KR20190132331A - 신규한 녹농균 특이 박테리오파지 pa4 및 이를 포함하는 항균 조성물 - Google Patents

신규한 녹농균 특이 박테리오파지 pa4 및 이를 포함하는 항균 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 특히 카르바페넴(carbapenem)계 항생제 내성 녹농균에 특이적인 사멸능을 갖는 신규 박테리오파지 PA4, 상기 박테리오파지를 포함하는 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제 또는 세척제 및 상기 박테리오파지를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명의 박테리오파지 PA4를 이용한 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법은 기존의 항생제 등의 화학물질에 비해 녹농균, 특히 카르바페넴 내성 녹농균에 대한 특이성이 매우 높고, 상기 박테리오파지 PA4는 녹농균에 감염하여 탁월한 용균 활성을 나타내고 물리화학적 자극에 강하다는 장점을 가지고 있다. 또한 본 발명의 박테리오파지 PA4는 사람, 동물, 식물 등 세균 외의 다른 숙주에는 감염되지 않으므로, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성균의 문제점, 식품 내의 항생제의 잔류 문제, 광범위한 숙주범위의 문제점을 해결할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제, 또는 세척제 분야에서 다양하게 사용될 수 있다.

Description

신규한 녹농균 특이 박테리오파지 PA4 및 이를 포함하는 항균 조성물{Novel Pseudomonas aeruginosa specific bacteriophage PA4 and antibacterial composition comprising the same}
본 발명은 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 특히 카르바페넴(carbapenem)계 항생제 내성 녹농균에 특이적인 사멸능을 갖는 신규 박테리오파지 PA4, 상기 박테리오파지를 포함하는 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제 또는 세척제 및 상기 박테리오파지를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
일반적으로 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)은 그람 음성균이며, 흔한 감염성 병원균으로서, 항생제에 대한 감수성이 낮아 자연적으로 쉽게 항균제 내성을 획득할 수 있다고 알려져 있다. 다양한 항생제에 내성을 가지는 내성균은 치료가 어려우며, 진행성의 질환을 가진 경우 사망률이 높다. 그나마 베타락탐계 항생제에 대하여 상대적으로 낮은 내성률을 가지고 있어 녹농균 치료 시 다양한 베타락탐계 항생제가 사용되고 있다.
다만 최근에 베타락탐계 항생제 중에서도 일부 항생제, 특히 카르바페넴에 내성을 나타내는 녹농균이 발견되고 있는 실정인 바, 임상에서 카르바페넴 내성 녹농균의 사멸의 중요성은 크다고 할 수 있다. 구체적으로 항생제에 내성을 가진 녹농균은 전세계적으로 증가하는 추세이고 종합 병원급에서의 카르바페넴 내성률은 29%(2006년)로 보고된바 있고, 특히 국내에서 2008년 6월부터 2009년 7월 동안 중환자실 병원감염감시 결과 카르바페넴 내성률은 68.9%인 것으로 보고되었는 바, 카르바페넴에 대한 녹농균의 내성률이 점점 증가하고 있음을 알 수 있다. 상기 녹농균에 의하여 피부감염, 각막염, 중이염, 폐렴, 균혈증, 패혈증, 수막염과 뇌종양 등이 유발되고 주요 병원감염 원인으로 흔히 요로감염과 인공호흡기관련 폐렴 등이 발생되고 있다. 또한, 녹농균은 인공호흡기를 사용하는 호흡기계 감염, 화상 감염, 낭포성 섬유증 환자의 폐렴을 유발하며, 인공환기기, 흡입카테터, 고여 있는 오염된 물 등의 감염소에 존재하다가 환자에게 직간접적으로 전파되어 정착하게 되는데 진행성의 질환을 가진 환자의 경우에는 치료가 어려워 높은 사망률을 보이는 것으로 알려져 있다.
한편, 박테리오파지(bacteriophage)는 특정 세균을 감염시켜 감염된 세균의 성장을 억제하고 저해하는 세균 특이적 바이러스를 의미한다. 박테리오파지는 박테리아에 감염(infection)한 후 박테리아 세포 내부에서 증식을 하고, 증식 후 자손 박테리오파지들이 박테리아 밖으로 나올 때 숙주인 박테리아의 세포벽을 파괴하는 방식으로 박테리아를 사멸시키는 능력을 갖고 있다. 박테리오파지의 박테리아 감염 방식은 매우 특이성이 높아서 특정 박테리아에 감염할 수 있는 박테리오파지의 종류는 일부로 한정된다. 즉, 특정 박테리오파지는 특정 범주의 박테리아에만 감염할 수 있고 이로 인하여 특정 박테리오파지는 특정 박테리아만을 사멸시키며 다른 박테리아에는 영향을 주지 않는다. 따라서 최근 세균성 질환의 대처 방안으로 박테리오파지(bacteriophage)의 활용이 크게 주목을 받고 있다. 특히 2000년 이후에 항생제 내성균의 증가로 인하여 기존 항생제의 한계성이 나타나고, 기존 항생제의 대체 물질로의 개발 가능성이 부각되면서 다시 박테리오파지가 항-박테리아제로 주목을 받고 있다.
현재까지 녹농균, 특히 카르바페넴 항생제 내성 녹농균에 의한 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 신규한 박테리오파지에 대한 연구는 여전히 부족한 실정이다. 따라서 녹농균, 특히 카르바페넴계 항생제 내성 녹농균에 특이적인 용균활성을 갖는 박테리오파지 및 이의 응용에 대한 기술 개발이 필요하다.
한국공개특허 제10-2015-0123396호
이에 본 발명자들은 녹농균에 특이적인 용균활성을 갖는 박테리오파지를 분리하고 분리된 박테리오파지의 형태적 및 유전적 특성을 분석하여 상기 박테리오파지가 녹농균, 특히 카르바페넴계 항생제 내성 녹농균을 선택적으로 사멸시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 녹농균에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 PA4를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제 또는 세척제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지 PA4를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 녹농균에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 PA4를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 항생용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 사료 첨가용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가용 조성물을 포함하는, 사료를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 소독제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 세척제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 박테리오파지 PA4를 이용한 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법은 기존의 항생제 등의 화학물질에 비해 녹농균, 특히 카르바페넴 내성 녹농균에 대한 특이성이 매우 높고, 상기 박테리오파지 PA4는 녹농균에 감염하여 탁월한 용균 활성을 나타내고 물리화학적 자극에 강하다는 장점을 가지고 있다. 또한 본 발명의 박테리오파지 PA4는 사람, 동물, 식물 등 세균 외의 다른 숙주에는 감염되지 않으므로, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성균의 문제점, 식품 내의 항생제의 잔류 문제, 광범위한 숙주범위의 문제점을 해결할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제, 또는 세척제 분야에서 다양하게 사용될 수 있다.
도 1은 하수에서 채취한 시료 내 박테리오파지 PA4의 존재를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 박테리오파지 PA4의 녹농균에 대한 용균반 형성 활성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 박테리오파지 PA4의 유전자 맵을 나타낸 도이다.
도 4는 전자 현미경을 통해 박테리오파지 PA4의 형태학적 특성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 박테리오파지 PA4의 단백질 패턴을 SDS-PAGE를 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 박테리오파지 PA4의 pH 안정성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 박테리오파지 PA4의 온도 안정성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명은 녹농균에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 PA4를 제공한다.
본 발명에서, 용어 박테리오파지(bacteriophage)는 특정 세균에 감염하여 당해 세균의 성장을 억제하고 저해하는 세균 특이적 바이러스로, 단일 혹은 이중 사슬의 DNA 또는 RNA를 유전 물질로 포함하는 바이러스를 의미한다.
본 발명의 박테리오파지 PA4는 녹농균, 특히 카르바페넴 내성 녹농균에 대해 용균활성이 탁월하다. 상기 박테리오파지 PA4는 130-150nm의 크기로, 정이십면체의 머리를 가지며 수축성 꼬리가 있는 마이오비리대(Myoviridae)에 속한다. 본 발명의 박테리오파지 PA4는 단백질 패턴 분석 결과 90 kDa, 60 kDa, 43 kDa, 23 kDa 그리고 16 kDa의 단백질을 포함함을 확인하였다. 그 전체 염기서열을 서열번호 1로 표시하였다. 또한 상기 박테리오파지 PA4는 pH 및 온도에 대한 안정성이 우수한 특성을 가지고 있다.
박테리오파지 PA4는 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 전체 유전자의 전체 또는 일부로서 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 서열번호 1로 표시되는 염기서열, 및 상기 염기서열의 기능적 동등물로 이루어질 수 있다. 상기 기능적 동등물이란 염기서열의 변형, 치환의 결과, 상기 서열번호 1로 표시되는 염기서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 1로 표시되는 염기서열과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 서열을 의미한다.
상기와 같은 녹농균 특이적 용균활성, 내산성, 내염기성 및 내열성은 본 발명의 박테리오파지 PA4를 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 및 치료용 조성물, 및 상기 박테리오파지 PA4를 유효성분으로 포함하는 다양한 제품에 적용함에 있어, 다양한 pH 범위의 적용이 가능하게 한다.
본 발명의 박테리오파지 PA4는 하수처리장, 도계장 및 양계농장 부근의 하수로부터 시료를 채취하여 분리한 박테리오파지로서, 본 발명자는 이를 박테리오파지 PA4로 명명하고 2016년 10월 21일에 한국미생물보존센터에 수탁번호 KFCC11697P로 기탁하였다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서, 상기 녹농균은 항생제 내성 녹농균일 수 있으며, 바람직하게는 베타락탐계 항생제 내성 녹농균일 수 있고, 보다 바람직하게는 카르바페넴계 항생제 내성 녹농균이나, 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니다. 임상적 측면에서 카르바페넴계 항생제는 페니실린(penicillin)의 골격과 유사하기 때문에 β-락탐환(環)과 5원환(5員環)이 있지만 5원환의 S(황)원자가 C(탄소)원자와 치환하고, 2위(2位)에 이중결합한 구조를 가진다. 카르바페넴계 항생제는 그람양성균에서 그람음성균, 혐기성균까지 폭이 넓은 항균활성을 나타내고, β-락타마아제(β-lactamase)에서도 안정적인 것이 특징이다.
본 발명에서, 상기 카르바페넴계 항생제는 이미페넴, 파니페넴(panipenem), 베타니프론(betanipron), 메로페넴(meropenem) 등일 수 있으며, 바람직하게는 이미페넴일 수 있으나, 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 박테리오파지 PA4는 최근 문제가 되고 있는 항생제 내성, 특히 카르바페넴 항생제에 대한 내성균에 대한 특이적인 사멸능을 가지므로 상기 균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있으나, 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서, 녹농균에 의한 감염성 질병은 패혈증, 전신감염, 기도감염, 낭포성 섬유증, 녹농균 모낭염, 골수염, 괴저성 농창(ecthyma gangraenosum), 방광염, 중이염, 농흉(empyema), 폐렴, 뇌막염, 복막염, 각막염, 내안구염 및 균혈증을 포함하나 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니고, 녹농균에 의하여 발생할 수 있는 이차감염을 모두 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 1×103 내지 1×1010 PFU/mL의 박테리오파지를 포함하며, 바람직하게는 1×106 내지 1×109 PFU/mL의 박테리오파지를 포함한다. 본 발명에 사용된 용어, PFU(plaque forming unit)는 박테리오파지가 플라크를 형성하는 것을 수치화한 단위이다.
본 발명의 용어 예방이란 조성물의 투여로 질병을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 치료란 조성물의 투여로 상기 질병의 증세가 호전되거나 상기 질병의 억제 또는 경감 및 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에서 용어, 약학적으로 허용 가능한 담체란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 밖에 비강 분무, 경구 투여 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수도 있으며, 비경구 투여의 경우 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수 도 있다.
상기 비강 분무의 경우 일정량의 박테리오파지 PA4를 물에 희석하여 분무기나 분무 시스템을 통해 비강으로 흡수 되도록 할 수 있다. 상기 비강 분무를 위한 비강 분무제 또는 호흡기용 제형으로는 에어로졸제 등을 들 수 있다.
상기 비강 분무제 또는 호흡기용 제형은, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말을 분산시키기 위한 추진제 및/또는 기타 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 대상이 되는 동물 및 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사나 수의사는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 유효성분으로 포함하는 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제로 제제화할 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유를 포함할 수 있으며, 캡슐 제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 유효성분으로 포함하는 비경구 투여용 제형으로는, 피하주사, 정맥주사 또는 근육 내 주사 등의 주사용 형태, 좌제 주입방식 또는 호흡기를 통하여 흡입이 가능하도록 하는 에어로졸제 등 스프레이용으로 제제화할 수 있다. 주사용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 에어로졸제 등의 스프레이용으로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 항생용 조성물을 제공한다.
본 발명에서, 용어 항생용 조성물은 약제 형태로 동물에게 제공되어 균을 사멸시킬 수 있는 제제를 의미하며, 방부제, 살균제, 항생제 및 항균제를 총칭하는 것이다.
본 발명의 박테리오파지 PA4는 기존 항생제에 비하여 녹농균에 대한 특이성이 매우 높고, 동시에 카르바페넴 항생제 저항성 균에서도 작용하며, 유익균은 죽이지 않으면서 특정 병원균만 사멸시킬 수 있다. 아울러, 약물 내성 내지 저항성을 유도하지 않아, 기존의 항생물질에 비하여 제품수명(life cycling)이 긴 신규 항생제로서 이용될 수 있다는 이점이 있다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 사료 첨가용 조성물을 제공한다.
축산, 수산업에서 사용되는 사료 첨가용 항생제는 질병의 예방 목적으로 사용되고 있는데, 예방 목적의 항생제 투여는 내성균 발생 가능성을 높이고 가축에 잔류하는 항생제가 사람에게 전달될 수 있어서 문제이다. 항생제가 육류를 통해 인체에 흡수되면 항생제 내성을 유발해 질병의 확산을 부를 수도 있다. 또한, 사료에 섞어 먹이는 항생제의 종류가 많고 이는 다제 내성균 발생 확률이 높아지는 문제점이 있기 때문에 좀 더 자연 친화적이면서도 기존의 항생제의 사용에서 발생한 문제를 해결할 새로운 사료 첨가용 항생물질로서 본 발명의 상기 박테리오파지 PA4를 이용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 사료 첨가용 조성물을 포함하는 사료를 제공할 수 있으며, 본 발명의 사료는 박테리오파지를 사료 첨가제 형태로 따로 제조하여 사료에 혼합시키거나, 사료 제조 시 직접 첨가시켜 제조할 수 있다. 본 발명의 사료 내 박테리오파지는 액상 또는 건조 상태일 수 있으며, 바람직하게는 건조된 분말형태이다. 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 박테리오파지는 분말형태로 사료 중량의 0.05 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 2 중량%의 성분비로 혼합될 수 있다. 또한, 상기 사료는 본 발명의 박테리오파지 외에 사료의 보존성을 높일 수 있는 통상의 첨가제들을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 사료 첨가용 조성물에는 비병원성의 다른 미생물이 추가로 첨가될 수 있다. 첨가될 수 있는 미생물로는 단백질 분해 효소, 지질 분해효소 및 당 전환 효소를 생산할 수 있는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 고초균, 소의 위와 같은 혐기적 조건에서 생리적 활성 및 유기물 분해능이 있는 락토바실러스 균주(Lactobacillus sp.), 가축의 체중을 증가시키며 우유의 산유량을 늘리고 사료의 소화 흡수율을 높이는 효과를 보여주는 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae)와 같은 사상균 및 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)와 같은 효모로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 박테리오파지 PA4를 포함하는 사료에는 식물성으로는 곡물류, 근과류, 식품가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류, 곡물부산물류 등이 있으며, 동물성으로는 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 단세포 단백질, 동물성 플랑크톤류, 남은 음식물 등이 있으며 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 사료 첨가용 조성물에는 품질 저하를 방지하기 위하여 첨가하는 결착제, 유화제, 보존제 등이 포함될 수 있고, 효용 증대를 위하여 사료에 첨가하는 아미노산제, 비타민제, 효소제, 생균제, 향미제, 비단백태질소화합물, 규산염제, 완충제, 착색제, 추출제, 올리고당 등이 있으며, 그 외에도 사료 혼합제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 박테리오파지 PA4를 포함하는, 음용수 첨가제를 제공한다.
본 발명의 음용수 첨가제는 상기 박테리오파지 PA4 또는 이를 포함하는 조성물을 음용수 첨가제 형태로 따로 제조하여 사료 또는 음용수에 혼합하는 방식으로 사용되거나, 음용수 제조 시 직접 첨가하는 방식으로 사용할 수 있다. 상기와 같이 음용수에 혼합하여 공급함으로써 지속적으로 녹농균, 특히 카르바페넴 내성 녹농균의 숫자를 감소시킬 수 있는 효과가 있다.
본 발명에서 음용수는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 음용수를 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 소독제를 제공한다.
녹농균, 특히 카르바페넴 내성 녹농균에 특이적 사멸능을 갖는 본 발명의 박테리오파지 PA4를 포함하는 소독제는 병원감염을 막기 위한 병원 및 보건용의 소독제로 유용하게 사용될 수 있고 일반 생활 소독제, 식품 및 조리 장소 및 설비의 소독제, 양계장, 축사 등의 건물, 축체, 음수, 깔짚, 난좌, 운반차량, 식기 등의 각종 생육 용품의 소독 등에 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 포함하는, 세척제를 제공한다.
본 발명의 박테리오파지 PA4는 녹농균에 특이적 사멸능을 가지므로, 녹농균에 노출되었거나 노출될 가능성이 있는 조류의 피부 표면 또는 신체 각 부위 등을 세척하는 용도로도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 PA4를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명에서, 용어 "개체"는 녹농균에 의한 감염성 질병이 발병될 수 있는 모든 개체를 의미하는 것으로 인간을 포함한 포유동물, 가축류 또는 가금류를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 용어 "가축류"는 인간에 의하여 순화, 개량되어 사람과 함께 공동생활을 하는 유용한 동물을 지칭하는 개념으로, 예를 들어, 돼지, 소, 닭, 말, 오리 또는 개 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 용어 "가금류"는, 가축 중 조류에 속하는 동물을 총칭하여 이르는 개념으로, 예를 들어, 닭, 오리, 꿩, 메추리, 타조, 거위 또는 칠면조 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 방법에서 상기 박테리오파지 PA4 또는 조성물은 약학적 제제의 형태로 동물에게 투여되거나, 가축의 사료 또는 음용수에 혼합하여 이를 섭식시키는 방법을 통해 투여될 수 있다.
본 발명의 방법에서 상기 박테리오파지 PA4 또는 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 구체적으로, 구강, 직장, 국소, 정맥 내, 복강 내, 근육 내, 동맥 내, 경피, 비측 내, 흡입 등을 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다.
본 발명의 방법에 투여되는 상기 박테리오파지 PA4의 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다. 특정 개체에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 본 발명을 실시예, 제제예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예, 제제예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예, 제제예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 신규한 박테리오파지의 분리 및 배양
1.1 박테리오파지의 스크리닝 및 분리
카르바페넴(carbapenem)계 항생제인 이미페넴(imipenem) 내성 녹농균(슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa))에 특이적인 박테리오파지를 스크리닝 및 분리하기 위해서 용균반 분석을 수행하였다. 시료는 박테리오파지가 존재할 것으로 예상되는 하수처리장, 도계장 및 양계농장 부근의 하수로부터 채취하였으며, 박테리오파지 분리에 사용된 이미페넴 내성 녹농균은 아시아태평양 감염재단에서 분양받은 것을 사용하였다.
구체적으로, 채취한 시료를 균질화 한 후 상기 녹농균과 함께 35℃에서 하룻밤 동안 진탕배양 하였다. 상기 배양액을 4,000 rpm으로 20분간 원심분리한 후, 상등액을 공극(pore) 크기가 0.45 μm인 필터를 이용하여 여과하여 시료 여과액을 얻었다.
전배양된 이미페넴 내성 녹농균 150 μL를 취해서 멸균된 튜브에 넣고 3 mL의 BHI 탑 아가(top agar) (뇌 심장 침출액(brain heart infusion) (뇌 침출 고체 12.5 g, 소 심장 침출액 고체 5.0 g, 프로테오스 펩톤 10.0 g, 글루코스 2.0 g, 염화나트륨 5.0 g, 인산나트륨 2.5 g/L) + 0.6% 아가)를 첨가하여 잘 혼합한 후 미리 만들어 둔 2% BHI 아가 플레이트에 중층하였다. 실온에서 30분간 방치한 후 상기 시료 여과액을 각각 10 μL씩 점적하고, 다시 실온에서 30분간 방치한 후 35℃에서 24시간 동안 배양하여 박테리오파지의 유무를 확인하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
한편, 박테리오파지의 존재를 확인한 시료로부터 박테리오파지를 순수 분리하기 위해서 소프트 아가 오버레이(soft agar overlay)법을 이용하였다. 박테리오파지가 존재하는 것으로 확인된 시료를 식염수로 적절히 희석하여 각 희석단의 시료 희석액 100 μL를 취하고, 대상 세균(이미페넴 내성 녹농균) 배양액 150 μL에 혼합한 후 0.6% BHI 탑 아가 3 mL을 첨가하여 잘 혼합한 뒤, 미리 만들어 둔 2% BHI 아가 플레이트에 중층하여 방치한 후 35℃에서 24시간 배양하였다. 배양한 각 플레이트에서 형성된 용균반을 확인한 후, 이를 선택하여 400 μL의 SM 완충액 (NaCl 5.8 g/L; MgSO47H2O 2 g/L; 1M Tris-HCl (pH 7.5) 50 mL)에 현탁하고, 실온에서 4시간 동안 천천히 교반하면서 박테리오파지 용액을 회수한 후 4,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 상등액만 취하고 이를 0.2 μm 필터로 여과하여 최종 박테리오파지 용액을 회수하였다. 이렇게 얻어진 최종 박테리오파지의 용균반을 확인한 결과를 도 2에 나타내었다.
도 1 및 2에 나타낸 바와 같이, 2-4 mm의 크기를 가지는 용균반을 형성하는 박테리오파지를 확인하였고, 상기 박테리오파지는 카르바페넴계 항생제인 이미페넴 내성 녹농균에 특이적인 용균능을 갖는 박테리오파지임을 확인하였다.
1.2 박테리오파지의 대량 배양 및 정제
상기 실시예　1.1에서 확인한 카르바페넴계 항생제인 이미페넴 내성 녹농균 특이적 박테리오파지를 대량 배양하기 위하여, 1.1에서 회수한 최종 박테리오파지 배양액을 1.0x107 PFU/mL로 희석한 후 전배양된 이미페넴 내성 녹농균 1.0x109 CFU/mL과 혼합하여 MOI(Multiplicity of infection)가 0.01이 되도록 하여 35℃에서 120 rpm으로 9시간 동안 배양하였다. 배양이 종료된 후 배양액 전량을 6,000 rpm으로 30분간 원심분리하여 상등액을 수득하였고, 이를 0.2 μm 필터로 여과하여 최종 박테리오파지 배양액을 회수하였다. 분리된 박테리오파지를 박테리오파지 PA4(Bacteriophage PA4)로 명명하고, 2016년 10월 21일 한국미생물보존센터 (Korean Culture Center of Microorganisms, 서울, 한국)에 기탁하고 수탁번호 KFCC11697P를 부여받았다.
실시예 2: 박테리오파지 PA4의 전체 유전자 분석
박테리오파지 PA4의 전체 유전자를 분석하기 위해, 박테리오파지 PA4 배양액에 20 mM EDTA, 50 μg/mL의 프로테나아제 K, 0.5%(w/v) SDS를 가한 후, 50℃에서 1시간 동안 정치하였다. 동량의 페놀-클로로포름-이소프로필 알코올 (25:24:1)과 혼합한 후 실온에서 12,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수된 상등액을 동일 부피의 페놀-클로로포름-이소프로필 알코올 (25:24:1)과 혼합하여 실온에서 12,000 rpm으로 10분간 원심분리한 후 상등액을 회수하고, 상기 상등액에 3M 소듐 아세테이트를 전체 부피의 10%(v/v)가 되도록 가한 후 혼합하였다. 여기에 2배 부피의 차가운 95% 에탄올을 가하여 혼합한 뒤 -20℃에서 1시간 동안 정치하였다. 반응이 끝난 후 0℃에서 10분간 12,000 rpm으로 원심분리하여 침전물을 획득하였고, 차가운 70% 에탄올로 2회 세척한 뒤 에탄올을 완전히 제거하여 DNA 펠렛을 회수하였다. 회수한 펠렛을 최종 부피가 50 μL가 되도록 TE 완충액 (Tris-EDTA, pH 8.0)에 용해시킨 후 DNA 농도를 측정하였다. 전체 유전자 분석을 위해 PacBioRSII 를 이용하여 유전자 시퀀싱을 시행하였다(마크로젠, 한국). 시퀀싱 결과로 얻은 박테리오파지 PA4의 유전자 맵을 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 PA4의 전체 유전자의 크기는 66,485 bp 이며, GC함량이 56%, 전체 ORFs의 수는 95개임을 확인하였다. 분석한 박테리오파지 PA4의 전체 유전자 서열을 서열번호 1로 나타내었다.
실시예 3: 박테리오파지 PA4의 형태학적 특성
박테리오파지 PA4의 형태학적 특성을 알아보기 위해, 상기 실시예 1-2에서 얻은 배양액을 2.5% 파라포름알데하이드-글루타알데하이드(glutaraldehyde) (4℃, 인산 버퍼, pH7.2) 용액으로 2시간 동안 고정하였고, 그 후 완충액(0.1 M 인산 버퍼, pH7.2)에서 10분씩 3회 세척한 후 1% OsO4(25℃, 0.1M 인산 버퍼, pH7.2) 용액으로 2시간 동안 추가적으로 고정하였다. 이를 상기 완충액과 동일한 완충액으로 수회 세척한 후에 에탄올로 탈수하였으며, 프로필렌 옥사이드로 치환하여 Epon-812로 포매(ebedding)한 후 60℃ 오븐에서 36시간 동안 중합 반응을 수행하였다. 초마이크로톰(ultramicrotome; ULTRACUT E, Leica)을 이용하여 상기 포매된 조직을 초박편 형태로 제작하였으며, 이를 우라닐 아세테이트(Uranyl acetate) 및 시트르산납(lead citrate)에서 염색하고 건조시킨 후, 투과전자현미경(CM 20, Philips, Bio-Transmission electron microscope, 100 kV, 120,000~250,000)으로 관찰하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 PA4는 130-150 nm의 크기로, 정이십면체의 머리를 가지며 수축성의 꼬리를 가지는 형태인 마이오비리대(Myoviridae)에 속함을 확인하였다.
실시예 4: 박테리오파지 PA4의 단백질 패턴 분석
박테리오파지 PA4의 단백질 패턴을 분석하기 위해, 1.0x1010 PFU/mL로 준비된 박테리오파지 PA4 40 μL를 10 μL의 5X 로딩 완충액과 혼합하고, 10분간 끓인 다음 12.5% SDS-PAGE를 수행하였다. SDS-PAGE 수행 후 단백질 전기영동 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 PA4는 90 kDa, 60 kDa, 43 kDa, 23 kDa 그리고 16 kDa 크기의 주요 단백질을 가지는 것을 확인하였다.
실시예 5: 박테리오파지 PA4의 다양한 세균에 대한 감염성 조사
박테리오파지 PA4의 다양한 세균에 대한 감염성을 조사하였다.
우선, 박테리오파지 PA4의 카르바페넴계 항생제 내성 녹농균에 대한 용균 활성을 확인하기 위하여, 소프트 아가 오버레이법을 이용하여 아시아태평양 감염연구소에서 분양받은 이미페넴 내성 녹농균을 대상으로 용균 활성을 확인하였다. 그 결과를 표 1에 나타내었다.
Figure pat00001
(+: 용균활성 있음)
상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지 PA4가 이미페넴 내성 녹농균 8개 균주 중 모든 균주에 대해서 용균활성을 나타냄을 통해 본 발명의 박테리오파지 PA4가 이미페넴 내성, 즉 카르바페넴 내성 녹농균에 대하여 탁월한 용균활성을 가짐을 확인하였다.
또한, 박테리오파지 PA4가 다른 속 세균에 대해서도 용균활성을 나타내는지 확인하기 위하여 ㈜옵티팜에서 분리하여 보유하고 있는 균주와 미생물 자원센터 등에서 분양받은 균주를 대상으로 소프트 아가 오버레이법을 통해서 감염성을 확인하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.
Figure pat00002
(+: 용균활성 있음, -; 용균활성 없음)
표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 카르바페넴계 항생제 내성 녹농균 외에 내성을 갖지 않는 녹농균에 대해서도 용균성을 가지는 것을 확인하였다. 그러나 박테리오파지 PA4는 녹농균 외에 다른 속인 Bacillus cereus , Escherichia coli 및 Lactobacillus plantarum 등의 균주에 대해서는 용균활성이 없는 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 녹농균에 특이적으로 용균활성을 나타내는 박테리오파지임을 확인하였다.
실시예 6: 박테리오파지 PA4의 pH 안정성 조사
박테리오파지 PA4의 pH 안정성을 확인하기 위하여, 다양한 pH 범위 (pH3, 4, 5, 6, 7, 8, 9)에서 박테리오파지의 수를 측정하였다. 소듐 아세테이트 완충액 및 소듐 포스페이트 완충액을 이용하여 각각의 pH에 맞게 조제한 후 박테리오파지 PA4 배양액을 4.0x109 PFU/mL으로 준비한 다음, 2시간 동안 상온에서 방치하였다. 방치 후 각 반응액을 단계 희석하여 소프트 아가 오버레이법에 의해 타이터(titer) 측정을 수행한 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 pH3-9의 범위에서 안정한 것을 확인하였다. 이를 통해 박테리오파지 PA4는 pH 안정성이 우수한 박테리오파지임을 알 수 있다.
실시예 7: 박테리오파지 PA4의 열 안정성 조사
박테리오파지 PA4의 열 안정성을 확인하기 위하여, 40℃, 50℃, 60℃, 70℃, 80℃의 다양한 온도 범위에서 일정 시간 방치 후 박테리오파지의 수를 측정하였다. 보다 구체적으로, 박테리오파지 PA4 배양액을 4.0x109 PFU/mL가 되도록 희석한 후 배양액 5 mL을 멸균된 튜브에 분주하고 10분, 30분 및 1시간 동안 각 온도에서 방치하였다. 방치 후 각 반응액을 단계희석하여 소프트 아가 오버레이법에 의한 타이터 측정을 수행한 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 40-70℃의 범위에서 60분 동안 안정하며, 80℃의 범위에서는 10분 동안 안정하며 30분이 경과한 후에도 어느 정도 안정성을 가지는 것을 확인하였다. 이를 통해 박테리오파지 PA4는 내열성이 우수한 박테리오파지임을 알 수 있다.
상기 실험으로부터 박테리오파지 PA4는 녹농균, 특히 카르바페넴계 항생제 내성 녹농균에 감염하여 탁월한 용균 활성을 나타내고 물리화학적 자극에 강하다는 장점을 가지고 있음을 확인하였다. 또한 본 발명의 박테리오파지 PA4는 사람, 동물, 식물 등 세균 외의 다른 숙주에는 감염되지 않으므로, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성균의 문제점, 식품 내의 항생제의 잔류 문제, 광범위한 숙주범위의 문제점을 해결할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 본 발명의 박테리오파지 PA4는 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제, 또는 세척제 분야에서 다양하게 사용될 수 있다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한 첨부된 청구 범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.
이하 본 발명의 박테리오파지 PA4를 포함하는 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아니고 단지 이를 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1: 의약품의 제조
1.1 주사제의 제조
박테리오파지 PA4 1.0x107 PFU/mL
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 mL) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
1.2 액제의 제조
박테리오파지 PA4 1.0x107 PFU/mL
설탕 20 g
이성화당 20 g
레몬향 적량
정제수를 가하여 전체 1,000 mL로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조한다.
1.3 정제의 제조
박테리오파지 PA4 1.0x107 PFU/mL
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
한국미생물보존센터 KFCC11697P 20161021
SEQUENCE LISTING <110> Optipharm.CO.,LTD <120> Novel Pseudomonas aeruginosa specific bacteriophage PA4 and antibacterial composition comprising the same <130> OTP1.29P-1 <150> KR 10-2016-0177044 <151> 2016-12-22 <160> 1 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 66485 <212> DNA <213> bacteriophage PA4 <400> 1 tcgtcgagct tcctggagtt ccagacgatt tccctttctg aggtaaatat ggctactaag 60 gccgatttgg aattgaaagt tcatcagctt cgacgagtca tcaaatctcg cgagcaagaa 120 cttgaagagt tggaagttcg atcggagcgc catcgcgaac gacggtgctg agcatggatt 180 caagatcaac agcgacattt actaacagca acctggagaa ccaaatggat attcaaaacc 240 tgttcaaact cggcatgaag cgcgacatcg ctcagttgat cgagccggat caccgccgcg 300 cagtaaacct gggcgcaggc aattcgccga ttcccggcgt cgaatcgctc gactggccgg 360 actgggacgg cgccagcggc cgagtgccgt atgaagacgg cgaattgacg gcggtctacg 420 catttcactt cttcgaacat ctcactggag cccaggtcat cgatttggtg aaagacctgc 480 agcgggccat ggcagtcggc gcgacgctca atgtcgttgt tccattctac aactccaaca 540 tcgcccacca agacctggac cataaaacgt tcttcactga agagacatgg cggaccctgt 600 tcagaaatcc gttctacgac aagaacaggg aagacccttg gaagttcatc atcggaacca 660 acgtcatcat cggcgtcgcc gagcggaacc tggcagtcat gtcgcagttg atccgtgtag 720 cctgaccctc tgcgatccga cgaacggtag tgcgaaagtg ctaccgtttt ccatttctgg 780 cgtatagtca acccatcgaa acgaactttc caaacaggag aatcgatatg aacgcagcag 840 agaatctgtt caccggcttc gaagacctgg gtgacgactt cgctaccgta gcgatcaaca 900 acgaagcgcc gaagaccctg gaagacgcgt ccatgggcgc tcgcccgaat tcccggaagg 960 aagtgaagct gtatcgcgac aagtgcacca aatgcgcagg caccggcctg taccgtggcc 1020 cttcgtctta tggtcgcgcc tgcttcgcct gcggcggtgt tggatacaaa gagtacaaaa 1080 ccagcccgga gcagcgcgcc aagagtcgtg ctaaggcggc agaaaagcgc atcgagaaaa 1140 tatgtagcgc tgcgcaagag cgcgacctca aaattaaagc cttcgaagct gcacacccgg 1200 acatcgtcga gtggtggact ggaaattcct tcagcttcgc tcagagcctt caggagtcgt 1260 tgtataaata cggctccttg acagaaaatc agatcgctgc tgcgaagcgc gccatcgaaa 1320 acctcgccaa atatcgcgag aaagtggccg cgcaggaagc tgctgcaccg actctggaca 1380 tttccggcat cgagaaggcg tttgagaagg cgaaagaatc tggcatcaag cgcccgaaaa 1440 tccgcctggc tggcgaaggc gaggagccgc tcatcgttat tgtgaaagag gctagcgctc 1500 acagccggaa cgccggtagc ttgtacgtct tgggcgacat ctacctcggc cggatcacca 1560 atggcaaatt catcaagagt cgcgactgca ccgacactga gcatgacgac gttctgaaga 1620 tgtttgaaaa gccgatggaa tcggcagtcg cctacggccg gaagactggt caatgctcct 1680 gctgcggtcg cgagttgacc aaccacgcat ccatcgaaat gggcattgga ccgatctgtg 1740 ccggaaagtt cttcggatga tctacataac catcaaagcc atggcctggt tcgccctcct 1800 atgggcgacc ggcttggcca tcgtaactct caccatacat ttatgctact gaggattatc 1860 catgagcacc gtccatgacc cgatgaagga caagatcacg ctgcacggcc tggggttcat 1920 tcaagtccag ctcccggcag ggcgcctcca tgtttggcac ccggagttgc cgcgccggct 1980 ttgcttcaat cactcggcca tccacgatca tagattcgat ttcgagtctc tggtactggt 2040 tggatcgatg gagaacatca actattacga ggatcgctcg gcttgcctcg gcgaaatgac 2100 tcacgaaggt tatgaacact cttcggctcg ccaggcttgc ggcggtcgcg gctggaatcc 2160 tgtgggctct gtatgtctgc gccagaggca aagatttgtt gttgacgccg ggcagcaata 2220 ttctatgtct gcgtacgttc cgcacaagac gaatccgctc ggtgacggcc gcgtggcgac 2280 tctcatgcgg aaaggcagcg ttcataaatg gcctgccact tcctatgtga cgctgggcgt 2340 cgatcccgaa accgacttcg accgctacca gtggtcggtg ccgacgctct gggaagtcgt 2400 caccgatgtc ctcggcggcg cagagttcca aatcccatcc atcccttgac cgaaggaacc 2460 aaaaaaatga agaaattctg tatcgacatc accaatggcc tggccggctt catcatctgg 2520 ggcggcgcca tcgtcctggc cgcttctgtc tttctcatcg gtccgctggc catccttctg 2580 accggagcct gggttgtgtg tacgtccgtc gtgttcgccc tctggttcgc cgtcgccggc 2640 atctacgaag agtcgcaaaa gcagaccgag catctgaaat ccctggtgtc gctccaggcg 2700 cgtgaacgcg gcatcggcta cggtccagga gatgccgttt gcagcgccag cgctccggcc 2760 gttcccgtag agcccaagct cagccatccc aagctgaagc cgggcgcaca gctcgcggcc 2820 gccgtcttgt tcttcgccgc tctcatcctc ctgctggtag caggcgattg gatctggaat 2880 ttcttccagt caatgccgaa atagtggaag aaaatgcttt acttccattc tgaatgaagg 2940 caaaatagct ccattgaaac gcgaaaccct tcagacaaaa ggaaccgacc atgaccgacc 3000 agaacgaatt caccccggaa gccatcgaga aggcgaaaga ccgcatccgc aaactgactg 3060 ccatggcggc cgactcctcc agcccgcacg aagccgccat tgcagccgag cgtgtgaaga 3120 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ataccgcctg cgtcgtgtga cttcgaagac gcccggccgc cataaatgac tttgtaacgg 6540 gcgcgagttc gccagaccgc tcgcagtgca ggattgagtt tgtacattta atcagtccat 6600 tgttcgcaat aggccgagta tatcgacacc gcagcagacg gtcgagcaca accgttcgtc 6660 ggtgtgcaga atttttctca ctcagacact ttacttccat tctgactatc ggcataatct 6720 cctcatcgaa acgcgaaacc cttcaaacaa aaggaagccg aaaatgacta agcaagccaa 6780 aatcctgagc gtcgctaaat tggccgtggt cactgaagaa gtcgccaaag catacctgga 6840 agctgaagag tggctggttg acgaagccgt gtacaccatc aaggctgagc gcaaagccgg 6900 cctgctgtaa cggaatcacc cgcccggttt gccgggctga cagccctgga gggtaaaacg 6960 atgatccaca ccgtgaacgg caagcagtac atgtacggca gcttttccgg cataaactcc 7020 aaactttacc gcctggaaat tcgccacggc ttcaccatgc cggtgcaggt cgaggtccgc 7080 aaaaacagcg ctgaatacaa gcgtgtttgc ctggccatca ctactggcgc ctaaccgacc 7140 cgcgcccggc gaaccgggct ccaaaactcc aaaaacagag gatcgcagaa atgaccaaac 7200 aagtccagat cgaagtcgcc aacctcgatg aagctttcgt ccagcacctc ctggcaggcg 7260 gccatctgtt cgatgtcgac gactatgaag ttgcagaccg catcctgctg aatgtggatg 7320 gcgaaccggc tatccagttc gaactgaatg ccgaactgtg gaacgaagag actctgggca 7380 ttccgatgga catcgacagt gacgagttcg ccgatgagct gcaggattgg gtcgagtcga 7440 aggtgaattt cgccttcgaa gagtggctga gcgcggacga aggcgaagag tgattacgat 7500 gcggctggga tggtcccggc cgcgacttct tatgaggatt gtgttatgtc tagcatagtg 7560 tacttccagt acatcaccgg caccattcag gttcctctgg aagtcgaggt ggaggccggc 7620 cagctgcaaa tggtcaatgt agaagtcgat cctgatggct tccgcaaatt ctggcctatt 7680 gccgatagtc tgctatggga cgcagaggag tgcaagtttc tgcctcgcta caaatccaac 7740 tacatgggtg aggccgtaaa gtatgccgac caggctatgc tcgctttcgc ggccggccaa 7800 tactacctgc ggatggggtc gaaggaagag cgtaaagacc cggacgccga tctgcatgcg 7860 ctggagttgt ccgcattgcg agcagaactg cgaaggacca aagtcgccaa acagcagctg 7920 gtgcgcgaaa atactcgtct tgtcgaccgc ctgcagaact tcgtagcccg cgaagacaag 7980 gtcgccgagc agaaccgcca gcttcaactc agaatccagg atttggaggc cgagctagcg 8040 tcgcagaagg ctcttcggga agagttagac aagagcctgg acggcagcat ccagaacgcc 8100 aacaatcagc acaagctggc gtgcgaagcc agggagcaga tggtcaaggc cagggaagag 8160 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10680 ctcaaggaag actgctgcac ggatgaactc cagtccgccc tggacgcagg atggcgcctt 10740 ctcgccgttt gtccgcagga agcgcgccgg cccgactaca tcctgggccg attcgattct 10800 gtcccgccga ccggaccgcg tggcgcggcc aggagcatcg attaaatgac catggtaggc 10860 ccggctggaa agcgctactg gcttcggtat gaaaccagat actgggagtg tcttgacgga 10920 caaaccctgc ggctggtctt cgtcatcaac ggtcgccggt atgaggtcaa tcgacgagtg 10980 aatgtagaca tcctgtccag tcggcgcagg ttcgaatctt tcggccgagt cctggcaagg 11040 atggaaatca gcctgtggtt cgcagtgtgc gagcaagaag ggccatggcg cggtagcgta 11100 gccataagcg ataccgcact ttggttccac ctgacgggag aattggtaca caaatgcttt 11160 actcggcggt gagaatcagg gcataatctc ttcaccggct gagaagccgg acccgaagtc 11220 caaaaaggaa tctcgaaatg tacagaactc cctcgtccaa attcacgttc atttgcaacg 11280 gcctcgccca gaatacagaa gtgacggtcc tgctccggac gcagaagccg gaagatgtat 11340 gggtggtgga cgaagcttca gttgcgaacc tgattcgcat ccatgaacgc agcaatccgc 11400 gccgtcgccg taccatcagc atcctcgacg tggatgcagt gtccatcctt cacaaacgtt 11460 aatccatcgg cgcggctgga ttggtcccgg ccgcgccatt catgcaggag 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Claims (7)

  1. 이미페넴(imipenem) 내성 녹농균에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어지며, 수탁번호 KFCC11697P인, 박테리오파지 PA4.
  2. 제1항의 박테리오파지 PA4를 포함하는, 항생용 조성물.
  3. 제1항의 박테리오파지 PA4를 포함하는, 사료 첨가용 조성물.
  4. 제3항의 사료 첨가용 조성물을 포함하는, 사료.
  5. 제1항의 박테리오파지 PA4를 포함하는, 소독제.
  6. 제1항의 박테리오파지 PA4를 포함하는, 세척제.
  7. 제1항의 박테리오파지 PA4를 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 이미페넴(imipenem) 내성 녹농균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법.
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