CN108431213B - 新的海豚链球菌噬菌体Str-INP-1及其海豚链球菌增殖抑制用途 - Google Patents

新的海豚链球菌噬菌体Str-INP-1及其海豚链球菌增殖抑制用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种以具备专门杀灭海豚链球菌的能力并具有用序列号1标记的基因组为特征从自然界分离的长尾噬菌体Str‑INP‑1(保藏号:KCTC 12687BP)及利用以所述噬菌体为有效成分的组合物预防及处置海豚链球菌感染的方法。

Description

新的海豚链球菌噬菌体Str-INP-1及其海豚链球菌增殖抑制 用途
技术领域
本发明涉及一种从自然界分离的噬菌体及利用以其为有效成分的组合物预防及处置海豚链球菌感染的方法,该噬菌体在感染海豚链球菌后能够将海豚链球菌杀灭。具体讲,就是一种以具备专门杀灭海豚链球菌的能力并具有用序列号1标记的基因组为特征的从自然界分离的长尾噬菌体Str-INP-1(保藏号:KCTC 12687BP)及利用以所述噬菌体为有效成分的组合物预防及处置海豚链球菌感染的方法。
背景技术
研究表明,以链球菌病(Streptococcosis)的病原菌著称的海豚链球菌(Streptococcus iniae)菌群作为革兰氏阳性球菌,其属于链球菌属(Genus),是一种使养殖鱼类患上链球菌病而带来严重经济损失的病原体。另外,海豚链球菌作为一种能够使红细胞完全溶解的β-溶血性(Beta-hemolytic)细菌,不仅对于海洋鱼类及广盐性鱼类具有致病性,对于淡水鱼也具有很强的致病性。特别是,当感染海豚链球菌而发病时,会导致感染鱼类的大约30~50%死亡,是一种致命性的细菌。海豚链球菌是从韩国、日本、美国、以色列、澳大利亚等地的淡水及海水鱼中分离出的感染菌,主要使偏口鱼、银鱼、罗非鱼、虹鳟鱼、鲂鱼、沙丁鱼、鲷鱼等鱼类感染疾病。
被海豚链球菌感染的鱼类一般会无力地漂浮或者静静地贴在水池底部一动不动,有可能也会不停地转圈。另外,从外观上通常可以观察到眼球突出或者鳃盖内侧发生点状出血,有时还可以观察到胸部或腹鳍有淤血。据报告,将被海豚链球菌感染的鱼类解剖可以发现脑损伤、体色黑化、鱼嘴红肿、眼球突出、角膜白浊、肝脏淤血、腹水、疝气等症状。
由海豚链球菌感染引发的链球菌病,从鱼苗到成鱼,不论个体大小都有可能发病,由此带来的经济损失是非常大的。因此,迫切需要开发一种能够预防海豚链球菌感染以及对感染进行处置的方案。特别是,最近水产品作为食品的安全性成了社会的主要关注点,所以最好能够开发出一种比较环保的方案。
由于鱼类养殖产业能够轻易获得短缺的食物资源,因此每年都在不断地快速增长。但是,随着这种养殖产业的增长速度进一步加快,通过饲料对周边环境造成的污染也在增加。特别是,广泛使用含有大量抗生素的饲料,反而对人类的健康造成了威胁。以偏口鱼为主的鱼类养殖场过多地使用抗菌化学治疗药物即抗生素作为细菌性疾病的治疗方法,其结果是频繁出现对多种药剂产生耐药性的菌种,由此对鱼类养殖户带来了相当大的经济损失。另外,这种抗生素的过度使用还会威胁国民健康,进而使人们对养殖鱼类的消费心理萎缩,最终导致整个水产业的竞争力下降。因此,可以说,目前迫切需要开发一种能够预防因细菌导致的鱼类疾病并能够对其感染进行有效处置的方法。
最近,作为控制养殖鱼类疾病的方法,虽然已正式开展了疫苗(Vaccine)开发等工作,但是疫苗种类尚未实现多元化,而疾病种类却在朝着多元化方向发展,为了应对混合疾病发生的增加,需要在开发疫苗的同时,再综合开发其它的疾病控制方法。
最近,作为应对细菌性疾病的方案,噬菌体(Bacteriophage)的利用受到了极大的关注。特别是,由于人们提倡亲近自然的方式,使得大家对噬菌体的关注比以往任何时候都要高。噬菌体作为一种能感染细菌的小型微生物,也被简称为“普通噬菌体(Phage)”。当噬菌体感染(Infection)细菌之后,就在细菌细胞内部繁殖。繁殖后,当子孙噬菌体来到细菌外时,就通过破坏宿主即细菌的细胞壁的方式将细菌杀灭。噬菌体的细菌感染方式具有非常强的特异性,可以感染特定细菌的噬菌体种类仅限于一部分。即,特定噬菌体只能够感染特定范畴的细菌。因此,特定噬菌体只杀灭特定细菌,而不会对其它的细菌产生影响。这种噬菌体的细菌特异性仅对目标细菌产生抗菌效果,不会对环境或者鱼类中的常居菌产生影响。通常情况下,现有的抗生素会同时对多种类型的细菌产生影响,而噬菌体只针对特定细菌发挥作用。因此,利用噬菌体不会对体内的正常菌群产生干扰。所以,与使用抗生素相比,利用噬菌体是非常安全的,而且其产生副作用的可能性也会大大降低。
噬菌体是1915年英国的细菌学家Twort在对葡萄球菌(Micrococcus)菌落培养过程中出现透明斑的现象进行研究的过程中发现的。另外,1917年,法国的细菌学家d'Herelle在痢疾患者粪便的过滤液中发现了具有使痢疾杆菌(Shigella disenteriae)溶解作用的物质,通过对此进行研究,独立发现了噬菌体。当时,从其“猎食细菌”的意义出发将其命名为“噬菌体”。此后,相继发现了痢疾菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌等多种致病性细菌的噬菌体。
由于具有能够杀灭细菌的特殊能力,因此噬菌体被发现之后,研究人员都期待能够研发出有效应对细菌感染的方案,并开展了相关大量的研究。但是,当Flemming发现青霉素之后,抗生素得到了广泛普及,对噬菌体的研究仅限于一部分东欧国家及原苏联在勉强开展。但是,由于2000年以后抗生素耐药菌不断增加,导致现有抗生素也表现出了一定的局限性。随着现有抗生素替代物质开发可能性的凸显,人们再次关注将噬菌体作为抗菌剂的研究进展。
特别是,随着世界各国政府最近对抗生素的使用加强了限制,人们对噬菌体的关注度进一步提高,将其用于产业方面的事例也在不断增加。
如上所述,噬菌体对细菌具有非常强的特异性。正是由于存在这种特异性,即使是同一种类的细菌,噬菌体往往也只对其中一部分菌株(strain)发挥抗菌效果。另外,针对不同的对象菌株,噬菌体发挥抗菌力的强度也会不一样。正是由于这种原因,如果想要确保针对特定种类的细菌实施有效控制,就需要确保具备多种有用的噬菌体。为了开发能够应对海豚链球菌的噬菌体的有效利用方法,当然也需要确保具备多种有用噬菌体(能够针对海豚链球菌产生抗菌效果的多种噬菌体),而且还需要在所确保的多种有用噬菌体中从抗菌力强度或者抗菌范围层面筛选具有优势的噬菌体。
发明详述
所要解决的技术问题
因此,本发明人想要开发出一种利用从自然界分离并能够选择性地杀灭海豚链球菌的噬菌体而得到的用于预防海豚链球菌的感染或能够将其用于感染后处置的组合物,以及一种利用该组合物预防或处置海豚链球菌感染的方法。经过努力,成功地从自然界分离出了符合上述要求的噬菌体,为了确保能够将所述分离的噬菌体与其它噬菌体进行特定区分,赋予了该基因组(Genome)相应的基因序列,并开发出了以所述噬菌体为有效成分的组合物,然后确认该组合物能够有效用于预防及处置海豚链球菌感染,由此完成了本发明。
因此,本发明的一个目的在于,提供一种以具备专门杀灭海豚链球菌的能力并具有用序列号1标记的基因组为特征的从自然界分离的长尾噬菌体(Siphoviridae)Str-INP-1(保藏号:KCTC 12687BP)。
本发明的另一个目的在于,提供一种以感染海豚链球菌后能够杀灭海豚链球菌的分离噬菌体Str-INP-1为有效成分可用于预防海豚链球菌感染的组合物及利用该组合物预防海豚链球菌感染的方法。
本发明的另一个目的在于,提供一种以感染海豚链球菌后能够杀灭海豚链球菌的分离噬菌体Str-INP-1为有效成分可用于处置海豚链球菌感染的组合物及利用该组合物处置海豚链球菌感染的方法。
本发明的另一个目的在于,提供一种利用所述组合物生产的用于海豚链球菌感染预防及处置的药浴剂。
本发明的另一个目的在于,提供一种利用所述组合物生产的通过海豚链球菌感染预防及处置提高饲养效果的饲料添加剂。
解决技术问题的方法
本发明提供了一种以具备专门杀灭海豚链球菌的能力并具有用序列号1标记的基因组为特征的从自然界分离的长尾噬菌体(Siphoviridae)Str-INP-1(保藏号:KCTC12687BP)及利用以其为有效成分的组合物预防及处置海豚链球菌感染的方法。
噬菌体Str-INP-1由本发明人分离后,于2014年10月1日托管于韩国生命科学研究院微生物资源中心(保藏号:KCTC 12687BP)。
另外,本发明提供了一种以可用于海豚链球菌感染预防或处置的噬菌体Str-INP-1为有效成分的药浴剂及饲料添加剂。
本发明的组合物中包含的噬菌体Str-INP-1能够有效杀灭海豚链球菌,并对由海豚链球菌引发的链球菌病的预防(预防感染)或者治疗(感染处置)具有良好效果。因此,本发明的组合物可用于由海豚链球菌引发的链球菌病的预防及治疗。
本说明书中使用的“处置”或“治疗”等术语具有以下含义:(1)抑制由海豚链球菌引发的链球菌病;(2)减轻由海豚链球菌引发的链球菌病。
本说明书中提到的“分离”或“分离的”是指“在自然状态下利用多种实验方法对噬菌体进行分离和确保能够与其它噬菌体进行特定区分的特征”。同时,还包含“通过生物工程技术使噬菌体繁殖以便能够用于促进产业发展”。
本发明的组合物中包含的药剂学上允许使用的载体,作为生产制剂时通常利用的物质,包括:乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、洋槐胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等,但并非仅限定于此。本发明的组合物中除了上述成分之外,还包括:润滑剂、润湿剂、甜味剂、增香剂、乳化剂、悬浮剂、保存剂等。
本发明的组合物以噬菌体Str-INP-1为有效成分,其中所含的噬菌体Str-INP-1含量为1×101pfu/ml至1×1030pfu/ml或1×101pfu/g至1×1030pfu/g,优选地,其含量为1×104pfu/ml至1×1015pfu/ml或1×104pfu/g至1×1015pfu/g。
本发明的组合物可以按照具有本发明所属技术领域普通知识的技术人员能够很容易实施的方法利用药学上允许使用的载体及/或赋形剂生产成制剂,从而既可以按照单位容量形态进行生产,也可以装入大容量容器内。所述剂型既可以是油脂或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形态,也可以是浓缩物、粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态。除此之外,还包括:分散剂或稳定剂。
本发明的组合物根据利用方式的不同,其剂型并非仅局限于上述几种,也可以制作成药浴剂及饲料添加剂。
为了提高上述用途的效率,对于其它菌种具有抗菌活性的噬菌体也可以用于本发明的组合物中。另外,本发明的组合物中还包含对于海豚链球菌具有抗菌活性的其它种类噬菌体。即使是对于海豚链球菌具有抗菌活性的噬菌体,其在抗菌力的强度或者抗菌范围方面也存在一定的差异,因此将它们进行适当组合可以最大限度地发挥其效果。
发明效果
本发明中利用以噬菌体Str-INP-1为有效成分的组合物对海豚链球菌的感染进行预防及处置的方法,与现有基于抗生素等化学物质的方式相比,其优点在于对海豚链球菌的特异性非常强。这意味着,在不会对其它有用的常居菌产生影响的同时,还能够对海豚链球菌的感染进行预防或处置,而且其副作用非常小。通常情况下,如果使用抗生素等化学物质,同时也会对普通常居菌造成损害,最终导致动物的免疫力下降等多种副作用。同时,本发明是将自然界已经存在的噬菌体分离后用作组合物的有效成分,因此还具有非常亲近自然的优点。另外,即使噬菌体能够发挥抗菌活性的菌种相同,但就其发挥的抗菌效果而言,在抗菌力的强度或者抗菌范围(即,从属于海豚链球菌的多种菌株[strain]的层面来看,噬菌体对个别菌株发挥抗菌活性的范围。通常情况下,噬菌体可以对属于相同菌种[species]的一部分菌株[strain]发挥抗菌活性。即,即使属于相同菌种,噬菌体对个别菌株的敏感性也会存在差异)方面也存在一定的差异。因此,本发明与对海豚链球菌具有毒性(Virulence)的其它噬菌体相比,可提供差异化的抗菌效果。这一点在用于产业现场时,其效果会有很大的差异。
附图说明
图1是噬菌体Str-INP-1的电子显微镜照片;
图2是显示噬菌体Str-INP-1对海豚链球菌杀灭能力的实验结果,透明部分是试验对象细菌经过溶菌后最终形成的溶菌斑。
具体实施方式
下面,将依据实施例对本发明进行更加具体的说明。但是,这些实施例只是本发明的示例,本发明的范围并非仅限定于这些实施例。
实施例1:能够杀灭海豚链球菌的噬菌体的分离
在对能够杀灭海豚链球菌的噬菌体进行筛选时,利用了从自然环境获取的样品。另外,用于噬菌体分离的海豚链球菌是由本发明人事先分离并鉴定为海豚链球菌的。
下面,将对噬菌体分离过程进行详细说明。将收集的样品添加到按照1/1000比例接种有海豚链球菌的THB(Todd Hewitt Broth)培养基(脑心浸液,3.1g/L;蛋白胨,20g/L;葡萄糖,2g/L;氯化钠,2g/L;磷酸二钠,0.4g/L;碳酸钠,2.5g/L)中,然后在30℃环境下振荡培养3-4小时。培养之后,在8,000rpm的条件下离心分离20分钟,回收上清液。在回收的上清液中按照1/1000比例接种海豚链球菌,然后在30℃环境下再次振荡培养3-4小时。为了当样品中包含有噬菌体时使噬菌体的数量(Titer)能够增加,总共重复执行了5次上述过程。经过5次重复后,将培养液在8,000rpm的条件下离心分离20分钟。经过离心分离后,将回收的上清液利用0.45μm的过滤器进行过滤,利用获得的滤液通过普通的滴定实验(Spot assay)调查是否存在能够杀灭海豚链球菌的噬菌体。
所述滴定实验是按如下方法实施的。将海豚链球菌按照1/1000比例接种到THB培养基中,然后在30℃环境下振荡培养一夜。将通过上述过程准备好的海豚链球菌的培养液3ml(OD600为1.5)涂抹(Spreading)到THA(Todd Hewitt Agar)平板培养基(脑心浸液,3.1g/L;蛋白胨,20g/L;葡萄糖,2g/L;氯化钠,2g/L;磷酸二钠,0.4g/L;碳酸钠,2.5g/L;琼脂,15g/L)上。将涂抹后的平板培养基在超净台(Clean bench)上放置30分钟左右,使涂抹液干燥。干燥后,将前面准备的滤液10μl滴定到涂抹有海豚链球菌的平板培养基上,将其放置30分钟左右以使其干燥。干燥后,将经过所述滴定处理的平板培养基在30℃环境下静置培养一天后,观察在滴有滤液的位置是否生成有透明环(Clear zone)。如果生成有透明环,就可以判断滤液中含有能够杀灭海豚链球菌的噬菌体。通过上述观察,可以确保获得含有对海豚链球菌具有杀灭能力噬菌体的滤液。
利用确认了存在对海豚链球菌具有杀灭能力噬菌体的滤液实施了纯粹噬菌体的分离。纯粹噬菌体的分离采用了常用的溶菌斑分析(Plaque assay)方法。下面将对此进行详细说明,将在溶菌斑分析过程中形成的一个溶菌斑利用无菌吸头(Tip)回收之后,将其添加到海豚链球菌培养液中在30℃环境下一起培养4-5小时。培养之后,在8,000rpm的条件下离心分离20分钟,获取上清液。向获取的上清液中添加1/50体积的海豚链球菌培养液,然后再次在30℃环境下培养4-5小时。为了使噬菌体的数量增加,至少需要将这一过程实施5次以上,最后在8,000rpm的条件下离心分离20分钟,获取上清液。使用获取的上清液再次进行溶菌斑分析。通常情况下,纯粹噬菌体的分离不可能通过1次的上述过程完成。因此,利用此时形成的溶菌斑再次重复前面的整个步骤,这种重复操作过程至少实施5次以上,以确保获得含有纯粹噬菌体的溶液。通常情况下,纯粹噬菌体的分离过程需要一直进行重复操作,直到形成的溶菌斑大小及形状全都相似时为止。另外,最后通过电子显微镜确认是否有纯粹噬菌体分离。需要重复执行前面叙述的过程,直至在电子显微镜分析环节中确认到纯粹噬菌体的分离。电子显微镜分析是按照常用的方法实施的,下面将对此进行简单说明。将含有纯粹噬菌体的溶液涂到铜载网(Copper grid)上,利用2%乙酸铀酰(Uranyl acetate)进行负染色(Negative staining)和干燥后,通过透射电子显微镜对其形态进行拍摄。纯粹分离的噬菌体电子显微镜照片如图1所示,从其形态特征判断,可以确认新获得的噬菌体属于长尾噬菌体(Siphoviridae)科。
含有通过这种方式确认的纯粹噬菌体的溶液经过了以下提炼过程。按照含有纯粹噬菌体溶液全部体积1/50的标准添加海豚链球菌培养液后,再次培养4-5小时。培养之后,在8,000rpm的条件下离心分离20分钟,获取上清液。为了获取含有充足数量噬菌体的溶液,将这一过程总共重复执行了5次,将最终通过离心分离获得的上清液利用0.45μm的过滤器进行过滤,然后实施了普通的聚乙二醇(Polyethylene Glycol;PEG)沉淀过程。具体讲,向滤液100ml中添加PEG和NaCl,确保其达到10%PEG 8000/0.5M NaCl。然后在4℃环境下静置2-3小时,接着在8,000rpm的条件下离心分离30分钟,获得噬菌体沉淀物。利用缓冲液(Buffer;10mM Tris-HCl、10mM MgSO4、0.1%Gelatin、pH 8.0)5ml使通过上述过程获得的噬菌体沉淀物悬浮,将其称为“噬菌体悬浮液”或“噬菌体溶液”。
由此,可以确保获得经过提炼的纯粹噬菌体,将所述噬菌体命名为“噬菌体Str-INP-1”后,于2014年10月1日托管于韩国生命科学研究院微生物资源中心(保藏号:KCTC12687BP)。
实施例2:噬菌体Str-INP-1的基因组分离及序列分析
将噬菌体Str-INP-1的基因组按下述方法实施了分离。基因组的分离利用了按照与实施例1相同的方法获得的噬菌体悬浮液。首先,为了将悬浮液中可能含有的海豚链球菌的DNA和RNA除去,向噬菌体悬浮液10ml中分别添加200U的DNase I和RNase A,然后在37℃环境下放置30分钟。放置30分钟之后,为了除去DNase I与RNase A的活性,添加0.5M乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid;EDTA)500μl,然后再次静置10分钟。接着,将其在65℃环境下再进一步静置10分钟。然后,为了使噬菌体外壁瓦解,添加proteinase K(20mg/ml)100μl,然后在37℃环境下使其反应20分钟。接着,添加10%十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate;SDS)500μl,然后再次在65℃环境下使其反应1小时候。反应1小时之后,向该反应液中添加由苯酚(Phenol):三氯甲烷(Chloroform):异戊醇(Isoamylalcohol)按照25:24:1的构成比形成的混合液10ml并搅拌均匀。接着,将其在13,000rpm条件下离心分离15分钟,使其形成分层。然后从分离的层中取上层溶液,向其中添加1.5体积比的异丙醇(Isopropyl alcohol)后,在13,000rpm的条件下离心分离10分钟,使基因组沉淀。将沉淀物回收后,向沉淀物中添加70%乙醇(Ethanol),然后再次在13,000rpm的条件下离心分离10分钟,对沉淀物进行清洗。将经过清洗的沉淀物回收,并实施真空干燥后,将其溶解于100μl的水中。重复执行上述过程,确保获得大量噬菌体Str-INP-1的基因组。
将由此获得的基因组通过Chunlab株式会社生产的Roche 454GS Junior仪器的下一代碱基序列分析(Next generation sequencing analysis),对噬菌体Str-INP-1的基因组序列进行了分析。最终分析的噬菌体Str-INP-1基因组的大小为33,269bp,所有基因组序列被标记为序列号1。
以获得的上述噬菌体Str-INP-1的基因组序列为基础,利用Web上的BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)对其与当前已知的噬菌体基因组序列的同源性(Similarity)进行了调查。BLAST调查结果表明,无法确认噬菌体序列具有50%以上的同源性。
根据这一事实,可以判断噬菌体Str-INP-1属于目前尚无报告的新型噬菌体。在得出这一事实的同时,还可以得出以下判断:即,通常情况下,如果噬菌体的种类不同,则可以发挥抗菌力的强度及抗菌范围也不相同,由此可以断定,噬菌体Str-INP-1能够发挥与现有报告的其它噬菌体不同的抗菌效果。
实施例3:噬菌体Str-INP-1对海豚链球菌的杀灭能力调查
对分离的噬菌体Str-INP-1杀灭海豚链球菌的能力进行了调查。在杀灭能力调查过程中,按照与实施例1相同的方法,通过滴定实验调查了是否生成透明环。用于进行杀灭能力调查的海豚链球菌是由本发明人分离并鉴定为海豚链球菌的,总共43种。噬菌体Str-INP-1对成为实验对象的43种海豚链球菌中的36种具有杀灭能力,比较具有代表性的实验结果如图2所示。另外,还通过其它实验对噬菌体Str-INP-1杀灭迟钝爱德华菌(Edwardsiella tarda)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、鱼肠弧菌(Vibrioichthyoenteri)、格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)、副乳房链球菌(Streptococcusparauberis)的能力也进行了调查,结果表明,噬菌体Str-INP-1对这些菌种不具有杀灭能力。
通过以上结果可以看出,噬菌体Str-INP-1对海豚链球菌具有特定杀灭能力,可以对多数海豚链球菌发挥抗菌效果。这意味着,噬菌体Str-INP-1可用作海豚链球菌感染预防及处置用途的组合物的有效成分。
实施例4:噬菌体Str-INP-1预防海豚链球菌感染的实验例
向装有9ml的THB培养基的一个试管内放入1×108pfu/ml标准的噬菌体Str-INP-1溶液100μl,向另一个装有9ml的THB培养基的试管内仅添加等量的THB培养基。然后,分别向每个试管内放入海豚链球菌的培养液,确保600nm处的吸光度达到0.5左右。添加海豚链球菌后,将试管转移到30℃的培养基中进行振荡培养,并对海豚链球菌的增长状态进行了观察。如表1所示,可以观察到,在添加了噬菌体Str-INP-1溶液的试管中,海豚链球菌的增长得到了抑制。相反,在未添加噬菌体溶液的试管中,未观察到海豚链球菌的增长被抑制。
【表1】
抑制海豚链球菌的增长
Figure GDA0003009617350000101
从以上结果可以看出,本发明的噬菌体Str-INP-1不仅阻碍了海豚链球菌的增长,而且还具有将其杀灭的能力。由此可以得出结论,噬菌体Str-INP-1可用作预防海豚链球菌感染用途的组合物有效成分。
实施例5:利用噬菌体Str-INP-1的海豚链球菌感染疾病处置例
对用噬菌体Str-INP-1处置由海豚链球菌引发偏口鱼感染链球菌病的效果进行了调查。将出生4个月的偏口鱼鱼苗(体长6~9cm)50尾分为一组,总共分为两组。然后,将其放入水槽中分开饲养,并持续14天的实验。对水槽周围的环境进行了控制,使放置水槽的实验室温度保持一定。从实验进行后的第5天开始,以1×108cfu/g的标准,采用普通的投喂饲料的方式投喂含有海豚链球菌的饲料,一天2次并持续投喂3天。从投喂含有海豚链球菌饲料的最后一天开始,在两个水槽内均观察到了表现出链球菌病临床症状的个体。从执行完投喂3天含有海豚链球菌饲料的第二天(实验进行后的第8天)开始,按照普通的投喂饲料的方式给实验组(投喂噬菌体组)的偏口鱼投喂含有1×108pfu/g噬菌体Str-INP-1的饲料。相反,按照相同的方式给对照组(未投喂噬菌体组)的偏口鱼投喂不含噬菌体Str-INP-1的相同组成饲料。从试验进行后的第8天开始,每天以所有的试验动物为对象对链球菌病发生状态进行了调查。链球菌病发生状态调查是通过测定体色黑化指数的方式实施的,体色黑化指数测定是通过常用的测定Dark Coloration(DC)score(正常:0,轻微黑化:1,深度黑化:2)的方式实施的,其结果如表2所示。
【表2】
体色黑化指数测定结果(平均值)
日期 D8 D9 D10 D11 D12 D13 D14
对照组(未投喂噬菌体) 1.04 1.40 1.64 1.72 1.68 1.36 1.16
实验组(投喂噬菌体) 1.00 0.84 0.32 0.20 0.12 0.08 0.04
从以上结果可以看出,本发明的噬菌体Str-INP-1对于由海豚链球菌导致的感染疾病的处置也非常有效。
实施例6:饲料添加剂及饲料的制作
利用噬菌体Str-INP-1溶液,以每1g饲料添加剂中含有1×108pfu的噬菌体Str-INP-1的标准制作饲料添加剂。饲料添加剂的制作方法是先向噬菌体溶液中添加麦芽糊精(40%,w/v)后再向其中添加相对于整体为10%的海藻糖并冷冻干燥,最后将其粉碎成细粉形态。所述制作过程中的干燥过程也可以采用减压干燥、加温干燥、常温干燥的方式代替。为了进行对比实验,制作不含噬菌体的饲料添加剂时采取了制作噬菌体溶液时使用的缓冲液(Buffer;10mM Tris-HCl,10mM MgSO4,0.1%Gelatin,pH 8.0)来代替噬菌体溶液。
将通过上述方法制作的2种饲料添加剂分别与重量比250倍的养鱼用生饲料混合,最终制作出2种饲料。
实施例7:药浴剂的制作
利用噬菌体Str-INP-1溶液,以每1ml药浴剂中含有1×108pfu的噬菌体Str-INP-1的标准制作药浴剂。药浴剂的制作方法是以制作噬菌体溶液时使用的ml缓冲液每1ml中含有1×108pfu的噬菌体Str-INP-1的标准添加所述噬菌体Str-INP-1溶液并混合均匀。为了进行对比实验,不含噬菌体的药浴剂直接采用了制作噬菌体溶液时使用的缓冲液。
将通过上述方法制作的2种药浴剂以体积比1,000倍的水进行稀释,最终制作成药浴剂。
实施例8:偏口鱼饲养过程中的饲养效果确认
对利用实施例6及实施例7中制作的饲料和药浴剂饲养偏口鱼的饲养效果是否获得了改善进行了调查。特别是,本调查是从病死率观点实施的。将总共600尾偏口鱼每300尾分为一组,总共分为2组(用饲料喂养的组-A;用药浴剂处置的组-B),持续了4周的试验。将每一组又重新分为由150尾组成的小组,各小组分为使用噬菌体Str-INP-1的小组(小组-①)及未使用噬菌体的小组(小组-②)。成为本试验对象的偏口鱼选用出生4个月的偏口鱼鱼苗,各试验小组的偏口鱼各自饲养在以一定间隔隔离的不同水槽内,各小组按照表3所列项目进行区分。
【表3】
偏口鱼饲养试验中的小组区分及标记
Figure GDA0003009617350000121
如果用饲料喂养,就将通过实施例6中所述饲料制作方式制作的饲料按照表3的区分采用通常的饲料投喂方式进行喂养。如果用药浴剂进行处置,就将通过实施例7中所述药浴剂制作方式制作的药浴剂按照表3的区分采用通常的药浴剂处置方式进行处置。试验结果如表4所示。
【表4】
偏口鱼饲养试验中的死亡率
死亡个体数/试验个体数 死亡率(%)
A-① 6/150 4.0
A-② 37/150 24.7
B-① 8/150 5.3
B-② 43/150 28.7
从以上结果可以确认,投喂依据本发明生产的饲料和利用依据本发明的药浴剂进行处置,可减少偏口鱼在饲养过程中的死亡率,由此可以得出以下结论,使用本发明的组合物,可以有效改善偏口鱼的饲养效果。
通过以上说明,对本发明的特定部分进行了详细介绍,对于具有本行业普通技术知识的技术人员来说,应当明白,这种具体的技术仅代表理想的实施例,它并不限定本发明的范围。因此,本发明的实质性范围应当依据后附权利要求书及其等价物确定。
托管机构名称:KCTC
保藏号:KCTC 12687BP
接管日期:2014年10月01日
序列表
<110> 尹特荣生物科技株式会社
<120> 新的海豚链球菌噬菌体Str-INP-1及其海豚链球菌增殖抑制用途
<130> DFP18KR3301
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 33269
<212> DNA
<213> 噬菌体 Str-INP-1(Bacteriophage Str-INP-1)
<400> 1
ttaatccatg cttcagccat taacctacaa ttttcgtcac taccaaaaat ccaatcaaaa 60
atttttgcag gcatatcgct gttagaaaac aagcctgtta atgttaaagc acgctttttg 120
caatactcta tccaatccgc cacaaactgc ggaacttctg gttttggttg gtcgatgtca 180
ggctcatcta atctaaaatc actatctgac atgtaataaa tatcgtcttt aattaagcaa 240
tccagctcgt taacatttct ttcactatcg aggaaatcta tgttgcccat actgtcaaca 300
tatcctctaa cccaaatctg tgtacctcgt tttaaatctt caatcttcat ttgctacctc 360
ttttaatact tttgtaaaaa tttccttaac tagtagttgt ggtatatttg atcgctcatt 420
atatgacctt gaaaaatctt ttttaaaatc aatttcattt ggaatgtttt cgtgttttaa 480
attcaaatca atattcccgg aaaatcgtgt tggtttactg attggataat cataattgtt 540
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aattctgcca aaagctgggt tttctataag atagtatttt ggctcatatc gctttatgat 660
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tttaaattgg tatctatcat aatctgaatg atcccttact gtaaacctcg ataagggtat 780
ttgaggttcg aacaatccat cacccttttc ttgtttccaa caagcgtttc ctctatccat 840
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attcaaatta ataaaatggt cgtttttgtt ttcaatatca attccgattg gataaatttc 1020
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ccaaacaatc atcttcatcc cccattccca gtaagttctg caattcgttt tgtcttatca 1140
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cctttgattt gttggtcttt tgatttaagt tctgttttga ggtggttatt acgttgtttt 1260
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ctgccaacat catgcaataa ttagccatgt cgtttaacgt gtctgaaatg ctctctaaga 1440
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tcttatccat tcatcacctc gtacttatat acctgcggtc taatattaag ctgacttgca 1680
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atctccttta cggaatccag ataaatcaca atatccttta ggtacaccag tttcaaacca 1980
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atatataagg tttttaaacg gttaagggtt accatttttc cattaaccaa actattaacc 2340
attaaccttg atataacatg taactggttt tttcggatca ttttcatcgt gccaagaaaa 2400
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atagtctttt ggactcattt ctacattttt tccgtttaat tcaatctcaa tgatttcatc 5340
aactctgact agttcaccgt taactttttt catttctacc tttttaggtt cttcttttaa 5400
tttttcgcca cagtacggac aacatccgtt aactatatca gttgagaaga acgcaccgta 5460
acatttagga cattctcttg tagctggtga atcgtcttta tcttttgatt ttttcttttt 5520
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catcatcagt tatcttttta actaaacgag ctacgacatc tgtaagacct agaaagttat 6720
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tgtgattctt tccatctctt ccgagatttg ctagacaagc tctaaacagt tcagaaacat 6960
tgtctacaac tatgttgtca tattctttag ctccgccttc aaccaattca ttcactagcg 7020
ttagccaact ttcccagatt ttatgtgtat caacgtcagc aatatcaata tttttaatac 7080
ctcgtaaaac ctttgctgac ttgtcaatat ttacaacaag tgttttacct gataaatatt 7140
tagcagttga tgttttccca taacccggat tcccgtaaat taaataacac gtatcattaa 7200
tttttaaatc tgttgcttta gttatctcca atttctaatc cctccacaaa atcgtgagca 7260
gcatttctat aatcaaattc attccgttgt tgcctatatt tttctttgaa taattcatct 7320
actacttttt tgtttaaata ctccgaatat tcatctgcta aattgtcagc aaaatcattc 7380
atccgtctat ttatttcatt ctcaatttta gtatcgaata aatcaatttt gtcggatgtt 7440
atatctccat gtttgcagtt gtaactcggt actatttgaa tttttccgaa acttgtcatg 7500
tacgttctat aatttttcaa tcgtatgccc tcgcttgcca cgttactgtt ggttcgtctt 7560
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ccattttcat aaacttccca ctgcttagca ttaattgtcg gcgcaattag ttttatttct 7980
ttaattaatt gatctagtgt aagtccacgt tcttgtctta gttttttaag attgttcata 8040
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actccagtag ttgcaactgt tgcagacgct ccgactgttt caattgctgt agatgttgct 20880
tttagttttg ctaatttgct aaaccaacca aatacagtgc tagatgctcc agttactgta 20940
cctaatgctt ttgaaactgg ataggcaccg gccgttatca aacctaaatt aattaataat 21000
ttttgtgtag ctggatcagc ttctgaaaat ttattaacta agtctgtcac tttttcaatt 21060
atcggtgtaa gtgttggtag taacttctga ccaacagtaa tacttaatac ttctaatgat 21120
gatttaaact ggtcaacttt gctttttgat gaaccagaca tttccttggc taaatctgag 21180
gtataacctt ttgcgttttc agtttctttt gagagatttt taagtgcatc tccgccttga 21240
tcaactaaaa tattcattgc tgactgcgct tctacaccaa acgcttgcga tattaacgct 21300
gccttttgag cgcctgtcat atcttttgtt gatgacttga ttttatctaa tacgtctggt 21360
agtttaatag cccctgttct aaactgttca gatgtaaaac caagtttatt aaacgcaact 21420
tcattttctt ttgcagggtc aagtaattta cttaaagcac cacgtaaagc agtacccgct 21480
ttttgacctt cgatacctgc attcgataat agaccaattg cagatgctgt tgtttctaca 21540
ctcataccaa cagattttgc gactggacct acatattgca ttgcaagtcc tagatcttca 21600
aaccctgatg ctgttttatt ggccacaaat gacagtgagt cagtaactct actagtatct 21660
ttggcttcaa gtccaaactg ttgtaacgta cttgttgaca cgttcataac cgtgttaaaa 21720
tcatctccag atgctttagc agcatctaag atggccggca ttgcgtccat cgtttgatta 21780
aacgtgaaac cttttttaat aacttcttgc ataccatcat ttatggcagt tgtagagata 21840
ccgtattgtt ttgcccaacc tttagaagca tcacccattt ttttggtttg tgcatttaat 21900
tgttctactg aacttgttgt gtctctaagt aatgctcttg ttgtttgcat ttggccatcg 21960
aaatcaactg cttttttagc tgcataagca agccctgctc cagttgctaa tgatgctgtc 22020
ttagttgctt cagcaaactt attaaacaag ttactagttg ttcttaattt tccagataac 22080
tcgtctaatt ctttagatgt tcttccccaa aaactatttt cagcgtttac tctttttaaa 22140
gcactggaaa cttgattaag ttcattttcc attgcattta gcttggcgtt ctcacgctca 22200
atttgtactg ctgccgcttc ccacttcgca gtgcctggct ctagctcatc atacttagct 22260
tttaactgtg tcaaaacttt cttttgagca actatttgct gttcaattga tttatatttt 22320
gtaccaagta atgacaagtt atttccgtta ccttttaggg cactgtctaa tgctcttgtc 22380
tcagctttaa aataattgac ttctcgcttt gcgctttgaa gttttggtga gaagtttgta 22440
gtatcaagtc ctaactcgat aaacatactc cctaatggtg ttccacttga catattccct 22500
cctttcactt aaaaataaaa aggcacaatt aagtgccttg catttgtctg acaaaatcac 22560
ctagaggtat aatatcttct tggatttcat tatcttcctc atcatggcca atgacagcca 22620
tcaggtctct ccagtccgtt tccatgacat cctttactga taatccataa tcagacttga 22680
taatacttct tgagaattca tcaaattttt ttaatgcttt tttagcactt attctgtttc 22740
ctttttttcg gcttcaccgc caatcaattc aacaaagaca tcggctatta aattatttat 22800
ttctttcata ttcattccgt catacatctt gtcgatagtc aacccttcaa aaagtgaaga 22860
aataaagtta agctgaatgt caagagcttc tgtttctgat aattgttttt cttcaatatc 22920
tgcttgcatt gctagatatt cacggtattt acgagctgga agaaagtcat tttcataaac 22980
aaccttctct cttttctcgt tacgtacttt aacctctaat tttgccatct attaagctcc 23040
tactgtcata tcaagcaagc ttgctaaagc tttagcattt gtacctgtac catttgcttc 23100
tgtatcaata cccataccga catattgacc tttagcatct cctgttgttc ccggttgtgc 23160
taagaacaca agtttttgcg aatcaaggcc ctctttctta ctgtcttgag tttttagttc 23220
aaggtcttct ttagagaacg ttcctttaaa gaaaccgaag taagcatttc cttctgtatc 23280
tggtgcttcg agcaaaatag atacttctgg agcttctgtg tcctctccga tgaatgttag 23340
accagttgct gttgttcctg atttgtaacc aaaaattact ttttggacag ccataggaat 23400
gtcaattaat tcaaactcag ctttcacttc accaacacca cgacgtgagg tatagtaggc 23460
aatatcagaa ccgtaagtct gaataggatc agcagctaaa ccactaattt tagcagtttt 23520
ggtcgcacct tttcctgact taccttcaat tacaaatttc ttttcatttt gtcctaaaac 23580
ttggatcgtc atacgtttaa atccgattgg ttgcattaat tttctccttt aatattcttc 23640
ataaattttg ctgaaacctc tataggtcct agcatctcta tatctatttg tattgttttc 23700
aaatccctca agacctgaat ctgattgaaa aaaacctatt gttgacaata gaccttcaat 23760
cttatgttgc aattctttgc attccattct tgagatactt tcaacctcaa tttgatacaa 23820
aaatttttta gataatgggg catcagaacc aaaatcttgt tgttgaggtg gagtaattgg 23880
aataataaca atactagtgg aatcatctga cagactttct ggccttgcaa aagacttaat 23940
cttgacttgt cttatcgttt catttgtctt taacagatca gcaatttcca tcatcatatc 24000
tctgaccatt atattttaaa ttctcctttc aatttttctt gtatcctttg aggataaact 24060
ccttcgaggg aatcagaata gcgtctgata acaccgacac cacgcttatt cttcttccaa 24120
ccgtactcca tttcttgtaa atggactaat ctgtaccgtg gcgctgtaaa gccaagtttt 24180
attttaggga ttccttcgct acgttttacg ccagatactg ctacactttc cattgtcata 24240
ccagttcttt gataaactga tactgcttct ttaaatgtcg gttcaaactc ttttccgact 24300
tcctttagcg ttttgttcac tgctctgtta actttcgcag agcctaattc tttttccata 24360
ttcgctaata gttcatcgat tccgtttagt tcagctccca tatcagtcac ctgctacgat 24420
tataataaag tcgtcatcta caaaatcagg tctaatatca actatcccta gctttttaga 24480
ctggactctt ttatctaaaa tgtctacttt gtggtcatta gatggataat aagcagagta 24540
tggactccgc atttttatag tgtattgtgc tttaactcct ctatcacttg caatagtaat 24600
atccttggaa cttggattgt aaacttctgc tagtgttcta aaaagttcgt taagtttaat 24660
atcacggcca tctagtgagt catctgtagt tgctgaataa aatacgactg gtgtttttaa 24720
atcaccgtta tttgtttttt gtttcatcat cttttacttc ttcaataaaa ttcggaagat 24780
tttcgtcgat ttctttaaag cgtgtttttg taacttcaaa ttcatctcca atctcacgga 24840
ttttatcttc tttcaaatct ttaaaacgta gaagtgtttt tactttcata ttctttctcc 24900
agcccgtaca tagctaatct agctatctca tttttaaacg aatcataaaa caactcgaga 24960
ctgtcattat aaacatatct cgagcgttcc ataattaatt ctttccctga ttcaatagtc 25020
attaggtcaa agcctaataa gctatttaaa gcgtcttctg agctatttaa aatgttattg 25080
atgttttcgt catctacatc atgaaacact ctcatacgct ctttaaatcg ctttaagagt 25140
gcattatttt ccataggcta ttaaacttct ggcaaagctt cagggactgt tagtgtccaa 25200
acagctgctg cacgttcatc ttttgcacgt ccgtaagcaa attgtttagc tgtaaacaaa 25260
tctaggtctt cgatagcaaa tgtttctgtg tatttgcgca actcaatacc gcctgcgata 25320
tatgcatcgt aacgaccttt aacaaaagta gtaacttgtt tcgcagtttg atgtacagat 25380
tcgattaatg ttacattaaa cggcattgca gtcacaaata caccgtttgc gtttaatgta 25440
gtatattgtt ttttgatatc ccatgcgtct actggattaa caaccattac gatgttacct 25500
tcaacgttaa ctggtgtttt accatcttct tttacagagt gatgtttgtg tactccagtt 25560
aattctttaa cagttgttgg tgcatcttta aatgtaagca caccttttgg ttttttagct 25620
tcataagttg ctttttcgcc aacgacatga ccactcaatg tgcgtgatag tccgattggt 25680
ttgctatttc catcaccatt taaaaatgct tcttccaagg ctactgcaaa cgcttcgtta 25740
atttgtgttg acacaaaatt aagtaaccaa gcagggccaa attttactgc atcttttggg 25800
ataactacaa atgccgtaag tttgtgttgg attgctttac tagagctaaa tgcagcagtt 25860
aactgacctt tgatttctcc gtagagttct ccccattctg ctttaccttt agattcagag 25920
tcaataaact tcatgaagcc ccatattctt caatccgata acttcaagca atggatgtgc 25980
tgtaactaaa tcttcaaaaa tgcgatcaac agtttcttct gggataagtt ctgtaatacc 26040
tgttggagct gttttcacga tttcattaaa gaatttgcgc tcacgagcgg tcatcttcat 26100
ttcttctggt gtaagtgcaa tagcagactc aacttccgaa gaagctacct tcttagattc 26160
ttcaaacata gcttctaaca tttcgccgta tagttcagat tgcacttctt gaggttcatt 26220
cgcttgtact gcgttcaaaa atttttcacg gattgtgtta aattcatttg ataatttcat 26280
tgtcatattt taaatttctc cttttaatta aaacaaaagc cccaaatcct tttgacactt 26340
cttttcttgt ttagtttttc tacttcttca ttttttgttg attgttatac tcactaactg 26400
caattgctaa ctcagcaatg tctggttctt tttgattaac attaatagca ttagccagtt 26460
ttgagataac ttcgctaggt actacgttct cgatccctgc tactaattgt ggcgcttgct 26520
taatttcttc tgcaaacatt tctttatctg caaaaccttt atcaacagct tgttgagcag 26580
tgaaccaagt ttctttgccc atcaagtcta gtaattcagt catttctaaa cctgtcttat 26640
tgacataggc attagcaatt gatgtgttgt aattttctag tacgccagct tcgtgtaaca 26700
tttgtttatg atcaccactt accgtagttg atacattatg tatcatgatt tgagcagttg 26760
gactaatttc aaccgtatca ccagccatgg caatcaccga tgctgcactt gctgcaatgc 26820
ctacaatctt aactgttaaa ttcccttgat aagattttaa agcagtgtaa atttcactcc 26880
ctgcgtatac atctccgcca ccagaattta taataacttc cacgtcgcta ttatcttgcg 26940
gtaagataat atcttttggc gcagtagctg gcatgtctag ccaatcataa aaccaacggt 27000
cgccgtctga tacgatcggt cctttaattt gtatctgtgt catttagatt ctcacctcct 27060
ttcccatatt caacatagtt tttagtcata ataaatttct ctccatcttc gatatcatca 27120
aacccaaatt cgttacgtac ttcatttcgg ttaaatgtac cactggcaat caacttatca 27180
atgtttgaag cacactcaat aatgtttatg tgactaagac ctacaatagt aatgaacgta 27240
cctttttcat attcgtcttt actaagtagt tttgcattta gttcgtcttc cactttttta 27300
aataaaggtt gcatacaata aataacaagt gctttttgcg agctgtcaag ggttgccata 27360
tcaccatgca atacaacagc tggaatacct aagatatctg ctatctcatc atcaaactgt 27420
cgtctgattg ttttaacatc atctatagat atgtttgatg tgccagttgt gtttgttaac 27480
tcgttatact caagtccgtc tactgttggg acgattgcaa cagatcgagt tgaaaaagca 27540
ttaaataatt tatcagaata gctttgcatc aattctcttc ttttatcaac catctgctga 27600
gaacctttaa attctaatgt cccacggatt tggttatttc gttggattgt ttcaatcatc 27660
cgttgatgca acttttcata gtcagcaaaa agaccatcaa tataatttga tagtctatta 27720
ttgttatatt gtaagtaaac aacttcactc attttgaacg ttcgcttaaa tgtgtaatct 27780
ttgatagtga cttgttggaa caaatcttca taaactgcat attcgatatg gtcaaagcta 27840
tctgcaatca gtaactggtc atcatctgac aacacaacta atacttcatt gtcggttata 27900
agtttataga taaatctttg ccaaaaccgt gacgatgatt catttttgtt tggtttgaca 27960
ttgagcatgt aggaccatgt ttttttatca gagttcaaaa atttaaagtc agagttagaa 28020
aatatcctag ctaaaaattc agctgattta tcaattgcca gattctttaa gtagagattt 28080
tgatattcta caaataactc atcaatatta tagctacttt ctggaattgt tccagtttta 28140
aagacactac caaagaaatc aaatagtttc attcatttcc tcctttcttt agattccatg 28200
ataaccctgt cggttgggag atgacgagat cacttccttt cagttaccaa tattttttaa 28260
attcaccaac tttttctaaa cctccatcaa aaattttata aatacattca ttaaaattta 28320
tataagtgta tccattttta taagcaatat ttctggcttc tgaaattgta tgaccaggat 28380
ctatctcata gattatttct gctctaccaa cttgcttttt acgtttacaa ttattgatat 28440
taaagttaat acctaaatta ttaagtttat ccagtgcttc ttttacgtca tcaattgcct 28500
tttggacttc attgatattt tcaatttcta aattcaggaa catagttccg gttgattcta 28560
atttcactac tttccctcct aaaaatccca atcagcaatg ctttctaaaa actctccaac 28620
attgctatct tgtatgcttt cctttttata aagcgcagat ataaaagcat gaaatccatc 28680
tgtctttctt cttactggtt ctttcttcaa aaatcgttta ttgcctgatg catcttcttt 28740
aacaaaagtg ttgtccgtat accacaacat cattctgtca tcatctaaaa agataaagcg 28800
ttcattagca aatccatctt caataatcgg tgcgacttta ctttgaatcg ctccagggtt 28860
tcttaaaaat tcatattcaa aaccttcttc ttcaagcaat ggttttaata agtccatacg 28920
gaatccatca gcacagacaa tttcgataaa atgatcgttt ctccactcta ctaacttatt 28980
aattagcagt cttgggtcta tgctatctcc atcaactaag gttaacagac catttctctc 29040
ccattcctca ataggcgctt ttaatttaaa ggctttaaaa aattcacgtc taacaaacga 29100
gtgttgcttc caaataaaat catcgccatt cttaaataac aatccaacag atgcaaaatc 29160
tcggatactt gcgtagtcga atccagctac acaagaccta ccttttaagt ctatttcagg 29220
ctcccgtaat gtagcaagta gtttttcacg actggtaaca tctttttcaa ggtccgcttc 29280
tggtaagttc atgcgctttg tcataaactc ttgtcttccg cttggctcaa gttctaaatc 29340
gtcatagtct gattttgtag tagtccaaag ccttttggca tatgacgtat cttcatcaag 29400
cattggatta gctttcggcc agttcttgaa atcatcaact tcctctgcat tatctaattt 29460
gcagatgaat gggaacattc ggaagtcgtc tacttctcct cttaatatcc gactagcttt 29520
ttcaatcgtt ttgtcataaa acccttcacg cacataacca ttcgtaccat taaaaaatgt 29580
tcttacatga gcaatctttc caaggcctga tttctgcacc ttaacaattc tgtcatcttc 29640
aaattggtga atttcatcaa attcaagaca accatctcgg gcagagtcca ttgttttggg 29700
gttatttgtt ctaaaagaaa agacggaatt attcttccgt ccgacaatag ccatttttgt 29760
taagtagtaa tgattttcta atccccttgc ttggattgtt tcatatactt cttcaaatga 29820
tactttcccc tgtttttcac tgttggcagt aattgtgaca tcataatttt taataggata 29880
taatgggctt gtaaaaaacg catccctagt cgacataaaa ccattcttac cacctccacg 29940
agcaagtgtc aaaaggtatt cattaaaatg tggttcgcca tcttcttttc taaataaaaa 30000
aatgaatggt gtaataaatt tctgatatgc tgccaaagga aagaaattct tttcagcaaa 30060
cctcacatat ttatctatta aatcattgtc aaaatacaaa tcatctcgag tgagtatctt 30120
ttctctgatg attttaacta attgttttcg ctctttgtta taaacaatta aatcgttatc 30180
aatcttatgt gcatattctt caaacagtgg atgtgaaatc aaataagatc accaccatcc 30240
gagtcatgtt tcgtctgcac attaaattca aaagattttt caattgataa tatctgcgca 30300
ttaatcttag ctttttcttg aagagcggga ttagtcttta gaaacacttg actgccattt 30360
attgtctcaa ctaatagccc ttgttcttta atatatttat ccagtttata aaacatttca 30420
attaagttta gataacgctc aaccttttct aattgcattt ggtcatcagc gttaatcttt 30480
gataataact ctttttttag cttctgttgt gtgtatccca cagacacccc cccttcacgt 30540
aaaaatactt aaatatttgg acagtcgacc cttcccaccg gtttcaaacg ttcggttttt 30600
actgattatt tttaagtggg gggtatctat ccgaaccact cgtcagaacg ataatttgtt 30660
tctttctcaa tctttttctt tttataatta aaacgtttgt gtcttttgtt atgacagtct 30720
ttgcacagag tcctaaggtt atcaatgtcc aatgcaaact caggatagaa ctctaactct 30780
ttgatatggt caacctctaa gttagtcttg gttaccttac cttctaactt acaccactga 30840
cattcttcgt tatctcttcc aattgcttca agtctcaatg ctcgccactc ttgtaagttg 30900
tagaatgtac tatgtcttgt tgccttagtc gatatgtcaa tctgcataat acctccataa 30960
taaaaagcca ctcaatgagt gactaagtaa gcgtgcgagc ggactcgaac cgccacgcct 31020
caatgttgaa ctatcaacat aataaggaat cgaaccttat tgccaagaca cgctttatag 31080
gaacagtcgg aatcgaaccg acacatcgaa gtggtctgct tcaaacgtgt ccacctctag 31140
tagttttcca atcttggctc atgttcctat tgagatagca ggattcgaac ctgcgacgct 31200
tccattattt atctcaactg atattgtaag tttggtttat atgttgttgt ttactacttt 31260
gtagctatta gttaatttat accgcttctt acaattatct atgatactat aatactaaat 31320
taaatagtat ttgtgagtaa tagttagtca attataatac tatagtagta ctatttagta 31380
aatcattgag gttttctatc gctttccttt tgattgtata gtatgtgttg cggttcattt 31440
ccaatctatc tattgcttcg tcgtaagttt ggcaattgac gaatgtagtt accaacacat 31500
gtctttgagt tatgtcaggt agttgcataa ccatttgaat gatattacct tttcgtctgt 31560
caagctctcc aatctgttca gcataatact cacctttaat gatgttgtta atattcttgt 31620
cagtctgtga ttgcttaatc cctccttgga ctttcatgtc agaccactgt ggactagaca 31680
acacagattg actagtagtc atatctcttt caagctcttt aattaatttt ggtattaccc 31740
ttaattcttt taacaacata tcagcttttg tctgattccg ccccattcca agtctcctta 31800
tggtataata tagttacgaa ctaataccaa ggcgctcatt ctgttgggcg ctttttgttg 31860
tcttatcgga gtagctatac ctcttttctt ttttattttc ggacaggcac acgatccgca 31920
ttgaaattct cacagtgcct tgaataataa cagatgaccg ataatctgcg ttagaatgtg 31980
tacttatatg taaggagcct ttcttatttt tattattttt tcggtctatg ccacatggcc 32040
cgattagagg tcaagtggtt atgtccgcca aaatcaataa ctattgcttt tgacttgtct 32100
ttgcagccaa cgatcatgcc gtaacgatta atatgctctg ccccagtatc attaccataa 32160
tacttagtta tttttaaaac tcctcaaaat aaaatttacc tgaaaatggc ctgatttgaa 32220
cgatgccata atctatacct agcctactga taaaaggctt agtgatacgc tcatgcaaag 32280
tcatcatttg ctgtctaaaa acttctaggg tcattgcgtt tttataataa ttgcacgatt 32340
ggcaagcagg catataattg tccatagtat cctcaccgcc aaaaacaaaa ggctctaagt 32400
ggtcaactct tagcgttttg atgtctaata ttttaccgca ataggcacaa tgacaatcgt 32460
atttttccaa gacaagttgc ctagtctttt tacttatgga tttacgtttc acctcaactc 32520
ctccaaacta atccatttaa actgcgggaa ttgttctgct tctttttgag tgcatttgtg 32580
accataaaaa tttacttcac atgggctgtt agttgaactt acagttaatt tcttgttatg 32640
acaatctatg ttttcataac ataaataatt aaacttccaa ctcggttctg gcacatcaac 32700
tagtaacaca cctaattttt ctgtcatttt tccacgcttt ctagcaactc actgttttga 32760
tatacgttgc cgatgatttc aatagtttca caaccatctt cggttggact aagataccaa 32820
aattccccat ctttccacgc tggacataat aaccacagtc catcaattct tctttttatt 32880
tcaaacgttc cttttacacc ttgcgaccaa gctatcacga catccccttc gaaaacatca 32940
ttaccttttt tatcaagtag tcctgtagat tgcattggtt cgctaaacat gctgtcatct 33000
gtacttaacg ccataaacaa ctctgataat tcatcgtatc catcagctat ccacatttca 33060
cgactttcaa aatcgtatac tctaactttt ttcatcactc cacctccttc gcccactgcc 33120
acaaaaaatc aaaatcctgt ttgatttcgg attcggtgag gtgcagatat tttggtttgt 33180
taatgttagg gtttaacata tcaagaatta accgccctgt actttgttgt ttaaacaaca 33240
ctagttttcc gcctgcgcta tttggatta 33269

Claims (5)

1. 一种保藏号为KCTC 12687BP的长尾噬菌体Str-INP-1,其特征在于:
其具备专门杀灭海豚链球菌的能力并具有用序列号1标记的基因组。
2.一种海豚链球菌感染预防及处置用组合物,其特征在于:
以权利要求1所述的噬菌体Str-INP-1为有效成分。
3.根据权利要求2所述的海豚链球菌感染预防及处置用组合物,其特征在于:
所述组合物用于生产药浴剂或饲料添加剂。
4.根据权利要求2所述的组合物在制备预防或处置海豚链球菌感染的药物中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途,其特征在于:
其中所述组合物以药浴剂或饲料添加剂的形式对除人之外的动物使用。
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