CN104644711A

CN104644711A - 一种艾纳香属植物提取物及其制备方法与应用

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Publication number: CN104644711A
Application number: CN201410671304.0A
Authority: CN
Inventors: 叶文才; 李药兰; 张晓琦; 范春林; 王国才; 李满妹; 王英; 王磊
Original assignee: Jinan University
Current assignee: Jinan University; University of Jinan
Priority date: 2014-11-21
Filing date: 2014-11-21
Publication date: 2015-05-27
Anticipated expiration: 2034-11-21
Also published as: CN104644711B

Abstract

本发明属于植物天然药物领域，具体公开了一种艾纳香属植物提取物及其制备方法与应用。所述提取物含有质量百分比为10~99%的总咖啡酰奎宁酸。其制备方法包括如下步骤：S1.将艾纳香属植物的全草或一部分粉碎，用有机溶剂、水或有机溶剂的水溶液提取，得粗提物；S2.将粗提物用正丁醇萃取或经大孔吸附树脂柱纯化得艾纳香属植物提取物。该提取物具有很好的抗病毒作用，可用于制备预防和治疗病毒感染的药物和保健品，其有效部位成分明确，毒性小，药理作用强，具有良好的药用前景；此外，其制备工艺简单、适合于大规模生产。

Description

一种艾纳香属植物提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于植物天然药物领域，具体涉及一种艾纳香属植物提取物及其制备方法与应用。

背景技术

呼吸道病毒感染是严重危害人类健康的传染性疾病之一，其中呼吸道合胞病毒、流感病毒和副流感病毒是呼吸道病毒感染的主要病原体。呼吸道合胞病毒(respiratory syncytium virus,RSV)属副粘病毒科肺病毒属，它所引起的呼吸道感染、喉炎、气管炎、支气管炎和肺炎等是临床上的常见病与多发病，易感人群为小孩和老人。RSV感染可能对婴儿、早产儿及患有慢性肺部疾病、先天性心脏病和免疫受抑制的儿童的生命构成严重威胁。血清学统计表明，100％的儿童成年以前都感染过RSV。迄今为止，对RSV感染既无疫苗预防，也无有效的治疗手段。核苷类药物病毒唑(ribavirin)是唯一被FDA批准治疗RSV感染的化学药物，但由于其疗效有限、毒副作用大，临床应用效果并不理想。另外，RSV抗体类药物(如RSV单克隆抗体Synagis)虽然疗效较好，但使用周期长、费用高，尚未广泛应用于临床。因此，亟需寻找和开发使用安全、特异性强的高效抗RSV感染药物。流感病毒(influenza virus，Flu)长期以来一直威胁着人类健康，是一种造成人类和动物患流行性感冒的RNA病毒，传染性强、传播迅速，容易在世界范围内发生周期性大流行。目前尚缺乏有效的治疗方法。接种疫苗虽可降低发病率和减轻症状，但由于流感病毒不断发生抗原性变异，不利于及时制备出高效、有特异性预防作用的疫苗。因此，面对流感病毒的威胁，特别是近年来禽流感疫情的爆发，抗流感病毒药物的研究更具现实意义和紧迫性，亟待有所突破。

滇桂艾纳香Blumea riparia(Bl.)DC.又名假东风草等，为多年生木质草本菊科植物。文献报道滇桂艾纳香全草均可入药，具有补血、活血、敛血、止血之功效，用于治疗经期提前、产后血崩等；是预防和治疗药物流产后出血的中药单方制剂妇血康颗粒的主药；未涉及到抗病毒活性(蒋伟哲等，中国临床新医学，2014，7(5)：407－410)。文献报道滇桂艾纳香主要含有黄酮类、有机酸、甾体类等化合物(姜建萍，湖南中医药大学博士学位论文：壮药滇桂艾纳香止血药效的实验研究，2010年5月)；从艾纳香属植物(中国约有30种植物)中分离得到的化合物超过100种，主要为黄酮类化合物、苯丙素类、萜类、噻吩类、挥发油类化合物等(袁宁宁等，广州化工，2012，40(24)：35－37,62)；未涉及到咖啡酰奎宁酸类化合物。文献报道艾纳香属植物主要有抑菌活性，抗疱疹病毒(涉及Blumea lacera有抗HSV-1，HSV-2病毒的活性)、抗肿瘤、抗氧化的活性(袁宁宁等，广州化工，2012，40(24)：35－37,62)，未涉及到艾纳香属植物抗呼吸道病毒活性。有文献报道用大孔树脂吸附法纯化滇桂艾纳香总黄酮的工艺，但活性不清楚(陈伟鹏等，中华中医药学刊，2014，32(5)：1205－1208)。滇桂艾纳香中总咖啡酰奎宁酸部位及其预防与治疗呼吸道病毒感染，未见报道。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种中药提取物，该提取物是从菊科艾纳香属植物中提取得到，含有质量百分比为10～99％的总咖啡酰奎宁酸。

本发明的另一目的在于提供一种上述中药提取物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供一种上述中药提取物的应用。

本发明的上述目的通过以下方案予以实现：

一种中药提取物，是从菊科艾纳香属植物中提取得到，含有质量百分比为10～99％的总咖啡酰奎宁酸。

本发明首次从艾纳香属植物中提取得到了一种含有总咖啡酰奎宁酸的提取物，提供了一种全新的中药提取物。该提取物与现有的具有抗病毒作用的中药提取物相比具有更优异的活性，尤其是对呼吸道合胞病毒(RSV)，其选择性指数(SI值)高于利巴韦林10多倍。该提取物是通过运用中药现代化手段结合现代药理技术，首先从成千上万种中药材中筛选出具有抗病毒前景的艾纳香属植物，然后再经过大量的实验摸索提取条件及纯化工艺制备出具有上述优异抗病毒活性部位。

优选地，所述的提取物，主要5-O-咖啡酰奎宁酸(5-O-caffeoylquinic acid，BR-1)、4-O-咖啡酰奎宁酸(4-O-caffeoylquinic acid，BR-2)、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸(1,5-O-dicaffeoylquinic acid，BR-3)、3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸(3,4-O-dicaffeoyl-epi-quinic acid，BR-4)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸(3,5-O-dicaffeoylquinic acid，BR-5)、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸(3,4-O-dicaffeoylquinic acid，BR-6)和3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸(3,4,5-O-tricaffeoylquinic acid，BR-7)；所述7种咖啡酰奎宁酸占总咖啡酰奎宁酸质量的20-80％。本发明通过了一系列的色谱技术，对上述菊科艾纳香属植物提取物中的主要成分进行了结构鉴定，明确了提取物中的有效成分，有利于用药安全。

化合物BR-1～BR-7的结构式如下所示：

更优选地，所述的提取物，含有1～5％的5-O-咖啡酰奎宁酸、1～5％的4-O-咖啡酰奎宁酸、1～3％的1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、20～30％的3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸、 20～30％的3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、20～30％的3,4-O-二咖啡酰奎宁酸和10～15％的3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸；所述百分比为质量百分比，以提取物总质量为基准计算。

优选地，所述菊科艾纳香属植物包括：滇桂艾纳香Blumea riparia、六耳铃Blumea lanciniata、光叶艾纳香Blumea eberhardtii、东风草Blumea megacephala、高艾纳香Blumea repanda与艾纳香Blumea balsmifera。

更优选地，所述菊科艾纳香属植物为滇桂艾纳香Blumea riparia。

本发明还提供一种上述提取物的制备方法，包含如下步骤：

S1.取艾纳香属植物的全草或一部分，用有机溶剂、水或有机溶剂的水溶液提取，得粗提物；

S2.将粗提物用正丁醇萃取或经大孔吸附树脂柱纯化得艾纳香属植物提取物；

其中，S1.中所述的有机溶剂为乙醇、甲醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯和/或丙酮。

优选地，S1.中所述的提取是指将粉碎的艾纳香属植物干燥全草或一部分，用质量百分比浓度为0～100％的有机溶剂水溶液或水渗漉提取或回流提取，过滤提取液，滤液合并后经减压浓缩、干燥后得到粗提物。

优选地，所述渗漉提取的时间为7～10天；所述回流提取的次数为1～3次，每次1～3小时。

更优选地，步骤S1.为：将艾纳香属植物的全草或一部分的干燥药材粉碎，用有机溶剂的水溶液提取，减压浓缩(该步骤的作用是除醇和浓缩)得到粗提物；粗提物用正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收，即得提取物；或将粗提物经过大孔吸附树脂柱纯化得到滇桂艾纳香提取物。

优选地，S1.中所述的艾纳香属植物为滇桂艾纳香Blumea riparia、六耳铃Blumea lanciniata、光叶艾纳香Blumea eberhardtii、东风草Blumea megacephala、高艾纳香Blumea repanda或/和艾纳香Blumea balsmifera；S1.中所述的有机溶剂的水溶液为质量分数为30％～70％的乙醇或甲醇水溶液；S2.中粗提取物经正丁醇萃取后进一步通过大孔吸附树脂柱纯化。

优选地，所述的大孔吸附树脂柱纯化方法为：将S1.中所述粗提物过大孔树脂柱，先用质量百分比为10～20％乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用质量百分比为30～70％乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥得艾纳香属植物提取物。

更优选地，艾纳香属植物粗提物用正丁醇萃取后还可进一步用大孔树脂柱进行纯化，方法为：粗提物经步骤S2.中正丁醇萃取后，将萃取液浓缩，然后再过大孔树脂柱，先用质量百分比为10～20％乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用质量百分比为30～70％乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥得艾纳香属植物提取物。

本发明还提供一种上述提取物在制备具有抗呼吸道病毒作用的药物或保健品中的应用，所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)或副流感病毒(PIV)。

滇桂艾纳香提取物在制备具有抗病毒作用的药物或保健品中的应用。

优选地，所述病毒为呼吸道病毒。

更优选地，所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)或副流感病毒(PIV)。

有益效果：

1、本发明首次从艾纳香属植物中提取出总咖啡酰奎宁酸用于预防和治疗呼吸道病毒感染，有效成分明确，毒性小，药理作用强，具有良好的药用和保健前景。尤其是从滇桂艾纳香中提取出的总咖啡酰奎宁酸，经抗病毒实验验证，对各呼吸道病毒有不同程度的体外抑制作用，其中对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制活性最好，半数抑制浓度(IC50值)低于阳性对照药利巴韦林，而且滇桂艾纳香提取物的毒性低，其选择性指数(SI值)高于利巴韦林10多倍；动物试验表明，本发明提供的滇桂艾纳香提取物在小鼠体内不但可减少其肺组织中病毒的含量，而且可缓解由呼吸道病毒感染引起的肺部炎症，急性毒性结果显示，该提取物在小鼠体内基本无毒。

2、本发明的原料滇桂艾纳香资源广泛、价廉，制备工艺简单、易于大规模生产，所得提取物中总咖啡酰奎宁酸含量可达50％以上。

3、本发明中的含有5-O-咖啡酰奎宁酸、4-O-咖啡酰奎宁酸、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸和3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸等7种成分的总含量为10-90％的有效部位可与药学上可接受的赋型剂一起，采用本领域的常规方法制备成各种剂型，如片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂和口服液等。给药剂量为50-500mg/人/次，每天1-3次。

附图说明

图1为小鼠肺部组织病理学变化图(100×)。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。

实施例1 滇桂艾纳香提取物的制备

干燥的滇桂艾纳香(Blumea riparia)全草(产于广西百色)粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液，把所得到的浓缩液用500ml的正丁醇萃取3次，合并3次正丁醇萃取液，减压回收得到13.0g干浸膏，即本发明滇桂艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为82％。

实施例2 滇桂艾纳香提取物的制备

干燥的滇桂艾纳香(Blumea riparia)(产于广西百色)粗粉1000g，用5000ml的50％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液，把所得到的浓缩液用500ml的正丁醇萃取3次，合并3次正丁醇萃取液，减压回收得到16.0g干浸膏，即本发明滇桂艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为67％。

实施例3 滇桂艾纳香提取物的制备

干燥的滇桂艾纳香(Blumea riparia)(产于广西百色)粗粉1000g，用5000ml的95％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液，把所得到的浓缩液用500ml的正丁醇萃取3次，合并3次正丁醇萃取液，减压回收得到22.0g干浸膏，即本发明滇桂艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为55％。

实施例4 滇桂艾纳香提取物的制备

干燥的滇桂艾纳香(Blumea riparia)全草(产于广西百色)粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液。

称取大孔吸附树脂(D101)2000g，加蒸馏水4000ml，搅拌均匀，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h；待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用95％乙醇湿法装柱；接着用95％乙醇清洗柱子至流出液与水(1∶5)混合不呈浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道；用2％NaOH通过树脂柱，浸泡2-4h，再用蒸馏水洗至中性，备用。

将上述滇桂艾纳香浓缩液稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为15％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为50％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集50％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到滇桂艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为50％。

实施例5 滇桂艾纳香提取物的制备

干燥的滇桂艾纳香(Blumea riparia)全草(产于广西百色)粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液，把所得到的浓缩液用500ml的正丁醇萃取3次，合并3次正丁醇萃取液，减压回收得到13.0g干浸膏。

将上述滇桂艾纳香干浸膏加水稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为15％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为40％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集40％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到滇桂艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为90％以上。其中含有，2％的5-O-咖啡酰奎宁酸、5％的4-O-咖啡酰奎宁酸、2％的1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、21％的3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸、28％的3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、22％的3,4-O-二咖啡酰奎宁酸和11％的3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸。

实施例6 滇桂艾纳香提取物的制备

将上述滇桂艾纳香干浸膏加水稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为20％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为60％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集60％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到滇桂艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为80％以上。其中含有，2％的5-O-咖啡酰奎宁酸、4％的4-O-咖啡酰奎宁酸、3％的1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、28％的3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸、23％的3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、22％的3,4-O-二咖啡酰奎宁酸和14％的3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸。

实施例7 六耳铃提取物的制备

干燥的六耳铃Blumea lanciniata(产于云南)全草粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液。

将上述六耳铃浓缩液稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为15％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为50％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集50％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到六耳铃提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为45％。

实施例8 光叶艾纳香提取物的制备

干燥的光叶艾纳香(Blumea eberhardtii)(产于云南)全草粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液。

将上述光叶艾纳香浓缩液稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为15％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为50％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集50％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到光叶艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为31％。

实施例9 东风草提取物的制备

干燥的东风草(Blumea megacephala)(产于云南)全草粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液。

将上述东风草浓缩液稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为10％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为70％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集70％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到东风草提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为20％。

实施例10 高艾纳香提取物的制备

干燥的高艾纳香(Blumea repanda)(产于云南)全草粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液。

将上述高艾纳香浓缩液稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为15％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为50％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集50％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到高艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为42％。

实施例11 艾纳香提取物的制备

干燥的艾纳香(Blumea balsmifera)(产于云南)全草粗粉1000g，用5000ml的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收至无醇味，得到浓缩液。

将上述艾纳香浓缩液稀释至3000ml，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000ml质量百分比浓度为15％的乙醇水溶液洗脱柱子，再用20000ml质量百分比浓度为50％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集50％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到艾纳香提取物。经测定，总咖啡酰奎宁酸的质量含量为45％。

实施例12、动物急性毒性试验

健康雄性ICR小鼠(7周龄，购自广东省医学实验动物中心(合格证号SCXK(粤)2003-2002))，体重18-22克，用0.3％羧甲基纤维素水溶液配制滇桂艾纳香提取物(实施例1)悬液，用之前超声混匀，灌胃滇桂艾纳香提取物每天5.0g/kg/d，连续14天，未见小鼠死亡，解剖小鼠，未发现心、肝、肾、脾、肠等重要脏器的肿大，未出现出血点等异常现象。

实施例13、艾纳香属植物提取物及咖啡酰奎宁酸BR-1～BR-7单体体外抗呼吸道病毒活性

细胞、病毒和实验材料：选用呼吸道合胞病毒(RSV)，宿主细胞为喉癌细胞(Hep-2)；选用副流感3型病毒(PIV 3)、宿主细胞为Hep-2和甲型流感病毒(Flu A，H3N2)，宿主细胞为狗肾传代细胞(MDCK)。

阳性对照药为利巴韦林(病毒唑)；细胞生长在质量百分比浓度为10％的胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中；维持液为2％FBS的DMEM培养基。

样品溶液的配制：将实施例1～10所得艾纳香属植物提取物、单体和病毒唑用维持液配制成200μg/mL的样品溶液。

用四唑盐(MTT)比色法测定化合物的细胞毒性：将Hep-2细胞或MDCK细胞培养在96孔培养板中，等单层细胞长好后，加入用维持液稀释好的样品(浓度为500～15.7μg/mL)，在37℃，5％CO₂培养箱中培养3天。加入10μl MTT溶液(5mg/mL，用缓冲溶液配置)，继续培养4小时。吸出样品溶液，加入二甲亚砜，室温下，将96孔板置于微空孔板振荡器中振荡10分钟。用酶标仪测定各孔的OD值，测量波长为570nm，参比波长为630nm，计算样品对细胞的半数致死毒性浓度(CC₅₀)。每组设4个平衡孔，每组实验重复3次。计算结果，画出曲线，求出半数毒性浓度(CC₅₀)。

通过观察样品对细胞病变效应的抑制程度(cytopathic effect reduction assay)测定抗病毒活性：将Hep-2细胞或MDCK细胞培养在96孔培养板中，等单层细胞长好后，加入用维持液稀释好的100倍半数感染量(100TCID₅₀)的病毒液，再加入用维持液稀释好的系列浓度样品溶液(浓度为100～1.6μg/mL)。在37℃，5％CO₂培养箱中培养4天。每天于倒置显微镜下观察细胞病变效应(CPE)的程度，并记录：－表示无CPE；+表示0～25％细胞有CPE；2+表示25～50％细胞有CPE；3+表示50～70％细胞有CPE；4+表示75～100％细胞有CPE。最后估计出半数抑制浓度(IC₅₀)。选择性指数(SI)＝CC₅₀/IC₅₀。实验结果见表1：

表1 滇桂艾纳香提取物和咖啡酰奎宁酸BR-1～BR-7单体的抗呼吸道病毒活性

表2 艾纳香属植物提取物抗呼吸道病毒活性

表1中的数据说明(IC₅₀值越低说明抗病毒作用越好，CC₅₀值越高说明对细胞的毒性越小，SI值越大说明越有利于开发成药物)，滇桂艾纳香提取物及其中的单体化合物对各呼吸道病毒有不同程度的体外抑制作用。其中对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制活性最好，半数抑制浓度(IC₅₀值)低于阳性对照药利巴韦林，而且滇桂艾纳香提取物的毒性低，其选择性指数(SI值)高于利巴韦林10多倍。

表2中的数据说明，艾纳香属植物提取物均显示出一定的抗呼吸道病毒作用，尤其是在实施例5和6条件下制备得到的滇桂艾纳香提取物，其抗病毒活性最好，其半数抑制浓度(IC50值)远远低于利巴韦林，选择性指数(SI值)远远高于利巴韦林。

实施例14、滇桂艾纳香提取物体内抗病毒作用

实验动物：3周龄BALB/C雄性或雌性小白鼠(11～15g)。(购自广东省医学实验动物中心(合格证号SCXK(粤)2003-2002))

RSV感染小鼠模型：选用BALB/C小鼠60只，雄雌各半，随机分成6组，分别为滇桂艾纳香提取物(实施例4)高剂量组(400mg/kg·d)、中剂量组(200mg/kg·d)、低剂量组(100mg/kg·d)、利巴韦林(50mg/kg·d)、病毒阳性和生理盐水阴性对照组，每组10只。灌胃给药，阳性和阴性对照组灌胃生理盐水。三天后，经鼻滴入RSV悬液(TCID₅₀为2×10⁶/ml)，继续灌胃给药四天，观察小鼠存活情况。实验前一天禁食不禁水，第五天处死小鼠，无菌取肺组织，匀浆、用维持液吹打悬浮、离心、稀释，接种在Hep-2细胞上，采用细胞病变效应抑制法测定病毒滴度，计算病毒抑制率，实验结果见表3，可见，与病毒对照组相比，利巴韦林(50mg/kg/d)和高剂量滇桂艾纳香提取物(400m/kg/d)都能显著的降低小鼠肺组织内的RSV含量，且具有显著性差异(P<0.001)，滇桂艾纳香提取物低剂量组(100mg/kg/d)小鼠肺组织中的病毒滴度也明显的地下降(P<0.01)。

RSV感染小鼠肺组织病理学检查：将另一部分小鼠的肺组织用4％甲醛溶液进行固定，经脱水及包埋后，切片，然后进行苏木素-伊(Hematoxylin-Eosin，HE)常规染色，显微镜下观察肺组织病理性改变，结果见图1。如图1所示，与正常小鼠(空白对照组)相比，病毒对照组的小鼠经鼻腔吸入的RSV悬浮液后，肺部出现了比较严重的组织病理学改变，表现为：肺泡变小，肺泡壁变厚，支气管壁增厚，肺组织炎性浸润。与病毒对照组相比，口服400mg/kg/d滇桂艾纳香提取物后，肺组织中的炎性浸润明显改善，肺泡壁变薄，肺泡腔增多。

以上结果表明，滇桂艾纳香提取物不但能减少病毒在小鼠体内的复制，而且能减弱病毒引起的肺部炎症反应。

表3 滇桂艾纳香提取物体内抗呼吸道合胞病毒实验结果

实施例8、滇桂艾纳香提取物的胶囊剂的制备

把本发明滇桂艾纳香提取物(实施例1)100g和微粉硅胶200g充分混合均匀，过筛，加入适量的硬脂酸镁，混匀，用干法造粒机制粒，过筛，筛取40-80目之间的颗粒，装入胶囊，每粒装0.3g。

实施例15、滇桂艾纳香提取物的片剂的制备

把本发明滇桂艾纳香提取物(实施例1)200g和羟丙纤维素120g、微粉硅胶30g混合均匀，用10％预胶化淀粉浆作为粘合剂，湿法造粒，烘干，加入适量的硬脂酸镁混合，压制成2000片片剂。

实施例16、滇桂艾纳香提取物中咖啡酰奎宁酸的HPLC检测方法

5-O-咖啡酰奎宁酸(5-O-caffeoylquinic acid，BR-1)、4-O-咖啡酰奎宁酸(4-O-caffeoylquinic acid，BR-2)、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸(1,5-di-O-caffeoylquinic acid，BR-3)、3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸(3,4-O-dicaffeoyl-epi-quinic acid，BR-4)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸(3,5-O-dicaffeoylquinic acid，BR-5)、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸(3,4-O-dicaffeoylquinic acid，BR-6)和3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸(3,4,5-O-tricaffeoylquinic acid，BR-7)等7个咖啡酰奎宁酸为本发明滇桂艾纳香总咖啡酰奎宁酸的主要有效成分，可以作为质量控制的指标成分。按重量百分比计，滇桂艾纳香总咖啡酰奎宁酸的含量应大于50％。

采用高效液相色谱法(HPLC-DAD)进行分析，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C₁₈柱(4.6x 250mm,5μm)，流动相为乙腈-0.5‰甲酸水溶液梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，采用Agilent 1200Series HPLC泵，Agilent 1200Series自动进样器，紫外光检测器，检测波长208，327nm。BR-1～BR-7的保留时间分别为5.55、8.80、12.78、23.59、25.16、27.66和50.68min。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种中药提取物，是从菊科艾纳香属植物中提取得到，其特征在于，含有质量百分比为10~99%的总咖啡酰奎宁酸。

2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，主要含有5-O-咖啡酰奎宁酸、4-O-咖啡酰奎宁酸、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸和3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸；所述7种咖啡酰奎宁酸占总咖啡酰奎宁酸质量的20~80%。

3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，含有1~5%的5-O-咖啡酰奎宁酸、1~5%的4-O-咖啡酰奎宁酸、1~3%的1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、20~30%的3,4-O-二咖啡酰表奎宁酸、20~30%的3,5~O-二咖啡酰奎宁酸、20~30%的3,4-O-二咖啡酰奎宁酸和10~15%的3,4,5-O-三咖啡酰奎宁酸；所述百分比为质量百分比，以提取物总质量为基准计算。

4.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，菊科艾纳香属植物包括：滇桂艾纳香Blumea riparia、六耳铃Blumea lanciniata、光叶艾纳香 Blumea eberhardtii、东风草 Blumea megacephala、高艾纳香 Blumea repanda与艾纳香Blumea balsmifera。

5.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述菊科艾纳香属植物为滇桂艾纳香Blumea riparia。

6.权利要求1~4任一项提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

S1. 取艾纳香属植物的全草或一部分，用有机溶剂、水或有机溶剂的水溶液提取，得粗提物；

S2. 将粗提物用正丁醇萃取或经大孔吸附树脂柱纯化得艾纳香属植物提取物；

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，S1.中所述的艾纳香属植物为滇桂艾纳香Blumea riparia、六耳铃Blumea lanciniata、光叶艾纳香 Blumea eberhardtii、东风草 Blumea megacephala、高艾纳香 Blumea repanda或/和艾纳香Blumea balsmifera；S1.中所述的有机溶剂的水溶液为质量分数为30%~70%的乙醇或甲醇水溶液；S2.中粗提取物经正丁醇萃取后进一步通过大孔吸附树脂柱纯化。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂柱纯化方法为：将S1中所述粗提物过大孔树脂柱，先用质量百分比为10~20%乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用质量百分比为30～70%乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥得艾纳香属植物提取物。

9.权利要求1~4任一项提取物在制备具有抗呼吸道病毒作用的药物或保健品中的应用，所述的病毒为呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒或副流感病毒。

10.权利要求5所述的提取物在制备具有抗病毒作用的药物或保健品中的应用。