CN103623075A - 金莲花提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种金莲花提取物的制备工艺将金莲花（毛茛科植物金莲花Trollius chinensis Bunge的干燥花）加5-50倍量的10%-100%乙醇水溶液回流提取1-6次，每次0.5-8小时；滤过后合并乙醇水提取溶液备用；将乙醇水提取液回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.00-1.20的浓缩液，静置，滤过，滤液备用；将浓缩后的乙醇水溶液或直接将乙醇水溶液用大孔吸附树脂、聚酰胺等树脂吸附；吸附物用水洗，再用10-100%醇洗脱；收集醇洗脱液；回收醇，干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物。金莲花提取物可用于制备抗病毒、抗菌、抗炎的药物。

Description

金莲花提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说是一种金莲花提取物的制备方法。

背景技术

中国药典1977年版、北京市药材标准、上海市药材标准以及山西省药材标准中规定金莲花为毛茛科植物金莲花Trollius chinensis Bunge的干燥花。夏季花开时采摘，除去杂质，阴干。苦，寒。归肝经。具有清热散风，解毒消肿，平肝明目。用于口疮喉肿，浮热牙宣，耳疼目痛，山岚瘴气，疔疮火毒，上呼吸道感染，急性肠炎，泌尿系统感染及疮疖脓肿等作用。

金莲花中含有多种化学成分，现已发现主要以黄酮类成分为主，同时还含有生物碱、有机酸、挥发油等成分。药理作用显示具有：抗病毒、抑菌与抗炎作用等作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种从中药金莲花中提取一种总黄酮含量在20%以上的金莲花提取物的制备方法，通过简单的工艺过程得到总黄酮含量大于20%的金莲花提取物。

本发明的技术方案是：其具体方法步骤为：

将金莲花Trollius chinensis Bunge的干燥花用10%-100%乙醇水或甲醇水回流提取，加入相当于药材重量的5-50倍溶剂，回流提取1-6次，每次0.5至8小时，合并提取液；用各种方式滤过，合并乙醇水或甲醇水提取溶液备用；

将乙醇水或甲醇水提取液回收乙醇或甲醇，并浓缩至相对密度为1.00-1.20的浓缩液，静置，滤过，滤液备用；

将浓缩后的乙醇水或甲醇水溶液或者直接将乙醇水或甲醇水溶液用大孔吸附树脂或聚酰胺等树脂吸附；

吸附物用水洗，再用10-100%醇洗脱；

收集醇洗脱液；

回收醇，浸膏干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物；

金莲花提取物总黄酮含量在20%以上（紫外-可见分光光度法或HPLC法测定）。

所述的金莲花提取物，是从毛茛科植物金莲花Trollius chinensis Bunge的干燥花中提取出来的一大类物质。用该金莲花提取物做为药效成分来制备用于治疗病毒性疾病的药物制剂，可单独或与制药工艺中可接受的赋形剂结合，按照常规方法制成口服给药、腔道、黏膜给药、肌肉或静脉给药的药物剂型。所述金莲花提取物总黄酮含量大于50%以上。本发明发现了中药金莲花提取物治疗病毒性疾病的药效物质，为其临床应用提供了科学依据，使金莲花提取物可做为一个天然的抗病毒剂，具有无成瘾性、用量小的特点。金莲花提取物采用体外培养法筛选实验，结果表明：在625μg/ml的浓度时对甲型流感病毒A1的抑制率为75.6%、212.5μg/ml的浓度时对呼吸道合胞病毒RSV的抑制率为62.3%、39.07μg/ml的浓度时对腺病毒Adv3的抑制率为67.1%。目前临床治疗病毒性疾病以化学合成和半合成的药物为主。但是，由于半个多世纪以来化学合成和半合成抗菌、抗病毒药物的广泛使用，已诱发病菌产生了耐药性菌株，且日渐增多条件性致病菌。加之其毒副作用较大等缺点，致使该类药物尽管作为一线治疗药、但已存在诸多不足。因此，抗病毒中药具有副作用小而具有广阔的应用前景，用本发明工艺提取的提取物的开发成功将产生重大的社会效益。

本发明的优点是：工艺简单，提取率也较高，能够得到总黄酮含量大于20%的金莲花提取物。

具体实施方式

下面结合实施例来更详细的说明本发明，但本发明并不受这些实施例的限制。

实施例1：

金莲花100克，加16倍量的60%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇溶剂并浓缩至相对密度为1.10-1.15的浓缩液，静置，滤过，备用。将浓缩液后的药液加入已处理好的D101大孔吸附树脂200g吸附6小时。吸附药液的大孔吸附树脂柱用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积的50%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收醇，干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物，总黄酮含量在59%（紫外-可见分光光度法测定）。 

实施例2：

金莲花100克，加10倍量的45%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇溶剂并浓缩至相对密度为1.05-1.10的浓缩液，静置，滤过，备用。将浓缩液后的药液加入已处理好的聚酰胺树脂100g吸附5小时。吸附药液的聚酰胺树脂柱用3倍柱床体积水洗后再用6倍柱床体积的70%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收醇，干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物，总黄酮含量在40%（HPLC法测定）。

实施例3：

金莲花100克，加16倍量的78%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇溶剂并浓缩至相对密度为1.10-1.15的浓缩液，静置，滤过，备用。将浓缩液后的药液加入已处理好的D101大孔吸附树脂200g吸附6小时。吸附药液的大孔吸附树脂柱用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积的50%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收醇，干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物，总黄酮含量在75%（紫外-可见分光光度法测定）。

实施例4：

金莲花100克，加30倍量的65%甲醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并甲醇提取液，回收甲醇溶剂并浓缩至相对密度为1.00-1.10的浓缩液，静置，滤过，备用。将浓缩液后的药液加入已处理好的D101大孔吸附树脂300g吸附3小时。吸附药液的大孔吸附树脂柱用4倍柱床体积水洗后再用15倍柱床体积的70%甲醇洗脱，收集醇洗脱液，回收醇，干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物，总黄酮含量在50%（紫外-可见分光光度法测定）。

实施例5：金莲花提取物体外对流感病毒（H1N1）抑制活性检测

材料与方法

1.体外宿主细胞：MDCK（狗肾传代细胞）细胞。

2.病毒株：流感病毒A型（H1N1）（A3/京科/30/95）。

3. CPE法检测药物对细胞的毒性。

4. CPE法(细胞病变)检测药物对流感病毒的抑制作用。                  

试验过程

（1）.药物的细胞毒性检测

MDCK细胞在96孔细胞培养板中培养形成单层后，加入不同浓度的药液，继续培养3天，用CPE法检测药物对MDCK细胞的毒性。

（2）. 药物抗流感病毒作用检测

MDCK细胞在96孔细胞培养板中培养形成单层后，用100TCID50的流感病毒感染细胞，再加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液，继续培养3天，经CPE法确定药物对流感病毒的抑制作用。  

实验结果： 

实验结果表明金莲花提取物体对MDCK细胞的无毒浓度为625ug/ml，即（TC0=625ug/ml），金莲花提取物在625ug/ml的浓度时对流感病毒A型（H1N1）的抑制率分别为75.6%。

实施例6：金莲花提取物体外对呼吸道合胞病毒（RSV）抑制活性检测材料与方法

1.体外宿主细胞：Vero（非洲绿猴肾细胞）细胞。

2.病毒株：呼吸道合胞病毒（RSV）。

3. CPE法检测药物对细胞的毒性。

4. CPE法(细胞病变)检测药物对呼吸道合胞病毒的抑制作用。                  

试验过程

（1）.药物的细胞毒性检测

Vero细胞在96孔细胞培养板中培养形成单层后，加入不同浓度的药液，继续培养3天，用CPE法检测药物对Vero细胞的毒性。

（2）. 药物抗呼吸道合胞病毒作用检测

Vero细胞在96孔细胞培养板中培养形成单层后，用100TCID50的呼吸道合胞病毒（RSV）感染细胞，再加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液，继续培养3天，经CPE法确定药物对呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制作用。  

实验结果： 

实验结果表明金莲花提取物体对Vero细胞的无毒浓度为212.5ug/ml，即（TC0=625ug/ml），金莲花提取物在212.5ug/ml的浓度时对呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制率分别为62.3%。

实施例7：金莲花提取物体外对腺病毒（Adv3）抑制活性检测

材料与方法

1.体外宿主细胞：Vero（非洲绿猴肾细胞）细胞。

2.病毒株：腺病毒（Adv₃）。

3. CPE法检测药物对细胞的毒性。

4. CPE法(细胞病变)检测药物对腺病毒的抑制作用。                  

试验过程

（1）.药物的细胞毒性检测

Vero细胞在96孔细胞培养板中培养形成单层后，加入不同浓度的药液，继续培养3天，用CPE法检测药物对Vero细胞的毒性。

（2）. 药物抗腺病毒作用检测

Vero细胞在96孔细胞培养板中培养形成单层后，用100TCID50的腺病毒（Adv₃）感染细胞，再加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液，继续培养3天，经CPE法确定药物对腺病毒（Adv₃）的抑制作用。  

实验结果： 

实验结果表明金莲花提取物体对Vero细胞的无毒浓度为39.07ug/ml，即（TC0=39.07ug/ml），金莲花提取物在39.07ug/ml的浓度时对腺病毒的抑制率分别为67.1%。

实施例8：

取金莲花提取物25g，加入淀粉细粉200g，用等量递增法混匀，加入滑石粉5g，硬脂酸镁2g，混匀，用85%乙醇制粒，干燥，整粒，压制成1000片，每日3次，每次2片。

实施例9：

取金莲花提取物25g，加入淀粉细粉150g，滑石粉10g，硬脂酸镁5g，混匀，制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒，每日3次，每次2片。

实施例10：

取金莲花提取物50g，加入微晶纤维素250g，交联聚乙烯吡咯烷酮50g，混匀，加入90乙醇制粒，干燥，整粒，加入羧甲基淀粉钠10g，硬脂酸镁5g，混匀，压制成1000片，每日服用3次，每次1片。

实施例11：

取金莲花提取物50g，甘露醇150g，加注射用水2000ml，搅拌使溶解，用1M NaOH溶液调pH至9.60～10.0，搅拌使溶解，滤过，滤液按1％溶液体积量加入活性炭，在70～80℃下加热30分钟，粗滤过，管道及容器用400mL注射用水洗涤，加水到2500ml，药液经0.22μm无菌过滤器过滤，灌装，冻干，压塞，轧盖，制成1000瓶，即得。实验显示本发明的医药用途是制备治疗急、慢性呼吸道疾病、支气管炎、肺气肿的药物。

Claims (6)

1.一种金莲花提取物的制备工艺，其特征在于：将金莲花（毛茛科植物金莲花Trollius chinensis Bunge的干燥花）加5-50倍量的10%-100%乙醇水溶液回流提取1-6次，每次0.5-8小时；

滤过后合并乙醇水提取溶液备用；

将乙醇水提取液回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.00-1.20的浓缩液，静置，滤过，滤液备用；

将浓缩后的乙醇水溶液或直接将乙醇水溶液用大孔吸附树脂、聚酰胺等树脂吸附；

吸附物用水洗，再用10-100%醇洗脱；

收集醇洗脱液；

回收醇，干燥，粉碎，过筛，得金莲花提取物。

2.如权利要求1所述方法提取的金莲花提取物，其特征在于：金莲花提取物中总黄酮含量为20～100%。

3.根据权利要求2所述的金莲花提取物，其特征还于：金莲花提取物可以单独或与各种中药及其提取物制成各种药用剂型。

4.根据权利要求3所述的金莲花提取物，其特征在于： 所说的药用剂型是肌肉或静脉给药制剂，如注射用粉针剂、水针剂。

5.根据权利要求3所述的金莲花提取物，所述的药用剂型是口服给药制剂，如胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、片剂、分散片和冲剂、口服液；阴道、肛门、鼻腔、滴眼剂黏膜给药制剂。

6.权利要求1方法提取的金莲花提取物，其特征还于：金莲花提取物用于制备抗病毒、抗菌、抗炎的药物。