CN114740131B - 一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法，涉及指纹图谱构建技术领域，包括以下步骤：1)将茜芷制剂内容物与酒石酸溶液混合，浸泡；加入甲醇溶液进行第一回流，再次加入甲醇溶液，过滤，得供试品溶液；2)取标品混合，加入甲醇溶液，进行第二回流处理，再次加入甲醇溶液，过滤，得对照品溶液；3)分别取供试品溶液和对照品溶液进行超高效液相色谱分析；4)将步骤3)获得色谱指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，采用平均值计算法生成茜芷制剂的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积；全面地反映中药茜芷制剂中所含成分的相对关系，能从整体特征上控制中药茜芷制剂的质量，为产品的质量控制提供科学的依据。
Description
技术领域
本发明涉及指纹图谱构建技术领域，尤其涉及一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法及其应用。
背景技术
指纹图谱是指某些复杂物质，比如中药成分，某种生物体、某种组织或细胞的DNA、蛋白质经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药的指纹图谱是具有高度专属性的一种特征图谱，能够比较全面地表征药材成分的相对关系，目前已经成为公认的质量控制的有效手段。同一基原药材的生长环境、采收季节以及贮藏条件不同，其指纹图谱也会有所差别。建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。
随着社会的进步，目前药物流产因其安全、有效、使用方便、痛苦小等特点，备受广大育龄妇女的青睐，已被广泛应用于临床。但是，药物流产后阴道出血量多，出血持续时间长等副作用一直困扰着广大妇女和医务人员。由于临床上使用的各种止血剂疗效不理想，从而直接影响了其大面积的推广和使用。研究表明，茜芷系列产品对于更年期宫血症治疗效果良好，可改善更年期出现的全身症状。茜芷系列产品可用于药流、人流、长效避孕皮下埋植等避孕方式导致的妇女阴道流血病症，提供了一种安全和有效的治疗方法，解决了人流、药流、意外流产后子宫出血的症状，该药物比流产类药物和长效避孕药更安全、有效，更多地为广大育龄妇女所接受，保障了广大育龄妇女的身心健康。
中药复方是中医用药的主要形式，其作用特点是通过“多成分、多靶点、多途径”对机体发挥整体的治疗作用。中药茜芷制剂由茜草炭、三七、川牛膝、白芷4味药组成，方中川牛膝滋补肝肾、活血祛瘀、引血下行为君药，主要含有总皂苷，具有兴奋子宫平滑肌，使子宫收缩幅度增高、频率加快、张力增加的功效。三七具有化瘀止血，消肿定痛，为臣药，主要含有三七皂苷R1，具有活血止血、抗炎、镇痛的功效。茜草(炭)凉血化瘀止血为佐药，主要含有鞣质，具有化瘀止血、镇痛、抗炎的功效。白芷温经活血止痛为佐药，主要含有欧前胡素和异欧前胡素，具有活血化瘀、解痉的功效。诸药合用，共奏活血止血，祛瘀生新，消肿止痛之攻效。可促进各种流产术后子宫内膜的修复及缩短流产术后出血量，为女性的健康生活提供了必要的保障。
目前的产品执行质量标准中仅对有效成分检测采用高效液相色谱法测定白芷中欧前胡素的含量，同时对其他药材成分进行专属鉴别。但由于茜芷制剂有四味中药，成分复杂，个别成分的定性定量分析仍难以全面反应药品的全面信息，ZL201710452403.3虽然构建了一种治疗妇女子宫出血的茜芷中药制剂的检测方法，但该方法仍存在检测和鉴别指标单一的缺点，容易导致质量控制的准确性和可靠性产生波动，不利于全面监控茜芷制剂的质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法，全面地反映中药茜芷制剂中所含成分的相对关系，能从整体特征上控制中药茜芷制剂的质量，为产品的质量控制提供科学的依据。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
1)将茜芷制剂内容物与酒石酸溶液混合，浸泡18～30h；加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，进行第一回流处理0.5～1.5h，再次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，过滤，得供试品溶液；
2)取标品大叶茜草素、羟基茜草素、人参皂苷、三七皂苷、杯苋甾酮和欧前胡素混合，加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，进行第二回流处理0.5～1.5h，再次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，过滤，得对照品溶液；
3)分别取供试品溶液和对照品溶液10～20μL，进行超高效液相色谱分析获得供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱；
4)将步骤3)获得的供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，采用平均值计算法生成茜芷制剂的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。
优选的，步骤1)中茜芷制剂内容物和酒石酸溶液比为0.8～1.2g：10mL。
优选的，步骤1)中第一次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液与中茜芷制剂内容物的比为0.8～1.2g：50mL。
优选的，步骤1)中再次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液的用量与回流处理过程中损失的甲醇的质量一致。
优选的，步骤1)中所述第一回流处理的温度为95～105℃。
优选的，步骤2)中第一次加入甲醇溶液时，大叶茜草素：羟基茜草素：人参皂苷：三七皂苷：杯苋甾酮：欧前胡素：甲醇溶液＝5mg：2mg：20mg：5mg：2mg：1mg：50mL。
优选的，步骤2)中再次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液的用量与回流处理过程中损失的甲醇的质量一致。
优选的，步骤2)中第二回流处理的温度为95～105℃。
优选的，步骤3)中，超高效液相色谱的条件为：
C18烷基键合硅胶为填充剂，流动相A为体积比5:1的乙腈甲醇混合液，流动相B为0.1％磷酸二氢钾溶液；梯度洗脱；
梯度洗脱方式具体为：
0～10min，5％A+95％B；
10～40min，20％A+80％B；
40～60min，70％A+30％B；
60～80min，95％A+5％B；
百分数表示流动相A和B所占的体积百分数；
柱温为25℃，检测波长为270～315nm，流速为1.0mL/min，分析时间为80min。
本发明还提供了所述茜芷制剂指纹图谱的构建方法构建获得的茜芷制剂指纹图谱在茜芷制剂质量控制中的应用。
本发明提供了一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法，本发明提供的中药茜芷制剂指纹图谱建立方法能准确的提取和分离制剂所含各类成分，具有良好的精密度，操作简便稳定、重现性好的优点；用本发明所提供的方法所建立的中药茜芷制剂指纹图谱，具有6个达到有效分离的特征峰，对茜芷制剂所含所有中药材进行指标成分的定性定量控制，获得的指纹图谱能有效地表征中药茜芷制剂的质量，有利于全面监控药物的质量；本发明通过不同批次的中药茜芷制剂进行检测，从图谱可以看出，相同位置的色谱峰的相对保留时间的RSD均在2％之内，表明本发明提供的发明具有良好的重现性，使用本发明提供的方法建立的指纹图谱具有可靠性。
附图说明
图1为本发明对比例1茜芷片中白芷、三七、茜草薄层鉴别图；
图2为本发明对比例1茜芷片薄层色谱扫描法测定含量结果；
图3为本发明实施例1提供的色谱条件下对照品溶液图谱(1大叶茜草素、2人参皂苷Rg1/3羟基茜草素、4欧前胡素、5杯苋甾酮、6三七皂苷R1)；
图4为不同流动相的色谱图(A、乙腈-甲醇；B、乙腈：甲醇(体积比5:1)-0.1％磷酸二氢钾溶液；C、甲醇-水；D、甲醇-0.1％磷酸二氢铵溶液)；
图5为不同检测波长下的色谱图(λ：A、275nm；B、280nm；C、290nm；D、305nm；E、315nm)；
图6为不同柱温下的色谱图；A、25℃；B、30℃；C、35℃；
图7为不同流速下的色谱图；0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min；
图8为不同进样量下的色谱图；A、5μl；B、10μl；C、15μl；D、20μl；
图9为茜芷中药制剂HPLC指纹谱及对照指纹谱(R)批号(S1～S5为茜芷片，S6～S11为茜芷胶囊)。
具体实施方式
本发明提供了一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
1)将茜芷制剂内容物与酒石酸溶液混合，浸泡18～30h；加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，进行第一回流处理0.5～1.5h，再次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，过滤，得供试品溶液；
2)取标品大叶茜草素、羟基茜草素、人参皂苷、三七皂苷、杯苋甾酮和欧前胡素混合，加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，进行第二回流处理0.5～1.5h，再次加入体积浓度为60～80％的甲醇溶液，过滤，得对照品溶液；
3)分别取供试品溶液和对照品溶液10～20μL，进行超高效液相色谱分析获得供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱；
4)将步骤3)获得的供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，采用平均值计算法生成茜芷制剂的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。
在本发明中，将茜芷制剂内容物与酒石酸溶液混合，所述茜芷制剂内容物和酒石酸溶液比优选为0.8～1.2g：10mL，进一步优选为0.9～1.1g：10mL，再进一步优选为1g：10mL；所述茜芷制剂为甘肃兰药药业有限公司生产的茜芷片，批号分别为：20210102、20210103、20210301、20210302、20210303，甘肃扶正药业科技股份有限公司生产的茜芷胶囊，批号分别为：J20200801、J20200802、J20200901、J20210101、J20210102、J20210103。
在本发明中，茜芷制剂内容物与酒石酸溶液混合后，浸泡处理，时间优选为18～30h，进一步优选为20～28h，再进一步优选为22～26h。
在本发明中，浸泡处理后加入甲醇溶液，所述甲醇溶液的体积浓度优选为60～80％，进一步优选为65～75％，再进一步优选为70％；所述甲醇溶液与茜芷制剂内容物的比优选为0.8～1.2g：50mL，进一步优选为0.9～1.1g：50mL，再进一步优选为1g：50mL。
在本发明中，加入甲醇溶液后进行第一回流处理，时间优选为0.5～1.5h，进一步优选为0.75～1.25h，再进一步优选为1h；温度优选为95～105℃，进一步优选为98～102℃，再进一步优选为100℃。
在本发明中，进行第一回流处理后，再次加入甲醇溶液，甲醇溶液的体积浓度优选为60～80％，进一步优选为65～75％，再进一步优选为70％；再次加入甲醇溶液的用量优选的与回流处理过程中损失的甲醇的质量一致。
在本发明中，再次加入甲醇溶液后，过滤处理，得供试品溶液。
在本发明中，取标品大叶茜草素、羟基茜草素、人参皂苷、三七皂苷、杯苋甾酮和欧前胡素混合，加入甲醇溶液，所述大叶茜草素：羟基茜草素：人参皂苷：三七皂苷：杯苋甾酮：欧前胡素：甲醇溶液优选为5mg：2mg：20mg：5mg：2mg：1mg：50mL；所述甲醇溶液的体积浓度优选为60～80％，进一步优选为65～75％，再进一步优选为70％；其中对欧前胡素设为参照化合物，后续相应的对欧前胡素色谱峰设为参照峰；所述大叶茜草素(110884-201803)、人参皂苷Rg1(201726)、羟基茜草素(111898-201902)、三七皂苷R1(110745-201921)、杯苋甾酮(11804-201705)和欧前胡素(110826-201918)，均购于中国食品药品检定研究院。
在本发明中，取标品大叶茜草素、羟基茜草素、人参皂苷、三七皂苷、杯苋甾酮和欧前胡素混合，加入甲醇溶液后，进行第二回流处理，时间优选为0.5～1.5h，进一步优选为0.75～1.25h，再进一步优选为1h，温度优选为95～105℃，进一步优选为98～102℃，再进一步优选为100℃。
在本发明中，进行第二回流处理后，再次加入甲醇溶液，甲醇溶液的体积浓度优选为60～80％，进一步优选为65～75％，再进一步优选为70％；再次加入甲醇溶液的用量优选的与回流处理过程中损失的甲醇的质量一致。
在本发明中，再次加入甲醇溶液后，过滤处理，得对照品溶液。
在本发明中，分别取供试品溶液和对照品溶液进行超高效液相色谱分析获得供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱，所述供试品溶液体积优选为10～20μL，进一步优选为12～18μL，再进一步优选为14～16μL；所述对照品溶液体积优选为10～20μL，进一步优选为12～18μL，再进一步优选为14～16μL；所述记录色谱图的时间优选为70～90min，进一步优选为75～85min，再进一步优选为80min。
在本发明中，所述超高效液相色谱的条件优选为：
C18烷基键合硅胶为填充剂，流动相A为体积比5:1的乙腈甲醇混合液，流动相B为0.1％磷酸二氢钾溶液；梯度洗脱；
梯度洗脱方式具体为：
0～10min，5％A+95％B；
10～40min，20％A+80％B；
40～60min，70％A+30％B；
60～80min，95％A+5％B；
百分数表示流动相A和B所占的体积百分数；
柱温为25℃，检测波长为270～315nm，流速为1.0mL/min，分析时间为80min。
在本发明中，所述乙腈，为色谱纯，购自美国默克公司，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；色谱柱型号：WelchUltimateXB-C18(4.6×250mm，5μm)；Hitachi LaChromC18(4.6×250mm，5μm)；DiamonsilC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；薄层板类型:GF254。
在本发明中，将获得的供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，采用平均值计算法生成茜芷制剂的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。
在本发明中所采用仪器信息，十万分之一电子分析天平(MS205DU，瑞士梅特勒公司)；Agilent1290超高效超高效液相色谱仪，DAD检测器；ZYCGF-Ⅱ-10T型超纯水机(四川卓越水处理设备有限公司)；Triple TOF5600高分辨率质谱仪(AB SCIEX公司)KI-3500Plus全能型薄层色谱扫描仪。
本发明还提供了所述茜芷制剂指纹图谱的构建方法构建获得的茜芷制剂指纹图谱在茜芷制剂质量控制中的应用。针对茜芷制剂成品所含有效成分的结构特点及理化特征，对供试品的预处理方法、流动相、检测波长、洗脱程序、柱温、流速等测试条件进行了筛选和优化，完成了系统的方法学验证，对不同阶段的样品进行HPLC检测，获得图谱和本申请简历的指纹图谱比较，相似度大于0.9为合格。
茜芷制剂的现行质量标准以单一指标成分欧前胡素进行含量测定，难以全面监控成品的质量、全面监控生产工艺的稳定性。而该方法所构建的指纹图谱能检出6个共有色谱峰，可以全面监控半成品和成品的质量，通过色谱指纹特征相似程度的比较，评价优劣、考察稳定性和一致性，弥补了原质量控制方法的不足。通过成品与原料药材指纹图谱的相关性考察，确立了茜芷制剂指纹图谱中共有色谱峰的来源归属。
茜芷制剂指纹图谱在制剂生产工艺全过程的质量控制和最终产品的质量评价中具有重要意义。首先，所建立的指纹图谱将质量控制指标从单一活性成分提升到多个活性成分，提高了产品鉴别的准确性和专属性，更好地保证产品的质量和疗效，有利于全面监控药物的质量；其次，该指纹图谱可用于指导工艺研究，即通过半成品及成品图谱中共有特征峰的比较，优化生产工艺，保证生产工艺的稳定性。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
供试品溶液的制备：每批次取中药茜芷胶囊10粒，除去囊壳混匀研细，取细粉0.5g，精密称定，置平底烧瓶中，加入适量1.5％的酒石酸5mL浸泡24h，精密加入70％甲醇25mL，称定质量，加热回流处理0.5h，冷却至室温，用70％甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；对照品溶液的制备：分别取大叶茜草素、羟基茜草素、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、杯苋甾酮和欧前胡素，置于同一平底烧瓶中，加甲醇配制成每1mL含大叶茜草素0.5192mg、羟基茜草素0.2133mg、人参皂苷Rg 11.9722mg、三七皂苷R10.5098mg、杯苋甾酮0.1333mg和欧前胡素0.1087mg的混合对照品溶液，吸取1mL，置于5mL量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，4℃冰箱保存，备用。
色谱条件：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm粒径为5μm)；以乙腈：甲醇(5:1)为流动相A，以0.1％磷酸二氢钾溶液为流动相B，按以下程序进行梯度洗脱；检测波长为290nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；分析时间为80min；理论板数按欧前胡素峰计算不低于3000；精密吸取混合对照品溶液10μl，注入超高效液相色谱仪，记录90min的色谱图。在上述6种化合物中，欧前胡素在茜芷制剂中的含量较稳定，且在图谱中保留时间适中、分离度较好，因此选择欧前胡素作为参照物，后续相应的欧前胡素色谱峰作为参照峰。
梯度洗脱采用以下方式：百分数表示流动相A和B所占的体积百分数。
在0～10min，5％A+95％B；
在10～40min，20％A+80％B；
在40～60min，70％A+30％B；
在60～80min，95％A+5％B。
精密吸取参照物溶液10μl、供试品溶液10μl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。相似度评价按《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.9。
试验结果：指纹图谱共有模式(对照指纹图谱)见图3，各色谱峰归属情况见表1。
表1各色谱峰归属情况
| 序号 | 保留时间(min) | 色谱峰指认名称 | 归属药材 |
| 1 | 7.68 | 大叶茜草素 | 茜草 |
| 2 | 45.36 | 人参皂苷Rg1 | 三七 |
| 3 | 50.14 | 羟基茜草素 | 茜草 |
| 4 | 57.21 | 欧前胡素 | 白芷 |
| 5 | 59.33 | 杯苋甾酮 | 川牛膝 |
| 6 | 63.37 | 三七皂苷R1 | 三七 |
对比例1
茜芷片现行标准质量控制检验
药物白芷的特征薄层色谱鉴别。取茜芷片(20210102)20片，除去包衣，研细，加石油醚(60～90℃)20mL，振摇提取30分钟，滤过，滤渣备用，滤液挥去石油醚至约2mL，作为供试品溶液。另取白芷对照药材0.5g，加石油醚(60～90℃)5mL，振摇提取30分钟，静置，上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2020年版一部附录)试验，吸取上述两种溶液各5ul。分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙醚(3：2)为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
取三七皂甙R1对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2020年版一部附录)试验。吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水(4：1：5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，现相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下，显相同颜色的荧光斑点。
取鉴别下三七皂甙R1的剩余供试品溶液，挥去甲醇，残渣加水20mL使溶解，再加盐酸2mL，置沸水浴中加热30分钟，冷却，用乙醚20mL分两次振摇提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取茜草对照药材粉末1g，加甲醇20mL，加热回流15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。薄层色谱法(中国药典2020年版一部附录)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-甲醇(20：10：1：0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸硫酸溶液(取磷钼酸2g,加水20mL使溶解，再缓缓加入硫酸30mL，摇匀)，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
茜芷片薄层色谱鉴别白芷、三七、茜草药材薄层板照片见图1。
含量测定：取茜芷片(20210102)除去包衣，研细，称取研细的茜芷片8g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流提取4小时，提取液回收石油醚至干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取欧前胡素对照品适量，加醋酸乙酯制成每1mL含0.80mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2020年版一部附录)试验，吸取对照品溶液1ul和2ul。供试品溶液4μl，分别交叉点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙醚(3：2)为展开剂，在20℃以下展开，展距约7cm，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下定位，波长：λs＝310nm，λR＝370nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。含量测定结果见图2。
实验例
实验条件的摸索
1、流动相的选择
对所建立的中药茜芷制剂指纹图谱进行分析，本发明采用了梯度洗脱的方法分别对乙腈-甲醇、乙腈：甲醇(5:1)-0.1％磷酸二氢钾溶液、甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸二氢铵溶液四种流动相系统进行考察，以色谱峰的分离效果为考察指标，找到适合的流动相；结果如图4所示。
实验结果显示，以甲醇作为流动相时，色谱图基线严重漂移，且色谱峰的数目较少；以乙腈-甲醇流动相系统洗脱得到的色谱图干扰峰较多，分离度较差。综合考虑。最后优选定以乙腈：甲醇(5:1)-0.1％磷酸二氢钾溶液作为流动相系统进行梯度洗脱，该流动相具有改善峰形，减轻或消除色谱峰拖尾现象，使色谱峰更尖锐，低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和毒性低等优点。
2、检测波长的选择
对所建立的中药茜芷制剂指纹图谱进行分析，为了获得中药制剂的化学信息，波长的选择显得尤为重要，本发明以色谱图峰的数量、丰度、基线漂移情况等为考察指标，分别对275nm、280nm、290nm、305nm、315nm五种不同波长进行考察，选择适合的检测波长。实验结果显示，检测波长越小，色谱峰的峰高越高，但基线也会漂移增加。当检测波长为275-305nm时，各色谱图的峰数量一致，当以315nm为检测波长时，色谱峰数目明显减少。结合各检测波长下的色谱图，最终选择以290nm为最优的检测波长。结果如图5所示。
3、进样量、柱温、流速的选择
对所建立的中药茜芷制剂指纹图谱进行分析，本发明还对色谱条件的不同柱温(20、25、30℃)；不同进样量(5、10、15、20ul)；不同流速(0.8、1.0、1.2mL/min)分别进行了考察，对比各条件下的色谱图，综合考虑峰型、保留时间、分离度、峰高等因素，确定以10ul为进样量，柱温25℃，流速为1.0mL/min进行中药制剂指纹图谱的测定。
按照相同的色谱条件对样品溶液进行90min的色谱分析发现，80min后色谱图再无滞后峰出现，故选择以80min作为该指纹图谱的分析时间。
最终确定的中药制剂的指纹图谱最佳色谱条件为：色谱柱C18烷基键合硅胶；检测波长：290nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μl。结果如图6、图7、图8所示。
茜芷片指纹图谱方法学考察
1、精密度试验
取同一茜芷片(批号20210102)，按实施例1的制备方法和条件连续进样6次，检测指纹图谱，以4号峰(欧前胡素)为参照峰，计算共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果各共有峰的相对保留时间的RSD在0.063％～0.68％，相对峰面积的RSD在0.18％～2.7％，指纹图谱的相似度均＞0.9，表明仪器精密度良好。
2、稳定性试验
取同一茜芷片(批号20210102)，按实施例1的制备方法和条件，分别在0、2、4、8、12、24小时进样，记录色谱图。以4号峰(欧前胡素)为参照峰，计算共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果各共有峰的相对保留时间的RSD在0.19％～0.83％，相对峰面积的RSD在0.35％～2.3％，6个时间段的指纹图谱相似度均＞0.9，表明供试品溶液在24h内稳定。
3、重复性试验
取同一茜芷片(批号20210102)6份，按实施例1的制备方法和条件连续进样，检测指纹图谱，结果各共有峰的相对保留时间的RSD在0.021％～0.098％，相对峰面积的RSD在0.39％～2.9％，6份样品的指纹图谱的相似度均＞0.9，表明该方法重复性良好。
4、指纹图谱的建立及相似度评价
取11批中药茜芷制剂(S1～S5为茜芷片，S6～S11位茜芷胶囊)样品，按实施例1的制备方法和条件测定，记录色谱图。将11批中药茜芷制剂的色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)，以S1为参照图谱，时间宽度为0.1min，采用多点校正后自动匹配指纹图谱，并以中位数法生成对照指纹图谱R，见图9。计算指纹图谱相似度，11批中药茜芷制剂供试品指纹图谱和对照图谱相似度均大于0.9，见表2。
表2 11批中药茜芷制剂指纹图谱相似度
由以上实施例可知，本发明提供了一种中药茜芷制剂(片/胶囊)HPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。针对产品组分所含有效成分的结构特点及理化特征，对供试品的预处理方法、检测波长、洗脱程序、流速、柱温、流动相等试验条件进行了筛选和优化及系统的方法学验证。首次建立了中药茜芷制剂HPLC指纹图谱，并且记录80min内的HPLC图谱；通过对多个茜芷制剂供试品中各组分的有效成分进行检测，并且根据“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行HPLC指纹图谱分析，通过优化色谱条件和通过多点校正的方法对所有色谱峰进行匹配，所建立的指纹图谱将质量控制指标从单一活性成分提升到多个活性成分，提高了产品鉴别的准确性和专属性，中药茜芷制剂的HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积较稳定。该指纹图谱可用于指导工艺研究，即通过原料药材、半成品及成品图谱中共有特征峰的比较，优化生产工艺，保证生产工艺的稳定性。较全面地反映中药茜芷制剂中所含成分的相对关系，能从整体特征上控制中药茜芷制剂的质量，为产品的质量控制提供科学的依据。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种茜芷制剂指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将茜芷制剂内容物与酒石酸溶液混合，浸泡18~30h；加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液，进行第一回流处理0.5~1.5h，再次加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液，过滤，得供试品溶液；
2）取标品大叶茜草素、羟基茜草素、人参皂苷、三七皂苷、杯苋甾酮和欧前胡素混合，加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液，进行第二回流处理0.5~1.5h，再次加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液，过滤，得对照品溶液；
3）分别取供试品溶液和对照品溶液10~20μL，进行超高效液相色谱分析获得供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱；
4）将步骤3）获得的供试品色谱指纹图谱和对照品色谱指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，采用平均值计算法生成茜芷制剂的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积；
步骤1）中茜芷制剂内容物和酒石酸溶液比为0.8~1.2g：10mL；
步骤1）中第一次加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液与中茜芷制剂内容物的比为0.8~1.2g：50mL；
步骤1）中再次加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液的用量与回流处理过程中损失的甲醇的质量一致；
步骤1）中所述第一回流处理的温度为95~105℃；
步骤2）中第一次加入甲醇溶液时，大叶茜草素：羟基茜草素：人参皂苷：三七皂苷：杯苋甾酮：欧前胡素：甲醇溶液=5mg：2mg：20mg：5mg：2mg：1mg：50mL；
步骤2）中再次加入体积浓度为60~80%的甲醇溶液的用量与回流处理过程中损失的甲醇的质量一致；
步骤2）中第二回流处理的温度为95~105℃；
步骤3）中，超高效液相色谱的条件为：
C18烷基键合硅胶为填充剂，流动相A为体积比5:1的乙腈甲醇混合液，流动相B为0.1%磷酸二氢钾溶液；梯度洗脱；
梯度洗脱方式具体为：
0~10min，5%A+95%B；
10~40min，20%A+80%B；
40~60min，70%A+30%B；
60~80min，95%A+5%B；
百分数表示流动相A和B所占的体积百分数；
柱温为25℃，检测波长为270~315nm，流速为1.0mL/min，分析时间为80min。
2.权利要求1所述茜芷制剂指纹图谱的构建方法构建获得的茜芷制剂指纹图谱在茜芷制剂质量控制中的应用。
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Non-Patent Citations (4)
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|---|
| HPLC-ELSD测定茜芷胶囊中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1及Rb_1的含量;王学军;武新安;郁洋;张伯崇;;分析测试技术与仪器(第04期);第218-220页 * |
| HPLC法测定茜芷胶囊中欧前胡素的含量;袁才英, 位海强, 叶桂芬, 赵建泽;兰州医学院学报(第01期);第31-33页 * |
| RP-HPLC梯度洗脱法同时测定茜芷胶囊中欧前胡素及大叶茜草素的含量;张晶;王学军;李仲;刘雄;;中国中医药科技(第01期);第53-54页 * |
| RP-HPLC测定茜芷胶囊中欧前胡素的含量;张雪菊, 苏文博, 殷学芳, 叶莺;中成药(第09期);第722-723页 * |
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