CN112229995A - 胃蛋白酶原pgi/ii复合校准品的稀释液及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及免疫诊断领域，特别涉及胃蛋白酶原PGI/II复合校准品的稀释液及其应用。本发明PGI/II复合校准品稀释液中的BSA、小牛血清、ADP有很强的蛋白保护作用，从而最大程度地提高了PGI/II校准品的稳定性，解决了目前存在的PGI/II复合校准品不稳定的问题，提高临床PGI/II检测的准确性，为临床相关疾病的诊断提供更准确的依据。
Description
技术领域
本发明涉及免疫诊断领域，特别涉及胃蛋白酶原PGI/II复合校准品的稀释液及其应用。
背景技术
胃蛋白酶原(PG)对胃部疾病的发展历程，一般可表述为：浅表性胃炎——胃粘膜糜烂溃疡——萎缩性胃炎——胃癌，且对其他疾病具有良好的诊断和筛选作用。
胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体，根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。
通常情况下，约有1％的PG透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的PG在血液中非常稳定。血清PGI和PGII反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。当胃黏膜发生病理变化时，血清PG含量也随之改变。因此，监测血清中PG的浓度可以作为监测胃黏膜状态的手段。
血清胃蛋白酶原水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能：PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低；PGII与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，联合测定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。
胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ检测试剂盒用于检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的含量，具有简便、快速的优势，避免了X-射线对人体的侵害和胃镜的不便。通过其血清测量值的不同，在各胃部疾病中均有不同程度的改变，为临床提供可靠的诊断价值。
目前市面上大多数公司试剂盒中PGI\PGII校准品为单独存在，增加了临床操作的不便性，因此，有必要开发一种同时具有高稳定性和特异性的胃蛋白酶原I/II复合校准品。
发明内容
针对现有胃蛋白酶原检测校准品在测试过程中存在的上述缺陷，本发明提供一种准确性好、特异性高、稳定性好操作简便适用于临床全自动或半自动生化分析的胃蛋白酶PGI/PGII复合校准品稀释液。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了用于PGI/II复合校准品的稀释液，包括如下组分：
所述生物缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷、MES、磷酸盐、MOPS、DIPSO中的一种或两者以上的混合物；
所述蛋白保护剂包括BSA、小牛血清、Casein、干酪素、ADP的一种或两者以上的混合物；
所述防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、PC300中的一种或两者以上的混合物。
在本发明的一些具体实施方案中，在缓冲液中加入终浓度为0.005～0.2g/ml的BSA、终浓度5～15％的小牛血清、终浓度0.0005～0.01g/ml防腐剂和终浓度0.001～0.05g/ml的ADP制得；
所述缓冲液包括以下任意一种或多种的组合：
100ml中包含MOPS0.4185g，pH值为6.5的MOPS缓冲液；
100ml中包含磷酸二氢钠0.0624g、磷酸氢二钠0.716g、氯化钠0.8g，pH值为7.4的磷酸缓冲液；
100ml中包含TAPS碱0.4866g，pH值为8.4的TAPS缓冲液。
在本发明的一些具体实施方案中，其制备方法为：取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，溶解后，调节pH值为6.5，1gBSA，1g蛋白保护剂ADP定容至100ml。
基于上述研究，本发明还提供了所述的稀释液在制备胃蛋白酶原PGI/II复合校准品中的应用。
本发明还提供了所述的稀释液在制备胃蛋白酶原PGI/II检测试剂或检测试剂盒中的应用。
具体的，本发明提供了胃蛋白酶原PGI/II复合校准品，包括所述的稀释液以及PGI/PGII抗原。
在本发明的一些具体实施方案中，所述胃蛋白酶原PGI/II复合校准品所述包括如下组分：
在本发明的一些具体实施方案中，所述胃蛋白酶原PGI/II复合校准品包括如下组分：
本发明还提供了所述的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品在制备胃蛋白酶原PGI/II检测试剂盒中的应用。
本发明还提供了胃蛋白酶原PGI/II检测试剂盒，包括所述的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品以及可接受的助剂或载体。
ADP是广谱酶及抗体稳定剂，还可提高酶活力和杀菌的独特性能，本发明中尝试将ADP与其他蛋白保护剂搭配，用于PGI/PGII复合校准品稳定性的改善，取得了较好的效果，且能对提高其他相似蛋白稳定性起到指引和借鉴作用。
本发明涉及一种胃蛋白酶原I/II复合校准品稀释液，其中复合校准品中包含生物缓冲剂、蛋白质保护剂、防腐剂、PGI/PGII抗原和水。按照下列配方配制最佳稀释液：称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1％BSA，1％蛋白保护剂ADP定容至100ml。本发明提供的胃蛋白酶原I/II复合校准品稀释液，添加小牛血清后，使校准品稀释液基质与血清基质尽量接近，保证胃蛋白酶原I/II的生物学状态，添加蛋白保护剂ADP后，胃蛋白酶原I/II抗原被保护，使得校准品的稳定性得到较大改善。
本发明填补了胃蛋白酶原I/II复合校准品领域的空白，最大程度地提高了PGI/II校准品的稳定性，解决了目前存在的PGI/II校准品不稳定的问题，提高临床PGI/II检测的准确性，为临床相关疾病的诊断提供更准确的依据，且本发明也对蛋白保护剂用于其他相似校准品开发起到指导作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示采用本发明稀释液配制的校准品制作的标准曲线；
图2示PGI临床样本测定结果；
图3示PGII临床样本测定结果；
图4示本发明提供的PGI/II复合校准品开封稳定性曲线图；其中纵坐标表示各浓度点的降幅，横坐标对应各浓度点S1、S2、S3、S4、S5；两种不同线型的线条代表测量的时间点第0天、第28天；
图5示本发明提供的PGI/II复合校准品实时稳定性曲线图；其中纵坐标表示各浓度点的降幅，横坐标对应各浓度点S1、S2、S3、S4、S5；三种不同线型的线条代表测量的时间点第0个月、第7个月、第12个月。
具体实施方式
本发明公开了胃蛋白酶原PGI/II复合校准品的稀释液及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明涉及一种胃蛋白酶原I/II复合校准品稀释液，其中复合校准品中包含生物缓冲剂、蛋白质保护剂、防腐剂、PGI/PGII抗原和水。
所述胃蛋白酶原I/II校准品的组成成分及各成分的浓度如下：
优选地，试剂中生物缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷、MES、磷酸盐、MOPS、DIPSO中的一种或几种；蛋白保护剂为BSA、小牛血清、Casein、干酪素、ADP的一种或几种；防腐剂为叠氮化钠、硫柳汞、PC300中的一种或几种。
优选地，每1L试剂复合校准品中各组分的用量为：生物缓冲剂5mmol～50mmol，蛋白保护剂1～200g，防腐剂0.5～10g。
本发明提供一种PGI/II复合校准品稀释液，能够显著提高PGI/II校准品的稳定性，从而提高临床检测PGI/II的准确性，有利于相关疾病的准确诊断，是在缓冲液中加入BSA、小牛血清、蛋白保护剂配制而得。
牛血清白蛋白(BSA)，又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，在生物化学与遗传工程等研究中广泛用作生物大分子的稳定剂、模型抗原以及半抗原的载体，在一些实施例中，BSA在稀释液中的浓度1％时，能够较大程度地提高PGI/II复合校准品的稳定性。
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，为蛋白提供一种稳定的微环境。加入3～20％小牛血清的基质液，可以避免基质效应，从而间接起到增加稳定性的作用。在一些实施例中，稀释液中加入10％的小牛血清能够最大程度地提高PGI/II复合校准品的稳定性。
采用这些实施例所提供的稀释液配制的PGI/II复合校准品稀释液制作标准曲线，相关系数r＝0.97以上，校准品PGI在0-200ng/ml、PGII在0-100ng/ml之间线性良好。
综上所述，本发明PGI/II复合校准品稀释液中的BSA、小牛血清有很强的蛋白保护作用，从而最大程度地提高了PGI/II校准品的稳定性，解决了目前存在的PGI/II复合校准品不稳定的问题，提高临床PGI/II检测的准确性，为临床相关疾病的诊断提供更准确的依据。
本发明提供的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品的稀释液及其应用中，所用原料及试剂均可由市场购得。
本实施例所用到的生物化学试剂均为本领域常规试剂，可按照本领域常规方法配制或商购获得，规格为实验室纯级即可。
测试条件与方法：
仪器：东芝120全自动生化分析仪
参数：
表1
| 主波长 | 660nm | 样品(S) | 5μL |
| 副波长 | / | 试剂1(R1) | 150μL |
| 反应温度 | 37℃ | 试剂2(R2) | 30μL |
| 反应方向 | 升反应 | 反应类型 | 终点法 |
操作步骤：
表2
统计学方法：
所有的统计结果由SPSS18.0计算得到，计量资料数据以x±s表示组间差异进行独立样本t检验，P＜0.05认为具有统计学差异。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：PGI/II校准品稀释液的pH值选择
1、不同缓冲体系的PGI/II校准品稀释液的配制
(1)100mlPGI/II校准品缓冲液(MOPS)
称取MOPS0.4185g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，定容至100ml。
(2)100mlPGI/II校准品缓冲液(PBS)
称取磷酸二氢钠(NaH2PO4)0.0624g、磷酸氢二钠(Na2HPO4)0.716g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值7.4，定容至100ml。
(3)100mlPGI/II校准品缓冲液(TAPS)
称取TAPS0.4866g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值8.4，定容至100ml。
2、PGI/II校准品的稳定性试验
用步骤1配制的三种稀释液分别制备200ng/ml的PGI、100ng/ml的PGII抗原溶液，分别于37℃恒温培养箱中放置9天、7天、5天、3天和1天，以2-8℃条件做对照，进行下列试验。选取PGI/II测定试剂盒(胶乳免疫比浊分析法)，用东芝120全自动生化仪测试不同校准品稀释液的pH值对PGI/II校准品稳定性的影响。
3、PGI/II校准品在不同pH值条件下的稳定性分析
本试验配制了不同缓冲体系，由此对pH6.5～8.4条件下PGI/II项目的稳定性进行研究。用pH6.5的MOPS体系、pH7.4的磷酸盐弱碱体系、pH8.4的TAPS碱性体系这三种缓冲液配制校准品，分别放在37℃恒温培养箱中，进行稳定性试验。如表3～5，P1点为PGI200ng/ml校准品，P2点为PGII100ng/ml校准品。验证在不同缓冲体系之下P点测值变化，变化越小表明校准品越稳定。结果表明，在pH6.5的弱酸条件下，P1、P2点降幅最低，校准品稳定性较高。
所有的统计结果由SPSS18.0计算得到，组间差异进行独立样本t检验，P＜0.05认为具有统计学差异。
表3 MOPS缓冲液
| 4℃ | 1D | 3D | 5D | 7D | 9D | |
| P1 | 199.89 | 197.42 | 193.18 | 190.11 | 187.45 | 180.33 |
| P1测值偏差 | -1.24％ | -3.36％ | -4.89％ | -6.22％ | -9.79％ | |
| P2 | 100.13 | 97.73 | 94.35 | 92.41 | 90.11 | 86.98 |
| P2测值偏差 | -2.40％ | -5.77％ | -7.71％ | -10.01％ | -13.13％ |
表4 PBS缓冲液
| 4℃ | 1D | 3D | 5D | 7D | 9D | |
| P1 | 199.89 | 190.93 | 183.62 | 177.47 | 172.68 | 166.37 |
| P1测值偏差 | -4.48％ | -8.14％ | -11.22％ | -13.61％ | -16.77％ | |
| P2 | 100.13 | 91.68 | 91.27 | 85.43 | 83.27 | 80.33 |
| P2测值偏差 | -8.44％ | -8.85％ | -14.68％ | -16.84％ | -19.77％ |
表5 TAPS缓冲液
| 4℃ | 1D | 3D | 5D | 7D | 9D | |
| P1 | 199.89 | 193.27 | 190.66 | 185.71 | 180.43 | 174.78 |
| P1测值偏差 | -3.31％ | -4.62％ | -7.09％ | -9.74％ | -12.56％ | |
| P2 | 100.13 | 95.48 | 93.38 | 90.62 | 87.61 | 84.23 |
| P2测值偏差 | -4.64％ | -6.74％ | -9.50％ | -12.50％ | -15.88％ |
实施例2：PGI/II校准品稀释液的保护剂选择
1、含有不同保护剂的PGI/II校准品稀释液的配制
(1)100mlPGI/II校准品缓冲液(保护剂为BSA)
称取MOPS0.4185g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gBSA，定容至100ml。
(2)100mlPGI/II校准品缓冲液(保护剂为Casein)
称取MOPS0.4185g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gCasein，定容至100ml。
(3)100mlPGI/II校准品缓冲液(保护剂为ADP)
称取MOPS0.4185g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gADP，定容至100ml。
2、PGI/II校准品的稳定性试验
用步骤1配制的三种稀释液分别制备200ng/ml的PGI、100ng/ml的PGII抗原溶液，分别于37℃恒温培养箱中放置9天、7天、5天、3天和1天，以2-8℃条件做对照，进行下列试验。
3、PGI/II校准品在不同保护剂下的稳定性分析
本试验在pH6.5条件下采用了不同的蛋白保护剂，1％BSA，1％Casein，1％ADP分别配制成校准品稀释液，用这三种校准品稀释液配制校准品，进行稳定性试验。如表6～8，P1点为PGI200ng/ml校准品，P2点为PGII100ng/ml校准品。验证在不同保护剂之下P点测值变化，变化越小表明校准品越稳定。结果表明，添加1％ADP的校准品缓冲液的P点降幅最低，稳定性最好。
表6 BSA保护剂
| 4℃ | 1D | 3D | 5D | 7D | 9D | |
| P1 | 198.33 | 199.32 | 195.71 | 190.52 | 183.71 | 182.43 |
| P1测值偏差 | 0.50％ | -1.32％ | -3.94％ | -7.37％ | -8.02％ | |
| P2 | 101.45 | 97.45 | 93.28 | 91.11 | 88.63 | 88.90 |
| P2测值偏差 | -2.68％ | -8.05％ | -10.19％ | -12.64％ | -12.37％ |
表7 Casein保护剂
| 4℃ | 1D | 3D | 5D | 7D | 9D | |
| P1 | 198.33 | 197.58 | 190.67 | 188.32 | 187.7 | 181.69 |
| P1测值偏差 | -0.38％ | -3.86％ | -5.05％ | -5.36％ | -8.39％ | |
| P2 | 101.45 | 98.46 | 94.99 | 92.69 | 89.37 | 87.43 |
| P2测值偏差 | -1.67％ | -6.37％ | -8.63％ | -11.91％ | -13.82％ |
表8 ADP保护剂
| 4℃ | 1D | 3D | 5D | 7D | 9D | |
| P1 | 198.33 | 197.98 | 194.84 | 192.69 | 188.32 | 183.17 |
| P1测值偏差 | -0.18％ | -1.76％ | -2.84％ | -5.05％ | -7.64％ | |
| P2 | 101.45 | 98.44 | 94.39 | 93.21 | 90.32 | 89.67 |
| P2测值偏差 | -1.69％ | -6.96％ | -8.12％ | -10.97％ | -11.61％ |
实施例3：PGI/II校准品稀释液中各成分最适浓度的筛选
1、含不同浓度小牛血清的PGI/II校准品稀释液的配制
(1)100mlPGI/II校准品缓冲液(未加小牛血清)
称取MOPS0.4185g、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gADP，定容至100ml。
(2)100mlPGI/II校准品缓冲液(10％小牛血清)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gADP，定容至100ml。
(3)100mlPGI/II校准品缓冲液(20％小牛血清)
称取MOPS0.4185g、20ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gADP，定容至100ml。
(4)100mlPGI/II校准品缓冲液(30％小牛血清)
称取MOPS0.4185g、30ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1.0gADP，定容至100ml。
2、含不同浓度ADP保护剂的PGI/II校准品稀释液的配制
(1)100mlPGI/II校准品缓冲液(不含蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，定容至100ml。
(2)100mlPGI/II校准品缓冲液(1.0％蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1g蛋白保护剂ADP，定容至100ml。
(3)100mlPGI/II校准品缓冲液(2.0％蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，2g蛋白保护剂ADP，定容至100ml。
(4)100mlPGI/II校准品缓冲液(3.0％蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，3g蛋白保护剂ADP，定容至100ml。
3、含不同蛋白保护剂复配的PGI/II校准品稀释液的配制
(1)100mlPGI/II校准品缓冲液(1％BSA+1％Casein)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1gBSA，1gCasein，定容至100ml。
(2)100mlPGI/II校准品缓冲液(1％BSA+1％蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1gBSA，1g蛋白保护剂ADP，定容至100ml。
(3)100mlPGI/II校准品缓冲液(1％Casein+1％蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1gCasein，1g蛋白保护剂ADP，定容至100ml。
(4)100mlPGI/II校准品缓冲液(1％BSA+1％Casein+1％蛋白保护剂ADP)
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1gBSA，1gCasein，1g蛋白保护剂ADP，定容至100ml。
4、PGI/II校准品的稳定性试验
用步骤1-3配制的12种稀释液分别制备200ng/ml的PGI、100ng/ml的PGII抗原溶液，分别于37℃恒温培养箱中放置9天、7天、5天、2天、和1天，以2-8℃条件做对照进行测试，测试方法同实施例1。
5、不同浓度的稀释液成分对PGI/II校准品稳定性的影响
(1)通过比较不同浓度小牛血清(0ml、10ml、20ml、30ml)条件下校准品的稳定性，结果表明，在校准品缓冲液中加入10ml小牛血清，校准品的稳定性最好。
表9小牛血清对校准品稳定性的影响
(2)通过比较不同浓度蛋白保护剂ADP(0％、1.0％、2.0％、3.0％)条件下校准品的稳定性，结果表明，在校准品缓冲液中加入2％蛋白保护剂ADP，校准品的稳定性最好。
表10蛋白保护剂对校准品稳定性的影响
(3)通过比较不同浓度蛋白保护剂复配(1％BSA+1％Casein、1％BSA+1％蛋白保护剂、1％Casein+1％蛋白保护剂ADP、1％BSA+1％Casein+1％蛋白保护剂ADP)条件下校准品的稳定性，结果表明，在校准品缓冲液中加入1％BSA+1％蛋白保护剂ADP，校准品的稳定性最好。
表11蛋白保护剂复配对校准品稳定性的影响
实施例4：PGI/II最适校准品稀释液重复验证
1、初始PGI/II校准品稀释液、优化后PGI/II校准品稀释液的配制
(1)100mlPGI/II校准品初始缓冲液(MOPS)
称取MOPS0.4185g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，定容至100ml。
(2)100ml优化后PGI/II校准品稀释液(MOPS)
称取MOPS0.4185g、小牛血清10ml、Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1gBSA，1g蛋白保护剂定容至100ml。
2、PGI/II校准品的稳定性试验
用步骤1配制的两种稀释液分别制备200ng/ml的PGI、100ng/ml的PGII抗原溶液，分别于37℃恒温培养箱中放置9天、7天、5天、3天和1天，以2-8℃条件做对照，进行下列试验。
3、PGI/II校准品的稳定性分析
本试验在pH6.5条件下，比较了添加蛋白保护剂(1％蛋白保护剂ADP、1％BSA)与不添加蛋白保护剂的校准品稳定性。如表12，P1点为PGI200ng/ml校准品，P2点为PGII100ng/ml校准品。
表12 PGI/II最适校准品稀释液重复验证
验证在不同保护剂之下P点测值变化，用SPSS分析两组数据，0.01≦P<0.05，优化前后稳定性存在显著差异，即添加蛋白保护剂(1％蛋白保护剂ADP、1％BSA)后校准品稳定性明显高于不添加蛋白保护剂校准品稳定性。
实施例5：PGI/II校准品临床检测应用
收集80例临床样本，选用北京利德曼PGI/II体外诊断试剂盒(胶乳免疫比浊)(注册号京械注准20172400148)进行方法学比较。
测定步骤：
(1)按照下列配方配制最佳稀释液：
称取MOPS0.4185g、10ml小牛血清(根据密度换算成10.5g)，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，完全溶解后，调节pH值6.5，1gBSA，1g蛋白保护剂ADP定容至100ml。
(2)用上述步骤(1)得到的稀释液配制200ng/ml(100ng/ml)、140ng/ml(70ng/ml)、70ng/ml(35ng/ml)、35ng/ml(17.5ng/ml)、17.5ng/ml(8.75ng/ml)的PGI(PGII)复合校准品作标准曲线；
(3)测定方法：
用东芝120全自动生化仪测试80例样本，比较本研究所用校准品。
测定结果：
采用本发明稀释液配制的校准品制作的标准曲线(logX-logY)如图1所示，相关系数r＝0.99，表明PGI校准品在0-200ng/ml、PGII校准品在0-100ng/ml之间线性良好。
将本发明稀释液配制的校准品的测定结果与利德曼PGI/PGII体外诊断试剂盒(胶乳免疫比浊)进行方法学比较，结果如图2、图3所示，相关系数r＝0.97，表明本发明稀释液配制的校准品的测定结果与北京利德曼PGI/PGII试剂盒测定结果高度相关，一致性较高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.用于PGI/II复合校准品的稀释液，其特征在于，100ml所述稀释液中包括如下组分：
所述生物缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷、MES、磷酸盐、MOPS、DIPSO中的一种或两者以上的混合物；
所述蛋白保护剂包括BSA、小牛血清、Casein、干酪素、ADP的一种或两者以上的混合物；
所述防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、PC300中的一种或两者以上的混合物。
2.如权利要求1所述的稀释液，其特征在于，在缓冲液中加入终浓度为0.001～0.12g/ml的BSA、终浓度5～15％的小牛血清、终浓度0.0005～0.01g/ml防腐剂和终浓度0.001～0.05g/ml的ADP制得；
所述缓冲液包括以下任意一种或多种的组合：
100ml中包含MOPS 0.4185g，pH值为6.5的MOPS缓冲液；
100ml中包含磷酸二氢钠0.0624g、磷酸氢二钠0.716g、氯化钠0.8g，pH值为7.4的磷酸缓冲液；
100ml中包含TAPS碱0.4866g，pH值为8.4的TAPS缓冲液。
3.如权利要求1或2所述的稀释液，其特征在于，其制备方法为：取MOPS 0.4185g、10ml小牛血清，Proclin3000.1g，加入60ml超纯水，溶解后，调节pH值为6.5，1gBSA，1g蛋白保护剂ADP定容至100ml。
4.如权利要求1至3任一项所述的稀释液在制备胃蛋白酶原PGI/II复合校准品中的应用。
5.如权利要求1至3任一项所述的稀释液在制备胃蛋白酶原PGI/II检测试剂或检测试剂盒中的应用。
6.胃蛋白酶原PGI/II复合校准品，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的稀释液以及PGI/PGII抗原。
7.如权利要求6所述的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品，其特征在于，包括如下组分：
8.如权利要求6或7所述的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品，其特征在于，包括如下组分：
9.如权利要求6至8任一项所述的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品在制备胃蛋白酶原PGI/II检测试剂盒中的应用。
10.胃蛋白酶原PGI/II检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求6至8任一项所述的胃蛋白酶原PGI/II复合校准品以及可接受的助剂或载体。
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