CN109633161A - 一种基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1包含表面活性剂，试剂R2包含PCT抗体包被的胶乳微球，其中试剂R1中的表面活性剂为Triton X‑100、辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组合，试剂R2中的PCT抗体包被的胶乳微球用甘氨酸、甘氨酸和1,2‑乙二胺的混合物或甘氨酸和酪蛋白的混合物作为封闭试剂进行封闭，封闭试剂的pH值为8.2，但当试剂R1中的表面活性剂为Triton X‑100时，试剂R2中的PCT抗体包被的胶乳微球不用单独的甘氨酸封闭。该检测试剂盒具有降低检测的背景信号而不降低免疫反应度的效果。

Description

一种基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原检测试剂盒
技术领域
本发明涉及医疗检测技术领域，特别是胶乳增强免疫比浊法检测技术领域， 具体涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原检测试剂盒。
背景技术
降钙素原(PCT)是一种蛋白质，在健康人体内含量极少，其在血浆中的水平 通常小于0.1ng/mL，但在人体处于病理状态下，各组织器官几乎都能分泌PCT。 影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度 和免疫反应的状况等。当人体受到严重的细菌、真菌、寄生虫感染以及出现脓 毒症和多脏器功能衰竭时，PCT在血浆中的水平升高，而在自身免疫、过敏和 病毒感染时PCT不会升高，局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症也不 会导致其升高。
因此，PCT反映了全身炎症反应的活跃程度，其可以作为炎症反应监测的 关键指标，已在临床中得到了广泛的应用。PCT临床诊断的适应症包括：对细 菌感染与病毒感染的鉴别诊断；对抗生素治疗效果的监测，指导临床抗生素的 使用；帮助系统性细菌感染及脓毒症的早期诊断，评估疾病严重程度及预后； 手术和严重创伤患者细菌感染并发症监测等。
目前临床检测PCT常用的方法有放射免疫学分析法、胶体金比色法、免疫 比浊法和化学发光法。免疫比浊法是目前较为常用的检测方法，其基本原理是， 抗原(例如PCT抗原)与抗体(例如PCT抗体)在稀释系统中反应形成可溶性 免疫复合物，在稀释系统中的促聚剂(如聚乙二醇等)的作用下自液相析出， 形成微粒，使反应液出现浊度；当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随 着待检测样本中抗原的量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加；通过测定 反应液的浊度与一系列抗原标准品制作的校准曲线对照，得到样本中抗原的含 量。根据反应液的浊度的测定原理，免疫比浊法分为免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。这两种方法的免疫反应几乎相同，区别在于透射比浊法检测的是免 疫复合物吸收入射光所引起的入射光信号减弱，散射比浊法检测的是免疫复合 物使入射光折射偏转所引起的散射光的信号强弱。为解决免疫复合物颗粒体积 小，检测灵敏度差的问题，还开发了胶乳增强免疫比浊法，即将待测抗原相对 应的抗体包被在胶乳微球(通常为聚苯乙烯胶乳微球)上，使抗原抗体结合物 的体积增大。检测时，由于体积较大的抗原抗体结合物的存在，透射光和散射 光的强度变化更为显著，从而提高检测的灵敏度。
目前常用的基于胶乳增强免疫比浊法的PCT检测试剂盒包括试剂R1和试 剂R2。试剂R1包括促聚剂、缓冲剂、表面活性剂、电解质、稳定剂和防腐剂 组分，其中表面活性剂使用Triton X-100。试剂R2包括PCT抗体包被的胶乳微 球、缓冲剂、表面活性剂、电解质、稳定剂和防腐剂组分，其中在PCT抗体包 被的胶乳微球的制备中，在PCT抗体包被反应后使用1M甘氨酸溶液(pH 8.0) 封闭反应。通过两点终点法检测PCT浓度，检测波长为主波长600nm，次波长 800nm。首先将试剂R1与含有PCT的待测样本混合并温育一段时间，然后加 入试剂R2混合反应一段时间，读取第一个吸光度A1(OD600-800)，再反应一段时 间，读取第二个吸光度A2(OD600-800)，计算吸光度差值△OD＝A2-A1。通过将计 算得到的吸光度差值与使用标准PCT抗原浓度按相同方法制作的校准曲线对 照，得到待测样本中的PCT的浓度。应用两点终点法进行检测，可以减少检测 仪器带来的背景信号，但试剂R1和试剂R2的组分仍可能给检测带来背景信号， 影响检测灵敏度。由于本领域技术人员通常采购市售的基于胶乳增强免疫比浊 法的PCT检测试剂盒，未注意到也未能克服试剂盒的试剂R1和试剂R2所带来 的上述问题。
发明内容
本发明的目的在于对基于胶乳增强免疫比浊法的PCT检测试剂盒的试剂R1 和试剂R2进行优化，减少试剂给检测带来背景信号。
为此，本发明人经过深入的研究，开发出本发明的基于胶乳增强免疫比浊 法的降钙素原(PCT)检测试剂盒。
该检测试剂盒包括：
试剂R1和试剂R2，试剂R1包含促聚剂、缓冲剂、表面活性剂、电解质和 稳定剂，试剂R2包含PCT抗体包被的胶乳微球、缓冲剂、表面活性剂、电解 质和稳定剂，
其中，试剂R1中的表面活性剂为Triton X-100，试剂R2中的PCT抗体包 被的胶乳微球用0.5-1.5M甘氨酸和0.05-0.15M 1,2-乙二胺的混合物或0.5-1.5M 甘氨酸和1.5-2.5％酪蛋白的混合物作为封闭试剂进行封闭，
或者，所述试剂R1中的所述表面活性剂为Triton X-100与辛酰硫代甜菜碱 和/或Emulgen B66的组合，或者为辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组 合，所述试剂R2中的所述PCT抗体包被的胶乳微球用0.5-1.5M甘氨酸、0.5-1.5 M甘氨酸和0.05-0.15M 1,2-乙二胺的混合物或0.5-1.5M甘氨酸和1.5-2.5％酪蛋 白的混合物作为封闭试剂进行封闭，
封闭试剂的pH值为大于6.5至小于10.1。
PCT抗体包被的胶乳微球的制备工艺是,将带有羟基的聚苯乙烯胶乳悬浊 液用N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDAC)处理，得到活化聚苯乙烯胶乳悬浊液，然后将PCT抗体溶液加入到制得 的活化聚苯乙烯胶乳悬浊液中，进行PCT抗体包被反应，然后再加入封闭试剂 封闭反应，经离心、清洗后，得到PCT抗体包被的胶乳微球。
在本发明的优选实施方案中，试剂R1和试剂R2还包含防腐剂。
在本发明的优选实施方案中，试剂R1中的表面活性剂为辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组合。
在本发明的优选实施方案中，试剂R2中的封闭试剂的pH值为8.2。
在本发明的优选实施方案中，试剂R2中的PCT抗体包被的胶乳微球用 0.5-1.5M甘氨酸和0.05-0.15M 1,2-乙二胺的混合物作为封闭试剂进行封闭；更 优选用1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺作为封闭试剂进行封闭。
本领域技术人员可以选择试剂R1的各组分的常规含量。在本发明的优选实 施方案中，试剂R1包含1.0-3.0％w/v的促聚剂、40-60mM的缓冲剂、0.05-0.15％ w/v的表面活性剂、100-200mM的电解质、0.05-0.15％w/v的稳定剂和0.05-0.15％ w/v的防腐剂。
本领域技术人员可以选择试剂R2的各组分的常规含量。在本发明的优选实 施方案中，试剂R2包含0.05-0.3％w/v的PCT抗体包被的胶乳微球、40-200mM 的缓冲剂、0.01-0.5％w/v的表面活性剂、10-200mM的电解质、0.05-1.0％w/v 的稳定剂和0.05-0.2％w/v的防腐剂。
本领域技术人员可以选择试剂R1的各组分的常规种类。在本发明的优选实 施方案中，试剂R1中的促聚剂选自聚乙二醇4000-200000或它们的组合，例如 聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇10000或聚乙二醇 20000等或它们的组合，缓冲剂选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)或4-羟乙基哌嗪乙 磺酸(HEPES)或它们的组合，电解质选自氯化钠或氯化钾或它们的组合，稳定剂 选自海藻糖、甘油或牛血清白蛋白(BSA)或它们的组合，防腐剂选自硫柳汞、叠 氮钠或抗生素或它们的组合。
本领域技术人员可以选择试剂R2的各组分的常规种类。在本发明的优选实 施方案中，试剂R2中的缓冲剂选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)或4-羟乙基哌嗪乙 磺酸(HEPES)或它们的组合，表面活性剂选自吐温20、吐温60或吐温80或它 们的组合，电解质选自氯化钠或氯化钾或它们的组合，稳定剂选自海藻糖、甘 油或牛血清白蛋白(BSA)或它们的组合，防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠或抗生素或 它们的组合。
在本发明的更优选实施方案中，试剂R1包含1.0-3.0％w/v的聚乙二醇 10000、40-60mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.05-0.15％w/v的辛酰硫代甜菜碱 或Emulgen B66或它们的组合、100-200mM的氯化钠、0.05-0.15％w/v的牛血 清白蛋白(BSA)、0.05-0.15％w/v的叠氮钠，pH为7.0-8.0；试剂R2包含0.05-0.3％ w/v的PCT抗体包被的胶乳微球、40-200mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、 0.05-0.5％w/v的吐温20、10-200mM的氯化钠、0.05-1.0％w/v的牛血清白蛋白 (BSA)、0.05-0.1％w/v的叠氮钠，pH为7.0-9.0。
在本发明的一个还更优选的实施方案中，试剂R1包含2.0％w/v的聚乙二 醇10000、50mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.1％w/v的辛酰硫代甜菜碱或 Emulgen B66或它们的组合、150mM的氯化钠、0.1％w/v的牛血清白蛋白 (BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为7.5；试剂R2包含0.1％w/v的PCT抗体包 被的胶乳微球、50mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.1％w/v的吐温20、 20mM的氯化钠、0.2％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为 8.0。
在本发明的另一个还更优选的实施方案中，试剂R1包含2.0％w/v的聚乙 二醇10000、50mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.05％w/v的辛酰硫代甜菜碱和 0.05％w/v的Emulgen B66、150mM的氯化钠、0.1％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、 0.1％w/v的叠氮钠，pH为7.5；试剂R2包含0.1％w/v的PCT抗体包被的胶乳 微球、50mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.1％w/v的吐温20、20mM的 氯化钠、0.2％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为8.0。
如本说明书具体实施方式部分所示，本发明人经过实验证实，一方面，试 剂R1使用辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66代替Triton X-100作为表面活性剂， 可以降低检测的背景信号，另一方面，试剂R2中的PCT抗体包被的胶乳微球 用1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺的混合物或1M甘氨酸和2％酪蛋白的混合物 代替1M甘氨酸作为封闭试剂进行封闭，且封闭试剂的pH值在大于6.5至小于 10.1的范围内，也可以降低检测的背景信号，同时不降低检测的免疫反应度。 因此，本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒通过采用 优化的试剂R1和优化的试剂R2，能够降低检测的背景信号，提高检测灵敏度。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
现有的基于胶乳增强免疫比浊法的PCT检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2。 下文对试剂R1和试剂R2的组成和制备、PCT抗原校准曲线的制作和PCT抗原 的检测方法进行说明。在此基础上，研究了试剂R1中的表面活性剂的种类、试 剂R2中的PCT抗体包被的胶乳微球的封闭试剂种类和pH值对基于胶乳增强免 疫比浊法的PCT检测试剂盒的背景信号的影响，证明了本发明的用基于胶乳增 强免疫比浊法的PCT检测试剂盒具有降低检测的背景信号且不降低检测的免疫 反应度的效果。
1.试剂R1的组成和制备
1.1.试剂R1的组成
试剂R1包括聚乙二醇10000作为促聚剂、三羟甲基氨基甲烷(Tris)作为缓冲 剂、Triton X-100作为表面活性剂、氯化钠作为电解质、牛血清白蛋白(BSA)作 为稳定剂和叠氮钠作为防腐剂。具体组成如下：
pH 7.0-8.0
1.2.试剂R1的制备
将计算量的聚乙二醇10000、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、Triton X-100、氯化 钠、牛血清白蛋白(BSA)和叠氮钠加入到装有800mL纯水的容器中，常温搅拌 至固体完全溶解，pH调至7.50，用纯水定容至1L并混合均匀，0.45μm过滤 膜过滤，即得试剂R1。
2.试剂R2的组成和制备
2.1.试剂R2的组成
试剂R2包括PCT抗体包被的胶乳微球、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)作为 缓冲剂、吐温20作为表面活性剂、氯化钠作为电解质、稳定剂和防腐剂。具体 组成如下：
pH 7.0-9.0
2.2.试剂R2的制备
2.2.1.活化聚苯乙烯胶乳悬浊液的制备
将100mg/mL的表面带有羟基的聚苯乙烯胶乳悬浊液(Bangs Lab，美国) 用50mM2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液(pH 6.0)稀释至浓度为10mg/mL。加入N- 羟基丁二酰亚胺(NHS)，使NHS在反应体系中的浓度达到1mg/mL。搅拌溶解 后，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDAC)，使EDAC在反 应体系中的浓度达到0.3mg/mL。将反应体系在2-8℃下搅拌1小时后，15000rpm 离心20分钟。弃去上清液，然后向沉淀物加入50mM 2-(N-吗啉基)乙硫酸缓冲 液(pH 6.0)，超声分散，得到活化聚苯乙烯胶乳悬浊液。
2.2.2.PCT抗体溶液的制备
PCT抗体从海肽生物科技(上海)有限公司购得。包被前PCT抗体的缓冲 液换为100mM磷酸盐，得到PCT抗体溶液，pH 7.0。
2.2.3.PCT抗体包被的胶乳微球的制备
将PCT抗体溶液加入到制得的活化聚苯乙烯胶乳悬浊液中，加入量为0.4 mg抗体/mL活化聚苯乙烯胶乳悬浊液。室温下20rpm搅拌2-4小时，进行PCT 抗体包被反应。然后加入1M甘氨酸溶液(pH 8.2)封闭反应，封闭试剂的加入量 为反应体系总体积的10％。将反应液在15000rpm下离心20分钟，然后弃去上 清。将沉淀物清洗三次，即得PCT抗体包被的胶乳微球，胶乳微球直径为50-400 nm。
2.2.4.试剂R2的制备
将制得的PCT抗体包被的胶乳微球用含有50mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 (HEPES)、0.1％w/v吐温20、20mM氯化钠、0.2％w/v牛血清白蛋白和0.1％w/v 叠氮钠的稀释液重悬，使胶乳微球的最终浓度为0.05-0.3％w/v，超声分散，即 得试剂R2。
3.PCT抗原校准曲线的制作
3.1.PCT抗原校准品的制备
按设定的0ng/mL、1.0ng/mL、2.5ng/mL、8.0ng/mL、24.0ng/mL、58.0ng/mL 的PCT抗原校准品浓度，计算所需的PCT抗原质量，分别加入到含有50mM Tris-HCl、150mM KCl、5mMCaCl2、5％BSA(W/V)、10％甘露醇、0.09％叠氮 钠的稀释液(pH7.50)中，混合均匀后，用0.45μm过滤膜过滤除菌，得到相应的 设定浓度的PCT抗原校准品。
3.2.PCT抗原的检测方法
基于胶乳增强免疫比浊法的PCT检测试剂盒采用两点终点法，用PCT抗体 包被的胶乳微球检测PCT抗原，检测波长为主波长600nm，次波长800nm。 3.3.PCT抗原校准曲线的制作
为制作PCT抗原校准曲线，分别将180μL的试剂R1和16μL的每个PCT 抗原校准品混合均匀，37℃孵育5分钟。然后分别加入60μL的试剂R2。将每 个混合物混合均匀，37℃反应30秒，自动化分析仪(Hitachi 7180)读取第一吸光 度A1(OD600-800)，再37℃反应5分钟，读取第二吸光度A2(OD600-800)。按公式 △OD＝A2-A1分别计算吸光度差值，代表PCT抗原与PCT抗体的反应度，结果 如表1所示。可以以PCT抗原校准品浓度为X轴，相应的吸光度差值△OD为 Y轴，制作校准曲线。
表1.PCT抗原校准品浓度与对应的吸光度差值
PCT抗原校准品浓度(ng/mL) 吸光度差值(△OD)
0 694
0.9 1150
2.4 2126
8 4836
24 7320
58 8568
4.背景信号和抗原抗体免疫反应度的定义
4.1.背景信号的定义
在本发明中，用基于胶乳增强免疫比浊法的PCT检测试剂盒的检测PCT浓 度时的背景信号，由PCT抗原校准品浓度为0ng/mL时吸光度差值(△OD)的大 小来定义。吸光度差值(△OD)越小，则背景信号越小，反之吸光度差值(△OD) 越大，则背景信号越大。
4.2.抗原抗体免疫反应度的定义
在本发明中，用基于胶乳增强免疫比浊法的PCT检测试剂盒检测PCT浓度 时的抗原抗体免疫反应度，由PCT抗原校准品浓度为58ng/mL时吸光度差值 (△OD)与由PCT抗原校准品浓度为0ng/mL时吸光度差值(△OD)的差值的大小 来定义。该差值越小，则抗原抗体免疫反应度越小，反之该差值越大，抗原抗 体免疫反应度越大。
5.试剂R1中的表面活性剂的种类对背景信号的影响
按上述“1.2.试剂R1的制备”中所描述的方法，但将表面活性剂Triton X-100 用表4中所列的表面活性剂替代，得到新制备的试剂R1。
按上述“3.3.PCT抗原校准曲线的制作”中所描述的方法，用上述制备的PCT 抗原校准品与新制备的试剂R1和试剂R2进行反应，读取第一吸光度A1和第 二吸光度A2，计算吸光度差值(△OD)，结果如表2所示(包括表1的结果以便 比较)。
表2.试剂R1的制备中表面活性剂的种类对背景信号的影响
由表2可见，使用Triton X-100作为表面活性剂时，背景吸光度差值(△OD) 为694，免疫反应度为7874。使用辛酰硫代甜菜碱和Emulgen B66作为表面活 性剂时，背景吸光度差值(△OD)分别为550和390，低于Triton X-100的结果， 表明两者能降低检测的背景信号，且免疫反应度分别为7990和8023，与Triton X-100的结果相比还有所提高。使用Tergitol(NP-40)作为表面活性剂时，背景吸 光度差值(△OD)为258，更加远低于比TritonX-100的结果，表明其能很好地降 低检测的背景信号，但免疫反应度为7468，与Triton X-100的结果相比差距较 大，表明其造成反应度明显下降。使用Genapol X-080作为表面活性剂时，吸光 度差值(△OD)为796，远高于Triton X-100的结果，表明其造成检测的背景信号增加，且其免疫反应度为7792，与Triton X-100的结果相比也有一定的差距。
由以上分析可知，在制备试剂R1时，辛酰硫代甜菜碱和Emulgen B66可很 地替代Triton X-100作为表面活性剂，更有利于降低检测的背景信号，而不影响 免疫反应度。
6.试剂R2的制备中抗体包被封闭试剂的种类对背景信号的影响
按上述“2.2.3.PCT抗体包被的胶乳微球的制备”中所描述的方法，进行PCT 抗体包被反应，然后分别用以下试剂代替甘氨酸溶液作为封闭试剂封闭反应： 甘氨酸和1,2-乙二胺的混合物、甘氨酸和牛血清白蛋白的混合物、甘氨酸和山羊 血清的混合物、甘氨酸和酪蛋白的混合物、甘氨酸和马血清的混合物、甘氨酸 和明胶的混合物，得到分别经不同封闭试剂封闭处理的PCT抗体包被的胶乳微 球，即新制备的试剂R2。
按上述“3.3.PCT抗原校准曲线的制作”中所描述的方法，用上述制备的PCT 抗原校准品与试剂R1和新制备的试剂R2进行反应，读取第一吸光度A1和第 二吸光度A2，计算吸光度差值(△OD)，结果如表3所示(包括表1的结果以便 比较)也可如上所述制作校准曲线。
表3.封闭试剂的种类对背景信号的影响
由表3可见，使用1M甘氨酸作为封闭试剂时，背景吸光度差值(△OD)为 694，免疫反应度为7874。使用1M甘氨酸或甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺的混合 物作为封闭试剂时，背景吸光度差值(△OD)为470，免疫反应度为7986，表明 其能明显降低检测的背景信号，且提高免疫反应度。使用1M甘氨酸和2％酪蛋 白的混合物作为封闭试剂时，背景吸光度差值(△OD)为601，免疫反应度为7947， 表明其能一定程度地降低检测的背景信号，且提高免疫反应度。使用1M甘氨 酸和2％山羊血清的混合物、1M甘氨酸和2％牛血清的混合物、1M甘氨酸和2％马血清的混合物和1M甘氨酸和2％明胶的混合物作为封闭试剂时，背景吸 光度差值(△OD)分别为801、796、856和750，表明它们造成检测的背景信号的 增加，且它们造成免疫反应度有一定的下降。
由以上分析可知，在试剂R2的制备中，可以选择1M甘氨酸和0.1M 1,2- 乙二胺的混合物和1M甘氨酸和2％酪蛋白的混合物代替1M甘氨酸作为封闭试 剂。
以上研究了甘氨酸、1,2-乙二胺和酪蛋白三种封闭试剂单独或组合对背景信 号的影响，其中的浓度可以做适当的扩展，例如，甘氨酸的浓度可以在0.5-1M 的范围内，1,2-乙二胺的浓度可以在0.05-0.15M的范围内，酪蛋白的浓度可以 在1.5-2.5％的范围内。
7.试剂R2的制备中抗体包被封闭试剂pH值对背景信号的影响
按上述“2.2.3.PCT抗体包被的胶乳微球的制备”中所描述的方法，进行PCT 抗体包被反应，然后分别用甘氨酸溶液(1M,pH 6.5)和甘氨酸溶液(1M,pH 10.1) 作为封闭试剂封闭反应，得到分别经不同pH的甘氨酸封闭试剂封闭处理的PCT 抗体包被的胶乳微球，即新制备的试剂R2。
按上述“3.3.PCT抗原校准曲线的制作”中所描述的方法，用上述制备的PCT 抗原校准品与试剂R1和新制备的试剂R2进行反应，读取第一吸光度A1和第 二吸光度A2，计算吸光度差值(△OD)，结果如表4所示(包括表1的结果以便 比较)。
表4.作为封闭试剂的甘氨酸溶液的pH值对背景信号的影响
由表4可见，使用pH 8.2的1M甘氨酸作为封闭试剂时，背景吸光度差值 (△OD)为694，免疫反应度为7874。使用低pH值的甘氨酸溶液(pH 6.5)作为封 闭试剂时，背景吸光度差值(△OD)为310，远低于pH 8.2时的结果，表明其能 明显降低检测的背景信号，但免疫反应度为7256，表明其造成反应度降低。使 用高pH值的甘氨酸溶液(pH 10.1)作为封闭试剂时，背景吸光度差值(△OD)为 956，表明其造成造成检测的背景信号增加，且免疫反应度为7652，表明其也造 成反应度有一定的下降。
由以上分析可见，pH 8.2是封闭试剂的理想pH值。
以下通过实施例说明本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT) 检测试剂盒。
实施例1
1.试剂R1的组成和制备
1.1.试剂R1的组成
试剂R1包括聚乙二醇10000作为促聚剂、三羟甲基氨基甲烷(Tris)作为缓冲 剂、Triton X-100作为表面活性剂、氯化钠作为电解质、牛血清白蛋白(BSA)作 为稳定剂和叠氮钠作为防腐剂。具体组成如下：
pH 7.5
1.2.试剂R1的制备
将计算量的聚乙二醇10000、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、辛酰硫代甜菜碱、 氯化钠、牛血清白蛋白(BSA)和叠氮钠加入到装有800mL纯水的容器中，常温 搅拌至固体完全溶解，pH调至7.50，用纯水定容至1L并混合均匀，0.45μm过 滤膜过滤，即得试剂R1。
2.试剂R2的组成和制备
2.1.试剂R2的组成
试剂R2包括PCT抗体包被的胶乳微球、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)作为 缓冲剂、吐温20作为表面活性剂、氯化钠作为电解质、稳定剂和防腐剂。具体 组成如下：
pH 8.0
2.2.试剂R2的制备
2.2.1.活化聚苯乙烯胶乳悬浊液的制备
将100mg/mL的表面带有羟基的聚苯乙烯胶乳悬浊液(Bangs Lab,美国) 用50mM2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液(pH 6.0)稀释至浓度为10mg/mL。加入N- 羟基丁二酰亚胺(NHS)，使NHS在反应体系中的浓度达到1mg/mL。搅拌溶解 后，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDAC)，使EDAC在反 应体系中的浓度达到0.3mg/mL。将反应体系在2-8℃下搅拌1小时后，15000rpm 离心20分钟。弃去上清液，然后向沉淀物加入50mM 2-(N-吗啉基)乙硫酸缓冲 液(pH 6.0)，超声分散，得到活化聚苯乙烯胶乳悬浊液。
2.2.2.PCT抗体溶液的制备
PCT抗体从海肽生物科技(上海)有限公司购得。包被前PCT抗体的缓冲 液换为100mM磷酸盐，得到PCT抗体溶液，pH 7.0。
2.2.3.PCT抗体包被的胶乳微球的制备
将制得的PCT抗体溶液加入到制得的活化聚苯乙烯胶乳悬浊液中，加入量 为0.4mg抗体/mL活化聚苯乙烯胶乳悬浊液。室温下20rpm搅拌2-4小时，进 行PCT抗体包被反应。然后加入1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺的混合物(pH 8.2) 封闭反应，封闭试剂的加入量为反应体系总体积的10％。将反应液在1500rpm 下离心20分钟，然后弃去上清。将沉淀物清洗三次，即得PCT抗体包被的胶乳 微球，胶乳微球直径约为300nm。
2.2.4.试剂R2的制备
将制得的PCT抗体包被的胶乳微球用含有50mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)(pH7.5)、0.1％w/v吐温20、20mM氯化钠、0.2％w/v牛血清白蛋白和 0.1％w/v叠氮钠的稀释液重悬，使胶乳微球的最终浓度为0.1％w/v，超声分散， 即得试剂R2。
3.检测试剂盒的制备
将40mL试剂R1和10mL试剂R2分别装入合适的试剂瓶中，分别在两个 试剂瓶上贴上相应的标签，装入盒子中，盒子附上试剂盒使用说明书，即制得 本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒。在使用时，如 上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点法检测样本中的PCT含量。
实施例2
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v辛酰硫代甜菜碱作为表面活性剂，同时 试剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二 胺的混合物(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同， 胶乳微球直径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原 (PCT)检测试剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点 终点法检测样本中的PCT含量。
实施例3
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v Emulgen B66作为表面活性剂，同时试 剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺 的混合物(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶 乳微球直径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原 (PCT)检测试剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点 终点法检测样本中的PCT含量。
实施例4
因为如上所述，在制备试剂R1时，辛酰硫代甜菜碱和Emulgen B66可很地 替代Triton X-100作为表面活性剂，因此本实施例中，试剂1使用0.05％w/v辛 酰硫代甜菜碱和0.05％w/v Emulgen B66作为表面活性剂，同时试剂2的PCT 抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺的混合物(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳微球直径约 为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂 盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点法检测样 本中的PCT含量。
实施例5
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v Triton X-100作为表面活性剂，同时试剂 2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸和2％酪蛋白的混合物 (pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳微球直 径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试 剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点法检测 样本中的PCT含量。
实施例6
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v辛酰硫代甜菜碱作为表面活性剂，同时 试剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸和2％酪蛋白的混 合物(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳微 球直径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT) 检测试剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点 法检测样本中的PCT含量。
实施例7
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v Emulgen B66作为表面活性剂，同时试 剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸和2％酪蛋白的混合 物(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳微球 直径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测 试剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点法检 测样本中的PCT含量。
实施例8
本实施例中，试剂1使用0.05％w/v辛酰硫代甜菜碱和0.05％w/v Emulgen B66作为表面活性剂，同时试剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M 甘氨酸和2％酪蛋白的混合物(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程 与实施例1相同，胶乳微球直径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫 比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准 曲线，并采用两点终点法检测样本中的PCT含量。
实施例9
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v辛酰硫代甜菜碱作为表面活性剂，同时 试剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸(pH 8.2)封闭反应， 其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳微球直径约为300nm，制 得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒。在使用时， 如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点法检测样本中的PCT含量。
实施例10
本实施例中，试剂1使用0.1％w/v Emulgen B66作为表面活性剂，同时试 剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M甘氨酸(pH 8.2)封闭反应， 其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳微球直径约为300nm，制 得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒。在使用时， 如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点法检测样本中的PCT含量。
实施例11
本实施例中，试剂1使用0.05％w/v辛酰硫代甜菜碱和0.05％w/v Emulgen B66作为表面活性剂，同时试剂2的PCT抗体包被的胶乳微球的制备中使用1M 甘氨酸(pH 8.2)封闭反应，其余的组分、含量和制备过程与实施例1相同，胶乳 微球直径约为300nm，制得本发明的基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT) 检测试剂盒。在使用时，如上文所述制作PCT抗原校准曲线，并采用两点终点 法检测样本中的PCT含量。
以上应用了具体实例对本发明进行了阐述，只是用于帮助理解本发明，并 不用以限制本发明。本发明所属技术领域的技术人员依据本发明的构思，还可 以做出若干简单推演、变形或替换。这些推演、变形或替换方案也落入本发明 的权利要求范围内。

Claims (10)

1.一种基于胶乳增强免疫比浊法的降钙素原(PCT)检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含促聚剂、缓冲剂、表面活性剂、电解质和稳定剂，所述试剂R2包含PCT抗体包被的胶乳微球、缓冲剂、表面活性剂、电解质和稳定剂，
其中，所述试剂R1中的所述表面活性剂为Triton X-100，所述试剂R2中的所述PCT抗体包被的胶乳微球用0.5-1.5M甘氨酸和0.05-0.15M 1,2-乙二胺的混合物或0.5-1.5M甘氨酸和1.5-2.5％酪蛋白的混合物作为封闭试剂进行封闭，
或者，所述试剂R1中的所述表面活性剂为Triton X-100与辛酰硫代甜菜碱和/或Emulgen B66的组合，或者为辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组合，所述试剂R2中的所述PCT抗体包被的胶乳微球用0.5-1.5M甘氨酸、0.5-1.5M甘氨酸和0.05-0.15M 1,2-乙二胺的混合物或0.5-1.5M甘氨酸和1.5-2.5％酪蛋白的混合物作为封闭试剂进行封闭，
所述封闭试剂的pH值为大于6.5至小于10.1。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和所述试剂R2还包含防腐剂。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的所述表面活性剂为辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组合。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的所述封闭试剂的pH值为8.2。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的所述PCT抗体包被的胶乳微球用0.5-1.5M甘氨酸和0.05-0.15M 1,2-乙二胺的混合物作为封闭试剂进行封闭；更优选用1M甘氨酸和0.1M 1,2-乙二胺的混合物作为封闭试剂进行封闭。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂R1包含1.0-3.0％w/v的促聚剂、40-60mM的缓冲剂、0.05-0.15％w/v的表面活性剂、100-200mM的电解质、0.05-0.15％w/v的稳定剂和0.05-0.15％w/v的防腐剂，
所述试剂R2包含0.05-0.3％w/v的PCT抗体包被的胶乳微球、40-200mM的缓冲剂、0.01-0.5％w/v的表面活性剂、10-200mM的电解质、0.05-1.0％w/v的稳定剂和0.05-0.2％w/v的防腐剂。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的所述促聚剂选自聚乙二醇4000-200000或它们的组合，所述缓冲剂选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)或4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)或它们的组合，所述电解质选自氯化钠或氯化钾或它们的组合，所述稳定剂选自海藻糖、甘油或牛血清白蛋白(BSA)或它们的组合，所述防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠或抗生素或它们的组合；所述试剂R2中的所述缓冲剂选自三羟甲基氨基甲烷(Tris)或4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)或它们的组合，所述表面活性剂选自吐温20、吐温60或吐温80或它们的组合，所述电解质选自氯化钠或氯化钾或它们的组合，所述稳定剂选自海藻糖、甘油或牛血清白蛋白(BSA)或它们的组合，所述防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠或抗生素或它们的组合。
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂R1包含1.0-3.0％w/v的聚乙二醇10000、40-60mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.05-0.15％w/v的辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组合、100-200mM的氯化钠、0.05-0.15％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.05-0.15％w/v的叠氮钠，pH为7.0-8.0，
所述试剂R2包含0.05-0.3％w/v的所述PCT抗体包被的胶乳微球、40-200mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.05-0.5％w/v的吐温20、10-200mM的氯化钠、0.05-1.0％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.05-0.1％w/v的叠氮钠，pH为7.0-9.0。
9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂R1包含2.0％w/v的聚乙二醇10000、50mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.1％w/v的辛酰硫代甜菜碱或Emulgen B66或它们的组合、150mM的氯化钠、0.1％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为7.5，
所述试剂R2包含0.1％w/v的所述PCT抗体包被的胶乳微球、50mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.1％w/v的吐温20、20mM的氯化钠、0.2％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为8.0。
10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂R1包含2.0％w/v的聚乙二醇10000、50mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.05％w/v的辛酰硫代甜菜碱和0.05％w/v的Emulgen B66、150mM的氯化钠、0.1％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为7.5，
所述试剂R2包含0.1％w/v的所述PCT抗体包被的胶乳微球、50mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、0.1％w/v的吐温20、20mM的氯化钠、0.2％w/v的牛血清白蛋白(BSA)、0.1％w/v的叠氮钠，pH为8.0。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111812336A (zh) * 2020-08-10 2020-10-23 苏州康和顺医疗技术有限公司 用于检测冠状病毒抗体的检测试剂盒及其制备方法
CN111965365A (zh) * 2020-07-23 2020-11-20 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种果糖胺测定试剂盒

Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5047326A (en) * 1988-10-07 1991-09-10 Eastman Kodak Company Immunmological reagent composition and its use in the determination of chlamydial or gonococcal antigens
US20020102617A1 (en) * 2000-08-03 2002-08-01 Macbeath Gavin Protein microarrays
CN102759631A (zh) * 2012-08-02 2012-10-31 南京诺尔曼生物技术有限公司 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒
CN103344763A (zh) * 2013-06-18 2013-10-09 华东师范大学 乳胶增强型afp检测试剂盒及其制备方法和应用
CN103558400A (zh) * 2013-11-25 2014-02-05 重庆中元生物技术有限公司 一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒
CN104076158A (zh) * 2014-07-10 2014-10-01 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒
US20150031052A1 (en) * 2011-12-28 2015-01-29 Denka Seiken Co., Ltd. Method for reducing adsorption of bubbles
CN104335048A (zh) * 2012-03-30 2015-02-04 积水医疗株式会社 凝集测定用胶乳粒子
CN104807990A (zh) * 2015-05-12 2015-07-29 骏实生物科技(上海)有限公司 一种用于抗原抗体反应体外诊断试剂的热稳定剂
CN105652021A (zh) * 2016-03-11 2016-06-08 上海练佰生物技术中心 一种测定小而密脂蛋白的试剂、方法和试剂盒
CN105842458A (zh) * 2016-03-24 2016-08-10 山东盛百灵医药科技有限公司 一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法
CN106199000A (zh) * 2016-07-07 2016-12-07 四川新健康成生物股份有限公司 抗体的包被工艺以及该工艺制成的肌红蛋白测定试剂盒
CN108226531A (zh) * 2017-12-27 2018-06-29 三诺生物传感股份有限公司 一种β2-微球蛋白检测试剂盒
CN108375571A (zh) * 2018-02-05 2018-08-07 苏州长光华医生物医学工程有限公司 一种用于化学发光免疫检测的磁颗粒试剂及试剂盒
CN108700519A (zh) * 2016-02-24 2018-10-23 生物辐射实验室股份有限公司 用于荧光检测的方法和组合物
CN108709993A (zh) * 2018-04-02 2018-10-26 深圳上泰生物工程有限公司 一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法
CN108761089A (zh) * 2018-06-29 2018-11-06 迈克生物股份有限公司 用于检测β2-微球蛋白的试剂的制备方法

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5047326A (en) * 1988-10-07 1991-09-10 Eastman Kodak Company Immunmological reagent composition and its use in the determination of chlamydial or gonococcal antigens
US20020102617A1 (en) * 2000-08-03 2002-08-01 Macbeath Gavin Protein microarrays
US20150031052A1 (en) * 2011-12-28 2015-01-29 Denka Seiken Co., Ltd. Method for reducing adsorption of bubbles
CN104335048A (zh) * 2012-03-30 2015-02-04 积水医疗株式会社 凝集测定用胶乳粒子
CN102759631A (zh) * 2012-08-02 2012-10-31 南京诺尔曼生物技术有限公司 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒
CN103344763A (zh) * 2013-06-18 2013-10-09 华东师范大学 乳胶增强型afp检测试剂盒及其制备方法和应用
CN103558400A (zh) * 2013-11-25 2014-02-05 重庆中元生物技术有限公司 一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒
CN104076158A (zh) * 2014-07-10 2014-10-01 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒
CN104807990A (zh) * 2015-05-12 2015-07-29 骏实生物科技(上海)有限公司 一种用于抗原抗体反应体外诊断试剂的热稳定剂
CN108700519A (zh) * 2016-02-24 2018-10-23 生物辐射实验室股份有限公司 用于荧光检测的方法和组合物
CN105652021A (zh) * 2016-03-11 2016-06-08 上海练佰生物技术中心 一种测定小而密脂蛋白的试剂、方法和试剂盒
CN105842458A (zh) * 2016-03-24 2016-08-10 山东盛百灵医药科技有限公司 一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法
CN106199000A (zh) * 2016-07-07 2016-12-07 四川新健康成生物股份有限公司 抗体的包被工艺以及该工艺制成的肌红蛋白测定试剂盒
CN108226531A (zh) * 2017-12-27 2018-06-29 三诺生物传感股份有限公司 一种β2-微球蛋白检测试剂盒
CN108375571A (zh) * 2018-02-05 2018-08-07 苏州长光华医生物医学工程有限公司 一种用于化学发光免疫检测的磁颗粒试剂及试剂盒
CN108709993A (zh) * 2018-04-02 2018-10-26 深圳上泰生物工程有限公司 一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法
CN108761089A (zh) * 2018-06-29 2018-11-06 迈克生物股份有限公司 用于检测β2-微球蛋白的试剂的制备方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PANG H, ZHANG C, LIU F, GONG X, JIN X, SU C.: "Reduced thrombin activatable fibrinolysis inhibitor and enhanced proinflammatory cytokines in acute coronary syndrome.", 《MED INTENSIVA》 *
孙大成 等: "《现代医学技术》", 30 August 2001 *
孟凡达等: "快速检测心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫微流体测试卡", 《分析化学》 *
涂建成，李艳主编: "《临床生物化学检验实验指导》", 30 August 2015 *
王文倩,魏颖,王宇,徐玉东,杨永清,尹磊淼: "蛋白免疫印迹法检测小分子蛋白的实验条件优化研究", 《现代生物医学进展》 *
葛建军: "胶乳增强免疫比浊法测定降钙素原方法学评价及临床意义", 《实用医技杂志》 *
贺国旭,潘自红,李松田,张鲁雅: "硫代甜菜碱12/十二烷基磺酸钠复配体系表面活性的研究", 《四川师范大学学报(自然科学版)》 *
陈主初 等: "《肿瘤蛋白质组学》", 30 September 2002 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111965365A (zh) * 2020-07-23 2020-11-20 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种果糖胺测定试剂盒
CN111965365B (zh) * 2020-07-23 2021-11-19 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种果糖胺测定试剂盒
CN111812336A (zh) * 2020-08-10 2020-10-23 苏州康和顺医疗技术有限公司 用于检测冠状病毒抗体的检测试剂盒及其制备方法

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