CN109490533A - 一种胃蛋白酶原ⅱ(pgⅱ)检测试剂盒及生产工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，试剂R1包括如下成分：试剂R2包括如下成分：该胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒即开即用，无需配制，测量重复性好，检测灵敏度高，并且长期存放的稳定性较好。本发明还提出一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产工艺。

Description

一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒及生产工艺
技术领域
本发明涉及一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，属于诊断试剂盒技术领域。
背景技术
胃蛋白酶是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃蛋白酶原(PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，分为PGⅠ和PGⅡ，胃蛋白酶原经胃酸或者胃蛋白酶刺激后形成胃蛋白酶。PGⅠ来源于胃底腺的主细胞和颈粘液细胞，PGⅡ则来源与全胃腺(胃贲门腺、胃底腺、胃窦幽门腺)和远端十二指肠Brunner氏腺，前列腺和胰腺也产生少量PGⅡ，胃黏膜合成的PGⅡ约为总量的25％。合成后的PG大部分进入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶，只有少量(约1％)PG透过胃粘膜毛细血管进入学循环。血清PG水平反应了不同部位胃粘膜的形态和功能。PGⅠ是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，PGⅠ升高意味着胃酸分泌增多，PGⅠ的降低意味着胃酸分泌减少或胃粘膜腺体萎缩。PGⅡ与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关。PGⅠ/PGⅡ比值进行性降低与胃黏膜萎缩进展相关。联合测定胃蛋白酶原PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ比值可以代替胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。是检查手段的革命(定量检测，减少活检痛苦和防止组织取样错漏)。
目前现有技术中对于胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)的测定需要比较复杂的配液过程，并且存放时间受环境条件影响较大，长期存放的稳定性差，灵敏度差，测量重复性低。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明提出一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，即开即用，无需配制，测量重复性好，检测灵敏度高，并且长期存放的稳定性较好。
为实现上述目的，本发明的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其中：试剂R1包括如下成分：
试剂R2包括如下成分：
进一步地，试剂R1包括如下成分：
试剂R2包括如下成分：
进一步地，在试剂R2中，胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与羧基胶乳微球偶联，羧基胶乳微球的粒径为20nm～500nm。
进一步地，羧基胶乳微球的粒径为220nm。
进一步地，在试剂R2中，胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体采用抗人类胃蛋白酶原Ⅰ(小鼠)单克隆抗体。
进一步地，在试剂R2中，表面活性剂包括胆甾醇异硬脂酸酯、芥酸酰胺。
进一步地，试剂R1与试剂R2的体积比为27:5。
本发明检验血清胃蛋白酶原Ⅱ的原理是：样品中的PGⅡ和被乳状液粒吸附的抗体发生抗原抗体反应，即通过使用与抗体共价结合的胶乳颗粒予以增强免疫沉淀反应，形成免疫复合物。在波长700nm处检测浊度的变化，浊度的变化程度与样品中PGⅡ的含量成正比，通过计算得出样品中的PGⅡ含量。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液作为一种生物缓冲剂，为反应提供稳定的、适宜的PH环境。
氯化钠提供一个离子环境，同时能够增加试剂中盐离子效应。
聚乙二醇20000是环氧乙烷水解产物的聚合物，属于一种非离子型的水溶性聚合物，具有水溶性、不挥发性、生理惰性、温和性等特性，作为分散剂和乳化剂，提高配制溶液和反应体系的均匀性和稳定性，提高抗原抗体结合物的反应浊度，提高试剂的灵敏度。
吐温20是一种表面活性剂，配合聚乙二醇20000，能够增加乳化剂的稳定性，提高反应体系的反应效率。
海藻糖是生物活性物质的稳定剂和保护剂，可以提高胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体和胶乳微球偶联复合物的结合效率和稳定性。
叠氮化钠作为防腐剂能够防止溶液中微生物生长，保持试剂的稳定性。
胆甾醇异硬脂酸酯用于润滑剂和抗粘连剂，芥酸酰胺是一种低泡性表面活性剂，分散于各种原料中具有良好的润湿性、渗透性。
胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体可以与血清样本中的胃蛋白酶原Ⅱ特异性结合形成抗原抗体复合物，通过测定复合物的反应浊度可以计算出样本中胃蛋白酶原Ⅱ的浓度。
本发明还提出一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产工艺，包括以下步骤：
S1：配制试剂R1，精确称量试剂R1的各组分，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质；
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在聚苯乙烯胶乳微球中加入胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：在步骤S3中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入规定量的表面活性剂、防腐剂、稳定剂、缓冲液，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S5：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S6：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S7：包装，成品检验，入库存储。
进一步地，在步骤S3中，向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min。
进一步地，步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
在步骤S3中未偶联的游离抗体不需要通过高速离心机多次离心去除，仅需通过特殊的封闭处理即可实现试剂的稳定，大大简化了操作步骤，减小了包被的批间差，提高了包被效率。
本发明的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，即开即用，无需配制，检测灵敏度高，测量重复性好，并且长期存放的稳定性较好。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步描写和阐述。
图1是本发明首选实施方式的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的标准曲线；
图2是本发明首选实施方式的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的测定值与理论值的线性范围示意图；
图3是本发明首选实施方式的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的测定值与理论值的样本相关性示意图。
具体实施方式
下面将结合附图、通过对本发明的优选实施方式的描述，更加清楚、完整地阐述本发明的技术方案。
实施例1：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产，包括以下步骤：
S1：对试剂R1各组分进行称量，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质，其中各组分的含量如下：
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在10g聚苯乙烯胶乳微球中加入6ml胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，制得2mg/ml的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，控制胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与聚苯乙烯胶乳微球质量比为0.03:1，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min；
S5：在步骤S4中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入体积分数为2.5ml/L的胆甾醇异硬脂酸酯、体积分数为2.5ml/L的芥酸酰胺、1g/L的叠氮化钠、40g/L的海藻糖、3.0285g/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液至终体积为1L，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S6：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S7：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S8：包装，成品检验，入库存储。
其中步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
实施例2：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产，包括以下步骤：
S1：对试剂R1各组分进行称量，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质，其中各组分的含量如下：
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在0.33g聚苯乙烯胶乳微球中加入0.2ml胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，制得2mg/ml的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，控制胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与聚苯乙烯胶乳微球质量比为0.03:1，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min；
S5：在步骤S4中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入体积分数为1ml/L的胆甾醇异硬脂酸酯、体积分数为1ml/L的芥酸酰胺、0.1g/L的叠氮化钠、10g/L的海藻糖、1g/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液至终体积为1L，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S6：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S7：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S8：包装，成品检验，入库存储。
其中步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
实施例3：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产，包括以下步骤：
S1：对试剂R1各组分进行称量，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质，其中各组分的含量如下：
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在33g聚苯乙烯胶乳微球中加入20ml胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，制得2mg/ml的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，控制胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与聚苯乙烯胶乳微球质量比为0.03:1，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min；
S5：在步骤S4中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入体积分数为5ml/L的胆甾醇异硬脂酸酯、体积分数为5ml/L的芥酸酰胺、10g/L的叠氮化钠、100g/L的海藻糖、10g/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液至终体积为1L，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S6：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S7：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S8：包装，成品检验，入库存储。
其中步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
实施例4：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产，包括以下步骤：
S1：对试剂R1各组分进行称量，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质，其中各组分的含量如下：
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在33g聚苯乙烯胶乳微球中加入20ml胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，制得2mg/ml的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，控制胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与聚苯乙烯胶乳微球质量比为0.03:1，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min；
S5：在步骤S4中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入体积分数为5ml/L的胆甾醇异硬脂酸酯、体积分数为5ml/L的芥酸酰胺、10g/L的叠氮化钠、100/L的海藻糖、10g/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液至终体积为1L，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S6：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S7：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S8：包装，成品检验，入库存储。
其中步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
实施例5：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产，包括以下步骤：
S1：对试剂R1各组分进行称量，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质，其中各组分的含量如下：
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在0.33g聚苯乙烯胶乳微球中加入0.2ml胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，制得2mg/ml的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，控制胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与聚苯乙烯胶乳微球质量比为0.03:1，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min；
S5：在步骤S4中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入体积分数为1ml/L的胆甾醇异硬脂酸酯、体积分数为1ml/L的芥酸酰胺、0.1g/L的叠氮化钠、10g/L的海藻糖、1g/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液至终体积为1L，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S6：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S7：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S8：包装，成品检验，入库存储。
其中步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
对比例1：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，与实施例1的区别在于，步骤S5中，未添加胆甾醇异硬脂酸酯和芥酸酰胺。
对比例2：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，与实施例1的区别在于，步骤S5中，未添加芥酸酰胺。
对比例3：胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，与实施例1的区别在于，步骤S5中，未添加胆甾醇异硬脂酸酯。
本发明的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒适用且不限于日立7060、日立7080、日立7170、日立7600、日立7180、东芝400、岛津8000、罗氏P800、雅培2000、贝克曼CX、贝克曼DX、贝克曼LX、奥林巴斯400、奥林巴斯640、奥林巴斯2700、奥林巴斯5400等全自动生化分析仪。
本发明的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒检测脂肪酶活性的测定方法如下：
全自动生化分析仪的波长设置为700nm，采用两点终点法。加入样本、校准液或质控品6μl，之后再加162μl试剂R1混匀，于37℃孵育3min～5min后加入30μl的试剂R2混匀，于37℃孵育约18s，读取吸光度值A1，继续孵育约4.7min，读取吸光度值A2，计算吸光度之差ΔA＝A2-A1。
使用多点定标法，以样条函数作为计算模式绘制标准曲线，样品中的PGⅡ含量根据其吸光度值在标准曲线上算出。
本发明的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒性能测试如下：
试验中采用的校准液和质控品均采用朗道公司的产品，校准方法采用多点定标曲线折线处理，定标数据如表1。校准曲线见图1。
表1：定标数据(单位ng/ml)：
浓度 0 6.3 12.5 25 50 100
OD1 39 258 562 1326 3057 5409
OD2 43 253 568 1354 3049 5493
OD均值 41 255.5 565 1340 3053 5451
试验1：线性范围
取临床高值标本，高值标本按0、1/8、1/4、2/4、3/4、1的稀释比例稀释，每个样品测3次，取平均值数据记录如表2。根据图2可见，本发明试剂盒的最高检测范围可达80ng/ml，判定依据R2≥0.990。
表2：线性范围验证结果(单位：ng/ml)：
稀释比例 PGⅡ理论值 PGⅡ实测均值
0 0 1.1
1/8 10 11.2
1/4 20 19.5
1/2 40 38.9
3/4 60 62.3
1 80 81.3
试验2：精密度试验
1、批内精密度
取一个低值的PGⅡ样品和一个高值PGⅡ样品各20次，测定本发明试剂盒的批内精密度，试验结果见表3。
表3：批内精密度试验结果(单位：ng/ml)
测定次数 样品1 样品2
1 24.1 58.6
2 23.5 55.7
3 24.3 59.3
4 22.8 56.2
5 23.6 57.2
6 23.5 56.9
7 24.6 57.6
8 24.3 57.9
9 22.9 58.2
10 23.2 59.3
11 23.5 54.9
12 25.1 56.8
13 22.9 58.4
14 23.1 58.9
15 25.3 59.2
16 23.7 57.6
17 24.8 56.2
18 24.0 58.7
19 23.9 58.0
20 23.4 56.8
平均值 23.83 57.62
SD 0.7312 1.2614
CV％ 3.07％ 2.19％
2、批间精密度
使用实施例1、实施例2和实施例3制得的胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒分别测定同一人的血清样品20次，数据记录如表4。
表4：批间精密度试验结果(单位：ng/ml)
试验3：稳定性试验
1、开瓶稳定性
将本发明试剂盒试剂开口放置2-8℃冰箱内，取2只高低值标本，分装放置-20℃保存，每10天取高低值各1只检测3次，取平均值记录如表5。
表5：开瓶稳定性试验结果(单位：ng/ml)
2、效期稳定性
将本发明试剂盒放置2-8℃，取2只高低值标本，分装放置-20℃保存，每3个月取高低值各1只检测3次，取平均值记录如表6。
表6：效期稳定性试验结果(单位：ng/ml)
试验4：样品相关性试验
取40例标本，标本浓度范围分布为低、中、高全覆盖，检测三次取平均值，记录如表7。
表7：样品相关性试验结果(单位：ng/ml)
综上所述，本发明的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，即开即用，无需配制，测量重复性好，检测灵敏度高，并且长期存放的稳定性较好并且长期存放的稳定性较好。
上述具体实施方式仅仅对本发明的优选实施方式进行描述，而并非对本发明的保护范围进行限定。在不脱离本发明设计构思和精神范畴的前提下，本领域的普通技术人员根据本发明所提供的文字描述、附图对本发明的技术方案所作出的各种变形、替代和改进，均应属于本发明的保护范畴。本发明的保护范围由权利要求确定。

Claims (10)

1.一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其中：
试剂R1包括如下成分：
试剂R2包括如下成分：
2.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，
试剂R1包括如下成分：
试剂R2包括如下成分：
3.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，在试剂R2中，所述胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与羧基胶乳微球偶联，所述胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体与羧基胶乳微球的质量比为0.03:1，所述羧基胶乳微球的粒径为20nm～500nm。
4.如权利要求3所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，所述羧基胶乳微球的粒径为220nm。
5.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，所述胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体采用抗人类胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)(小鼠)单克隆抗体。
6.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，在试剂R2中，所述表面活性剂包括胆甾醇异硬脂酸酯、芥酸酰胺。
7.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1与试剂R2的体积比为27:5。
8.一种用于生产权利要求1-7任意项所述胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配制试剂R1，精确称量试剂R1的各组分，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质；
S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在聚苯乙烯胶乳微球中加入胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；
S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体，将胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；
S4：在步骤S3中制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入规定量的表面活性剂、防腐剂、稳定剂、缓冲液，混匀搅拌2h后制得试剂R2；
S5：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；
S6：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；
S7：包装，成品检验，入库存储。
9.如权利要求9所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产工艺，其特征在于，在步骤S3中，向制得的偶联胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min。
10.如权利要求9所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)检测试剂盒的生产工艺，其特征在于，所述步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109975545A (zh) * 2019-03-22 2019-07-05 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种高准确性胃蛋白酶原ⅱ检测试剂盒
CN112229995A (zh) * 2020-09-30 2021-01-15 北京安图生物工程有限公司 胃蛋白酶原pgi/ii复合校准品的稀释液及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104111335A (zh) * 2013-11-13 2014-10-22 唐勇 胃蛋白酶原i／ii胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒
CN105911279A (zh) * 2016-05-26 2016-08-31 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定胃蛋白酶原ⅱ的试剂盒及其制备方法
CN105934439A (zh) * 2013-11-27 2016-09-07 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 从生物流体中分离微小rna
CN108982850A (zh) * 2018-06-28 2018-12-11 广州市伊川生物科技有限公司 一种用于检测胃蛋白酶原ⅱ的试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104111335A (zh) * 2013-11-13 2014-10-22 唐勇 胃蛋白酶原i／ii胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒
CN105934439A (zh) * 2013-11-27 2016-09-07 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 从生物流体中分离微小rna
CN105911279A (zh) * 2016-05-26 2016-08-31 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定胃蛋白酶原ⅱ的试剂盒及其制备方法
CN108982850A (zh) * 2018-06-28 2018-12-11 广州市伊川生物科技有限公司 一种用于检测胃蛋白酶原ⅱ的试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙酣经 黄澄华 主编: "《化工新材料产品及应用手册》", 31 January 2002, 中国石化出版社 *
陈兴荣 主编: "《’95高新技术产品精选》", 31 May 1995, 中国环境科学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109975545A (zh) * 2019-03-22 2019-07-05 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种高准确性胃蛋白酶原ⅱ检测试剂盒
CN112229995A (zh) * 2020-09-30 2021-01-15 北京安图生物工程有限公司 胃蛋白酶原pgi/ii复合校准品的稀释液及其应用

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