CN109541085A - 一种淡紫金莲花提取物及其固体速溶颗粒的制备方法与检测方法 - Google Patents

一种淡紫金莲花提取物及其固体速溶颗粒的制备方法与检测方法 Download PDF

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Abstract

一种淡紫金莲花提取物及其固体速溶颗粒的制备方法与检测方法，属于淡紫金莲花提取物技术领域。取淡紫金莲花药材粉末，按料液比1:10‑1：30(g/mL)加入体积分数为50‑80％的乙醇溶液，回流提取或在40℃下超声提取1‑4次，每次0.5‑3h，滤过；滤液室温静置3‑4小时，高速管式分离机分离；真空冷冻干燥成淡紫金莲花提取物粉；粉碎并过80目筛，密封保存，备用。提取物中包括荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素。固体速溶颗粒成分包括：淡紫金莲花提取物50‑75份，木糖醇1‑2份或麦芽糊精5～10份或白糖3‑5份，其他可接受的添加剂2～5份。本发明方法简单，效率高。

Description

一种淡紫金莲花提取物及其固体速溶颗粒的制备方法与检测 方法
技术领域
本发明涉及一种固体速溶颗粒，具体是包含淡紫金莲花提取物、泡腾剂和稳定剂的固体速溶颗粒，属于淡紫金莲花提取物技术领域。
背景技术
淡紫金莲花(Trollius lilacinus Bunge)为毛茛科多年生草本植物，淡紫金莲花头状花序的外形与金莲花相似。淡紫金莲花但花单独顶生，淡紫色、淡蓝色或白色，5-6月开花，生长于海拔2600-3500米间山地草坡或云杉林边。分布于中国新疆天山一带、西伯利亚西部及中亚地区。现代药理研究表明，淡紫金莲花所含的黄酮类成分有抗癌、抗病毒、抗菌、对上呼吸道感染、急慢性咽炎和扁桃体炎有较好的疗效，能够抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌及大肠杆菌等多种细菌。
颗粒剂具有吸收迅速、生物利用度高，有利于贮存、携带、运输，并有口感良好、患者容易接受等特点。因此，本发明结合颗粒剂与淡紫金莲花提取的相关技术，研制了淡紫金莲花提取物固体颗粒，为淡紫金莲花综合开发利用提供技术支持。
发明内容
本发明提供一种淡紫金莲花提取物及其固体速溶颗粒的制备方法，以及淡紫金莲花提取物或固体速溶制剂的HPLC检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种淡紫金莲花提取物的制备方法，其特征在于：步骤如下：取淡紫金莲花药材粉末，按料液比1:10-1：30(g/mL)加入体积分数为50-80％的乙醇溶液，回流提取或在40℃下超声提取1-4次，每次0.5-3h，滤过；滤液室温静置3-4小时，高速管式分离机分离；真空冷冻干燥成淡紫金莲花提取物粉；粉碎并过80目筛，密封保存，备用。
本发明的方法制备得到的淡紫金莲花提取物中包括荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素，其中荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素的含量分别为1.4915、 1.1572、0.7441、0.1018mg/g。
采用HPLC对淡紫金莲花提取物进行测定，包括以下步骤：
(1)色谱条件
色谱柱：Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-体积分数0.1％磷酸溶液(B)；梯度洗脱程序：0～17min 7％～15％A，17～26min 15％～16.5％A，26～30min 16.5％～24％A，30～40min 24％～26％A，40～51 min 26％～50％A，51～52min50％～90％A，52～60min 90％A，60～70min 90％～50％A，70～80min 50％～7％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：10μL；柱温：30℃。上述0-52min内，A的含量是逐渐提高的；60-80 min内，A的含量是逐渐降低的，色谱图见图1。
(2)对照品溶液的配制
精密称取荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素适量，用甲醇制成含有64μg/ml 槲皮素、64μg/ml藜芦酸、64μg/ml金丝桃苷和80μg/ml荭草苷的混合对照品溶液，摇匀，放于冰箱中，备用。
(3)供试品溶液的制备
称取已干燥粉碎的淡紫金莲花提取物粉(过65目筛)1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，用移液管精密加入95％乙醇20mL，称定重量，超声提取20min，取出，放冷，再称定重量，用95％乙醇补足失重，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(4)线性关系考察
将步骤(2)混合对照品溶液分别以5、10、15、20、25、30μL的进样量进高效液相色谱仪；根据色谱图，以峰面积为纵坐标(Y)，对照品量为横坐标(X) 绘制标准曲线，得荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷和槲皮素的回归方程及线性范围；结果见表1。
表1中国新疆天山一带淡紫金莲花提取物4种化学成分的线性关系及线性范围
(5)供试品含量测定
采用上述色谱条件，对供试品中的荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷、槲皮素的含量进行检测，结果如下表2。
表2淡紫金莲花测得4种有效成分含量
淡紫金莲花固体速溶颗粒及制备方法如下：
淡紫金莲花固体速溶颗粒成分质量分数包括：淡紫金莲花提取物50-75份，木糖醇1-2份或麦芽糊精5～10份或白糖3-5份，其他可接受的添加剂2～5份(如山梨醇等)。
按照上述淡紫金莲花固体速溶颗粒的成分比例，将物料加乙醇混合均匀，放入喷雾干燥器中，在喷雾干燥塔内进行干燥，得到上述淡紫金莲花固体速溶颗粒；将所得颗粒进行灭菌、包装。
本发明提供了前述淡紫金莲花的提取物的质量监控，及其在固体速溶颗粒研发领域中的用途。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1.本发明通过对影响淡紫金莲花中荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素含量的提取因素进行了条件优化，如料液比、乙醇体积分数、超声提取时间、超声提取次数等；
2.本发明采用HPLC对淡紫金莲花中荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素进行同时检查，方法操作简单，提高检测效率；
3.本发明保留了金莲花的药用和营养价值，在干燥过程中采用真空冷冻干燥，去除乙醇和水后，较好地保留了金莲花原有的营养成分和功效，具有一定的抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌及大肠杆菌等多种细菌等功效。
附图说明
图1混合对照品(A)和金莲花样品(B)的HPLC图谱
1-荭草苷 2-藜芦酸 3-金丝桃苷 4-槲皮素。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
本发明所用的实验试剂与仪器如下：
1.试剂与药材
淡紫金莲花，产地新疆；荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷和槲皮素购于上海源叶生物科技有限公司；其他试剂均为色谱纯或分析纯。
2.仪器
RE-52CS型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器设备厂；ALC-201型电子天平，德国赛多利斯公司；HC-3017型高速离心机，科大创新股份中佳分公司。201型电热鼓风恒温干燥箱，成都电烘箱厂；Agilent-1260高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司。
实施例1本发明淡紫金莲花提取物的提取条件筛选
1.淡紫金莲花提取物检测方法
1.1色谱条件
色谱柱：Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-体积分数0.1％磷酸溶液(B)；梯度洗脱程序：0～17min 7％～15％A，17～26min 15％～16.5％A，26～30min 16.5％～24％A，30～40min 24％～26％A，40～51 min 26％～50％A，51～52min50％～90％A，52～60min 90％A，60～70min 90％～50％A，70～80min 50％～7％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：10μL；柱温：30℃。上述0-52min内，A的含量是逐渐提高的；60-80 min内，A的含量是逐渐降低的，色谱图见图1。
1.2对照品溶液的配制
精密称取荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素适量，用甲醇制成含有64μg/ml 槲皮素、64μg/ml藜芦酸、64μg/ml金丝桃苷和80μg/ml荭草苷的混合对照品溶液，摇匀，放于冰箱中，备用。
1.3供试品溶液的制备
称取已干燥粉碎的淡紫金莲花提取物粉(过65目筛)1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，用移液管精密加入95％乙醇20mL，称定重量，超声提取20min，取出，放冷，再称定重量，用95％乙醇补足失重，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
1.4线性关系考察
将步骤(2)混合对照品溶液分别以5、10、15、20、25、30μL的进样量进高效液相色谱仪；根据色谱图，以峰面积为纵坐标(Y)，对照品量为横坐标(X) 绘制标准曲线，得荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷和槲皮素的回归方程及线性范围；结果见表3。
表3 4种化学成分的线性关系及线性范围
1.5精密度试验
将混合对照品溶液以10μL的进样量重复进样6次，依据色谱图，计算得 RSD值见表4。
1.6重复性试验
取同一批次的样品6份，按照“2.3.1(3)”项方法制备样品，按照“2.3.1(1)”项进行HPLC测定，经计算可得RSD值见表4。
1.7稳定性试验
将同一供试品溶液，分别在制备后的0、2、4、6、8、10h以进样量为10μL 进样，经计算可得RSD值见表4。
表4金莲花4种成分RSD值
1.8供试品含量测定
采用上述色谱条件，对供试品中的荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷、槲皮素的含量进行检测，结果如下表5。
表5淡紫金莲花测得4种有效成分含量
2.淡紫金莲花的提取工艺研究
2.1乙醇体积分数
精密取淡紫金莲花细粉5.0g，共5份，分别加入体积分数为40、50、60、70、 80％的乙醇溶60ml，于45℃的超声提取30min，滤过，用相应的乙醇溶液，定容至100ml容量瓶中。采用HPLC检测提取液中金丝桃苷的含量，并带入线性回归方程计算提取率，结果见表6。
表6乙醇体积分数对淡紫金莲花中金丝桃苷提取的影响
由表6可知，通过随着乙醇体积分数升高，金丝桃苷的提取量大幅提高，当乙醇体积分数达到60％时，金丝桃苷提取量上升缓慢，考虑到溶剂回收及成本，因此选择乙醇体积分数60％。
2.2料液比
精密取淡紫金莲花细粉5.0g，共6份，分别加入体积分数为60％的乙醇溶液 30、40、50、60、70、80ml，于45℃的超声提取30min，滤过，用60％的乙醇溶液，定容至100ml容量瓶中。采用HPLC检测提取液中金丝桃苷的含量，并带入线性回归方程计算提取率，结果见表7。
表7料液比对淡紫金莲花中金丝桃苷提取的影响
由表7可知，随着乙醇溶液用量的增加，金丝桃苷提取量逐步增加，可能是由于乙醇溶液用量的增加，会增大金丝桃苷溶出效率，但当乙醇溶液用量增大到一定程度后，金丝桃苷基本被提取出来，再增大溶剂用量，总金丝桃苷提取量基本保持不变。故选料液比选为1∶12。
1.3超声提取时间
精密取淡紫金莲花细粉5.0g，共5份，加入体积分数为60％的乙醇溶液60ml，分别于45℃的超声提取10、20、30、40、50min，滤过，用60％的乙醇溶液，定容至100ml容量瓶中。采用HPLC检测提取液中金丝桃苷的含量，并带入线性回归方程计算提取率，结果见表8。
表8超声提取时间对淡紫金莲花中金丝桃苷提取的影响
由表8可知，随着超声提取时间的延长，金丝桃苷提取量逐步增加，但当超声提取时间为30min时，金丝桃苷提取量最大，随后金丝桃苷提取量出现下降趋势，可能是随着时间延长，金丝桃苷在该环境下发生了水解，故超声提取时间选为30min。
1.4超声提取次数
精密取淡紫金莲花细粉5.0g，共3份，加入体积分数为60％的乙醇溶液60ml，于45℃的超声提取30min，分别提取1、2、3次，滤过，用60％的乙醇溶液，定容至100ml容量瓶中。采用HPLC检测提取液中金丝桃苷的含量，并带入线性回归方程计算提取率，结果见表9。
表9超声提取次数对淡紫金莲花中金丝桃苷提取的影响
由表9可知，随着提取次数的的增加，金丝桃苷提取量增加，提取到2次时，金丝桃苷提前量已接近于最大值，在增加次数，金丝桃苷量增加较少，且溶剂消耗量增加、成本增加。故选次数提取次数选为1∶14。
2.条件验证
精密称取淡紫金莲花细粉5g，共3份，分别加入60％的乙醇70ml，于30℃的超声提取2次，每次30min，滤过，分别加入60％的乙醇定容至100ml，采用HPLC 检测提取液中金丝桃苷的含量，并带入线性回归方程计算提取率，结果见表10。
表10淡紫金莲花中金丝桃苷提取的条件验证
由表10可知，在所选最优条件下，金丝桃苷提取量的平均值为0.7361，RSD 值为0.33％，说明该条件能够显著提高金丝桃苷提取量。
实施例2淡紫金莲花固体速溶颗粒的制备
一种淡紫金莲花固体速溶颗粒，其组分如下：
A：淡紫金莲花提取物50-75份；
B：辅料：白糖3-5份、山梨醇2～5份；
按照以下步骤制备：
按配方量计，在淡紫金莲花提取物冻干粉(A)和所述的B辅料中，加入浓度为30％的乙醇少许，混合均匀，放入喷雾干燥器中，在喷雾干燥塔内进行干燥，得到上述淡紫金莲花固体速溶颗粒；然后采用辐照灭菌法灭菌，再经包装、检验得到淡紫金莲花固体速溶颗粒产品。
实施例3无糖型淡紫金莲花固体速溶颗粒的制备
一种淡紫金莲花固体速溶颗粒，其组分如下：
A：淡紫金莲花提取物50-75份；
B：辅料：木糖醇1-2份、山梨醇2～5份；
按照以下步骤制备：
按配方量计，在淡紫金莲花提取物冻干粉(A)和所述的B辅料中，加入浓度为30％的乙醇少许，混合均匀，放入喷雾干燥器中，在喷雾干燥塔内进行干燥，得到上述淡紫金莲花固体速溶颗粒；然后采用辐照灭菌法灭菌，再经包装、检验得到淡紫金莲花固体速溶颗粒产品。
实施例4淡紫金莲花固体速溶颗粒的成型工艺
取上述实施例2或实施例3制备的淡紫金莲花固体速溶颗粒0.50g，置于透明烧杯中，用水温为85℃±5℃的纯净水150ml冲泡，从固体速溶颗粒的速溶、沉淀、澄清度等方面进行成型工艺研究，结果见下表11。
表11成型工艺研究
。

Claims (6)

1.一种淡紫金莲花提取物的制备方法，其特征在于：步骤如下：取淡紫金莲花药材粉末，按料液比1:10-1：30(g/mL)加入体积分数为50-80％的乙醇溶液，回流提取或在40℃下超声提取1-4次，每次0.5-3h，滤过；滤液室温静置3-4小时，高速管式分离机分离；真空冷冻干燥成淡紫金莲花提取物粉；粉碎并过80目筛，密封保存，备用。
2.按照权利要求1所述的一种淡紫金莲花提取物的制备方法，其特征在于：淡紫金莲花提取物中包括荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素，其中荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素的含量分别为1.4915、1.1572、0.7441、0.1018mg/g。
3.采用HPLC对淡紫金莲花提取物进行测定，其特征在于，包括以下步骤：
(1)色谱条件
色谱柱：Amethyst HC-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-体积分数0.1％磷酸溶液(B)；梯度洗脱程序：0～17min 7％～15％A，17～26min 15％～16.5％A，26～30min16.5％～24％A，30～40min 24％～26％A，40～51min 26％～50％A，51～52min 50％～90％A，52～60min 90％A，60～70min 90％～50％A，70～80min 50％～7％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：10μL；柱温：30℃；上述0-52min内，A的含量是逐渐提高的；60-80min内，A的含量是逐渐降低的；
(2)对照品溶液的配制
精密称取荭草苷、金丝桃苷、藜芦酸和槲皮素适量，用甲醇制成含有64μg/ml槲皮素、64μg/ml藜芦酸、64μg/ml金丝桃苷和80μg/ml荭草苷的混合对照品溶液，摇匀，放于冰箱中，备用；
(3)供试品溶液的制备
称取已干燥粉碎的过65目筛的淡紫金莲花提取物粉1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，用移液管精密加入95％乙醇20mL，称定重量，超声提取20min，取出，放冷，再称定重量，用95％乙醇补足失重，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(4)线性关系考察
将步骤(2)混合对照品溶液分别以5、10、15、20、25、30μL的进样量进高效液相色谱仪；根据色谱图，以峰面积为纵坐标(Y)，对照品量为横坐标(X)绘制标准曲线，得荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷和槲皮素的回归方程及线性范围；结果见表1；
表1 中国新疆天山一带淡紫金莲花提取物4种化学成分的线性关系及线性范围
(5)供试品含量测定
采用上述色谱条件，对供试品中的荭草苷、藜芦酸、金丝桃苷、槲皮素的含量进行检测。
4.一种淡紫金莲花固体速溶颗粒，其特征在于，淡紫金莲花固体速溶颗粒成分质量分数包括：淡紫金莲花提取物50-75份，木糖醇1-2份或麦芽糊精5～10份或白糖3-5份，其他可接受的添加剂2～5份。
5.按照权利要求4所述的一种淡紫金莲花固体速溶颗粒，其特征在于，其他可接受的添加剂为山梨醇。
6.制备权利要求4所述的一种淡紫金莲花固体速溶颗粒的方法，其特征在于，按照上述淡紫金莲花固体速溶颗粒的成分比例，将物料加乙醇混合均匀，放入喷雾干燥器中，在喷雾干燥塔内进行干燥，得到上述淡紫金莲花固体速溶颗粒；将所得颗粒进行灭菌、包装。
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