CN110088104A - 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的四氢吡啶并嘧啶化合物 - Google Patents

用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的四氢吡啶并嘧啶化合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供了具有通式的新化合物，包含所述化合物的组合物以及使用所述化合物的方法，其中R1、R2和R3如文中所定义。

Description

用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的四氢吡啶并嘧啶化 合物
本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，并且特别涉及可用于治疗乙型肝炎病毒感染的HBsAg(HBV表面抗原)抑制剂和HBV DNA生成的抑制剂。
发明领域
本发明涉及具有药物活性的新的四氢吡啶并嘧啶化合物、它们的制备、包含它们的药物组合物以及它们作为药物的潜在用途。
本发明涉及式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，
其中R1、R2和R3如下所述。
乙型肝炎病毒(HBV)是有包膜的、部分双链的DNA病毒。紧凑的3.2kb HBV基因组由四个重叠的开放阅读框(ORF)组成，其编码核、聚合酶(Pol)、包膜和X-蛋白。Pol ORF是最长的并且包膜ORF位于其内，而X和核ORF与Pol ORF重叠。HBV的生命周期有两个主要事件：1)由松弛环状(RC DNA)生成闭合环状DNA(cccDNA)，和2)前基因组RNA(pgRNA)逆转录生成RCDNA。在宿主细胞感染之前，HBV基因组以RCDNA的形式存在于病毒体内。已经确定HBV病毒体能够通过非特异性结合至存在于人肝细胞表面的带负电荷的蛋白聚糖(Schulze,A.,P.Gripon&S.Urban.Hepatology,46,(2007),1759-68)和经由HBV表面抗原(HBsAg)特异性结合至肝细胞牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)受体(Yan,H.等人,J Virol,87,(2013),7977-91)而进入到宿主细胞中。一旦病毒体进入细胞，病毒核和衣壳化的RC DNA通过宿主因子经由核定位信号，通过Impβ/Impα核转运受体转运到细胞核中。在细胞核内，宿主DNA修复酶将RC DNA转化为cccDNA。cccDNA充当所有病毒mRNA的模板，因此，它是受感染个体中HBV持久性的原因。由cccDNA生成的转录物被分成两类：前基因组RNA(pgRNA)和亚基因组RNA。亚基因组转录物编码三种包膜(L、M和S)和X蛋白，并且pgRNA编码前核、核和Pol蛋白(Quasdorff,M.&U.Protzer.J Viral Hepat,17,(2010),527-36)。HBV基因表达或HBV RNA合成的抑制导致HBV病毒复制和抗原生成的抑制(Mao,R.等人,PLoS Pathog,9,(2013),e1003494；Mao,R.等人,J Virol,85,(2011),1048-57)。例如，IFN-α显示通过减少从HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)微型染色体的pgRNA和亚基因组RNA的转录而抑制HBV复制和病毒HBsAg生成。(Belloni,L.等人,J Clin Invest,122,(2012),529-37；Mao,R.等人,J Virol,85,(2011),1048-57)。所有HBV病毒mRNA均被封端并多聚腺苷酸化，然后输出至细胞质进行翻译。在细胞质中，新病毒体的组装被引发并且新生的pgRNA与病毒Pol一起包装，从而可以开始经由单链DNA中间体将pgRNA逆转录成RC DNA。含有RC DNA的成熟核壳体被细胞脂质以及病毒L、M和S蛋白包封，然后感染性HBV颗粒通过在细胞内膜出芽释放(Locarnini,S.Semin Liver Dis,(2005),25Suppl 1,9-19)。有趣的是，也生成非感染性颗粒，其在数量上远远超过感染性病毒体。这些空的、包封的颗粒(L、M和S)被称为亚病毒颗粒。重要的是，由于亚病毒颗粒与感染性颗粒具有相同的包膜蛋白，因此推测它们可作为宿主免疫系统的诱饵并且已被用于HBV疫苗。S、M和L包膜蛋白由含有3个不同起始密码子的单个ORF表达。所有三种蛋白在它们的C-末端共享一个226aa序列，即S-结构域。M和L具有额外的pre-S结构域，分别为Pre-S2以及Pre-S2和Pre-S1。然而，具有HBsAg表位的是S-结构域(Lambert,C.&R.Prange.Virol J,(2007),4,45)。
病毒感染的控制需要宿主先天免疫系统的密切监视，其可以在感染后数分钟至数小时内产生响应以影响病毒的初始生长，并且限制慢性和持久感染的发展。尽管目前有基于IFN和核苷(核苷酸)类似物的治疗，但是乙型肝炎病毒(HBV)感染仍然是世界范围内的主要健康问题，其涉及估计约3亿5千万慢性携带者，他们具有更高的肝硬化和肝细胞癌的风险。
肝细胞和/或肝内免疫细胞响应于乙型肝炎病毒感染而分泌抗病毒细胞因子在被感染肝脏的病毒清除中起关键作用。然而，由于病毒采用了多种逃避策略来对抗宿主细胞识别系统和随后的抗病毒响应，慢性感染的患者仅显示出弱的免疫响应。
许多观察结果显示若干HBV病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号转导系统并随后干扰干扰素(IFN)抗病毒活性而对抗最初的宿主细胞响应。其中，HBV空亚病毒颗粒(SVP，HBsAg)的过度分泌可能参与在慢性感染患者(CHB)中观察到的免疫耐受状态的维持。持续暴露于HBsAg和其他病毒抗原可以导致HBV-特异性T细胞缺失或导致进行性的功能受损(Kondo等人,Journal of Immunology(1993),150,4659–4671；Kondo等人,Journal ofMedical Virology(2004),74,425–433；Fisicaro等人,Gastroenterology,(2010),138,682-93)。此外，还报道了HBsAg通过直接相互作用而抑制免疫细胞如单核细胞、树突细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞的功能(Op den Brouw等人,Immunology,(2009b),126,280-9；Woltman等人,PLoS One,(2011),6,e15324；Shi等人,J Viral Hepat.(2012),19,e26-33；Kondo等人,ISRN Gasteroenterology,(2013),文章编号935295)。
HBsAg定量是用于慢性乙型肝炎的预后和治疗响应的重要生物标志物。然而，在慢性感染患者中很少观察到HBsAg消失和血清转化的实现，其仍然是治疗的终极目标。当前疗法如核苷(核苷酸)类似物是抑制HBV DNA合成但不降低HBsAg水平的分子。即使采用延长的治疗，核苷(核苷酸)类似物所显示的HBsAg清除率也与自然观察到的那些相当(在-1％-2％之间)(Janssen等人,Lancet,(2005),365,123-9；Marcellin等人,N.Engl.J.Med.,(2004),351,1206-17；Buster等人,Hepatology,(2007),46,388-94)。
已经公布了一些关于HBsAg抑制剂的专利申请，包括新的二氢喹嗪酮类化合物(WO2015/113990,WO 2015/173164)、新的哒嗪酮和三嗪酮类化合物(WO2016/023877)、新的6,7-二氢苯并[a]喹嗪-2-酮衍生物(WO/2016/071215)、新的四氢吡啶并嘧啶和四氢吡啶并吡啶类化合物(WO2016/107832)和新的2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸衍生物(WO2016/128335)，表明该领域正在进行一些早期的探索性尝试。但是，没有被批准的商业产品。因此，仍然存在靶向HBsAg来治疗HBV的医学需求(Wieland,S.F.&F.V.Chisari.JVirol,(2005),79,9369-80；Kumar等人,J Virol,(2011),85,987-95；Woltman等人,PLoSOne,(2011),6,e15324；Op den Brouw等人,Immunology,(2009b),126,280-9)。
发明概述
本发明的目的是新的式I化合物，它们的制备，基于本发明化合物的药物及其制备以及式I化合物作为HBV抑制剂以及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的用途。式I化合物显示出优异的抗HBV活性。
本发明涉及式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，
其中
R1是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或C3-7环烷基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C1-6烷基、氰基、C3-7环烷基C1-6烷氧基、C3-7环烷基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、C1-6烷氧基羰基哌嗪基、吗啉基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基、氧代吡咯烷基、四氢呋喃基C1-6烷氧基和四氢呋喃基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被C1-6烷基、卤素、卤代C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基或苯基C1-6烷基取代。
发明详述
定义
本文所用的单独的或在组合中的术语“C1-6烷基”表示包含1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、叔丁基等。具体的“C1-6烷基”是甲基、乙基、异丙基和叔丁基。更具体的“C1-6烷基”是甲基和乙基。
单独的或在组合中的术语“C3-7环烷基”是指包含3-7个碳原子、特别是3-6个碳原子的饱和碳环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。具体的“C3-7环烷基”基团是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。更具体的“C3-7环烷基”基团是环丙基。
单独的或在组合中的术语“C1-6烷氧基”表示基团C1-6烷基-O-，其中“C1-6烷基”如以上所定义；例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。具体的“C1-6烷氧基”基团是甲氧基、乙氧基和丙氧基。更具体的“C1-6烷氧基”基团是甲氧基和乙氧基。
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
术语“卤代C1-6烷氧基”是指C1-6烷氧基基团，其中C1-6烷氧基基团的至少一个氢原子被相同或不同的卤原子、特别是氟原子替代。卤代C1-6烷氧基的实例包括一氟-、二氟-或三氟-甲氧基、-乙氧基或-丙氧基，例如氟丙氧基、二氟丙氧基、三氟丙氧基、氟乙氧基、二氟乙氧基、三氟乙氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基。具体的“卤代C1-6烷氧基”基团是3-氟丙氧基、3,3-二氟丙氧基、3,3,3-三氟丙氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基。更具体的“卤代C1-6烷氧基”基团是2,2-二氟乙氧基。
术语“氨基”是指式-NR’R”的基团，其中R’和R”独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-7环烷基、杂C3-7环烷基、芳基或杂芳基。或者，R’和R”与它们所连接的氮一起可以形成杂C3-7环烷基。
术语“C1-6烷基磺酰基”是指基团-SO2-C1-6烷基，其中C1-6烷基如以上所定义。C1-6烷基磺酰基的实例包括甲基磺酰基和乙基磺酰基。
术语“对映体”是指化合物的两种彼此互为不能重叠的镜像的立体异构体。
术语“非对映体”是指具有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。
本发明的化合物可以以它们的可药用盐的形式存在。术语“可药用盐”是指保留了式I化合物的生物学效力和特性并且由适宜的无毒有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规的酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括例如衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，以及衍生自有机酸例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等的那些。碱加成盐包括衍生自铵、钾、钠和季铵氢氧化物，例如，四甲基氢氧化铵的那些。将药物化合物化学修饰成盐是制药化学家所熟知的一种用来提高化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性的技术。其例如描述于Bastin R.J.等人,Organic Process Research&Development(有机工艺研发)2000,4,427-435。特别是式I化合物的钠盐。
包含一个或多个手性中心的通式I的化合物可以以外消旋体、非对映体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映异构体盐。
HBsAg的抑制剂
本发明提供了(i)具有通式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体:
其中
R1是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或C3-7环烷基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C1-6烷基、氰基、C3-7环烷基C1-6烷氧基、C3-7环烷基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、C1-6烷氧基羰基哌嗪基、吗啉基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基、氧代吡咯烷基、四氢呋喃基C1-6烷氧基和四氢呋喃基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被C1-6烷基、卤素、卤代C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基或苯基C1-6烷基取代。
本发明的另一个实施方案是(ii)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是氢或C1-6烷基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C3-7环烷基C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基和四氢呋喃基C1-6烷氧基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被C1-6烷基或苯基C1-6烷基取代。
本发明的另一个实施方案是(iii)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是氢或甲基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：环丙基甲氧基、二氟乙氧基、二甲基氨基、氟、甲氧基、甲氧基吡咯烷基、甲基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基丙氧基、吡咯烷基和四氢呋喃基甲氧基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被甲基或苄基取代。
本发明的另一个实施方案是(iv)式I的化合物或或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R1是C1-6烷基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(v)式I的化合物或或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R1是甲基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(vi)式I的化合物或或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是被两个独立地选自C3-7环烷基C1-6烷氧基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、氧代哌嗪基、吡咯烷基和四氢呋喃基C1-6烷氧基的取代基取代的吡啶基；并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(vii)式I的化合物或或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R2是氟(甲氧基)吡啶基、二氟吡啶基、氟(二甲基氨基)吡啶基、氟(吡咯烷基)吡啶基、氟(甲基磺酰基哌嗪基)吡啶基、氟(甲氧基吡咯烷基)吡啶基、氟(氧代哌嗪基)吡啶基、氟(环丙基甲氧基)吡啶基、氟(四氢呋喃基甲氧基)吡啶基、氟(四氢呋喃基甲氧基)吡啶基或甲氧基(甲氧基吡咯烷基)吡啶基；并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(viii)式I的化合物或或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R3是C1-6烷基咪唑基、噻唑基或三唑基；并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(ix)式I的化合物或或其可药用盐或对映体或非对映体，R3是甲基咪唑基、噻唑基或三唑基；并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的具体式I化合物是如下化合物：
6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]唑；
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-4-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-(1-苄基咪唑-4-基)-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉；
4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉；
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑；
5-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑；
4-[6-(2-氟-6-吡咯烷-1-基-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-(4-氟-6-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[6-[2-(环丙基甲氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-(环丙基甲氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-(2,2-二氟乙氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
1-[3-[[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮；
1-[3-[[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮；
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-5-甲基-噻唑；和
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
更具体地，本发明涉及如下式I化合物：
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-4-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；和
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
合成
本发明的化合物可以通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物的合适方法以及它们的起始原料在以下流程和实施例中提供。除非另有指明，所有取代基，特别是R1、R2和R3如上所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学领域的普通技术人员熟知的含义。
化合物Ia的通用合成路线(流程1)
流程1
L是F、Cl、Br或I
式Ia的化合物可以按照流程1制备。
化合物II在催化剂如Pd2(dba)3或Pd(OAc)2、配体如Ruphos、Sphos或BINAP和碱如Cs2CO3或t-BuONa的存在下在合适的溶剂例如1,4-二烷或甲苯中与化合物III一起加热，得到化合物IV。将化合物IV在酸性条件下脱保护得到化合物V。将化合物V与DMFDMA在不存在或存在适宜溶剂例如DMF或乙腈的条件下反应生成中间体VI。可以通过将中间体VI与化合物VII在碱例如K2CO3、NaOMe或Et3N的存在下在适宜的溶剂例如EtOH或MeOH中环化得到化合物Ia。
化合物Ic的通用合成路线(流程2)
流程2
式Ic的化合物可以按照流程2制备。
将化合物Ia在MeOH的存在下氧化生成中间体Ib，适宜的氧化剂选自RuCl3和NaIO4。化合物Ic可以通过将中间体Ib与亲核试剂例如格氏试剂或二烷基锌试剂在路易斯酸例如BF3.Et2O的存在下反应制得。
本发明还涉及制备式I化合物的方法，其包括如下步骤之一：
(a)将式(A)的化合物
与式(B)的化合物
在碱的存在下环化；
(b)将式(C)的化合物
与亲核试剂在路易斯酸的存在下偶联；
其中R1、R2和R3如上所定义。
在步骤(a)中，碱可以是例如K2CO3、NaOMe或Et3N。
在步骤(b)中，亲核试剂可以是例如格氏试剂或二烷基锌试剂；路易斯酸可以是例如BF3·Et2O。
按照上述方法制备的式I化合物也是本发明的目的之一。
本发明的化合物还显示出良好的安全性和PK特性。
药物组合物和给药
本发明还涉及用作治疗活性物质的式I的化合物。
另一个实施方案提供含有本发明的化合物和治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明的化合物来制备这些组合物和药物的方法。在一个实施例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度下、在适当pH下并以所需的纯度与生理学可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体)混合而配制成盖仑制剂给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但通常优选约3至约8的范围。在一个实施例中，式(I)的化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中配制。在另一个实施方案中，式(I)的化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。
组合物以符合良好医学实践的方式进行配制、定剂量和给药。在此上下文中考虑的因素包括被治疗的具体病症、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、病症的病因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排和执业医师已知的其他因素。要给药的化合物的“有效量”将受这些考虑控制，并且是抑制HBsAg所需的最低量。例如，这样的量可以低于对正常细胞或作为整体的哺乳动物而言是有毒的量。
在一个实施例中，每个剂量胃肠外给药的本发明化合物的药物有效量将在约0.01至100mg/kg，或者约0.01至100mg/kg患者体重/天的范围内，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型如片剂和胶囊优选含有约0.1至约1000mg的本发明化合物。
本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括经口、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外及鼻内给药，以及在期望用于局部治疗时，病变内给药。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。
本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。这些组合物可以含有药物制剂中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性物质。
典型制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂进行制备。合适的载体和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于药物产品(即药物)的生产。
适合的口服剂型的实例是包含约0.1至1000mg本发明的化合物、约0至2000mg无水乳糖、约0至2000mg交联羧甲基纤维素钠、约0至2000mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约0至2000mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP的溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂。气雾剂制剂的一个实例可以通过将例如0.1至1000mg的本发明化合物溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液中，在需要时添加张力剂例如盐如氯化钠而制备。所述溶液可以过滤，例如使用0.2微米滤器过滤，以除去杂质和污染物。
因此，一个实施方案包括包含式I的化合物或其立体异构体或可药用盐的药物组合物。在另一个实施方案中，包括包含式I的化合物或其立体异构体或可药用盐以及可药用载体或赋形剂的药物组合物。
以下实施例A和B举例说明了本发明的典型组合物，但是其仅仅是作为本发明的代表。
实施例A
式I的化合物可以以本身已知的方式作为活性成分用于生产具有以下组成的片剂：
实施例B
式I的化合物可以以本身已知的方式作为活性成分用于生产具有以下组成的胶囊：
适应症和治疗方法
本发明的化合物可以抑制HBsAg生成或分泌并且抑制HBV基因表达。因此，本发明的化合物可用于治疗或预防HBV感染。
本发明涉及式I的化合物用于抑制HBsAg生成或分泌的用途。
本发明涉及式I的化合物用于抑制HBV DNA生成的用途。
本发明涉及式I的化合物用于抑制HBV基因表达的用途。
本发明涉及式I的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。
式I化合物用于制备可用于治疗或预防与HBV感染相关的疾病的药物的用途是本发明的一个目的。
本发明特别涉及式I化合物用于制备用于治疗或预防HBV感染的药物的用途。
另一个实施方案包括一种用于治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的式I的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药、缀合物或可药用盐。
实施例
通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。
文中使用的缩写如下:
μL: 微升
μm: 微米
μM: 微摩尔/升
IC50: 半数最大抑制浓度
LC/MS: 液相色谱/质谱
M: 摩尔浓度
MHz: 兆赫兹
min: 分钟
hr(s): 小时
mM: 毫摩尔/升
MS(ESI): 质谱(电喷雾解离)
nM: 毫摩尔/升
NMR: 核磁共振
obsd. 实测值
rt: 室温
Pd/C: 钯/活性碳
Pd(dppf)Cl2: [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)
Pd2(dba)3: 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
TFAA: 三氟乙酸酐
δ: 化学位移
BINAP: (2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘)
Sphos: 2-二环己基膦基-2′,6′-二甲氧基联苯
Xphos: 2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯
Xphos-Pd-G2: (2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-
氨基-1,1′-联苯)]氯化钯(II)
DMFDMA: N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛
t-BuONa: 叔丁醇钠
NMP: N-甲基-2-吡咯烷酮
MTBE: 甲基叔丁基醚
通用实验条件
中间体和最终化合物通过快速色谱使用以下仪器之一进行纯化：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge组件；ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL粒度：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒度：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工股份有限公司(Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd)的ZCX，孔：200-300或300-400。
中间体和最终化合物通过使用X BridgeTM Perp C18(5μm,OBDTM30×100mm)柱或SunFireTM Perp C18(5μm,OBDTM 30×100mm)柱的反相柱制备型HPLC纯化。
手性分离在Thar 350制备型SFC上用ChiralPak AD-10u(200x 50mm I.D.)进行，流动相A为CO2，B为乙醇。
LC/MS光谱使用Acquity Ultra Performance LC-3100质量检测器或AcquityUltra Performance LC-SQ检测器获得。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：
酸性条件：A：0.1％甲酸的H2O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；
碱性条件：A：0.05％NH3·H2O的H2O溶液；B：乙腈；
中性条件：A：H2O；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告指示母核质量的离子，并且除非另有说明，引述的质量离子是正质量离子(M+H)+。
微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty或CEM Discover中进行。
NMR谱图使用Bruker Avance 400MHz获得。
在V自动旋光仪上测量旋光度。
所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，试剂在从商业供应商处获得后不经进一步纯化直接使用。
制备实施例
实施例1
6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：1-甲基咪唑-2-甲醛肟的制备
向1-甲基-1H-咪唑-2-甲醛(5.0g,46mmol)的MeOH(50mL)溶液中在0℃下加入K2CO3(6.9g,50mmol)和NH2OH盐酸盐(3.55g,50mmol)。然后将形成的混合物升温至室温并搅拌12小时。滤出固体并将滤液真空浓缩。将残余物在MTBE(50mL)中打浆并通过抽滤收集沉淀，得到白色固体状1-甲基咪唑-2-甲醛肟(7.0g,粗品)。
步骤2：1-甲基咪唑-2-甲腈的制备
向1-甲基咪唑-2-甲醛肟(7.0g,60mmol)的DCM(50mL)溶液中在0℃下缓慢加入TFAA(50g,242mmol)。将混合物室温搅拌12小时然后真空浓缩。将残余物用DCM(200mL)稀释然后用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到棕色油状1-甲基咪唑-2-甲腈(5.0g,粗品)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：1-甲基咪唑-2-甲脒盐酸盐的制备
向1-甲基咪唑-2-甲腈(5.0g,47mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入CH3ONa(1.3g,24mmol)。将形成的混合物室温搅拌12小时。向形成的溶液中加入NH4Cl(3.9g,73mmol)并将形成的混合物室温搅拌另外3小时然后过滤。将滤液真空浓缩。将固体残余物用MTBE(30mL)重结晶得到白色固体状1-甲基咪唑-2-甲脒盐酸盐(5.0g)。
步骤4：8-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷的制备
将5-溴-1,2-二氟-3-甲氧基-苯(1.0g,5.6mmol)、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(1.4g,6.4mmol)、tert-BuONa(800mg,8.3mmol)、Ruphos(50mg)、Pd2(dba)3(100mg)在二烷(10mL)中的混合物加热至100℃并搅拌12小时。冷却至室温后，将混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物用DCM(100mL)稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到棕色油状8-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(2.4g,粗品)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤5:1-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)哌啶-4-酮的制备
将8-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(2.4g,1.67mmol)、HCO2H(10mL)和H2O(10mL)的混合物于90℃搅拌加热2小时。冷却至室温后，将形成的混合物用DCM(50mL)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到红色油状1-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)哌啶-4-酮(1.1g,粗品)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤6:6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将1-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)哌啶-4-酮(1.1g,4.6mmol)和DMFDMA(12mL)的混合物于120℃搅拌加热4小时。将形成的混合物真空浓缩并将残余物溶于MeOH(10mL)。向形成的溶液中加入K2CO3(1.38g,10mmol)和1-甲基咪唑-2-甲脒盐酸盐(540mg,3.36mmol)。将形成的混合物于70℃搅拌加热12小时。将形成的反应混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(65mg)。1HNMR(400MHz,D2O)δppm:8.73(s,1H),7.59-7.57(d,2H),6.61-6.60(d,2H),4.40(s,2H),4.26(s,3H),3.87(s,3H),3.66(s,2H),3.17(s,2H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例2
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：6-苄基-1,5,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二酮的制备
将1-苄基-3-乙氧羰基-4-哌啶酮盐酸盐(100.0g,0.34mol,销售商:AcrosOrganics,CAS注册号:1454-53-1)、NaOMe(181.4g,3.36mol)和尿素(100.8g,1.68mol)在EtOH(1.5L)中的混合物在氮气氛下于80℃搅拌加热16小时。将形成的混合物冷却至室温并过滤。将收集的固体悬浮在H2O(1.0L)中，然后用NaOH(3.0M)水溶液碱化并过滤。将收集的固体真空干燥得到淡黄色固体状6-苄基-1,5,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二酮(73.0g)。
步骤2：6-苄基-2,4-二氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-1,5,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二酮(73.0g,0.28mol)和POCl3(421.54g,2.75mol)的混合物在氮气氛下于110℃搅拌加热3小时。将形成的反应混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物悬浮在H2O(1.0L)中，然后用冷的NaOH(3.0M)水溶液缓慢碱化至pH＝9-10，然后用DCM(500mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色固体状6-苄基-2,4-二氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶粗品(54.0g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：6-苄基-2-氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-2,4-二氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(58.3g,0.19mol)和Zn粉(94.7g,0.99mol)在EtOH(1.0L)和NH4OH(146mL)中的混合物加热至80℃并在氮气氛下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液真空浓缩并将残余物通过快速柱纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1,v:v)得到无色油状6-苄基-2-氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(18.9g)。
步骤4：6-苄基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶和6-苄基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-2-氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(5.0g,19.3mmol)、1H-1,2,3-三唑(1.6g,23.2mmol)和K2CO3(4.0g,28.9mmol)在NMP(50mL)中的混合物加热至80℃并在氮气氛下搅拌4小时。将混合物冷却至室温并用水(100mL)稀释。将形成的混合物用EA(200mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状6-苄基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.0g)和黄色固体状6-苄基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(2.5g)。
步骤5:2-(三唑-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(2.5g,8.55mmol)和Pd/C(500mg)在MeOH(50mL)中的混合物在氢气氛(45psi)下室温搅拌24小时。然后滤除催化剂并将滤液真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状2-(三唑-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.26g)。
步骤6:2,6-二氟-4-甲氧基-吡啶的制备
将搅拌中的2,4,6-三氟吡啶(10.0g,0.075mol)的MeOH(100mL)溶液冷却至0℃并向溶液中分批加入NaOMe(6.5g,0.12mol)。将形成的混合物加热至50℃并在氮气氛下搅拌24小时，冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝20/1,v:v)得到无色液体状2,6-二氟-4-甲氧基-吡啶(5.5g)。
步骤7:6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将2-(三唑-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(500mg,2.47mmol)、2,6-二氟-4-甲氧基-吡啶(540mg,3.71mmol)和K2CO3(1.0g,7.42mmol)在NMP(10mL)中的混合物在氮气氛下于140℃搅拌2小时。将形成的反应混合物冷却至室温，用水稀释(20mL)并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝5/1,v:v)得到淡黄色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(250mg)。
步骤8:6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(150mg,0.46mmol)的THF/MeOH(2mL/2mL)溶液中在-70℃下加入RuCl3水合物(10mg,0.04mmol)。将形成的混合物搅拌10分钟，然后在-70℃下向形成的反应混合物中滴加NaIO4(294mg,1.38mmol)的H2O(2mL)溶液。将形成的混合物升温至室温并搅拌8小时，然后用饱和亚硫酸钠水溶液稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(90mg,粗品)，将其直接用于下一步骤。
步骤9:6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(90mg,0.08mmol)的THF(2mL)溶液中加入BF3.Et2O(107mg,0.75mmol)。将形成的混合物在-60℃下搅拌10分钟，然后在-60℃下向形成的反应混合物中缓慢滴加CH3MgBr的Et2O溶液(0.25mL,0.75mmol)。将形成的混合物升温中-20℃并搅拌1小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(10mL)稀释并用EA(10mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(7mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.83(d,2H),7.94(s,1H),6.24(s,1H),5.89(s,1H),5.72(q,1H),4.52(dd,1H),3.87(s,3H),3.50(ddd,1H),3.04-3.23(m,2H),1.58(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：342。
实施例3
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：2-(三唑-2-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.1g,8.55mmol,实施例2中步骤4的产物之一)和Pd/C(200mg,10wt.％)在MeOH(20mL)中的混合物在氢气氛(45psi)下室温搅拌24小时。滤出催化剂并将滤液真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状2-(三唑-2-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(364mg)。
步骤2：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将2-(三唑-2-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(364mg,1.8mmol)、2,6-二氟-4-甲氧基-吡啶(784mg,5.4mmol)和K2CO3(746mg,5.4mmol)在NMP(5mL)中的混合物在氮气氛下于140℃搅拌2小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(20mL)稀释并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝50/1,v:v)得到黄色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(323mg)。
步骤3：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(323mg,0.99mmol)的THF/MeOH/DCM(4mL/4mL/2mL)溶液中在-70℃下加入RuCl3水合物(22mg,0.10mmol)。将混合物于-70℃搅拌10分钟，然后在-70℃下滴加NaIO4(634mg,2.96mmol)的H2O(6mL)溶液。将反应混合物升温至室温并搅拌20小时，用饱和亚硫酸钠水溶液稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶粗品(120mg)，将其直接用于下一步骤。
步骤4：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(120mg,0.34mmol)的THF(2mL)溶液中在-70℃下加入BF3.Et2O(143mg,1.00mmol)。将形成的混合物于-70℃搅拌，然后在-70℃下向反应混合物中缓慢加入CH3MgBr的Et2O溶液(0.34mL,1.00mmol)。将反应混合物升温至-20℃并搅拌1小时，然后用饱和氯化铵水溶液稀释并用EA(10mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(9mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.79(s,1H),8.11(s,2H),6.24(s,1H),5.88(d,1H),5.71(q,1H),4.51(dd,1H),3.86(s,3H),3.43-3.54(m,1H),3.04-3.22(m,2H),1.57(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：342。
实施例4
2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]唑
步骤1：2-甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯的制备
将1-Boc-4-哌啶酮(200.0g,1.00mol)和DMFDMA(598.0g,5.02mol)的混合物于120℃下在氮气氛下加热搅拌12小时。将混合物真空浓缩并将残余物溶于MeOH(6.0L)。向形成的溶液中加入O-甲基异脲硫酸盐(319.4g,1.86mol)和K2CO3(699.4g,5.06mol)。将形成的反应混合物于70℃下在氮气氛下加热搅拌6小时。冷却至室温后，将形成的混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过快速柱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝50/1,v:v)得到黄色油状2-甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(117.0g)。
步骤2：2-甲氧基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的2-甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(58.5g,0.22mol)的1,4-二烷(450mL)溶液中在室温下缓慢加入HCl的1,4-二烷溶液(220mL,4.0M)。将形成的混合物搅拌12小时然后真空浓缩。将残余物溶于MeOH(150mL)，用碱性树脂碱化然后过滤。将滤液真空浓缩得到2-甲氧基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶粗品(36.0g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将2-甲氧基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(36.5g,0.22mol)、2,6-二氟-4-甲氧基-吡啶(41.7g,0.29mol)和K2CO3(61.0g,0.44mol)在NMP(400mL)中的混合物于140℃下在氮气氛下加热搅拌2小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(800mL)稀释并用EA(400mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝1/1,v:v)得到黄色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(60.0g)。
步骤4：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2,5-二甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(10.0g,0.034mol)的THF/MeOH/DCM(80mL/80mL/40mL)溶液中在-70℃下缓慢加入RuCl3水合物(1.54g,0.006mol)和H2O2(39g,0.344mol)。将形成的混合物升温至室温并搅拌48小时，然后用饱和亚硫酸钠水溶液稀释并过滤。将滤液用DCM(500mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2,5-二甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶粗品(14.5g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤5:6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-甲氧基-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向冷却至-70℃的搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2,5-二甲氧基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(50.5g,0.16mol)的THF(1.0L)溶液中加入BF3.Et2O(67.1g,0.47mol)。将形成的混合物于-70℃搅拌10分钟，然后在-70℃下向反应混合物中缓慢加入CH3MgBr的Et2O溶液(158mL,0.47mol)。于-20℃搅拌1小时后，将形成的混合物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)稀释并用EA(500mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝2/1,v:v)得到黄色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-甲氧基-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(15.1g)。
步骤6:6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-醇的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-甲氧基-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(10.6g,0.035mol)的CH3CN(300mL)溶液中在室温下缓慢加入NaI(15.6g,0.104mol)和TMSCl(11.3g,0.104mol)。将形成的混合物于40℃搅拌12小时然后真空浓缩。将残余物溶于DCM/MeOH(500mL,10:1,v:v)并依次用饱和亚硫酸钠水溶液(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-醇粗品(9.2g)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤7:2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-醇(9.2g,0.03mol)和POCl3(115.83g)的混合物在氮气氛下于90℃搅拌10小时。冷却至室温后，将反应混合物缓慢倒入在0℃下搅拌着的NH4OH(500mL)和DCM(1.0L)的混合物中。将有机相分离，用盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1,v:v)得到黄色固体状2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(4.4g)。
步骤8:2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]唑的制备
将含有2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(100mg,0.32mmol)、2-(三丁基锡烷基)唑(348mg,0.97mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(23mg,0.03mmol)在1,4-二烷(4mL)中的混合物的烧瓶脱气并用氮气填充。将形成的混合物于110℃加热并在氮气氛下搅拌12小时。冷却至室温后，将反应混合物真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]唑(19mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.80(s,1H),8.16(s,1H),7.46(s,1H),6.23(s,1H),5.87(d,1H),5.69(q,1H),4.50(dd,1H),3.86(s,3H),3.42-3.56(m,1H),3.01-3.21(m,2H),1.56(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：342。
实施例5
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、4-(三丁基锡烷基)噻唑(242mg,0.65mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(23mg,0.03mmol)在1,4-二烷(5mL)中的混合物脱气并用氮气填充。将形成的混合物于120℃加热并在氮气氛下搅拌12小时。冷却至室温后，将反应混合物真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(27mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.12(d,1H),8.72(s,1H),8.49(d,1H),6.22(s,1H),5.86(d,1H),5.63(q,1H),4.42-4.53(m,1H),3.86(s,3H),3.41-3.53(m,1H),2.97-3.17(m,2H),1.55(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：358。
实施例6
2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、2-(三丁基锡烷基)噻唑(364mg,0.97mmol)和Xphos-Pd-G2(25mg,0.03mmol,CAS注册号:1310584-14-5)在1,4-二烷(4mL)中的混合物脱气并用氮气填充。于120℃加热并在氮气氛下搅拌12小时后，将形成的混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(28mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.75(s,1H),8.02(s,1H),7.79(s,1H),6.22(s,1H),5.87(d,1H),5.66(q,1H),4.43-4.54(m,1H),3.86(s,3H),3.42-3.54(m,1H),2.99-3.20(m,2H),1.56(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：358。
实施例7
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、1-甲基-2-(三丁基锡烷基)咪唑(360mg,0.97mmol)和Xphos-Pd-G2(25mg,0.03mmol,CAS注册号:1310584-14-5)在1,4-二烷(5mL)中的混合物脱气并用氮气填充。于110℃加热并在氮气氛下搅拌12小时后，将形成的混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(14mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.73(s,1H),7.80(s,1H),7.63-7.73(m,1H),6.29(s,1H),5.97(d,1H),5.57(q,1H),4.35-4.45(m,1H),4.00(s,3H),3.84(s,3H),3.43-3.44(m,1H),2.84-3.04(m,2H),1.44(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：355。
实施例8
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-4-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、三丁基-(1-甲基咪唑-4-基)锡烷(360mg,0.97mmol)和预催化剂Xphos-Pd-G2(25mg,0.03mmol,CAS注册号:1310584-14-5)在二烷(5mL)中的混合物脱气并用氮气填充。于120℃加热并在氮气氛下搅拌12小时后，将形成的混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色油状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-4-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(44mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.49(s,1H),7.73(s,1H),7.69(br s,1H),6.00(s,1H),5.80(d,1H),5.54(br d,1H),4.37(br d,1H),3.85(s,3H),3.80(s,3H),3.36-3.48(m,1H),3.00-3.18(m,2H),1.50(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：355。
实施例9
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：6-苄基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-2-氯-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(2.4g,9.44mmol,实施例2中步骤3的产物)、吡唑(771mg,11.32mmol)和Cs2CO3(4.6g,14.15mmol)在CH3CN(50mL)中的混合物于80℃搅拌12小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝50/1,v:v)得到淡黄色固体状6-苄基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.7g)。
步骤2：2-吡唑-1-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将6-苄基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.7g,5.83mmol)和Pd/C(500mg,10wt.％)在MeOH(35mL)中的混合物在氢气氛(45psi)下室温搅拌16小时。滤出催化剂并将滤液真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状2-吡唑-1-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(800mg)。
步骤3：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将2-吡唑-1-基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶(800mg,3.98mmol)、2,6-二氟-4-甲氧基-吡啶(865mg,5.96mmol,实施例2中步骤6的产物)和K2CO3(1.65g,11.93mmol)在NMP(15mL)中的混合物在氮气氛下于140℃搅拌2小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝1/2,v:v)得到淡黄色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(630mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.59(d,1H),8.55(s,1H),7.82(s,1H),6.46-6.53(m,1H),6.00-6.05(m,1H),5.86(d,1H),4.72(s,2H),3.93(t,2H),3.86(s,3H),3.17(t,2H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：327。
步骤4：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(630mg,1.93mmol)在THF/MeOH/DCM(5mL/5mL/5mL)中的混合物中在-70℃下缓慢加入RuCl3水合物(87mg,0.39mmol)和H2O2(1.1g,9.65mmol)。然后将混合物升温至室温并搅拌24小时。用饱和亚硫酸钠水溶液终止反应并将形成的混合物用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶粗品(340mg)，将其直接用于下一步骤。
步骤5:6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲氧基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(340mg,0.95mmol)的THF(7mL)溶液中在-70℃下加入BF3.Et2O(406mg,2.86mmol)。将混合物在-70℃下搅拌10分钟并向反应混合物中缓慢加入CH3MgBr的Et2O溶液(3.0mL,2.86mmol)。升温至-20℃并搅拌1小时后，将形成的混合物用饱和氯化铵水溶液(10mL)稀释并用EA(10mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(17mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.66-8.70(m,2H),7.83(d,1H),6.58(dd,1H),6.22(s,1H),5.87(d,1H),5.64(q,1H),4.49(dd,1H),3.86(s,3H),3.41-3.54(m,1H),2.97-3.16(m,2H),1.54(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：341。
实施例10
2-(1-苄基咪唑-4-基)-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：1-苄基-4-碘-咪唑的制备
将4-碘咪唑(2.5g,12.89mmol)、Cs2CO3(6.3g,19.33mmol)和BnBr(2.6g,15.47mmol)在CH3CN(50mL)中的混合物于80℃搅拌12小时。冷却至室温后，将固体过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状1-苄基-4-碘-咪唑(2.68g)。
步骤2：(1-苄基咪唑-4-基)-三丁基-锡烷的制备
向搅拌中的1-苄基-4-碘-咪唑(500mg,1.76mmol)的THF(10mL)溶液中在室温下缓慢加入EtMgBr的Et2O溶液(0.7mL,2.11mmol)。将反应混合物搅拌1小时，然后向反应混合物中缓慢加入n-Bu3SnCl(1.24g,3.81mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌15小时。用饱和氯化铵水溶液(5mL)终止反应后，将形成的混合物用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到粗产物形式的(1-苄基咪唑-4-基)-三丁基-锡烷(580mg)，将其直接用于下一步骤。
步骤3：2-(1-苄基咪唑-4-基)-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、(1-苄基咪唑-4-基)-三丁基-锡烷(436mg,0.97mmol)和Xphos-Pd-G2预催化剂(26mg,0.03mmol,CAS注册号:1310584-14-5)在1,4-二烷(5mL)中的混合物脱气并用氮气填充。于110℃下加热并在氮气氛下搅拌12小时后，将形成的混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状2-(1-苄基咪唑-4-基)-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(41mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.39(s,1H),7.90-8.09(m,2H),7.30-7.50(m,5H),6.17(s,1H),5.87(s,1H),5.55(q,1H),5.31(s,2H),4.38(br d,1H),3.85(s,3H),3.37-3.49(m,1H),2.90-3.11(m,2H)1.40(br s,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：431。
实施例11
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺
步骤1：噻唑-4-甲酰胺的制备
将噻唑-4-甲酸(10.0g,77.4mmol)和SOCl2(100mL)的混合物在60℃下搅拌5小时。然后将形成的反应混合物冷却并真空浓缩并将残余物溶于THF(100mL)。在0℃下向溶液中缓慢加入氢氧化铵(18.1mL,465mmol)。将形成的混合物室温搅拌1小时，然后用水(100mL)稀释并用DCM(50mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色固体状噻唑-4-甲酰胺粗品(10.3g)，将其直接用于下一步骤。
步骤2：噻唑-4-甲腈的制备
向噻唑-4-甲酰胺(10.0g,67.1mmol)的THF(150mL)溶液中在0℃下依次缓慢加入三乙胺(42.1mL,302mmol)和TFAA(19mL,134mmol)。在缓慢升温至室温并搅拌18小时后，将反应混合物用水(100mL)稀释并用DCM(50mL)萃取三次。将合并的有机相真空浓缩并将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1,v:v)得到黄色油状噻唑-4-甲腈(7.6g)。
步骤3：噻唑-4-甲脒盐酸盐的制备
向噻唑-4-甲腈(7.6g,64.2mmol)的无水MeOH(50mL)溶液中加入甲醇钠(1.73g,32.1mmol)并将形成的混合物室温搅拌16小时。向形成的混合物中加入氯化铵(4.46g,83.4mmol)。于80℃下搅拌3小时后，将形成的混合物冷却至室温并过滤。将滤液真空浓缩得到噻唑-4-甲脒盐酸盐粗品(10.4g),，将其直接用于下一步骤。
步骤4：2-甲基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1-甲酸苄酯的制备
向搅拌中的4-甲氧基吡啶(50.0g,458mmol)的无水THF(500mL)溶液中在-25℃下加入氯甲酸苄酯(50.0g,458mmol)的无水THF(400mL)溶液。在相同的温度下搅拌1小时后，将反应混合物冷却至-40℃，然后滴加甲基溴化镁(3.0M的乙醚溶液,183mL,550mmol)。移走冷却浴并将形成的混合物室温搅拌0.5小时，然后倒入10％HCl水溶液(1L)中。将形成的混合物室温搅拌10分钟，然后用EA(2L)萃取两次。将有机层合并，依次用饱和碳酸氢钠水溶液(1L)和盐水(1L)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝10/1,v:v)得到无色油状2-甲基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1-甲酸苄酯(105g)。
步骤5:2-甲基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1,3-二甲酸O1-苄酯O3-乙酯的制备
向2-甲基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1-甲酸苄酯(100.0g,400mmol)的THF(1L)溶液中在-70℃下滴加二(三甲基硅基)氨基锂(1.0M的THF溶液,960mL,960mmol)。将混合物在该温度下搅拌1小时。然后向形成的混合物中加入氯甲酸乙酯(55.4g,440mmol)。于-70℃下继续搅拌3小时后，将形成的反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(300mL)稀释然后用EA(3L)稀释。将有机层依次用水(1L)和盐水(1L)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色油状2-甲基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1,3-二甲酸O1-苄酯O3-乙酯(110g,粗品)。
步骤6:2-甲基-4-氧代-哌啶-1,3-二甲酸O1-苄酯O3-乙酯的制备
向2-甲基-4-氧代-2,3-二氢吡啶-1,3-二甲酸O1-苄酯O3-乙酯(110g,347mmol)的乙酸(1L)溶液中分批加入Zn(113g,1733mmol)。于75℃搅拌加热3小时后，将反应混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物用EA(3L)稀释，依次用水(1L)、NaHCO3水溶液(500mL)和盐水(1L)洗涤，然后真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化得到黄色油状2-甲基-4-氧代-哌啶-1,3-二甲酸O1-苄酯O3-乙酯(53g)。
步骤7:4-羟基-5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯的制备
向噻唑-4-甲脒盐酸盐粗品(7g)的三氟乙醇(100mL)溶液中加入2-甲基-4-氧代-哌啶-1,3-二甲酸O1-苄酯O3-乙酯(8.87g,27.8mmol)和碳酸钾(9.61g,69.5mmol)。将反应混合物于65℃搅拌16小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤液用盐水洗涤，用EA(100mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状4-羟基-5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯(8.8g)。
步骤8:4-氯-5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯的制备
向4-羟基-5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯(8.8g,19.6mmol)的乙腈(100mL)溶液中加入POCl3(4.56mL,48.9mmol)。于60℃搅拌2小时后，将形成的混合物冷却至室温并真空浓缩得到4-氯-5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯粗品(8.2g)，将其直接用于下一步骤。
步骤9:5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯的制备
向4-氯-5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯(3.0g)在EtOH(40mL)、水(10mL)和氢氧化铵(10mL)混合物中的溶液中加入Pd/C(6.0g,10wt.％)。将反应混合物在氢气氛下室温搅拌20小时。滤出催化剂并将滤液真空浓缩得到5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯粗品(2.5g)，将其直接用于下一步骤。
步骤10:4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑的制备
将5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸苄酯(2.5g)在盐酸(15mL)中的悬浮液在80℃下搅拌1小时。冷却至室温后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化并用氯仿和异丙醇的混合物(v:v＝3:1,50mL)萃取三次。将合并的萃取液用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑粗品(1.2g)，将其直接用于下一步骤。
步骤11:4-[6-(6-氟-4-碘-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的制备
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(300mg,1.29mmol)的DMSO(5mL)溶液中加入2,6-二氟-4-碘吡啶(373mg,1.55mmol)和NaHCO3(542mg,6.45mmol)并将形成的混合物于80℃搅拌18小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物过滤并将滤液用盐水稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状4-[6-(6-氟-4-碘-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(520mg)。
步骤12:2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺的制备
向4-[6-(6-氟-4-碘-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(100mg,221μmol)的二烷(5mL)溶液中加入二甲基胺盐酸盐(54mg,662μmol)、碳酸铯(359mg,1.1mmol)、Xantphos(25.5mg,44.1μmol)和Pd(OAc)2(4.95mg,22.1μmol)。将形成的混合物在氩气氛下于100℃搅拌20小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色固体状2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺(14mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.80(s,1H),8.50(d,1H),5.84(s,1H),5.66(s,1H),5.64-5.59(m,1H),4.46-4.38(m,1H),3.42-3.34(m,1H),3.02-2.93(m,8H),1.45(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]:371。
实施例12、13和14
4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉和4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉和4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(实施例11中步骤10的产物,200mg,861μmol)的DMSO(2mL)溶液中加入DIPEA(3mL)和2,4,6-三氟吡啶(149mg,1.12mmol)。将形成的混合物在微波照射下于150℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温后，向形成的混合物中加入吗啉(225mg,2.58mmol)。将形成的混合物在130℃下再搅拌18小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉(57mg)和淡黄色固体状4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉(40mg)和淡黄色固体状4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉(19mg)。
实施例12:4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.73(s,1H),8.51(d,1H),6.07(s,1H),6.02(s,1H),5.41-5.31(m,1H),4.17-4.09(m,1H),3.71-3.63(m,4H),3.53-3.44(m,1H),3.43-3.36(m,4H),3.11-2.92(m,2H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：413。
实施例13:4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.79(s,1H),8.50(d,1H),6.11(s,1H),5.89(s,1H),5.68-5.58(m,1H),4.51-4.36(m,1H),3.73-3.68(m,4H),3.43-3.35(m,1H),3.30-3.25(m,4H),3.05-2.90(m,2H),1.45(d,3H).(ESI+)[(M+H)+]：413。
实施例14:4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.78(s,1H),8.50(d,1H),6.16-6.06(m,1H),5.97-5.90(m,1H),5.67-5.59(m,1H),4.50-4.41(m,1H),3.74-3.64(m,4H),3.47-3.41(m,4H),3.40-3.34(m,1H),3.07-2.89(m,2H),1.46(d,3H).(ESI+)[(M+H)+]：413。
实施例15和16
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑和5-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑
步骤1：三丁基-(2-甲基噻唑-4-基)锡烷的制备
向搅拌中的4-溴-2-甲基噻唑(200mg,1.12mmol)的THF(4mL)溶液中在-70℃下缓慢加入n-BuLi(0.5mL,1.35mmol,己烷溶液)并将反应混合物于-70℃搅拌1小时。向形成的混合物中缓慢加入n-Bu3SnCl(590mg,1.81mmol的THF(2mL)溶液。于-70℃继续搅拌1小时后，将形成的混合物用饱和NH4Cl水溶液(2mL)稀释并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到三丁基-(2-甲基噻唑-4-基)锡烷粗品(380mg)，将其直接用于下一步骤。
步骤2：4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑和5-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑的制备
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、三丁基-(2-甲基噻唑-4-基)锡烷(粗品377mg,0.97mmol)和Xphos-Pd-G2(51mg,0.06mmol,CAS注册号:1310584-14-5)在1,4-二烷(5mL)中的混合物于120℃加热并在氮气氛下搅拌12小时。冷却至室温后，将反应混合物真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑(5mg)和淡黄色固体状5-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑(22mg)。
实施例15:4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.70(s,1H),8.26(s,1H),6.22(s,1H),5.86(d,1H),5.62(q,1H),4.42-4.54(m,1H),3.86(s,3H),3.40-3.55(m,1H),2.97-3.16(m,2H),2.79(s,3H),1.54(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：372。
实施例16:5-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.62(s,1H),8.36(s,1H),6.20(s,1H),5.86(d,1H),5.59(q,1H),4.46(br dd,1H),3.86(s,3H),3.39-3.54(m,1H),2.90-3.13(m,2H),2.74(s,3H),1.52(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：372。
实施例17、18和19
4-[6-(2-氟-6-吡咯烷-1-基-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4-氟-6-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(实施例11中步骤10的产物,200mg,861μmol)的DMSO(2mL)溶液中加入DIPEA(3mL)和2,4,6-三氟吡啶(149mg,1.12mmol)。将混合物在微波照射下于150℃搅拌2小时然后冷却至室温。然后向冷却的混合物中加入吡咯烷(122mg,1.72mmol)。将形成的混合物继续于130℃下搅拌18小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-(2-氟-6-吡咯烷-1-基-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(60mg)和淡黄色固体状4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(50mg)和淡黄色固体状4-[6-(4-氟-6-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(14mg)。
实施例17:4-[6-(2-氟-6-吡咯烷-1-基-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.76(s,1H),8.51(d,1H),5.89(s,1H),5.67(s,1H),5.38-5.28(m,1H),4.14-4.00(m,1H),3.55-3.44(m,1H),3.34-3.27(m,4H),3.12-2.90(m,2H),1.96-1.87(m,4H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：397。
实施例18:4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.80(s,1H),8.50(d,1H),5.72(s,1H),5.65-5.54(m,1H),5.52(s,1H),4.48-4.36(m,1H),3.42-3.35(m,1H),3.29-3.22(m,4H),3.07-2.89(m,2H),2.01-1.86(m,4H),1.45(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：397。
实施例19:4-[6-(4-氟-6-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.78(s,1H),8.49(d,1H),5.96-5.91(m,1H),5.72-5.60(m,1H),5.58-5.43(m,1H),4.49-4.45(m,1H),3.42-3.34(m,5H),3.07-2.89(m,2H),1.99-1.87(m,4H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：397。
实施例20、21和22
4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[4-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(实施例11中步骤10的产物,200mg,861μmol)的DMSO(2mL)溶液中加入DIPEA(3mL)和2,4,6-三氟吡啶(149mg,1.12mmol)。将混合物在微波照射下于150℃搅拌2小时然后冷却至室温。然后向冷却的混合物中加入1-(甲基磺酰基)哌嗪(283mg,1.72mmol)。将形成的混合物于130℃继续搅拌18小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(67mg)和淡黄色固体状4-[6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(59mg)和淡黄色固体状4-[6-[4-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(16mg)。
实施例20:4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.74(s,1H),8.51(d,1H),6.14(s,1H),6.03(s,1H),5.43-5.33(m,1H),4.19-4.08(m,1H),3.64-3.54(m,4H),3.54-3.43(m,1H),3.21-3.13(m,4H),3.11-2.94(m,2H),2.90(s,3H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：490。
实施例21:4-[6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.80(s,1H),8.50(d,1H),6.16(s,1H),5.94(s,1H),5.69-5.60(m,1H),4.50-4.40(m,1H),3.57-3.48(m,4H),3.45-3.38(m,1H),3.24-3.17(m,4H),3.07-2.95(m,2H),2.92(s,3H),1.46(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：490。
实施例22:4-[6-[4-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.78(s,1H),8.50(d,1H),6.16-6.07(m,1H),6.04-5.97(m,1H),5.68-5.58(m,1H),4.52-4.42(m,1H),3.66-3.58(m,4H),3.45-3.36(m,1H),3.21-3.15(m,4H),3.05-2.94(m,2H),2.90(s,3H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：490。
实施例23、24和25
4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[6-氟-4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(实施例11中步骤10的产物,200mg,861μmol)的DMSO(2mL)溶液中加入DIPEA(3mL)和2,4,6-三氟吡啶(149mg,1.12mmol)。将混合物在微波照射下于150℃搅拌2小时然后冷却至室温。然后向形成的混合物中加入3-甲氧基吡咯烷盐酸盐(237mg,1.72mmol)。于130℃继续搅拌18小时后，将反应混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(65mg)和淡黄色固体状4-[6-[6-氟-4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(54mg)和淡黄色固体状4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(17mg)。
实施例23:4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.75(s,1H),8.51(d,1H),5.91(s,1H),5.69(s,1H),5.39-5.27(m,1H),4.12-3.99(m,2H),3.53-3.40(m,4H),3.26(d,3H),3.11-2.92(m,2H),2.06-1.99(m,2H),1.47(dd,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：427。
实施例24:4-[6-[6-氟-4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.80(s,1H),8.50(d,1H),5.73(s,1H),5.65-5.57(m,1H),5.53(s,1H),4.47-4.36(m,1H),4.13-4.03(m,1H),3.48-3.34(m,4H),3.27(d,3H),3.10-2.88(m,2H),2.09-2.02(m,2H),1.45(dd,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：427。
实施例25:4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.78(s,1H),8.50(d,1H),6.01-5.94(m,1H),5.71-5.61(m,1H),5.58-5.51(m,1H),4.51-4.42(m,1H),4.08-4.00(m,1H),3.51-3.35(m,4H),3.26(d,3H),3.06-2.88(m,2H),2.07-1.97(m,2H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：427。
实施例26
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲腈的制备
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,200mg,0.65mmol)、Zn(CN)2(380mg,3.24mmol)、Xphos(62mg,0.13mmol)和烯丙基氯化钯(II)二聚体(24mg,0.06mmol,CAS注册号:12012-95-2)在DMA(4mL)中的混合物在微波反应器中于150℃加热1小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲腈(190mg)，其直接用于下一步骤。
步骤2：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
向搅拌中的NaOMe(3mg,0.06mmol)的MeOH(2mL)溶液中在室温下缓慢加入6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲腈(190mg,0.63mmol)的MeOH(2mL)溶液，然后将混合物搅拌1小时。然后向形成的溶液中加入AcOH(0.2mL)和2,2-二甲氧基乙胺(133mg,1.27mmol)。于室温下继续搅拌1小时后，将形成的混合物用浓盐酸酸化至pH＝1，然后在氮气氛下于70℃搅拌加热14小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物用水(10mL)稀释并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(26.5mg)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.71(br s,1H),7.28(br s,2H),6.22(s,1H),5.87(s,1H),5.54-5.74(m,1H),4.48(br d,1H),3.86(s,3H),3.47(br t,1H),2.95-3.18(m,2H),1.54(br d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：341。
实施例27
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(实施例4中步骤7的产物,100mg,0.32mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(126mg,0.65mmol)、K2CO3(134mg,0.97mmol)和Pd(dppf)Cl2(71mg,0.10mmol)在1,4-二烷和H2O(3mL/0.3mL)中的混合物于120℃下在微波反应器中搅拌加热2小时。冷却至室温后，将反应混合物真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(5mg)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.69(s,1H),7.69(br s,1H),7.03(d,1H),6.22(s,1H),5.87(d,1H),5.61(q,1H),4.43-4.53(m,1H),3.86(s,3H),3.42-3.52(m,1H),2.97-3.17(m,2H),1.54(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：341。
实施例28、29和30
4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮和4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮和4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(实施例11中步骤10的产物,200mg,861μmol)的DMSO(2mL)溶液中加入DIPEA(3mL)和2,4,6-三氟吡啶(149mg,1.12mmol)。将形成的混合物在微波照射下于150℃搅拌2小时然后冷却至室温。然后向冷却的混合物中加入哌嗪-2-酮(172mg,1.72mmol)。于130℃继续搅拌18小时后，将形成的反应混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮(55mg)和淡黄色固体状4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮(40mg)和淡黄色固体状4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮(15mg)。
实施例28:4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.74(s,1H),8.51(d,1H),8.09(s,1H),6.02(s,2H),5.44-5.36(m,1H),4.21-4.11(m,1H),3.96(s,2H),3.74-3.62(m,2H),3.55-3.44(m,1H),3.29-3.24(m,2H),3.10-2.91(m,2H),1.48(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：426。
实施例29:4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.79(s,1H),8.50(d,1H),8.18(s,1H),6.04(s,1H),5.87(s,1H),5.69-5.61(m,1H),4.54-4.44(m,1H),3.91(s,2H),3.59-3.50(m,2H),3.42-3.37(m,1H),3.32-3.26(m,2H),3.06-2.90(m,2H),1.46(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：426。
实施例30:4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.79(s,1H),8.50(d,1H),8.08(s,1H),6.15-6.07(m,1H),5.97-5.90(m,1H),5.67-5.57(m,1H),4.53-4.40(m,1H),3.99(s,2H),3.73-3.66(m,2H),3.45-3.36(m,1H),3.30-3.25(m,2H),3.06-2.91(m,2H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：426。
实施例31、32和33
4-[6-[2-(环丙基甲氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[6-(环丙基甲氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
步骤1：4-[6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的制备
向4-(5-甲基-5,6,7,8-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)噻唑(实施例11中步骤10的产物,900mg,3.87mmol)的DMSO(10mL)溶液中加入DIPEA(15mL)和2,4,6-三氟吡啶(670mg,5.04mmol)。于130℃搅拌18小时后，将形成的反应混合物冷却至室温，然后用盐水(20mL)稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝20/1,v:v)得到黄色固体状4-[6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的混合物(0.9g)。
步骤2：4-[6-[2-(环丙基甲氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[6-(环丙基甲氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的制备
向环丙基甲醇(92.9mg,1.29mmol)的DMF(3mL)溶液中在0℃下加入氢化钠(68.8mg,60wt.％,1.72mmol)并将混合物在0℃下搅拌1小时。然后向形成的混合物中加入4-[6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的混合物(320mg)。缓慢升温至80℃并在80℃下搅拌16小时后，将形成的反应混合物冷却至室温，然后用水(10mL)稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-[2-(环丙基甲氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(14mg)和淡黄色固体状4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(20mg)和淡黄色固体状4-[6-[6-(环丙基甲氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(6mg)。
实施例31:4-[6-[2-(环丙基甲氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.02(d,1H),8.62(s,1H),8.40(d,,1H),6.10(t,1H),6.06(d,1H),5.20-5.12(m,1H),4.02-3.95(m,1H),3.91(d,2H),3.53-3.44(m,1H),3.09-2.94(m,2H),1.46(d,3H),1.20–1.08(m,1H),0.51-0.45(m,2H),0.25-0.20(m,2H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：398。
实施例32:4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.02(d,1H),8.61(s,1H),8.38(d,1H),6.10(s,1H),5.74(d,1H),5.55-5.48(m,1H),4.41-4.34(m,1H),3.80(d,2H),3.42-3.32(m,1H),3.05-2.92(m,2H),1.44(d,3H),1.22-1.13(m,1H),0.58-0.48(m,2H),0.30-0.22(m,2H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：398。
实施例33:4-[6-[6-(环丙基甲氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.02(d,1H),8.63(s,1H),8.38(d,1H),6.11-6.05(m,1H),5.72-5.66(m,1H),5.57-5.50(m,1H),4.46-4.34(m,1H),4.09-3.97(m,2H),3.44-3.34(m,1H),3.06-2.90(m,2H),1.46(d,3H),1.22-1.15(m,1H),0.54-0.44(m,2H),0.30-0.21(m,2H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：398。
实施例34、35和36
4-[6-[2-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[4-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[6-(2,2-二氟乙氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
向2,2-二氟乙醇(118.7mg,1.45mmol)的DMF(3mL)溶液中在0℃下加入氢化钠(57.9mg,60wt.％,1.45mmol)并将混合物在0℃下搅拌1小时。然后向形成的混合物中加入4-[6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的混合物(250mg,实施例31、32和33中步骤1的产物)。缓慢升温至80℃并搅拌16小时后，将形成的混合物冷却至室温，然后用水(10mL)稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-[2-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(44mg)和淡黄色固体状4-[6-[4-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(27mg)和淡黄色固体状4-[6-[6-(2,2-二氟乙氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(4mg)。
实施例34:4-[6-[2-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.14(d,1H),8.73(s,1H),8.51(d,1H),6.32-6.26(m,2.3H),6.16(t,0.5H),6.03(t,0.2H),5.32-5.23(m,1H),4.50-4.36(m,2H),4.15-4.06(m,1H),3.66-3.55(m,1H),3.23-3.05(m,2H),1.58(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：398。
实施例35:4-[6-[4-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.14(d,1H),8.73(s,1H),8.50(d,1H),6.35(t,0.3H),6.31(s,1H),6.21(t,0.5H),6.07(t,0.3H),5.94(d,1H),5.70-5.61(m,1H),4.56-4.48(m,1H),4.41-4.30(m,2H),3.55-3.45(m,1H),3.18-3.02(m,2H),1.57(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：398。
实施例36:4-[6-[6-(2,2-二氟乙氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.14(d,1H),8.77(s,1H),8.52(d,1H),6.34(t,0.3H),6.32-6.27(m,1H),6.20(t,0.5H),6.06(t,0.2H),5.93-5.88(m,1H),5.70-5.62(m,1H),4.63-4.48(m,3H),3.60-3.48(m,1H),3.19-3.05(m,2H),1.60(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：398。
实施例37、38和39
4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-[4-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑
向(四氢呋喃-3-基)甲醇(147.6mg,1.45mmol)的DMF(3mL)溶液中在0℃下加入氢化钠(57.9mg,60wt.％,1.45mmol)并将形成的混合物在0℃下搅拌1小时。然后向悬浮液中加入4-[6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的混合物(250mg,实施例31、32和33中步骤1的产物)。缓慢升温至80℃并搅拌16小时后，将形成的混合物冷却至室温，然后用水(10mL)稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(32mg)和淡黄色固体状4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(34mg)和淡黄色固体状4-[6-[4-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑(7mg)。
实施例37:4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.73(s,1H),8.51(d,1H),6.33(s,1H),6.21(s,1H),5.41-5.29(m,1H),4.17-4.01(m,3H),3.81-3.72(m,2H),3.69-3.61(m,1H),3.56-3.47(m,2H),3.12-2.91(m,2H),2.69-2.56(m,1H),2.06-1.95(m,1H),1.69-1.58(m,1H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：428。
实施例38:4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.20(d,1H),8.80(s,1H),8.50(d,1H),6.32(s,1H),5.98(d,1H),5.66-5.58(m,1H),4.48-4.39(m,1H),4.09-3.96(m,2H),3.83-3.75(m,2H),3.70-3.63(m,1H),3.55-3.49(m,1H),3.46-3.38(m,1H),3.08-2.90(m,2H),2.72-2.60(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.70-1.59(m,1H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：428。
实施例39:4-[6-[4-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.21(d,1H),8.80(s,1H),8.50(d,1H),6.39-6.33(m,1H),5.95-5.88(m,1H),5.67-5.58(m,1H),4.52-4.44(m,1H),4.29-4.14(m,2H),3.82-3.75(m,2H),3.70-3.61(m,1H),3.56-3.49(m,1H),3.48-3.40(m,1H),3.07-2.93(m,2H),2.70-2.59(m,1H),2.05-1.98(m,1H),1.71-1.63(m,1H),1.49(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：428。
实施例40和41
1-[3-[[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮和1-[3-[[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮
向1-(3-羟基丙基)吡咯烷-2-酮(207.3mg,1.45mmol)的DMF(3mL)溶液中在0℃下加入氢化钠(57.9mg,60wt.％,1.45mmol)并将形成的混合物在0℃下搅拌1小时。然后向悬浮液中加入4-[6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑和4-[6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑的混合物(250mg,
实施例31、32和33中步骤1的产物)。将形成的混合物缓慢升温至80℃并搅拌16小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物用水(10mL)稀释并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到淡黄色固体状1-[3-[[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮(3mg)和淡黄色固体状1-[3-[[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮(5mg)。
实施例40:1-[3-[[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.03(d,1H),8.63(s,1H),8.41(d,1H),6.12(s,1H),6.08(s,1H),5.20-5.14(m,1H),4.10(t,2H),4.04-3.97(m,1H),3.54-3.33(m,5H),3.08-2.95(m,2H),2.28(t,2H),1.99-1.85(m,4H),1.47(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：469。
实施例41:1-[3-[[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:9.02(d,1H),8.62(s,1H),8.39(d,1H),6.12(s,1H),5.77(d,1H),5.57-5.48(m,1H),4.42-4.35(m,1H),3.99(t,2H),3.45-3.34(m,5H),3.06-2.92(m,2H),2.27(t,2H),2.01-1.87(m,4H),1.45(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]：469。
实施例42
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-5-甲基-噻唑
步骤1：叔丁基-二甲基-(5-甲基噻唑-2-基)硅烷的制备
向搅拌中的2-溴-5-甲基噻唑(1.00g,5.62mmol)的THF(20mL)溶液中在-70℃下缓慢加入正丁基锂溶液(2.7mL,6.74mmol,己烷溶液)并将混合物在-70℃下搅拌0.5小时。然后向形成的混合物中缓慢加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.02g,6.74mmol)。升温至20℃并继续搅拌2小时后，将反应混合物用饱和氯化铵溶液稀释并用EA(30mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，真空浓缩并通过快速柱色谱纯化(洗脱剂：PE:EA＝50:1,v:v)得到黄色液体状叔丁基-二甲基-(5-甲基噻唑-2-基)硅烷(1.10g)。
步骤2：叔丁基-(4-碘-5-甲基-噻唑-2-基)-二甲基-硅烷的制备
向搅拌中的叔丁基-二甲基-(5-甲基噻唑-2-基)硅烷(680mg,3.19mmol)的THF(10mL)溶液中在-20℃下加入正丁基锂溶液(3.2mL,7.97mmol,己烷溶液)并将混合物搅拌0.5小时。然后向形成的混合物中在0℃下加入碘(1.20g,4.78mmol)的THF(5mL)溶液。升温至20℃并搅拌2小时后，将形成的反应混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释并用EA(20mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。将残余物通过快速柱色谱纯化(洗脱剂：PE:EA＝100:1,v:v)得到黄色液体状叔丁基-(4-碘-5-甲基-噻唑-2-基)-二甲基-硅烷(470mg)。
步骤3：叔丁基-二甲基-(5-甲基-4-三丁基锡烷基-噻唑-2-基)硅烷的制备
向搅拌中的叔丁基-(4-碘-5-甲基-噻唑-2-基)-二甲基-硅烷(100mg,0.29mmol)的THF(2mL)溶液中在室温下加入乙基溴化镁(0.15mL,0.44mmol)并将混合物搅拌2小时。然后缓慢加入n-Bu3SnCl(530mg,1.63mmol)并将反应液于20℃搅拌16小时。用饱和氯化铵溶液终止反应并用EA(5mL)萃取三次。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到叔丁基-二甲基-(5-甲基-4-三丁基锡烷基-噻唑-2-基)硅烷粗品(110mg)，将其直接用于下一步骤。
步骤4：4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-5-甲基-噻唑的制备
将2-氯-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(100mg,0.32mmol,实施例4中步骤7的产物)、叔丁基-二甲基-(5-甲基-4-三丁基锡烷基-噻唑-2-基)硅烷(488mg,0.97mmol)和Xphos-pd-G2(25mg,0.03mmol,CAS注册号:1310584-14-5)在1,4-二烷(5mL)中的混合物在氮气氛下于120℃搅拌加热12小时。将形成的反应混合物冷却至室温然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-5-甲基-噻唑(8.6mg,收率:7％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.85(s,1H),8.74(s,1H),6.22(s,1H),5.86(s,1H),5.63(br d,1H),4.42-4.54(m,1H),3.86(s,3H),3.43-3.54(m,1H),2.98-3.20(m,2H),2.89(s,3H),1.55(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]:372。
实施例43
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶
步骤1：N-氨基-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲脒的制备
将6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲腈(实施例26中步骤1的产物,50mg,0.17mmol)和NH2NH2水合物(13mg,0.25mmol)在EtOH(1mL)中的混合物于80℃搅拌加热3小时。将形成的混合物真空浓缩得到黄色固体状N-氨基-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲脒粗品(50mg)，将其直接用于下一步骤。
步骤2：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶的制备
将N-氨基-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-甲脒粗品(50mg,0.15mmol)、原甲酸三乙酯(112mg,0.75mmol)在AcOH(0.5mL)中的混合物于100℃搅拌加热1小时。将形成的混合物用EA(100mL)稀释，用NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶(11.8mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.69(s,1H)8.25(s,1H)6.00(s,1H)5.83(d,1H)5.66(q,1H)4.30-4.42(m,1H)3.86(s,3H)3.40-3.54(m,1H)3.07-3.28(m,2H)1.57(d,3H)。MS实测值：(ESI+)[(M+H)+]:342。
生物学实施例
实施例44材料和方法
HBV细胞系
将组成性表达HBV的细胞系HepG2.2.15细胞(Acs等.Proc Natl Acad Sci USA,84,(1987),4641-4)在保持在5％CO2、37℃的DMEM+Glutamax-I培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)中培养，所述培养基补充有10％胎牛血清(Invitrogen)和最终浓度为200mg/L的G418(Invitrogen)。
HBsAg试验
将HepG2.2.15细胞一式两份地以1.5x104个细胞/孔接种到白色96孔板中。将细胞用化合物在DMSO中的三倍系列稀释液处理。在所有孔中的最终DMSO浓度为1％，并将DMSO用作无药物对照。
使用HBsAg化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，中国郑州，目录号：CL0310-2)来半定量地测量分泌的HBV抗原的水平。对于该检测，使用50μL/孔培养上清液并用HBsAg化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，中国郑州，目录号：CL0310-2)对HBsAg进行定量，将50μL的上清液转移至CLIA测定板并将50μL的酶结合试剂添加到每个孔中。将板密封并在室温下温和搅拌1小时。弃去上清液-酶-混合物并将孔用300μL的PBS洗涤6次。通过将CLIA板正面向下放置在吸水纸巾上将残余液体除去。向每个孔中添加25μL的底物A和B。在温育10分钟后使用照度计(Mithras LB940MultimodeMicroplate Reader)测量发光度。生成剂量-响应曲线并使用E-WorkBook Suite(IDBusiness Solutions Ltd.,Guildford,UK)外推IC50值。IC50定义为相比于无药物对照，HBsAg分泌减少50％时的化合物浓度。
按照本文的描述测试式I化合物抑制HBsAg的能力。在以上试验中测试实施例化合物并发现其具有低于50μM的IC50。发现式I的特定化合物具有低于0.50μM的IC50。发现式I的更为特定的化合物具有低于0.100μM的IC50。HBsAg试验的结果在表1中给出。
表1:在HBsAg试验中的活性数据
HBV DNA试验
该试验采用实时qPCR(TaqMan)直接测量细胞上清液中的细胞外HBV DNA拷贝数。将HepG2.2.15细胞接种于96孔微量滴定板中，然后用完全培养液(DMEM,Glutamax,10％FBS,1％青霉素/链霉素,250μg/mL Genetycin,最终DMSO浓度为1％)处理。只使用靠内的孔以减少细胞培养过程中观察到的“边缘效应”，靠外的孔中充满完全培养液以使样品的蒸发减至最小。1小时后，将HepG2.2.15细胞用各种浓度的试验化合物一式两份地进行处理(根据测得的HBsAg IC50，使用5μM、2μM或0.5μM的最高浓度，进行1/3的连续稀释(总共稀释10次))。在首次加入试验化合物6天后，收集细胞培养上清液；用自动化系统(Magnapure)进行DNA提取，然后用实时qPCR/TaqMan试验检测HBV DNA拷贝数。从HBV DNA水平的降低计算抗病毒活性(IC50)。
按照本文的描述测试本发明化合物抑制HBV DNA的能力。在以上试验中测试实施例化合物并发现其具有低于50μM的IC50。HBV DNA试验的结果在表2中给出。
表2:在HepG2.2.15细胞中抗HBV DNA生成的活性
实施例号 IC<sub>50</sub>(nM)
5 8.7
20 20.3
26 5.7
43 1.7

Claims (20)

1.式I化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，
其中
R1是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或C3-7环烷基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C1-6烷基、氰基、C3-7环烷基C1-6烷氧基、C3-7环烷基、卤代C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、C1-6烷氧基羰基哌嗪基、吗啉基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基、氧代吡咯烷基、四氢呋喃基C1-6烷氧基和四氢呋喃基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被C1-6烷基、卤素、卤代C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基或苯基C1-6烷基取代。
2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是氢或C1-6烷基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C3-7环烷基C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基C1-6烷氧基、吡咯烷基和四氢呋喃基C1-6烷氧基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被C1-6烷基或苯基C1-6烷基取代。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是氢或甲基；
R2是苯基或吡啶基，其中所述苯基或吡啶基被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：环丙基甲氧基、二氟乙氧基、二甲基氨基、氟、甲氧基、甲氧基吡咯烷基、甲基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、氧代吡咯烷基丙氧基、吡咯烷基和四氢呋喃基甲氧基；
R3是咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基，其中所述咪唑基、唑基、吡唑基、噻唑基或三唑基是未取代的或被甲基或苄基取代。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1是C1-6烷基。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中R1是甲基。
6.根据权利要求1、2或4所述的化合物，其中R2是被两个独立地选自C3-7环烷基C1-6烷氧基、(C1-6烷基)2氨基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基吡咯烷基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、氧代哌嗪基、吡咯烷基和四氢呋喃基C1-6烷氧基的取代基取代的吡啶基。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中R2是氟(甲氧基)吡啶基、二氟吡啶基、氟(二甲基氨基)吡啶基、氟(吡咯烷基)吡啶基、氟(甲基磺酰基哌嗪基)吡啶基、氟(甲氧基吡咯烷基)吡啶基、氟(氧代哌嗪基)吡啶基、氟(环丙基甲氧基)吡啶基、氟(四氢呋喃基甲氧基)吡啶基、氟(四氢呋喃基甲氧基)吡啶基或甲氧基(甲氧基吡咯烷基)吡啶基。
8.根据权利要求1、2、4或6所述的化合物，其中R3是C1-6烷基咪唑基、噻唑基或三唑基。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中R3是甲基咪唑基、噻唑基或三唑基。
10.根据权利要求1所述的化合物，选自
6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-1-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(三唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]唑；
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
2-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-2-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-4-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-吡唑-1-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-(1-苄基咪唑-4-基)-6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉；
4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]吗啉；
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑；
5-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-2-甲基-噻唑；
4-[6-(2-氟-6-吡咯烷-1-基-4-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-(4-氟-6-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-2-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-吡唑-3-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
4-[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[4-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[6-[2-(环丙基甲氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-(环丙基甲氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-(2,2-二氟乙氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-(2,2-二氟乙氧基)-4-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
1-[3-[[6-氟-4-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮；
1-[3-[[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]氧基]丙基]吡咯烷-2-酮；
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]-5-甲基-噻唑；和
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
11.根据权利要求1所述的化合物，选自
4-[6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1-甲基咪唑-4-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
4-[6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[4-氟-6-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-噻唑-4-基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
4-[6-[4-(环丙基甲氧基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[2-氟-6-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-4-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；
4-[6-[6-氟-4-(四氢呋喃-3-基甲氧基)-2-吡啶基]-5-甲基-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基]噻唑；和
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-7,8-二氢-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
12.根据权利要求1至11任意一项所述的化合物的制备方法，包括
(a)将式(A)的化合物
与式(B)的化合物
在碱的存在下环化；
(b)将式(C)的化合物
与亲核试剂在路易斯酸的存在下偶联；
其中R1、R2和R3如权利要求1至9中任意一项所定义，亲核试剂是格氏试剂或二烷基锌试剂。
13.用作治疗活性物质的根据权利要求1至11任意一项所述的化合物。
14.包含根据权利要求1至11任意一项所述的化合物和治疗惰性载体的药物组合物。
15.根据权利要求1至11任意一项所述的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。
16.根据权利要求1至11任意一项所述的化合物在制备用于治疗或预防HBV感染的药物中的用途。
17.根据权利要求1至11任意一项所述的化合物用于抑制HbsAg生成或分泌或用于抑制HBV DNA生成的用途。
18.用于治疗或预防HBV感染的根据权利要求1至11任意一项所述的化合物。
19.按照权利要求12所述的方法制备的根据权利要求1至11任意一项所述的化合物。
20.治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的根据权利要求1至11任意一项所定义的化合物。
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