CN109415367A - 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物 - Google Patents

用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物 Download PDF

Info

Publication number
CN109415367A
CN109415367A CN201780039249.5A CN201780039249A CN109415367A CN 109415367 A CN109415367 A CN 109415367A CN 201780039249 A CN201780039249 A CN 201780039249A CN 109415367 A CN109415367 A CN 109415367A
Authority
CN
China
Prior art keywords
base
pyrimidine
methyl
ketone
pyrrolin simultaneously
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780039249.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109415367B (zh
Inventor
程战领
韩兴春
江敏
杨松
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of CN109415367A publication Critical patent/CN109415367A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109415367B publication Critical patent/CN109415367B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Abstract

本发明提供了具有通式I的新化合物、包含该化合物的组合物以及使用该化合物的方法，其中R1、R2、A和X如文中所定义。

Description

用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类 化合物
本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，并且特别涉及可用于治疗乙型肝炎病毒感染的HBsAg(HBV表面抗原)抑制剂和HBV DNA生成的抑制剂。
发明领域
本发明涉及具有药物活性的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物、它们的制备、包含它们的药物组合物以及它们作为药物的潜在用途。
本发明涉及式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，
其中R1、R2、A和X如下所述。
乙型肝炎病毒(HBV)是有包膜的、部分双链的DNA病毒。紧凑的3.2kb HBV基因组由四个重叠的开放阅读框(ORF)组成，其编码核、聚合酶(Pol)、包膜和X-蛋白。Pol ORF是最长的并且包膜ORF位于其内，而X和核ORF与Pol ORF重叠。HBV的生命周期有两个主要事件：1)由松弛环状(RC DNA)生成闭合环状DNA(cccDNA)，和2)前基因组RNA(pgRNA)逆转录生成RCDNA。在宿主细胞感染之前，HBV基因组作为RC DNA存在于病毒体内。已经确定HBV病毒体能够通过非特异性结合至存在于人肝细胞表面的带负电荷的蛋白聚糖(Schulze,A.,P.Gripon&S.Urban.Hepatology,46,(2007),1759-68)和经由HBV表面抗原(HBsAg)特异性结合至肝细胞牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)受体(Yan,H.等人,J Virol,87,(2013),7977-91)而进入到宿主细胞中。一旦病毒体进入细胞，病毒核和衣壳化的RC DNA通过宿主因子经由核定位信号，通过Impβ/Impα核转运受体转运到细胞核中。在细胞核内，宿主DNA修复酶将RC DNA转化为cccDNA。cccDNA充当所有病毒mRNA的模板，因此，它是受感染个体中HBV持久性的原因。由cccDNA生成的转录物被分成两类：前基因组RNA(pgRNA)和亚基因组RNA。亚基因组转录物编码三种包膜(L、M和S)和X蛋白，并且pgRNA编码前核、核和Pol蛋白(Quasdorff,M.&U.Protzer.J Viral Hepat,17,(2010),527-36)。HBV基因表达或HBV RNA合成的抑制导致HBV病毒复制和抗原生成的抑制(Mao,R.等人,PLoS Pathog,9,(2013),e1003494；Mao,R.等人,J Virol,85,(2011),1048-57)。例如，IFN-α显示通过减少从HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)微型染色体的pgRNA和亚基因组RNA的转录而抑制HBV复制和病毒HBsAg生成。(Belloni,L.等人,J Clin Invest,122,(2012),529-37；Mao,R.等人,J Virol,85,(2011),1048-57)。所有HBV病毒mRNA均被封端并多聚腺苷酸化，然后输出至细胞质进行翻译。在细胞质中，新病毒体的组装被引发并且新生的pgRNA与病毒Pol一起包装，从而可以开始经由单链DNA中间体将pgRNA逆转录成RC DNA。含有RC DNA的成熟核壳体被细胞脂质以及病毒L、M和S蛋白包封，然后感染性HBV颗粒通过在细胞内膜出芽释放(Locarnini,S.Semin Liver Dis,(2005),25Suppl 1,9-19)。有趣的是，也生成非感染性颗粒，其在数量上远远超过感染性病毒体。这些空的、包封的颗粒(L、M和S)被称为亚病毒颗粒。重要地是，由于亚病毒颗粒与感染性颗粒具有相同的包膜蛋白，因此推测它们可作为宿主免疫系统的诱饵并且已被用于HBV疫苗。S、M和L包膜蛋白由含有3个不同起始密码子的单个ORF表达。所有三种蛋白在它们的C-末端共享226aa序列、S-结构域。M和L分别具有额外的pre-S结构域，Pre-S2以及Pre-S2和Pre-S1。然而，正是S-结构域具有HBsAg表位(Lambert,C.&R.Prange.Virol J,(2007),4,45)。
病毒感染的控制需要宿主先天免疫系统的密切监视，其可以在感染后数分钟至数小时内产生响应以影响病毒的初始生长，并且限制慢性和持久感染的发展。尽管目前有基于IFN和核苷(核苷酸)类似物的治疗，但是乙型肝炎病毒(HBV)感染仍然是世界范围内的主要健康问题，其涉及估计约3亿5千万慢性携带者，他们具有更高的肝硬化和肝细胞癌的风险。
肝细胞和/或肝内免疫细胞响应于乙型肝炎病毒感染而分泌抗病毒细胞因子在被感染肝的病毒清除中起关键作用。然而，由于病毒采用了多种逃避策略来对抗宿主细胞识别系统和随后的抗病毒响应，慢性感染的患者仅显示出弱的免疫响应。
许多观察结果显示若干HBV病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号转导系统并随后干扰干扰素(IFN)抗病毒活性而对抗最初的宿主细胞响应。其中，HBV空亚病毒颗粒(SVP，HBsAg)的过度分泌可能参与在慢性感染患者(CHB)中观察到的免疫耐受状态的维持。持续暴露于HBsAg和其他病毒抗原可以导致HBV-特异性T细胞缺失或导致进行性的功能受损(Nayersina等人,Journal of Immunology(1993),150,4659–4671；Kondo等人,Journal ofMedical Virology(2004),74,425–433；Fisicaro等人,Gastroenterology,(2010),138,682-93)。此外，还报道了HBsAg通过直接相互作用而抑制免疫细胞如单核细胞、树突细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞的功能(Op den Brouw等人,Immunology,(2009b),126,280-9；Woltman等人,PLoS One,(2011),6,e15324；Shi等人,J Viral Hepat.(2012),19,e26-33；Kondo等人,ISRN Gasteroenterology,(2013),文章编号935295)。
HBsAg定量是用于慢性乙型肝炎的预后和治疗响应的显著生物标志物。然而，在慢性感染患者中很少观察到HBsAg消失和血清转化，其仍然是治疗的终极目标。当前疗法如核苷(核苷酸)类似物是抑制HBV DNA合成但不降低HBsAg水平的分子。即使采用延长的治疗，核苷(核苷酸)类似物所显示的HBsAg清除率也与自然观察到的那些相当(在-1％-2％之间)(Janssen等人,Lancet,(2005),365,123-9；Marcellin等人,N.Engl.J.Med.,(2004),351,1206-17；Buster等人,Hepatology,(2007),46,388-94)。因此，仍然存在靶向HBsAg来治疗HBV的医学需要(Wieland,S.F.&F.V.Chisari.J Virol,(2005),79,9369-80；Kumar等人,JVirol,(2011),85,987-95；Woltman等人,PLoS One,(2011),6,e15324；Op den Brouw等人,Immunology,(2009b),126,280-9)。
发明概述
本发明的目的是新的式I化合物，它们的制备，基于本发明化合物的药物及其制备以及式I化合物作为HBV抑制剂以及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的用途。式I化合物显示出优异的抗HBV活性。
本发明涉及式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，
其中
R1是氨基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-7环烷基、羧基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、氢或羟基C1-6烷基；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基、萘基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤素、吗啉基、硝基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或CH；
X是键或-C(＝O)-。
发明详述
定义
本文所用的单独的或在组合中的术语“C1-6烷基”表示包含1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、叔丁基等。具体的“C1-6烷基”是甲基、乙基、异丙基和叔丁基。更具体的“C1-6烷基”是甲基。
单独的或在组合中的术语“C3-7环烷基”是指包含3-7个碳原子、特别是3-6个碳原子的饱和碳环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。具体的“C3-7环烷基”基团是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
单独的或在组合中的术语“C1-6烷氧基”表示基团C1-6烷基-O-，其中“C1-6烷基”如以上所定义；C1-6烷氧基的例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。具体的“C1-6烷氧基”基团是甲氧基、乙氧基和丙氧基。更具体的“C1-6烷氧基”基团是甲氧基。
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
术语“卤代C1-6烷基”是指C1-6烷基基团，其中C1-6烷基基团的至少一个氢原子被相同或不同的卤原子、特别是氟原子替代。卤代C1-6烷基的实例包括一氟-、二氟-或三氟-甲基、-乙基或-丙基，例如3,3,3-三氟丙基、3,3-二氟丙基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。具体的“卤代C1-6烷基”基团是三氟甲基。
术语“氨基”是指式-NR’R”的基团，其中R’和R”独立地是氢或C1-6烷基。或者，R’和R”与它们所连接的氮一起可以形成杂C3-7环烷基。
单独的或在组合中的术语“羰基”是指基团-C(O)-。
单独的或在组合中的术语“氰基”是指基团-CN。
术语“C1-6烷基磺酰基”是指基团-SO2-C1-6烷基，其中“C1-6烷基”如以上所定义。C1-6烷基磺酰基的例子包括甲基磺酰基和乙基磺酰基。
术语“杂芳基”是指5至12个环原子的单价芳香族杂环单环或二环环系，其包含1、2、3或4个选自N、O和S的杂原子，其余的环原子是碳。杂芳基的例子包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、唑基、噻唑基、三唑基、二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、氮杂基、二氮杂基、异唑基、苯并呋喃基、异噻唑基、苯并噻吩基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、异苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并唑基、苯并异唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基或喹喔啉基。具体的“杂芳基”基团是1,2-苯并唑基、1,3-苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、吡嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑基、吡啶基、噻唑基和噻吩基。
术语“卤代噻吩基”是指被卤素取代一次、两次或三次的噻吩基。卤代噻吩基的例子包括但不限于溴噻吩基、氯噻吩基、氟噻吩基、二氟噻吩基和氟氯噻吩基。具体的“卤代噻吩基”基团是溴噻吩基和氯噻吩基。
术语“对映体”是指化合物的两种彼此互为不能重叠的镜像的立体异构体。
术语“非对映体”是指具有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。
本发明的化合物可以以它们的可药用盐的形式存在。术语“可药用盐”是指保留了式I化合物的生物学效力和特性并且由适宜的无毒有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规的酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，以及衍生自有机酸例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等的那些。碱加成盐包括衍生自铵、钾、钠和季铵氢氧化物，例如，四甲基氢氧化铵的那些。将药物化合物化学修饰成盐是制药化学家所熟知的一种用来提高化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性的技术。其例如描述于Bastin R.J.等人,OrganicProcess Research&Development(有机工艺研发)2000,4,427-435。特别是式I化合物的钠盐。
包含一个或多个手性中心的通式I的化合物可以以外消旋体、非对映体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映异构体盐。
HBsAg的抑制剂
本发明提供了(i)具有通式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体:
其中
R1是氨基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-7环烷基、羧基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、氢或羟基C1-6烷基；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基、萘基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤素、吗啉基、硝基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或CH；
X是键或-C(＝O)-。
本发明的又一个实施方案是(ii)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基或氢；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤素、吗啉基、硝基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或CH；
X是键或-C(＝O)-。
本发明的另一个实施方案是(iii)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤素和硝基；所述杂芳基是1,2-苯并唑基、1,3-苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并呋喃基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑基、噻唑基或噻吩基；
A是N；
X是-C(＝O)-。
本发明的另一个实施方案是(iv)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R1是甲基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(v)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是吲唑基、C1-6烷基吲唑基、C1-6烷氧基噻吩基、C1-6烷基噻吩基或卤代噻吩基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的又一个实施方案是(vi)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是吲唑基、甲基吲唑基、甲氧基噻吩基、溴噻吩基或氯噻吩基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(vii)选自下列的化合物：
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮；
(5-甲氧基-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-[4-(三氟甲基)噻唑-2-基]甲酮；
(3-氟-5-甲氧基-苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-噻吩基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮；
(4-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮；
(5-氯-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(4,5-二甲基噻唑-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-甲基吡唑-4-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-甲基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
1H-苯并咪唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(4-甲氧基苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-乙基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-硝基-2-噻吩基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-萘基)甲酮；
咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(3-甲基苯并呋喃-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(6-甲氧基吡嗪-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基-甲酮；
1,3-苯并噻唑-6-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
1,2-苯并唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；和
1,3-苯并噻唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
本发明的又一个实施方案是(viii)化合物(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；或其可药用盐或对映体或非对映体。
本发明的另一个实施方案是(ix)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基或氢；
R2是被一个、两个或三个独立地选自卤素和C1-6烷氧基的取代基取代的苯基；或
被一个或两个独立地选自下列的取代基取代的吡啶基：C1-6烷氧基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤素、吗啉基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或C；
X是键。
本发明的另一个实施方案是(x)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R1是甲基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(xi)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是被一个或两个独立地选自C1-6烷氧基、氮杂环丁基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤素和氧代哌嗪基的取代基取代的吡啶基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的又一个实施方案是(xii)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是被一个或两个独立地选自甲氧基、氮杂环丁基、甲基氨基、甲基磺酰基哌嗪基、二甲基氨基、氟和氧代哌嗪基的取代基取代的吡啶基，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(xiii)式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中A是N，并且所有其余的取代基具有以上给出的含义。
本发明的另一个实施方案是(xiv)选自下列的化合物：
6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
1-[4-[4-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-基]乙酮；
6-[6-氟-4-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷；
6-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷；
2-氟-N-甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
6-[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-[6-氟-4-(1-哌啶基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉；
6-(6-氟-4-哌嗪-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；和
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
本发明的又一个实施方案是(xv)选自下列的化合物：
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
2-氟-N-甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
6-[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；和
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
合成
本发明的化合物可以通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物的合适方法以及它们的起始原料在以下流程和实施例中提供。除非另有指明，所有取代基，特别是R1、R2、A和X如上所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学领域的普通技术人员熟知的含义。
化合物Ia的通用合成路线(方案1)
方案1
式Ia的化合物可以按照方案1制备。
将化合物II与化合物III在不存在或存在催化剂例如Pd2(dba)3或Pd(OAc)2、配体例如Ruphos或BINAP和碱例如Cs2CO3、K2CO3或t-BuONa的条件下、在适宜的溶剂例如1,4-二恶烷、DMSO或甲苯中偶联，得到化合物IV。将化合物IV在酸性条件下脱保护得到化合物V。将化合物V与DMFDMA在不存在或存在适宜的溶剂例如DMF或乙腈的条件下反应生成中间体VI。化合物Ia可以通过将中间体VI与化合物VII在碱例如K2CO3、NaOMe或Et3N的存在下、在适宜的溶剂例如EtOH或MeOH中成环而得到。
化合物Ib-A、Ib-B和Ib-C的通用合成路线(方案2)
方案2
式Ib-A、Ib-B和Ib-C的化合物可以按照方案2制备，其中L1是F、Cl或Br；R3和R4独立地选自氢或C1-6烷基；或R3和R4与它们所连接的氮一起形成2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基。
将V-b用DMFDMA在不存在或存在适宜的溶剂例如DMF和CH3CN的条件下处理生成中间体VI-b。将VI-b与化合物VII成环得到化合物Ib-1。该反应可以在适宜的碱例如NaOMe、NaHCO3或K2CO3的存在下，在适宜的溶剂例如MeOH或EtOH中进行。将化合物Ib-1用酸例如HCl或TFA脱保护生成中间体Ib-2。将化合物Ib-2与卤代吡啶Ib-3在适宜的碱例如DIPEA的存在下在适宜的溶剂例如DMSO或NMP中偶联得到化合物Ib-4和Ib-5。化合物Ib-A、Ib-B和Ib-C可以分别通过将化合物Ib-4或Ib-5与胺NHR3R4在适宜的碱例如K2CO3或DIPEA的存在下、在适宜的溶剂例如NMP或DMSO中反应而得到。
化合物Ic的通用合成路线(方案3)
方案3
式Ic的化合物可以按照方案3制备。将Ib-2与Ic-1在缩合剂例如HATU和碱例如DIPEA的存在下偶联得到Ic。
本发明还涉及制备式I化合物的方法，其包括如下步骤之一：
(a)将式(A)的化合物
与式(B)的化合物
在碱的存在下成环；
(b)将式(C)的化合物
与式(D)的化合物
NHR3R4(D)
在碱的存在下偶联；和
(c)将式(E)的化合物
与式(F)的化合物
在偶联剂和碱的存在下偶联；
其中
R1、R2、A和X如上所定义；
L1是F、Cl或Br；
W、Q和Y之一是N，另外两个是CH；
R3和R4独立地选自氢或C1-6烷基；或
R3和R4与它们所连接的氮一起形成2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基，
在步骤(a)中，碱可以是例如K2CO3、NaOMe或Et3N；
在步骤(b)中，碱可以是例如K2CO3或DIEA；
在步骤(c)中，偶联剂可以是例如HATU；碱可以是例如DIPEA。
按照上述方法制备的式I化合物也是本发明的目的之一。
药物组合物和给药
本发明还涉及用作治疗活性物质的式I的化合物。
另一个实施方案提供含有本发明的化合物和治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明的化合物来制备这些组合物和药物的方法。在一个实施例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度下、在适当pH下并以所需的纯度与生理学可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体)混合而配制成盖仑制剂给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但通常优选约3至约8的范围。在一个实施例中，式(I)的化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中配制。在另一个实施方案中，式(I)的化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。
组合物以符合良好医学实践的方式进行配制、定剂量和给药。在此上下文中考虑的因素包括被治疗的具体病症、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、病症的病因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排和执业医师已知的其他因素。要给药的化合物的“有效量”将受这些考虑控制，并且是抑制HBsAg所需的最低量。例如，这样的量可以低于对正常细胞或作为整体的哺乳动物而言是有毒的量。
在一个实施例中，每个剂量胃肠外给药的本发明化合物的药物有效量将在约0.01至100mg/kg，或者约0.01至100mg/kg患者体重/天的范围内，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型如片剂和胶囊优选含有约0.1至约1000mg的本发明化合物。
本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括经口、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外及鼻内给药，以及在期望用于局部治疗时，病变内给药。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。
本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。这些组合物可以含有药物制剂中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性物质。
典型制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂进行制备。合适的载体和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于药物产品(即药物)的生产。
适合的口服剂型的实例是包含约0.1至1000mg本发明的化合物、约0至2000mg无水乳糖、约0至2000mg交联羧甲基纤维素钠、约0至2000mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约0至2000mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP的溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂。气雾剂制剂的一个实例可以通过将例如0.1至1000mg的本发明化合物溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液中，在需要时添加张力剂例如盐如氯化钠而制备。所述溶液可以过滤，例如使用0.2微米滤器过滤，以除去杂质和污染物。
因此，一个实施方案包括包含式I的化合物或其立体异构体或可药用盐的药物组合物。在另一个实施方案中，包括包含式I的化合物或其立体异构体或可药用盐以及可药用载体或赋形剂药物组合物。
以下实施例A和B示例本发明的典型组合物，但是其仅仅是作为本发明的代表。
实施例A
式I的化合物可以以本身已知的方式作为活性成分用于生产具有以下组成的片剂：
实施例B
式I的化合物可以以本身已知的方式作为活性成分用于生产具有以下组成的胶囊：
适应症和治疗方法
本发明的化合物可以抑制HBsAg生成或分泌并且抑制HBV基因表达。因此，本发明的化合物可用于治疗或预防HBV感染。
本发明涉及式I的化合物用于抑制HBsAg生成或分泌的用途。
本发明涉及式I的化合物用于抑制HBV DNA生成的用途。
本发明涉及式I的化合物用于抑制HBV基因表达的用途。
本发明涉及式I的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。
式I化合物用于制备可用于治疗或预防与HBV感染相关的疾病的药物的用途是本发明的一个目的。
本发明特别涉及式I化合物用于制备用于治疗或预防HBV感染的药物的用途。
另一个实施方案包括一种用于治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的式I的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药、缀合物或可药用盐。
实施例
通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。
文中使用的缩写如下:
μL:微升
μm:微米
μM:微摩尔/升
(Boc)2O:二碳酸二叔丁酯
BSA:牛血清白蛋白
IC50:半数最大抑制浓度
LC/MS:液相色谱/质谱
M:摩尔浓度
MHz:兆赫兹
hr(s):小时
mM:毫摩尔/升
MS(ESI):质谱(电喷雾解离)
nM:纳摩尔/升
NMR:核磁共振
obsd.实测值
rt:室温
Pd/C:钯/活性碳
Pd2(dba)3:三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
TFA:三氟乙酸
δ:化学位移
Xantphos 4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽
DMFDMA:N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛
tert-BuONa:叔丁醇钠
tert-BuOK:叔丁醇钾
DIPEA:N,N-二异丙基乙基胺
TEA三乙胺
NMP:N-甲基-2-吡咯烷酮
HATU N-[(二甲基氨基)-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-1-基亚甲
基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物通用实验条件
中间体和最终化合物通过快速色谱使用以下仪器之一进行纯化：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge组件；ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL粒度：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒度：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工股份有限公司(Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd)的ZCX，孔：200-300或300-400。
中间体和最终化合物通过使用X BridgeTM Perp C18(5μm,OBDTM30×100mm)柱或SunFireTM Perp C18(5μm,OBDTM 30×100mm)柱的反相柱制备型HPLC纯化。
LC/MS光谱使用Acquity Ultra Performance LC-3100质量检测器或AcquityUltra Performance LC-SQ检测器获得。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：
酸性条件：A：0.1％甲酸的H2O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；
碱性条件：A：0.05％NH3·H2O的H2O溶液；B：乙腈；
中性条件：A：H2O；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告指示母核质量的离子，并且除非另有说明，引述的质量离子是正质量离子(M+H)+。
微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty或CEM Discover中进行。
NMR谱图使用Bruker Avance 400MHz获得。
所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，试剂在从商业供应商处获得后不经进一步纯化直接使用。
制备实施例
实施例1
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮
步骤1：3-(苄基氨基)丁酸甲酯的制备
将巴豆酸甲酯(20.0g,200.0mmol)、苄基胺(10.7g,100.0mmol)在MeOH(500mL)中的混合物在室温下搅拌72小时。将形成的反应混合物真空浓缩得到无色油状的3-(苄基氨基)丁酸甲酯粗品(20.3g)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤2：3-[苄基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]丁酸甲酯的制备
将3-(苄基氨基)丁酸甲酯(20.3g,97.9mmol)、溴乙酸乙酯(19.3g,115.5mmol)和K2CO3(27.1g,195.8mmol)在MeCN(275mL)中的混合物在室温下搅拌15小时。将形成的反应混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝1:1,v:v)得到无色油状的3-[苄基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]-丁酸甲酯(20.5g)。
步骤3：1-苄基-2-甲基-4-氧代-吡咯烷-3-甲酸甲酯的制备
在0℃及氮气下，向3-[苄基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]-丁酸甲酯(20.5g,69.9mmol)的甲苯(500mL)溶液中缓慢加入叔丁醇钾(9.4g,83.9mmol)的THF(150mL)。将形成的混合物在室温下搅拌15小时。向形成的混合物中加入HCl(1M,135mL,在H2O中)。于室温搅拌4小时后，将形成的混合物用Na2CO3中和。分离水层并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝3/1.v:v)得到棕色油状1-苄基-2-甲基-4-氧代-吡咯烷-3-甲酸甲酯(10.0g)。
步骤4：1-苄基-5-甲基-吡咯烷-3-酮的制备
将1-苄基-2-甲基-4-氧代-吡咯烷-3-甲酸甲酯(10.0g,40.44mmol)和H2SO4水溶液(5％，用20.0g浓H2SO4和380mL水制备)的混合物加热回流28小时。冷却至室温后，将形成的混合物用固体Na2CO3中和并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝10/1,v:v)得到黄色油状的1-苄基-5-甲基-吡咯烷-3-酮(5.4g)。
步骤5：2-甲基-4-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向1-苄基-5-甲基-吡咯烷-3-酮(5.4g,28.5mmol)和Boc2O(7.5g,34.4mmol)的EtOH(50mL)溶液中加入Pd/C(0.8g,10wt％)。将形成的混合物在H2(40Psi)气氛下室温搅拌16小时然后过滤。将滤液真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝20/1,v/v)得到无色油状的2-甲基-4-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.9g)。
步骤6：5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯的制备
将2-甲基-4-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g,5.0mmol)和DMFDMA(10mL)的混合物在氮气氛下于120℃搅拌加热12小时。将形成的反应混合物真空浓缩并将残余物溶于EtOH(18mL)。向溶液中加入嘧啶-2-甲脒盐酸盐(1.45g,5.6mmol)和K2CO3(2.57g,18.6mmol)。将形成的混合物在氮气氛下于60℃搅拌加热2小时，然后真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到红色油状的5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(628mg)。
步骤7：5-甲基-2-嘧啶-2-基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐的制备
将5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(2.26g,7.21mmol)和1M HCl的EA溶液(30mL,30mmol)在MeOH(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将形成的混合物真空浓缩得到黄色固体状5-甲基-2-嘧啶-2-基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐粗品(2.02g)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤8:(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮的制备
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(56.1mg,0.2mmol)、5-甲基噻唑-2-甲酸(28.6mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(17mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.00(d,2H),8.92-8.82(m,1H),7.60-7.53(m,1H),7.42(t,1H),6.70-5.73(m,1H),5.70-4.93(m,2H),2.52-2.45(m,3H),1.68-1.55(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:339。
实施例2
(5-甲氧基-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、5-甲氧基噻吩-2-甲酸(31.6mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲氧基-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(17mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.02(d,2H),8.90(s,1H),7.45(t,1H),7.31-7.24(m,1H),6.21(d,1H),5.78(m,1H),5.28-5.14(m,2H),4.05-3.85(m,3H),1.63(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:354。
实施例3
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-[4-(三氟甲基)-2-噻吩基]甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、4-(三氟甲基)噻唑-2-甲酸(39.4mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-[4-(三氟甲基)-2-噻吩基]甲酮(16mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.01(d,2H),8.95-8.87(m,1H),8.00-7.91(m,1H),7.43(t,1H),6.58-5.73(m,1H),5.72-4.95(m,2H),1.70(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:392。
实施例4
(3-氟-5-甲氧基-苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、3-氟-5-甲氧基苯甲酸(34mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(3-氟-5-甲氧基-苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(19mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.06-8.80(m,3H),7.43-7.33(m,1H),6.87-6.75(m,2H),6.68(td,1H),5.81-5.28(m,1H),5.04-4.69(m,2H),3.78(s,3H),1.56-1.75(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:366。
实施例5
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-噻吩基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、噻吩-2-甲酸(25.6mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-噻吩基)甲酮(19mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.99(d,2H),8.89(s,1H),7.59(dd,1H),7.52(dd,1H),7.41(t,1H),7.10(dd,1H),5.79(q,1H),5.24(s,2H),1.65(br d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:324。
实施例6
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、4-甲基噻吩-2-甲酸(28.4mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮(15mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.02(d,2H),8.90(s,1H),7.45(t,1H),7.43-7.26(m,1H),7.11(s,1H),5.83-5.72(m,1H),5.30-5.16(m,2H),2.28-2.16(m,3H),1.68-1.59(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:338。
实施例7
(4-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、4-溴噻吩-2-甲酸(41.4mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(4-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(22mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.00(d,2H),8.90(s,1H),7.46(d,1H),7.45-7.41(m,2H),5.77(q,1H),5.22(d,2H),1.65(br d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:402。
实施例8
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、5-甲基噻吩-2-甲酸(28.4mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮(15mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.01(d,2H),8.89(s,1H),7.43(t,1H),7.39(d,1H),6.76(dd,1H),5.78(q,1H),5.27-5.15(m,2H),2.48(s,3H),1.63(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:338。
实施例9
(5-氯-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,56.1mg,0.2mmol)、5-氯噻吩-2-甲酸(32.5mg,0.2mmol)、HATU(76mg,0.2mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-氯-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(11mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.00(d,2H),8.89(s,1H),7.43(t,1H),7.34(d,1H),6.93(d,1H),5.76(q,1H),5.25-5.13(m,2H),1.64(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例10
(4,5-二甲基噻唑-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、4,5-二甲基噻唑-2-甲酸(15.7mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(38.8mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(4,5-二甲基噻唑-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(14mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.10-8.76(m,3H),7.49-7.34(m,1H),6.65-5.70(m,1H),5.70-4.90(m,2H),2.41-2.28(m,6H),1.72-1.63(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:353。
实施例11
(1-甲基吡唑-4-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(12.6mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(38.8mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(1-甲基吡唑-4-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(12mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.08(br d,2H),8.97(s,1H),7.95(s,1H),7.90(s,1H),7.51(t,1H),5.90-5.75(m,1H),5.24(br s,2H),4.00(s,3H),1.77-1.72(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:322。
实施例12
(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、1-甲基-1H-吲唑-3-甲酸(17.6mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(38.8mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(13mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.08-8.84(m,3H),8.36(d,1H),7.46-7.36(m,3H),7.30-7.22(m,1H),6.66-5.80(m,1H),5.70-5.01(m,2H),4.17-4.03(m,3H),1.73-1.50(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:372。
实施例13
(1-甲基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(12.6mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(38.8mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(1-甲基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(13mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.20-8.95(m,3H),7.60-7.53(m,1H),7.51-7.41(m,1H),6.95-6.90(m,1H),6.60-5.80(m,1H),5.73-5.03(m,2H),4.05-3.94(m,3H),1.82-1.71(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:322。
实施例14
1H-苯并咪唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(16.2mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(38.8mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状1H-苯并咪唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(17mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.35-13.26(m,1H),9.16-9.06(m,1H),9.03(d,2H),7.89-7.27(m,5H),6.81-5.73(m,1H),5.72-4.95(m,2H),1.74-1.59(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例15
(4-甲氧基苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
向5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DCM(1mL)中的混合物中在0℃下加入4-甲氧基苯甲酰氯(17.1mg,0.1mmol)。将形成的混合物升温至室温并搅拌20小时，然后用H2O(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(4-甲氧基苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(14mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.08(d,2H),8.94(br s,1H),7.60(br d,2H),7.52(t,1H),6.97(d,2H),5.86(br s,1H),5.20-5.09(m,1H),4.94(br s,1H),3.88(s,3H),1.70(br s,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:348。
实施例16
(1-乙基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、1-乙基-1H-吡唑-3-甲酸(14mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(1-乙基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(17mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.07(d,2H),8.98-8.90(m,1H),7.52-7.41(m,2H),6.95-6.88(m,1H),6.55-5.78(m,1H),5.70-4.99(m,2H),4.32-4.12(m,2H),1.74(d,3H),1.56(t,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:336。
实施例17
(5-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、5-溴噻吩-2-甲酸(20.7mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到灰白色固体状(5-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(10mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.08-8.97(m,3H),7.71-7.61(m,2H),7.38(d,1H),5.72-5.57(m,1H),5.41(br d,1H),5.18(br d,1H),1.59(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:402。
实施例18
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-硝基-2-噻吩基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、5-硝基噻吩-2-甲酸(17.3mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-硝基-2-噻吩基)甲酮(11mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.11-8.96(m,3H),8.19(d,1H),7.87(d,1H),7.66(t,1H),6.05-5.60(m,1H),5.55-4.95(m,2H),1.72-1.40(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:369。
实施例19
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-萘基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、2-萘甲酸(17.2mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到灰白色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-萘基)甲酮(7mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.14-8.91(m,3H),8.37-7.97(m,4H),7.80-7.57(m,4H),5.81-5.57(m,1H),5.41-4.65(m,2H),1.82-1.18(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:368。
实施例20
咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸(16.2mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(9mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.17-8.95(m,3H),8.67-8.48(m,2H),7.77-7.29(m,3H),7.08-6.66(m,1H),5.74-4.91(m,3H),1.71-1.47(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例21
(3-甲基苯并呋喃-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、3-甲基苯并呋喃-2-甲酸(17.6mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到灰白色固体状(3-甲基苯并呋喃-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(8mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.25-8.83(m,3H),7.94-7.26(m,5H),6.25-5.63(m,1H),5.60-4.90(m,2H),2.51(s,3H),1.73-1.38(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:372。
实施例22
(6-甲氧基吡嗪-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、6-甲氧基吡嗪-2-甲酸(15.4mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(6-甲氧基吡嗪-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(7mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.04-8.91(m,3H),8.67-8.55(m,1H),8.51-8.41(m,1H),7.64-7.56(m,1H),6.15-5.62(m,1H),5.47-4.89(m,2H),4.01-3.96(m,3H),1.63-1.28(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:350。
实施例23
1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、1H-吲唑-3-甲酸(16.2mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(5mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.72(br s,1H),9.04-8.91(m,3H),8.22-8.11(m,1H),7.67-7.54(m,2H),7.44-7.34(m,1H),7.21(t,1H),6.43-5.64(m,1H),5.49-4.87(m,2H),1.64-1.43(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例24
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基-甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸(16.2mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基-甲酮(10mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.06-8.90(m,3H),8.84-8.72(m,1H),8.60(s,1H),8.21(d,1H),7.60(t,1H),7.46(ddd,1H),7.07(dt,1H),5.70(br s,1H),5.53-4.97(m,2H),1.55(br d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例25
1,3-苯并噻唑-6-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、苯并[d]噻唑-6-甲酸(17.9mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状1,3-苯并噻唑-6-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(10mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.54(s,1H),9.10-8.91(m,3H),8.54(br s,1H),8.19(br d,1H),7.87-7.59(m,2H),5.80-5.50(m,1H),5.36-4.66(m,2H),1.75-1.10(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:375。
实施例26
咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸(16.2mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到粉色固体状咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(10mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.42(br d,1H),9.13-8.97(m,3H),8.63(s,1H),7.88(d,1H),7.76-7.62(m,2H),7.31(t,1H),5.90-5.78(m,1H),5.55-5.16(m,2H),1.65(br d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:358。
实施例27
1,2-苯并唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、苯并[d]异唑-3-甲酸(16.3mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和TEA(30.4mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状1,2-苯并唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(6mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.16-8.94(m,3H),8.10-8.00(m,1H),7.88-7.78(m,1H),7.68(t,1H),7.55(dd,1H),7.33(dd,1H),6.32-5.72(m,1H),5.64-5.01(m,2H),1.76-1.50(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:359。
实施例28
1,3-苯并噻唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮
将5-甲基-2-(嘧啶-2-基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶盐酸盐(实施例1步骤7的产物,28.1mg,0.1mmol)、苯并[d]噻唑-2-甲酸(17.9mg,0.1mmol)、HATU(38mg,0.1mmol)和DIPEA(38.8mg,0.3mmol)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌64小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色固体状1,3-苯并噻唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(6mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.17-8.97(m,3H),8.25(d,2H),7.73-7.56(m,3H),6.62-5.70(m,1H),5.68-4.99(m,2H),1.74-1.63(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:375。
实施例29
6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
步骤1：1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸苄酯的制备
将3-氧代吡咯烷-1-甲酸苄酯(20g,91.3mmol)、低聚甲醛(17g,0.274mol)和甲苯磺酸一水合物(867mg,4.57mmol)在甲苯(200mL)中的混合物用Dean-Stark装置加热回流36小时。冷却至室温后，将形成的混合物用饱和NaHCO3水溶液(200mL)和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1,v:v)得到无色油状的1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸苄酯(15g)。
步骤2：1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷的制备
将1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸苄酯(8g,30.4mmol)的MeOH(80mL)溶液在Pd/C(0.5g,10wt.％)的存在下在H2(30Psi)气氛下室温搅拌12小时。将混合物过滤并将滤液真空浓缩得到无色油状的1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷(3g)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：7-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷的制备
将1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷(2g,15.5mmol)、5-溴-1,2-二氟-3-甲氧基-苯(4.47g,20.1mmol)、tert-BuONa(2.23g,23.25mmol)、Xantphos(325mg)和Pd2(dba)3(258mg)在二恶烷(20mL)中的混合物在氮气氛下于100℃搅拌加热16小时。将形成的混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物用DCM(200mL)稀释，然后用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1,v:v)得到黄色油状的7-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷(2.7g)。
步骤4：1-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)吡咯烷-3-酮的制备
将7-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷(1g,3.7mmol)、甲酸(5mL)和H2O(5mL)的混合物于90℃搅拌加热2小时。冷却至室温后，将形成的混合物用DCM稀释，然后用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1,v:v)得到黄色固体状1-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)吡咯烷-3-酮(350mg)。
步骤5：6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶的制备
将1-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)吡咯烷-3-酮(350mg,1.54mmol)和DMFDMA(5mL)的混合物于120℃搅拌加热4小时。将形成的混合物真空浓缩并将残余物溶于MeOH(5mL)。向溶液中加入吡啶-2-甲脒盐酸盐(246mg,1.56mmol)和K2CO3(474mg,3.43mmol)。将形成的混合物于60℃搅拌加热16小时。冷却至室温后，将形成的混合物过滤并将滤液真空浓缩。将残余物用DCM(50mL)稀释，然后用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(10mg)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:3.93(s,3H),4.73(d,4H),6.24-6.37(m,2H),7.49-7.60(m,1H),8.00(t,1H),8.39(d,1H),8.76(d,1H),8.98(s,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:341。
实施例30
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
步骤1：5-甲基-2-嘧啶-2-基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶的制备
将5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(628.0mg,2.0mmol)和HCl的EA溶液(20mL,4M)的混合物在氮气氛下室温搅拌15小时。将形成的反应混合物真空浓缩并将残余物用MeOH(20mL)稀释。将形成的溶液用碱性树脂中和并过滤。将滤液真空浓缩得到红色固体状5-甲基-2-嘧啶-2-基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶粗品(436.0mg)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤2：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶的制备
将5-甲基-2-嘧啶-2-基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶(400.0mg,1.8mmol)、2,6-二氟-4-甲氧基吡啶(406.0mg,2.8mmol)和DIPEA(696.0mg,5.4mmol)在NMP(12mL)中的混合物于120℃搅拌加热5小时。将形成的反应混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(20mL)中并用DCM(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(62.3mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.06(s,2H),8.91(s,1H),7.48-7.46(t,1H),5.88(s,1H),5.81(s,1H),5.58-5.56(m,1H),4.93-4.80(m,2H),3.88(s,3H),1.70-1.68(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:339。
实施例31和32
6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶和6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
将2,4,6-三氟吡啶(1.9g,14.07mmol)、5-甲基-2-嘧啶-2-基-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶(1.5g,7.03mmol)和DIPEA(3.68mL,21.1mmol)在NMP(15mL)中的混合物在微波反应器中于150℃搅拌加热1小时。将形成的反应混合物用H2O(100mL)稀释并用乙酸乙酯萃取(100mL)三次。将合并的有机层用无水MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色固体状6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(400mg)和浅黄色固体状6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(640mg)。
实施例31：6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶，1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.06(d,2H),8.93(s,1H),7.48(t,1H),7.28(s,1H),6.05(d,2H),5.57(dd,1H),5.31(s,1H),4.80-4.94(m,2H),1.70(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:327。
实施例32：6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶，1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.07(d,2H),8.97(s,1H),7.50(t,1H),7.28(s,1H),6.08(s,2H),5.35(dd,1H),4.93(dd,1H),4.80(d,1H),1.67(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:327。
实施例33
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
步骤1：5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯的制备
将2-甲基-4-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.0g,15.0mmol)和DMFDMA(30mL)的混合物在氮气氛下于120℃搅拌加热12小时。将形成的反应混合物真空浓缩并将残余物溶于EtOH(40mL)。向溶液中加入吡啶-2-甲脒盐酸盐(2.4g,15.0mmol)和K2CO3(6.2g,45.0mmol)。将混合物在氮气氛下于60℃搅拌加热2小时。将形成的反应混合物真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到红色油状5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(1.2g)。
步骤2：5-甲基-2-(2-吡啶基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶的制备
将5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(800mg,2.6mmol)和HCl的EA溶液(10mL,2M)的混合物在氮气氛下室温搅拌15小时。将形成的反应混合物真空浓缩并将残余物溶于MeOH(10mL)。将形成的混合物与碱性树脂一起在室温下搅拌4小时然后过滤。将滤液真空浓缩得到棕色油状5-甲基-2-(2-吡啶基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶(400mg,粗品)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶的制备
将5-甲基-2-(2-吡啶基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶(200mg,0.8mmol)、2,6-二氟-4-甲氧基吡啶(175mg,1.2mmol)和DIPEA(310mg,2.4mmol)在NMP(5mL)中的混合物于120℃搅拌加热15小时。将形成的混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(20mL)中并用DCM萃取(30mL)三次。将合并的有机相用盐水洗涤(20mL)，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色固体状6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(5mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.00-9.14(m,1H),8.89(s,1H),8.82(d,1H),8.32(br t,1H),7.82(br t,1H),5.84-5.92(m,2H),5.52-5.59(m,1H),4.78-4.92(m,2H),3.90(s,3H),3.14(br d,1H),1.70(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:338。
实施例34
1-[4-[4-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-基]乙酮
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、1-(哌嗪-1-基)乙酮(76.9mg,0.6mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMSO(2mL)中的混合物于120℃搅拌加热20小时。将形成的反应混合物用H2O(20mL)稀释并用DCM萃取(20mL)三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗品通过制备型HPLC纯化得到黄色粉末状1-[4-[4-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-哌嗪-1-基]乙酮(5mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.13-8.97(m,3H),7.66(t,1H),6.03(dd,1H),5.93-5.81(dd,1H),5.50(br d,1H),4.89-4.66(m,2H),3.64-3.48(m,8H),2.05(s,3H),1.62(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:435。
实施例35
6-[6-氟-4-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷
将6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例32,131mg,0.4mmol)、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷半草酸盐(173mg,0.6mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMSO(2mL)中的混合物于130℃搅拌加热20小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色粉末状6-[6-氟-4-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(9mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.10-8.97(m,3H),7.67(t,1H),5.80(s,1H),5.51-5.35(m,2H),4.89-4.65(m,6H),4.15-4.04(m,4H),1.52(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:406。
实施例36
6-[4-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷半草酸盐(173mg,0.6mmol)和DIPEA(77.5mg,0.6mmol)在DMSO(2mL)中的混合物于130℃搅拌加热20小时。将形成的混合物用水(20mL)稀释并用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗品通过制备型HPLC纯化得到黄色粉末状6-[4-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(3mg)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.10-8.95(m,3H),7.66(t,1H),5.49-5.36(m,3H),4.85-4.64(m,6H),4.12(m,4H),1.57(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:406。
实施例37
2-氟-N-甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,97.9mg,0.3mmol)、甲胺盐酸盐(101mg,1.5mmol)和DIPEA(233mg,1.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状2-氟-N-甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺(48mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.04-8.98(m,3H),7.66(t,1H),6.66(br d,1H),5.56(s,1H),5.44-5.34(m,1H),4.83-4.65(m,2H),3.76-3.66(m,1H),2.75(d,3H),1.58(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:338。
实施例38
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,97.9mg,0.3mmol)、二甲胺盐酸盐(122mg,1.5mmol)和DIPEA(233mg,1.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺(45mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.10-8.95(m,3H),7.66(t,1H),5.72(s,1H),5.59(s,1H),5.50-5.40(m,1H),4.87-4.69(m,2H),3.00(s,6H),1.59(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:352。
实施例39
6-[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、氮杂环丁烷盐酸盐(56.1mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状6-[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(22mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.05-8.98(m,3H),7.66(t,1H),5.46-5.33(m,3H),4.84-4.67(m,2H),3.94(t,4H),2.35(quin,2H),1.58(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:364。
实施例40
6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、吡咯烷(42.7mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(21mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.99-8.90(m,3H),7.59(t,1H),5.50(s,1H),5.44-5.33(m,2H),4.79-4.62(m,2H),3.25-3.21(m,4H),1.96-1.84(m,4H),1.52(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:378。
实施例41
6-[6-氟-4-(1-哌啶基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、哌啶(51.1mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状6-[6-氟-4-(1-哌啶基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(35mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.99-8.90(m,3H),7.59(t,1H),5.83(s,1H),5.73(s,1H),5.43-5.34(m,1H),4.79-4.61(m,2H),3.35-3.29(m,4H),1.60-1.45(m,9H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:392。
实施例42
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、吗啉(52.3mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉(28mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.99-8.92(m,3H),7.59(t,1H),5.89(s,1H),5.79(s,1H),5.44-5.34(m,1H),4.81-4.64(m,2H),3.68-3.61(m,4H),3.26-3.23(m,4H),1.51(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:394。
实施例43
6-(6-氟-4-哌嗪-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、哌嗪(51.7mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于110℃加热1小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状6-(6-氟-4-哌嗪-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(43mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.98-8.92(m,3H),7.59(t,1H),5.84(s,1H),5.74(s,1H),5.43-5.34(m,1H),4.80-4.61(m,2H),3.21-3.17(m,4H),2.77-2.68(m,4H),1.51(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:393。
实施例44
6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、1-(甲基磺酰基)哌嗪(98.5mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于130℃加热3小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(23mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.98-8.90(m,3H),7.59(t,1H),5.93(s,1H),5.83(s,1H),5.45-5.34(m,1H),4.82-4.63(m,2H),3.51-3.40(m,4H),3.19-3.09(m,4H),2.86(s,3H),1.51(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:471。
实施例45
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮
将6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶(实施例31,65.3mg,0.2mmol)、哌嗪-2-酮(60.1mg,0.6mmol)和DIPEA(233mg,0.8mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在微波反应器中于130℃加热3小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物通过制备型HPLC纯化得到浅黄色粉末状4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮(13mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.05-8.97(m,3H),8.20(br s,1H),7.66(t,1H),5.93(s,1H),5.80(s,1H),5.48(br d,1H),4.89-4.72(m,2H),3.93(s,2H),3.56(br t,2H),3.35-3.27(m,2H),1.59(d,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:407。
生物学实施例
实施例46材料和方法
HBV细胞系
将组成性表达HBV的细胞系HepG2.2.15细胞(Acs等.Proc Natl Acad Sci USA,84,(1987),4641-4)在保持在5％CO2、37℃的DMEM+Glutamax-I培养基(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)中培养，所述培养基补充有10％胎牛血清(Invitrogen)和最终浓度为200mg/L的G418(Invitrogen)。
HBsAg试验
将HepG2.2.15细胞一式两份地以1.5x104个细胞/孔接种到白色96孔板中。将细胞用化合物在DMSO中的三倍系列稀释液处理。在所有孔中的最终DMSO浓度为1％，并将DMSO用作无药物对照。
使用HBsAg化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，中国郑州，目录号：CL0310-2)来半定量地测量分泌的HBV抗原的水平。对于该检测，使用50μL/孔培养上清液并用HBsAg化学发光免疫测定(CLIA)试剂盒(Autobio Diagnostics Co.，中国郑州，目录号：CL0310-2)对HBsAg进行定量，将50μL的上清液转移至CLIA测定板并将50μL的酶结合试剂添加到每个孔中。将板密封并在室温下温和搅拌1小时。弃去上清液-酶-混合物并将孔用300μL的PBS洗涤6次。通过将CLIA板正面向下放置在吸水纸巾上将残余液体除去。向每个孔中添加25μL的底物A和B。在温育10分钟后使用照度计(Mithras LB940MultimodeMicroplate Reader)测量发光度。生成剂量-响应曲线并使用E-WorkBook Suite(IDBusiness Solutions Ltd.,Guildford,UK)外推IC50值。IC50定义为相比于无药物对照，HBsAg分泌减少50％时的化合物浓度(或经调节的培养基对数稀释)。
按照本文的描述测试式I化合物抑制HBsAg的能力。在以上试验中测试实施例化合物并发现其具有低于50μM的IC50。发现式I的特定化合物具有低于0.50μM的IC50。发现式I的更为特定的化合物具有低于0.100μM的IC50。HBsAg试验的结果在表1中给出。
表1:在HBsAg试验中的活性数据
HBV DNA试验
该试验采用实时qPCR(TaqMan)直接测量细胞上清液中的细胞外HBV DNA拷贝数。将HepG2.2.15细胞接种于96孔微量滴定板中，然后用完全培养液(DMEM,Glutamax,10％FBS,1％青霉素/链霉素,250μg/mL Genetycin,最终DMSO浓度为1％)处理。只使用靠内的孔以减少细胞培养过程中观察到的“边缘效应”，靠外的孔中充满完全培养液以使样品的蒸发减至最小。1小时后，将HepG2.2.15细胞用各种浓度的试验化合物一式两份地进行处理(根据测得的HBsAg IC50，使用5μM、2μM或0.5μM的最高浓度，进行1/3的连续稀释(总共稀释10次))。在首次加入试验化合物6天后，收集细胞培养上清液；用自动化系统(Magnapure)进行DNA提取，然后用实时qPCR/TaqMan试验检测HBV DNA拷贝数。从HBV DNA水平的降低计算抗病毒活性(IC50)。
按照本文的描述测试本发明化合物抑制HBV DNA的能力。在以上试验中测试实施例化合物并发现其具有低于50μM的IC50。发现式I的特定化合物具有低于500nM的IC50。发现式I的更为特定的化合物具有低于100nM的IC50。HBV DNA试验的结果在表2中给出。
表2:在HepG2.2.15细胞中抗HBV DNA生成的活性
实施例号 IC<sub>50</sub>(nM)
10 67.6
12 5.6
21 26.2
30 6.5

Claims (25)

1.式I的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，
其中
R1是氨基C1-6烷基、C1-6烷基、C3-7环烷基、羧基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、氢或羟基C1-6烷基；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基、萘基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤素、吗啉基、硝基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或CH；
X是键或-C(＝O)-。
2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基或氢；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自下列的取代基取代：2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤代C1-6烷基、卤素、吗啉基、硝基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或CH；
X是键或-C(＝O)-。
3.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基；
R2是苯基、萘基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤素和硝基的取代基取代；所述杂芳基是1,2-苯并唑基、1,3-苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并呋喃基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑基、噻唑基或噻吩基；
A是N；
X是-C(＝O)-。
4.根据权利要求1、2或3任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R1是甲基。
5.根据权利要求1至4任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是吲唑基、C1-6烷基吲唑基、C1-6烷氧基噻吩基、C1-6烷基噻吩基或卤代噻吩基。
6.根据权利要求1至5任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是吲唑基、甲基吲唑基、甲氧基噻吩基、溴噻吩基或氯噻吩基。
7.根据权利要求1所述的化合物，选自
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基噻唑-2-基)甲酮；
(5-甲氧基-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-[4-(三氟甲基)噻唑-2-基]甲酮；
(3-氟-5-甲氧基-苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-噻吩基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(4-甲基-2-噻吩基)甲酮；
(4-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-甲基-2-噻吩基)甲酮；
(5-氯-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(4,5-二甲基噻唑-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-甲基吡唑-4-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-甲基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
1H-苯并咪唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(4-甲氧基苯基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(1-乙基吡唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-溴-2-噻吩基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(5-硝基-2-噻吩基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-(2-萘基)甲酮；
咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(3-甲基苯并呋喃-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(6-甲氧基吡嗪-2-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
1H-吲唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基-甲酮；
1,3-苯并噻唑-6-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
1,2-苯并唑-3-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；和
1,3-苯并噻唑-2-基-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
8.根据权利要求1所述的化合物，该化合物是
(1-甲基吲唑-3-基)-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮；或其可药用盐或对映体或非对映体。
9.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基或氢；
R2是被一个、两个或三个独立地选自卤素和C1-6烷氧基的取代基取代的苯基；或
被一个或两个独立地选自下列的取代基取代的吡啶基：C1-6烷氧基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤素、吗啉基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基；
A是N或C；
X是键。
10.根据权利要求1、2或9任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R1是甲基。
11.根据权利要求1、2、9或10任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是被一个或两个独立地选自下列的取代基取代的吡啶基：C1-6烷氧基、氮杂环丁基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、二C1-6烷基氨基、卤素和氧代哌嗪基。
12.根据权利要求1、2、9、10、11或12任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中R2是被一个或两个独立地选自下列的取代基取代的吡啶基：甲氧基、氮杂环丁基、甲基氨基、甲基磺酰基哌嗪基、二甲基氨基、氟和氧代哌嗪基。
13.根据权利要求1、2、9、10、11或12任意一项所述的化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，其中A是N。
14.根据权利要求1所述的化合物，选自
6-(3,4-二氟-5-甲氧基-苯基)-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(4,6-二氟-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(2,6-二氟-4-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-(2-吡啶基)-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
1-[4-[4-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-基]乙酮；
6-[6-氟-4-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷；
6-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷；
2-氟-N-甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
6-[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-(6-氟-4-吡咯烷-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-[6-氟-4-(1-哌啶基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]吗啉；
6-(6-氟-4-哌嗪-1-基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；和
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
15.根据权利要求1所述的化合物，选自
6-(6-氟-4-甲氧基-2-吡啶基)-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
2-氟-N-甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
2-氟-N,N-二甲基-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)吡啶-4-胺；
6-[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；
6-[6-氟-4-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶；和
4-[2-氟-6-(5-甲基-2-嘧啶-2-基-5,7-二氢吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-吡啶基]哌嗪-2-酮；
或其可药用盐或对映体或非对映体。
16.根据权利要求1至15任意一项所述的化合物的制备方法，所述方法包括下列步骤之一：
(a)将式(A)的化合物
与式(B)的化合物
在碱的存在下成环；
(b)将式(C)的化合物
与式(D)的化合物
NHR3R4(D)
在碱的存在下偶联；
(c)将式(E)的化合物
与式(F)的化合物
在偶联剂和碱的存在下偶联；
其中
R1、R2、A和X如权利要求1至15任意一项所定义；
L1是F、Cl或Br；
W、Q和Y之一是N，另外两个是CH；
R3和R4独立地选自氢或C1-6烷基；或
R3和R4与它们所连接的氮一起形成2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚基、氮杂环丁基、C1-6烷基羰基哌嗪基、C1-6烷基磺酰基哌嗪基、吗啉基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌啶基和吡咯烷基。
17.用作治疗活性物质的根据权利要求1至15任意一项所述的化合物。
18.包含根据权利要求1至15任意一项所述的化合物和治疗惰性载体的药物组合物。
19.根据权利要求1至15任意一项所述的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。
20.根据权利要求1至15任意一项所述的化合物在制备用于治疗或预防HBV感染的药物中的用途。
21.根据权利要求1至15任意一项所述的化合物用于抑制HbsAg生成或分泌或用于抑制HBV DNA生成的用途。
22.用于治疗或预防HBV感染的根据权利要求1至15任意一项所述的化合物。
23.按照权利要求16所述的方法制备的根据权利要求1至15任意一项所述的化合物。
24.治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的根据权利要求1至15任意一项所定义的化合物。
25.如上所述的本发明。
CN201780039249.5A 2016-06-29 2017-06-26 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物 Active CN109415367B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2016087606 2016-06-29
CNPCT/CN2016/087606 2016-06-29
PCT/EP2017/065672 WO2018001944A1 (en) 2016-06-29 2017-06-26 Novel dihydropyrrolopyrimidines for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109415367A true CN109415367A (zh) 2019-03-01
CN109415367B CN109415367B (zh) 2021-04-16

Family

ID=59152922

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780039249.5A Active CN109415367B (zh) 2016-06-29 2017-06-26 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11225482B2 (zh)
EP (1) EP3478686B1 (zh)
JP (1) JP6821716B2 (zh)
CN (1) CN109415367B (zh)
WO (1) WO2018001944A1 (zh)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016183266A1 (en) 2015-05-13 2016-11-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Ehpatitis b antiviral agents
EP3426245B1 (en) 2016-03-07 2022-12-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
KR102305215B1 (ko) 2016-10-14 2021-09-28 프리시젼 바이오사이언시스 인코포레이티드 B형 간염 바이러스 게놈 내의 인식 서열에 대해 특이적인 조작된 메가뉴클레아제
IL272941B2 (en) 2017-08-28 2023-03-01 Enanta Pharm Inc Antiviral agents for viral hepatitis b
WO2019123339A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
KR102492187B1 (ko) 2017-12-20 2023-01-27 인스티튜트 오브 오가닉 케미스트리 앤드 바이오케미스트리 에이에스 씨알 브이.브이.아이. Sting 어댑터 단백질을 활성화하는 포스포네이트 결합을 가진 3'3' 사이클릭 다이뉴클레오티드
US11058678B2 (en) 2018-01-22 2021-07-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
US10836769B2 (en) 2018-02-26 2020-11-17 Gilead Sciences, Inc. Substituted pyrrolizine compounds and uses thereof
US10729688B2 (en) 2018-03-29 2020-08-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
EP3774883A1 (en) 2018-04-05 2021-02-17 Gilead Sciences, Inc. Antibodies and fragments thereof that bind hepatitis b virus protein x
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
AU2019247905B2 (en) 2018-04-06 2023-10-05 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides
US11142750B2 (en) 2018-04-12 2021-10-12 Precision Biosciences, Inc. Optimized engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the Hepatitis B virus genome
TW202014193A (zh) 2018-05-03 2020-04-16 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 包含碳環核苷酸之2’3’－環二核苷酸
WO2020028097A1 (en) 2018-08-01 2020-02-06 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of (r)-11-(methoxymethyl)-12-(3-methoxypropoxy)-3,3-dimethyl-8-0x0-2,3,8,13b-tetrahydro-1h-pyrido[2,1-a]pyrrolo[1,2-c] phthalazine-7-c arboxylic acid
AR116474A1 (es) 2018-09-21 2021-05-12 Enanta Pharm Inc DERIVADOS DEL ÁCIDO 6,7-DIHIDRO-2H-BENZOFURO[2,3-a]QUINOLIZIN-3-CARBOXÍLICO COMO AGENTES ANTIVIRALES PARA EL TRATAMIENTO O PREVENCIÓN DE UNA INFECCIÓN POR HBV
CA3116347A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds having hpk1 inhibitory activity
JP7460644B2 (ja) 2018-10-31 2024-04-02 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｐｋ１阻害剤としての置換６－アザベンゾイミダゾール化合物
KR20210093951A (ko) 2018-11-21 2021-07-28 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 항바이러스제로서의 작용화된 헤테로사이클
WO2020178770A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
CA3129022C (en) 2019-03-07 2023-08-01 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
US11766447B2 (en) 2019-03-07 2023-09-26 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3′3′-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
TW202212339A (zh) 2019-04-17 2022-04-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TWI751516B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
US11453681B2 (en) 2019-05-23 2022-09-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted eneoxindoles and uses thereof
WO2020247444A1 (en) 2019-06-03 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc, Hepatitis b antiviral agents
WO2020247561A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc, Hepatitis b antiviral agents
WO2020247575A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
MX2021015452A (es) 2019-06-25 2022-02-11 Gilead Sciences Inc Proteinas de fusion flt3l-fc y metodos de uso.
US11738019B2 (en) 2019-07-11 2023-08-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
US20220296619A1 (en) 2019-08-19 2022-09-22 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations of tenofovir alafenamide
US11236108B2 (en) 2019-09-17 2022-02-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocycles as antiviral agents
CA3149557A1 (en) 2019-09-30 2021-04-08 Scott J. Balsitis Hbv vaccines and methods treating hbv
CN116057068A (zh) 2019-12-06 2023-05-02 精密生物科学公司 对乙型肝炎病毒基因组中的识别序列具有特异性的优化的工程化大范围核酸酶
WO2021188414A1 (en) 2020-03-16 2021-09-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocyclic compounds as antiviral agents
TW202200161A (zh) 2020-03-20 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 4’-c-經取代-2-鹵基-2’-去氧腺苷核苷之前藥及其製造與使用方法
US20230303599A1 (en) 2020-08-07 2023-09-28 Gilead Sciences, Inc. Prodrugs of phosphonamide nucleotide analogues and their pharmaceutical use
TWI815194B (zh) 2020-10-22 2023-09-11 美商基利科學股份有限公司 介白素2-Fc融合蛋白及使用方法
WO2022241134A1 (en) 2021-05-13 2022-11-17 Gilead Sciences, Inc. COMBINATION OF A TLR8 MODULATING COMPOUND AND ANTI-HBV siRNA THERAPEUTICS
US11926628B2 (en) 2021-06-23 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
IL309378A (en) 2021-06-23 2024-02-01 Gilead Sciences Inc DIACYLGLYERCOL KINASE MODULATING COMPOUNDS
CA3222277A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
WO2022271659A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009030316A1 (de) * 2007-08-30 2009-03-12 Merck Patent Gmbh 1,3-dihydro-isoindolderivate

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6608081B2 (en) 1999-08-12 2003-08-19 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Bicyclic heterocyclic substituted phenyl oxazolidinone antibacterials, and related compositions and methods
US6413981B1 (en) 1999-08-12 2002-07-02 Ortho-Mcneil Pharamceutical, Inc. Bicyclic heterocyclic substituted phenyl oxazolidinone antibacterials, and related compositions and methods
WO2002064574A2 (en) 2001-02-07 2002-08-22 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Pyridoarylphenyl oxazolidinone antibacterials, and related compositions and methods
JP4647670B2 (ja) 2005-02-07 2011-03-09 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー グリシントランスポーター１の阻害剤としてのヘテロシクリル置換フェニルメタノン
WO2012136622A1 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Cellzome Limited Dihydropyrrolo pyrimidine derivatives as mtor inhibitors
JP2014528410A (ja) 2011-09-30 2014-10-27 キネタ・インコーポレイテツド 抗ウイルス化合物
CN107108610B (zh) 2014-12-30 2019-06-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗和预防肝炎b病毒感染的新的四氢吡啶并嘧啶和四氢吡啶并吡啶化合物
JP6462155B2 (ja) 2015-05-04 2019-01-30 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療用のＨＢｓＡｇ（ＨＢＶ表面抗原）及びＨＢＶ ＤＮＡ産生の阻害剤としてのテトラヒドロピリドピリミジン類及びテトラヒドロピリドピリジン類

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009030316A1 (de) * 2007-08-30 2009-03-12 Merck Patent Gmbh 1,3-dihydro-isoindolderivate

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHANG-AN GENG等: "Small-molecule inhibitors for the treatment of hepatitis B virus documented in patents", 《MINI REVIEWS IN MEDICINAL CHEMIISTRY》 *

Also Published As

Publication number Publication date
US11225482B2 (en) 2022-01-18
JP6821716B2 (ja) 2021-01-27
WO2018001944A1 (en) 2018-01-04
EP3478686A1 (en) 2019-05-08
EP3478686B1 (en) 2020-04-15
US20190241570A1 (en) 2019-08-08
CN109415367B (zh) 2021-04-16
JP2019519590A (ja) 2019-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109415367A (zh) 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢吡咯并嘧啶类化合物
CN107207505B (zh) 治疗和预防乙型肝炎病毒感染的 2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸衍生物
EP3535261B1 (en) Novel tetrahydropyridopyrimidines for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
EP3535262B1 (en) Novel tetrahydropyridopyrimidines for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
JP6285440B2 (ja) 融合二環式スルファモイル誘導体並びにｂ型肝炎の治療のための薬剤としてのその使用
CN107624113B (zh) 作为HBsAg (HBV 表面抗原)和HBV DNA 生成的抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的四氢吡啶并嘧啶和四氢吡啶并吡啶类化合物
CN106459032B (zh) 治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新的二氢喹嗪酮类
JP6348891B2 (ja) Ｃｘｃｒ４受容体アンタゴニスト
TWI291465B (en) Heterocyclic dihydropyrimidine compounds
JP5046942B2 (ja) Ｈｃｖ阻害性の二環式ピリミジン類
WO2019143902A2 (en) Substituted heterocycles as antiviral agents
CN110248939A (zh) 作为rho-激酶抑制剂的酪氨酸酰胺衍生物
CN1984908A (zh) 病毒聚合酶抑制剂
JP2020518671A (ja) 二環式縮合環系ヌクレオカプシド阻害剤および薬物としてｂ型肝炎を治療するためのその使用
BR112021005091A2 (pt) heterociclos funcionalizados como agentes antivirais
WO2023030459A1 (zh) 一类含喹啉酮酰胺的化合物及其制备方法、药物组合物和用途
CN110964023A (zh) 稠合四环类化合物及其在药物中的应用
CN111212644B (zh) 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺化合物的无定型固体分散体
CN113748113A (zh) 具有抗乙型肝炎病毒(hbv)活性的新型吲哚嗪-2-甲酰胺类化合物
WO2023083330A1 (zh) Drak2抑制剂及其制备方法和应用
CN105189498A (zh) 作为janus激酶抑制剂的孪位取代的氰基乙基吡唑并吡啶酮

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40004615

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant