CN112858517A - 一种控制了甘油含量的益母草注射液及益母草注射液的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种控制了甘油含量的益母草注射液及益母草注射液的质量控制方法。该益母草注射液中甘油的含量为1.000mg/mL～3.500mg/mL。益母草注射液中多元醇类成分较多，分离难度大，检测条件复杂，本发明首次明确其中含有较大比例的甘油，并首次对益母草注射液中的甘油含量进行了控制。本发明首次提供了以甘油作为指标性成分来对益母草注射液进行质量控制的方法，采用甘油作为指标性成分，重现性高，稳定可控。通过对甘油含量的控制，可以控制益母草注射液的质量，使制剂更加稳定、可控，为益母草注射液提供了一种新的质量控制方法。

Description

一种控制了甘油含量的益母草注射液及益母草注射液的质量 控制方法

技术领域

本发明属于注射制剂质量控制领域，具体涉及一种控制了甘油含量的益母草注射液，以及一种通过检测益母草注射液中甘油含量来对益母草注射液进行质量控制的方法。

背景技术

益母草注射液是一种治疗妇产科疾病的临床常用中药。研究表明，孕妇流产后采用益母草注射液能减少产后出血，因为益母草注射液作为收缩子宫药，它具有十分强烈的兴奋子宫平滑肌的作用，用于流产患者有助于恢复再生其子宫内膜的创伤，减少患者阴道的出血量和缩短出血的时间；此外，益母草注射液还具有治疗痛经的作用，能治疗月经期偏头痛。

益母草注射液的主要有效成分为总生物碱，根据物质基础研究结果表明，益母草注射液中总生物碱主要由盐酸水苏碱和氯化胆碱组成，其中盐酸水苏碱约占生物碱总量的90％。根据《卫生部药品标准中药成方制剂第二十册》，益母草注射液每支(1mL)含总生物碱以盐酸水苏碱(C₇H₁₃NO₂·HCl)计算，应为18～22mg。

益母草注射液中的有效成分均为水溶性，且含盐较多，使得其中化学成分的分离纯化和结构鉴定难度较大，目前对其中化学成分的含量控制能力有限。为了促进中药、天然药物研制工作进一步规范化、科学化和标准化，加强中药、天然药物注射剂的质量管理，国家食品药品监督管理局于2007年12月6日印发了《中药、天然药物注射剂基本技术要求》(国食药监注[2007]743号)。《中药、天然药物注射剂基本技术要求》的第(四)部分质量研究中规定：“注射剂中所含成份应基本清楚。应对注射剂总固体中所含成份进行系统的化学研究。有效成份制成的注射剂，其单一成份的含量应不少于90％；多成份制成的注射剂，总固体中结构明确成份的含量应不少于60％”；第(五)部分质量标准中还规定：“有效成份制成的注射剂，主药成份含量应不少于90％。多成份制成的注射剂，所测成份应大于总固体量的80％，注射剂中含有多种结构类型成份的，应分别采用HPLC和/或GC等定量方法测定各主要结构类型成份中至少一种代表性成份的含量，此外，应对未测定的其他成份进行研究。处方中含有毒性成份或已上市单一成份药品的，应测定其含量。注射剂质量标准中含测指标均应规定其含量的上下限”。

现行的益母草注射液的质量标准还不能满足上述《中药、天然药物注射剂基本技术要求》中的要求，因此，准确检测益母草注射液中除总生物碱以外的其它化学成分的含量，进一步完善对益母草注射液的质量研究，提升益母草注射液的质量标准具有重要的意义。

此外，稳定、可控是现代药物制剂的重要标准。但是，由于益母草注射液中所含成分复杂，使益母草注射液的稳定性和可控性较差，不同药材、成品批次不同，质量也有较大的浮动。因此，如果能够以益母草注射液中的某个化合物为指标性成分，对益母草注射液进行稳定的质量控制，对促进益母草注射液产品更加稳定可控具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种控制了甘油含量的益母草注射液，以甘油作为指标性成分来对益母草注射液进行质量控制；本发明的另一个目的在于提供以甘油作为指标性成分来对益母草注射液进行的质量控制方法，该方法是通过检测益母草注射液中甘油的含量来实现的。

本发明提供了一种益母草注射液，所述益母草注射液中甘油的含量为1.000mg/mL～3.500mg/mL。

进一步地，所述益母草注射液中甘油的含量为1.417mg/mL～3.090mg/mL。

本发明还提供了一种检测益母草注射液中甘油含量的方法，所述方法是利用高效液相色谱仪和示差折光检测器检测，具体包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取益母草注射液，即得；

(2)制备对照品溶液：取甘油对照品，加水溶解，即得；

(3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，测定条件如下：

色谱柱：填充剂为强阳离子交换树脂；

流动相：水；

检测器：示差折光检测器。

进一步地，所述填充剂为磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂。

进一步地，所述填充剂为以钙形式存在的磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂。

进一步地，所述高效液相色谱仪测定的流速为0.3mL/min～1.0mL/min；

所述高效液相色谱仪测定的柱温为20～40℃。

进一步地，所述高效液相色谱仪测定的流速为0.5±0.2mL/min；

所述高效液相色谱仪测定的柱温为30℃。

进一步地，所述示差折光检测器的检测温度为30～40℃，优选为35℃。

进一步地，所述对照品溶液中甘油的浓度为1～3mg/mL，优选为2mg/mL。

本发明还提供考了益母草注射液的质量控制方法，所述方法是以甘油作为指标性成分，通过上述的方法检测益母草注射液中的甘油含量。

益母草注射液中多元醇类成分较多，分离难度大，检测条件复杂。本发明首次发现益母草注射液中含有较大比例的甘油，并首次对益母草注射液中的甘油含量进行了控制，为提升益母草注射液的质量标准提供了依据。

本发明首次提供了一种以甘油作为指标性成分来对益母草注射液进行质量控制的方法，该方法重现性高、稳定可控。本发明通过对相同方法下制得的30批益母草注射液成品中甘油含量的测定，制定了益母草注射液中甘油含量的标准。通过对甘油含量的控制，可以控制益母草注射液的质量，使制剂更加稳定、可控，为益母草注射液提供了一种新的质量控制方法。本发明检测益母草注射液中甘油含量的方法线性关系、精密度、准确度良好，重复性佳，利用本发明的检测方法能够准确检测益母草注射液中甘油的含量，可以对益母草注射液进行进一步的质量控制。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为本发明检测益母草注射液中甘油含量的方法的线性关系。

图2为实施例4益母草注射液(批号：190801)的色谱图。

图3为实施例4甘油对照品的色谱图。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

甘油对照品购自中国食品药品检定研究院。

以钙形式存在的磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂购自美国安捷伦公司。

HPLC1260液相色谱仪配RID示差检测器G1362A购自美国安捷伦公司。

GEL树脂柱(CHP20/P120)购自日本三菱化学公司。

实施例1：制备益母草注射液

取益母草加3倍重量的水煎煮三次，第一次2小时，第二次1.7小时，第三次1.5小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.36～1.38(80℃)的清膏，放冷，加水稀释至含水量为35％；然后用乙醇沉淀处理三次，第一次加入乙醇使含醇量达78％，第二次加入乙醇使含醇量达88％，第三次加入乙醇使含醇量达92％；静置，取上清液回收乙醇至稠膏(命名为醇沉膏)。

取醇沉膏，加3～5倍的注射用水，搅拌，静置，取上清液用15wt.％活性炭脱色至溶液为淡黄色至黄色，用40％氢氧化钠溶液或稀盐酸调节pH至4.8～5.2，加入5wt.％活性炭，煮沸10～15分钟，脱炭过滤得益母草浓溶液(每1ml含总生物碱以盐酸水苏碱计，不得少于35mg)。

准确称取益母草浓溶液[含总生物碱(以盐酸水苏碱计)20g]，置配制罐中，加入适量注射用水，加入苯甲醇10ml，搅匀，加入活性炭(1～5g)，循环脱炭10分钟后补加注射用水使体系至1000ml，搅匀、精滤、灌封、灭菌、包装，即得益母草注射液。

按照上述制备方法，制得30批益母草注射液，批号如表2所示。

实施例2：益母草注射液中甘油的获得

本实施例从益母草注射液中分离得到了甘油。具体方法如下：

取实施例1中制得的益母草注射液(批号：20190805)3L与同体积乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，蒸去溶剂，得粘稠液体YMC-Et；水相继续用同体积水饱和正丁醇萃取三次，合并有机相，蒸去溶剂，得粘稠液体YMC-Bu；将剩余水相浓缩至粘稠液体YMC-H₂O。

将YMC-Bu上YMC GEL树脂(CHP20/P120，三菱化学，日本)柱，按照以下洗脱条件依次洗脱：

100％纯水洗脱4L，收集洗脱液，减压至干得YMC-Bu-1；

10％(v/v)甲醇水溶液洗脱2L，收集洗脱液，减压至干得YMC-Bu-2；

30％(v/v)甲醇水溶液洗脱2L，收集洗脱液，减压至干得YMC-Bu-3；

50％(v/v)甲醇水溶液洗脱2L，收集洗脱液，减压至干得YMC-Bu-4；

70％(v/v)甲醇水溶液洗脱2L，收集洗脱液，减压至干得YMC-Bu-5；

100％甲醇洗脱2L，收集洗脱液，减压至干得YMC-Bu-6。

将YMC-Bu-2再上Sephadex LH-20凝胶(GE Healthcare，美国)柱，10％(v/v)甲醇水溶液洗脱，收集流份1～40(编号：Bu2-1～Bu2-40)。将Bu2-21减压至干，用少量甲醇溶解，点样，用制备型硅胶板分离，溶剂(乙酸乙酯：甲醇＝5：1)展开，根据不同显色剂显色判断化合物条带。收集R_f值为0.05(乙酸乙酯：甲醇：水＝4：2：1)，香草醛硫酸显紫黑色的化合物(70mg)。

实施例3：益母草注射液中甘油的结构确认

将实施例2收集得到的化合物进行核磁共振检测，测试结果如表1所示：

表1、核磁共振¹H(400MHz)、¹³C(100MHz)谱图数据

No.	<sup>1</sup>H	<sup>13</sup>C
			1，3	3.72m 2H，3.62m 2H	65.2
2	3.85m 1H	74.7

经过分析，确认实施例2收集得到的化合物为甘油，结构如下所示：

实施例4：检测益母草注射液中甘油含量的方法

本实施例采用高效液相色谱仪和示差折光检测器，对实施例1所得益母草注射液(批号：190801)中的甘油含量进行了检测，检测方法具体如下：

(1)制备供试品溶液：取益母草注射液(批号：190801)，即得。

(2)制备对照品溶液：称取20mg甘油对照品，精密称定，置于10mL容量瓶中，加水溶解并定容，即得对照品溶液。该对照品溶液中甘油浓度为2mg/mL。

(3)分别吸取10μL对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，色谱条件如下：

色谱柱：由以钙形式存在的磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂作为填充剂(Hi-plex Ca，7.7mm×300mm,8μm)；

流动相：水；

流速：0.5mL/min；

柱温：30℃。

(4)检测器：示差折光检测器，检测温度为35℃。

检测结果(如图2和图3所示)：益母草注射液(批号：190801)中甘油的含量为2.443mg/mL。

以甘油作为指标性成分，通过上述方法对益母草注射液中的甘油含量进行测定，可以对益母草注射液进行质量控制。

实施例5：检测不同批次的益母草注射液中甘油含量的方法

按照实施例4相同的检测方法，将实施例4中的益母草注射液分别替换为表2中序号2～30所示的益母草注射液(均为实施例1所得)，对各益母草注射液中的甘油含量进行检测，检测结果如表2所示。

表2、各批益母草注射液中甘油含量测定结果

结果显示，检测的30批益母草注射液中，甘油含量为1.417mg/mL～3.090mg/mL，平均为2.250mg/mL。

通过对益母草注射液中甘油含量的测定，可反映益母草注射液的质量。

以下通过实验例证明本发明检测方法的有益效果。

实验例1：线性关系、精密度、检测限和定量限考察

1、溶液配制

对照品贮备溶液：

称取甘油150.01mg，精密称定，置50ml量瓶中，用纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，得储备溶液1；

称取甘油255.98mg，精密称定，置25ml量瓶中，用纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，得储备溶液2。

对照品溶液：

精密吸取1.0mL储备溶液1，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液1；

精密吸取2.0mL储备溶液2，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液2。

2、线性关系、精密度、检测限和定量限考察方法

分别精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、10.0mL储备溶液2，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别注入高效液相色谱仪中进行测定，色谱条件同实施例4，记录色谱图。以甘油浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。

吸取对照品溶液2，注入高效液相色谱仪中进行测定，色谱条件同实施例4，记录色谱图；连续进样6次，计算峰面积均值及RSD值。

吸取5.0mL对照品溶液1，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为LOQ溶液。取LOQ溶液3mL，至10mL容量瓶中用水稀释，摇匀，作为LOD溶液。进样，色谱条件同实施例4，记录色谱图，计算检测限(LOD)、定量限(LOQ)值。

3、测试结果

对照品溶液2连续进样6次所得谱图中，对照品峰面积分别为301274.1、322791.3、322016.8、310739.7、309764.7、307861.4，峰面积均值为312408.0。

表3、甘油线性关系、精密度、检测限和定量限结果

线性关系、精密度、检测限和定量限测试结果如表3和图1所示，可以看出，本发明检测益母草注射液中甘油含量的方法的线性关系和精密度良好，符合要求。

实验例2：重复性考察

吸取实施例1制得的益母草注射液(批号：190801)，注入高效液相色谱仪中进行测定，色谱条件同实施例4，记录色谱图。连续进样6次，计算益母草注射液中甘油的浓度(mg/mL)，并计算RSD值。

表4、重复性试验结果

结果见表4所示，RSD值小于3.0％，说明本发明检测益母草注射液中甘油含量的方法的重复性良好。

实验例3：稳定性考察

吸取实施例1制得的益母草注射液(批号：190801)，分装到安瓿瓶中。分别于开瓶后0、1、2.5、4、5、7、12、24h进样测定，色谱条件同实施例4，记录色谱图。

结果显示，开瓶后0、1、2.5、4、5、7、12、24h测得峰面积分别为377781.3、369172.8、395173.3、391122.6、394831.1、390676.9、387797.8、378789.0，平均值为385668.1，RSD％值2.43。表明供试品在24h内稳定性良好。

实验例4：加样回收率考察

将按照实施例1的方法制得的47支注射液(批号：190801，规格1mL)混合均匀，作为样品溶液。

称取甘油316.71mg，精密称定，置50ml量瓶中，用纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备溶液3。

回收率溶液1(加样50％)：精密量取样品溶液5.0mL三份，置10mL量瓶中，分别精密量取并加入1.0mL对照品贮备溶液3，并分别稀释至刻度，摇匀。

回收率溶液2(加样100％)：精密量取样品溶液5.0mL三份，置10mL量瓶中，分别精密量取并加入2.0mL对照品贮备溶液3，并分别稀释至刻度，摇匀。

回收率溶液3(加样150％)：精密量取样品溶液5.0mL三份，置10mL量瓶中，分别精密量取并加入3.0mL对照品贮备溶液3，并分别稀释至刻度，摇匀。

分别精密吸取回收率溶液1、回收率溶液2、回收率溶液3，注入液相色谱仪，色谱条件同实施例4，记录色谱图；每份溶液连续进样3次。计算各待测溶液中甘油的含量及回收率。

表5、加样回收率测试结果

结果如表5所示，甘油的加样回收率均在93.09％～105.83％之间，说明本发明检测益母草注射液中甘油含量的方法的准确度良好。

上述实验结果表明，本发明检测益母草注射液中甘油含量的方法线性关系、精密度、准确度良好，重复性佳。

综上，本发明首次发现益母草注射液中含有较大比例的甘油，并首次对益母草注射液中的甘油含量进行了控制，为提升益母草注射液的质量标准提供了依据。本发明首次提供了一种以甘油作为指标性成分来对益母草注射液进行质量控制的方法，通过对甘油含量的测定，可以反映益母草注射液的稳定性，达到质量控制的目的；采用甘油作为指标性成分，重现性高，稳定可控。通过对甘油含量的控制，可以控制益母草注射液的质量，使制剂更加稳定、可控，为益母草注射液提供了一种新的质量控制方法。

Claims (10)

1.一种益母草注射液，其特征在于：所述益母草注射液中甘油的含量为1.000mg/mL～3.500mg/mL。

2.根据权利要求1所述的益母草注射液，其特征在于：所述益母草注射液中甘油的含量为1.417mg/mL～3.090mg/mL。

3.一种检测益母草注射液中甘油含量的方法，其特征在于：所述方法是利用高效液相色谱仪和示差折光检测器检测，具体包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取益母草注射液，即得；

(2)制备对照品溶液：取甘油对照品，加水溶解，即得；

(3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，测定条件如下：

色谱柱：填充剂为强阳离子交换树脂；

流动相：水；

检测器：示差折光检测器。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述填充剂为磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述填充剂为以钙形式存在的磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂。

6.根据权利要求3～5任一项所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪测定的流速为0.3mL/min～1.0mL/min；

所述高效液相色谱仪测定的柱温为20～40℃。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪测定的流速为0.5±0.2mL/min；

所述高效液相色谱仪测定的柱温为30℃。

8.根据权利要求3～5任一项所述的方法，其特征在于：所述示差折光检测器的检测温度为30～40℃，优选为35℃。

9.根据权利要求3～5任一项所述的方法，其特征在于：所述对照品溶液中甘油的浓度为1～3mg/mL，优选为2mg/mL。

10.益母草注射液的质量控制方法，其特征在于：所述方法是以甘油作为指标性成分，通过权利要求3～9任一项所述的方法检测益母草注射液中的甘油含量。

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