KR20220120308A - 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 - Google Patents

클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20220120308A
KR20220120308A KR1020210024236A KR20210024236A KR20220120308A KR 20220120308 A KR20220120308 A KR 20220120308A KR 1020210024236 A KR1020210024236 A KR 1020210024236A KR 20210024236 A KR20210024236 A KR 20210024236A KR 20220120308 A KR20220120308 A KR 20220120308A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
bacteriophage
clostridium perfringens
composition
drinking water
active ingredient
Prior art date
Application number
KR1020210024236A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102586836B1 (ko
Inventor
전종수
김지은
문준옥
채종표
김유진
이승은
Original Assignee
씨제이제일제당 (주)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 씨제이제일제당 (주) filed Critical 씨제이제일제당 (주)
Priority to KR1020210024236A priority Critical patent/KR102586836B1/ko
Priority to CN202180094460.3A priority patent/CN117157392A/zh
Priority to JP2023551252A priority patent/JP2024508289A/ja
Priority to EP21928187.0A priority patent/EP4299726A1/en
Priority to PCT/KR2021/007482 priority patent/WO2022181892A1/ko
Publication of KR20220120308A publication Critical patent/KR20220120308A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102586836B1 publication Critical patent/KR102586836B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/40—Viruses, e.g. bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P1/00—Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/195—Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/60—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for weanlings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F1/00—Treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F1/68—Treatment of water, waste water, or sewage by addition of specified substances, e.g. trace elements, for ameliorating potable water
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C02F3/341—Consortia of bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/381—Microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2103/00—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated
    • C02F2103/20—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated from animal husbandry
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2303/00—Specific treatment goals
    • C02F2303/04—Disinfection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2305/00—Use of specific compounds during water treatment
    • C02F2305/04—Surfactants, used as part of a formulation or alone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/00031—Uses of virus other than therapeutic or vaccine, e.g. disinfectant
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
    • C12N2795/10111—Myoviridae
    • C12N2795/10121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
    • C12N2795/10111—Myoviridae
    • C12N2795/10131—Uses of virus other than therapeutic or vaccine, e.g. disinfectant
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
    • C12N2795/10111—Myoviridae
    • C12N2795/10132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)

Abstract

본 출원은 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물에 관한 것으로, 신규한 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 클로스트리디움 퍼프린젠스를 특이적으로 사멸시키는 효과를 가지며, 내산성 및 내열성이 우수하여 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료 용도로 항생제, 사료 첨가제, 음용수 첨가제, 사료, 음용수, 소독제 또는 세척제 등에 널리 활용될 수 있다.

Description

클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물{Novel bacteriophage having a specific bactericidal activity against Clostridium perfringens and antibacterial composition comprising the same}
본 출원은 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물에 관한 것이다.
클로스트리디움 퍼프린젠스 (Clostridium perfringens)는 그람 양성의 대형 편성혐기성 간균으로 편모가 없고 아포를 형성하는 균으로 알려져 있다. 클로스트리디움 퍼프린젠스는 동물, 특히 닭, 돼지 등을 비롯한 가축들에 있어서 설사 등을 유발하는 균으로서 살모넬라에 의한 가금 티푸스 못지 않게 축산업에 있어서 중요하고 치명적인 병원균의 하나로 인식되고 있다.
현재, 양계 및 양돈 산업에 있어서 가장 빈번하게 발병하는 질병의 하나인 클로스트리디움 퍼프린젠스 감염에 의한 괴사성 장염(Necrotic Enteritis)은 닭이나 돼지 등의 소장 하부에 심한 괴사성 병변을 유발하여 혈액이 섞인 설사가 배출되는 증상 등을 주요 증상으로 유발하는 질환이다. 이러한 괴사성 장염은 그 발병 정도에 따라 감염 동물에 탈수 증상, 간헐적 설사 증상 등을 일으키며 점차적으로 동물의 신체를 쇠약하게 하고 성장 장애를 유발하는 등, 축산업에 있어 상당히 문제가 되고 있는 질병이다. 더욱이 괴사성 장염의 원인이 되는 클로스트리디움 퍼프린젠스는 동물의 분변을 통하여 쉽게 전파되기 때문에 토양이나 오염된 사료를 통한 경구 감염 등에 의하여 공동 사육 공간 내 동물 간에 쉽게 전염이 일어나고 특히 어린 가축의 발병률이 높아 더욱 문제가 되고 있다.
축산업 등 분야에서는, 가축의 세균 감염에 의한 질환을 예방 및 치료하기 위하여, 여러 항생제가 사용되어 왔으나, 항생제 오남용 또는 내성 문제나, 동물 체내에 잔류할 가능성 등 문제가 대두되면서 현재는 전세계적으로 항생제 투여에 많은 제한을 두고 있다.
이에 따라, 최근에는 특정 세균에 감염하여 세균의 성장을 억제하는 세균 특이적 바이러스인 박테리오파지가 항생제에 비하여 숙주 특이성이 강한 바, 새로운 항생제의 대체제로 연구되고 있으나, 아직까지 그 수가 절대적으로 부족한 실정이다. 따라서, 양돈 및 양계를 비롯한 축산업에 있어서 중요한 문제가 되고 있는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환을 예방 및 치료하기 위하여, 광범위한 용균 스펙트럼을 가지고 내산성 및 내열성이 우수하여 산업적으로 활용 가능성이 높은 새로운 박테리오파지의 개발이 지속적으로 요구되고 있다.
미국 등록특허 US 6,942,858 B1
본 출원의 목적은 클로스트리디움 퍼프린젠스에 특이적인 사멸능을 가지고, 수탁번호 KCCM12933P로 기탁된 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 이를 유효성분으로 포함하 는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 항생제, 사료 첨가제, 음용수 첨가제, 소독제, 또는 세척제, 또는 상기 사료 첨가제를 포함하는 사료, 또는 상기 음용수 첨가제를 포함하는 음용수를 제공하는 것이다.
본 출원의 다른 목적은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 이를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 이용한 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 출원의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 또는 이를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물의 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방제 또는 치료제 제조를 위한 용도를 제공하는 것이다.
본 출원에서 개시되는 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다. 또한, 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 통상의 실험만을 사용하여 본 출원에 기재된 본 출원의 특정 양태에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 확인할 수 있다. 또한, 이러한 등가물은 본 출원에 포함되는 것으로 의도된다.
일 양상은 클로스트리디움 퍼프린젠스에 특이적인 사멸능을 가지고, 수탁번호 KCCM12933P로 기탁된 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens: CP)"는 그람 양성의 혐기성 간균으로, 닭, 돼지 등 동물에서 감염성 질환을 유발하는 원인균에 해당한다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "박테리오파지(bacteriophage)"는 특정 세균에 감염하여 당해 세균의 성장을 억제하는 세균 특이적 바이러스로, 단일 혹은 이중 사슬의 DNA 또는 RNA를 유전 물질로 포함하는 바이러스를 의미한다.
다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 상기한 바와 같다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 특이적인 사멸능을 가지는 것이므로, 개체에 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환 발병 전에 투여 시, 개체로 유입되는 클로스트리디움 퍼프린젠스를 사멸시킴으로써 이에 의한 감염을 억제하여 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환을 예방할 수 있다. 또한, 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환이 발병한 개체에 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 투여하면, 개체에 존재하는 클로스트리디움 퍼프린젠스를 사멸시킴으로써 이에 의해 나타나는 증상을 완화 또는 소멸시킬 수 있으므로, 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환을 치료할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예방"은 박테리오파지 또는 조성물의 투여에 의해 개체에서 질병의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하는 것일 수 잇고, 용어 "치료"는 박테리오파지 또는 조성물의 투여에 의해 개체에서 질병의 증세가 호전, 완화, 또는 소멸되도록 하는 모든 행위를 의미하는 것일 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 예를 들면 괴사성 장염일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "괴사성 장염(Necrotic Enteritis)"은 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의해 유발되는 감염성 질병의 하나로, 양돈(이유자돈), 양계 등 가축에 질병을 유발하며 특히, 육계 등에서 빈번하게 발병하여, 상당한 피해를 끼치는 세균성 질병에 해당한다. 괴사성 장염의 증상은 소장에서 콕시듐과 함께 클로스트리디움 퍼프린젠스가 과도하게 증식하면서 나타나게 되며, 소화기 점막 괴사, 갑작스러운 설사 등을 유발한다. 예를 들어, 양돈에 있어서 심급성 괴사성 장염의 경우, 발병 후 1일 내지 2일 경과 후에 폐사를 일으키며, 급성 괴사성 장염의 경우 혈액이 섞인 설사를 배출하다 2일 내지 3일 경과 후에 폐사를 일으킨다. 또한, 아급성 괴사성 장염의 경우에는 설사 (혈변은 없음)가 5일 내지 7일간 계속되다가 쇠약 및 탈수 증상을 일으키며, 만성 괴사성 장염의 경우에는 간헐적 설사를 유발하고 성장 장애를 일으킬 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 1 X 102 내지 1 X 1012 PFU/mL 또는 1 X 105 내지 1 X 1010 PFU/g으로 포함하는 것일 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 더 포함하는 것일 수 있고, 상기 담체와 함께 제제화되어 식품, 의약품, 사료 첨가제 또는 음용수 첨가제 등으로 제공될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "약학적으로 허용가능한 담체"는 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제 등을 의미하는 것일 수 있다.
상기 조성물에 포함될 수 있는 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용가능한 담체라면 어느 것이든 사용될 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수 있으며, 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법도 이용할 수 있다. 비경구 투여의 경우 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수 도 있다. 상기 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 대상이 되는 동물 및 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 민감성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사나 수의사는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물의 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로젠지(lozenge), 수용성 또는 유성 현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제로 제제화할 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제, 스테아르산 마스네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유를 포함할 수 있으며, 캡슐 제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물의 비경구 투여용 제형으로는, 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사 등의 주사용 형태, 좌제 주입방식 또는 호흡기를 통하여 흡입이 가능하도록 하는 에어로졸제 등 스프레이용으로 제제화할 수 있다. 주사용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조성물을 안정화제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 에어로졸제 등의 스프레이용으로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.
상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 동결보호제(cryoprotectant), 또는 부형제 등을 포함할 수 있다.
상기 보존제, 안정화제, 또는 부형제는 상기 조성물의 품질 저하(deterioration)를 감소시키는데 충분한 유효량으로 조성물에 포함되는 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "품질 저하"는 조성물 등에 포함되는 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 균 수 감소, 활성 감소, 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다.
예를 들어, 상기 조성물은 조성물의 품질 저하를 감소시키는데 충분한 유효량의 보존제, 안정화제, 또는 부형제를 포함함으로써, 자연 상태에 존재하는 박테리오파지와 다르게, 조성물 내에서 박테리오파지 CJ_CP_20-15가 보다 오랜 기간 동안 생존하거나 활성이 유지되는 것일 수 있다.
상기 보존제, 안정화제, 또는 부형제는 상기 조성물의 품질 저하를 감소시킬 수 있는 것이라면, 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들이 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 안정화제는 알긴산염(alginate), 알긴산 나트륨(sodium alginate), 카제인, 카제인 나트륨, 셀룰로스, 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스(carboxymethylcellulose), 카르복시메틸셀룰로스 나트륨(sodium carboxymethylcellulose), 펙틴, 젤라틴, 아라비아검, 잔탄검, 덱스트란, 사이클로덱스트린 및 전분으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 동결보호제는 상기 조성물이 동결건조된 상태일 때, 조성물의 품질 저하를 감소시키는데 충분한 유효량으로 조성물에 포함되는 것일 수 있다. 예를 들어, 동결건조된 조성물 내에서 활성이 저하되거나 생존할 수 없는 자연 상태에 존재하는 박테리오파지와 다르게, 상기 조성물은 동결건조된 상태에서 조성물의 품질 저하를 감소시키는데 충분한 유효량의 동결보호제를 포함함으로써, 동결건조된 조성물 내에서도 박테리오파지 활성이 유지되거나 박테리오파지가 생존할 수 있는 것일 수 있다.
상기 동결보호제는 동결건조된 상태인 조성물의 품질 저하를 감소시키기 위한 것이라면, 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들이 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 동결보호제는 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 디메틸설폭시드(dimethyl sulfoxide: DMSO), 글루코스, 트레할로스, 말토덱스트린, 덱스트린, 스킴 밀크 및 전분으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 항생제를 제공한다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 상기한 바와 같다.
본 명세서 사용되는 용어, "항생제"는 균을 죽이거나 균의 성장을 억제할 수 있는 제제를 의미하며, 방부제, 살균제 및 항균제를 총칭하는 것일 수 있다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 항생제는 종래 항생제에 비하여 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이성이 매우 높아 익균은 죽이지 않고 특정 병원균만을 사멸시킬 수 있으며, 약물 내성을 유도하지 않아 종래의 항생제에 비하여 제품 수명이 연장되는 효과를 나타낼 수 있다.
상기 항생제는 당업계에서 통상적으로 사용되는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
상기 항생제는 항생제의 품질 저하를 감소시키는데 충분한 유효량의 첨가제를 포함하는 것일 수 있고, 상기 첨가제는 보존제, 안정화제, 부형제, 또는 동결보호제 등일 수 있다. 상기 항생제는 상기 첨가제를 포함함으로써, 자연 상태에 존재하는 박테리오파지와 다르게, 항생제 내에서 박테리오파지 CJ_CP_20-15가 보다 오랜 기간 동안 생존하거나 활성이 유지되는 것일 수 있다. 상기 보존제, 안정화제, 부형제, 또는 동결보호제는 항생제의 품질 저하를 감소시킬 수 있는 것이면, 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들이 제한 없이 사용될 수 있다.
다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 사료 첨가제를 제공한다. 또 다른 양상은 상기 사료 첨가제를 포함하는 사료를 제공한다. 또 다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 음용수 첨가제를 제공한다. 또 다른 양상은 상기 음용수 첨가제를 포함하는 음용수를 제공한다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 상기한 바와 같다.
상기 사료 첨가제 또는 음용수 첨가제는 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 포함하는 조성물의 형태로 제조되어 사료 또는 음용수에 혼합시키거나, 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 사료 또는 음용수 제조 시 직접 첨가하는 방식으로 사용하는 것일 수 있다.
상기 사료 첨가제 또는 음용수 첨가제 내에 포함되는 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 액체 상태 또는 건조된 고체 상태일 수 있고, 구체적으로, 건조된 분말 형태일 수 있다. 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 건조 방법은 통풍 건조, 자연 건조, 분무 건조 또는 동결 건조 방법일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 건조된 분말 형태로 사료 첨가제 또는 음용수 첨가제 중량의 0.05 내지 10 중량%, 구체적으로, 0.1 내지 2 중량%로 혼합되는 것일 수 있다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 사료 첨가제 또는 음용수 첨가제는 필요에 따라 기타 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 사용 가능한 첨가제의 비제한적인 예로는, 사료 또는 음용수의 품질 저하를 방지하기 위하여 첨가하는 결합제, 유화제, 보존제 등; 사료 또는 음용수의 효용 증대를 위하여 첨가하는 아미노산제, 비타민제, 효소제, 생균제, 향미제, 비단백태질소화합물(non-protein nitrogen compound: NPN), 규산염제, 완충제, 착색제, 추출제 또는 올리고당 등이 있으며, 이들은 단독으로 첨가되거나 또는 2 종 이상이 함께 첨가될 수 있다.
상기 사료 또는 음용수에 포함되는 박테리오파지 CJ_CP_20-15 이외의 원료들은 당업계에서 통상적으로 사용되는 것으로 제한없이 사용될 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
상기 사료 첨가제는 사료 100 중량부에 대하여, 0.05 내지 10 중량부, 예를 들어, 0.1 내지 2 중량부로 포함되는 것일 수 있다. 상기 음용수 첨가제는 음용수 100 중량부에 대하여, 0.0001 내지 0.01 중량부, 예를 들어, 0.001 내지 0.005 중량부로 포함되는 것일 수 있다.
상기 사료 첨가제, 사료, 음용수 첨가제 또는 음용수는 당업계에서 통상적으로 사용되는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
상기 사료 첨가제, 사료, 음용수 첨가제 또는 음용수는 이들의 품질 저하를 감소시키는데 충분한 유효량의 첨가제를 포함하는 것일 수 있고, 상기 첨가제는 보존제, 안정화제, 부형제, 또는 동결보호제 등일 수 있다. 상기 사료 첨가제, 사료, 음용수 첨가제 또는 음용수는 상기 첨가제를 포함함으로써, 자연 상태에 존재하는 박테리오파지와 다르게, 사료 첨가제, 사료, 음용수 첨가제 또는 음용수 내에서 박테리오파지 CJ_CP_20-15가 보다 오랜 기간 동안 생존하거나 활성이 유지되는 것일 수 있다. 상기 보존제, 안정화제, 부형제, 또는 동결보호제는 사료 첨가제, 사료, 음용수 첨가제 또는 음용수의 품질 저하를 감소시킬 수 있는 것이면, 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들이 제한 없이 사용될 수 있다.
다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 소독제를 제공한다. 또 다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 세척제를 제공한다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 상기한 바와 같다.
상기 소독제 또는 세척제의 제형은 특별히 제한되지 아니하며, 당업계에서 통상적으로 알려진 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 소독제 또는 세척제는 당업계에서 통상적으로 사용되는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
상기 소독제는 클로스트리디움 퍼프린젠스를 제거하기 위하여 살포될 수 있으며 동물의 활동 영역, 도축장, 폐사 지역, 조리 장소 또는 조리 설비 등에 살포될 수 있으나 이에 제한되지 아니한다.
상기 세척제는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 노출되었거나 노출될 가능성이 있는 동물의 피부 표면 또는 신체 각 부위 등 을 세척하는 용도로 사용될 수 있으나 이에 제한되지 아니한다.
상기 소독제 또는 세척제는 이들의 품질 저하를 감소시키는데 충분한 유효량의 첨가제를 포함하는 것일 수 있고, 상기 첨가제는 보존제, 안정화제, 부형제, 또는 동결보호제 등일 수 있다. 상기 소독제 또는 세척제는 상기 첨가제를 포함함으로써, 자연 상태에 존재하는 박테리오파지와 다르게, 소독제 또는 세척제 내에서 박테리오파지 CJ_CP_20-15가 보다 오랜 기간 동안 생존하거나 활성이 유지되는 것일 수 있다. 상기 보존제, 안정화제, 부형제, 또는 동결보호제는 소독제 또는 세척제의 품질 저하를 감소시킬 수 있는 것이면, 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들이 제한 없이 사용될 수 있다.
다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 또는 이를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 인간을 제외한 동물에 투여하는 단계를 포함하는, 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 이를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 및 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 상기한 바와 같다. 구체적으로, 상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 예를 들어 괴사성 장염일 수 있다.
상기 예방 또는 치료 방법은 구체적으로, 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의해 감염되었거나 감염될 위험이 있는, 인간을 제외한 동물에 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 약학적 제제의 형태로 동물에게 투여되거나, 사료 첨가제 또는 음용수 첨가제의 형태로 동물의 사료 또는 음용수에 혼합하여 이를 섭식시키는 방법을 통해 투여되는 것일 수 있다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 구체적으로, 구강, 직장, 국소, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 경피, 비측내, 흡입 등을 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 적합한 1일 총 사용량은 올바른 의학적 판단 범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며 이는 당해 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에 있어 자명한 사항이다.
특정 동물에 대한 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 구체적인 약학적 유효량은, 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 해당 개체의 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별 또는 식이는 물론, 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간 등을 고려하여 결정될 수 있으며, 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있다.
상기 인간을 제외한 동물은 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의해 감염될 수 있는 동물이라면 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어 상기 동물은 조류 및 포유류일 수 있고, 구체적으로, 닭, 오리, 돼지 등을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
다른 양상은 상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 또는 이를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물의 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방제 또는 치료제 제조를 위한 용도를 제공한다.
상기 박테리오파지 CJ_CP_20-15, 이를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 및 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 상기한 바와 같다. 구체적으로, 상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 예를 들어 괴사성 장염일 수 있다.
신규한 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 클로스트리디움 퍼프린젠스를 특이적으로 사멸시키는 효과를 가지며, 내산성 및 내열성이 우수하여 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료 용도로 항생제, 사료 첨가제, 음용수 첨가제, 사료, 음용수, 소독제 또는 세척제 등에 널리 활용될 수 있다.
도 1은 신규 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 전자 현미경 사진이다.
도 2는 신규 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 pH 안정성을 확인한 결과 그래프이다.
도 3은 신규 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 60℃에서의 안정성을 확인한 결과 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 클로스트리디움 퍼프린젠스( Clostridium perfringens : CP)에 대한 사멸능을 가지는 박테리오파지의 분리
실시예 1-1. 분변 시료 전처리액의 제조
대한민국 서울시, 경기도, 충청도, 경상도 지역의 농장에서 양돈, 양계 및 축우의 분변 시료들을 채취하여, 각 시료 20 g을 80 mL의 PBS에 희석하여 10,000 rpm에서 15분 동안 원심분리하였다. 상등액을 0.2 μm 필터로 여과한 후, 여액에 10%(w/v) 염화나트륨 수용액을 첨가하고 4℃에서 12 시간 동안 보관하였다. 이후, 여기에 10%(w/v) 폴리에틸렌 글리콜 8000 (Sigma-Aldrich, Cat. No. P2139)을 첨가하여, 4℃에서 12 시간 동안 보관한 후, 농축을 위해 15,000 rpm에서 1 시간 동안 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 침전물을 10 mL의 SM 버퍼(5.8 g/L 염화나트륨, 2 g/L MgSO4·7H2O, 0.05M Tris-Cl (pH 7.5))에 녹인 후, 0.2 μm 필터로 여과하여 그 여액을 4℃에서 보관하였다.
실시예 1-2. 박테리오파지 농축액 제작
대한민국 서울시, 경기도, 충청도, 경상도 지역의 가축 농가에서 수집한 분변 시료로부터 분리한 CP 균주 및 국립수의과학검역원에서 분양받은 CP 균주를 2mL의 BHI (Brain Heart Infusion) 배지에 접종하여, 42℃ 및 혐기 조건에서 18 시간 동안 정치 배양 후, 50 mL의 BHI 배지에 상기 CP 균주 배양액 1mL 및 상기 실시예 1-1에서 수득한 분변 시료 전처리액 1 mL을 접종하여 42℃에서 18 시간 동안 혼합 정치 배양하였다. 혼합 배양액을 6,000 rpm에서 20분 동안 원심분리 후, 상등액을 0.2 μm 필터로 여과하고, 여기에 10%(w/v) 폴리에틸렌 글리콜 8000을 첨가하여, 4℃에서 12 시간 동안 보관하였다. 이후, 농축을 위해 15,000 rpm에서 1 시간 동안 원심분리하여 상등액을 제거하고, 침전물을 1 mL의 SM 버퍼에 녹이고, 0.2 μm 필터로 여과하여 그 여액을 4℃에서 보관하였다.
실시예 1-3. 박테리오파지의 스크리닝 및 분리
상기 실시예 1-2에서 제작한 박테리오파지 농축액 50 μL를 0.7%(w/v) 한천(BD DIFCO, Cat. No. 44164) 5 mL, 및 상기 실시예 1-2에서 사용한 것과 동일한 CP 균주를 600 nm에서 흡광도(O.D.)가 2가 되도록 진탕 배양한 배양액 50 μL와 혼합하고, 지름 150 mm의 BHI 평판 배지를 이용하여 Double-layer agar plaque assay를 수행하였다. 소프트 아가에 형성된 용균반을 200 μL 팁으로 펀칭하여 0.5 mL의 SM 버퍼에 넣어 용출하였다. 용출된 박테리오파지 포함 용액은 동일한 형태의 단일 용균반이 형성될 때까지 Double-layer agar plaque assay를 반복하여 순수한 박테리오파지를 포함하는 용액을 분리하였다. 수득한 박테리오파지 포함 용액을 0.2 μm 필터로 여과하고, 여기에 10%(w/v) 폴리에틸렌 글리콜 8000을 첨가하여, 4℃에서 12 시간 동안 보관하였다. 이후, 농축을 위해 15,000 rpm에서 1 시간 동안 원심분리하여 상등액을 제거하고, 침전물을 1 mL의 SM 버퍼에 녹이고, 0.2 μm 필터로 여과하여 그 여액을 4℃에서 보관하였다.
실시예 2. 분리한 박테리오파지의 전유전체(whole genome sequencing: WGS) 분석
CsCl gradient 법 및 파지 DNA 분리 키트(Norgen Biotek-Corp. Kit, Cat. No. 46800)를 이용하여 상기 실시예 1-3에서 순수 분리한 박테리오파지 농축액 1 mL로부터 DNA를 추출하였다. (주)마크로젠(Macrogen Inc.)에 의뢰하여 전유전체 분석을 수행하였고, De novo assembly 소프트웨어(SPAdes 3.13.0)를 사용하여 유전자를 조합하고, Open reading frame(ORF)은 GeneMark.hmm과 NCBI ORF finder를 사용하여 수행하였다. BLASTP (E values of <0.1)와 PSI-BLAST (E value of <0.005) 프로그램을 사용하여 각 ORF의 기능을 명명 (annotation)하였다.
그 결과, 분리한 박테리오파지는 51,650 bp, 73 ORF, G+C 함량 34.1%인 서열번호 1의 염기서열을 가짐을 확인하였고, 이는 기존에 보고된 Clostridium phage CP3 (MF001357.1)와 96%의 서열 동일성을 나타냈으나, 모든 단편이 100% 일치하는 박테리오파지는 없는 것으로 확인하여, 상기 박테리오파지는 신규 분리된 박테리오파지임을 알 수 있었다. 이에, 상기 신규한 박테리오파지를 박테리오파지 CJ_CP_20-15로 명명하고, 2021년 1월 18일자로 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms)에 기탁하여 수탁번호 KCCM12933P를 부여 받았다.
실시예 3. 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 형태 분석
고순도의 박테리오파지 용액을 얻기 위해, CsCl gradient 법을 수행하였다. 구체적으로, 밀도가 1.7, 1.5, 1.45 또는 1.3인 SM 버퍼에 용해시킨 CsCl 용액을 준비하고, 15 mL 초원심분리(ultracentrifuge)용 튜브(Beckman Coulter, Cat. No. Z00901SCA)에 상기 CsCl 용액을 높은 밀도에서 낮은 밀도로 층을 이루도록 2 mL씩 분주하여, 가장 상단에 실시예 1-3에서 수득한 박테리오파지 CJ_CP_20-15 농축액 2 mL를 분주하였다. 이를 4℃ 및 25,000 rpm에서 2 시간 동안 원심분리 후, 튜브에 형성된 흰색의 박테리오파지 층만을 시린지(Satorius, Cat. No. 17822-K)로 채취하였다. 채취한 박테리오파지 용액 1 μL를 carbon-coated copper grid 위에 점적 후, 2% 우라닐 아세테이트로 15초간 염색하여 전자현미경(TEM, JEOL JEM-101, Tokyo, Japan)으로 형태를 관찰하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 형태학상 이십면체 머리와 약 100 nm 길이의 수축성 있는 꼬리(contractile tail)를 가지는 것으로 관찰되어, 카우도비랄레스 목(Caudovirales order), 미오비리대 과(Myoviridae family)에 속함을 알 수 있었다.
실시예 4. 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 pH 안정성 평가
박테리오파지 CJ_CP_20-15가 넓은 pH 범위에서 안정성이 있는지 확인하기 위하여, pH 4, 7, 7.5 또는 10의 용액(pH 4: 0.2M 아세트산 나트륨(sodium acetate) 용액; pH 7, 7.5: 0.2M 인산 나트륨(sodium phosphate) 용액; 및 pH 10: 0.2M 트리스(Tris-HCl) 용액)을 준비하였다. 각 pH 별 용액 450 μL와 2 X 1010 PFU/mL의 박테리오파지 용액 50 μL를 혼합하여 4℃에서 2 시간 동안 정치 후, Double-layer agar plaque assay를 수행하여 titer 증감을 평가하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 pH 7 내지 10에서 활성을 잃지 않고 안정적이었으며, pH 4에서도 pH 7.5인 군에 비하여 약 1.7 로그 정도만 활성이 감소된 바, 우수한 내산성을 가지는 박테리오파지임을 알 수 있었다.
실시예 5. 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 열 안정성 평가
박테리오파지 CJ_CP_20-15가 고온에서 안정성이 있는지 확인하기 위하여, 2 X 108 PFU/mL의 박테리오파지 용액 500 μL를 60℃에서 0, 3, 6 또는 24 시간 동안 정치 후, Double-layer agar plaque assay를 수행하여 titer 증감을 평가하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 60℃에서 3 시간 동안 노출되었을 때 0 시간 노출된 대조군 대비 약 1.0 로그의 활성 감소를 보였고, 6 시간 동안 노출 시 대조군 대비 약 2.1 로그의 활성 감소를 보였으며, 24 시간 동안 노출 시에도 대조군 대비 약 5.1 로그의 활성 감소가 있으나 여전히 활성을 나타냈다. 따라서, 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 우수한 내열성을 가지는 박테리오파지임을 알 수 있었다.
실시예 6. 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 용균 범위(spectrum) 평가
박테리오파지 CJ_CP_20-15의 용균 범위를 평가하기 위하여, 대한민국 서울시, 경기도, 충청도, 경상도 지역의 가축 농가에서 수집한 분변 시료로부터 분리한 CP 균주 및 국립수의과학검역원에서 분양받은 CP 균주 총 45종을 각각 BHI 액상 배지에서 배양 후, 0.7% 소프트 아가 5 mL에 상기 균주 배양물 각 50 μL를 접종하여 페트리 디쉬에 부어 플레이팅 후 5분간 정치하였다. 이후, 소프트 아가 위에 상기 실시예 1-3에서 수득한 박테리오파지 CJ_CP_20-15 농축액 10 μL를 적가(spotting)한 다음 42℃에서 18 시간 동안 정치 배양하였다. 배양 종료 후 소프트 아가 위에 형성된 용균반 유무에 따라 박테리오파지 CJ_CP_20-15의 용균 범위를 평가하였다.
CP 균주명 용균반 형성 유무 CP 균주명 용균반 형성 유무
HLYS-1 ++ BCCP42-2 ++
HLYS-3 ++ BCCP43-1 ++
JSH-1 ++ BCCP47-2 ++
CP-KCCM 40947 ++ BCCP48-3 ++
KJW-2 ++ BCCP51-1-1 ++
CP-KJW-1 ++ BCCP52-2-8 ++
CP-JSH-1 ++ BCCP53-2-3 ++
CP-OYS-2 ++ BCCP54-3-8 ++
CP-BC-1 ++ BCCP55-3-1 ++
CP-BSW-4 ++ SBCCP429-2 ++
CP-HBM-2 ++ SBCCP321 ++
CP-HLYS ++ SBCCP343 ++
CP-KW-1 ++ SBCCP361 ++
CP-BS-1 ++ ELCCP6-1 ++
CP-HL-1 ++ OYS-2-1 ++
CP-LJN-1 ++ OYS-2-2 ++
BCCP17-1 ++ 1-1-2 +
BCCP23-4 ++ 1-1 ++
BCCP37-2 ++ C3 +
BCCP38-1 ++ CP-ATCC12921 +
BCCP39-1 ++ CP-ATCC13124 ++
BCCP40-1 ++ CP-CCARM 18020 ++
BCCP41-3 ++
(++: 깨끗한 용균반 형성; +: 탁한 용균반 형성)
그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이, 시험한 45종 CP 균주 모두에서 용균반이 형성되어, 박테리오파지 CJ_CP_20-15는 광범위한 CP 균주들에 사멸능을 가짐을 확인하였다.
이상의 설명으로부터, 본 출원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 출원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 출원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 출원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
한국미생물보존센터(국외) KCCM12933P 20210118
SEQUENCE LISTING <110> CJ CheilJedang Corporation <120> Novel bacteriophage having a specific bactericidal activity against Clostridium perfringens and antibacterial composition comprising the same <130> PN137594KR <160> 1 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 51650 <212> DNA <213> bacteriophage CJ_CP_20-15 <400> 1 cttggtcagt tggtgggtaa tcaaagtatt tatataactc aagatcagta aaaaatcttt 60 ctagaccttc cttaggagtg gtcttgggat ccacatagtc ttgtaattcc tgtcccttag 120 tatataactt ctgaagttca gtagccataa tggtgtttac taagttatca gcctctttta 180 tattatcata aaattcagga acatacaata gtaattcttt ttgaacctgt tctagactat 240 acataagtta ccaccacctc agtaatggtt ggtatttgat tagcaggaat agttaaagat 300 tgactacttc cattaagtgt aatggttgta taatcttcta ctccctcaat atttaaaagc 360 atagccccta ttctatttat agataggcta gtaattttaa atacttgact atttagaaat 420 tcttctagtt ctttcttgaa gtttaatttt atttgttctt ctgtaactga actcaatttc 480 ttaacttgag ctcttacagt gatattaaag gtttgggctg actcaacagt aaaaacacat 540 cctataggag ctttaccctc acctaaacct ttcttgcctg gatccatgta ttcttgaact 600 ttattaacta gctcaggatt agcaggctta ttttcaactg tggttataat acctttagca 660 gtatttattc catcccaaca gggaagaacc acagctttac ccactccagc tacactttta 720 caccaatcag ttaactgttg aacattccca tctccagatg gttgtatagt ggctttagta 780 gctctttctc ttaactcatc atctgtctcc tgatctctac caataacaag tatatctccc 840 atagtagcac ttctaagttc tgctatagca ttgataggaa ttaaatgtgt acctgttgat 900 actttattgg gtcctgaacc taaggtctca cattcaataa tattaggctc tatcacttgc 960 cagaaataat ctcctccttg gaatcttgaa ccaacatcgg gttcatagcc aacaaatata 1020 gctgaccttc tacacttagt tggaattatt ctggatatcc ctacattggc agctctctca 1080 tctaagaact tacctgtagc agtacttaga aatactgagt ctaatatttg attaacatta 1140 acagcataaa actcagctag cttaacagca aaaaccatag ccatatcata ggtgaagctt 1200 ccagttctag tgtcaatatc atcaggggat aggcctatca tttcttctaa taattcttta 1260 tgtgttcggg agaataaatc ttcagaaaat cccattatat caccccttcc agttttgtat 1320 ctccatatat ggtatttatc catacttcaa tatatacatt cttaccttgc acattatact 1380 ttagatcagt tactttagtc actctatcat cttctaagag acattcaggg atagccctat 1440 taatctccat ttcaagaagt tcaggagtta ctagagagtc attaatcaaa gctctaatat 1500 cacaaccata agaagtatct tgataaatca tataggcatt tttaggagtt attaatcttt 1560 tatataaaga ttgttttaag gcctcaagac catccacatt atcataaatc ctattaaggt 1620 ttagatccag tttataggtc ttggtattct ccattgtttt ctcatcaact ataagagtat 1680 ctttaaagcc attaggtagc attatatcaa cctcctaaga tccctaacat aaaatatctt 1740 tgtccatcat catagggcat aagataaaca gtatcgccct cactaataga ctcaatatgt 1800 tttggaacat ctataatatt tccagatagt actaattttc tattgtgaag acactcacat 1860 tttagagggc tagtactaag taccttagct ctataaatat ttagaggggt ggacatatta 1920 ctatatactt gttttacaca gtctaataaa ttattagcca ttaaatatca ccctcctcag 1980 tacatttaag ttttaaattc atggtgtagt cagtatcaaa tttatgggta tcagactcaa 2040 tgtagaaagc cttgttaatt tttaaatgtg gtatactaac cacaatggct ttgccactaa 2100 tacaatcagg tacacctata acagttatag agatatcagt tttaggtctc ttacctgttt 2160 ctagctttat tctagccttc tcatttaatt gggcttggtt tagttcatca ctgatagtat 2220 cgtataattg aaatacacca tatttctttt ggctgctatc atctttagca gaggcaaata 2280 aagtaatctc gggatcatct ttacccttac cctgtttata tttacatact agctttacct 2340 ggttgacaat actatcaaag tttctacttc ttgaaaaggt tccaatattt ttaccatatt 2400 cgaatttcca caattcatta ttggttcttc ggtttataaa atcaaactta cctgtaatag 2460 aattatagta aatataaaac tgttctccag tttgttcata aacctctttt attaccttct 2520 tcataatatc atagggagtt tgtttctcac atactaaact agagaaagta tatccagttt 2580 tagctactac tccaggggca accccaaagg ctttacataa tgactcaaat atagcttcgc 2640 cagtttggtt ttcgaataca aagctatctt tattattagc ccaataaatc atagggtcat 2700 aagctttaac cttaagtaaa tgctttttct cattatctga gatattcata ataataccat 2760 taaagatatt cttaccctca tggactagta ctacctgatc tccatcataa attggatgta 2820 tatcttgagc attatattgg aatgataggg tacgaggggc agatgaagaa gaccctgccc 2880 aactcttacc actggaggta tttgtaatat caaaggattt atctccttgt accacaatta 2940 attgcatatt ataacctcct tatataatca ccagaactcc aaccttcttt atatcctgaa 3000 ccattatcta atttatactt tacataatgc catccatttt gagatcttaa tactgtaaag 3060 tgttcattag gccatatctt acccttagtg ggattattga tacctggtcc agttcttacc 3120 catagccatg agtaaacatt agtagtagta gctgcccaag gttgagtacc tccagaagaa 3180 ctacctcctg tattaccact ataggctagt ttaggttttg gaattgtaaa actaactgat 3240 ttaacctcag gcttcttata ctcagttagt tttattttta cttgaagagt accaatatct 3300 ccacctttct cagtatatga gatattatca atagtaacta ataagttaat atcagtacta 3360 gtaatagtaa atcttactgg atctttaccc atttcaataa gtttagcata acttactcta 3420 gggtctgcaa tatcagtata ctcacatcca tcgtagtatg agcttggtaa ctcaaaatta 3480 aaagaaaaag attttagctt agggtctcct atgaaagaga gttcccctaa gccttcaatg 3540 gaaactgtac tattatctct actatcagag atatttatat cagtgggatt tactggtaac 3600 ctaaacctag tatctccctg tattaaccag aattgatatt tactatgcaa ggtccagttc 3660 acctccctcg aacatttcct gatttaacat ttccacaata aatctgtata ctctcattaa 3720 ttcactttct gagattgttc catcttcagc ctgtactgtg aaattaaatg agttgttaat 3780 gttcataact ttagatccat catcacttcc tgctccagat tgtcttagta aatcctgagt 3840 tttatctgca ggtaatactt gagagcctct aggcattttt gagaatgtag gacccataac 3900 taattcagga ccagcttcac caaccatggc agctttatct gtaaagaagt cagtaccttc 3960 agcaagcatt ggtatctggg gaatattaat acccttaccc ccaataatag gtacccagtc 4020 aggtatctta atagtattaa gagcaccaat taagttatta atcataccaa taatactatt 4080 aataggagct tttgctaggg ataacatacc ttggaaaata cccccaaaga tgttcttaac 4140 accttcccaa gctttagacc aattacctgt gaatactcca gccacaaaag ctattaaacc 4200 actcaacatc tgcattaatc cctgtagtat tcctgatata gtttgaacgg ccccagtaac 4260 aactgaggag ataacaggcc atactgtttg gaaagatgcg gctaaaaggt taagtagtgg 4320 agttagcata tccaccaacc cttggaatat cataccaaaa ctctcaatag ctgattgaat 4380 atatggaact acattctcag caaagcttaa gaacataggt agtagtgtat tattccacca 4440 atctgctagt ccttgtaata ttggcattag gaagttacct atagcttcca caacttgtga 4500 tatagctggg gctatgtagg tgttaaaggc ttcagctaat gatacagcta ttggcatgaa 4560 aacattagtt atcaattctc caagagctgt aaaagtagca gagaacatag aacctaatac 4620 ttctaatata gggcctaaca cttccaatac agtttgccat acttgagtaa agccttgaac 4680 ataaagaact actaagtcta tggctggaat taggttattc ataaatatag aagctaaagt 4740 tccaaacata tcaagaagta cttgacctat aggagctaat actcccatga taggctcagc 4800 taaaccatta aaggcttctt gtatattatt attagcctct gataaataat ctggtagacc 4860 tattaagatc tctccaaaat tattatagat gtcttctcca agactccata tcttctcatt 4920 aatttgatct gccacatcag caggtaagaa cttatataat atatcattgg ttagatctat 4980 aaagggttgc atagcatccc caaactccca accattcatg atgtaatata tagtctctcc 5040 taaaccttgg aaagcagaaa caaccattga gaatataggt cctagttttt caaagccttc 5100 ttgtataaat gtgataccat ttagaacagc attagctata acctcaacgg caggggctag 5160 ggcatctccc acatctaaca taactacagc agctttggtt tttattctct ccatggttct 5220 attaaagccc ttatccattt tttcataggc agcttcagtg gccccagcac tatccttcat 5280 ctcattaaga gcattagtaa aggcctcagt accttcacca gtcaaggcta gtgcagctga 5340 accagcttct acagaaccaa agaggtcatt gatacccaga ttacttttct gggcatgttt 5400 ttctaacatc tgaagggcct cttggatatt acctccacct ttaatgaagt ctttgaagcc 5460 cttaccagct atttcccgga agactttatc agtcttggtt cccgatttag atagctcatc 5520 tatagcagct cttatcttag tagtagctac agatgttgga accccctgag ctgttaatgc 5580 agctatagag gcagatactt cttcaaaaga taccccagca gctgaggctg aaggtagcac 5640 attgaatagg gattgtgata gttgctcaaa gttagtctta ccaagtctta ctgtagtaaa 5700 cataaggtct gaggcccttt gaacatccat attcttagct ccatatgagt taataacagt 5760 agttagtcca tcaaccgcag tttctattga tgtgatacca cctatagaag ctttaccagc 5820 tgtttctaag aaactaaaaa cgttatcctc tggaactgat gaggatatag cttgataaag 5880 agcaggtact actttatcag gcaatatccc tatatcagaa cttaactttt ttacctggcc 5940 ggacatctta tcaaaggtct cttgagtaga gttgggtaat agagtcataa cctcatttaa 6000 accttgctca aaatccccaa aggctttaac actgtcctta gtaaaatccc agacagcctt 6060 agctgagaat actccagcag ctactccacc aattttggca agagtaccca tgaaggaatt 6120 accactatca gccatctggt taaatgcacc agagatctta tcttgggcag agaatatggc 6180 agtaaatgcc gcttgacttg ccattatatc cctcctttat gattaagagc ctttctttaa 6240 cttatcccta gcttttttat cttcctctaa agccagttca catgaggcta taagaaaggc 6300 tttcctattg ggagatagtt tatcaaattc ccagggtagt atattatgct tctggaataa 6360 cacatgagcc caaaatgcac tagtgtcggc ctttattagt tttttgcttc tttgattaga 6420 tcatccttat tatcgcctaa tccatttatg tccataacct cactagttat tctagtgaaa 6480 tctcctggta agcttagtac atccataagt aaatctactg gatccacaaa cttagtagac 6540 tctaaccatt ttggatcttt aaagtcaggg aatactattg tttctagtat catttcccta 6600 gtagctcttc tttggtctgt tattgagtta gttatacctt tgtttctagt aattactgta 6660 tttctctttt ggatatcttc catttgctta gtagtgattg gctttaatat ccaaggtata 6720 ggttggcccg ctaattcatg accctcaggg aaactaaatc tagctacccc ttcaacttca 6780 atttcgggtg attgtttacc cttatcattt tccatgaaaa attccatact aaattttgac 6840 ataataatct acctccacaa tattcttaat cttttataaa tatcttactt ctgaagctga 6900 gaatgatatt tcttcttgaa tttcttctcc ctcagcatct agtccaatta gtggtaaatc 6960 tccttctaat tgtactccta gtaattgtac tctgtcctca ccataattct taacatagtc 7020 agaatctgga tcatcacata cagcttgtat atccatctta gggaatatac cagtttttaa 7080 gtattcctta atagcttctc ttatcattgg agtagctttg aattgagtta tagttccagt 7140 tatatcataa cctataactt ttgaggttaa tcctttctga cccataactc ttttcttagt 7200 cacctcagga gtaaatagag cttctagttt tattaagcta gttacttgct tacctgatac 7260 aaaagctcta ccctctctag cagacattct attaacttca ctcatgggct atacctcctt 7320 aattattctt aacagttaca aagtatttct tgaaagttct tacaggttgt gtaagtatag 7380 tagcatacat agtctttcct ttactagctt cttcatctac cactacatca gagtcagggt 7440 ccacattctt taatgctcct tgagcttgta gtgtagttaa tagacttatt agtctatcct 7500 gagctagctt tataccatct ttgtggttag ggaaaacatt aggaactaag atctgagatc 7560 ctagatctat aacagcatcc aatacagcca caactttgtt atctgtaaag ctttcatccc 7620 attcttctgt aaaagtatgg tgtgtattta tatcttcctc aactactacc tttactcttt 7680 cagaatttga gtcagtttga gttgagaata taaattgacc tgtttttaat ccatcaacta 7740 tttgagagtg ttttagtctt ggattggcat ctactgctcc aggatatgct ttataagtaa 7800 ggtcttcagt atatccagct gcagctctag caccagctac ccatgcagtt gcttgagaag 7860 ctgttaactt agtgccccct tctaatacaa caccattctt aacattgata atgtatgggt 7920 aatcacaagt agcaaagtca gaagtaactg ccacaatatt cttaccaact tcatctctga 7980 agtatttaag ttttgataat agagcagtgt gtaattcact atcagtaaat gggaaggcca 8040 tagttttaaa gttgtataac tcacagttat ctaagaagtt gataacatca gagttattca 8100 tctgagtaga agtaccagta ctaaactcag tcttagcagt ctcatctata gaaccacttc 8160 cacttactgt aaaccattga gacttaactg ttgatatttc agttactcct gtagcctcaa 8220 agattttaga tccctcaaga tataataata tatcctttcc tccaagagga ttggtcttaa 8280 tagttagaga taacttatta cccctttctc cagctttagt agctgtaaat gttagagacc 8340 ctactacagc tttggcttta gttccacctg ttaggttata tactaaaaca gttgcagctt 8400 cttttaaagc ctctttaact agtaatacag tagggtgagt tatgtcatac ccaagttgat 8460 ataatgcttc taggccacct tcattggtta ccttgataac atctccagca ttaccccatt 8520 taagttgtaa tggtaagatc ataactccta gattattaag cttaggctca ttaagtccac 8580 cacttacgaa tctagtatac ataccaggtc ttactttatt ttgtcctgga ataaaagttc 8640 ctcctgccat ctattttacc tccttcttta gccagtcttt tataatctga ctagtttgtt 8700 ttattgttaa ctcttcatca ggtggaaggg attgaactgc agcgttgaag acaaactcct 8760 caacctggaa aagttgttga caatgggctc ttaattgagg tatggaaaat ttttgtactt 8820 tcactatttt accccctttg ttatctcaaa gttttcgaag taagttggat ctttataaag 8880 actaaccaca atatcatagt ttatctctac ctgagaatct tcttcagttt caccttcaaa 8940 tacttccaca ttctttattt tgagattttt gttggtctta ctaccatccc tattaagtat 9000 aggaattttt ctatttctca agtatatagc attagctata ttctgagcaa tttcaagaga 9060 gtctttaggt tcaaatacct taactcttaa agtattctca gttctataac tacaaagagt 9120 atcattctga ggattaaata ccttcttgaa atataatgag ggatacttga acttttcagg 9180 tattcgctca aaatagagga tagtaattcc agttagatca gatatgaatt tagcaatact 9240 ccctatatct gctgtcatta ataactaccc cctaaaactt cggctaacca atcttctaat 9300 tttctttgga aagcctgttc aaatattttt tcatatattt ttactgcatt gtcccaataa 9360 ggtttaccag gtactttctt ttgtcttagt accataccag tcttagctcc tggttgataa 9420 ataaatttat ctcctgacca tatgccagga acgaatctaa atgattgtcc ttgtggatta 9480 gtgtagtgac catcgtttac ccacttagca tattttaggt tagtaccaac ttctaaagtt 9540 agtcctccat cactacttac ccatatacca ttcttacctc ccttttgaaa ggagttaagt 9600 aataatctag tgtctactac ttgtagtcta attatttcat cttgaaccac atcaaggaag 9660 tctatccctg cagcttcaaa ccatactgct aattgctttt tgaaatcact attagctgca 9720 tctcttagct tctttataaa cctttctatt tgtttagcat ctatttctat gcctccagaa 9780 tttgaagcca taactatcta aaatccttag cctctatacc aaccttaatt tttagacctc 9840 ttatatccct aggagcttta gctatatatg tgataccagt ctcaaggtcc acaattttat 9900 cattttgtct aacatcagtt ccaatagcaa aatctactga gtactcctgg gtaatcttaa 9960 acctaggttc tttgtactca agtttttcta gagttcctga cttaaaatga cagggtacct 10020 cagtcatgtc tggctcatca ggataactaa agctaggggt atgggctagc ccatatccgg 10080 gatcttcagg gtcttctaat aggtggtata tattacatct atgatttaag agcttgttat 10140 atgaatttcc aatcatatta cagtaccctt aatctcatag tagttgttct gatagatgga 10200 ctatcatctt ctaagaaagg tttaatcaga ggcataatat caggctctat gacagcctta 10260 tcagttcttc ttgtatatga gtaatcatca taggtctcgg attgaatatc agccttgcta 10320 atgaccaagg attgtagtcc ataatactca gcatacaata tatgggctaa ccttaattct 10380 ttactattag gatttttctc cacaatagta tcatagtctt tatttgaatt tttaaaaatt 10440 cctgagatct tggctttagc tcttagtata tccatctcaa tatttttggg gtctcttttc 10500 ttaatctcag gattacttga aaagtcaatt atttcatccg gagtaatatt catatgagcc 10560 acccctatct gtttctttta ttcttgtttg taaatcttct agcaggttct tctttactgt 10620 catctgtaga aggtatttct tctccagtaa aatcttctag aggttcatcc tcaacaggtt 10680 catctatgac aatcacatca tagttctgtt ttaaataatt tactaggtta tctttaactt 10740 cttctacatg gtcttgagta attctatgac ccttaataac cagagtttgt aatttaccct 10800 ttgctaattt gaccttagcc ataatatctc tcctttctaa tgaaaaagag cccacattta 10860 tagtgggcct tcatgattaa gcttttacct tgattatctt agcagcagct ttaggatctt 10920 caaacttaac atccatctta agagttaaaa ctacataagt agctctttct ctaggagctc 10980 tttctaattc aattctgata tctcttgata tacctataac tatattctta gggtgagtta 11040 agattatatc tgatacttga gtagaagtat cttcataatc ttgtagcata gctatacctt 11100 taacaggtac accataagca gatttaacag agccatttat aaatgagtca tcaccattag 11160 cagttaatct ctctcctact aagtctaccc aatcagtttc taaaccattt gagcagtaga 11220 atctccactc actggggttt cttaaatact tagctggtac agctttctta gcttgtttta 11280 ataggtcttt acttaaagca cccctttgag catctactac atgagcagtt aactgttttc 11340 taaccccatc taattgttgt aagaactcat cactaccctc actagtatca ccattaacaa 11400 ttatttcttc catatcaaga gcaactcttt cagctaataa ttgcattaca gtgtcttcta 11460 ttgattttcc ttctatattt gtttctatag tatcatcagt taacttaacc acagctataa 11520 attctttagc ttgtaaagta actgttccag tagttggagc tgaatattta gactcccctg 11580 gatcttttcc ttcagttgca ggatttaata ctctttgacc aaatcctatt gactcaatct 11640 ttttagagtc tcctttcatt ggtacagttc tagcctcttt taatattgtt ggctcatcaa 11700 ttatcatttt aataaaagcg ttagcttgtt ctgtgtttaa tttacctcca ccacttaata 11760 ctgtagagtt aaatactgct ttatttattt tagccataat cttttcctcc tatcaattat 11820 tcttggtttc caccaaataa tccattaaat actgattttt gaacttcttg tccttctcct 11880 ccatttttaa caatttgttt acttcctaca tatggagcca tggccttagc tactgcctca 11940 gctatttttt cttcctcagt tttttcttct tgtttctgga ttaagccagc ctctaacata 12000 gctttttcca cagccttagc aactatatct tcagtagtag cttgttgacc ttcactcttt 12060 ttaacttcac cctcaacagg tttagttcca tctaatgcct ttttgatagc ttcgtctatc 12120 attttttgta cttgagtttc attcatctct tcttccccct ccactgagtc taataattca 12180 ttaatagcac tttgtgctgt ttttaacttt tccacatttt ttgaagatat tttcttacct 12240 gccttattga ctggtaactc aaaggattta gctacttcct cgggagttcc taataatatt 12300 ccctccatag tttcagaaaa ttcttgaaga gcttccttta tcttatctac atcactttca 12360 aaagatctag tgtaatccca actagaatat ggatatagaa tatcttctaa ggtactaact 12420 gcattccaga aattatccct ttttgcagtc tctttatatt tttcagagta tgcacctttc 12480 tgtatatgct ttggagttaa ccctaaggcc tttccaatct tatcaagtat agattgacct 12540 atagacttct caatctcatc aatatctaca tcttgtgtag aatatttacc agtaccaccc 12600 atagaccatc cagtaatttc gcctttctca atcttgctcc atagatcatc atcgacaatc 12660 tcagctttag ctagccaagt tccagcttta actactgtac cttctattgt agtatcttcc 12720 tcagttaccc atgattttac aatcttgaca ccctcaagag tgttctcatt gtgttgtaaa 12780 tcactaccaa ggccattttc attaaaccac tcacaagctt tcttgatctc ttcctcagtc 12840 ataaaattat catggtagtc agcagtcatt ggctcatata ctacaccgat aacaaaatga 12900 ttatctcctt cagactcaga ctttaagatt ggcttatcat atctaaatct attaggagcc 12960 ccaagttctt tagccacaat ccattgccat ttattagctg ctttatcaac taatgaaagg 13020 taatcaattt tagcatctga gatctcaata gctttcttaa ctgattttac tggcatttac 13080 tctccctcct ttacaaatta tattctgcta tcacttgatc tctgatagct tctttttctt 13140 ctttagataa tcctagtata tccttatcaa ttacaggccc atgggtacaa tgacaattca 13200 cagtctcaga agctggtaag ttgatatccc taggaaatct agcttcataa attcctacag 13260 tgaagtactc acctttatta atgacagtac catccagatc gacatggtgt tgccttgggt 13320 gaatacccct tccccctgag tgtttccact gtattcctgt tactgcgggg cattgattaa 13380 aagcctcatc cttagcatat gaatgagctc ttaacatttc agtaatagca gtagctctag 13440 ctctagttct actaaagcca taagtctcag ataatttacc aactacatct tctacagact 13500 ctccatcttc aagagcctta tccagaatat tctgtagttt ttcatgggaa gttaatttca 13560 tcatttcccc tagtttagaa gaccactcat ctataaaggt agtagtatat ggagaaaaga 13620 ctttggttag ggataagtcc ttatcaatac cttgtaaata agtatctcct aaattttcta 13680 tagcttcttg ataacaactc ttaagagttt ctgctaaaga agtatcgata ttatctgtac 13740 ctatttgaga ctccacatat tccataaatt cttcaatggt ttcaaagtct ccatctttta 13800 taagatgttt taattcttct gtaaggagat cagaaatagt gtcttctaat tcagagatct 13860 tttctattgt ataatcaatc tcctcatagc cagcttcttt caattctttc ttaaggctat 13920 catcttcatt ctttaagatc ttatcaattt tagcgatcaa ctcatcagta cccactatta 13980 cttacctcct tttaattgat agtttaataa ctgtttctta gcctctttaa gtacagctat 14040 cacctcatca ctcccattag agctttgagc cttctcaatt atacttgtta agttattact 14100 cattgaagag gcaactgagt aagtagggat atttgcccat tcttcatcaa taggagtata 14160 gtccttattg attgatgaat agtactcctc attaatctga ttaggagtca tagctctaga 14220 ggctatagca aacattcctt tctgataatc agagttctca atattaggac tcttaaagta 14280 agcttccaca tatttaaaac catagccaga tagaataaca ttatttagta tccatgttag 14340 gttttctctt tcaggaacaa atacttgctc ttcagttttt cttgtagcct ctctggctgt 14400 agccacatta taatcttggg agtaccctac atatatatct ggtagtaaga aagaagattg 14460 tatctttttc ctagtattat ccatgtagtc ttggaataac tcatccttct gtaatatttc 14520 agataggggc ttgacctcaa cagtaactgg cttagaatca tcaagggcag tgtctctctc 14580 tgcagcttca gtttctaata ctaagaaacc atgctgggaa ttttcacctt ttacattatt 14640 catgtactca gttaattcat tccaagattt atcattaaga gtaccacctt gaattagtaa 14700 cattaatgga gtatgtttac cattagtaaa atatctccag tttaataatt cggcctttct 14760 tgaaccttga gcggctaaca taggaccttc ccatcttggt gtaccataga caccataacc 14820 tgttttaaaa tgaagtatac tgttagctcg atctttaaga ggtatctctc ccttttcata 14880 atactttcca gtattcatat ctagatctct aggatctccc cactctttaa agaagattga 14940 ttgattattt acagtctgct taaatcttct gaatcttttt cttctagtgt actgtttacc 15000 atatcgggtt acagtgtact ctgtactctc atcatctagc ttaagaattt taattgtctt 15060 agggtcttca atttctttta tctcttttac gagagctgag tctttaggat cttctacgat 15120 ctctaaaaaa gaatacccaa gtccttctct ccaatcaact atctcttcaa agacattctt 15180 ggttggttta tcaaaagaca gggtatcaat taattcttcc agctgtttat attcagcttc 15240 catttctgga gtaggttcat ctaccttctc aatataccta atacctattc cgaatccagc 15300 aatattattt cggtaggcct ttttgcattg gggtattatt gtagactccc ttataatcac 15360 ttctaatagt tgggggtcat attcagggga tatctcatca acttcaattc caagtacact 15420 ggtttgttga ttagatttat ccactggatc caaagacttt tggatagggt ctccacatat 15480 acttctggcg gatatctttt tcaaagttac tttacctcct ttcttacctt atatatcaaa 15540 ttataaaatc cagatggcct catatttcag ggaggattac atcaactcca catatagtgt 15600 caaatacggc cattcacatg atttaaaaat aactataatt tgatacgttt attataacat 15660 aattcacaaa aatttgtcaa cgttttattt ttacattatt ttccagaaga ttttccgcat 15720 atattcccca tataaaatta tataattatt aatgtatact atattactat attaatttat 15780 gaaataaatt atatagtata tagtatactt atattacata tatataaagg tggtaactct 15840 gatatgcctt ctatatcaca ttattactaa tatagagcct agtcaatttc aaaactgata 15900 tctcacatat cagaataaaa attattggct ttaataggca tatcagttac ttagattttt 15960 cttaatttag atccaacagg aaggcaagct aagaatagag agtctgctaa gtctggagaa 16020 tgtagtcctc ttttcttcat ttcatcctta ctctccagct ttatttgacc tttggagttg 16080 aatactttaa actttctggt agtcaattct cccacaagat ctgtattatc tggtagtctt 16140 aactcatcat cctccagtaa ttccttaact acagaggcta tatatgtggt tgtatcataa 16200 taaaaggcat aagcctggga ccccctcttt aatggcatac caaatttaca tggtactacc 16260 ttcaaccagt ccagtttttc ttcaaatttt atctccttta atctatcagt tactccccca 16320 cctacaccag tgtcgtctat tttcacaact actgctagtt tagggaactc accatgtagg 16380 gatttagcct ttcttagcac ttctcctact gttttcatag tgtccttacc ttggtaatag 16440 ataggttctt ccacatatcc atcaattttg gtcataatag aggtcttatc tgaaccaaat 16500 ctagctacgt ctacacccat atctatagta actggttctg taggtctggt tatttcacta 16560 ttaatacctc tatatactgt ggataattgt ataaatatgt catcttcttc tagtgggaag 16620 tcccctttta ccagacatct gtagacattg gactcttctc catacttttt ccttaacatt 16680 ttatggtttt ctttatcagt tctatcaact tttgtagcgt caatatgaat acatttaaaa 16740 ttttccttaa gactgtggtg agaatcaaag aagatacctg tatttttaac agggttacca 16800 atcaaaatta tcttattttc ctcatcggat atagtaccaa gtaatgcttc tagtatctca 16860 tcatctattc caggagcctc atcacatata attagcataa actcactatg aagaccaagc 16920 atattctctt ttctattact agttttacac atagcaaacc aagtcatagg actacaattc 16980 ctagtcatag tagttttatt tactgtaaag taatcttcca caatagttcc ttgtagccat 17040 tttgatattt caggccataa tacagatgtt aactgtgaaa atgtaggagc tgtagcaatt 17100 accttacatt caggcctaaa ggtcatatac caaattataa gacaagcaca ggccatggtc 17160 ttacctaccc cctgtcctga ccttacagag gttctcttat tgtctcttac actcaataaa 17220 atatctttct gatgtggatc taagtgtact cctagtatat cttccgagaa tccacaagga 17280 tcgtcatagt atagatctac taattcttca aaggatattt cttccagagc ttccttgtta 17340 atgtggaact tatcaactaa agcatctagc tctaatttct caattatgct atctaaatca 17400 aacaattata tacacctcct tagtaaagtg ctttatttag tcctgtaata cctttttact 17460 tagtggtatt agattttcct ttacctgcat tctttttctt tctatcagcc attttggctc 17520 taagaacctc aagatctttt cccttaccag cattattctg attttcctgt atttgtaaaa 17580 gtaatttaac cttttcaagt tcaactttca tcacatcagt acttaggccg aagtatacct 17640 caagtctttt tagtgcctga agtctatcct ccattttaac tgatacgcca tctttacttt 17700 gtttaatctc attgattaaa gtaccatcta cagccttact agaccttaat agaactagat 17760 catccttgaa ttggcacaca tcagttatat ctgcaaaggc tattttcatg tactgcctta 17820 ttacatccat accatcgcat agtaattctt catctctatc ggctctgata gcctttagag 17880 cttcctgtat tttcttcttc tttaatagtt tagacccatg tgcatgagaa ttattcccag 17940 gataacctgc tctagcagct gctgtagttg cattaaagca cttcatgtaa tgaaatacaa 18000 acaactcttc tttctcatca agatcatact tatcagccag ggtcttaata gtcttttttg 18060 ttttgctact caatgccaca atatcacctt cttcttctaa aaatgttatg ccctgctctt 18120 taaactctct tagacactgc ctaacaaagg tctgtgatac cttagcaagg tttcttagtt 18180 gtttaggatg tgtaaaggga tcagccttca gggcattata tatcaatttt ttggctttct 18240 tcaaatgttc aggagtacag tactctggtt cagtgtatga cttatagctc ataatacaat 18300 atcaccccct taaaatccag actttactac gtgaaaaatg gttggcacac taaccttaat 18360 gctagtaata ccaaccaaat ggcaaaatta actatggatt tataccacta ttataccaca 18420 tctggattaa ttatgtcaac gttttataat tttatttcac ctgtcaatat tttttcatac 18480 atatccacat ctattcttcc ttcctgtagc aggttatcag ctgcaatttg tatctcttct 18540 ggggaatata ctggattacc tttagtatca agttctatac cagtatatga gtctacctta 18600 cctctgttca taccatatcc aactgattta tgaacttcta gtttttcatt atggtcttct 18660 tgccagtgtt ttaattcttc ctgatattcc ttattctcct ctttagtttg tttacattca 18720 ataggtctat tatctttcat cttttgcttt agagctgctg tattgggttt acagttctta 18780 gatcctccac ctgaacctct attcttatct tcctcataag ctttattaat ctcaatccca 18840 attattagat ccatcttctc taccaagtaa agacattctt ttactattgg attgttaggt 18900 tgatttttag aaatgatgtc ttgacactct ttctttaatt gatgtggatt attacattgg 18960 ctagggcatt tttctcctgg cccatatgga attgtatatg ctaagcagtt acctgctgga 19020 tcccttctat aacatcttct tttacatact attttactca tggttaatac ctcctaatat 19080 attttctttc tcttctaata atttttcaag ttcctcaaga ttttcttctt tatcactatt 19140 accagcttta gctatattta gaatagcttc tagttgttcc tcactcaaaa actcctttaa 19200 tttctcatcc tctaatatat tagatacctc tttactcata ttgttctacc tccacatcat 19260 tacaaattaa tttagctatt ccctcactta atctgtattt ctcaagatat accactttct 19320 taattcctgc attgattatt aaattagcac agctctcaca tggggataag gttacataca 19380 tagtagttcc ttcagttgag atcccatgtt tagcacagta acttattaag ccagcttctg 19440 catggatcac aatatcacat ccaggaccta aacaagtttt acaatgttct actcctgaag 19500 gtactccatt atatgaagta gcaactatcc tgttatctct aactaataca caaccaactg 19560 cttttcttag gcaagtagat cttcctgtca taagtttagc aacttccatg taaagtgttt 19620 ctctgcttat tctgttgtta ttattttcca tagtttatca cctcaatttt attatatact 19680 attccctatc atatgtcaag agaaacttta gaaaggtata tcaccataat ccagatcaat 19740 acattgggct ggctttggtt ttactttttt aggctctgga gttttcttga ctttatgata 19800 ctttggagct ctggctaaat ccttttttaa ctttctgact ctcttcatat cccactcatg 19860 tatttcatgg tctctaaaat attcattcaa tactcttact gcggatctct ttgaaggtgt 19920 ctttacagag cagttattag gagcaagaca gcatcctgtc tccttatctg atatagtata 19980 acatactgta ttatgagggg ctcctacagg cctatgaatg aataaggttc tgcccatata 20040 atcaaactca cataatactt ccacatatct tttatactgt tgtccctggt cattcttaca 20100 taatacataa gtatattctt tcatgttaat tctcctttct atgttaaaag ggagatcatc 20160 tctcccctta atatcttttt attcttctgt tgttctcatc aacctcaatc acttcatacc 20220 ttctaacctt atcagatata ccttcctcct gtaatacttt aggaatatat cctatggcct 20280 gtcttttgtt atcaacttca aaatatctgg tcaagatcct ttttgatgtt acaatcacta 20340 atcttacttt catattatct acctccatgt ggcctgaact acagctccag gtctatgctt 20400 agcttcaatc ttagcttctt cctcagtatc aaaatagatt atatcttcct tgtgttcatc 20460 cttaacagat acccagtgta ctcctaaata tttgttatgt gctaatacac taacatcagg 20520 gttccaatcc acatcaactg taacttgtaa aacgatatat ctccttttca tatcagttct 20580 cctttttgta tttatttgtt gattttatta taagagagcc tcggaagttt gtcaaagatt 20640 ttctcgaagg aattcgtata atatcttccg agctgagcat aatatagact ataaaacaaa 20700 atcaaggagt tgtaataaat gaaagataat aatttaatac cattaagaga tattgccaaa 20760 gaggttggaa taaatgaaag gaaagccaga aagctattaa gatcacatga gaataaagca 20820 aatcacaatt attattggat gtttacacca agagagaaaa gacatattgt atcagttcta 20880 aagagactgc aataggtttt ctaaaaataa gggagggatt aaccctcctt tttataattt 20940 tttgagttct ggaaaaatcc ttaattagtt caagtttcgt aaagttctct tgatcttttc 21000 cattctcttc ttaacttgga tagcttcttc ttcgcaagga gcatggcccc ctaggaattg 21060 gtgccatctt ctttcaagtt ctctgtattc agattgaagt tccatgaact caagtgaatg 21120 attgtccata ctatcacctc ctcaacacta ttataagtga tactgtcata ttctgtcaaa 21180 taaaaaagag agaatgttat tctccccatc ttaatatctt tatagttgct ccatcaactc 21240 ccttgccatc cacatcatgg acatacttat caagtctcat tgttgagtcc tgtataattc 21300 ttttgtcttc tctgtcaaaa accttaatga catcagggtt acccctgtca atgatgtaag 21360 caatctcttg agttccatct gcatatgtta cttgaagtaa tgaatgtaga ggaataaagt 21420 ctggagctgc ccaatcacca atcttaagat cccctcctat actattcttg gtctcatatc 21480 ctgccacatc tgtaggctca tctgatgagt aataagtaac ttcaactttg aactccattc 21540 ctttaaatga atttatcatc tcaattagat tttgtttatc agttctcagt ttatcattct 21600 gatattttaa tccttctaca ttgtccatca gtatttcagt ctgctcagtt aattgtttat 21660 tcgactcaat atattcttgg acagcatttc cccaatgatt gtttaggctc tgtatggtta 21720 acagtagccc tcctatcaca attattgtta gtaatgacat aattctttta atcattctct 21780 tttaactcct ttatttttaa tttgaatttc tcaattccag atttatactt acccacaata 21840 tcaaaggtat cggttagtat tgcataggtt tccccatcag aattaaatct gaagcttcct 21900 ctcttgatgt ctcctagctt attaaaggtc ttaccctcct tgtccagata tcctttatag 21960 tccatatagc acagacaagc agtaacaaac tcctgcttat tcctgaaatt atgcttgata 22020 cccataccat ctacccattt acttaataca aatagacttt cattagtctt ctttacttta 22080 ctattctgga ttagatcctt ccacacataa tcattagcct ctttaaatga cttaaatctc 22140 ttgcctttca gtatcttact actctggatc ttggctttat aatcctcaaa tatacttggc 22200 cagaagtctt ttagatataa atacaaggaa atatcatcta atttagcatt cggatcgtta 22260 atctggatta caggatgacc atccattgct ctgatattat tccttagttg ggtattctct 22320 ctcttcattt tagatacttc aatatataat ttaacgaatg cgtcagacaa ttcatgattg 22380 gttaattccc tttttagggg cttaccatct ttactttctt tagtagttac aatattaaag 22440 tagtcttgta acctatccca gttattcttc attagatcta cctcctatgc ttacattata 22500 catatattgt actgatatgt caaagtccag gcattaactg atatctgata tgcctatatt 22560 tttaccccat atcagtctga tatcccacat atcagttgaa actacaaaat cacaaaggca 22620 ttggtatcac tggcgtagag ggatatcagt tatgccccct ttatatatac atagtattat 22680 atatactata taataatata ttattatata tagtatatat atattacatg gtgattacat 22740 caatggcagg ctattgcctt gcctccatta tcattacggc aggcatatcc atgcttccga 22800 gcttttgccc tatatagaaa aacccagacg gtcagcgatc gagctcttga ttttgttttg 22860 tcgagggaga gaacagtaag agagaacccc cgaacgttga cagttgtact tacttctctt 22920 ataatgacag taaaggaggg ataaccatga aaacattatt tactgataca aaactagtat 22980 taattgaaac tactaacttc ttcattatgt tacaagaaga aggtaagtat gtactatcta 23040 aaacaatcga taaggagatg ggagaacaaa tacacagagt atctaagtta gctgcccttg 23100 tatatactaa tgaggagtat actaactcta atgaaccaag atctatatac ttagatgaca 23160 atttcttata cgaagtgctt ggtaatggga agtatattat aagatacagt atataagagc 23220 ccacaatcaa ttctaaggcc ttttagatat gtggtaatgt gattttactt ataatgtggt 23280 agagacacct tacaggagct gctagaggcc tttaaaggag gtatatcatg tatttatgta 23340 atggtaaaat agtcaagaat aaaaatgact taaaagataa gtttggtggt aaatcagtag 23400 tattcatcga tggggatgta gctacagtaa tggactttag tgacagaaag ccaaagataa 23460 caaaatatct tattagggag gtatcacatg ataaacacat cattattgaa gagactggaa 23520 gggatagagg aaaagcataa gcaaaatact gatgagataa gaaagaacct aaactatgcc 23580 agatatttga ttgagaaaca gtattgtcat ttaacaaaag aacagaagat aaaattggga 23640 cagttcttag gattgactga gaagaagtta aaagaaatac aagagataaa taatcagtta 23700 ataaatttga gagtggggct aagttatgaa gtcgtatgta ataaccagaa aaaatagtgg 23760 ggtatcttta gcagatacag acatgggaca agtattagct aagatactat gtaagcatgg 23820 gggaacactt accattgagg aaattgaacc agaacatatt ggtcaaactt tttctattgt 23880 agaaggtaaa agaatatggt ataatagaaa aggaggtgat aatattgggg agaagaagtg 23940 ctatgttaat tctcaagtat gactgcgaag aaactccaga aaggattgaa ttacgaaaga 24000 agtggttaca gatttgtctt cattcaataa tatattatag atatgacaac aatatctgga 24060 cagaccaaca atgggatgag actgccagag aggtagttaa acttaagaat gagaatccag 24120 gtttagtaaa cagtatgcca tttaggaatg accttaaagt ctttgatgga tccactggct 24180 ttaacctttc atgtatgcaa gatattaaga tgttaaggtg ggctcaaaac ttacttgact 24240 ttcatgttaa acgaggactt gatggaaaga gtaagaaaaa gaagaagaag aggaggaaaa 24300 agaaatgaac ctacttgagc actatataaa aaaggtacac agtgtaagag agtaccatga 24360 atttgataat gaaccttggg ctaaaggtaa acaatatgta gaagtagaca tggactatat 24420 ttgttattct aatacaccac aaagagtgaa gatggtattt actgttgatg agtgggagaa 24480 gataaaatat agaggctact acatgggata ggaggaatag ttatgataag agaaatgggc 24540 atgagaatgc taataccaga aatacatgat ataaaagata gggatataca aaattttgta 24600 agaaaggccc taaatgagat agttgatgaa aagttcttta taatacctgc aagtagtact 24660 gggaaatatc atccaactta tagtgcaggg gtaggaggtt tgttaagaca tactaaagct 24720 gcttgttata taggtaaagc attatgcgaa gctgagatga tatgttcaag ggacagagat 24780 atgataatag ctgctttaat attacatgac attaataagc cagataaaga acatccatat 24840 atggttagag agacactatc acccctagag gaagagtttc caataatata caaagtggta 24900 gttgaactaa ttgagtctca tcatggtcaa tggggtagtg ttcctattaa tagttattcc 24960 cagagaatag tacacttggc tgattatatc agttcacaga aaggtttaat attctcatat 25020 gaccaaggaa ctgattattc tgacctgtta tgggaggaga agtaaatggt gctaggggta 25080 ataaccctag tatcaatatt tttactagga gtgtttatag gttttgaggt gaagaaatgg 25140 aactaggttt tgcgatacta gctataatag tatcaatatt tttagaaact aaatatataa 25200 aggagtagat tattatgtca agagcaagag ctgcaaggag aagagccgaa agagagaaca 25260 aaaatcttaa tgttcttaaa gctgtggaca tcatgttagc cttatcatgc tatacattaa 25320 agaaggaagg ttatggtaag actagaatga ctaggtttgt ggaagggatg agtaaacaca 25380 cagaggagat tgaaaaggga acacttaact atgaaaccat aatgggagag attaaggatt 25440 tagtaccacc aggtatattt gatttagggg aggagtcaaa ggagtgatag tattgggata 25500 tttattatgg gcatttagaa tattaggcat acttgtaata gtatggtgta taatggaggc 25560 gatcagttgt gagcaataag ttatatttta ggtatagtgc tatgaactct ggaaagacta 25620 ctcagttaat ccaggtagca cataactatg aagaaagggg aatgaagcca ttagtagtta 25680 agcccggaat tgatactaaa ggtggaccat gtataatcag tagaataggg gtagcaagaa 25740 aggtggatgt tcttctacct cctagagtta aattatcaaa aatactttct gactttgagt 25800 ctaattattg ggcagtagat gttatattaa ttgatgaggt acaattctta tccagagaac 25860 aggttgatga tctgttaaat ttatcattac attatcctat tatatgttat ggattgagaa 25920 ctgactttaa aagggaagga tttgaaggaa gtaccagatt attacaagtg gcccataata 25980 ttgaagaatt aaagaacatt tgtcaatgtg gtaaaaaagc cacattctca atattaaaat 26040 accagggtaa atatactgac cagggtaacc agatacaaat tgataaccag cccgaaagtg 26100 ttgaatatga agccgtttgt aatgaatgtt ataataaatt aattttttct aaataactcg 26160 ttgacaggct atataggata tgatattata gtattgtaat caaattacaa acaccaacca 26220 aaactttata attagttaat ttcaaactat actaaatttg ttatttaaaa attaaaaata 26280 tggaggaatg attattatgg caaaaggaaa agcaaaatgg ttagaggaag caaacaataa 26340 ggagctaatt gtaatcgtac aatctgcttt aaattctgga gatgagaaag aagttaaaaa 26400 ggctttaaaa gctattgtgg aattagatga aagaactcct gacacagatg gacaaataac 26460 tgtagaggaa gcattagaat cattagaaat ggctgtagga actgtaaagg ctgcatacca 26520 agcagaaata gatgctgtgg aagatgaagg tgtagtagat gctgacttcg aagaagttga 26580 tgaagacgaa gcagaagaag atgaaaatga tttagaatca ttatctaaaa aggaattagc 26640 tgctatggct aaagacttag gtatcaaagg agctaagaaa aaagataaag atgagttaat 26700 cgctttaatc aaagaagctc aaggtgaaga agaagacgaa gaggaagaag aagaggatga 26760 aactcctgac tactctgaaa tgactaagaa agacttaatt gctcttgcta aagaaagagg 26820 aataaaagtt aataagaaaa tgaaaccagc tgagataatt gaattattag aagctgatga 26880 tgaagaataa ttctcatcaa ataataaggg gagcaaactt gctcctcaaa ttttttactt 26940 attttagaaa cagatgttag agggggatgt ataaatggca agaggtggaa attcaactta 27000 tactaaagca gtatattgtt acaacaataa tagggagtat agatccttca gatatgcagc 27060 taaacagtta ggagtatcgg ctgttagtat aatgagagta gttaacggga ctaaaccaca 27120 tataggggga ttagtattcg ctgagataga ggaaggcact agaaaattaa agccaagggg 27180 agaagtagtt ccatacttga aagaattagg ttgggataat atagacttat aatagggggt 27240 ataatatatg gacataaagt tcttgaagga tatattctct aaacaatgtg aaaatgggga 27300 ttacattatc ctagcagcta gaaaaggtaa agaatggaaa gatgtaccaa tcaaatataa 27360 taagaataac attgacaaaa aactaaagga ctttgaacaa cagtataagg gttatgattt 27420 atattggagc ccaatgccct atagtaatcc tcaaagaagg atagttaact tcatagagac 27480 taaatactta atacaagata tagatgagca tactgaccca ttggggatta aacctaaacc 27540 aagttatctg tgggaaagtt ctcctggaaa atatcagggg ctatgggaaa tggataggta 27600 tatagaggct aatcaatatg acgaaataaa tccagcatta gctaaacata taggctgtga 27660 ctcctgcttt gatgttactc atgtatatag aataccagga actattaact ataaatacaa 27720 gaataaacca aaagtaaaaa gacctataca cactaaggag atatataagc ctaaggtgat 27780 cgctaaggct gttaaggctg taagtaaatc taatgatagt gttaaggtca atataggagg 27840 atctgaggcc tcacaatctg aaagaaagat atatgctaaa tataatatac caaagaaggt 27900 tagagactta ctggctttag atgacattac ttctttagat agaagttcta ctatatggta 27960 tattgagaat aaattacatg aaataggact agagcctaat gagattatat tattagttaa 28020 gggctcagct tttaataaat ataagggaag aaaagatgaa gaaacaaggt taagaaaaga 28080 attggataaa atcataggag gagaaataga ggctgatatt gaaaaggctg aaagtactaa 28140 actgagaata gatagttatc aggatgttat gggtaataat ggtgccttcc caggttggtt 28200 agtacaaggt ttctggggta gaagatctca tggaattgtg gctggacaac caaaggtatt 28260 taaatccaca tttacacagg acttagctat atcagttgct agtggaagac ccttcctagg 28320 tcaatatcct gttctagaac caggcccagt aattgtagtt caaaatgaga atgctgactg 28380 gattatgagg gatagaactg aaaagataat tagccacaga ggagtagttg gtaatgtgga 28440 tataaagggt aagagaagac ttaaagttag gtttgctcca gatcttccta tcacttttat 28500 taatcaacag ggatttatgt tagatgaaga atcccataga aaacagatag aagaattaat 28560 tgatgagata aaacctgtac tagtaatatt cgacccatta tatcttatgt ttagtggaga 28620 tcttaataat gcagctgatc ttaatcctgt actacaatgg tgtcttaaac ttaagaatga 28680 gaagcataca ggagttatgt taatacacca ctataataaa ggtggaaatg ccactcaaac 28740 cagaggtggt caaaagatgg ctggttcatt catattacat ggttgggtag aatcagcatt 28800 atatttaaaa agacctgatg acttagaagg tgacgatgag gagattgaag tagatataga 28860 taaccttgat aaacaaagcc atttaccaag taaaatcatt atggatagag agttccgtct 28920 tgcaggacaa ttccctcaaa ttgaattgaa tttatcaatg ggagaatttg gagatcccta 28980 ttatcatgta gaagtagcaa tacccggaaa agaagtaatt gtgaaacctg aggacaaagc 29040 caaagttata gaggctgtaa aatcaggagc tcataccaag gaggagatag tgtcaatatc 29100 aggattaaat tcacagaagg ttaatctagt tctagatact ttaaaagata ctattgtata 29160 ttctccggat aaaggttata atataagtaa gaaactaaat attgggagga aaaaggcatg 29220 ataataaagt gtaagaggcc agcaggtcat aatcatataa gggcctttgt agtagtaatt 29280 attgctagag gtaagaagaa taaaatcact tatcattcag gattgaaata tttctatacc 29340 tataaatcag ctaaattatt tatagacaaa gttatggaag aatgtccctg ggctgaattt 29400 tattgggtgg atgtccatga agcccataag atccctgaag gcgaagagat acctaagaag 29460 aaaatgtggt gtccatattg tcaaactatt caagaattta agagaagcca aggaggttac 29520 aagaattgcc ctatctgtgg tataagtgac caagactttt atgtaaaatg tatgaatata 29580 agatataggg aggctaaggc taatgcgaag aagaaacttg aaggaagtaa tactaatcct 29640 agggatatca ttgtcaatgg ggataatgct aactcagggg gcaaaactaa tagaaagtca 29700 tcaccaaaga aaaagtcaag aaaagttagt agaaaagctt cataatgctt tagactataa 29760 tgttattgag acttctccat ctggactaga tggggaggat cttattatca aactaaacct 29820 taatagtcct aaagacctta cccctaacaa cttatctaag ttagctaatg aggctatggt 29880 caataactta ggagctcaga attatactat acttgtttat gatagtaata gaccagaaaa 29940 tcttctggct gttatagata tacctaaaaa ttctaaaata acctttgaca taataaatta 30000 attatggtaa tataaaaatg tagaaggagg agaatttaat ggtcaataaa aagtattaca 30060 tcttgaaaga ccttaatgat gacaaacccc aactatggaa gggaagttta accactgcta 30120 ctaagatagc aggagcatta ggagttagtg tgataaaact aaataggtat ttagtaagaa 30180 agggatttgc cagaaggtac aatgagcata cacttgagat aatagaccca atccttgcta 30240 aagaacttgg ttattatgta actccaagta agtcccttat aaatccttta tttgaatata 30300 atgataaagg agtacaatat atactaaact taatagtaga agatctaaag aatggaggag 30360 agctttaatg attatcattt taggaatgga taactcaggt aagaccacaa cagctaagaa 30420 cctaactaaa cacagaggag gagaatatat ccaatcaatg ggacctggtt cttatgaaga 30480 acaaagagaa tgggtattaa ctcaaattgt gagaaaaggt gaaagggaag ctatacatga 30540 tagatttact tgctttgaag aaatggtgta tggacctatc atcagagata gtagtaattt 30600 caaccttgac agtaaggagc taaagatctt aaaacatcta tgtaagccaa ctattgtata 30660 tgctagacca cctagggaag tgatcttcaa ttttggtgat agagaacaga tgccaggagt 30720 aattgaaaga gctgaacatc tactggctag atatgatgaa ctgatatgga agttattctg 30780 tgatggatgg aatgtactgg tatatgatta tactacttcc aatgtggaga agctatccca 30840 gttaatagat gactcaagtg ctaaagaagc tataaaccaa tttataaata tatcaagata 30900 agaggagaga ttgttatgaa tataaaccat gcagtagaag aaaaaataga aggagataga 30960 ttacaagcta tctttaatag acaaaaggag ttaatggaga aatatcatca tatagaagct 31020 agatcaggat tatgccaaac tgaagactgt ccagttaact taaatgataa aagaggtcaa 31080 gctagactta aagattttgc ttggagaatg actgaagaag taggagaagc attggatgct 31140 tataatcatg aagaccatta ccaagaagaa ttaattgatg gattacactt cttaactgaa 31200 tttacaattc tagctggtaa ggattataat actatagata ataatgctat attagttgat 31260 agcctagaga acttatatca taaggctact acatcaccag aatttcctga aatgttagta 31320 gaagaagctg taactgacct ggtaagagaa atgggtatgt gctgtaactg ccttaagaat 31380 aaaccttgga aacaaacttc aatgctaaca gatgtaaatg cttttaatca aagattattc 31440 aatgtatggg tatgttacat taaattatta gctgtatctg gcttagaggt agatgacata 31500 gtaaatatat accttaagaa atcacaggta aataaattcc gccaaagatc taattactaa 31560 aataaatact taggagaagg taatatgcta ataagagact ataatgattt tgatgactta 31620 ttcttaaacc ttaataggga aatgattacc aatccagaag aaactatgat gtatactcag 31680 aacatacagg gctttcagga ggacttagtt ctctcctgta agtcccataa atgtacttta 31740 aatctagggg actttggata taaagaaggt aagtggggac acctattaag atcatacatt 31800 gattatccac aattaattga atttagagaa aagcttacca agataagtgg tatgagctat 31860 acttattatt tcaacaggaa aaaagctact aatggttctt gcttgatagc tgcagtagta 31920 actagaccaa aaagaaaagg accttggaaa cacttaaaaa ttatgtatag agtatgtgaa 31980 ttacaaaaga aattcgcagc tgatctagta ttaataaaca ggttcattga agaactacct 32040 caagaagtat gtgagataga taatattact tttcatatgt ctcaagctta tttgtcagga 32100 atgtttataa atggatattt caattatttt aaggtaccaa gaaagagtat tgctaatagc 32160 aaacatcctt ggcataaatc cttgaatagt aactataaca ggttctttaa atcagaggac 32220 cagatacact cttataaagc tctccagaag atgcagttac tacattttgg tctggagaaa 32280 tttctaaaga tagatatcaa taaattatct attgacaagt actttaataa gtagtataat 32340 taacttaaca aaattaaata aatggaggaa ttaaactatg agaatttata ttaatgctca 32400 agaagcattt gaagaagtaa aaagagattt atgtgaaatg gggattgagg taagacccaa 32460 aactatgcaa gataaagtta tagaaggtaa tccagattat ttcacaaagg agttacaaaa 32520 ctatagttac acaattctag aaagtaaacc tgaagaagtt ccaggtgtat ctcaaccttg 32580 ggcagatgct gaatttagag aaaggatcta cgatccacaa ggtgtcatca atcaatactc 32640 tcttgaagaa agagaagaat tatttggtat acatccacat catactaggg aggctttcat 32700 aaatcccggt aaagcttatc aattaagacc tgaggtatgg aatgaatatc taagagatgg 32760 aaaatttggg tattcttaca atgaaagaat ttggcaatac agacaaattg aggatatcat 32820 caatagaatt aaagaagatc caggctcaag acaattatgg ttatctctgt ggaatccagc 32880 tattgatcca ttcaatatag gaggagtaac tagagtacca tgttcattag gatataactt 32940 ccaagtaaga gaaggtaagc taaatatcca ttatgttatg agaagttctg attttgctac 33000 tcactttgct aatgatgttt atcttgctat gaaactatta cattgggtag ctgaacaaac 33060 tggctatgaa ccaggaagtt tctctcatac aattttctct cttcatgttt acaacaaaga 33120 tattaagggg gtattctaat aaatgagtta catgagaaaa gaaagatata aacattctga 33180 tcttaataat aaggttaaca agaaggaaac cctaaagcaa tttattagga atactgaaaa 33240 ggaatttgat ttagaaccag ctaaccttgg ggacatgact aggaatgaac ttaataacta 33300 tataaattat atggatgaac tgtggagtaa gtaatatgta taattatagt gatgataaca 33360 gacctaagaa caataacaat ggctgtcttg gttgtttaat tataatctta gcagctatag 33420 gattatgggt aataattttt gatattgcca atataatata tcatatgata ttctaaattt 33480 aaagggggct atcctaatga aaaatataat ttgtcctatg tgtaaaaact cagtaacatt 33540 aaaaagaaaa tatggagcta tgttttggat catgattttc ttaactggag gcctatgggt 33600 agtaaccata cccttcaaaa aacataaggt ctgtccagta tgtaactcaa tcataaaata 33660 aagataaggg cctttagggg tcctttctat ttaggaggta atattttaaa tgagatgtaa 33720 caactgtaac ctatatactc actcagctcc ctcatgtata gaaggaactt gtgtaggaaa 33780 gaaaaagaag ccaagaataa tggtcataaa tagtttagct aatgataggg atgaggccaa 33840 tagaatagct actcctgata aatcattact tgataaaatg gaaggtctag acttttatta 33900 taccaatgct attaagtgta gaactcctaa gggtactaaa atcaaagtat cagagattaa 33960 gaaatgccaa gaacatttac ttaaggaaat tgaaaaatat aaacccgaat atgttatgat 34020 cttaggatct caagcattaa agatgctaag taatgaaggt ataacttcaa tatgtggagt 34080 acctaagaag catgagaaat atggctttaa gtttattgcc agctattcac ccggtgtagt 34140 tgcatatgac ccaactaaag cacaatttgt agatcaggcc tttaataact ttaaagccat 34200 ggtaaaaggt aaagagcatg aattacctga tcttaacata aaacttatta ctagtatgaa 34260 agaactaaac caggctttca aatatttaag ggatgagggt tataatagag tatcatatga 34320 tatagaaact agaggcttag ataggtttaa taataacatt actctatttg gttttggtaa 34380 tacccaagta cagtatatac tgcctttaga agtcaaatat agcccattaa ggggtaagcc 34440 catagcacaa agaagattag ctaaatcctt gattaaaaga cttaattctg agatgaagga 34500 aagaatagcc cagaatggta agtttgatga taatttctta aaggagaaat atggtattaa 34560 gccaatcata acctttgata ctttactagc ctcacattgt ttagatgaga atactcctaa 34620 tggtcttaag gagaatgctt tattacattg taatgctaaa gactgggata taaataagaa 34680 attaaagact ggaaatgtgg agactaaatc agactttgag gattatgtta ggtatctggg 34740 gtatgatata tactatacat ttgctctata taaaatattt aataaaagac ttaaaaggga 34800 tgagagctta tataaactat tccaccactt atacatccca gctagtaaag cttatgagga 34860 tgttcagttc aagggtatat atgtaaatca ggagaaattc aaagaggttg aaaaatactt 34920 aagatctgaa ctagataaga ttgagactgg acttaagaag tatactaatg gccaggatat 34980 taactggagc tcacctaaac aggttggaga atttttatat gatacacttg gtcttcctgt 35040 gattgaggtt actgactctg gagcaccagc tactggagaa agtgtattat taagactaag 35100 agataaacat ccagcagtag aactactatt acagcatagg ggagttcata tacaaatttc 35160 ccactttata gatggttggc taaataggat gcacaatcat agattatatc caaactttaa 35220 acttcatgga actgtaacag gaagaacctc aagtaataat cctaatctac agcaagttcc 35280 tagagataag aaaatcagga gtttattagg accatctcct ggaagagtat tcattgaagc 35340 cgatctatcc caggccgaac ttagaatagc tgctatgatg gccgatgagg ataatatgaa 35400 gtttatttac cagactggtg gagatataca tgactccaca tataatatta tatctgggga 35460 agatatcaat gatgagaaag atccagcagt taagaaggag aaaaggaaaa aggctaaggc 35520 tgtaaacttt ggtttcttat atggtatgca atggaaaaaa ttcaaggatt atggaagaga 35580 caactatggt cttaaattaa cagatgagga agccaaaaca tatagaagga acttctttaa 35640 taaataccct aaactattaa catggcatga taaacaaaga aaaattgtta aagccaatgg 35700 tgaagtaaga tctctaatag gaagaattag aagattaccc gatatatatt catctgatag 35760 atctaaagct gctgaagccg aaagacaatg tattaactca ccagttcaag gttttggttc 35820 agatatcact ttattaggcc tatgtgagat tacaggctat gctaaatatg ttaatcctga 35880 atatgtatta gataagtcta agtttgatgt attaggctca gtacatgact caatattatt 35940 tgaagtagat aaagactatg tggaagaatt agcttggaaa gtaaaatcaa tagttgaaaa 36000 taataaagta ttaaagaaag tatttaaatt taccccaaca gtcccaataa tcatggatat 36060 atcagttggt tattcttggg gaggatgtgt tgaactggat tttaaaggtg attggaaaag 36120 ccagataaga aaagtgttga cagatgaata attatctgat aatataaata ttgtaatgaa 36180 aaggaggtat aaggatgtta aaaataagta attccagaat taacaaattc ttgtcttgtc 36240 cttatgccca ttatgttaaa tactatgaag gtctggtacc taaaagaagt ggagctgcct 36300 tacaaagggg ctctgctatc caccaggcta tagaagacta ccataatggg aagagttgga 36360 aaaaatctgt tgataaattt tccaaagagt tttacaaaaa tacatttaaa gaagagatcc 36420 ttgaatttgg agatattcca aaaatggttt attccttatg tgataactat ttccactatt 36480 atgatgaaaa agaagataat gtaacctatg tggaaaatga acatcacttc gaattaaaac 36540 tatgtaaggg tgtaactcta gaaggctata ttgatagtgt cttagatgtg gatggaaaga 36600 tatgggctaa ggaaactaaa acctacaaaa agatgcctga tagaaatttc ctgatcttca 36660 atagacaatc tgctatatat acctgggctc ttctacatga atacccaaaa gtaagtggta 36720 ctatatggga tataatatta gctcagcaac caggtagacc agaattaact caaaaagggg 36780 tattatctca aaagaggatt aaatccacac ccctagagtt agaaagagga ataagagaat 36840 taggattaga tcctaaagat tatgagtctt atattaattc tgctagatgg gaagacttct 36900 ttgtaagaca cccaataata ttatcaaaga atatacttaa cagtgtaatg attgatacta 36960 ttgagatagc taaacttatt agagatgagg gccacaaaag aaaggaaaag aaccttggaa 37020 aaggttgctc tttctgtgaa tataaatctt tatgccaagc tgaactttta aatcttgata 37080 aagaatttat tattaaggct gactacaaac aaagggagga aagtgacaat ggcaaaaaag 37140 caaaaatcaa aatcaaatag ttttgaggac agattagtgg atctatatga tatagatgag 37200 cccacaatac taacacttta tggaagatct ggttcaggta aaactactat ctcaggaaca 37260 ctacccaaac caatattctt tattgatgta aaggacaaag gtactctatc agctagaaac 37320 aagcttagag ttaaaagagg agatatacaa gtatttagtc taaagagttt tgatgacata 37380 tacgaggctt atgattacct atcagaaaac actgataaat ttaaaacagt agttatagac 37440 catttaactg ctttacaaga attaggtaat gaaaaggtca aagctgaaga aggtaaggac 37500 cagatgagcc aaagaatgtt tggaaatgtg gctaattata tgaaagaggt tataaacctt 37560 tataaagaat taaatgagga aggtatacta ccatgcttta tagtacaaga taggttagaa 37620 tctggtgatg gtgaaggaga agaccaatta atgcctgagg taggaccagg attaatgcca 37680 tctgtatcta aatatttatg tgctgtatca agagtaatag gtcatactta tttatatgaa 37740 cactcagaaa aagagggtat gaaggttaag aaagaaatcc agtatagact aagactagga 37800 cctaaccctt attatattac taaatttact agacctcaag gatctgaatg tccagcttat 37860 ctggtacatg atttaaaatc accaacaact atctgggagg atattgaaac tattctggct 37920 ggtgaatgga ataataagcc agctaaatct ggtaaaaaaa ccagtaagaa atctggtaaa 37980 aagaaaaaat aaaattttct aaaaatacct ttgacaacca attaaaaatc tgataatata 38040 aacttgtaaa caaagaggta caatatcttg acaaatattt atctcataat gatattttaa 38100 aatttaagga ggacaataac atggctaaaa agactactaa gagaggtaac aaaaacaaag 38160 gaggattaaa gattgatctt tcaaacgttg aaacttcagt tactatccca gaaggaaatt 38220 acattgtgga agtagaagat gtagaggtta aggtttctga aaatagtgga agcaattatt 38280 tatcatttac ttttgtaata gcagaaggaa agatgaaagg acaaaagtta taccacattt 38340 gctcacttca accacaagct ttatttaact taaaaggtgt gttagttgct ttaggatttg 38400 atatccctga tgaggagttc gaattagata cagaagctct agttggttta caatgtgggg 38460 tagaagtatc acatgaaata tatgagggta agaagaaatc aagaataact gattttataa 38520 accttgacga agctgactct gatgatgacg aagatgagga tgatgactca gatgatgatg 38580 aagaagatga tgaagacgat gagtctgaag ttgatcttga agaattagac aaggatgagc 38640 taaaagaatt agctaaggct ttaaaaatcc cagctaagaa aatcaagaag gctaaaactg 38700 aagaagatct aattgatcta attgaagaag aagctgacga agaagaaata gctgaacaat 38760 ataatgacct attcggagac tctgatgaag atgacgaaga agatgaggat gaagaagagg 38820 aagatgaaga agaaaatgac tatgagtcaa tgactttaaa agaacttaaa gctgaagcta 38880 aggacagagg cttaaaggtt aaaaaaggaa tgtctaagga tgacatcata gaaatgctag 38940 aagaagatga tgaagaataa aatttaatta ttaaaatatg agggccttta aggtcctcct 39000 ttatttaccc ttggaggcta ctattatgct tgaaagagat gtggttaaat ccataatgaa 39060 tatgcttaaa aaagaatacc caggtttttg gtttaaaact catgggggac catttcaaat 39120 agctggctta cctgatatac taggttgcca caaaggtaag tttattggta ttgaagttaa 39180 acttcctgga aaagaaaaga acctaactca aaaacaaaaa gacattataa ataaaataaa 39240 tctagcagga ggaatagctt ttatggctac ctcagctgaa tatacaagga ggagattaca 39300 tgaaaaattt agaaagacac caacaattcc taggagaact aggagatctg tatgaattaa 39360 agaataatct atatggggat aatttccaca agacttatct tgaatatgga aaccctgttc 39420 tatgtataag acttgaagat aagctaggaa gagctaaaag tttattacta ggagatcaag 39480 atgacttccc ttcatatgct gctcaaaaag aatctgtggt tgatacttta ctagacctag 39540 ctaactatgc cattatggct gctatggaac taactagtga tgataactca gaaatacatg 39600 atcttagtaa agaagaatat gatgaagaag acctagatga taatgacgat gatgacttag 39660 atgatgatga caatgtttac gacgaagaag aattagattt tgatagtatg aataaagaat 39720 ccttaaaaca atatctaaaa gataatgggg ttaaattcca tagtaaggcc tcaagagatg 39780 aacttgtaaa actggctaag gaggtataag gaggaggctt taatgcctct tcttttttag 39840 tatgaagaga aaattattta aacatcagaa agaagcatta caactatttt taaataaaga 39900 aaagtttgcc ctatttatgg acatgggtac gggtaagacc ttagtcccta ttgtggccct 39960 tgagaaactt gaaggtctag atactgtact aatattctca cctaaatcta ttgtatttaa 40020 ctgggagtct gagatccata aatttactaa acttaaggaa tataggatat ttaaattaca 40080 gggtaataag accaaggtta tggaaaccta tagagctata aaatcctact caggattaaa 40140 gattattatt gccaattttg agaaggctag gttgatggat aaatacctta tgaacttaaa 40200 gccacagttt attgttgttg acgaatccca taaggtaaag aatagaaatg cccagatatc 40260 taaggctcta tataaaattg ctactaaatg taaatatagg ttgataatga cagggactcc 40320 cactcctaat ggttatgaag atttatttat gcaatataaa attatgaact caaatattct 40380 aggagttaat tggaaacagt ttgaagatga ctttataatc aaaggaggtt atatgaacta 40440 tgaaattgtg gggtataaga atgaggaaat attaaagaac cttatgcacc agaattgcta 40500 tatagtaaga atagaagatt gtattgattt accagaacaa cttcctgatc tgtatttaac 40560 ctgtgaatta aatagtaaag ccagaaaggc ctataatgac cttagaaagg aaatgatagc 40620 acaactagat atagtacagg aaaacattcc tagaaagcaa ttaaaggcct tattaaggtc 40680 taatggtata ccctatgaga gtaatgagcc ctatgaggat ttattcttaa gggctaatat 40740 gtttatcaac caattaacag ctgatcttac tattacccaa tatttgaggc tacagcagat 40800 ctcaggagga tttatcacaa acaatgtagg aaataatatt aatattgata aaggcaaatt 40860 aggcttgtta caggactatc tagaaggata taaaaagcct gttgttgtaa tatgtaattt 40920 tcttgaggaa ataaaactta tacatgatac ttttaaaaag acccacagag tagaatgctt 40980 aacaggatct actaagaata gagctgagat caataaggat tttcaggagg gcaagattga 41040 tatattaata ctacaaataa gctcaggtag tgttggtcta aacctcttca gggcctcaag 41100 gttaatattc tatagttgga actataaata tgatgattat gtgcaagcta ttgccagaat 41160 caaaaggaat ggtcaaaagg agccttggca aataatacac ttaataacgg agaatactat 41220 tgatgagaaa atattaaaat caatacagct taaaagggat agagcagaaa aactgttgac 41280 tattgataag taatgtggta atatagaatt gaggtgataa gtaatgagaa aagaacaacc 41340 tagaataagt aatcatactg aaatagctaa ggctttaatt gaggctggta aaactattaa 41400 agctctaacc aagattaaag tcaaggagga aaagaaaaaa caaaaaagac ttgaaaggtt 41460 aagactccta aatgaggaaa agaagaagga gagagaatta atgaaagaat ttaatcccga 41520 tgagcctaag aagccaagaa agaaaaagga caaacctata aagaaggttg atctgaataa 41580 agttgaggct aagggaactt accctacacc ttctggaggt aatgcaccta cgggaacagt 41640 tgacttaaaa attttatgtg agtcattagg attagatcca agtaaagcca gggccaagct 41700 aagaaagcaa ggtgtaaaca aaccctataa atggtcagga tctgaacttg aggatattaa 41760 gaaaatgtta aaataagggg gaggtttaaa aacctcttct ttttcgttga caatatccac 41820 agtatatggt aatataaata ttgtaatcaa acaaaaaaag gagagaactg aatatgaaag 41880 atcttgaaaa acttacaagg gaagaattga ttgaacttgt aaaggagtta tctattgatt 41940 ggacaggagc ctataataga aactataaga ttgaccttga tgagtatgag attgtatata 42000 ttgatcttaa tgatctaaaa gagttcaatg ataaattagg tcatctagaa ggagatgtgt 42060 atatacaata cacggtaaat cttattaagg cccatttaca tcctgagaag gatatattga 42120 ttagaggggg tggtgatgag tttgtagtta tcagtgatat agcttataat ctgtgcaata 42180 ccttgaatat ataccctgag ctatcatgtg gctatggtaa aggtaaaact attgaagaag 42240 ctatagtaca ggccgactca atgatgtata agaataaaaa atctaagaag ttaagatact 42300 caaaggagga ttagttatta tgaggttatt atggttaaaa gaatatttgg atatatgcaa 42360 tatcttgggt attgagccca caatggaatc ttgtgctagg tggggaaaga ataaaaaact 42420 atcagggttt tcattaaccc cagtgggagc aactaaatag ttgcttcttt ttaaagcgat 42480 ccgataccta gcaactttca tgccaaaaag aaattcggga ttttctttga catagactcc 42540 agagtctggt ataataatct tgtaaacaaa attaattcaa aggagttgtt aattatgaat 42600 aacaaaaaat ttcaagaaac tttagaacaa ttaaaggagg aactagaaat acaaggggta 42660 gaatttaatg atgagaatga cttaatagct gctgttgaat acatcataga atatgattac 42720 cacccagaac aatatgtgga agatacttta tgtaactacc ctgaaatgtt caaggatcta 42780 taaaactaag gaggtgtaaa aacctccttt tttatttttc taaaaatctg gatttaatcg 42840 ttgacaggat cgggactatc tagtataata atattgtaat caaaattaat tgaaggagat 42900 gttaactatg gaactaacaa gatcagaaaa acttaatgta ataaaaggaa ttgctcaaaa 42960 ggctatggat aataaaatct atccacaatt tagaaaagaa ctagataaac aggtaaaatc 43020 ctttggacta agcaacaaag ttagggaaag tgaattagga gactaccttt cttgctgtat 43080 ggttgcctat gaagaggtta tactaaaaat gaaaaaagcc aattaatatg ggtggccaaa 43140 aggccatcta tttttttcga aaaaatctcc agaatctcgt tgacatagtc tgggccctct 43200 ggtataataa tattgtaatc aatattaatt aattcttagg aggaatgaaa aatgactaaa 43260 ttagaaatgt taaatgagat agaaaaaata aataaggtgg tttttgaaaa gaacttccaa 43320 aaacaattct tggataaggt gatagaacta ctacaacaaa tgggagtaac taaatattat 43380 gtatgtaaac atcataaaaa agctgagatt gaaaaacatc ttgaggcttg catctgtgca 43440 atatatgata taggaagaag ggatgatcta ggatggtaaa ccccatcctt tttcttcgaa 43500 gtttttcatt gacagatcca gagttctctc ttataattaa atcataaatt aactattgga 43560 ggtaaacaaa atgagagata tgatagaaaa tcaattagct gaatatgagg taaaggagtt 43620 atacaatgag gccacaatga tcttaggaaa agcatttggt gtaagtgctg ttgatcttta 43680 tatagaatct gatgtggatg ctaactacta tggtctatgc catagatcag gtaataaatt 43740 tactgggatt acaattaacc ttttcccttt caggtttgca caggaaggag aaaaagctta 43800 tgataaaatc aaaaaatttg gctgggatat taaggactgt gttcttgaaa ctatatgcca 43860 tgaattggct cacttaactt attggtcaca tagtccttta cataaaaaat taactagtct 43920 ttattacaac aaagtgcaac aggctagaaa aggtgaaaac tcagctgtag cacaaactag 43980 aagtgatata tacactttaa aagatttatg tgaattaata gaactagatc caagaaaggc 44040 tagaagtata ttaagaaaga ataatattga gaaacctggt aaacagtggg agtgggagca 44100 aggtatgcct aaagatatat atgatctatt aatcaactta aaggttaggg gaagaaggta 44160 aacttcttct cttttttcgt tgacatatct cgagagtgct ggtataatta tattaacaaa 44220 taacttaggg ggtaaatcac atgatagata tatattatag tattcaagta gaagctgaaa 44280 acttctttgg ttgtcaaaaa gaagatggaa gctgggtagc aacaggagca tttagtatac 44340 ctgttaatag cataactttt gaagaggctg atcaattatc caatgaggcc atagatgggt 44400 ggttaaagga gtatgaggtt actaaggtaa taagtaggag atcacataca caggttaaat 44460 tagattggta taatagttat atcaaggatg atccattaaa gggtgatata attaatatgg 44520 tgtaccctga tctttcagat aaagctaaaa tcaaatatgg ctttggtaag ataggggcta 44580 gcactatgtc aaaggttgct aagaagggtt tacttaaaac ttgccctaga tgtggaggca 44640 ctggccattg ctcaagaacc tcagatggta acactacttg ctttaaatgt aagggcttta 44700 aatatgtgat accaactaag atctcaaaga aattttataa atctgtggag aaaacctttg 44760 acatctctgg caataactct tataataaac ttgtaaacaa aaacaaagag gagatgttaa 44820 atatgaactt aactgcaatg gaaacaaaga tattaaatgc tatgagaaag aatgaatttg 44880 atgatggact agatgttgac tgtgtatggg tattctcagt aatagaaaac tcaggtatag 44940 aaggaactaa ggctagaggt gtgatctcat cacttgttaa aaaaggttta gtatttgctg 45000 atggagaggt aataggttac acagaagaag gaagaaaggt ctttgataat gctgatggag 45060 aagaatgtaa ctggggaggt ccaaaattat taaaagaaat ccctgacaaa ccagaggaaa 45120 tctcttataa tgaaaatgta gataaaacaa ataagaaaga agaggtaaat gatatgaaag 45180 atttaaatac tatgaaagct gttgaaatta aagaattagc aaaggaatta aaagttaaaa 45240 actggtggac tatgaaaaag gctgatctaa tagctgctat ccaacaaatc caacaaccac 45300 aagaagaaaa agttgaagag gtacaacaac cagctgaacc tgaagaaaag gctgaacaaa 45360 ctaaaattac tcttgatcta acagatgtta aggaacctga agaagaaaag gttgaaacta 45420 agaaaaaacc aaaaactaaa gaaggtgtat ttacactaaa gatgatactt gaagaattaa 45480 atatgaatgg taaaaaggca agaaggatct taagaaacaa agaggttgta aaaccaggaa 45540 agcaatggga atgggataat gaagaagaat ttaaaaaggt taaggaccta ctttctaaat 45600 aaagtaggcc caacctctat cccctattga tttacaggag gatctgattt tctcttatcc 45660 attaactgct tccatacttg attaccaaag gaagctacag ctgcacatat taaaccctgt 45720 ataaagccat tcaaaaaggt cttggctgta aaacctaatt ctaattgaat tgccatatat 45780 aagattgata atgatatact gaatatcaaa agtattaatg gtatagacca atctggtata 45840 taaggcttag ccttgataaa cagacctaaa cagtaacatg atacaatgat tattaaaagc 45900 tgtggatcaa tgtaattgaa tattaagttt actaaatttt cttccatgat aaataccccc 45960 taaattatct ctacatattt tgaacttaca taaccttgct tcttaccgtg gctagtatta 46020 tattctatat gataccaacc attcttactt cccaatatag taactctctc attactaaat 46080 actgagccta ttatattacc attcacatca tctcttacat taagagaagt gttaacttta 46140 actattcctt gtttaacatc ctcatagaat ttctggcttt gctcaccctc gtagcgaacg 46200 tatccatcag atggagtacc atcctttcta taaaatgtta ttcttaacca gccattagtt 46260 ctatacattg ggctagcctt ttgaccaggc tgtagttctt cattatgatc tttgatgtta 46320 acgtcttcag ggttccacca cacataagtt actccattgt cattttgata tttcatgtgg 46380 tagtcaaaac ttaatctgct gtaatgtttt atgtcaatat aagcatggta cttcttattc 46440 tttccaggat atacaacttc tatgaaattt ctagaaggat atattccgag aacaaataaa 46500 ttatctaggc tatcaataaa tctaccaggg actggcttac aatcctcatc tagaacttct 46560 attgaacctt cccccactaa agtagcatta gttcttgtct cattagactc atagaatcct 46620 ttggggttat tgattactgg tgagcttgag ctctctcctg aatttactct ttctaggaat 46680 gtattccagt aaccattggc tatcattctt ctaggacaat tttttctact ggcatcatag 46740 tgtcttacta ctttacaatt agaatagtag ccattcttta ggtatctaac tagctctaca 46800 gcattatcaa ctgccttatt gtagtcagag tcaggattaa cacatatttc tatagatatt 46860 gtatttctat tattgatacc gtatctatta tgaccatctc cacaattcca agtggcgtgt 46920 ttgtgttcta cagcttgata tacccctgta tcatcgacat aataatggac actggcttta 46980 cctatatttc catttgcttg agccttacag tgggtttcgg ctccagcacc ccaagaggta 47040 ttatcagttt cgtggataat tatataccca ggattatttg catttagagt aacattcgta 47100 gtacttaatc ttttattgat tttcataata aacatctcct ttatatatta tagtgtttta 47160 ttgggcctga gaggctcgct acagcatttt aaccacctcc ttaatatatt tccttatata 47220 aaacctaaca ggccttaaat ggcctgctag gcttataagt taacctttgt tactaaatag 47280 gtgatctttt atagtatcta catcctcttt gatatcctca actacattga atttatcaac 47340 tagcttatct atcacttgat ttaatttatt ctccctttct ctagcttctt gtctagtgtc 47400 atataatagc catacaaata gactacaaaa gataccttgg ctaagaactt gagttagtat 47460 ttctttttcc atagattaca ccctttcctt aaagtcttca ccacatattc ttttatagtc 47520 ctctggtgta atttctcctt ccggattaga agagcatttt accgcctgat gtaatttgtc 47580 cttacctatt gctccaattc tataagccat ttcccagaaa ttcataatcc ctacctcctt 47640 atttattcat cattttaatc tttatatcag ctagttcttg tgttaatact ttcattatgg 47700 ccttagtttg cattagctct aatttagtat cagcaagagc ctgggcttga taaccaatta 47760 atttattaat atccagagga ttaggatcta tagcctcata ggaagtaaat aggtccttat 47820 ctttgatact gtatagatct gatctctttt tactaatatc aaatttggtt gggccaccct 47880 ttatgtggtc aaataaactt acagtcattt gtatggctga aagattgtct agatcaatta 47940 cctcagtgtt atccacaaag gctaaatgcc cttgtgaatt atgaggtata tggagacata 48000 taatatcttc tatattattt aatatttcac tatcctctct atagtataga ggttcaggcc 48060 tattaattag gtctaatatc ttagtaactt cttcatggtc tttatctata aatgatttta 48120 catcttctga gtcttctgcc tgatttatca gcatttcttt ttcatcatca tagaatataa 48180 ggtctatgat tttattagtt tccacagaat aattaaatcc tactattctc atgttttatc 48240 aactccttta ctcagtggct aaataggtta gtattatttg agttggctta ccagctacca 48300 tttgataaca tccaccattc aaatatgagt tattccaata gtcaatagta caataacctg 48360 aggtattatt agaagcgtca ttatagttat gtgatactag agatataggt aatacccaat 48420 tccaagcctt aggaaaatgt atagtataac ttacacctcc acctgagtta gcataacccg 48480 tcttaactat ttgacggact aatcttagtc ctcccccaag atgacatact ctaacgttac 48540 cattgtcatt atcccaataa tctcctttag caatagatct attatttaca acgaagtcag 48600 taacattctc agtatatagc tttttgttct cttgtttgaa atacaatctt ccatcttcag 48660 ctccaccata ccagtcattt attcttaggt attttctagc ccataggttt tcagctgata 48720 gagccttatc aacctctaga gatccgtctc tagtagttat cctcatatca aaatctttct 48780 tactaccctt taagtggaaa tctaatatag gacctagttc cataactcca tcatgtgata 48840 taaaagggat acctgcatag tcattactag ctccagctaa gtcccattct tttagtttat 48900 tactgttagc agctgtagcg gttttaccta aataagcact atcatggtta tggtctgagg 48960 ctgcagctcc tatatcggat ggcttaggtt tattgaggtt actataagct atacaccatt 49020 cggaccatat gcctttaaaa ctacaaaacc tagtatatgt tttgccataa ctatctgtaa 49080 atagttgagt tacctcaccc cccttgggta ataccaatag agttccataa ataccatatg 49140 tgtaaactac aggggagttt ggtaaggtat ctacactaga tactgagtat atcccctctt 49200 ccttacaaag attaaaatct actatatcat cttttctaat agttaaataa actccctcat 49260 gggtatggtt agttggggat gcccccacat ctgctgcagt tggtttatta tcttcatgat 49320 agaccttctt attgttctta ttaacaatat ccagagagtc tatctttaca ggccttccag 49380 cataccctat atggacttta ttatctgcat ctatatagat cacatagtca tcactgcctt 49440 ctttagtcct acagctaaat ccataattgt gggccccaat aaatttctga cccggtctca 49500 tgattagatg gcctgataat tctccacccg tagtaggtaa ggcaccaata tctgctggag 49560 taggcttatt ttgtttacta tatatttcag cccaattcgt ccatccggta ccctcaatgt 49620 ttgtagctgt tctagtaaaa actcttccac catctgcaaa gaacatttga gaagcccagt 49680 gtcctgtatt ccaggataaa acaatcaatc tcccatctgc taggattggg gcatttctat 49740 cgacagaatt tctaactgta gaataaatac ctccctctgt aatggtgttt agatctacac 49800 cctctagtct tttggctgtt ttatcccagg ccccaatatc tgcgggtgtt ggcttagctc 49860 cggagttata atcttttctc caagggaacc aatccgtatt atttacttta tacctccaat 49920 acttattacc attagtatca taatactctt gccatatcca gttattagta ttattatgct 49980 tagtctctgt actaacatat actatcagta taccatattt tgtaccagtt agtggggcat 50040 taggtaactc acctgagatc aggtattgcc cctcagttaa agctgtatta aaatcagtta 50100 tggcgtcctt aggaatggga taagccttta ggtcagcagg ggtaggctta ttagcctcat 50160 cataaacctt ataccactta ctccaagaat tatttcctga tgtgtagttt ctaacatatc 50220 tagttatttt attggttggg tataggttaa taaactcctg ttggaatccc ctctcacctg 50280 tatttctaac cataaaaacc ctattactca tatgggctaa ggttccctcg ggggtatttt 50340 taaagtcacc agttcctgta tcaaagtaga agaaggcatt cgcttgttta aaggaattac 50400 aatctctatc taagggagca ctaaccttaa taagtgcttg atcttgatta gcctttcggt 50460 ctacttgatt ttgtaaactg gtgtctttct caaataatag gtctaatctt tttagcacat 50520 cctcaggggc tagattataa tcaggtacta cattacccct agctaatatg aggtttagta 50580 cctttaatga ggtacttgag gttgcactct gtaccacaaa ttgtattttg gtatcagtag 50640 ctccagatgg aatactaaat ttatgagttt ttaacttgta cccattactc tgtggtgtac 50700 taccttgttt tacaatactc ctatattgtt gacctccatt agtgtaagcc agtttaattt 50760 catagctagt aaaactacct tcaatatctt ctagaaaggc tagtatataa tcactatttg 50820 gttctatagg cagagtttta atctcaagag tttgtggacc tgttgacata ccagaccatt 50880 taaaacctcg tctctgggtt ggagtatctg taatgggtgt gatattacca ggaccagtat 50940 aagactcaga gttgtaccac tcaagcctat taatagtacc aacccttaaa gcatctagcc 51000 tatcctcatt agacttagac ttcttttcta cctcagtcat tttctgttta tgttcggtag 51060 caaagttctc aatgttctca ttgtccttgt taaaatcatt catttttggc ttatctgtta 51120 actcccactt atttaaacct agggtaggag ttttactagt acttggcatt ttgcatacct 51180 cctttattca gttatagcat attcttccca tttttcccag gtaagatcta gactgtccca 51240 cttgctccac atataatcat atctatcgaa catctcccaa gtaatataaa gtaatataat 51300 ttgatatatt aggtgagcag gcattcttcc cctgaatact ctttctagag cctttaggtt 51360 aggtggtacc cctggtaggt cagtaaagct aatcttgatc ttactctctt cagctatgaa 51420 ctctaccttt acctttccac ctgtataggc cttagtaaga tttttgatag atgtactatt 51480 aaactttttc caagcagata gaactactgt aataatagct cttttctctt ggtcagttgg 51540 tgggtaatca aagtatttat ataactcaag atcagtaaaa aatctttcta gaccttcctt 51600 aggagtggtc ttgggatcca catagtcttg taattcctgt cccttagtat 51650

Claims (12)

  1. 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens: CP)에 특이적인 사멸능을 가지고, 수탁번호 KCCM12933P로 기탁된 박테리오파지 CJ_CP_20-15.
  2. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 괴사성 장염인 것인, 조성물.
  4. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 항생제.
  5. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 사료 첨가제.
  6. 청구항 5의 사료 첨가제를 포함하는 사료.
  7. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 음용수 첨가제.
  8. 청구항 7의 음용수 첨가제를 포함하는 음용수.
  9. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 소독제.
  10. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15를 유효성분으로 포함하는 세척제.
  11. 청구항 1의 박테리오파지 CJ_CP_20-15 또는 청구항 2의 조성물을 인간을 제외한 동물에 투여하는 단계를 포함하는, 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환의 예방 또는 치료 방법.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 클로스트리디움 퍼프린젠스에 의한 감염성 질환은 괴사성 장염인 것인, 방법.
KR1020210024236A 2021-02-23 2021-02-23 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 KR102586836B1 (ko)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210024236A KR102586836B1 (ko) 2021-02-23 2021-02-23 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
CN202180094460.3A CN117157392A (zh) 2021-02-23 2021-06-15 具有产气荚膜梭菌特异性杀菌作用的新噬菌体及包含其的抗菌组合物
JP2023551252A JP2024508289A (ja) 2021-02-23 2021-06-15 ウェルシュ菌に対する特異的死滅能を有する新規なバクテリオファージ、およびこれを含む抗菌組成物
EP21928187.0A EP4299726A1 (en) 2021-02-23 2021-06-15 Novel bacteriophage having clostridium perfringens-specific bactericidal effect and antibacterial composition comprising same
PCT/KR2021/007482 WO2022181892A1 (ko) 2021-02-23 2021-06-15 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210024236A KR102586836B1 (ko) 2021-02-23 2021-02-23 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20220120308A true KR20220120308A (ko) 2022-08-30
KR102586836B1 KR102586836B1 (ko) 2023-10-10

Family

ID=83048554

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210024236A KR102586836B1 (ko) 2021-02-23 2021-02-23 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP4299726A1 (ko)
JP (1) JP2024508289A (ko)
KR (1) KR102586836B1 (ko)
CN (1) CN117157392A (ko)
WO (1) WO2022181892A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117586966A (zh) * 2023-11-21 2024-02-23 青岛润达生物科技有限公司 一株耐酸碱产气荚膜梭菌噬菌体rdp-cp-22005及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6942858B1 (en) 1996-04-15 2005-09-13 Nymox Corporation Compositions containing bacteriophages and methods of using bacteriophages to treat infections
KR20160080175A (ko) * 2014-12-29 2016-07-07 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 클로스트리디움 퍼프린젠스 박테리오파지 Ｃｌｏ-ＰＥＰ-1 및 이의 클로스트리디움 퍼프린젠스 증식 억제 용도
KR20180074583A (ko) * 2016-12-23 2018-07-03 주식회사 옵티팜 신규한 클로스트리디움 퍼프린젠스 특이 박테리오파지 cp3 및 이를 포함하는 항균 조성물

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7625739B2 (en) * 2007-08-14 2009-12-01 Intralytix, Inc. Clostridium perfringens bacteriophage and uses thereof
KR101381797B1 (ko) * 2013-02-27 2014-04-07 씨제이제일제당 (주) 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6942858B1 (en) 1996-04-15 2005-09-13 Nymox Corporation Compositions containing bacteriophages and methods of using bacteriophages to treat infections
KR20160080175A (ko) * 2014-12-29 2016-07-07 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 클로스트리디움 퍼프린젠스 박테리오파지 Ｃｌｏ-ＰＥＰ-1 및 이의 클로스트리디움 퍼프린젠스 증식 억제 용도
KR20180074583A (ko) * 2016-12-23 2018-07-03 주식회사 옵티팜 신규한 클로스트리디움 퍼프린젠스 특이 박테리오파지 cp3 및 이를 포함하는 항균 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Daeun Shin. Isolation and characterization of bacteriophages and endolysins targeting Clostridium perfringens, 2019, 서울대학교 대학원 석사학위논문.* *
한국식품영양과학회 학술대회발표집, 2016, P05-11.* *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117586966A (zh) * 2023-11-21 2024-02-23 青岛润达生物科技有限公司 一株耐酸碱产气荚膜梭菌噬菌体rdp-cp-22005及其应用
CN117586966B (zh) * 2023-11-21 2024-04-26 青岛润达生物科技有限公司 一株耐酸碱产气荚膜梭菌噬菌体rdp-cp-22005及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024508289A (ja) 2024-02-26
WO2022181892A1 (ko) 2022-09-01
KR102586836B1 (ko) 2023-10-10
CN117157392A (zh) 2023-12-01
EP4299726A1 (en) 2024-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107109372B (zh) 新型产气荚膜梭菌噬菌体Clo-PEP-1及其用于抑制产气荚膜梭菌增殖的用途
JP6110515B2 (ja) 新規なバクテリオファージ及びこれを含む抗菌組成物
EP2961834B1 (en) Novel bacteriophage and antibacterial composition comprising the same
KR100941891B1 (ko) 살모넬라 엔테리티디스 감염 박테리오파지로부터 선별된살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지
KR20180042748A (ko) 신규한 포도상구균 특이 박테리오파지 sa7 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102586836B1 (ko) 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR101587113B1 (ko) 치주염 유발 장알균(Enterococcus faecalis)을 특이적으로 사멸시키는 신규한 박테리오파지
KR102016922B1 (ko) 신규한 병원성 대장균 특이 박테리오파지 ec10 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR100958139B1 (ko) 엔테로코쿠스 패칼리스 특이적 사멸능을 갖는 신규한박테리오파지
KR101863593B1 (ko) 신규한 살모넬라균 특이 박테리오파지 sp1 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR20180073489A (ko) 신규한 녹농균 특이 박테리오파지 pa4 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102016920B1 (ko) 신규한 클로스트리디움 퍼프린젠스 특이 박테리오파지 cp5 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102037383B1 (ko) 신규한 비브리오균 특이 박테리오파지 vp2 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102586838B1 (ko) 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102016919B1 (ko) 신규한 살모넬라균 특이 박테리오파지 sc1 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR101871338B1 (ko) 신규한 병원성 대장균 특이 박테리오파지 ec14 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102586837B1 (ko) 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR102586839B1 (ko) 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
EP4299725A1 (en) Novel bacteriophage having enterotoxigenic escherichia coli-specific bactericidal effect and antibacterial composition comprising same
KR20230127663A (ko) 살모넬라　사멸능을 갖는 박테리오파지 및 이의 용도
KR20230159560A (ko) 장독소원성 박테로이데스 프라길리스의 증식을 억제하기 위한 조성물 및 방법
KR20190132331A (ko) 신규한 녹농균 특이 박테리오파지 pa4 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR20230127664A (ko) 살모넬라　사멸능을 갖는 박테리오파지 및 이의 용도
KR20240003147A (ko) 신규한 살모넬라 엔테리카 특이 박테리오파지 opt-sal01 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR20180075410A (ko) 신규한 살모넬라균 특이 박테리오파지 sh9 및 이를 포함하는 항균 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant