CN103044253A - 一种藏丹参中迷迭香酸的提取分离方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种藏丹参中迷迭香酸的提取分离方法，所述方法，步骤如下：将藏丹参粉碎，加75%乙醇于多功能超声波提取罐中提取三次，合并提取液浓缩至无乙醇，加水得藏丹参提取物的水溶液，将水溶液用超滤设备过滤澄清，所得滤液再用纳滤设备进行过滤，滤液用盐酸调PH=4，上聚酰胺树脂进行吸附，乙醇洗脱，收集迷迭香酸组分的洗脱液，用反渗透膜设备浓缩，浓缩液喷雾干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%。

Description

一种藏丹参中迷迭香酸的提取分离方法

一、技术领域

本发明涉及一种中药提取方法，特别涉及一种从藏丹参中提取分离迷迭香酸的方法。

二、技术背景

藏丹参是唇形科的绒毛鼠尾草Salvia  castanea  Diels  f.tomentosa  Stib，在《中国植物志》和《西藏植物志》中都有收载，为栗色鼠尾草的变型。藏丹参在藏医学中主要用于心悸、心烦失眠、关节疼痛、黄疸型发热、肝脾肿大、产后瘀血、月经不调、口腔溃疡等疾病的治疗。藏丹参主要分布于西藏南部的林芝、波密、密林、工布江达等地区，经过初步调查，每年资源量在两千吨左右，开发潜力巨大。

迷迭香酸（Rosmarinic  acid），结构式如下：

<化学式>：C₁₈H₁₆O_8，<分子量>：360.33。

迷迭香酸是一种水溶性酚酸类天然抗氧化剂，其抗氧化活性强于维生素E，在体内具有极强的清楚自由基能力，而且还有抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、免疫调节、抑制尿酸生成等多种药理活性。提取分离高含量的迷迭香酸用于食品、保健品、化妆品、药品等具有重要意义。

迷迭香酸存在于迷迭香、紫苏、薄荷、鼠尾草、马玉兰、丹参、藏丹参等多种植物中，尤以藏丹参中的迷迭香酸含量最高。藏丹参以外的其他植物中迷迭香酸含量低，提取分离工艺复杂，制备的迷迭香酸含量低，生产成本高。

聚酰胺树脂分离技术是八十年代发展起来的一种新技术，是分离科学领域的重大创新，在天然有机化合物的分离纯化中得到广泛应用，尤其是对酚类化合物的分离效果更好。它具有分离纯化工艺简单、聚酰胺树脂再生处理方便、聚酰胺化学性质稳定、可重复使用数百次甚至上千次等诸多优点，深受植物活性成分提取行业的青睐。它的分离原理是根据有机化合物的极性大小来进行分离，一般情况是，极性大的先洗脱下来。在使用过程中，只需用食用乙醇洗脱、食用乙醇再生就可以，制备的目标化合物无有害溶剂残留，因此，采用聚酰胺树脂分离纯化天然有机化合物已经得到药学等领域专家的普遍认可。

膜是具有选择性分离功能的材料。利用膜的选择性分离实现料液的不同组分的分离、纯化、浓缩的过程称作膜分离。它与传统过滤的不同在于膜可以在分子范围内进行分离，并且这过程是一种物理过程，不需发生相的变化和添加助剂。膜的孔径一般为微米级，依据其孔径的不同（或称为截留分子量），可将膜分为微滤膜、超滤膜、纳滤膜和反渗透膜，根据材料的不同可分为无机膜和有机膜，无机膜主要还只有微滤级别的膜，主要是陶瓷膜和金属膜。有机膜是由高分子材料做成的，如醋酸纤维素、芳香族聚酰胺、聚醚砜、聚氟聚合物等。

将膜分离技术与聚酰胺树脂分离技术结合起来，用于天然有机化合物的提取分离具有生产成本低、产品质量好等优点。广州汉方现代中药研究开发有限公司申请了题为 “一种从藏丹参中分离纯化迷迭香酸的制备方法”的专利，专利号为201110330595.3。该专利中的工艺主要是以大孔吸附树脂为分离材料，制备的迷迭香酸含量比较低，含量仅为32.11%。

现有技术从藏丹参中提取迷迭香酸的回收率以及含量均不高，浪费了很多资源，同时现有技术从藏丹参中提取迷迭香酸的生产成本高，难以在市场上占据优势，为此，本发明经过研究找到了一种新的提取迷迭香酸的方法，该方法与广州汉方现代中药研究开发有限公司申请的201110330595.3专利相比，所得产物迷迭香酸含量高，达到90%以上，回收率也略高，达到95%以上，生产成本低，适合于工业化大生产。

三、发明内容

本发明的主要目的是提供一种从藏丹参中分离纯化迷迭香酸的方法，该方法制备工艺简单，产品含量高，成本低，适用于工业化生产。

本发明的制备方法，包括以下步骤：

1）.将藏丹参粉碎；

2）.用乙醇提取，提取液浓缩至无醇味，加水；

3）.过滤，得藏丹参提取物澄清水溶液；

4）.纳滤，得藏丹参提取物水溶液的纳滤液；

5）.将纳滤液用酸调pH到酸性，上聚酰胺树脂进行吸附，先用水洗涤，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；

6）.将乙醇洗脱液浓缩，干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%。

步骤2）中所述用乙醇提取是回流提取或超声提取。

步骤2）中所述提取是超声提取。

步骤2）中所述乙醇浓度为10-90%。

步骤2）中所述加水，加入水的量为浓缩液的2-20倍。

步骤5）中所述的酸性pH值为1-6。

步骤5）中所述的用乙醇洗脱，乙醇浓度为10-95%.

优选的，本发明的制备方法，步骤如下：

1）.将藏丹参用万能粉碎机粉碎，得到提取用的药材粉末，目数为20目～80目；

2）.按1：1～1：30的料液质量体积比向所述药材粗粉中加入质量浓度为10%～90%的乙醇溶液，置于超声波提取罐并置于10--90℃温度下提取0.5～5小时，提取次数为1～3次，合并提取液减压浓缩至无乙醇，加水得藏丹参提取物水溶液；

3）.将藏丹参提取物水溶液用超滤设备进行过滤澄清，得藏丹参提取物水溶液的澄清溶液；

4）.藏丹参提取物水溶液的澄清液用纳滤设备进行过滤，得藏丹参提取物水溶液的纳滤液；

5）.将藏丹参提取物水溶液的纳滤液用酸调pH=1～5，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，再用10%～95%乙醇溶液洗脱，收集迷迭香酸组分；

6）.将含迷迭香酸的乙醇洗脱液用反渗透膜设备进行浓缩，再进行喷雾干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%；

特别优选的，本发明的制备方法，步骤如下：

1）.将藏丹参用万能粉碎机粉碎，得到提取用的药材粉末，目数为40目～70目；

2）.按1：5～1：15的料液质量体积比向所述药材粗粉中加入质量浓度为50%～80%的乙醇溶液，置于超声波提取罐并置于10-50℃温度下提取1～3小时，提取次数为1～3次，合并提取液减压浓缩至无乙醇，加水得藏丹参提取物水溶液；

3）.将藏丹参提取物水溶液用超滤设备进行过滤澄清，得藏丹参提取物水溶液的澄清溶液；

4）.藏丹参提取物水溶液的澄清液用纳滤设备进行过滤，得藏丹参提取物水溶液的纳滤液；

5）.将藏丹参提取物水溶液的纳滤液用酸调pH=2～4，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，再用60%～90%乙醇溶液洗脱，收集迷迭香酸组分；

6）.将含迷迭香酸的乙醇洗脱液用反渗透膜设备进行浓缩，再进行喷雾干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%；

最优选的，本发明的制备方法，步骤如下：

将50公斤藏丹参粉碎成80目，加500公斤70%乙醇用多功能超声波提取罐于20℃超声提取1小时，按以上方法再提取一次，合并两次提取液，于50℃以下减压浓缩至无乙醇，加500公斤纯化水得藏丹参提取物水溶液；将该溶液用超滤设备过滤澄清得藏丹参提取物的澄清溶液；再将该溶液用纳滤设备进行过滤得纳滤溶液；将该纳滤液用稀盐酸调PH=2，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，80%乙醇洗脱迷迭香酸；含迷迭香酸组分的洗脱液用反渗透膜进行浓缩，浓缩液喷雾干燥即得迷迭香酸，含量为92.5%，回收率为95.4%。

为检测得到的迷迭香酸的含量，本发明提供了一种迷迭香酸检测方法，该方法如下：

1 所需仪器和设备

Agilent1260高效液相色谱仪（配有：四元泵、标准型自动进样器、柱温箱、Agilent DAD检测器）；电子天平（感量0.0001g）；超声波清洗仪；玻璃仪器（容量瓶、三角瓶、分液漏斗、冷凝管等）；高速离心机；旋转蒸发仪；

2 所需试剂

甲醇为色谱纯，水为超纯水；迷迭香酸标准品购自四川维克奇生物科技有限公司，HPLC测定纯度≥98%。藏丹参药材产地为西藏林芝。

3 溶液配制

标准溶液：准确称取迷迭香酸标准品3.1mg，置于25mL的容量瓶中，用色谱甲醇定容至刻度，作为标准品储备液。

样品溶液：精密称取样品(1) 66mg，样品（2）15.1mg，分别置于25mL容量瓶中，以75%乙醇溶解定容，配制成一定浓度的样品溶液，0.45um滤膜过滤备用。

洗脱剂中水相溶液的配制：量取5mL醋酸置于1000mL容量瓶中，用适量超纯水溶解，并容至刻度，0.45um滤膜过滤备用。

4 测定方法

色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6mm×100mm，3.5μm）；

流动相：甲醇:5‰醋酸水溶液40:60等度洗脱；流速：1.0mL/min；

检测波长：330 nm；柱温：25℃；

5 结果计算

含量计算方法：A_C/A_S=C_C/C_SC_S（g/100g）=（Cs×V）×100/Ms

注：A_C—标准品峰面积，A_S—为样品峰面积，C_C—为标准品浓度（mg/mL），C_S—为样品浓度，V—样品溶液体积，mL；Ms—样品重量（mg）。

本发明的方法是经过多种实验筛选获得的，筛选过程如下：

实验1

取100克藏丹参（迷迭香酸含量为3.2%）粉碎，加800毫升酒精超声提取两次，减压浓缩至无酒精味，加水并过滤，上大孔树脂柱，纯化水洗脱大极性杂质，60%酒精洗脱，合并含迷迭香酸的洗脱组分，合并蒸干得迷迭香酸4.04克，含量为65.3%，回收率为82.4%。

实验2

取100克藏丹参（迷迭香酸含量为3.2%）粉碎，加800毫升酒精超声提取两次，减压浓缩至无酒精味，加水并过滤，上聚酰胺树脂柱，纯化水洗脱大极性杂质，60%酒精洗脱，合并含迷迭香酸的洗脱组分，合并蒸干得迷迭香酸3.42克，含量为78.6%，回收率为84.0%。

实验3

取100克藏丹参（迷迭香酸含量为3.2%）粉碎，加800毫升酒精超声提取两次，减压浓缩至无酒精味，加水并超滤，然后再纳滤，滤液上聚酰胺树脂柱，纯化水洗脱大极性杂质，50%酒精洗脱，合并含迷迭香酸的洗脱组分，合并蒸干得迷迭香酸3.14克，含量为90.2%，回收率为88.5%。

实验4

取100克（迷迭香酸含量为3.2%）藏丹参粉碎，加800毫升酒精超声提取两次，减压浓缩至无酒精味，加水并超滤，然后再纳滤，滤液上聚酰胺树脂柱，纯化水洗脱大极性杂质，65%酒精洗脱，合并含迷迭香酸的洗脱组分并进行反渗透，反渗透液减压浓缩干得迷迭香酸3.36克，含量为91.6%，回收率为96.2%。

经过上述筛选发现，聚酰胺树脂的分离效果比大孔树脂好；上聚酰胺树脂前用超滤和纳滤处理上柱液，可以除掉大分子杂质，迷迭香酸含量明显提高；用反渗透膜处理洗脱液，可以降低生产时的动力消耗，由于是低温浓缩，迷迭香酸的内在质量好，含量和回收率都比较高。因此，本发明的方法提高了产品的回收率，提高了产品的纯度，降低了生产成本。

四、具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

将50公斤藏丹参（迷迭香酸含量为3.2%）粉碎成40目，加400公斤75%乙醇用多功能超声波提取罐于40℃超声提取1小时，按以上方法再提取一次，合并两次提取液，于50℃以下减压浓缩至无乙醇，加500公斤纯化水得藏丹参提取物水溶液；将该溶液用超滤设备过滤澄清得藏丹参提取物的澄清溶液；再将该溶液用纳滤设备进行过滤得纳滤溶液；将该纳滤液用稀盐酸调PH=4，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，50%乙醇洗脱迷迭香酸；含迷迭香酸组分的洗脱液用反渗透膜进行浓缩，浓缩液喷雾干燥即得迷迭香酸1.68公斤，含量为91.2%，回收率为95.8%。

实施例2

将50公斤藏丹参（迷迭香酸含量为3.2%）粉碎成80目，加500公斤70%乙醇用多功能超声波提取罐于20℃超声提取1小时，按以上方法再提取一次，合并两次提取液，于50℃以下减压浓缩至无乙醇，加500公斤纯化水得藏丹参提取物水溶液；将该溶液用超滤设备过滤澄清得藏丹参提取物的澄清溶液；再将该溶液用纳滤设备进行过滤得纳滤溶液；将该纳滤液用稀盐酸调PH=2，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，80%乙醇洗脱迷迭香酸；含迷迭香酸组分的洗脱液用反渗透膜进行浓缩，浓缩液喷雾干燥即得迷迭香酸1.65公斤，含量为92.5%，回收率为95.4%。

实施例3

将50公斤藏丹参（迷迭香酸含量为3.2%）粉碎成20目，加450公斤95%乙醇用多功能超声波提取罐于60℃超声提取1小时，按以上方法再提取一次，合并两次提取液，于50℃以下减压浓缩至无乙醇，加500公斤纯化水得藏丹参提取物水溶液；将该溶液用超滤设备过滤澄清得藏丹参提取物的澄清溶液；再将该溶液用纳滤设备进行过滤得纳滤溶液；将该纳滤液用稀盐酸调PH=3，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，90%乙醇洗脱迷迭香酸；含迷迭香酸组分的洗脱液用反渗透膜进行浓缩，浓缩液喷雾干燥即得迷迭香酸1.70公斤，含量为90.4%，回收率为96.0%。

Claims (10)

1.一种藏丹参中迷迭香酸的提取分离方法，所述方法步骤如下：

1）.将藏丹参粉碎；

2）.用乙醇提取，提取液浓缩至无醇味，加水；

3）.过滤，得藏丹参提取物澄清水溶液；

4）.纳滤，得藏丹参提取物水溶液的纳滤液；

5）.将纳滤液用酸调pH到酸性，上聚酰胺树脂进行吸附，先用水洗涤，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；

6）.将乙醇洗脱液浓缩，干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%。

2.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，步骤2）中所述用乙醇提取是回流提取或超声提取。

3.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，步骤2）中所述提取是超声提取。

4.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，步骤2）中所述乙醇浓度为10-90%。

5.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，步骤2）中所述加水，加入水的量为浓缩液的2-20倍。

6.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，步骤5）中所述的酸性pH值为1-6。

7.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，步骤5）中所述的用乙醇洗脱，乙醇浓度为10-95%。 

8.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

1）.将藏丹参用万能粉碎机粉碎，得到提取用的药材粉末，目数为20目～80目；

2）.按1：1～1：30的料液质量体积比向所述药材粗粉中加入质量浓度为10%～90%的乙醇溶液，置于超声波提取罐并置于10--90℃温度下提取0.5～5小时，提取次数为1～3次，合并提取液减压浓缩至无乙醇，加水得藏丹参提取物水溶液；

3）.将藏丹参提取物水溶液用超滤设备进行过滤澄清，得藏丹参提取物水溶液的澄清溶液；

4）.藏丹参提取物水溶液的澄清液用纳滤设备进行过滤，得藏丹参提取物水溶液的纳滤液；

5）.将藏丹参提取物水溶液的纳滤液用酸调pH=1～5，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，再用10%～95%乙醇溶液洗脱，收集迷迭香酸组分；

6）.将含迷迭香酸的乙醇洗脱液用反渗透膜设备进行浓缩，再进行喷雾干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%。

9.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

1）.将藏丹参用万能粉碎机粉碎，得到提取用的药材粉末，目数为40目～70目；

2）.按1：5～1：15的料液质量体积比向所述药材粗粉中加入质量浓度为50%～80%的乙醇溶液，置于超声波提取罐并置于10-50℃温度下 提取1～3小时，提取次数为1～3次，合并提取液减压浓缩至无乙醇，加水得藏丹参提取物水溶液；

3）.将藏丹参提取物水溶液用超滤设备进行过滤澄清，得藏丹参提取物水溶液的澄清溶液；

4）.藏丹参提取物水溶液的澄清液用纳滤设备进行过滤，得藏丹参提取物水溶液的纳滤液；

5）.将藏丹参提取物水溶液的纳滤液用酸调pH=2～4，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，再用60%～90%乙醇溶液洗脱，收集迷迭香酸组分；

6）.将含迷迭香酸的乙醇洗脱液用反渗透膜设备进行浓缩，再进行喷雾干燥得迷迭香酸，含量≥90%，回收率≥95%。

10.根据权利要求1的分离方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

将50公斤藏丹参粉碎成80目，加500公斤70%乙醇用多功能超声波提取罐于20℃超声提取1小时，按以上方法再提取一次，合并两次提取液，于50℃以下减压浓缩至无乙醇，加500公斤纯化水得藏丹参提取物水溶液；将该溶液用超滤设备过滤澄清得藏丹参提取物的澄清溶液；再将该溶液用纳滤设备进行过滤得纳滤溶液；将该纳滤液用稀盐酸调PH=2，上聚酰胺树脂进行吸附，纯化水洗去杂质，80%乙醇洗脱迷迭香酸；含迷迭香酸组分的洗脱液用反渗透膜进行浓缩，浓缩液喷雾干燥即得迷迭香酸，含量为92.5%，回收率为95.4%。