CN105911279A - 一种测定胃蛋白酶原ⅱ的试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分：试剂R1：缓冲液、无机盐、加速剂、防腐剂，试剂R2：缓冲液、稳定剂、防腐剂、胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度。本发明具有准确度高等优点。

Description

一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒及其制备方法。
背景技术
胃蛋白酶原由泌酸腺的主细胞合成，在胃腔内经盐酸或已有活性的胃蛋白酶的作用下变成胃蛋白酶，胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体，根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原Ⅰ，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌，组分6、7被称为胃蛋白酶原Ⅱ，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原Ⅱ，因此血清中胃蛋白酶原的含量可以反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映了胃黏膜不同部位的分泌功能，当胃黏膜发生病理变化时，血清胃蛋白酶原含量也随之改变，被称为胃黏膜的“血清学活检”。
其中，胃是胃蛋白酶原Ⅱ的唯一来源，因此胃蛋白酶原Ⅱ可以反映胃黏膜状态和细胞数量的变化，胃蛋白酶原Ⅱ与胃底黏膜病变的相关性较大，其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关。
目前胃蛋白酶原的检测方法普遍存在操作复杂以及测定准确度低的缺陷，需要进行进一步的改进。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术操作复杂、测定准确度低的缺陷，而提供一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 20~180 mmol/L
无机盐 100~300 mmol/L
加速剂 10~60 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 10~60 mmol/L
稳定剂 15~45 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 5~16 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 100 mmol/L
无机盐 200 mmol/L
加速剂 35 g/L
防腐剂 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 35 mmol/L
稳定剂 30 g/L
防腐剂 1.0 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 10 g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐采用氯化钠、氯化钾、硫酸钾的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-800、聚乙二醇-2000、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-8000中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用叠氮钠。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用蔗糖、吐温-20、吐温-80、牛血清白蛋白中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用叠氮钠。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的制备方法为：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应1小时，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使用超声分散仪进行超声分散，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8 mg/mL抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的MES缓冲液，混合搅拌，室温反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为0.5%-2.0%，最后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度达到20 g/L，在4℃的条件下封闭8-12小时，即可制备得到胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体。
作为优选，本发明还公开了上述测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 20~180 mmol/L
无机盐 100~300 mmol/L
加速剂 10~60 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 10~60 mmol/L
稳定剂 15~45 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 5~16 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度。
作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为5:1。
作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:10到1:50之间。
本发明的检测原理是：本发明利用抗原抗体反应，先加入试剂R1，使血清中的胃蛋白酶原Ⅱ的位点暴漏，当加入胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体，使溶液中的抗原抗体反应形成不溶于溶液的抗原抗体复合物，从而产生一定的浊度，在人血清中胃蛋白酶原Ⅱ含量在一定范围内与形成的浊度成正比，通过测定特定波长的吸光度值，根据校准曲线计算出血清中胃蛋白酶原Ⅱ的含量。
样本中胃蛋白酶原Ⅱ（PG-Ⅱ）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中PG-Ⅱ的浓度。
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明通过在试剂R1和试剂R2中均添加了稳定剂，增加了胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的悬浮稳定性，因此检测的准确性也就大大的提高了，另外操作也比较方便。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
MES缓冲液 100 mmol/L
硫酸钾 200 mmol/L
聚乙二醇-2000 35 g/L
叠氮钠 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 35mmol/L
蔗糖 30 g/L
叠氮钠 1.0 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 10 g/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
Tris缓冲液 180 mmol/L
氯化钠 105 mmol/L
聚乙二醇-4000 20 g/L
叠氮钠 1.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 10 mmol/L
吐温-20 45 g/L
叠氮钠 1.5 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 16 g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的制备：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为4%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在28℃的条件下反应1小时，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使用超声分散仪进行超声分散，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8 mg/mL抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的MES缓冲液，混合搅拌，室温反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为1.0%，最后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度达到20 g/L，在4℃的条件下封闭10小时，即可制备得到胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
MES缓冲液 100 mmol/L
硫酸钾 200 mmol/L
聚乙二醇-2000 35 g/L
叠氮钠 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
MES缓冲液 35 mmol/L
蔗糖 30 g/L
叠氮钠 1.0 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 10 g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长700nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取200μl试剂R1与7μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入40μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1；
(d)根据样本中胃蛋白酶原Ⅱ（PG-Ⅱ）的活性（ng/mL）= CS × （ng/mL）计算出样本中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的制备：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为120nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为4%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在28℃的条件下反应1小时，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使用超声分散仪进行超声分散，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8 mg/mL抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的MES缓冲液，混合搅拌，室温反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度为1.0%，最后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度达到20 g/L，在4℃的条件下封闭10小时，即可制备得到胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体；
2、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 180 mmol/L
氯化钠 105 mmol/L
聚乙二醇-4000 20 g/L
叠氮钠 1.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
Tris缓冲液 10mmol/L
吐温-20 45 g/L
叠氮钠 1.5 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 16 g/L
其溶剂为纯化水；
3、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长700nm；
（c）反应时间 ：10min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d)反应方向：正反应；
4、检测步骤
（a）取200μl试剂R1与7μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入40μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1；
(d)根据样本中胃蛋白酶原Ⅱ（PG-Ⅱ）的活性（ng/mL）=CS×（ng/mL）计算出样本中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度。
表1为实施例1所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒以及实施例2所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度为 10.0 ng/mL，测定结果见表1：
表1
第1次（ng/mL） 第2次（ng/mL） 第3次（ng/mL） 均值（ng/mL） 偏差（%）
实施例1 10.0 10.1 10.5 10.2 2.00
实施例2 10.2 10.2 10.5 10.3 3.00
由表1可知，本发明所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒以及实施例2所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度为40.0 ng/mL，测定结果见表2：
表2
第1次（ng/mL） 第2次（ng/mL） 第3次（ng/mL） 均值（ng/mL） 偏差（%）
实施例1 39.1 42.7 39.9 40.57 1.43
实施例2 41.4 41.5 42.7 41.87 4.68
由表2可知，本发明所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (8)

1.一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 20~180 mmol/L
无机盐 100~300 mmol/L
加速剂 10~60 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 10~60 mmol/L
稳定剂 15~45 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 5~16 g/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
缓冲液 100 mmol/L
无机盐 200 mmol/L
加速剂 35 g/L
防腐剂 1.0 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 35 mmol/L
稳定剂 30 g/L
防腐剂 1.0 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 10 g/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐采用氯化钠、氯化钾、硫酸钾的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-800、聚乙二醇-2000、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-8000中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用叠氮钠。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用蔗糖、吐温-20、吐温-80、牛血清白蛋白中的一种或多种的组合，所述的防腐剂采用叠氮钠。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的制备方法为：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.5mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，在20℃-37℃的条件下反应1小时，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使用超声分散仪进行超声分散，使用离心机，在25000 rpm/min转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散，然后边搅拌边加入等体积的含8 mg/mL抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体的MES缓冲液，混合搅拌，室温反应2小时，使得聚苯乙烯微球最终质量浓度百分比为0.5%-2.0%，最后加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白最终浓度达到20 g/L，在4℃的条件下封闭8-12小时，即可制备得到胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体。
6.根据权利要求1或2所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
缓冲液 20~180 mmol/L
无机盐 100~300 mmol/L
加速剂 10~60 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
缓冲液 10~60 mmol/L
稳定剂 15~45 g/L
防腐剂 0.5~1.5 g/L
胶乳包被抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体 5~16 g/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的胃蛋白酶原Ⅱ的浓度。
7.根据权利要求6所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为5:1。
8.根据权利要求6所述的一种测定胃蛋白酶原Ⅱ的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:10到1:50之间。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108802375A (zh) * 2018-08-06 2018-11-13 滴准生物科技（常州）有限公司 一种抗核抗体谱的检测试剂盒
CN109490533A (zh) * 2018-12-29 2019-03-19 南京澳林生物科技有限公司 一种胃蛋白酶原ⅱ(pgⅱ)检测试剂盒及生产工艺
CN109975545A (zh) * 2019-03-22 2019-07-05 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种高准确性胃蛋白酶原ⅱ检测试剂盒
CN112051401A (zh) * 2020-08-28 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090263915A1 (en) * 2006-07-24 2009-10-22 Sekisui Medical Co., Ltd. Agglutination inhibition assay method and reagent
US20100167310A1 (en) * 2005-12-28 2010-07-01 Mitsuaki Yamamoto Reagent for Measuring Agglutination and Method of Measuring Agglutination
CN102645537A (zh) * 2012-04-26 2012-08-22 北京美康生物技术研究中心 用于诊断胃病或胃癌的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用
CN104111335A (zh) * 2013-11-13 2014-10-22 唐勇 胃蛋白酶原i／ii胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒
CN104655843A (zh) * 2014-05-19 2015-05-27 宁波普瑞柏生物技术有限公司 一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒
CN105067815A (zh) * 2015-09-16 2015-11-18 浙江凯成生物科技有限公司 一种测定人血清中胃蛋白酶原i/ii含量的试剂盒

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100167310A1 (en) * 2005-12-28 2010-07-01 Mitsuaki Yamamoto Reagent for Measuring Agglutination and Method of Measuring Agglutination
US20090263915A1 (en) * 2006-07-24 2009-10-22 Sekisui Medical Co., Ltd. Agglutination inhibition assay method and reagent
CN102645537A (zh) * 2012-04-26 2012-08-22 北京美康生物技术研究中心 用于诊断胃病或胃癌的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用
CN104111335A (zh) * 2013-11-13 2014-10-22 唐勇 胃蛋白酶原i／ii胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒
CN104655843A (zh) * 2014-05-19 2015-05-27 宁波普瑞柏生物技术有限公司 一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒
CN105067815A (zh) * 2015-09-16 2015-11-18 浙江凯成生物科技有限公司 一种测定人血清中胃蛋白酶原i/ii含量的试剂盒

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108802375A (zh) * 2018-08-06 2018-11-13 滴准生物科技（常州）有限公司 一种抗核抗体谱的检测试剂盒
CN109490533A (zh) * 2018-12-29 2019-03-19 南京澳林生物科技有限公司 一种胃蛋白酶原ⅱ(pgⅱ)检测试剂盒及生产工艺
CN109975545A (zh) * 2019-03-22 2019-07-05 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种高准确性胃蛋白酶原ⅱ检测试剂盒
CN112051401A (zh) * 2020-08-28 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原的测定试剂盒

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