CN102464693A - 一种人参皂苷Re的提取分离方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种人参皂苷Re的提取分离方法，其特征在于：该提取方法中所用的原料为采自于人参，西洋参，高丽参等的花蕾，茎叶，以及果实，提取步骤包括乙醇回流，浓缩，醇沉，有机溶剂萃取，静置，过滤，干燥等步骤。该提取方法的特点在于该提取方法是从原料中提取得到提取物后经过浓缩，静置，过滤等步骤，过滤后得到白色粉末，该过程利用皂苷的溶解度和含量的差异，实现提取-分离一步完成，不使用大孔吸附树脂或HSCCC技术进行分离，分离的到的产品经过高效液相色谱法检测，以峰面积为指标，经归一化法计算Re含量占总皂苷含量的80％以上，本方法可以开发一种用于工业化提取人参皂苷的新思路。

Description

一种人参皂苷Re的提取分离方法

技术领域：

本发明涉及一种人参皂苷Re的提取分离方法，属于医药卫生保健领域。 

背景技术：

人参皂苷Re(ginsenoside-Re)是人参三醇系皂苷中的一种，是人参中含量较多的皂苷之一，尤其在花和茎叶中含量很高。现代药理学研究证明了人参皂苷Re在抗氧化应激损伤，提高免疫力，抗癌，益智等方面的药理活性，并从分子层面解释了其药理作用机制，这不仅佐证了中国医学古籍中的人参用法，而且进一步提示了人参皂苷Re在对抗心肌梗死，治疗老年痴呆，促进智力发育等疾病的治疗方面可能具有广阔的应用前景。 

由于人参皂苷结构复杂，目前仍不能合成任何一种皂苷单体，人参皂苷仍然是从植物中提取而获得。人参皂苷单体Re生产的工艺是以三七，人参，西洋参的根，花或茎叶等为原料，经过乙醇回流，超声，或者微波等提取的方式得到提取液，经过反复的柱层析，以总皂苷-三醇组皂苷-皂苷单体的顺序分离而得到。除此之外还有高速逆流色谱法(HSCCC)，近年来广泛用于中药有效成分的分离。无论是利用大孔吸附树脂进行分离的液-固色谱法还是HSCCC法，它们的分离操作基础是是皂苷之间理化性质的差异，由于皂苷之间结构相似，理化性质差别小，单体之间的分配行为接近，分离难度大，大孔吸附树脂法的洗脱过程需要使用大量的有机溶剂，实验成本高，周期长，工业化生产困难较大，而HSCCC法虽然提取得到的产品纯度较高，但分离效率不如气相色谱和高效液相色谱技术，不适用于大规模的工业化生产，虽然分离技术近年来发展迅速，可以应用于工业化生产的方法却很少，因此皂苷单体的获得方法的局限一直是制约人参皂苷单体科学研究和临床应用的主要因素，即使是对于含量较大的皂苷Re而言也并没有可以用于工业化生产的提取分离方法。 

文献中关于人参皂苷Re的提取分离方法的专利接近的共有以下几篇：孙贺成[专利公开号：CN101538308A]以人参果为原料药以HSCCC法分离获得人参皂苷Re单体，纯度达到98％以上。徐菲菲[专利公开号：CN1650876A]以水作为起步溶剂，以人参为原料，提取液经浓缩后经大孔吸附树脂吸附，低浓度醇洗脱，用甲醇-水交替结晶，得到纯度为95％以上的Re单体。桂明玉[专利公开号：CN1869059A]将人参有效成分提取后通过氧化铝柱层析方法获得单体皂苷。王一涛[专利公开号：CN101575357]以三七总皂苷或三七中间体为原料采用制备型高效液相色谱法梯度洗脱，得到Re纯度在97％以上。上述方法的特点在于以大孔吸附树脂或HSCCC技术分离得到人参皂苷Re，起始原料为人参或人参能提取物，虽然得到样品纯度高但不适用于工业化生产。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种能够适应工业化生产要求的人参皂苷Re的提取分离方法，本发明提供的人参皂苷Re的提取方法包括以下工艺步骤： 

1.原料的浸泡及煎煮 

将含量为60％-95％的乙醇提取液按原料与提取液的重量份数比为1∶5-1∶20的比例加入，常温浸泡1-3小时后，加热保持微沸状态1-3小时，趁热过滤，收集滤液，重复提取操作1-3 次，合并滤液。 

2.提取液的浓缩 

将步骤1中的滤液在减压条件下浓缩至原提取液体积的1/3-1/4。 

3.乙醇沉淀 

向步骤2中得到的浓缩液中加入其体积2-5倍的低浓度的乙醇进行沉淀，沉淀溶剂中乙醇的含量20％-50％，静置1-24h后，过滤，收集滤液。 

4.提取液的再浓缩 

将步骤3中的到的滤液再次进行减压浓缩，至原体积的1/3-1/4。 

5.有机溶剂萃取 

向步骤4中得到的浓缩液中加入一定量的有机溶剂进行萃取，萃取比例为1∶1-1∶3，萃取溶剂为乙醚，乙酸乙酯，三氯甲烷中的一种或几种，萃取次数为1-3次，收集下层水相。 

6.静置 

挥干水相中的有机溶剂，静置2-24小时，有白色沉淀析出，过滤的到白色粉末状物质，经液相色谱检测该白色粉末中的主要成分是Re，以归一化法计算，Re的含量大于60％。 

本发明所涉及到的人参皂苷Re的提取方法与现有技术的主要优点在于： 

(1)利用该方法得到得到人参皂苷Re工艺过程简单，周期短，生产成本低，杂质含量少，生产过程不使用毒性强的有机溶剂，更有利于环保。 

(2)利用该方法生产得到的Re可以作为药品生产的原料或经进一步精制得到标准品，由于其他杂质含量少，精制的成本大大降低。 

该本发明开发的人参皂苷Re的提取分离方法，可以适应工业化生产的需要，为皂苷单体的提取分离提供一种新思路。 

附图说明；

以下结合图来详细说明本发明： 

图1：本发明的工艺路线： 

图2：液相色谱图 

A为市售Re标准品的液相色谱图 

B为提取分离得到Re的液相色谱图 

C为经乙醇回流提取，正丁醇萃取法得到的总皂苷的液相色谱图 

D为滤液的液相色谱图 

具体实施方式：

实施例1 

1.原料的浸泡及煎煮 

将乙醇含量为60％的溶液按原料与溶液的重量比为1∶15加入水蒸气蒸馏装置中，常温浸泡1小时，加热使之保持微沸状态3小时，趁热过滤，收集滤液，重复提取操作1次，提取时间为0.5小时，合并滤液。 

2.提取液的浓缩 

将步骤1中的得到的滤液在减压条件下浓缩至原提取液体积的1/3。 

3.乙醇沉淀 

向步骤2中得到的浓缩液中加入其体积3倍的乙醇溶液进行沉淀，乙醇浓度为30％，静置24h后，过滤，收集滤液。 

4.提取液的再浓缩 

将步骤3中的到的滤液再次进行减压浓缩，至原体积的1/4。 

5.有机溶剂萃取 

向步骤4中得到的浓缩液中加入一定量的乙醚进行萃取，萃取比例为1∶1，萃取次数为3次，收集下层水相。 

6.静置 

挥干水相中的有机溶剂，静置2h，有白色沉淀析出，过滤得到白色粉末状物质。经称重计算白色粉末的收率大于3％。 

实施例2 

原料的浸泡及煎煮 

将乙醇含量为90％的溶液按原料与溶液的重量比为1∶5加入水蒸气蒸馏装置中，常温浸泡1小时，加热使之保持微沸状态1小时，趁热过滤，收集滤液，重复提取操作2次，提取时间均为0.5小时，合并滤液。 

提取液的浓缩 

将步骤1中的得到的滤液在减压条件下浓缩至原提取液体积的1/4。 

乙醇沉淀 

向步骤2中得到的浓缩液中加入其体积3倍的乙醇溶液进行沉淀，乙醇浓度为60％，静置24h后，过滤，收集滤液。 

提取液的再浓缩 

将步骤3中的到的滤液再次进行减压浓缩，至原体积的1/4。 

有机溶剂萃取 

向步骤4中得到的浓缩液中加入一定量的乙酸乙酯进行萃取，萃取比例为1∶2，萃取次数为3次，收集下层水相。 

静置 

挥干水相中的有机溶剂，静置12h，有白色沉淀析出，过滤得到白色粉末状物质。经称重计算白色粉末的收率大于3％。 

实施例3 

样品液相色谱鉴定： 

仪器以及色谱条件：高效液相色谱仪Agilent 1200SL，DAD检测器，Chemstation工作站，人参皂苷Re对照品购自中国药品生物制品鉴定所(批号：110754-200822)，色谱柱：SDBC₁₈1.8μm，4.8×50mm，以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速1ml·min^-1，检测波长203nm，柱温25℃。 

检测结果：以峰面积为指标经过归一化法计算，人参皂苷Re的含量占总皂苷含量的80％以上。 

Claims (8)

1.一种以乙醇为主要提取溶剂经浸泡及煎煮提取得到人参皂苷Re的方法，其特征在于其提取过程还经过提取液的浓缩，乙醇沉淀，过滤，滤液的再浓缩，有机溶剂的萃取，静置，滤过和干燥步骤。

2.权利要求1中所述的原料其特征在于：原料为人参花，人参茎叶，人参果，西洋参花，西洋参茎叶，西洋参果。

3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：提取溶剂的乙醇浓度为60-95％，原料与提取溶剂比例为1∶5-1∶20，提取次数为1-3次。

4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：滤液在减压条件下浓缩至原提取液体积的1/3-1/4。

5.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：向浓缩液中加入沉淀溶液为乙醇溶液，乙醇含量为20％-50％，加入体积为原浓缩液体积的2-5倍。

6.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：除掉醇沉后得到的杂质，再将滤液浓缩至原体积的1/3-1/4。

7.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：浓缩液中加入一定量的有机溶剂进行萃取，萃取比例为1∶1-1∶3，萃取溶剂为乙醚，乙酸乙酯，三氯甲烷中的一种或几种，萃取次数为1-3次。

8.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：挥干有机溶剂，静置，过滤分离得到白色沉淀。

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