KR20020000217A - 스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료 방법 - Google Patents

스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20020000217A
KR20020000217A KR1020017010898A KR20017010898A KR20020000217A KR 20020000217 A KR20020000217 A KR 20020000217A KR 1020017010898 A KR1020017010898 A KR 1020017010898A KR 20017010898 A KR20017010898 A KR 20017010898A KR 20020000217 A KR20020000217 A KR 20020000217A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
composition
carrier
lysine
enzyme
streptococcus
Prior art date
Application number
KR1020017010898A
Other languages
English (en)
Inventor
피쉐티빈센트
루미스로렌스
Original Assignee
뉴 호라이즌스 다이아그노스틱스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 뉴 호라이즌스 다이아그노스틱스, 인코포레이티드 filed Critical 뉴 호라이즌스 다이아그노스틱스, 인코포레이티드
Publication of KR20020000217A publication Critical patent/KR20020000217A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/503—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명은 스트렙 목으로 일반적으로 알려져 있는 스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료법을 위한 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소를 함유하는 조성물에 관한 것이다. 그러한 감염을 치료적 및 예방적으로 처리하는 방법이 또한 기술된다.

Description

스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료 방법{A means for the prophylactic and therapeutic treatment of streptococcal infections}
그룹 A 스트렙토코커스는 무증상성 사람 및 인후통, 편도염, 또는 농가진 등의 질병 증상을 가지는 증상성 사람에서 담체 상태로 존재할 수 있는 중요한 병원체임이 알려져 있다. 치료되지 않으면, 이러한 스트렙토코커스 감염은 사구체신염, 류마티스성 열병 및 아마도 류마티스성 심장병을 유발할 수 있다. 항미생물성 약제, 특히 페니실린 유래 항생제의 발달과 더불어, 원인적 미생물은 적당한 항생제 요법의 처방된 섭생을 이용하면 쉽게 제거될 수 있다.
감염된 사람(보통 어린이 및 젊은 성인)은 그룹 A 스트렙토코커스 미생물을 특히 탁아소나 학교에서 다른 사람에게 전염할 수 있다는 사실은 항미생물성 요법을 개시하고 적어도 24 내지 72 시간 동안 이러한 환경으로부터 알려진 감염된 사람을 격리시킬 필요성을 제공한다. 조기 발견과 적절한 치료를 통하여 문제가 많은 병원체의 전제적인 순환성 전달 패턴을 감소할 수 있을 뿐 아니라 그룹 A 감염(류마티스성 열병 또는 신염)의 후유증을 감소 또는 제거할 수 있다는 것이 대조되는 연구에서 밝혀져 있다.
미국특허 제5,604,109호 (Fischetti 등)는 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소를 이용하는 진단 검사에 의하여 그룹 A 스트렙토코커스 항원를 빠르고 민감하게 검출하는 방법을 개시한다. 그러한 검사는 감염된 사람을 빨리 찾아내는 데 도움을 줄 수 있고, 그 후 감염된 사람은 일반적인 항생제 치료를 받을 수 있다.
그러나 스트렙토코커스 감염과 효과적으로 싸우는 것은 여전히 문제로 남아 있다. 스트렙토코커스 인두염을 가진 환자는 전염성이 뛰어나고 가까이 접촉시 미생물을 전염하고 그 결과 스트렙 목 전염병이 퍼지게 한다. 이것은 사람들이 서로 가까이 접촉하는 학교나 군대에서 특히 문제이다. 게다가, 일반적으로 항생제의 예방차원의 용도는 많은 이유로 권고할만하지 못하기 때문에, 스트렙토코커스 감염을 방지하는 예방 방법에 대한 필요성이 있다.
본 발명은 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소(Group C Streptpcoccal phage associated lysin enzyme) 및 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소를 포유류의 입, 목, 또는 코의 통로로 투여하기 위한 담체를 함유하는 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 스트렙 목(strep throat)으로 일반적으로 알려져 있는 감염을 포함하여, 스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료에 특히 유용하다.
본 발명(인용에 의하여 미국특허 제5,604,109호는 전부 통합됨)은 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소 및 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소를 인간과 같은 포유류의 입, 목, 또는 코의 통로로 투여하기 위한 담체를 함유하는 조성물을 제공한다. 그러한 조성물은 감염된 사람에게 노출된 후 감염을 방지하는 예방법으로서 또는 이미 감염된 사람을 위하여 스트렙토코커스 A 목 감염의 치료법으로서 특히 유용하고, 그에 의하여 감염을 완화시킨다.
따라서, 스트렙토코커스가 감염된 사람으로부터 도입될 때 구강이나 비강에 존재하는 라이신의 존재는 들어오는 스트렙토코커스의 적어도 상당량을 죽이고, 그에 의하여 감염을 예방함으로써 예방효과를 제공한다. 라이신 효소의 존재하는 스트렙토코커스 감염에 대한 이러한 빠르고 구체적인(치사) 활동은 상기 감염을 줄임으로써 치료효과를 얻고 상기 스트렙이 다른 사람에게로 전염되는 것을 감소하게 한다.
본 발명의 일실시예에서, 라이신 효소는 캔디, 껌, 마름모꼴 정제, 알약, 정제, 분말, 에어로졸, 액체(예를 들면, 가글(gargle)) 또는 액체 스프레이의 형태로 투여된다. 본 발명의 다른 실시예에서, 상기 라이신 효소는 비강 스프레이의 형태로 투여된다.
스트렙토코커스 A 노출의 치료방법은 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소의 제약학적으로 수용가능한 양의 유효량을 치료의 필요성이 있는 포유류의 구강 또는 비강 점막에 바르는 단계, 상기 라이신 효소가 구강 점막을 포화시키기에 필요한 기간 동안 상기 라이신 효소를 구강 점막에 접촉시킨 상태로 있게 하는 단계, 및 치료가 완결될 때까지 비슷한 방법으로 그러한 라이신 효소의 부가적인 투여량을 바르는 단계를 포함한다. 상기 효소는 이를 함유하는 담체에 따라서, 감염을 위한 목 또는 코의 점막의 라이닝(lining)에 투여될 수 있다.
이 조성물이 그룹 A 스트렙에 대하여 유사하게 효과적인 동시에, 그것은 그룹 C 감염에 대하여도 사용될 수 있다. 상기 효소는 유사하게 그룹 E 스트렙토코커스에 대하여도 효과적이다.
스트렙토코커스가 감염된 사람으로부터 도입될 때 구강에 있는 라이신의 존재가 들어오는 스트렙토코커스를 죽이고, 따라서 감염을 방지하고 스트렙 감염을 방지하기 위한 예방법을 제공한다는 것이 밝혀져 있다. 상기 라이신 효소의 스트렙토코커스에 대한 이 빠르고 구체적인(치사) 활동은 또한 감염을 감소시킴으로써 감염된 사람을 치료하는 효과를 주고 스트렙이 다른 사람에게로 전염되는 것을 감소시킨다.
특정 박테리오파지 (C1으로 확인된)로 감염된 후 그룹 C 스트렙토코커스 미생물에 의하여 생산된 아미다제 무랄리틱(muralytic, 라이신) 효소는 미국특허출원 제5,604,109호에서 기술된 바와 같이 분리되고 수확된다. 이 그룹 C 스트렙토코커스 효소(또한 라이신 효소로 공지되어 있음)는 그룹 A, C, 및 E 스트렙토코커스의 세포벽에 특수한 특이성을 가지고 있고, 공지되어 있는 다른 방법에 의하여 달리 분리되고 수확될 수도 있다.
스트렙 감염의 예방법 및 치료법에 사용될 수 있는 조성물은 구강 또는 비강의 점액상 라이닝을 위한 라이신 효소 및 (담체 시스템 또는 경구 모드와 같은) 적용 수단을 포함한다.
상기 효소를 담체 시스템에 넣거나 경구투여 모드에 있는 때 또는 그 전에,상기 효소는 pH 범위를 약 4.0과 약 8.0 사이, 더 바람직하게는 약 5.5와 약 7.5 사이, 가장 바람직하게는 약 6.1에 유지시키기 위한 안정화 버퍼 환경 내에 있는 것이 바람직하다.
안정화 버퍼는 상기 라이신 효소의 최적 활동을 허용해야 한다. 상기 버퍼는 디티오트라이톨(dithiothreitol)과 같은 환원제 일 수 있다. 상기 안정화 버퍼는 또한 에틸렌디아민테트라아세트산 디소디움 염과 같은 금속 킬레이트제이거나 이를 포함할 수 있고, 그것은 또한 포스페이트 또는 사이트레이트-포스페이트 버퍼를 함유할 수 있다.
변질을 막기 위하여, 상기 안정화 버퍼는 소량의 소디움 벤조에이트와 같은 보존제로서 살균성 또는 정균성 약제를 더 함유할 수 있다.
적용 수단은 직접적, 간접적, 담체 및 특수 수단 또는 이들의 조합을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 상기 라이신 효소를 코 멤브레인에 직접 가하는 것은 코 스프레이, 코 액적(drop), 코 연고, 코 세약(washes), 코 관장약(injections), 코 패킹(packings)에 의할 수 있거나, 콧구멍, 콧날, 또는 얼굴에 바르는 연고의 사용 또는 이러한 적용 방법 및 유사한 방법의 조합 또는 달리 공지된 코 담체를 통하여 될 수 있다. 입 및 목에 가하는 것은 목 정제를 사용하여 될 수 있거나, 입 세약, 가글, 용액, 스프레이, 캔디, 껌 등을 사용하여 될 수 있다. 따라서, 상기 라이신 효소를 투여하는 형태는 마름모꼴 정제, 알약, 캔디, 주사항원, 껌, 정제, 분말, 스프레이, 액체, 연고 및 에어로졸을 포함하고 이들에 한정되지 않는다.
상기 라이신 효소가 첨가되는 마름모꼴 정제, 정제, 또는 껌은 슈가, 옥수수 시럽, 다양한 색소, 비슈가 감미료, 조미료, 임의의 결합제, 또는 이들의 조합을 함유할 수 있다. 유사하게, 임의의 껌계 제품은 아카시아, 카르나우바 왁스, 시트르산, 콘 스타치, 식용 색소, 조미료, 비슈가 감미료, 젤라틴, 클루코오스, 글리세린, 껌 배이스(base), 셸랙, 소디움 사카린, 슈가, 물, 화이트 왁스(white wax), 셀룰로오스, 다른 결합제 및 이들의 조합을 함유할 수 있다.
마름모꼴 정제는 수크로스, 콘 스타치, 아카시아, 트래가캔스 고무, 아네트홀(anethole), 아마씨, 올레오 기름, 미네랄 오일, 및 셀룰로오스, 다른 결합제, 및 이들의 조합을 더 함유할 수 있다. 본 발명의 다른 실시예에서, 슈가 대체물이 덱스트로스, 수크로스, 또는 다른 슈가 대신에 사용된다.
상기 효소는 또한 코 스프레이에 넣어질 수 있다. 이 경우 코 스프레이가 담체이다. 코 스프레이는 효과가 장시간 지속되거나 시간에 맞추어 방출되는 스프레이일 수 있고, 당업계에 공지된 수단에 의하여 제조될 수 있다.
상기 라이신 효소용 임의의 담체는 일반적인 수단에 의하여 제조될 수 있다. 그러나, 임의의 입 세약 또는 유사한 형태의 제품은 상기 효소의 변성을 방지하도록 알코올을 함유하지 않는 것이 바람직하다. 유사하게, 상기 라이신 효소가 제조 공정 도중 진해정, 껌, 캔디 또는 마름모꼴 정제에 넣어질 때, 상기 마름모꼴 정제 또는 캔디가 굳어지기 전, 그러나 상기 효소의 변성을 막기 위하여 상기 진해정 또는 캔디가 어느 정도 냉각된 후에 넣어야 한다.
상기 효소는 이러한 물질에 액체 형태로 또는 동결 건조된 상태로 첨가될 수있고, 첨가시에 액체를 만나면 액화될 것이다. 예를 들면, 상기 효소는 마이셀 또는 리포솜, 또는 다른 캡슐형으로 될 수 있거나, 프로드러그로서 또는 연장된 저장 및/또는 방출 효과를 제공하기 위하여 장시간에 걸쳐 방출되는 형태로 투여될 수 있다.
감염을 치료하는 데 유효한 상기 라이신 효소의 투여율 또는 투여량은 일부 상기 라이신이 치료적 또는 예방적으로 사용되는가의 여부, 수령인이 상기 스트렙토코커스에 노출되는 기간, 및/또는 감염의 성질, 감염자의 키와 몸무게 등에 의존할 것이다. 적절한 투여율을 결정하는 것은 기술자의 기술 범위 내에 있다. 상기 효소를 함유하는 상기 조성물의 사용 기간은 또한 용도가 예방적인가의 여부에 달려 있고, 이 경우 한정된 시간 동안 예들 들면 일주일, 한달 또는 더 긴 기간 동안 예를 들면 매일 또는 매주 사용될 수 있고, 또는 용도가 치료적인가의 여부에 달려 있고, 이 경우 상기 조성물을 사용하는 보다 집중적인 섭생이 예를 들면 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10 또는 14일 또는 더 긴 기간 동안 이용되기가 쉽다. 따라서, 치료법의 기간은 매일을 단위로 수일 또는 수주일 수 있고, 가능하면 하루중 여러번 일 수 있다.
효과적이기 위하여, 상기 효소는 입, 목 또는 코 통로와 접촉하는 효소 단위의 유효수를 제공하기에 충분한 양으로 존재해야 한다. 입, 목 또는 코 통로와 접촉하는 효소 단위가 너무 적으면, 심지어는 장시간에 걸쳐서도, 원하는 유용한 효과를 발생하지 않는다. 따라서, 사용되는 임의의 투여 형태는 상기 투여량이 효소를 입, 목 또는 코 통로에 제공하는 시간 동안 대략 최소의 단위수를 제공해야 한다. 효소의 유효량 또는 투여분을 제공한다고 여겨지는 효소의 활성 단위의 농도는 코 및 입 통로의 환경에서 약 100 단위 내지 약 100,000 단위의 범위에 있다. 이렇게 넓은 범위 내에서, 약 100 내지 약 10,000 단위의 투여분이 허용가능하다고 여겨진다. 그러한 단위는 액채 또는 타액과 같은 담체에 소량으로, 예를 들면 1 ml 이하(예를 들면 마름모꼴 정제의 경우)로 함유될 수 있거나, 수 ml의 가글과 같은 보다 많은 투여부피에 함유될 수 있다. 따라서, 일반적으로 보다 큰 부피의 담체는 활성 효소의 유효농도를 달성하기 위하여 보다 큰 수의 단위를 필요로 한다. 따라서, 허용가능한 농도는 코 또는 입 통로의 환경에서 약 100 단위/ml 내지 100,000 단위/ml이다. 이 범위 내에서, 약 100 단위/ml 내지 약 10,000 단위/ml의 농도가 허용가능하다.
따라서, 실제로 활성 효소 단위에 노출되는 시간은 ml 당 투여분으로 사용되는 활성 효소 단위의 바람직한 농도에 영향을 미치는 경향이 있다. 예를 들면, 장시간에 걸쳐 방출(소정의 코 스프레이, 마름모꼴 정제 및 캡슐로 된 효소)된다고 고려되는 담체는 ml 당 낮은 농도의 활성 효소 단위를 보다 긴 시간에 걸쳐 제공할 수 있다. 역으로, 짧은 시간에 치료하는 경우(예를 들면, 가글) ml 당 높은 농도의 활성 효소 단위를 제공할 수 있다. 유효농도의 활성 효소를 감염 장소에 제공하기에 또는 충분한 예방효과를 제공하기에 충분한 라이신 효소를 함유하는 임의의 투여 형태는 일상적인 실험을 할 수 있는 범위 내에 충분히 들어오고, 따라서 즉시 발명의 범위 내에 충분히 들어온다.
상기 즉시 발명의 조성물은 스트렙토코커스 감염의 예방법 또는 치료법에 또는 그들의 증상의 완화에 사용하기 위하여 적어도 하나의 다른 부가적인 약제를 더 포함할 수 있다. 상기 약제는 부가적으로 몇몇 부가적인 치료 및/또는 예방 효과, 예를 들면 고통 완화에 효과적일 수 있다. 몇몇 약제는 국부적으로 또는 조직적으로 활성을 띨 수 있고, 항생제 또는 예를 들면 인후염용 국부적인 항생제를 포함하는 고통 완화 의약품을 포함할 수 있다. 다른 방법으로, 그러한 약제는 상기 즉시 발명의 조성물로 치료하기 전 또는 후에 투여될 수 있다. 항생제의 투여량은 스트렙토코커스 감염의 치료 또는 예방에 또는 그러한 감염 증상의 치료에 효과적이어야 한다.
이 치료법은 임의의 동물 또는 포유류 종에 사용될 수 있지만, 이 제품의 바람직한 용도는 인간을 위한 것이다.
라이신을 함유하는 담체의 매 투여분은 의도된 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위하여 필요한 시간 동안 구강 점막과 접촉되어야 한다. 라이신 효소를 구강 점막에 투여하는 것은 그 방법이 안전하고 의도된 예방 또는 치료 효과를 제공하는 한, 가글, 입 린스, 마름모꼴 정제, 정제, 껌, 캔디, 분말, 코 및 입 스프레이과 같은 임의의 수단에 의하여 될 수 있다. 기술자는 본 발명과 조화를 이루는 라이신 효소를 제공하기 위한 다른 가능한 방법 및 조성물을 이해할 수 있을 것이다.
<실시예 1>
그룹 C 파지 라이신 효소는 다음과 같이 제조되었다: 그룹 C 스트렙토코커스 계통 26RP66 (ATCC #21597) 또는 다른 그룹 C 스트렙토코커스 계통을 18 mm 튜브 내 37℃의 토드히윗(Todd Hewitt) 배지에서 650nm에서 0.23의 OD까지 성장시켰다.5X10 sup 6의 역가에 있는 그룹 C 박테리오파지 (C1) 26RP66 (ATCC #21597-B1) 4부 세포당 1부 파지의 비율로 첨가하였다. 상기 혼합물을 37℃에서 18 분간 방치하였고, 그 후 감염된 세포를 얼음 조각 위에 부어 상기 용액의 온도를 15℃ 이하로 냉각시켰다. 그 후, 감염된 세포를 냉장된 원심분리기로 수확하고, 5X10 sup -3M의 디티오트라이톨과 10 μg의 디엔에이아제를 함유하는 pH 6.1의 0.1 M 포스페이트 버퍼에서 원래 부피의 1/300로 현탁시켰다. 상기 세포는 방출되는 파지와 라이신 효소를 용해시킨다. 대부분의 세포조각과 파지를 제거하기 위하여 100,000X g에서 5 시간 동안 원심 분리한 후, 상기 효소 용액을 나누어서 그룹 A 스트렙토코커스를 용해시키는 능력을 시험하였다.
다수의 효소에서 단위/ml의 수는 그룹 A 스트렙토코커스의 분산의 OD650을 0.3의 OD에서 15분 내에 0.15로 감소시키는데 필요한 효소의 최고 희석농도의 역수로 결정된다. 일반적인 효소 제조에서 4X10 sup 5 내지 4X10 sup 6 단위가 하나의 12 리터 배치에서 생산되었다.
효소를 이용하는 것은 필요한 인규베이션 시간에 따라 시험당 라이신 효소의 최소 단위수를 요구한다. 상기 효소는 안정성, 최고의 효소 활동도를 위한 적당한 조건을 함유하는 안정화 버퍼에서 희석된다. 바람직한 실시예는 동결 건조된 라이신 효소를 사용하는 것이다. 안정화 버퍼는 환원제를 포함할 수 있고, 이 환원제는 0.001 M 내지 1.0 M, 바람직하게는 0.005 M인 디티오트라이톨일 수 있다. 안정화 버퍼는 금속 킬레이션제를 포함할 수 있고, 이것은 0.00001 M 내지 1.0 M, 바람직하게는 0.005 M인 에틸렌디아민테트라아세트산 디소디움 염일 수 있다. 안정화 버퍼는 0.001M 내지 1.0 M, 바람직하게는 0.05 M인 사이트레이트-포스페이트 버퍼를 포함할 수 있다. 안정화 버퍼는 약 4.0 내지 8.0, 바람직하게는 6.1인 pH 값을 가질 수 있다. 안정화 버퍼는 보존제로서 살균성 또는 정균성 약제를 포함할 수 있다. 그러한 보존제는 0.001 퍼센트 내지 0.1 퍼센트, 바람직하게는 0.02 퍼센트의 소디움 아자이드일 수 있다.
라이신 생산을 위한 파지 원액 제조방법은 라이신 효소의 제조시 파지 및 그룹 C 스트렙토코커스의 감염을 위해 상술한 방법과 같다. 그러나, 감염된 세포를 얼음위에 붇는 대신에 전부 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션를 계속하여 전체 부피 내에 상기 파지 및 또한 효소의 용해 및 방출을 허용하게 한다. 상기 파지를 연이은 라이신 생산에 사용하기 위하여, 잔류하는 효소는 비활성화 또는 제거되어 파지 감염보다 그룹 C 세포가 없는 것으로부터의 용해를 방지해야 한다.
<실시예 2>
실시예 1에 따라 제조된 효소는 0.1% 토끼 면역글로불린, 0.005 M (에틸렌디니트릴로)테트라아세트산 디소디움 염(EDTA), 0.005M 디티오트라이톨, 0.02% 소디움 아자이드, 0.01% N-아세틸글루코사아민을 함유하는 pH 6.1의 사이트레이트 포스페이트 버퍼로 구성된 버퍼에서 100 단위/ml의 농도로 희석시킨다. pH 8.2인 0.02M 트리스 버퍼, 1.0% 소 혈청 알부민, 0.02% 소디움 아자이드, 300K 단위의 헤파린에 현탁된 그룹 A 스트렙토코커스 항체 (OD sup 520 1.5)로 레벨링된 콜로이드 금 졸 1 부를 효소 반응물 3 부에 첨가, 혼합, 0.22 마이크론 필터로 여과하고, 각 튜브에 200 마이크로리터씩 넣고 동결건조하였다. 이 동결건조된 효소는 단시간 조건(즉 2 주) 동안은 높은 온도(즉 45℃)에서 안정하고 상온에서 장시간(>1 년) 저장시 안정하다.
<실시예 3>
방법.
1. 1% 이스트 추출물을 함유하는 토드히윗(Todd Hewitt, TH) 즙 50 ml 내에 그룹 A 스트렙토코커스 계통 S43/192/39R (스트렙토마이신에 내성이 있는) (동결된 혈액즙으로부터 얻은) 500 μl 및 스트렙코마이신/ml 100 μl의 하루 배양을 시작한다;
2. 0.59의 OD650까지 성장시킨다.
3. 3000 rpm으로 15 분간 원심분리하여 박테리아를 침전시킨다.
4. 항생제( 플레이트 카운트에 의하여 측정되는 바와 같이 3×105/100 μl)없는 TH 1 ml에 미생물을 현탁시킨다.
5. 대조군으로서 pH 6.1의 포스페이트 버퍼 0.5 ml에 이러한 농축된 새포 0.5를 첨가한다.
6. 마우스에 투여 5 분 전에, 상기 농축된 세포 현탁물 0.5 ml를 pH 6.1의 포스페이트 버퍼 내에서 10,000 단위/ml로 미리 희석된 파지 라이신 용액과 혼합한다.
5 마리의 마우스에 대조군 용액 60 ml를 똑 같이 분리하여, 입과 비강내에 주입하였다.
5 마리의 마우스에 라이신과 박테리아 혼합물 60 ml를 똑 같이 분리하여, 입과 비강내에 주입하였다.
스트렙토마이신 500 μg/ml를 함유하는 5% 양 혈액, 프로테오즈 펩톤 한천 판상에 목 면봉으로 발랐다. 이 판을 37℃에서 밤새 인큐베이션 하였다.
다음 결과가 얻어졌다:
7/221d 7/232d 7/243d 7/287d
콜로니 형성 단위
라이신
L1L2L3L4L5 00000 00010 00001 00000
대조군
C1C2C3C4C5 26>4009>4002 14170>4002 710015>40030 08302200
이러한 결과는 단지 5 분간 파지 라이신과 그룹 A 스트렙토코커스가 접촉하여 이 모델 시스템의 마우스의 상부 호흡기 도관에서 스트렙토코커스가 콜로니를 형성하는 것을 억제한다는 것을 보여준다.
<실시예 4>
스트렙토코커스가 환경 내에 들어오기 전에 구강 (즉 마름모꼴 정제에 의한 방출을 통하여)에 라이신이 존재한다면 일어날 수 있는 상황을 재연하기 위하여, 동물, 박테리아 및 라이신을 실시예 3에 기술한 바와 같이 준비하되, 다만 이 실험에서는 동물을 다음과 같이 처리하였다:
라이신: 5 마리의 마우스에 라이신 25 μl를 주입하고 그 직후 박테리아 현탁물을 주입하였다.
대조군: 5 마리의 마우스에 버퍼 25 μl를 주입하고 그 직후 박테리아 현탁물을 주입하였다.
24 시간
라이신
L6L7L8L9L10 -----
대조군
C6C7C8C9C10 -+-++
결과: 스트렙토코커스가 첨가될 때 그들의 구강에 라이신을 함유하는 0/5 동물은 콜로니를 형성하였고, 동시에 버퍼와 스트렙토코커스를 주입한 3/5 동물은 콜로니를 형성하였다. 따라서 그룹 A 스트렙토코커스가 첨가되기 전에 존재한다면 라이신은 콜로니 형성을 억제할 수 있다.
<실시예 5>
그룹 A M 유형 6 스트렙토코커스를 토드히윗 배지에서 밤새 37℃에서 성장시켰다. 미생물을 살균된 라이신 버퍼(pH 6.1인 포스페이트 버퍼 50 ml)로 한번 세척하였다. 그 후, 세포 펠렛를 같은 버퍼 5 ml에 현탁시켰다.
파지 라이신을 DTT 5 mM을 함유하는 라이신 버퍼로 적당한 단위의 두배까지 희석하고 혼합물을 살균 여과하였다.
박테리아 현탁물 1.0 ml를 적당한 라이신 희석액 1.0 ml에 첨가하고 혼합물을 37℃에서 인큐베이션시켰다. 시료들을 일정한 시간 간격으로 제거하고, 적절하게 희석하고 혈액 한천 판에 발라서 박테리아 카운트를 측정하였다.
대조군 시료는 단지 라이신 버퍼에 첨가된 박테리아 현탁물 1.0 ml로 구성된다. 일정량을 따라내어 10배로 희석하고 일정량을 혈액 한천 판에 바르고 박테리아 카운트를 측정하였다.
결과:
라이신을 가지는 경우 박테리아 카운트
라이신단위 초기카운트 5초 30초 60초 5분 10분
1000 5×106 0 0 0 0 0 mean 2 exp
100 8.6×106 1530 1196 771 64 6 mean 4 exp
10 9.8×106 >3000 >3000 >3000 >3000 >3000 mean 3 exp
본 발명의 많은 변경과 변형이 상기 개시의 견지에서 가능하다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구항의 범위내에서 구체적으로 기술된 바 보다 달리 보호될 수 있다고 이해되어야 한다.

Claims (31)

  1. 스트렙토코커스 감염의 치료법 또는 예방법에 사용되는 조성물로서,그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신 효소의 유효량 및 입, 목, 또는 코의 통로에 상기 라이신 효소를 투여하기 위한 담체를 포함하는 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 캔디, 껌, 마름모꼴 정제, 알약, 정제, 분말, 에어로졸, 액체, 액체 스프레이, 코 스프레이 및 코 연고로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 조성물의 pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위로 유지하는 버퍼를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 버퍼는 상기 조성물의 pH를 약 5.5 내지 약 7.5의 범위로 유지하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제 3항에 있어서, 상기 버퍼는 환원제를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 환원제는 디티오트라이톨인 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제 3항에 있어서, 상기 버퍼는 금속 킬레이션제를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 금속 킬레이션제는 에틸렌디아민테트라아세트산 디소디움 염인 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제 3항에 있어서, 상기 버퍼는 사이트레이트-포스페이트 버퍼인 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제 1항에 있어서, 보존제로서 살균성 또는 정균성 약제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. 제 1항에 있어서, 상기 라이신 효소는 동결 건조되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  12. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 감미료를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 코 또는 입 통로의 환경에서 유체의 밀리리터당 약 100 내지 100,000 활성 효소 단위의 농도를 제공하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 농도는 코 또는 입 통로의 환경에서 유체의 밀리리터당 약 100 내지 약 10,000 활성 효소 단위인 것을 특징으로 하는 조성물.
  15. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스트렙토코커스 감염의 치료법에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  16. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스트렙토코커스 감염의 예방법에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  17. 제 15항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 감염이 스트렙토코커스 목 감염인 것을 특징으로 하는 조성물.
  18. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 캔디인 것을 특징으로 하는 조성물.
  19. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 껌인 것을 특징으로 하는 조성물.
  20. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 마름모꼴 정제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  21. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 알약인 것을 특징으로 하는 조성물.
  22. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 분말인 것을 특징으로 하는 조성물.
  23. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 에어로졸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  24. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 액체 스프레이인 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 코 스프레이인 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 제 1항에 있어서, 상기 포유류는 인간인 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 상기 라이신 효소를 입과 목에 투여하는데 적당한 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. 제 1항에 있어서, 상기 담체는 상기 라이신 효소를 코 통로에 투여하는데 적당한 것을 특징으로 하는 조성물.
  29. 제 1항에 있어서, 스트렙토코커스 감염의 치료 또는 예방법 또는 그 증상의 완화에 효과적인 적어도 하나의 약제를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  30. 제 1항 내지 29항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 그 필요성이 있는 포유류에 투여하는 것을 포함하여 스트렙토코커스 감염을 치료적 또는 예방적으로 처리하는 방법.
  31. 제 1항 내지 29항에 따른 제약학적 조성물의 제조에 사용되는 그룹 C 스트렙토코커스 파지 연관 라이신의 용도.
KR1020017010898A 1999-02-25 1999-02-25 스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료 방법 KR20020000217A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/257,025 US6017528A (en) 1997-10-31 1999-02-25 Therapeutic treatment of group A streptococcal infections
PCT/US1999/004063 WO2000050069A1 (en) 1999-02-25 1999-02-25 A means for the prophylactic and therapeutic treatment of streptococcal infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20020000217A true KR20020000217A (ko) 2002-01-05

Family

ID=26795447

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020017010898A KR20020000217A (ko) 1999-02-25 1999-02-25 스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료 방법

Country Status (12)

Country Link
US (1) US6017528A (ko)
EP (1) EP1162994A4 (ko)
JP (1) JP2002537350A (ko)
KR (1) KR20020000217A (ko)
AU (1) AU2876799A (ko)
BR (1) BR9917152A (ko)
CA (1) CA2366712A1 (ko)
HK (1) HK1047243A1 (ko)
IN (1) IN2001DE00791A (ko)
MX (1) MXPA01008701A (ko)
NZ (1) NZ514260A (ko)
WO (1) WO2000050069A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017061733A1 (ko) * 2015-10-08 2017-04-13 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 스트렙토코커스 이니에 박테리오파지 Ｓｔｒ-ＩＮＰ-1 및 이의 스트렙토코커스 이니에 균 증식 억제 용도

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6248324B1 (en) 1997-10-31 2001-06-19 Vincent Fischetti Bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections
US20030129146A1 (en) * 1997-10-31 2003-07-10 Vincent Fischetti The use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries
US20020136712A1 (en) * 1997-10-31 2002-09-26 Fischetti Vincent Bacterial phage associated lysing enzymes for the prophylactic and therapeutic treatment of colonization and infections caused by streptococcus pneumoniae
US6326002B1 (en) 1997-10-31 2001-12-04 New Horizons Diagnostics Corporation Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating streptococcal infections of the upper respiratory tract
US20030129147A1 (en) * 1997-10-31 2003-07-10 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries
US6056954A (en) * 1997-10-31 2000-05-02 New Horizons Diagnostics Corp Use of bacterial phage associated lysing enzymers for the prophylactic and therapeutic treatment of various illnesses
US6406692B1 (en) 1997-10-31 2002-06-18 New Horizons Diagnostics Corp Composition for treatment of an ocular bacterial infection
US6423299B1 (en) 1997-10-31 2002-07-23 Vincent Fischetti Composition for treatment of a bacterial infection of an upper respiratory tract
US6432444B1 (en) * 1997-10-31 2002-08-13 New Horizons Diagnostics Corp Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections
US6399097B1 (en) 1997-10-31 2002-06-04 New Horizons Diagnostics Corporation Composition for treatment of a bacterial infection of the digestive tract
US20030082110A1 (en) * 1997-10-31 2003-05-01 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lysing proteins for treating bacterial dental caries
US6277399B1 (en) * 1997-10-31 2001-08-21 New Horizon Diagnostics Corporation Composition incorporating bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections
US6428784B1 (en) * 1997-10-31 2002-08-06 New Horizons Diagnostics Corp Vaginal suppository for treating group B Streptococcus infection
US6752988B1 (en) * 2000-04-28 2004-06-22 New Horizons Diagnostic Corp Method of treating upper resiratory illnesses
US6335012B1 (en) 1997-10-31 2002-01-01 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating bacterial infections of the mouth and teeth
US7232576B2 (en) 1997-10-31 2007-06-19 New Horizons Diagnostics Corp Throat lozenge for the treatment of Streptococcus Group A
US6399098B1 (en) 1997-10-31 2002-06-04 New Horizons Diagnostics Corp Composition for treating dental caries caused by streptococcus mutans
US20020127215A1 (en) * 1999-09-14 2002-09-12 Lawrence Loomis Parenteral use of bacterial phage associated lysing enzymes for the therapeutic treatment of bacterial infections
US7063837B2 (en) * 1999-09-14 2006-06-20 New Horizons Diagnostics Corp Syrup composition containing phage associated lytic enzymes
US20020187136A1 (en) * 2000-04-28 2002-12-12 Lawrence Loomis Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating various illnesses
US6608187B2 (en) 2000-05-23 2003-08-19 The Rockefeller University C1 bacteriophage lytic system
US6395504B1 (en) 2000-09-01 2002-05-28 New Horizons Diagnostics Corp. Use of phage associated lytic enzymes for the rapid detection of bacterial contaminants
CA2427928A1 (en) * 2000-11-02 2002-12-27 New Horizons Diagnostics Corporation The use of bacterial phage associated lytic enzymes to prevent food poisoning
US20040213765A1 (en) * 2001-07-13 2004-10-28 Vincent Fischetti Use of bacterial phage associated lytic enzymes to prevent food poisoning
GB0118009D0 (en) * 2001-07-24 2001-09-19 Regma Biotechnologies Ltd Novel preparation
US6759229B2 (en) * 2001-12-18 2004-07-06 President & Fellows Of Harvard College Toxin-phage bacteriocide antibiotic and uses thereof
US20040081646A1 (en) * 2002-08-29 2004-04-29 Engler Jeffrey A. Group B Streptococcal phage lysin
US7569223B2 (en) * 2004-03-22 2009-08-04 The Rockefeller University Phage-associated lytic enzymes for treatment of Streptococcus pneumoniae and related conditions
EP3252155A1 (en) 2011-04-21 2017-12-06 The Rockefeller University Streptococcus bacteriophage lysins for detection and treatment of gram positive bacteria
CN104114695B (zh) 2011-10-05 2018-04-17 洛克菲勒大学 二聚噬菌体溶素
EP3685851A1 (en) 2012-05-09 2020-07-29 Contrafect Corporation Bacteriophage lysin and antibiotic combinations against gram positive bacteria
KR20230135161A (ko) 2012-05-09 2023-09-22 콘트라펙트 코포레이션 박테리오파지 리신을 이용한 생물막의 예방, 붕괴 및 치료
US10851401B2 (en) 2016-05-12 2020-12-01 Contrafect Corporation Broth microdilution method for evaluating and determining minimal inhibitory concentration of antibacterial polypeptides
JP7370705B2 (ja) 2016-07-11 2023-10-30 フィリップ・モーリス・プロダクツ・ソシエテ・アノニム 疎水性カプセル
US11541105B2 (en) 2018-06-01 2023-01-03 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for disrupting biofilm formation and maintenance

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3852424A (en) * 1957-07-26 1974-12-03 Ciba Geigy Corp Purified ferrimycin and process for obtaining same
AU8108587A (en) * 1986-10-08 1988-05-06 David Bernstein Method for exposing group a streptococcal antigens and an improved diagnostic test for the identification of group a streptococci
US5997862A (en) * 1997-10-31 1999-12-07 New Horizons Diagnostics Corporation Therapeutic treatment of group A streptococcal infections

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017061733A1 (ko) * 2015-10-08 2017-04-13 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 스트렙토코커스 이니에 박테리오파지 Ｓｔｒ-ＩＮＰ-1 및 이의 스트렙토코커스 이니에 균 증식 억제 용도
US10722544B2 (en) 2015-10-08 2020-07-28 Intron Biotechnology, Inc. Streptococcus iniae bacteriophage Str-INP-1 and use of the same for inhibiting the proliferation of Streptococcus iniae

Also Published As

Publication number Publication date
AU2876799A (en) 2000-09-14
EP1162994A4 (en) 2004-12-29
MXPA01008701A (es) 2003-06-24
BR9917152A (pt) 2002-11-26
NZ514260A (en) 2003-02-28
HK1047243A1 (zh) 2003-02-14
JP2002537350A (ja) 2002-11-05
US6017528A (en) 2000-01-25
WO2000050069A1 (en) 2000-08-31
CA2366712A1 (en) 2000-08-31
EP1162994A1 (en) 2001-12-19
IN2001DE00791A (ko) 2007-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20020000217A (ko) 스트렙토코커스 감염의 예방 및 치료 방법
US5997862A (en) Therapeutic treatment of group A streptococcal infections
AU782624B2 (en) Methods and compositions for inhibiting adhesion by microorganisms
US6248324B1 (en) Bacterial phage associated lysing enzymes for treating dermatological infections
US6254866B1 (en) Use of phage associated lytic enzymes for treating bacterial infections of the digestive tract
ZA200202305B (en) The use of bacterial phage associated lysing enzymes for the prophylactic and therapeutic treatment of various illnesses.
US7169408B2 (en) Bandage composition containing phage associated lytic enzymes useful for treating dermatological infections
US6326002B1 (en) Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating streptococcal infections of the upper respiratory tract
JPH04500518A (ja) ウィルス感染の治療と予防の方法および組成物
US6428784B1 (en) Vaginal suppository for treating group B Streptococcus infection
Baće et al. Short-term treatment of pertussis with azithromycin in infants and young children
US7141241B2 (en) Use of bacterial phage associated lysing enzymes for treating upper respiratory illnesses
US20070212340A1 (en) Use of bacterial phage associated lysing enzymes for the prophylactic and therapeutic treatment of various illnesses
US6399097B1 (en) Composition for treatment of a bacterial infection of the digestive tract
US6399098B1 (en) Composition for treating dental caries caused by streptococcus mutans
RU2239451C2 (ru) Способ терапевтического или профилактического лечения стрептококковых инфекций (варианты) и композиция, предназначенная для использования в нем (варианты), лизиновый фермент, ассоциированный с фагом стрептококков группы с,- активный агент фармацевтической композиции
AU2005200385A1 (en) A means for the prophylactic and therapeutic treatment of streptococcal infections
Eriksson et al. Absorption of erythromycin from pediatric suspension in infants and children
Schwartz et al. Trimethoprim-sulfamethoxazole in the treatment of otitis media secondary to ampicillin-resistant strains of Haemophilus influenzae
CN1352567A (zh) 预防性和治疗性治疗链球菌感染的方法
Prado et al. Ceftriaxone in the treatment of bacterial meningitis in children
Fechtner Fungi and bacteria antibiotics: a review
Buttle The chemotherapy of Sulphon-amides
JPH11269092A (ja) 蛋白質分解酵素を含むヘリコバクター属細菌の除菌剤及び／又は殺菌剤、並びに該細菌に起因する疾患の治療剤及び／又は発症抑制剤
Fujii et al. Clinical and Laboratory Experiences with Oleandomycin or Triacetyloleandomycin in Pediatric Clinic

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application