CN104655843A - 一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，包括一种胃癌检测方法和检测胃癌的试剂盒。其中所述试剂盒包括一试剂R1和一试剂R2或R3，在体外，将含有PG抗原的受测体血清与所述试剂R1混合，数分钟后加入所述试剂R2或R3，所述试剂R2或R3中包括的胶乳颗粒包被有PG抗体，能够与样本中的PG抗原结合形成不溶性复合体，根据胶乳增强免疫比浊法原理，通过生化分析仪测定的吸光度与校准品进行比较，计算出PG的含量水平，与健康者的血清PG含量水平进行比较，初步判断受测人体的胃部健康状况。试验结果与进口试剂盒A比较有极好的相关性，相关系数≥0.9750，说明本发明提供的试剂盒可用于检测胃癌，检测结果稳定可靠，且可降低使用成本。

Description

一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒

技术领域

本发明涉及一种胃癌检测方法，通过胃蛋白酶原抗原和抗体之间的反应，采用胶乳增强免疫比浊法原理，能够快速准确的定量检测出胃癌，并涉及一种能够将胃蛋白酶抗原和抗体相结合的用于检测胃癌的试剂盒以及相关试剂。 

背景技术

胃是腹腔中容纳食物的器官，主要用于将大块食物研磨成小块，并将食物中的大分子降解为较小的分子，以便于吸收，对于人类而言，胃是非常重要的一个消化器官。 

在现代社会，由于人类不健康的生活方式，对胃的损害极大，又加之保护不够，使得胃癌的发生率极高，严重影响了人们的生活质量，在我国，胃癌是常见的恶性肿瘤之一，其病死率居各种恶性肿瘤之首。造成胃癌的原因很多，例如，遗传和基因的先天性因素，地域环境因素，吸烟、长期食用腌制和熏烤食品等不健康的饮食生活因素，幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori，HP)感染，胃息肉、慢性萎缩性胃炎以及切除部分胃等胃疾病转变为胃癌。其中HP感染与多种胃良、恶性疾病的发生发展密切相关，国际癌症研究中心已将其列为Ⅰ类致癌因子，在我国胃癌高发区成人HP感染导致的胃癌占60％以上。因此，还胃癌患者一个健康的身体是人们的追求。 

随着医学的进步，胃癌的治疗方法很多，包括手术治疗、化疗、放疗、热疗、免疫治疗等，这些治疗方法从一定程度上提高了患者的生存率，延长了患者的生命，但这些治疗方法的前提是必须经过相应的检测确诊为胃癌后进行治疗。目前检测胃癌的常用方法主要包括X线钡餐检查、纤维胃镜检查、上消化道造影检查，其中X线钡餐检查中使用的X射线对人体有侵害，费用较高，对早期胃癌的判断无能为力；胃镜被称为是确诊胃癌的“金标准”，但患者较痛苦，胃镜检查和上消化道造影检查均要求具备先进的设备和专门的操作人员，技术水平要求 较高，费用较贵，因此不能作为普查手段。 

由于胃癌的发生是一个多步骤、多因素进行性发展的过程，早期胃癌缺乏一定的特异性症状与体征，早期很难发现，当出现明显的临床症状再去医院就诊时，病情往往已属中、晚期，使患者失去最佳的治疗时机，并影响预后。因此，早期发现胃癌非常重要，可以在早期就进行针对性地治疗，提高患者的治愈率，并且预后较好。 

胃蛋白酶原(PG)是胃黏膜特异性功能酶——胃蛋白酶的前体，分为PGⅠ和PGⅡ两种亚群，均由胃部相关细胞分泌，通常情况下，约有1％的PG透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的PG在血液中非常稳定。由于胃部的发展历程一般可表述为：浅表性胃炎—胃黏膜糜烂溃疡—萎缩性胃炎—胃癌，而在这个过程中，均伴随着PG含量的变化，血清PG水平可反映不同部位胃黏膜的形态和功能，因此，临床上联合测定PGⅠ值、PGⅡ和PGⅠ/PGⅡ值可以起到胃黏膜“血清学活检”的作用，对监测早期胃癌具有重要的临床意义。 

上世纪80年代日本最早报道建立PGⅠ检测方法，使用最早的方法学主要以放免法和酶免法，后来又有时间分辨荧光免疫分析法。目前囯内外常用的血清PGⅠ检测的方法为放射免疫分析法(RIA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)三种检测方法。RIA虽然敏感性较高，但试剂具有放射性，造成环境污染，且有效期短、不易保存，应用受到一定限制；TRFIA的敏感度最高，但试剂成本亦较高，并且需要昂贵的仪器；ELISA敏感度相对低些，且只能定性或作半定量检测，不能动态观察PGⅠ的变化，这三种方法的操作步骤均为繁琐的手工操作，检测速度较慢。PG作为一种新的肿瘤标志物，对于胃癌的早期诊断和筛选、胃癌术后复发与转移的检测、良恶性溃疡的鉴别、胃酸分泌的评判都有重要的意义，以PG作为肿瘤标志物的方法目前在我国还未普及。因此，急需开发出一种简便、快速、高效、稳定、可靠、对人体和环境友好的检测PG含量的方法，这对大范围内筛查出胃癌阳性患者具有重要意义。 

发明内容

本发明的主要优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，通过PG抗体与PG抗原结合形成不溶性复合体，引起吸光度的变化，通过吸光度的 变化定量的测出PG含量，通过检测出的PGⅠ、PGⅡ和PGⅠ/PGⅡ的值与正常值比较，可反应出胃的病变程度，并基于PG含量来判断胃癌。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，通过配制试剂R1和试剂R2、R3，其中试剂R2中包括包被有PG抗体的胶乳颗粒，与包含PG抗原的样本发生凝集反应，使用生化分析仪进行检测，测出PG的含量，操作简单，检测快速，结果可靠。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，通过全自动生化分析仪，短时间内可完成大批量的检测，适合大范围人群筛查出阳性患者，再经胃镜活检确诊，可大大提高胃部疾病的早期诊断，具有较高的临床意义。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，只需要少量血液就可进行检测，对人体无创伤，对环境友好，对于胃部疾病具有良好的诊断和筛选作用。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，检测费用低，可判断胃部疾病的进展情况，对于胃癌的检测、诊断、治愈以及良好的预后都具有重要临床意义。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂及其试剂盒，对于胃癌普查的初筛、萎缩性胃炎等胃部疾病的检测、HP感染的筛查和HP治疗效果的评价、消化性溃疡复发和治愈的指标判定、胃癌切除后复发的指标判定、个人胃黏膜功能的动态检测具有重要临床意义。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，其中所述检测胃癌的试剂盒为全液体试剂，稳定性好，抗干扰性强。 

本发明的另一优势在于提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，其中所述检测胃癌的试剂盒可适用于各类生化分析仪器，可满足不同用户的不同需求。 

为满足本发明的以上优势以及本发明的其他优势和目的，本发明提供一种胃癌检测方法、试剂以及其试剂盒，包括一种胃癌检测方法和检测胃癌的试剂以及其试剂盒。 

一种胃癌检测方法，根据PG抗体与PG抗原能够特异性结合的原理，结合胃癌患者中的血清PG含量水平与健康者中的血清PG含量水平有差异的现象，可通过检测出的PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ的值，初步判断受测者的胃部健康状 况。 

在体外，将含有PG抗原的受测体血清作为样本，通过试剂R1培养数分钟后，加入试剂R2或R3，试剂R2或R3中的PG抗体能够与样本中的PG抗原结合形成不溶性复合体，通过生化分析仪测定的所述不溶性复合体的吸光度与校准品进行比较，计算出PG的含量水平，与健康者的血清PG含量水平进行比较，基于PG含量来判断胃癌。 

所述试剂R2或R3中包括有能够与样本中的PG抗原结合的PG抗体，其中所述PG抗体包括PGⅠ抗体和PGⅡ抗体。进一步地，所述试剂R2或R3的成分包括胶乳颗粒，其中所述乳胶颗粒包被有所述PG抗体，当所述PG抗原与所述PG抗体结合形成PG抗原—PG抗体不溶性复合体后，根据胶乳增强免疫比浊法原理进行检测。 

一种检测胃癌的试剂盒，包括：一试剂R1和一试剂R2或R3，所述试剂R1和所述试剂R2均为稀释剂，并为PG抗原和PG抗体提供适当的反应环境，以促进反应，其中所述试剂R1包括：(1)质量百分比为0.01％-1.00％的防腐剂：叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类(也称尼泊金酯类，例如，尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯等)、苯甲酸及其盐类(例如苯甲酸钠、苯甲酸钾等)、山梨酸盐类(例如山梨酸钾、山梨酸钙等)、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种；(2)质量百分比为0.01-4.00％的稳定剂：蛋白质(牛血清蛋白或明胶)、无机盐(氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种)、金属络合剂(HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG，含有氨基二乙酸基团的络合剂，选自EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种)、助悬剂(乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种)中的一种或几种；(3)质量百分比为0.01％-2.00％的表面活性剂：非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，优选地，所述表面活性剂为所述非离子型表面活性剂和所述阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自Tween20、Tween80、Emulgen B-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂选自SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种；(4)质量百分比为0.01-5.00％的反应促进剂：聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙 二醇6000、聚乙二醇8000、溴化乙二甲胺、聚凝胺的一种或几种；(5)质量百分比为0.05％-3.00％的电解质：一价金属离子和/或二价金属离子中的一种或几种，优选地，所述电解质选自钠离子和/或镁离子；(6)PH6.5-8.5的10-100mmol/L的缓冲液：甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液，优选地，所述缓冲液采用甘氨酸缓冲液或Tris缓冲液。 

所述试剂R2或R3包括：(1)质量百分比为0.10％-0.60％的包被有PGⅠ抗体的胶乳颗粒，其中所述胶乳颗粒的粒径大小为50-250nm；(2)质量百分比0.01％-1.00％防腐剂：叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类(也称尼泊金酯类，例如，尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯等)、苯甲酸及其盐类(例如苯甲酸钠、苯甲酸钾等)、山梨酸盐类(例如山梨酸钾、山梨酸钙等)、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种；(3)质量百分比为0.05％-12.00％的稳定剂：蛋白质(牛血清蛋白或明胶)、无机盐(氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种)、金属络合剂(HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG，含有氨基二乙酸基团的络合剂，选自EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种)、助悬剂(乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种)中的一种或几种；(4)质量百分比为0.01％-3.00％的表面活性剂：非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，优选地，所述表面活性剂为所述非离子型表面活性剂和所述阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自Tween20、Tween80、Emulgen B-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂选自SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种；(5)质量百分比为0.05％-3.00％的电解质：一价金属离子和/或二价金属离子中的一种或几种，优选地，所述电解质选自钠离子和/或镁离子；(6)PH6.5-8.5的10-100mmol/L的缓冲液：甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液，优选地，所述缓冲液采用甘氨酸或Tris缓冲液。 

将一定量的所述试剂R1加入一定量的样本中，于37℃孵育数分钟后加入一定量的所述试剂R2或R3，使用生化仪进行检测，采用多点定标方法测定。 

本发明的有益效果为：与进口试剂A的相关性r≥0.9750，可替代进口试剂， 进入市场后可降低使用的成本。可直接在全自动生化仪上使用，更为方便、快捷。 

附图说明

图1是本发明提供的一种胃癌检测方法的流程图。 

图2是根据本发明的具体实施例的试验测试结果与进口试剂盒A测试结果的比对图。 

图3所示为线性范围结果。 

具体实施方式

以下描述用于揭露本发明以使本领域技术人员能够实现本发明。以下描述中的优选实施例只作为举例，本领域技术人员可以想到其他显而易见的变型。在以下描述中界定的本发明的基本原理可以应用于其他实施方案、变形方案、改进方案、等同方案以及没有背离本发明的精神和范围的其他技术方案。 

1.胃癌检测方法 

1.1PG与胃癌的关系 

胃蛋白酶原(PG)是胃黏膜特异性功能酶，分为PGⅠ和PGⅡ两种亚群，人的PGⅠ由胃黏膜的胃主细胞及颈黏液细胞合成，PGⅡ不仅由胃主细胞及颈黏液细胞合成，而且可由胃窦黏液细胞及近端十二指肠的Brunner腺等合成，前列腺和胰腺也产生少量PGⅡ。 

血清PG水平可反映不同部位胃黏膜的形态和功能，对于胃癌的早期诊断具有重要意义。胃癌患者血清PGⅠ水平明显下降，表明胃癌患者胃黏膜分泌能力下降，由于80％以上的胃癌伴有萎缩性胃炎，而萎缩性胃炎可导致胃黏膜主细胞丢失，从而影响其分泌功能，而胃癌患者血清PGⅠ水平明显下降与胃癌患者胃黏膜萎缩、肠化从而分泌降低有关。PGⅠ升高者有溃疡可能，血清PGⅠ水平升高者，应注意其是否存在溃疡的可能性，对于临床上无症状溃疡的鉴别具有重要意义。 

一项HP阴性或阳性日本受试者的研究显示，尽管以往研究表明，血清PG Ⅰ的水平和PGⅠ/PGⅡ的比值均与最大胃排出量呈正相关，但这一关系可能在HP阴性或阳性受试者之间存在差异。在HP阳性受试者中，PGⅠ水平和PGⅠ/PG  Ⅱ比值与胃酸分泌量显著相关，其中后者与胃酸分泌量的相关性更强，应用PG Ⅰ/PGⅡ比值临床意义更加显著。在HP阴性受试者中，PGⅠ的水平与胃酸分泌量显著相关，但PGⅠ/PGⅡ比值与胃酸分泌量无相关性。这表明，根据是否感染HP，血清PG水平和胃酸分泌量的关系会有所不同。因此，当把血清PG水平作为检测胃酸分泌的一个简单的指标时，需要考虑到患者是否感染HP。HP感染后可刺激主细胞，通过增加主细胞内钙离子流、cAMP和磷酸肌醇浓度而刺激PG的合成分泌，主要分泌PGⅡ，成功根除HP后可以改善炎细胞浸润，恢复胃分泌功能，因此，通过除菌治疗后的PG变化能够判定HP感染的治疗效果。 

在临床上，测定血清PGⅠ和PGⅡ的水平及PGⅠ/PGⅡ比值有助于十二指肠溃疡、胃溃疡、HP感染及胃癌的鉴别诊断，偏离正常值的PGⅠ和PGⅠ/PG Ⅱ应警惕早期胃癌。由于血清PG的含量直接反映胃黏膜的功能，血清PGⅠ及PGⅠ/PGⅡ值对监测早期胃癌具有重要的临床意义，此外，还可以通过检测PG Ⅰ/PGⅡ值的变化来判断胃癌的治疗情况，PGⅠ/PGⅡ比值升高说明疗效显著。因此，血清PG可作为一种新的肿瘤标志物用于胃癌的早期诊断和筛选。 

1.2检测原理 

本发明根据PG抗体与PG抗原能够结合的原理，在PG抗体过量的情况下，通过乳胶增强免疫比浊法原理定量检测出PG抗原的含量，结合胃癌患者的血清PG含量水平与健康者的血清PG含量水平有差异的现象，通过检测出的PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ的值来判断是否出现胃癌或者胃癌征兆。 

将含有PG抗原的受测体血清作为样本，在体外，通过试剂R1稀释孵育数分钟后，加入包含包被有PG抗体的胶乳颗粒的试剂R2或R3，试剂R2或R3中的PG抗体能够与样本中的PG抗原发生凝集反应，形成不溶性复合体，通过生化分析仪测定的所述不溶性复合体的吸光度，将吸光度的变化与已知浓度的校准品比较，计算出PG的含量水平，与健康者的血清PG含量水平进行比较，初步判断受测人体的胃部健康状况，基于PG含量判断、确定受测者是否患有胃癌或胃癌征兆。 

所述测出的PG含量水平包括测出的PGⅠ含量水平、测出的PGⅡ含量水平和测出的PGⅠ/PGⅡ的值，所述健康者的PG含量水平包括健康者的PGⅠ含量 水平、健康者的PGⅡ含量水平和健康者的PGⅠ/PGⅡ的值，通过比较所述测出的PGⅠ含量水平、所述测出的PGⅡ含量水平和所述测出的PGⅠ/PGⅡ的值与健康者的PGⅠ含量水平、健康者的PGⅡ含量水平和健康者的PGⅠ/PGⅡ的值进行相对应地比较。 

所述健康者的血清PG含量水平为统计学意义上的健康者的血清PG含量水平。 

统计学意义上的健康者的血清PG含量水平如下：PGⅠ正常值范围为67-200μg/L，如果PGⅠ含量小于67μg/L，说明胃体、胃底黏膜萎缩或受损，可能与浅表性胃炎、萎缩性胃炎等疾病有关；如果PGⅠ含量大于200μg/L，可能与饮食、药物的刺激或HP感染以及胃溃疡、十二指肠溃疡有关。PGⅡ正常值范围为0-15μg/L，如果PGⅡ含量大于15μg/L，可能与HP感染、胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃窦部的疾病有关。PGⅠ/PGⅡ正常值范围大于7.5，如果PGⅠ/PGⅡ的值小于7.5，可能与浅表性胃炎、萎缩性胃炎、HP感染、胃溃疡、十二指肠溃疡及胃窦部的疾病有关。总之，一旦发现PGⅠ、PGⅡ和PGⅠ/PGⅡ值偏离正常值范围，要警惕胃癌的出现，需要进行进一步的检查和确诊，并给予相应的治疗，避免疾病恶化。 

本发明所述“胃癌患者”是指患有胃癌或胃癌征兆的人群，其中所述胃癌是指如果得不到及时治疗，可能会演化为胃癌的胃部疾病。本发明所述“健康者”是指血清中的PG含量水平处于正常范围的人群。本发明所述“受测人体”包括胃癌患者和健康者。本发明所述不溶性复合体是指不溶于所述试剂R1、所述试剂R2或R3和样本的复合体，所述不溶性复合体对通过溶液的光有一定的折射或吸收，能够减弱通过液相的光的强度。 

所述试剂R2或R3包括有能够与样本中的PG抗原结合的PG抗体，优选地，所述PG抗体采用国际著名品牌的抗体、纯度高、特异性好、干扰少、线性范围宽。 

所述试剂R2或R3包括胶乳颗粒，其中所述乳胶颗粒包被有所述PG抗体。当所述PG抗原与所述PG抗体特异性结合形成PG抗原—PG抗体复合体后，根据胶乳增强免疫比浊法原理进行检测。 

胶乳增强免疫比浊法原理为：包被有PG抗体的胶乳颗粒，当与含有PG抗 原的样品混合时，会发生凝集反应，从而引起吸光度的变化，吸光度的大小与样品中PG含量成比例，当有足量PG抗体存在时，PG抗原和PG抗体形成的复合体的浊度的高低反应了样本中PG抗原的浓度水平，将吸光度变化与已知浓度的校准品比较，可以定量得出样品中PG含量，可通过全自动生化分析仪进行检测，操作简便、省时，检测结果准确可靠，短时间内可完成大批量的检测，适合大范围人群筛查出阳性患者，再经胃镜活检确诊，可大大提高胃部疾病早期诊断率，具有重要的临床意义，由于现各大中小型医院检验科均配备了自动生化分析仪，因此，各种规模的适合有全自动生化分析仪的医院可将PG作为筛查检测胃癌的首选方法。 

2.检测胃癌的试剂盒 

2.1试剂盒组分 

试剂盒包括特异性物质、胶乳颗粒、稀释液和校准品，其中所述特异性物质能够与PG抗原结合，优选为PG抗体，所述PG抗体包被于所述胶乳颗粒，并通过所述稀释液对所述PG抗体和待检测的样本中的PG抗原进行相应的稀释，所述校准品为已知浓度的PG抗原溶液，包括PGⅠ抗原溶液和PGⅡ抗原溶液，便于使用者将测得的吸光度的变化与已知浓度的校准品比较，以定量得出样本中的PG含量，基于PG含量来判断胃癌。值得一提的是，通过将所述PG抗体包被于所述胶乳颗粒，所述PG抗体与所述PG抗原结合后，产生反应，使所述胶乳颗粒凝集，测定该凝集反应的吸光度，以定量检测PG含量，即所述胶乳颗粒的存在，更加有助于定量检测PG含量，对PG含量检测的灵敏度及准确性非常重要。 

所述稀释液包括一试剂R1和一试剂R2、R3，其中所述试剂R1和所述试剂R2、R3为液体试剂，为所述PG抗原和所述PG抗体的结合提供了相应地环境，并对所述PG抗原和所述PG抗体进行相应地稀释，有利于利用生化分析仪定量测定PG的含量水平，试剂盒用于胃癌检测的检测步骤如图1所示。 

所述试剂R1包括表面活性剂、反应促进剂、防腐剂、稳定剂、电解质和缓冲液，其中所述缓冲液的溶剂为水，优选为去离子水。其中所述电解质和所述缓冲液提供PG抗原和PG抗体反应的适当条件，主要为pH范围；所述表面活性 剂主要为去除一些干扰，减少非特异性结合，并对胶乳颗粒具有助悬作用；所述反应促进剂促进PG抗原和PG抗体反应及浊度的形成，提高反应的灵敏度；所述稳定剂和所述防腐剂有助于增加试剂盒试剂的稳定性，延长其保存期限和使用稳定性。 

更进一步地，所述试剂R1包括： 

(1)质量百分比为0.01％-1.00％的防腐剂：叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类(也称尼泊金酯类，例如，尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯等)、苯甲酸及其盐类(例如苯甲酸钠、苯甲酸钾等)、山梨酸盐类(例如山梨酸钾、山梨酸钙等)、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种； 

(2)质量百分比为0.01-4.00％的稳定剂：蛋白质(牛血清蛋白或明胶)、无机盐(氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种)、金属络合剂(HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG，含有氨基二乙酸基团的络合剂，选自EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种)、助悬剂(乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种)中的一种或几种； 

(3)质量百分比为0.01％-2.00％的表面活性剂：非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，优选地，所述表面活性剂为所述非离子型表面活性剂和所述阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自Tween20、Tween80、Emulgen B-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂选自SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种； 

(4)质量百分比为0.01-5.00％的反应促进剂：聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、溴化乙二甲胺、聚凝胺的一种或几种； 

(5)质量百分比为0.05％-3.00％的电解质：一价金属离子和/或二价金属离子中的一种或几种，优选地，所述电解质选自钠离子和/或镁离子； 

(6)PH6.5-8.5的10-100mmol/L的缓冲液：甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液，优选地，所述缓冲液是甘氨酸缓冲液或Tris缓冲液。 

所述试剂R2包括包被有所述PG抗体的胶乳颗粒、防腐剂、稳定剂、表面 活性剂、电解质和缓冲液，其中所述缓冲液的溶剂为水，优选为去离子水。其中所述电解质和所述缓冲液提供PG抗原和PG抗体反应的适当条件，主要为pH范围；所述表面活性剂主要为去除一些干扰，并对胶乳颗粒具有助悬作用；所述稳定剂和所述防腐剂有助于增加试剂盒试剂的稳定性，延长其保存期限和使用稳定性。本具体实施方式和相关具体实施例选择PGⅠ和PGⅡ抗体作为试验对象。 

更进一步地，所述试剂R2包括： 

(1)百分含量为0.10％-0.60％的包被有PGⅠ抗体或PGⅡ抗体的胶乳颗粒，其中所述胶乳颗粒的粒径大小为50-250nm； 

(2)质量百分比0.01％-1.00％的防腐剂：叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类(也称尼泊金酯类，例如，尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯等)、苯甲酸及其盐类(例如苯甲酸钠、苯甲酸钾等)、山梨酸盐类(例如山梨酸钾、山梨酸钙等)、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种； 

(3)质量百分比为0.05％-12.00％的稳定剂：蛋白质(牛血清蛋白或明胶)、无机盐(氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种)、金属络合剂(HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG，含有氨基二乙酸基团的络合剂，选自EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种)、助悬剂(乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种)中的一种或几种； 

(4)质量百分比为0.01％-3.00％的表面活性剂：非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，优选地，所述表面活性剂为所述非离子型表面活性剂和所述阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自Tween20、Tween80、Emulgen B-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂选自SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种； 

(5)质量百分比为0.05％-3.00％的电解质：一价金属离子和/二价金属离子中的一种或几种，优选地，所述电解质选自钠离子和/或镁离子； 

(6)PH6.5-8.5的10-100mmol/L的缓冲液：甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液，优选地，所述缓冲液是甘氨酸或Tris缓冲液。 

更进一步地，所述试剂盒进一步包括试剂R3，其中所述试剂R3与所述试剂R2的组分及各组分含量相同。 

2.2具体实施例 

具体实施例一 

一、试剂盒主要成分及浓度： 

试剂R1包括：甘氨酸缓冲液，PH8.0，浓度为50mmol/L；叠氮钠，质量百分比为0.09％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；氯化钠，质量百分比为0.90％；PEG6000，质量百分比为3.00％；Tween20，质量百分比为0.10％。 

试剂R2包括：Tris缓冲液，PH8.0，浓度为50mmol/L；叠氮钠，质量百分比为0.09％；氯化钠，质量百分比为0.90％；Tween20，质量百分比为0.10％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；乙二醇，质量百分比为8.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.40％，包被有PGⅠ抗体，粒径大小为100nm。 

试剂R3包括：Tris缓冲液，PH8.0，浓度为50mmol/L；叠氮钠，质量百分比为0.09％；氯化钠，质量百分比为0.90％；Tween20，质量百分比为0.10％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；乙二醇，质量百分比为8.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.50％，包被有PGⅡ抗体，粒径大小为50nm。 

二、试剂盒测定方法 

分析方法：两点终点法；反应方向：上升反应；校准方式：Spline；测定波长：700nm；测定温度：37℃；R1:R2:样本＝162:30:6μL或R1:R3:样本＝162:30:6μL。 

操作步骤：将162μL所述试剂R1加入到6μL样本中，于37℃孵育分钟后加入30μL所述试剂R2或R3，反应开始0.5分钟时读取第一点，反应5分钟后读取第二点。使用日立7170全自动生化仪，采用多点定标方法测定PG含量水平，分析测定结果。 

具体实施例二 

一、试剂盒主要成分及浓度： 

试剂R1包括：Tris缓冲液，PH8.0，浓度为50mmol/L；甘氨酸，质量百分比为0.40％；叠氮钠，质量百分比为0.09％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；氯化钠，质量百分比为0.90％；PEG6000，质量百分比为4.00％；Emulgen B-66，质量百分比为0.20％。 

试剂R2包括：Tris缓冲液，PH8.0，浓度为50mmol/L；叠氮钠，质量百分比为0.09％；氯化钠，质量百分比为0.90％；Tween20，质量百分比为0.10％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；蔗糖，质量百分比为10.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.35％，包被有PGⅠ抗体，粒径大小为150nm。 

试剂R3包括：Tris缓冲液，PH8.0，浓度为50mmol/L；叠氮钠，质量百分比为0.09％；氯化钠，质量百分比为0.90％；Tween20，质量百分比为0.10％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；蔗糖，质量百分比为10.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.30％，包被有PGⅡ抗体，粒径大小为120nm。 

二、试剂盒测定方法 

分析方法：两点终点法；反应方向：上升反应；校准方式：Spline；测定波长：700nm；测定温度：37℃；R1:R2:样本＝162:30:6μL或R1:R3:样本＝162:30:6μL。 

操作步骤：将162μL所述试剂R1加入到6μL样本中，于37℃孵育分钟后加入30μL所述试剂R2或R3，反应开始0.5分钟时读取第一点，反应5分钟后读取第二点。使用日立7170全自动生化仪，采用多点定标方法测定PG含量水平，分析测定结果。 

具体实施例三 

一、试剂盒主要成分及浓度： 

试剂R1包括：Tris缓冲液，PH7.0，浓度为20mmol/L；山梨酸钾，质量百分比为0.05％；牛血清白蛋白，质量百分比为1.80％；氯化镁，质量百分比为0.90％；PEG8000，质量百分比为4.00％；Tween80，质量百分比为0.90％；EDTA，质量百分比为0.50％；乳糖，质量百分比为0.01％。 

试剂R2包括：甘氨酸缓冲液，PH7.0，浓度为80mmol/L；叠氮钠，质量 百分比为0.10％；山梨酸钾，质量百分比为0.05％；氯化钠，质量百分比为0.20％；Tween20，质量百分比为0.10％；SDS，质量百分比为1.00％；牛血清白蛋白，百分含量为0.60％；乙二醇，质量百分比为8.00％；胶乳颗粒，质量百分比为0.20％，包被有PGⅠ抗体，粒径大小为200nm。 

试剂R3包括：甘氨酸缓冲液，PH7.0，浓度为50mmol/L；叠氮钠，质量百分比为0.20％；山梨酸钾，质量百分比为0.01％；氯化钠，质量百分比为0.20％；Tween20，质量百分比为0.10％；SDS，质量百分比为0.50％；牛血清白蛋白，质量百分比为0.60％；乙二醇，质量百分比为6.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.20％，包被有PGⅡ抗体，粒径大小为200nm。 

二、试剂盒测定方法 

分析方法：两点终点法；反应方向：上升反应；校准方式：Spline；测定波长：700nm；测定温度：37℃；R1:R2:样本＝162:30:6μL或R1:R3:样本＝162:30:6μL。 

操作步骤：将162μL所述试剂R1加入到6μL样本中，于37℃孵育分钟后加入30μL所述试剂R2或R3，反应开始0.5分钟时读取第一点，反应5分钟后读取第二点。使用日立7170全自动生化仪，采用多点定标方法测定PG含量水平，分析测定结果。 

具体实施例四 

一、试剂盒主要成分及浓度： 

试剂R1包括：甘氨酸缓冲液，PH6.5，浓度为80mmol/L；苯甲酸钠，质量百分比为0.09％；明胶，质量百分比为0.60％；氯化钠，质量百分比为0.90％；PEG8000，质量百分比为2.00％；Emulgen B-66，质量百分比为0.10％；EDTA，质量百分比为0.20％；乳糖，质量百分比为0.01％。 

试剂R2包括：Tris缓冲液，PH6.5，浓度为30mmol/L；苯甲酸钠，质量百分比为0.09％；氯化钠，质量百分比为0.50％；Triton X-100，质量百分比为0.10％；明胶，质量百分比为0.60％；蔗糖，质量百分比为10.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.50％，包被有PGⅠ抗体，粒径大小为80nm。 

试剂R3包括：Tris缓冲液，PH6.5，浓度为30mmol/L；苯甲酸钠，质量百分比为0.09％；氯化镁，质量百分比为0.20％；Triton X-100，质量百分比为0.10％；明胶，质量百分比为0.60％；蔗糖，质量百分比为10.00％；胶乳颗粒，百分含量为0.50％，包被有PGⅡ抗体，粒径大小为80nm。 

二、试剂盒测定方法 

分析方法：两点终点法；反应方向：上升反应；校准方式：Spline；测定波长：700nm；测定温度：37℃；R1:R2:样本＝162:30:6μL或R1:R3:样本＝162:30:6μL。 

操作步骤：将162μL所述试剂R1加入到6μL样本中，于37℃孵育分钟后加入30μL所述试剂R2或R3，反应开始0.5分钟时读取第一点，反应5分钟后读取第二点。使用日立7170全自动生化仪，采用多点定标方法测定PG含量水平，分析测定结果。 

2.3试验结果与进口试剂盒A结果的相关性 

以具体实施例2为例，具体实施例2的试剂盒与进口试剂盒A比较有极好的相关性，相关系数为0.9890，说明本发明提供的试剂盒可用于检测胃癌，检测结果稳定可靠，比对试验结果如图2所示。 

2.4线性范围结果 

如图3所示，当PG抗原和PG抗体稀释不同比例后，与进口试剂盒A仍然有极好的相关性，说明本发明提供的胃癌检测方法及检测胃癌的试剂盒可以应用于临床。 

2.5抗干扰性测试 

干扰效应结果如下： 

当PGI浓度为29.8ng/mL，胆红素≤60mg/dL，脂肪乳≤500mg/dL，血红蛋白≤500mg/dL时，对PGI测定结果无干扰。 

当PGI浓度为61.8ng/mL，胆红素≤60mg/dL，脂肪乳≤500mg/dL，血红蛋白≤500mg/dL时，对PGI测定结果无干扰。 

本领域的技术人员应理解，上述描述及附图中所示的本发明的实施例只作为 举例而并不限制本发明。本发明的目的已经完整并有效地实现。本发明的功能及结构原理已在实施例中展示和说明，在没有背离所述原理下，本发明的实施方式可以有任何变形或修改。 

Claims (10)

1.一种胃癌检测方法，其特征在于，体外将受测体的血清PG抗原与包被PG抗体进行胶乳颗粒反应，通过乳胶增强免疫比浊法定量测出血清中PG含量水平，根据测出的PG含量水平与统计学意义上的健康者血清PG含量水平相比较，基于PG含量来判断胃癌。

2.如权利要求1所述的胃癌检测方法，其特征在于，PG抗原与包被PG抗体的胶乳颗粒通过相应的稀释，所述PG抗原与PG抗体于液相中发生凝集反应，生成不溶于所述液相的PG抗原-PG抗体复合体，其中所述PG抗原与所述PG抗体于pH为6.0-9.0、温度为15℃-40℃的所述液相环境中反应。

3.如权利要求1或2所述的胃癌检测方法，其特征在于，所述PG抗体包括PGⅠ抗体和/或PGⅡ抗体，通过所述测出的PGⅠ、PGⅡ和/或PGⅠ/PGⅡ与健康者血清PGⅠ、PGⅡ和/或PGⅠ/PGⅡ比较，其中所述PGⅠ或PGⅡ抗体，相对于所述受测体的样本中的血清PGⅠ或PGⅡ抗原，所述PGⅠ或PGⅡ抗体过量。

4.一种检测胃癌的试剂盒，其特征在于，其包括PG抗体、胶乳颗粒和稀释液，其中所述PG抗体包被于所述胶乳颗粒，其中所述稀释液提供PG抗原和PG抗体反应的环境，以促进反应，其包括试剂R1、试剂R2和/或试剂R3，所述试剂R1包括表面活性剂、反应促进剂、稳定剂、防腐剂、电解质和缓冲液，以用于稀释PG抗原，所述试剂R2包括表面活性剂、稳定剂、防腐剂、电解质和缓冲液，以用于稀释PGⅠ抗体，所述试剂R3包括表面活性剂、稳定剂、防腐剂、电解质和缓冲液，以用于稀释PGⅡ抗体。

5.如权利要求4所述的检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步还包括至少一校准品，其中所述校准品的组分为PG抗原溶液，所述PG抗原溶液包括PGⅠ抗原溶液和/或PGⅡ抗原溶液，所述试剂R1、所述试剂R2和所述试剂R3包括的所述稳定剂包括蛋白质、无机盐、金属络合剂和助悬剂中的一种或几种。

6.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒包被PGⅠ抗体或PGⅡ抗体，其中所述胶乳颗粒的粒径为50-250nm，在所述试剂R1中：表面活性剂的百分含量为0.01％-2.00％、稳定剂的百分含量为0.01％-4.00％、反应促进剂的百分含量为0.01％-5.00％、所述防腐剂的百分含量均为0.01％-1.00％、电解质的百分含量为0.05％-3.00％、缓冲液的pH为6.5-8.5、缓冲液的浓度为10-100mmol/L，在所述试剂R2中：胶乳颗粒的百分含量为0.10％-0.60％，表面活性剂的百分含量为0.01％-3.00％、稳定剂的百分含量为0.05％-12.00％、所述防腐剂的百分含量均为0.01％-1.00％、电解质的百分含量为0.05％-3.00％、缓冲液的pH为6.5-8.5、缓冲液的浓度为10-100mmol/L，在所述试剂R3中：胶乳颗粒的百分含量为0.10％-0.60％，表面活性剂的百分含量为0.01％-3.00％、稳定剂的百分含量为0.05％-12.00％、所述防腐剂的百分含量均为0.01％-1.00％、电解质的百分含量为0.05％-3.00％、缓冲液的pH为6.5-8.5、缓冲液的浓度为10-100mmol/L。

7.如权利要求4、5或6所述的检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液的试剂为水，其中所述缓冲液包括甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液；所述反应促进剂包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、溴化乙二甲胺、聚凝胺的一种或几种；所述电解质包括至少一一价金属离子、至少一二价金属离子中的一种或几种；所述防腐剂包括叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸及其盐类、山梨酸盐类、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种；所述蛋白质包括牛血清蛋白或明胶，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种，所述金属络合剂包括HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG、EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种，所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种；所述表面活性剂包括非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂包括Tween20、Tween80、Emulgen B-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂包括SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种；所述羟基苯甲酸酯包括尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯，所述苯甲酸盐包括例如苯甲酸钠、苯甲酸钾等，所述山梨酸盐包括例如山梨酸钾、山梨酸钙。

8.一种用于稀释PG抗原或PG抗体的试剂，以提供PG抗原与PG抗体反应的环境，其特征在于，其包括表面活性剂、反应促进剂、稳定剂、防腐剂、电解质和缓冲液。

9.如权利要求8所述的用于稀释PG抗原的试剂，其特征在于，所述表面活性剂的百分含量为0.01％-2.00％、所述稳定剂的百分含量为0.01％-4.00％、所述反应促进剂的百分含量为0.01％-5.00％、所述电解质的百分含量为0.05％-3.00％、所述缓冲液的pH为6.5-8.5、所述缓冲液的浓度为10-100mmol/L，所述防腐剂的百分含量为0.01％-1.00％，其中所述缓冲液的试剂为水，其中所述缓冲液包括甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液；所述稳定剂包括蛋白质、无机盐、金属络合剂和助悬剂中的一种或几种，其中所述蛋白质包括牛血清蛋白或明胶，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种，所述金属络合剂包括HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG、EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种，所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种；所述反应促进剂包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、溴化乙二甲胺、聚凝胺中的一种或几种；所述电解质包括至少一一价金属离子、至少一二价金属离子中的一种或几种；所述表面活性剂包括非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂包括Tween20、Tween80、EmulgenB-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂包括SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种；所述防腐剂包括叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸及其盐类、山梨酸盐类、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种。

10.如权利要求8所述的用于稀释PG抗体的试剂，其特征在于，其所述表面活性剂的百分含量为0.01％-3.00％、所述稳定剂的百分含量为0.05％-12.00％、所述电解质的百分含量为0.05％-3.00％、所述缓冲液的pH为6.5-8.5、所述缓冲液的浓度为10-100mmol/L、所述防腐剂的百分含量为0.01％-1.00％，其中所述缓冲液的试剂为水，所述缓冲液包括甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、硼酸盐缓冲液或磷酸缓冲液；所述稳定剂包括蛋白质、无机盐、金属络合剂和助悬剂中的一种或几种，其中所述蛋白质包括牛血清蛋白或明胶，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或几种，所述金属络合剂包括HEDTA、CMOM、CMOS、DHEG、EGTA、DETP、DTPA、EDTA中的一种或几种，所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、糖浆剂、纤维素类的甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、阿拉伯胶、西黄蓍胶、桃胶中的一种或几种；所述电解质包括至少一一价金属离子、至少一二价金属离子中的一种或几种；所述表面活性剂包括非离子型表面活性剂和/或阴离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂包括Tween20、Tween80、Emulgen B-66、Triton X-100中的一种或几种，所述阴离子型表面活性剂包括SDS、脱氧胆酸钠、聚茴脑磺酸钠、烷基苯磺酸钠、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐中的一种或几种；所述防腐剂包括叠氮钠、叠氮锂、对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸及其盐类、山梨酸盐类、亚硝酸钠、PC300中的一种或几种。