CN101428049B - 抗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
抗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101428049B CN101428049B CN 200810243631 CN200810243631A CN101428049B CN 101428049 B CN101428049 B CN 101428049B CN 200810243631 CN200810243631 CN 200810243631 CN 200810243631 A CN200810243631 A CN 200810243631A CN 101428049 B CN101428049 B CN 101428049B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethanol
- extract
- radix bupleuri
- weight
- pharmaceutical composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 16
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 90
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 193
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 claims description 89
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 claims description 89
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 66
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 66
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 claims description 54
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 claims description 53
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 48
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 43
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 36
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 31
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 30
- 239000012567 medical material Substances 0.000 claims description 29
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 24
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims description 24
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims description 24
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 24
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- GQODBWLKUWYOFX-UHFFFAOYSA-N Isorhamnetin Natural products C1=C(O)C(C)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 GQODBWLKUWYOFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000008800 isorhamnetin Nutrition 0.000 claims description 21
- IZQSVPBOUDKVDZ-UHFFFAOYSA-N isorhamnetin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 IZQSVPBOUDKVDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 claims description 21
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 20
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 20
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N rutin Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N 0.000 claims description 15
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims description 15
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims description 15
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 14
- RTATXGUCZHCSNG-QHWHWDPRSA-N Nicotiflorin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=CC(O)=CC=2)=O)O1 RTATXGUCZHCSNG-QHWHWDPRSA-N 0.000 claims description 13
- KEIZXGINFPDITQ-UHFFFAOYSA-N UNPD138008 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1=C(OC2C(C(O)C(O)C(COC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KEIZXGINFPDITQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- UIDGLYUNOUKLBM-GEBJFKNCSA-N isorhamnetin-3-O-rutinoside Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)O)O2)O)=C1 UIDGLYUNOUKLBM-GEBJFKNCSA-N 0.000 claims description 13
- BGLPQQKZNUKSAR-UHFFFAOYSA-N isorhamnetin-3-O-rutinoside Natural products COc1ccc(cc1O)C2=C(OC3OC(COCC4OC(O)C(O)C(O)C4O)C(O)C(O)C3O)C(=O)c5c(O)cc(O)cc5O2 BGLPQQKZNUKSAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- IEPKWJCBNGNVDF-UHFFFAOYSA-N narcissin Natural products OC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)OC2C(C(O)C(O)C(COC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)O2)O)=C1 IEPKWJCBNGNVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- RTATXGUCZHCSNG-ZFDPGQBLSA-N nicotiflorin Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC2=C(c3ccc(O)cc3)Oc3c(c(O)cc(O)c3)C2=O)O1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1 RTATXGUCZHCSNG-ZFDPGQBLSA-N 0.000 claims description 13
- RTATXGUCZHCSNG-UHFFFAOYSA-N nicotiflorine Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=CC(O)=CC=2)=O)O1 RTATXGUCZHCSNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 11
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims description 11
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 10
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims description 9
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 claims description 3
- 241000202726 Bupleurum Species 0.000 abstract description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 abstract description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 72
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 36
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 21
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 21
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 13
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 12
- 235000019580 granularity Nutrition 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 12
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 4
- LUJAXSNNYBCFEE-UHFFFAOYSA-N Quercetin 3,7-dimethyl ether Natural products C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2OC)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 LUJAXSNNYBCFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PUTDIROJWHRSJW-UHFFFAOYSA-N Quercitrin Natural products CC1OC(Oc2cc(cc(O)c2O)C3=CC(=O)c4c(O)cc(O)cc4O3)C(O)C(O)C1O PUTDIROJWHRSJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OXGUCUVFOIWWQJ-XIMSSLRFSA-N acanthophorin B Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OXGUCUVFOIWWQJ-XIMSSLRFSA-N 0.000 description 4
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 4
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 4
- OEKUVLQNKPXSOY-UHFFFAOYSA-N quercetin 3-O-beta-D-glucopyranosyl(1->3)-alpha-L-rhamnopyranosyl(1->6)-beta-d-galactopyranoside Natural products OC1C(O)C(C(O)C)OC1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OEKUVLQNKPXSOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QPHXPNUXTNHJOF-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-O-beta-L-rhamnopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 QPHXPNUXTNHJOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N quercitrin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N 0.000 description 4
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- -1 2 hours Substances 0.000 description 3
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003502 gasoline Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- JTUQXGZRVLWBCR-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-(phenylmethyl)phenoxy]propan-2-yl]piperidine Chemical compound C1CCCCN1C(C)COC1=CC=CC=C1CC1=CC=CC=C1 JTUQXGZRVLWBCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229960001871 benproperine Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- BNGXYYYYKUGPPF-UHFFFAOYSA-M (3-methylphenyl)methyl-triphenylphosphanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC1=CC=CC(C[P+](C=2C=CC=CC=2)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 BNGXYYYYKUGPPF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 1
- 241000510654 Bupleurum chinense Species 0.000 description 1
- 241000475279 Bupleurum chinense f. vanheurckii Species 0.000 description 1
- 241001132281 Bupleurum marginatum Species 0.000 description 1
- 241000213015 Bupleurum scorzonerifolium Species 0.000 description 1
- 206010008531 Chills Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 1
- 102100032352 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 208000019255 Menstrual disease Diseases 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 206010068676 Pneumoretroperitoneum Diseases 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 208000005727 Retropneumoperitoneum Diseases 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 206010046814 Uterine prolapse Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 description 1
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000001949 anaesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N aristolochic acid I Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C2=C(C(O)=O)C=C3OCOC3=C2C2=C1C(OC)=CC=C2 BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- SKCNIGRBPJIUBQ-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethyl acetate Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCOC(C)=O SKCNIGRBPJIUBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 description 1
- 230000002279 cholagogic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 235000002378 plant sterols Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 229940095453 prednisone 10 mg Drugs 0.000 description 1
- 125000002324 prednisone group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 238000011003 system suitability test Methods 0.000 description 1
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于中药领域，公开了一种抗上呼吸道感染的药物组合物，其主要活性成分为柴胡地上部分提取物，还公开了所述药物组合物的制备方法。其中提取物的活性成分及其含量明确，适于医学制药和治疗，其制备方法简便，得率高，适合工业化生产，以其单一组分或加入一种或多种药学上可以接受的辅料制成各种制剂，用于解热、镇痛、抗炎、抗病毒、抗菌或增强免疫力。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，具体而言，是一种抗上呼吸道感染的药物组合物，其主要活性成分为柴胡地上部分提取物。本发明还涉及该药物组合物的制备方法以及该药物组合物在制备解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒、增强免疫力药物中的应用，尤其是在制备治疗上呼吸道感染疾病药物中的应用。
背景技术
柴胡为常用中药，始载于《神农本草经》，在我国已有2000多年应用历史。柴胡具有疏散退热、舒肝生阳之功效，主治感冒发热、寒热往来、疟疾、月经不调及子宫脱垂等症。现代药理研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用[田义新，等。柴胡药理作用的研究现状[J].吉林农业大学学报，1997，19(S1)：33 36]。柴胡的药效化学成分主要为皂甙、黄酮、挥发油、植物甾醇和多糖等，柴胡黄酮具有较强的抗流感病毒作用，而且具有较好的抗炎、降温效果和对多种细菌有较强抑制或杀灭作用[史青，等.柴胡属植物化学成分及药理研究新进展[J].中国实验方剂学杂志，2002，8(5)：53 56.]。中国药典中收载的柴胡药用部位一般为柴胡的根。而部颁标准中收载的柴酮片为中药柴胡的地上部分通过简单水煎煮、浓缩得到的总黄酮所压成的片剂，用于治疗外感风寒、小儿呼吸道感染等。其制备方法工艺粗糙，原料中的总黄酮的含量很少，还不到1％，并且杂质多，易吸潮，制成的药物没有明确的质量指标成分，每日口服剂量大。
目前，对于有效成分明确并且适于工业化生产的柴胡有效部位的提取物和制备方法的报道较少。专利申请“由柴胡制备中成药柴酮粉制剂及针剂”(CN95111097.7)中公开的提取物的制备方法十分含糊；专利申请“一种抗流感病毒的柴胡黄酮组合物及其制备方法”(CN1389212A)中使用盐酸调节提取溶剂的pH值，因而需进行后续的环保处理；“柴胡茎叶提取物及其制备方法和用途”(CN1528759A)中有关提取物及其制备方法的技术方案是本研究所的研究成果，其技术方案还有待改进。本发明制备工艺有了多处突破性的改进，改进后的工艺步骤更加简便，所得提取物得率高(详见工艺筛选及优化)；提取物中的主要黄酮成分组成及含量发生改变，是与已申请专利不同的新的组合物，本发明提取物中芦丁、烟花苷、水仙苷和槲皮素是占多数的组分，而提取物中槲皮素、山奈酚和异鼠李素的含量比例与上述申请相比也存在较大差异。同时由于药物组成成分发生变化导致本发明提取物具有更明显的药效。
发明内容
本发明是在现有技术的基础上进一步研究实验，提供了一种新的具有抗上呼吸道感染作用的药物组合物。
本发明的药物组合物，由柴胡地上部分提取物为活性成分，以其单一组分或加入一种或多种药学上可以接受的辅料制成。
本发明所述柴胡优选药典中柴胡项下的品种，包括柴胡(Bupleurum chinense DC.)和狭叶柴胡(Bupleurum scorzoneri folium Willd.)。
本发明所述的柴胡还优选烟台柴胡(Bupleurum chinense f.vanheurckii)或竹叶柴胡(Bupleurum marginatum Wall.ex DC)。
本发明的药物组合物中柴胡地上部分提取物由包含下述步骤的方法得到：取柴胡地上部分粉碎，洒水润湿后用无水甲醇、无水乙醇、丙酮、水或其任意比例的混合溶剂回流提取1-3次，每次加入5-6倍上述溶剂回流提取1-2小时，合并提取液，减压浓缩至无有机溶剂，将溶液降温至0-5℃后过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗8-12倍柱体积，再以5-20％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度2.0-6.0ml/min洗脱6-10倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得。
本发明的药物组合物中柴胡地上部分提取物优选由包含下述步骤的方法得到：取柴胡地上部分粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后用95％乙醇回流提取三次。第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，提取2小时。第二次加入药材5倍重量的95％乙醇，提取1小时。第三次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降温至0-5℃后过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得。
所述的柴胡地上部分提取物具有以下特征：
按重量计算，有效成分及其含量比例为芦丁(rutin)∶烟花苷(nicotiflorin)∶水仙苷(narcissin)∶槲皮素(quercetin)∶山奈酚(kaempferol)∶异鼠李素(isorhamnetin)＝15-25.3∶2.1-6.7∶4.7-9∶1-5.6∶0.1-0.7∶0.8-3；
取柴胡地上部分提取物20mg，加30ml甲醇∶浓盐酸＝5∶1(v/v)，回流水解2小时后，水解物成分以槲皮素、山奈酚和异鼠李素为主，按重量计算，三者含量比例为槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝4-7∶1-2∶1-3；
紫外分光光度法测得提取物总黄酮含量在50％-100％之间。
优选地，所述的柴胡地上部分提取物中有效成分的含量以重量计算比例为芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝18-23∶3-5∶6-8∶2-4∶0.2-0.6∶1-2；取20mg所述提取物，加30ml甲醇∶浓盐酸＝5∶1(v/v)，回流水解2小时后，水解物成分以槲皮素、山奈酚和异鼠李素为主，按重量计算，三者含量比例为槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝5∶1∶2；紫外分光光度法测得提取物中总黄酮含量为55％-95％。
提取物的检测方法如下：(1)对照品及供试品溶液的制备：精密称取无水芦丁对照品20mg(120℃干燥至恒重)，置100ml容量瓶中，加60％乙醇适量溶解，并用60％乙醇定容至刻度，摇匀。(2)标准曲线的制备：精确吸取无水芦丁对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml容量瓶中，分别加5、4、3、2、1、0ml 60％乙醇，再加入5％亚硝酸溶液0.3ml，摇匀，放置6min，然后各加入10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加1N氢氧化钠4ml，分别和70％(v/v)硫酸水溶液5.00ml，置60℃恒温水浴中，反应15min，然后水浴冷却10min。同时做空白，于500nm处测定吸光度值。以吸光度值对标样的质量浓度作图，经线形回归即得标准曲线。(3)样品液制备：精密称取30mg柴胡总黄酮粉，置50ml容量瓶中，加60％乙醇适量溶解，并用60％乙醇定容至刻度，摇匀。既得供试品溶液。精密吸取上述溶液1.5ml和2.0ml，照标准曲线项下方法，测定吸光度值，计算柴胡总黄酮含量。
总黄酮中黄酮甙元含量比例的测定如下：(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅烷为填充剂；甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为367nm。理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500。(2)对照品溶液的制备：分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的黄酮甙元对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.03mg、0.03mg、0.02mg的溶液，作为对照品溶液。(3)供试品溶液的制备：取本品中粉约20mg(同时另取本品粉末测定水分)，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇回流提取4小时，提取液蒸干，加甲醇-25％盐酸(4∶1)混合液75ml，同流1小时，放冷，转移到100ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即得。(4)测定方法：分别精密吸取上述三种对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算黄酮苷元的含量比例。
本发明的药物组合物可以仅是柴胡地上部分提取物，也可以是柴胡地上部分提取物与药物中可以接受的相应药用辅料或载体等辅助添加成分组合，并按相应的制药方法加工，即可成为相应的口服型药物制剂，如片剂、缓控释剂、滴丸、颗粒剂、胶囊剂、微丸等。例如，与在口服制剂中可以被接受的崩解剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、填充剂等常用的辅助添加成份混合后，按相应的常规工艺方法处理。即可制成为片剂、丸剂、胶囊剂或适当形式的缓释剂、控释剂等固体制剂形式的口服药物；与常用的增溶剂、乳化剂、等混合，按相应的常规工艺方法处理，即可制成为相应的注射剂药物。由于注射型药物制剂对原料药的纯度要求较高，在制备成注射型药物时，药物中的有效药成分宜选用含量大于80％的柴胡地上部分提取物的单一组分。
本发明的药物组合物优选的剂型为片剂、胶囊、丸剂、栓剂、滴丸剂、注射剂或喷雾剂。
本发明还提供了所述药物组合物的制备方法包含以下步骤：取柴胡地上部分粉碎，洒水润湿后用无水甲醇、无水乙醇、丙酮、水或其任意比例的混合溶剂回流提取1-3次，每次加入5-6倍上述溶剂回流提取1-2小时，合并提取液，减压浓缩至无有机溶剂，将溶液降温至0-5℃后过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗8-12倍柱体积，再以5-20％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度2.0-6.0ml/min洗脱6-10倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥后得到柴胡地上部分提取物，以其单一成分或加入一种或多种药学上可以接受的辅料制成相应的剂型。
本发明的药物组合物优选采用包含以下步骤的制备方法制得：取柴胡地上部分粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后用95％乙醇回流提取三次。第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，提取2小时。第二次加入药材5倍重量的95％乙醇，提取1小时。第三次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降温至0-5℃后过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥后得到柴胡地上部分提取物，以其单一成分或加入一种或多种药学上可以接受的辅料制成相应的剂型。
本发明的药物组合物可以解热、镇痛、抗炎、抗病毒、抗菌、增强免疫力，尤其可以治疗上呼吸道感染。
本发明的药物组合物可以应用于制备解热、镇痛、抗炎、抗病毒、抗菌、增强免疫力药物。本发明的药物组合物尤其应用于制备治疗上呼吸道感染的药物。
与专利申请“一种抗流感病毒的柴胡黄酮组合物及其制备方法”(CN1389212A)中的柴胡黄酮提取物相比，本发明柴胡地上部分提取物的制备方法在整个工艺中未曾涉及酸碱，有利于环保，所用溶剂种类更少，步骤更加简便，更适于工业化生产；所得提取物明显不同，其中的槲皮甙含量很小或为零(上述申请中槲皮甙含量为25-40％，槲皮甙的含量超过其余黄酮含量的总和，是该组合物中含量最大的化合物。而本发明中的组合物以芦丁、烟花苷、水仙苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素六种黄酮为主，几乎不含槲皮甙)；与专利申请“柴胡茎叶提取物及其制备方法和用途”(CN1528759A)中的柴胡茎叶提取物相比，本发明制备工艺有了多处突破性的改进，改进后的工艺步骤更加简便，所得提取物得率更高(详见工艺筛选及优化)；提取物中的主要黄酮成分组成及含量发生改变，是与之不同的新的组合物，本发明提取物中芦丁、烟花苷、水仙苷和槲皮素是占多数的组分，而提取物中槲皮素、山奈酚和异鼠李素的含量比例与上述申请相比也存在较大差异。同时由于药物组成成分发生变化导致本发明提取物具有更明显的药效(详见对比试验部分)。
本发明中的技术方案与现有技术相比有如下优势：
1、步骤更简单，产物得率高，更适于工业化生产；
2、有效成分及其含量更明确，有效成分含量高，有利于药物的制备和质量控制；
3、药物效果好。
附图说明
附图1：本发明柴胡地上部分提取物的HPLC谱图。
附图2：本发明柴胡地上部分提取物水解后的HPLC谱图。
以下通过提取方法对比试验说明本发明的有益效果。
专利申请CN1528759A中所述的提取柴胡茎叶有效成份柴胡总黄酮的提取工艺方法：
本发明所述的提取方法(并非本发明的最优化工艺)：
由此可见，与专利申请CN1528759A中所述的提取方法相比，在相同的原料和及其相似前处理步骤下，本发明提取物的提取方法的工艺步骤更简便，产物得率更高，提取物中柴胡总黄酮含量更高。
以下通过本发明所述提取方法的优化工艺研究进一步对本发明进行说明。
1、仪器与试剂
RE-52C型旋转蒸发器(巩义市予华仪器有限责任公司)；SHZ-DIII型循环水式多用真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；101AS-1型不锈钢数显电热鼓风真空干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)；LIBRORAEL-200电子天平；柴胡地上部分药材(湖北保康荆山天然药业有限公司)；D101、AB-8型大孔吸附树脂(上海华羚树脂有限公司)，聚酰胺(安庆鸿源化工厂)；乙醇(南京化学试剂厂)；蒸馏水(新瑞德纯净水)；其它仪器试剂同分析方法建立项下。
2、提取工艺的研究
结合实际生产情况，本实验采用回流法提取，实验中考察不同因素对提取效果的影响，如提取前药材洒水与否、提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取温度、提取次数等。通过实验结果对各因素进行优选，以确定最佳工艺条件。
2.1提取溶剂的确定
在相同条件下，使用10倍体积(v/w)溶剂、90℃、回流提取2小时，提取三次，考察常用溶剂无水甲醇、无水乙醇、丙酮、水、汽油、乙酸乙酯、氯仿对提取柴胡总黄酮含量的影响，结果见表1.1。
表1.1提取溶剂的确定
| 提取溶剂 | 无水甲醇 | 无水乙醇 | 丙酮 | 水 | 汽油 | 乙酸乙酯 | 氯仿 |
| 柴胡总黄酮含量％ | 3.2011 | 3.1844 | 2.9834 | 2.0812 | 0.25 | 1.9425 | 1.6043 |
从上表中可以看出，无水甲醇、无水乙醇、丙酮、水的提取效果要好于汽油、乙酸乙酯、氯仿，考虑到甲醇的毒性和丙酮的高挥发性，适宜采用较为安全的乙醇水溶液作为提取溶剂。
2.2提取前洒水的影响
取两份相同重量的柴胡，粉碎成相同粒度大小，分别洒水浸润或不处理，采用10倍体积的乙醇，回流提取1小时后，检测提取液中黄酮浓度。结果见表1.2。
表1.2提取前洒水的影响
| 提取前加水浸润 | 提取前不加水浸润 | |
| 提取液总黄酮浓度mg/g | 18.224 | 11.140 |
从上表中可看出提取前加入撒上一定量的水润湿后有助于提高黄酮成分的提取效率。2.3提取过程中不同药材粒度、浸泡时间、提取温度对提取物中总黄酮含量的影响
考察提取过程中药材粉碎粒度(A因素)，浸泡时间(B因素)，提取温度(C因素)三个因素的影响，分别给每个因素设置三个水平，以柴胡总黄酮含量为考察指标，用L9(34)正交表进行正交实验。称取粉碎成不同粒度的柴胡地上部分药材20g，加入10倍量95％乙醇按下表设计提取2次，每次2小时。滤过，滤液减压回收溶剂，于真空干燥箱中减压干燥。冷却，称重，测定总黄酮含量。实验设计及结果见表1.3。
表1.3不同因素对含量的影响结果
采用正交设计助手II V3.1分析软件，由极差分析可知，三组方差值均小于临界值9(a＝0.1)，表明上述三因素影响均不显著，即是说提取过程中药材粉碎粒度，浸泡时间，提取温度对提取过程的影响并不显著。考虑到实际生产状况和节省时间的原则，粒度选择3-4cm，提取前洒水润湿后不浸泡，回流提取即可。
2.4提取溶剂、溶剂倍数、提取次数、提取时间对总黄酮含量的影响
在确定了药材粒度和提取温度后，为了进一步优化提取工艺参数，考虑提取效果主要受提取溶剂(A因素)，溶剂倍数(B因素)，提取次数(C因素)和提取时间(D因素)四个因素的影响，分别给每个因素设置三个水平，以总黄酮得率为考察指标，用L9(34)正交表进行正交实验。其实验设计和结果见表1.4。
表1.4回流提取的因素水平表及结果(L9(34)，n＝3)
上表中，A3B3C3D3为最佳组合，即加入95％乙醇6倍提取三次，每次3小时，可获得含量高的总黄酮。极差分析表明，各因素影响顺序为：提取溶剂＞提取次数＞溶剂倍数＞提取时间。结合实际工业生产情况，因溶剂倍数影响较小，提取时间影响较小，为节约时间，提取时间定为D2。因此，最佳提取条件为提取三次，第一次6倍乙醇回流提取2小时，第二次5倍乙醇回流提取1小时，第三次5倍乙醇回流提取1小时。
提取工艺的确定
综合以上实验结果，确定提取工艺影响最显著的步骤为提取前洒水浸润、提取溶剂、溶剂倍数、提取次数、提取时间，因此确定提取的工艺为：取柴胡地上部分粉碎，洒水润湿后用无水甲醇、无水乙醇、丙酮、水或其任意比例的混合溶剂回流提取1-3次，每次加入5-6倍上述溶剂回流提取1-2小时。优化的提取工艺为：药材粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后用95％乙醇回流提取。第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，加热回流提取2小时。第二次加入5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。第三次加入5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。
2.5两种型号大孔树脂和聚酰胺对柴胡总黄酮静态吸附能力考察
精密称取处理好的2种树脂适量和聚酰胺(约相当于干材料10g左右)，置100ml锥形瓶中，精密加入上样液50ml(总黄酮6.4028mg/ml)，每隔10min振摇20s，持续3h，静止24h后，过滤，得液体样品，测总黄酮含量。结果见表1.5。
表1.5两种大孔树脂和聚酰胺静态吸附速率
| 分离材料 | 总黄酮含量mg/ml |
| 聚酰胺 | 0.1 |
| AB-8 | 0.9 |
| D-101 | 0.8 |
将滤出的树脂或聚酰胺另置100ml锥形瓶中，精密加入95％浓度乙醇100ml，每隔10min振摇20s，3h后，过滤，得液体样品，测总黄酮含量。结果见表1.6。
表1.6两种大孔树脂和聚酰胺静态解吸速率
| 分离材料 | 总黄酮含量mg/ml |
| 聚酰胺 | 3.05 |
| AB-8 | 2.65 |
| D-101 | 2.70 |
按下式计算每种吸附树脂或聚酰胺对柴胡总黄酮的静态饱和吸附量及静态洗脱率，结果见表1.7。
饱和吸附量(mg/g干树脂或聚酰胺)＝(样品总黄酮含量-吸附后滤液中总黄酮含量)/树脂或聚酰胺量；洗脱率＝(洗脱液浓度×洗脱液体积)/饱和吸附量×100％。
表1.7两种大孔树脂和聚酰胺静态饱和吸附量和静态洗脱率测定结果(n＝3)
| 类型 | 样品液浓度/mg/ml | 吸附后浓度/mg/ml | 饱和吸附量/mg/g干树脂或聚酰胺 | 洗脱量/mg/g干树脂或聚酰胺 | 洗脱率(％) |
| 聚酰胺 | 6.4028 | 1.34 | 26.17 | 25.44 | 97.21 |
| AB-8 | 6.4028 | 1.94 | 21.47 | 19.54 | 90.92 |
| D-101 | 6.4028 | 1.67 | 23.30 | 21.30 | 93.32 |
2.6两种大孔树脂和聚酰对柴胡总黄酮动态吸附能力考察
精密称取树脂和聚酰胺适量(约相当于干树脂或聚酰胺20g)，95％乙醇湿法装柱，浸泡24h，，以4倍体积95％乙醇处理，再以大量蒸馏水洗至无醇味。精密吸取样品液100ml(6.4028mg/ml)，流速1ml/min上柱，10ml/瓶收集过柱液，测总黄酮含量，结果见表1.8。
表1.8两种大孔树脂和聚酰动态吸附总黄酮泄露量(mg/g)
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
| 聚酰胺 | 2.76 | 3.52 | 3.94 | 4.47 | 5.85 | 6.23 | 6.76 | 8.16 | 9.11 | 13.60 |
| AB-8 | 2.67 | 4.46 | 5.29 | 8.31 | 11.02 | 12.29 | 13.15 | 13.42 | 15.16 | 19.70 |
| D-101 | 1.79 | 3.72 | 5.01 | 7.33 | 8.30 | 11.04 | 11.49 | 13.05 | 14.64 | 17.34 |
再以蒸馏水洗脱至无色，收集洗脱液，测总黄酮含量。再以95％乙醇洗脱，收集过柱液，测总黄酮含量。各段洗脱液分别集中后，得液体样品，计算各部分总黄酮含量。按下式分别计算比上柱量(S)、比吸附量(A)、比洗脱量(E)。结果见表1.9。
S＝(M上-M残)/M，A＝(M上-M残-M水洗)/M，E＝M洗脱/M。
表1.9两种大孔树脂和聚酰动态吸附洗脱工艺研究(n＝3)
| 类型 | 上柱总黄酮量/mg | 过柱残余总黄酮/mg | 水洗脱总黄酮/mg | 95％乙醇洗脱总黄酮/mg | 比上柱量S(mg/g干树脂或聚酰胺) | 比吸附量A(mg/g干树脂或聚酰胺) | 比洗脱量E(mg/g干树脂或聚酰胺) |
| 聚酰胺 | 640.28 | 50.51 | 102.41 | 527.50 | 27.66 | 22.85 | 24.74 |
| D-101 | 640.28 | 97.04 | 197.00 | 454.66 | 25.76 | 16.42 | 21.56 |
| AB-8 | 640.28 | 91.62 | 103.52 | 483.52 | 27.19 | 22.06 | 23.96 |
2.7结果与讨论
从上述实验结果可以看出，聚酰胺在静态和动态吸附实验中，静态饱和吸附量、静态洗脱率、静态洗脱量、动态比吸附量、动态比上柱量、比洗脱量等指标均优于D-101和AB-8，因此选用聚酰胺分离纯化柴胡总黄酮。
3聚酰胺吸附的工艺优化
3.1样品上样量对柴胡总黄酮收率的影响
每克干聚酰胺吸附22.85毫克柴胡总黄酮，以生药量计，与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)。
3.2聚酰胺对低温和常温两种状态下溶液中黄酮吸附性能的研究
分别精密称取两份聚酰胺适量(约相当于干聚酰胺20g)，95％乙醇湿法装柱，浸泡24h，，以4倍体积95％乙醇处理，再以大量蒸馏水洗至无醇味。分别精密吸取低温(0-5℃)和常温(20-30℃)样品液100ml(6.4028mg/ml)，流速1ml/min上柱，10ml/瓶收集过柱液，测总黄酮含量，结果见表1.10。
表1.10聚酰胺对低温和常温两种温度上样液动态吸附总黄酮泄露量(mg/g)
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
| 常温 | 2.76 | 3.52 | 3.94 | 4.47 | 5.85 | 6.23 | 6.76 | 8.16 | 9.11 | 13.60 |
| 低温 | 0.08 | 0.45 | 0.98 | 2.10 | 2.87 | 3.45 | 3.81 | 4.01 | 4.76 | 5.91 |
从表中明显看出，聚酰胺对低温状态下溶液中黄酮的吸附性能更好。
3.3水洗量的考察
取已处理好的聚酰胺柱(5cm×60cm，聚酰胺用量200g，柱体积350ml)，700ml样品液(6.4028mg/ml)以2.5ml/min速度上柱，待吸附完全后，用蒸馏水洗脱，收集流出液，每350ml为一个单位，烘干称重，洗至流出液近无色且膏重量较少止，共洗10倍柱体积。
3.4洗脱溶媒浓度对柴胡总黄酮收率的影响
黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，考虑到甲醇毒性及丙酮挥发性，本实验选用乙醇的水溶液作为洗脱剂。准确称取处理好的聚酰胺适量(相当于干聚酰胺200g)4份，湿法装柱，700ml样品液(6.4028mg/ml)上柱，待吸附完全后，用蒸馏水洗至无色，然后再分别用10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇各1500ml洗脱，分别得到液体样品，检测总黄酮浓度，计算每部分洗脱液总黄酮含量及收率。结果见表1.11。
表1.11洗脱溶剂筛选结果
| 10％乙醇洗脱 | 20％乙醇洗脱 | 30％乙醇洗脱 | 50％乙醇洗脱 | 70％乙醇洗脱 | |
| 总黄酮含量(g) | 0.49 | 2.56 | 2.33 | 3.46 | 3.67 |
| 总黄酮收率(％) | 5.9 | 32.8 | 52.0 | 77.2 | 81.9 |
注：总黄酮收率(％)＝(洗脱总黄酮量/上样总黄酮量)×100％
由表1.11可以看出，10％洗脱液中黄酮含量较少，除去杂质较多。20％乙醇洗脱液中已经含有较多的黄酮，如果用20％乙醇除杂质，黄酮的损失比较大。70％乙醇洗脱总黄酮收率最高，为81.9％。确定用水和10％乙醇洗脱除杂质，后用70％乙醇洗脱柱子以得到总黄酮。
3.5洗脱液流速对柴胡总黄酮收率的影响
将3份700ml样品液分别缓慢加入已处理好的聚酰胺中，待吸附饱和后，水洗12倍柱体积，以70％乙醇为洗脱剂，分别以2.0、4.0、6.0ml/min的速度进行洗脱，得液体样品，检测测总黄酮含量及收率。结果见表1.12。
表1.12洗脱流速的筛选结果
| 2.0ml/min | 4.0ml/min | 6.0ml/min | |
| 总黄酮含量(g) | 3.66 | 3.67 | 3.52 |
| 总黄酮收率(％) | 81.7 | 81.9 | 78.6 |
由表1.12可以看出，在流速为6.0ml/min时，总黄酮含量和收率较低，流速为2.0，4.0ml/min时，含量和收率无明显差异，为提高工作效率，确定洗脱速度为4.0ml/min。
3.6洗脱液用量对柴胡总黄酮收率的影响
取一根已处理好的聚酰胺柱(规格同上)，按上述工艺参数上样，水洗10倍柱体积后，用10％乙醇洗脱10倍体积，70％乙醇以4.0ml/min速度洗脱，分段收集，每350ml为一个单位，共收集10份，检测总黄酮含量及收率。结果见表1.11。
表1.13洗脱溶剂用量筛选结果
| 洗脱体积(倍) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 总黄酮重量(g) | 0.92 | 2.03 | 1.75 | 1.02 | 0.77 | 0.36 | 0.25 | 0.19 | 0.02 |
| 总黄酮含量(g) | 0.70 | 1.73 | 1.62 | 0.83 | 0.61 | 0.22 | 0.13 | 0.08 | 0.01 |
由表1.13可以看出，洗脱到第9个柱体积时，洗脱物总黄酮重量已明显降低，且含量也已较少，故确定洗脱剂用量为8倍量柱体积。
优化的纯化工艺确定
综合以上实验结果，确定优化的纯化工艺条件为：将待上样液降至低温(0-5℃)，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后，水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱10倍柱体积，再以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得成品。
4制备工艺的放大实验
取柴胡地上部分100kg，粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后提取三次。第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，加热回流提取2小时。第二次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。第三次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降至低温(0-5℃)过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后，水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱，再以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得成品。
表1.14制备工艺考察结果
| 批号 | A | B | C |
| 投料量(kg) | 100 | 100 | 100 |
| 成品(kg) | 2.4 | 2.5 | 2.2 |
| 柴胡总黄酮含量％ | 75.23 | 74.87 | 75.66 |
由表1.14可以看出，本发明优选的工艺工业化生产适应性较好。成品得率、总黄酮含量均较稳定。
下面通过体外和动物实验进一步说明本发明药物的有益效果。
1、解热试验(与专利申请CN1528759A对比试验)
将上述制备方法对比试验中方法1、2、3和4制得的提取物分别称为提取物1、2、3和4，临用前用生理盐水配成相同的所需浓度。
将体重160-200g且体温变化不超过0.3℃的雌性大鼠随机分组，每组10只，分别灌胃给予提取物1、2、3和4(200mg/kg)、阿斯匹林0.3g/kg(阳性组)及等量生理盐水(对照组)，每鼠给药30min后于背部皮下注射2，4-二硝基苯酚1ml/100g(25mg/kg)，分别于注射后、60、90、120、150、180min同法测定各鼠肛温，试验结果如表2.1所示。
表2.1对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热的影响
与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01
表2.1的试验结果显示，阿斯匹林组和提取物2、3、4组在60、90和120min，提取物1组在60和90min都能显著或明显抑制2，4-二硝基苯酚所致大鼠体温升高(P＜0.01，P＜0.05)，提取物3的效果比提取物1明显，提取物4的效果比提取物2明显。
2、镇痛试验
取体重20±2g的雌性小白鼠40只，按文献方法随机分为：空白对照组(生理盐水)、阳性药组(阿司匹林0.15g/kg)、本发明药物组合物高剂量组(200mg/kg)，本发明药物组合物低剂量组(100mg/kg)按上述剂量给药后，分别于30分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸0.1mL/10g，记录注射致痛剂后10分钟内扭体次数，统计结果如表2.2所示。
表2.2扭体次数统计结果(X±S)
与空白对照组相比**p＜0.01，*p＜0.05
试验结果表明本发明阳性药药组和提取物高剂量组能显著减少醋酸所致小鼠的扭体反应次数，低剂量组能减少醋酸所致小鼠的扭体反应次数，具有较好的镇痛功效。
3、抗炎试验
取体重为23-26克的雄性小鼠随机分组，每组10只，分别灌胃给予本发明药物组合物200mg/kg和100mg/kg、强的松10mg/kg(阳性组)及等量生理盐水(对照组)，每天一次，连续三天，末次给药后40分钟给动物左耳均匀涂布二甲苯0.005ml/只.在致炎后30分钟处死动物，用直径为8mm的不锈钢冲子取下左右相同部位耳片，称重，按下式计算肿胀度和肿胀抑制率，结果如表2.3所示。
肿胀度＝(左耳片重-右耳片重)
肿胀抑制率＝(1-给药组肿胀度/对照组肿胀度)×100％
表2.3对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01
表2.3结果显示，绿原酸组、本发明药物组合物高剂量组、低剂量组和强的松组均能抑制二甲苯值小鼠耳肿胀，与对照组比较有统计学差异，表明本发明药物组合物有明显的抗炎作用。
4、体外抗菌试验
本发明药物组合物的最低抑菌浓度(MIC)的部分试验结果如表2.3所示。
表2.4.1对临床分离菌株的MIC(mg/ml)(两次试验平均值)
表2.4.2对标准菌株的MIC
表2.4的试验结果显示：本发明药物组合物对临床分离的常见致病菌均显示出具有一定的抑菌作用。
5、体内抗病毒试验
经预试验测出LD50后进行正式试验。取雌雄各半小鼠随机分组，每组10只。各组分别于感染前1天开始分别灌胃给予本发明药物组合物200mg/kg和100mg/kg、利巴韦林75mg/kg及等量生理盐水(正常对照组、病毒对照组)，连续5天。除正常对照组外，其余各组小鼠在乙醚浅麻醉下，滴鼻感染流感病毒FM1株，接种量为15 LD50，感染后4天各组小鼠称重，脱颈椎处死，解剖，取肺称重，计算各鼠肺指数值和给药组相对于病毒感染组肺指数抑制率，试验结果如表2.5所示。
肺指数＝肺全重(g)/体重(g)×100％(单位：g/100g体重)
肺指数抑制率＝(1-给药肺指数平均值/病毒感染模型组肺指数平均值)×100％
表2.5小鼠流感病毒性肺炎的影响
与空白对照组比较+++p＜0.001，与模型组比较*p＜0.05
表2.5的结果显示，本发明药物组合物高剂量组、低剂量组和利巴韦林组均能明显抑制小鼠流感病毒性肺炎，与病毒对照组比较有统计学差异，表明本发明药物组合物有明显的抗流感病毒作用。
6、对正常小鼠免疫功能的影响
取体重18-22g小鼠60只，雌雄各半，按体积随分n组、每组10只。各组分别于感染前1天开始分别灌胃给予本发明药物组合物200mg/kg和100mg/kg、乌兜铃酸10mg/kg(阳性组)及等量生理盐水(对照组)，连续7天，末次给药后40min，然后各组小鼠尾静脉注射印度墨汁0.05ml/10g体重，分别于1、5min眼眶取血20μl，溶于2ml 0.1％Na2CO3溶液中摇匀，置754型紫外可见光分光光度计在波长700nm处比色，测定光密度(OD)。最后将小鼠脱颈椎处死，取肝、脾重量，按照公式求出廓清指数K，求出吞噬活性(校正廓清指数)a，结果见表2.6。
K＝(logOD1-logOD2)/(t1-t2)
a＝K-3×体重/(肝重+脾重)
表2.6对小鼠单核细胞吞噬功能的影响
与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01
表2.6的结果表明，本发明药物组合物高剂量组和阳性药组对正常小鼠的单核吞噬细胞的吞噬指数和吞噬活性明显增加，吞噬指数与模型组比均有显著性的差异。说明本发明药物组合物对免疫功能有增强作用。
7对上呼吸道咳嗽反应和排痰的影响
7.1对小鼠氨水引咳的影响
取雄性昆明小鼠56只，体重15-17g，随机分为：空白对照组(生理盐水)、阳性药组磷酸苯丙哌林0.05g/kg)、本发明药物组合物高剂量组(200mg/kg)，本发明药物组合物低剂量组(100mg/kg)按上述剂量给药后，给药体积为20ml/kg体重，小鼠分批给药，每批7只，每组各1只小鼠。各批小鼠于给药4小时后于钟罩内接受氨水喷雾，喷雾终止时，立即取出小鼠，然后观察和记录小鼠咳嗽的潜伏期和5分钟内咳嗽的次数。结果见表2.7.1。
表2.7.1对小鼠氨水所致引咳潜伏期和咳嗽次数的影响(X±S)
与空白对照组相比**p＜0.01，*p＜0.05
7.2对祛痰(小鼠酚红法)的影响
取雄性昆明小鼠56只，体重15-17g，随机分为：空白对照组(生理盐水)、阳性药组磷酸苯丙哌林0.05g/kg)、本发明药物组合物高剂量组(200mg/kg)，本发明药物组合物低剂量组(100mg/kg)按上述剂量给药后1小时，小鼠腹腔注射2.5％苯酚红0.1ml/10g体重。30min后，脱颈椎处死小鼠，暴露气管，气管插管并与注射器相连，用5％NaHCO3溶液1ml，缓慢注入气管内，然后轻轻吸出，再用5％NaHCO3水溶液1ml。同上冲洗，如此反复3次，合并三次冲洗液，放置一定时间使杂质沉淀，得到透明红色上清液，用545nm分光光计比色，测量OD值。结果见表2.7.2。
表2.7.2对小鼠气道内酚红排出量的影响(X±S)
与空白对照组相比**p＜0.01，*p＜0.05
下面通过具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应就此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，凡根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种修改、替换或变更，均包括在本发明的范围内。以下各实施例中本发明的药物组合物中的有效成分(柴胡地上部分提取物)均具有上述效果。
具体实施方式
实施例1
取柴胡地上部分粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后用95％乙醇回流提取三次。第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，提取2小时。第二次加入药材5倍重量的95％乙醇，提取1小时。第三次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降温至4℃后过滤得滤液即为上样液。取上清液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥即得提取物。紫外分光光度法测得总黄酮含量为63％，其中芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝20.5∶3.98∶7.26∶2.5∶0.46∶0.8。
取上述提取物1000g，加辅料淀粉1100g，混合均匀，按规方式制粒，压制成10000片，即得到片剂药物。
实施例2
本发明的药物组合物优选采用包含以下步骤的制备方法制得：取柴胡地上部分粉碎至粒度2-3cm，洒水润湿后用水在90℃提取三次。第一次加入药材6倍重量的水，提取2小时。第二次加入药材5倍重量的水，提取2小时。第三次加入药材5倍重量的水，加热回流提取1小时。合并三次提取液，减压浓缩，将溶液降温至5℃后过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗9倍柱体积，再以5％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度2.0ml/min洗脱10倍柱体积，收集洗脱液，浓缩至干后即得提取物。紫外分光光度法测得总黄酮含量为50％，其中芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝15.0∶3.2∶9.0∶3.9∶0.1∶1.5。
取上述提取物550g，微粉化，加入到PEG6000熔融液中，充分搅拌均质，在滴丸机中制成10000粒滴丸，即得到丸剂型药物。
实施例3
取柴胡地上部分粉碎至粒度0.8mm，洒水润湿后用90％乙醇在常温提取。提取液减压浓缩至无醇味，将溶液降温至3℃后过滤得滤液即为上样液。取上清液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度6.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，浓缩至干后即得提取物。紫外分光光度法测得总黄酮含量为92％，其中芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝21.1∶2.1∶7.0∶5.6∶0.5∶1.9。
取本上述提取物2000g，干压制粒，装制胶囊10000粒，即得到胶囊剂药物。
实施例4
取柴胡地上部分粉碎至粒度2-3cm，洒水润湿后用无水乙醇在常温提取2次。第一次加入药材6倍重量的无水乙醇，提取2小时。第二次加入药材5倍重量的无水乙醇，提取1小时。合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降温至0℃后过滤得滤液即为上样液。取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗12倍柱体积，再以5％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度2.0ml/min洗脱12倍柱体积，收集洗脱液，浓缩至干后即得提取物。紫外分光光度法测得总黄酮含量为94％，其中芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝25.3∶6.7∶4.7∶2.5∶0.7∶1.5。
取上述提取物，加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷，滤过，补加注射用水适量，调pH，冻干，即得冻干粉针剂。
实施例5
取柴胡地上部分粉碎至粒度7-9cm，洒水润湿后用60％甲醇在常温提取。提取液减压浓缩至无醇味，将溶液降温至3℃后过滤得滤液即为上样液。取上清液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量(以生药量计)与干聚酰胺用量的比例为1∶1(w/w)，待吸附饱和后。水洗8倍柱体积，再以7％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度5.0ml/min洗脱9倍柱体积，收集洗脱液，浓缩至干后即得提取物。紫外分光光度法测得总黄酮含量为68％，其中芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝25.3∶2.0∶7.0∶1.0∶0.5∶3。
取本上述提取物2000g，干压制粒，装制胶囊10000粒，即得到胶囊剂药物。
Claims (4)
1.一种抗上呼吸道感染的药物组合物，其特征为由柴胡地上部分提取物为活性成分，以其单一组分或加入一种或多种药学上可以接受的辅料制成，所述的柴胡地上部分提取物由包含下述步骤的方法得到：取柴胡地上部分粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后用95％乙醇回流提取三次，第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，提取2小时，第二次加入药材5倍重量的95％乙醇，提取1小时，第三次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降温至0-5℃后过滤得滤液即为上样液，取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量，以生药量计，与干聚酰胺用量的比例为1∶1，w/w，待吸附饱和后，水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得，所述的柴胡地上部分提取物中有效成分的含量以重量计算比例为芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝15-25.3∶2.1-6.7∶4.7-9∶1-5.6∶0.1-0.7∶0.8-3，取20mg所述提取物，加30ml甲醇∶浓盐酸＝5∶1，v/v，回流水解2小时后，水解物成分以槲皮素、山奈酚和异鼠李素为主，按重量计算，三者含量比例为槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝4-7∶1-2∶1-3，紫外分光光度法测得提取物中总黄酮含量在50％-100％之间。
2.根据权利要求1所述的抗上呼吸道感染的药物组合物，其特征为所述的柴胡地上部分提取物中有效成分的含量以重量计算比例为芦丁∶烟花苷∶水仙苷∶槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝18-23∶3-5∶6-8∶2-4∶0.2-0.6∶1-2；取20mg所述提取物，加30ml甲醇∶浓盐酸＝5∶1，v/v，回流水解2小时后，水解物成分以槲皮素、山奈酚和异鼠李素为主，按重量计算，三者含量比例为槲皮素∶山奈酚∶异鼠李素＝5∶1∶2；紫外分光光度法测得提取物中总黄酮含量为55％-95％。
3.根据权利要求1-2中任意一项权利要求所述的抗上呼吸道感染的药物组合物，其特征在于剂型为药学上可以接受的剂型。
4.根据权利要求3所述的抗上呼吸道感染的药物组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取柴胡地上部分粉碎至粒度3-4cm，洒水润湿后用95％乙醇回流提取三次，第一次加入药材6倍重量的95％乙醇，提取2小时，第二次加入药材5倍重量的95％乙醇，提取1小时，第三次加入药材5倍重量的95％乙醇，加热回流提取1小时，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将溶液降温至0-5℃后过滤得滤液即为上样液，取上样液上样于已处理好的聚酰胺柱上，上样量，以生药量计，与干聚酰胺用量的比例为1∶1，w/w，待吸附饱和后，水洗10倍柱体积，再以10％乙醇洗脱除去大量色素，最后以70％乙醇为洗脱剂，洗脱速度4.0ml/min洗脱8倍柱体积，收集洗脱液，减压浓缩干燥后得到柴胡地上部分提取物，以其单一成分或加入一种或多种药学上可以接受的辅料制成相应的剂型。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200810243631 CN101428049B (zh) | 2008-12-11 | 2008-12-11 | 抗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200810243631 CN101428049B (zh) | 2008-12-11 | 2008-12-11 | 抗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101428049A CN101428049A (zh) | 2009-05-13 |
| CN101428049B true CN101428049B (zh) | 2011-08-31 |
Family
ID=40643817
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200810243631 Expired - Fee Related CN101428049B (zh) | 2008-12-11 | 2008-12-11 | 抗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101428049B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102009050407A1 (de) * | 2009-10-22 | 2011-06-22 | Bionorica SE, 92318 | Entzündungshemmendes Mittel enthaltend Hydrolysate aus Pflanzenextrakten |
| CN105194414A (zh) * | 2015-10-30 | 2015-12-30 | 隋风翔 | 一种治疗上呼吸道感染的中药组合物 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1430996A (zh) * | 2003-01-15 | 2003-07-23 | 南通精华制药有限公司 | 大柴胡口服制剂及其生产方法 |
| CN1528759A (zh) * | 2003-09-29 | 2004-09-15 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 柴胡茎叶提取物及其制备方法和用途 |
| CN1593636A (zh) * | 2004-06-25 | 2005-03-16 | 张晴龙 | 一种柴胡口腔崩解片及其制备方法 |
| CN1626124A (zh) * | 2003-12-11 | 2005-06-15 | 天津天士力制药股份有限公司 | 一种小柴胡汤滴丸 |
| CN1899333A (zh) * | 2005-07-25 | 2007-01-24 | 郭爱华 | 一种柴胡提取物、其制备方法及其应用 |
-
2008
- 2008-12-11 CN CN 200810243631 patent/CN101428049B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1430996A (zh) * | 2003-01-15 | 2003-07-23 | 南通精华制药有限公司 | 大柴胡口服制剂及其生产方法 |
| CN1528759A (zh) * | 2003-09-29 | 2004-09-15 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 柴胡茎叶提取物及其制备方法和用途 |
| CN1626124A (zh) * | 2003-12-11 | 2005-06-15 | 天津天士力制药股份有限公司 | 一种小柴胡汤滴丸 |
| CN1593636A (zh) * | 2004-06-25 | 2005-03-16 | 张晴龙 | 一种柴胡口腔崩解片及其制备方法 |
| CN1899333A (zh) * | 2005-07-25 | 2007-01-24 | 郭爱华 | 一种柴胡提取物、其制备方法及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101428049A (zh) | 2009-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101244129B (zh) | 拉萨大黄提取物、其制备方法及其在制备治疗心脑血管疾病制剂中的应用 | |
| US9687516B2 (en) | Preparation method for extractive of jinxuan hemorrhoid washing powder botanicals | |
| CN1872106A (zh) | 山香圆叶在治疗病毒性感冒疾病中的应用 | |
| CN104644711A (zh) | 一种艾纳香属植物提取物及其制备方法与应用 | |
| CN101601666B (zh) | 了哥王提取物及其制备方法和用途 | |
| CN102349924A (zh) | 一种积雪草三萜酸单葡萄糖苷组合物及其制备方法、定量分析方法和应用 | |
| CN114524825A (zh) | 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
| CN101428090B (zh) | 一种具有明确谱效关系的西藏胡黄连组合物 | |
| CN101843667B (zh) | 一种双黄连药物组合物及其制备方法 | |
| CN100475228C (zh) | 一种杏香兔耳风提取物及其制备方法 | |
| CN101428049B (zh) | 抗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法和应用 | |
| CN1775267A (zh) | 一种开口箭提取物及其制备方法和应用 | |
| CN103623075A (zh) | 金莲花提取物的制备方法 | |
| CN101880306B (zh) | 黄腊果皂苷类成分及其制备方法和应用 | |
| CN104398950B (zh) | 一种菖蒲四味抗癌提取物及其制备方法和应用 | |
| CN1985873B (zh) | 甘草酸或其盐、人参和黄芪的药物组合物 | |
| CN105198897A (zh) | 一种新的贝壳杉烷类二萜化合物及其制备方法和治疗肝癌的医药用途 | |
| CN103083388B (zh) | 猪牙皂总皂苷的制备方法 | |
| CN102190692A (zh) | 一种新的二氢黄酮类化合物的制备方法及医药用途 | |
| CN104820029A (zh) | 一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法 | |
| CN100584345C (zh) | 具抗病毒作用的小紫金牛提取物及其提取方法和应用 | |
| CN101428077B (zh) | 治疗糖尿病的中药组合物 | |
| CN100448450C (zh) | 鸢尾总黄酮提取物的用途 | |
| CN101040899B (zh) | 一种抗肿瘤的中药组合物及其制剂和制备方法 | |
| CN103393738B (zh) | 一种防治甲型h1n1流感病毒的中药组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110831 Termination date: 20131211 |