CN104130127A

CN104130127A - 一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法

Info

Publication number: CN104130127A
Application number: CN201410271646.3A
Authority: CN
Inventors: 毛金玲; 雷飞凤; 农常东; 罗盛东
Original assignee: GUANGXI MEDICTOP PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GUANGXI MEDICTOP PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-06-18
Filing date: 2014-06-18
Publication date: 2014-11-05
Anticipated expiration: 2034-06-18
Also published as: CN104130127B

Abstract

本发明公开了一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，属于中药提取工艺技术领域。该方法由以下工艺制得氯原酸单体：水提、浓缩、大孔树脂吸附分离、洗脱、纯化、进一步提纯，经HPLC分析测定化合物C为≥98.6%氯原酸，为氯原酸单体。本发明从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，解决制备纯度不高、制备量小、制备过程复杂难于实现工业化生产的问题，采用极性大孔树脂柱富集、混合溶剂分相法结合，实现氯原酸分布梯度纯化，提取的纯度高，且工艺步骤简单，适合工业化生产。

Description

一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法

技术领域

本发明涉及中药提取工艺技术领域，具体涉及一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法。

背景技术

滇桂艾纳香Blumea riparia(BL.)DC，在《中国植物志》里亦有收载，称假东风草[1]，民间习用全草入药。《中华药海》中记载，滇桂艾纳香性味归经:淡、甘平，入肝、肾、膀胱三经；功效主治活血止血——本品甘淡入肝，养肝活血，收敛止血，具有活血不伤血、止血不留淤之功，可用于各种出血症；利水消肿——本品甘淡渗利，可利湿行水，主治小便不利浮肿症，用其性平、无寒热、偏热颇，故寒症、热症可用之，尤对产后浮肿症佳。起活血养血、利水消肿之效[2]。《新华本草纲要》中亦提到其有活血、止血、利水的功能，用于治经期提前，产后血崩，产后浮肿，不孕症。

氯原酸(Chlorogenic acid，以下简称CA)，是由咖啡酸与奎尼酸生成的缩酚酸，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。氯原酸具有清除自由基、抗茵消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利胆等多种功效，尤其近年来发现氯原酸类物质有抗癌、抗艾滋病的作用，可做为先导设计开发抗癌、抗艾滋病药物。同时，其抗氧化能力要强于咖啡酸、对经苯酸、阿魏酸、丁香酸等，是良好的抗氧化剂。氯原酸不仅应用于医药行业上，在日用化工、食品等领域都有广泛的应用，它还具有增香和护色的作用,可用于食品保鲜,也可用在多种保健食品及饮料中。

目前，氯原酸的市售产品多从植物杜仲里边提取，而且所含杂质较多，从滇桂艾纳香中提取分离氯原酸尚未形成大规模商业化的生产。从药材中提取氯原酸的传统工艺有水煮法、水提醇沉、萃取、稀释提取、单相水提取法等。这些方法单一使用，氯原酸的总收率不到2.5％，纯度在40％以下，很难达到95％以上，由于氯原酸的不稳定特性，在提取分离过程中常常伴随着氯原酸的分解，很难得到高含量产品。某些实验室的制备方法虽然能获得较高的纯度，却无法进行规模化工业生产。目前提取氯原酸的方法普遍存在但是不适合工业化生产，而适于工业化生产的产品纯度较低等问题。近年来，大孔树脂柱提取氯原酸这样的手段也比较普遍，但采用的树脂吸附差，由于氯原酸属于多羟基酚酸，其分子含有羟基、酚羧基等极性基团，整个分子呈中等偏弱极性，若采用非极性树脂，其吸附容量小，无法满足要求。再加上氯原酸的特殊结构，决定了其可以利用乙醇、丙酮、甲醇等极性溶剂从植物中提取出来，但是由于氯原酸本身的不稳定性，提取时不能高温、强光及长时间加热，也因此增加提取的难度。

因此，提取高纯度的氯原酸单体工艺研究是当今研究的热点之一，本单位受广西壮族自治区药品检验所中药室委托，对壮药滇桂艾纳香进行分离，经过预试，对制备的滇桂艾纳香浸膏样品中发现其含有酚类、有机酸类、糖类和氨基酸等成分，根据预试的结果，进行了大量的分离，经过大孔树脂柱层析、中压柱层析和高效液相柱层析纯化得到一个化合物，经分析测定此化合物为氯原酸，且纯度高。有过滇桂艾纳香中含有氯原酸的相关报道，但从滇桂艾纳香中提取分离氯原酸的报道较少，或者从滇桂艾纳香中提取分离得到是氯原酸提取物，且收率低，纯度不高，更谈不上提取分离得到高纯度的氯原酸单体了。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明供一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，解决制备纯度不高、制备量小、制备过程复杂难于实现工业化生产的问题，采用极性大孔树脂柱富集、混合溶剂分相法结合，实现氯原酸分布梯度纯化，提取的纯度高，且工艺步骤简单，适合工业化生产。

本发明的技术方案为：

一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，由以下工艺制成：

1)水提：将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，控制温度为60～80℃，用180～230目滤布过滤，合并滤液；

2)浓缩:滤液浓缩至相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至相对密度为1.36～1.38的浸膏；

3)大孔树脂吸附分离：浸膏溶于水并加热后过滤得浸膏水溶液，调pH至3～5，加入大孔树脂柱进行饱和吸附，吸附流速控制为5～10ml/min，浸膏总量控制为0.5～1倍树脂体积量；

4)洗脱：吸附后用水-乙醇溶液洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂总量控制为4～6倍树脂体积量，所述梯度洗脱的洗脱剂具体为3～5BV水→3～5BV25～35％乙醇→5～7BV50～75％乙醇，然后分别收集每个梯度的洗脱液；

5)纯化：对每一梯度的洗脱液进行TLC鉴别，取检测到目标成分的乙醇洗脱液进行浓缩并真空干燥，得粗提取物，上中压柱层析，其中流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(20～40:70～85:0.1～0.5,v/v/v),流速为1～1.5ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得高纯度化合物C部分；

6)进一步提纯：取C部分，由HPLC测定含量为≥94.7％的氯原酸，再上柱层析，流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(20～40:70～85:0.1～0.5,v/v/v)，流速为1～1.5ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得化合物C，经HPLC分析测定化合物C为≥98.6％氯原酸，为氯原酸单体。

作为本发明的优选方案，所述步骤1)加水煎煮两次为第一次加10～15倍量水煎煮1～2h，第二次加8～10倍量水煎煮1～1.5h。

作为本发明的优选方案，所述步骤2)是温度控制在58～65℃下进行浓缩。

作为本发明的优选方案，所述步骤3)中浸膏溶于5～8倍量的水，控制加热温度为60～80℃。

进一步地，步骤3)中所述大孔树脂柱包括极性大孔树脂柱、中极性大孔树脂柱或弱极性大孔树脂柱中的一种或两种以上。

由于氯原酸属于多羟基酚酸，其分子含有羟基、酚羧基等极性基团，整个分子呈中等偏弱极性，本发明采用极性、中极性、弱极性大孔树脂柱，其吸附容量大，采用多级大孔树脂柱吸附效果更显著。

作为本发明的优选方案，所述步骤5)中所述流动相还可以为乙腈-水(10～15:80～90,v/v)或乙腈-0.4％磷酸(10～15:80～90,v/v)。

本发明的有益效果为：

1、氯原酸受热不稳定，因此煎煮滇桂艾纳香药材时温度控制为60-80℃，保证氯原酸不因在煎煮的操作而大量损失，并保证进一步提取的氯原酸含量高且较稳定。

2、氯原酸易溶于水的性质，水提即可随原有的水分一起被带出，因此可省去使用其他溶剂提取而引入杂质。

3、调节PH值，调酸能改善大孔树脂的吸附效果，饱和吸附后进行梯度洗脱，用水和较低浓度乙醇溶液可进行比较彻底地去除大部分的杂质，再用较高浓度乙醇洗脱，获得含杂质较少的氯原酸洗脱液。

4、采用控制植物水提液的pH在3～5间，使得绿原酸处于分子状态，易于吸附和萃取，有效的将绿原酸与杂质进行分离，且在该pH环境下绿原酸不易水解，进一步提高了绿原酸的纯度。

5、本发明采用极性、中极性、弱极性大孔树脂柱中的一种或两种以上结合，其具有吸附容量大，选择性好，易于吸附，机械强度高，再生处理简单，吸附速度快，操作简单，得率恒定，产品质量稳定等众多特点，适合植物水提取液中绿原酸分离富集过程。

6、本发明前期经过大量的分离，经过大孔树脂柱层析、中压柱层析和高效液相柱层析纯化，经分析测定此化合物为氯原酸，提取的纯度高，且工艺步骤简单，适合工业化生产。

附图说明

图1为本发明的工艺流程示意图。

图2为实施例1化合物C与氯原酸对照品的TLC对比图谱。

图3为实施例1氯原酸对照品的HPLC图谱。

图4为实施例1化合物C的HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合工艺流程图和实施例对本发明做进一步说明。

实施例1：

从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法：

将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮1.5h，第二次加10倍量水煎煮1h，控制温度为65℃，用200目滤布过滤，合并滤液；滤液浓缩至60℃相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至60℃相对密度为1.36的浸膏；浸膏溶于5倍量的水并加热至65℃，过滤得浸膏水溶液，调pH至3，加入极性大孔树脂柱进行饱和吸附，吸附流速控制为5ml/min，浸膏总量控制为0.5倍树脂体积量；吸附后用水-乙醇溶液洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂总量控制为5倍树脂体积量，所述梯度洗脱的洗脱剂具体为3～5BV水→3～5BV30％乙醇→5～7BV50％乙醇，然后分别收集每个梯度的洗脱液；对每一梯度的洗脱液进行TLC鉴别，取检测到目标成分的50％乙醇洗脱液进行浓缩并真空干燥，得粗提取物,上中压柱层析,其中流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(25:80:0.4,v/v/v),流速为1ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得高纯度化合物C部分；取C部分，由HPLC测定含量为≥94.7％的氯原酸，再上柱层析，流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(25:80:0.4,v/v/v)，流速为1ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得化合物C，经HPLC分析测定化合物C为≥98.6％氯原酸，为氯原酸单体。

实施例2

从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法：

将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加15倍量水煎煮2h，第二次加10倍量水煎煮1.5h，控制温度为80℃，用230目滤布过滤，合并滤液；滤液浓缩至65℃相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至65℃相对密度为1.38的浸膏；浸膏溶于8倍量的水并加热，加热温度为80℃，过滤得浸膏水溶液，调pH至5，加入极性大孔树脂柱进行饱和吸附，吸附流速控制为10ml/min，浸膏总量控制为1倍树脂体积量；吸附后用水-乙醇溶液洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂总量控制为6倍树脂体积量，所述梯度洗脱的洗脱剂具体为3～5BV水→3～5BV25％乙醇→5～7BV50％乙醇，然后分别收集每个梯度的洗脱液；对每一梯度的洗脱液进行TLC鉴别，取检测到目标成分的乙醇洗脱液进行浓缩并真空干燥，得粗提取物，上中压柱层析，其中流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(20:70:0.1,v/v/v),流速为1ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得高纯度化合物C部分；取C部分，由HPLC测定含量为≥94.7％的氯原酸，再上柱层析，流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(20:70:0.1,v/v/v)，流速为1ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得化合物C，经HPLC分析测定化合物C为≥98.6％氯原酸，为氯原酸单体。

实施例3

从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法：

将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮1.5h，第二次加8倍量水煎煮1h，控制温度为60℃，用180目滤布过滤，合并滤液；滤液浓缩至58℃相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至58℃相对密度为1.36的浸膏；浸膏溶于6倍量的水并加热，加热温度为70℃，过滤得浸膏水溶液，调pH至4，加入极性大孔树脂柱进行饱和吸附，吸附流速控制为6ml/min，浸膏总量控制为0.5倍树脂体积量；吸附后用水-乙醇溶液洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂总量控制为5倍树脂体积量，所述梯度洗脱的洗脱剂具体为3～5BV水→3～5BV35％乙醇→5～7BV75％乙醇，然后分别收集每个梯度的洗脱液；对每一梯度的洗脱液进行TLC鉴别，取检测到目标成分的乙醇洗脱液进行浓缩并真空干燥，得粗提取物，上中压柱层析，其中流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(40:85:0.5,v/v/v),流速为1.5ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得高纯度化合物C部分；取C部分，由HPLC测定含量为≥94.7％的氯原酸，再上柱层析，流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(40:85:0.5,v/v/v)，流速为1.5ml/min,分段解析，回收溶剂，相同流分合并，结晶减压干燥得化合物C，经HPLC分析测定化合物C为≥98.6％氯原酸，为氯原酸单体。

实施例4

实施例4与上述实施例不同之处：上中压柱层析的流动相还可以为乙腈-水(10～15:80～90,v/v)或乙腈-0.4％磷酸(10～15:80～90,v/v)。

实施例5

实施例5与其他实施例不同的之处：大孔树脂柱除了选择极性大孔树脂柱，还可以选择中极性大孔树脂柱和弱极性大孔树脂柱，或者为两两或三种搭配使用，已达到吸附容量和吸附效果好，富集氯原酸。

以下以实施例1为例，详述对化合物C的测定方法：

一、TLC法(薄层色谱法)：

1、对照品溶液制备：精密称取氯原酸对照品(标记为1，见附图2)，其纯度为99％以上，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

2、供试品溶液制备：取化合物C(标记为2，见附图2)，加适量乙醇使溶解，作为供试品溶液。

3、鉴别：参照中国药典2005年版一部附录ⅥB进行试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl,分别点上同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇(6:2:1)溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(320nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点，见附图2。

4、结果：薄层层析检查测定化合物C为氯原酸。

二、HPLC法(高效液相层析法)

1、仪器与试剂

高效液相色谱仪：日本岛津LC-6A，高效液相色谱柱：中国科学院大连化学物理研究所产品，Ф4.6×250mm，填料为Nucleosil7C₁₈,紫外320nm检测。

2、方法

(1)色谱条件：高效液相色谱柱Nucleosil7C₁₈(Ф4.6×250mm)，流动相为25％甲醇-水-0.4％甲酸(25:80:0.4,v/v/v)，流速为1ml/min，柱温为室温，检测波长320nm下检测，理论板数氯原酸峰计算应不低于2000。

(2)对照品溶液和供试品溶液的制备同TLC法，在此不再赘述。

(3)精密度实验吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定氯原酸的含量，测定化合物C为氯原酸，其纯度达到98.6％以上。

3、结果：经HPLC测定与氯原酸对照品保留的时间一致，其图谱见附图3和附图4，根据数据分析与文献结合，确定化合物C为氯原酸。

通过实施例1表明，本发明从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，可靠，且提取纯度高，以实施例2～5作同样的试验，也同样达到相近的效果。

Claims

1.一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，其特征在于由以下工艺制成：

2.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤1)加水煎煮两次为第一次加10～15倍量水煎煮1～2h，第二次加8～10倍量水煎煮1～1.5h。

3.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤2)是温度控制在58～65℃下进行浓缩。

4.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤3)中浸膏溶于5～8倍量的水，控制加热温度为60～80℃。

5.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，其特征在于：步骤3)中所述大孔树脂柱包括极性大孔树脂柱、中极性大孔树脂柱或弱极性大孔树脂柱。

6.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤5)中所述流动相还可以为乙腈-水(10～15:80～90,v/v)或乙腈-0.4％磷酸(10～15:80～90,v/v)。