KR101830900B1

KR101830900B1 - 신규한 조류 병원성 대장균 특이 박테리오파지 ec13 및 이를 포함하는 항균 조성물

Info

Publication number: KR101830900B1
Application number: KR1020160110425A
Authority: KR
Inventors: 김영주; 연영은; 한범구; 김현일; 박철세
Original assignee: 주식회사 옵티팜
Priority date: 2016-08-30
Filing date: 2016-08-30
Publication date: 2018-02-21

Abstract

본 발명은 조류 병원성 대장균에 특이적인 사멸능을 갖는 신규 박테리오파지 EC13, 상기 박테리오파지를 포함하는 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제 또는 세척제 및 상기 박테리오파지를 가금류에 투여하는 단계를 포함하는 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명의 박테리오파지 EC13을 이용한 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법은 기존의 항생제 등의 화학물질에 비해 조류 병원성 대장균에 대한 특이성이 매우 높고, 상기 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 감염하여 대장균 내에서 100배 이상 증식함으로써 용균 활성이 우수하고 물리화학적 자극에 강하다는 장점을 가지고 있다. 또한 본 발명의 박테리오파지 EC13은 사람, 동물, 식물 등 세균외의 다른 숙주에는 감염되지 않으므로, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성균의 문제점, 식품 내의 항생제의 잔류 문제, 광범위한 숙주범위의 문제점을 해결할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제, 또는 세척제 분야에서 다양하게 사용될 수 있다.

Description

신규한 조류 병원성 대장균 특이 박테리오파지 EC13 및 이를 포함하는 항균 조성물{Novel avian pathogenic Escherichia coli specific bacteriophage EC13 and antibacterial composition comprising the same}

본 발명은 조류 병원성 대장균에 특이적인 사멸능을 갖는 신규 박테리오파지 EC13, 상기 박테리오파지를 포함하는 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제 또는 세척제 및 상기 박테리오파지를 가금류에 투여하는 단계를 포함하는 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.

일반적으로 대장균(Escherichia coli , E. coli)은 장내세균과 (Enterobacteriaceae)의 Escherichia 속에 속하는 그람음성의 단간균으로 포유동물을 비롯한 다양한 동물의 장관 내에 존재하는 정상세균 총 중의 하나이다. 대장균은 일반적으로 대장에 정상적으로 존재하는 비병원성 대장균과 특정 병원성 인자(부착인자 및 내열성 독소 등)를 획득하여 병증을 유발하는 병원성 대장균으로 구분할 수 있다. 대장균은 온혈 동물의 장내에 많은 부분을 차지하고 있는 미생물이나 대부분 비병원성 세균으로 기회감염을 유발할 수 있다. 비병원성 대장균 외의 대장균은 사람에 있어서는 설사증, 요로감염증, 패혈증 및 뇌막염 등의 질환을 유발할 수 있는 병원성 미생물이다. 최근에는 다양한 병원성 대장균이 진단, 검출되고 있는데, 장독소성 대장균 (Enterotoxigenic E. coli, ETEC), 장병원성 대장균 (Enteropathogenic E. coli, EPEC), 장출혈성 대장균 (Enterohemorrhagic E. coli, EHEC), 그리고 장응집성 대장균 (Enteroaggregative E. coli , EAEC) 등으로 분류될 수 있다.

한편 병원성 대장균은 닭, 돼지, 소, 오리 등 많은 동물에도 감염하여 질병을 유발 하는데, 특히 육계나 산란계 등에 흔히 감염하여 질병을 발생시키는 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli, APEC)은 조류 병원성 대장균증을 일으켜 양계산업에서 항생제 사용의 주요원인이 되고 있다. 다양한 대장균의 혈청형 중에서 조류 대장균증의 주요 원인균은 병원성 대장균 O78형 또는 O2형으로 알려져 있다. 가금에서는 호흡기도를 통해 장관외 감염을 일으키며 간포막염, 기낭염, 심낭염 및 급성 패혈증 등을 일으키며 폐사를 유발할 수 있다. 특히 조류 대장균증은 다른 세균과의 복합 감염 시 높은 폐사율을 나타냄으로서 농가에 심각한 경제적 손실을 초래하고 있어 중요한 질병으로 확인되고 있다.

한편, 박테리오파지(bacteriophage)는 특정 세균을 감염시켜 감염된 세균의 성장을 억제하고 저해하는 세균 특이적 바이러스를 의미한다. 박테리오파지는 박테리아에 감염(infection)한 후 박테리아 세포 내부에서 증식을 하고, 증식 후 자손 박테리오파지들이 박테리아 밖으로 나올 때 숙주인 박테리아의 세포벽을 파괴하는 방식으로 박테리아를 사멸시키는 능력을 갖고 있다. 박테리오파지의 박테리아 감염 방식은 매우 특이성이 높아서 특정 박테리아에 감염할 수 있는 박테리오파지의 종류는 일부로 한정된다. 즉, 특정 박테리오파지는 특정 범주의 박테리아에만 감염할 수 있고 이로 인하여 특정 박테리오파지는 특정 박테리아만을 사멸시키며 다른 박테리아에는 영향을 주지 않는다. 따라서 최근 세균성 질환의 대처 방안으로 박테리오파지(bacteriophage)의 활용이 크게 주목을 받고 있다. 자연 친화적 방식의 선호로 인하여 박테리오파지에 대한 관심은 어느 때보다 높다고 할 수 있다. 특히 2000년 이후에 항생제 내성균의 증가로 인하여 기존 항생제의 한계성이 나타나고, 기존 항생제의 대체 물질로의 개발 가능성이 부각되면서 다시 박테리오파지가 항-박테리아제로 주목을 받고 있다.

그러나, 조류의 사육에 있어서 중요한 문제가 되고 있는 조류 병원성 대장균에 의한 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 신규한 박테리오파지에 대한 연구는 여전히 부족한 실정이다. 따라서 조류 병원성 대장균에 특이적인 용균활성을 갖는 박테리오파지 및 이의 응용에 대한 기술 개발이 필요하다.

이에 본 발명자들은 조류 병원성 대장균에 특이적인 용균활성을 갖는 박테리오파지를 분리하고 분리된 박테리오파지의 형태적 및 유전적 특성을 분석하여 상기 박테리오파지가 조류 병원성 대장균을 선택적으로 사멸시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 조류 병원성 대장균에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 EC13을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제 또는 세척제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지 EC13을 가금류에 투여하는 단계를 포함하는, 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli)에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 EC13을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 항생용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 사료 첨가용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 소독제를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 EC13을 포함하는, 세척제를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 박테리오파지 EC13을 가금류에 투여하는 단계를 포함하는, 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 박테리오파지 EC13을 이용한 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법은 기존의 항생제 등의 화학물질에 비해 조류 병원성 대장균에 대한 특이성이 매우 높고, 상기 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 감염하여 대장균 내에서 100배 이상 증식함으로써 용균 활성이 우수하고 물리화학적 자극에 강하다는 장점을 가지고 있다. 또한 본 발명의 박테리오파지 EC13은 사람, 동물, 식물 등 세균외의 다른 숙주에는 감염되지 않으므로, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성균의 문제점, 식품 내의 항생제의 잔류 문제, 광범위한 숙주범위의 문제점을 해결할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제, 또는 세척제 분야에서 다양하게 사용될 수 있다.

도 1은 박테리오파지 EC13의 조류 병원성 대장균에 대한 용균반 형성 활성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 박테리오파지 EC13의 전체 유전자를 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 전자 현미경을 통해 박테리오파지 EC13의 형태학적 특성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 박테리오파지 EC13의 단백질 패턴을 SDS-PAGE를 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 박테리오파지 EC13의 pH 안정성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 박테리오파지 EC13의 열 안정성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명은 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli)에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 EC13을 제공한다.

본 발명에서, 용어 “박테리오파지(bacteriophage)”는 특정 세균에 감염하여 당해 세균의 성장을 억제하고 저해하는 세균 특이적 바이러스로, 단일 혹은 이중 사슬의 DNA 또는 RNA를 유전 물질로 포함하는 바이러스를 의미한다.

본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 대해 용균활성이 탁월하고, 다른 대장균 종도 약하게 용균시킬 수 있다. 상기 박테리오파지 EC13은 50nm의 크기로, 정이십면체의 머리를 가지며 꼬리가 없거나 짧은 형태인 포도비리데(Podoviridae)에 속함을 확인하였으며, 단백질 패턴 분석 결과 100 kDa, 70 kDa, 47 kDa, 35 kDa의 단백질을 포함하고, 전체 염기서열 분석 결과 48,932 bp의 크기를 갖고 GC함량이 44%, 전체 ORF의 수는 44개임을 확인하였으며 그 전체 염기서열을 서열번호 1로 표시하였다. 또한 상기 박테리오파지 EC13은 열 및 pH에 대한 안정성이 우수한 특성을 가지고 있다.

박테리오파지 EC13은 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 전체 유전자의 전체 또는 일부로서 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 서열번호 1로 표시되는 염기서열, 및 상기 염기서열의 기능적 동등물로 이루어질 수 있다. 상기 기능적 동등물이란 염기서열의 변형, 치환의 결과, 상기 서열번호 1로 표시되는 염기서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 1로 표시되는 염기서열과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 서열을 의미한다.

상기와 같은 조류 병원성 대장균 특이적 용균활성, 내산성, 내열성은 본 발명의 박테리오파지 EC13을 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 및 치료용 조성물, 및 상기 박테리오파지 EC13을 유효 성분으로 포함하는 다양한 제품에 적용함에 있어, 다양한 온도 및 pH 범위의 적용이 가능하게 한다.

본 발명의 박테리오파지 EC13은 도계장 및 양계농장 부근의 하수로부터 시료를 채취하여 분리한 박테리오파지로서, 박테리오파지 EC13으로 명명하고 2016년 7월 22일에 한국미생물보존센터에 기탁번호 KFCC11679P로 기탁하였다.

본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 특이적인 사멸능을 가지므로, 상기 균들에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 사용될 수 있다. 본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균 중에서도 O78 혈청형의 조류 병원성 대장균에 더욱 특이적이므로, 본 발명은 O78 혈청형의 조류 병원성 대장균 감염에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

바람직하게, 상기 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병은 간포막염, 기낭염, 심낭염, 패혈증, 관절염, 복막염, 심장주위염, 수란관염, 제대염, 골수염, 다발성장막염, 및 봉와직염으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 1 ×10³내지 1 ×10¹⁰ PFU/mL의 박테리오파지를 포함하며, 바람직하게는 1 ×10⁶ 내지 1 ×10⁹ PFU/mL의 박테리오파지를 포함한다. 본 발명에 사용된 용어, “PFU(plaque forming unit)”는 박테리오파지가 플라크를 형성하는 것을 수치화한 단위이다.

본 발명의 용어 “예방”이란 조성물의 투여로 질병을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어 “치료”란 조성물의 투여로 상기 질병의 증세가 호전되거나 상기 질병의 억제 또는 경감 및 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에서 용어, “약학적으로 허용 가능한 담체”란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 밖에 비강 분무, 경구 투여 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수도 있으며, 비경구 투여의 경우 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수 도 있다.

상기 비강 분무의 경우 일정량의 박테리오파지 EC13을 물에 희석하여 분무기나 분무 시스템을 통해 비강으로 흡수 되도록 할 수 있다. 상기 비강 분무를 위한 비강 분무제 또는 호흡기용 제형으로는 에어로졸제 등을 들 수 있다.

상기 비강 분무제 또는 호흡기용 제형은, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말을 분산시키기 위한 추진제 및/또는 기타 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 대상이 되는 동물 및 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감음성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사나 수의사는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물을 유효성분으로 포함하는 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제로 제제화할 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제, 스테아르산 마스네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유를 포함할 수 있으며, 캡슐 제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물을 유효성분으로 포함하는 비경구 투여용 제형으로는, 피하주사, 정맥주사 또는 근육 내 주사 등의 주사용 형태, 좌제 주입방식 또는 호흡기를 통하여 흡입이 가능하도록 하는 에어로졸제 등 스프레이용으로 제제화할 수 있다. 주사용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 에어로졸제 등의 스프레이용으로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.

본 발명에서, 용어 “항생용 조성물”은 약제 형태로 동물에게 제공되어 균을 사멸시킬 수 있는 제제를 의미하며, 방부제, 살균제, 항생제 및 항균제를 총칭하는 것이다.

상기 동물은 인간을 포함한 포유동물, 바람직하게는 가금류이다. 본 발명의 박테리오파지 EC13은 기존 항생제에 비하여 조류 병원성 대장균에 대한 특이성이 매우 높으므로, 유익균은 죽이지 않고, 특정 병원균만 사멸시킬 수 있고, 약물 내성 내지 저항성을 유도하지 않아, 기존의 항생물질에 비하여 제품수명(life cycling)이 긴 신규 항생제로서 이용될 수 있다.

축산, 수산업에서 사용되는 사료 첨가용 항생제는 질병의 예방 목적으로 사용되고 있는데, 예방 목적의 항생제 투여는 내성균 발생 가능성을 높이고 가축에 잔류하는 항생제가 사람에게 전달될 수 있어서 문제이다. 항생제가 육류를 통해 인체에 흡수되면 항생제 내성을 유발해 질병의 확산을 부를 수도 있다. 또한, 사료에 섞여 먹이는 항생제의 종류가 많고 이는 다제 내성균 발생 확률이 높아지는 문제점이 있기 때문에 좀 더 자연 친화적이면서도 기존의 항생제의 사용에서 발생한 문제를 해결할 새로운 사료 첨가용 항생물질로서 본 발명의 상기 박테리오파지 EC13을 이용할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 사료 첨가용 조성물을 포함하는 사료를 제공할 수 있으며, 본 발명의 사료는 박테리오파지를 사료 첨가제 형태로 따로 제조하여 사료에 혼합시키거나, 사료 제조 시 직접 첨가시켜 제조할 수 있다. 본 발명의 사료 내 박테리오파지는 액상 또는 건조상태일 수 있으며, 바람직하게는 건조된 분말형태이다. 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 박테리오파지는 분말형태로 사료 중량의 0.05 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 2 중량%의 성분비로 혼합될 수 있다. 또한, 상기 사료는 본 발명의 박테리오파지 외에 사료의 보존성을 높일 수 있는 통상의 첨가제들을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 사료 첨가용 조성물에는 비병원성의 다른 미생물이 추가로 첨가될 수 있다. 첨가될 수 있는 미생물로는 단백질 분해 효소, 지질 분해효소 및 당 전환 효소를 생산할 수 있는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 고초균, 소의 위와 같은 혐기적 조건에서 생리적 활성 및 유기물 분해능이 있는 락토바실러스 균주(Lactobacillus sp.), 가축의 체중을 증가시키며 우유의 산유량을 늘리고 사료의 소화 흡수율을 높이는 효과를 보여주는 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae)와 같은 사상균 및 사카로미세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae)와 같은 효모로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 박테리오파지 EC13을 포함하는 사료에는 식물성으로는 곡물류, 근과류, 식품가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류, 곡물부산물류 등이 있으며, 동물성으로는 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질, 동물성 플랑크톤류, 남은 음식물 등이 있으며 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 사료 첨가용 조성물에는 품질 저하를 방지하기 위하여 첨가하는 결착제, 유화제, 보존제 등이 포함될 수 있고, 효용 증대를 위하여 사료에 첨가하는 아미노산제, 비타민제, 효소제, 생균제, 향미제, 비단백태질소화합물, 규산염제, 완충제, 착색제, 추출제, 올리고당 등이 있으며, 그 외에도 사료 혼합제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 박테리오파지 EC13을 포함하는, 음용수 첨가제를 제공한다.

본 발명의 음용수 첨가제는 상기 박테리오파지 EC13 또는 이를 포함하는 조성물을 음용수 첨가제 형태로 따로 제조하여 사료 또는 음용수에 혼합하는 방식으로 사용되거나, 음용수 제조 시 직접 첨가하는 방식으로 사용할 수 있다. 상기와 같이 음용수에 혼합하여 공급함으로써 지속적으로 조류 병원성 대장균의 숫자를 감소시킬 수 있는 효과가 있다.

본 발명에서 음용수는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 음용수를 사용할 수 있다.

조류 병원성 대장균에 특이적 사멸능을 갖는 본 발명의 박테리오파지 EC13을 포함하는 소독제는 병원감염을 막기 위한 병원 및 보건용의 소독제로 유용하게 사용될 수 있고 일반 생활 소독제, 식품 및 조리 장소 및 설비의 소독제, 양계장, 축사 등의 건물, 축체, 음수, 깔짚, 난좌, 운반차량, 식기 등의 각종 생육 용품의 소독 등에 사용될 수 있다.

본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 특이적 사멸능을 가지므로, 조류 병원성 대장균에 노출되었거나 노출될 가능성이 있는 조류의 피부 표면 또는 신체 각 부위 등을 세척하는 용도로도 사용될 수 있다.

본 발명에서, 용어 “가금류”는, 가축 중 조류에 속하는 동물을 총칭하여 이르는 개념이다.

상기 가금류는 닭, 오리, 꿩, 메추리, 타조, 거위 및 칠면조로 구성된 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 방법은 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병, 예컨대 포막염, 기낭염, 심낭염, 패혈증, 관절염, 복막염, 심장주위염, 수란관염, 제대염, 골수염, 다발성장막염, 또는 봉와직염이 발생한 개체에 박테리오파지 EC13을 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 방법에서 상기 박테리오파지 EC13 또는 조성물은 약학적 제제의 형태로 동물에게 투여되거나, 가축의 사료 또는 음용수에 혼합하여 이를 섭식시키는 방법을 통해 투여될 수 있다.

본 발명의 방법에서 상기 박테리오파지 EC13 또는 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 구체적으로, 구강, 직장, 국소, 정맥 내, 복강 내, 근육 내, 동맥 내, 경피, 비측 내, 흡입 등을 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다.

본 발명의 방법에 투여되는 상기 박테리오파지 EC13의 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다. 특정 개체에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.

본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.

이하, 본 발명을 실시예, 제제예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예, 제제예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예, 제제예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 신규한 박테리오파지의 분리 및 배양

1.1 박테리오파지의 스크리닝 및 분리

조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli , APEC)에 특이적인 박테리오파지를 스크리닝 및 분리하기 위해서 용균반 분석을 수행하였다. 시료는 박테리오파지가 존재할 것으로 예상되는 도계장 및 양계농장 부근의 하수로부터 채취하였으며, 박테리오파지 분리에 사용된 조류 병원성 대장균은 (주)옵티팜에서 분리 동정된 것(혈청형 O78)을 사용하였다.

구체적으로, 채취한 시료를 조류 병원성 대장균과 함께 35℃에서 하룻밤 동안 진탕배양 하였다. 상기 배양액을 4,000 rpm으로 20분간 원심분리한 후, 상등액을 공극(pore) 크기가 0.45 μm인 필터를 이용하여 여과하여 시료 여과액을 얻었다.

전배양된 조류 병원성 대장균 150 μL를 취해서 멸균된 튜브에 넣고 3-5 mL의 LB 탑 아가(top agar) [LB 배지(트립톤 10g/L, 효모 추출물(yeast extract) 5g/L, NaCl 10g/L) + 0.6% 아가)를 첨가하여 잘 혼합한 후 미리 만들어 둔 2% LB 아가 플레이트에 중층하였다. 실온에서 30분간 방치한 후 상기 시료 여과액을 각각 10 μL씩 점적하고, 다시 실온에서 30분간 방치한 후 35℃에서 24시간 동안 배양하여 박테리오파지의 유무를 확인하였다.

박테리오파지의 존재를 확인한 시료로부터 박테리오파지를 순수 분리하기 위해서 소프트 아가 오버레이(soft agar overlay)법을 이용하였다. 박테리오파지가 존재하는 것으로 확인된 시료를 식염수로 적절히 희석하여 각 희석단의 시료 희석액 100 μL를 취하고, 대상 세균(조류 병원성 대장균) 배양액 150 μL에 혼합한 후 0.6% LB 탑 아가 3 mL을 첨가하여 잘 혼합한 뒤, 미리 만들어 둔 2% LB 아가 플레이트에 중층하여 방치한 후 35℃에서 24시간 배양하였다. 배양한 각 플레이트에서 형성된 용균반을 확인한 후, 이를 선택하여 400 μL의 SM 완충액 (NaCl 5.8g/L; MgSO₄7H₂O 2g/L; 1M Tris-HCl (pH 7.5) 50 mL)에 현탁하고, 실온에서 4시간 동안 방치하였다. 상기 박테리오파지액 100 μL를 0.6% LB 탑 아가와 세균 배양액 500 μL와 혼합한 뒤 150 mm 지름의 LB 플레이트에 분주하여 중층한 후 완전히 용균이 일어날 때까지 35℃에서 배양하였다. 배양이 종료된 후, LB 플레이트에 15 mL의 SM 완충액을 가하고 실온에서 4시간 동안 천천히 교반하면서 박테리오파지 용액을 회수한 후 4,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 상등액만 취하고 이를 0.45 μm 필터로 여과하여 최종 박테리오파지 용액을 회수하였다. 이렇게 얻어진 최종 박테리오파지의 용균반을 확인한 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 2-4 mm의 크기를 가지는 용균반을 형성하는 박테리오파지를 확인하였고, 상기 박테리오파지는 조류 병원성 대장균 특이적인 용균능을 갖는 박테리오파지임을 확인하였다.

1.2 박테리오파지의 대량 배양 및 정제

상기 실시예　1.1에서 확인한 조류 병원성 대장균 특이적 박테리오파지를 대량 배양하기 위하여, 1.1에서 회수한 최종 박테리오파지 배양액을 1.0×10⁷PFU/mL로 희석한 후 전배양된 조류 병원성 대장균 1.0x10¹⁰CFU/mL과 혼합하여 MOI (Multiplicity of infection)가 0.001이 되도록 하여 35℃에서 120 rpm으로 9시간 배양하였다. 배양이 종료된 후 배양액 전량을 6,000 rpm으로 30분간 원심분리하여 상등액을 수득하였고, 이를 0.2 μm 필터로 여과하여 최종 박테리오파지 배양액을 회수하였다. 분리된 박테리오파지를 “박테리오파지 EC13(Bacteriophage EC13)”으로 명명하고, 2016년 7월 22일 한국미생물보존센터 (Korean Culture Center of Microorganisms, 서울, 한국)에 기탁하고 기탁번호 KFCC11679P를 부여받았다.

실시예 2: 박테리오파지 EC13의 전체 유전자 분석

박테리오파지 EC13의 전체 유전자를 분석하기 위해, 박테리오파지 EC13 배양액에 20 mM EDTA, 50 μg/mL의 프로테나아제 K, 0.5% (w/v) SDS를 가한 후, 50℃에서 1시간 동안 정치하였다. 동량의 페놀-클로로포름-이소프로필 알코올 (25:24:1)과 혼합한 후 실온에서 12,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수된 상등액을 동일 부피의 페놀-클로로포름-이소프로필 알코올 (25:24:1)과 혼합하여 실온에서 12,000 rpm으로 10분간 원심분리한 후 상등액을 회수하고, 상기 상등액에 3M 소듐 아세테이트를 전체 부피의 10%(v/v)가 되도록 가한 후 혼합하였다. 여기에 2배 부피의 차가운 95% 에탄올을 가하여 혼합한 뒤 -20℃에서 1시간 동안 정치하였다. 반응이 끝난 후 0℃에서 10분간 12,000 rpm으로 원심분리하여 침전물을 획득하였고, 차가운 70% 에탄올로 2회 세척한 뒤 에탄올을 완전히 제거하여 DNA 펠렛을 회수하였다. 회수한 펠렛을 최종 부피가 50 μL가 되도록 TE 완충액 (Tris-EDTA, pH 8.0)에 용해시킨 후 DNA 농도를 측정하였다. 전체 유전자 분석을 위해 PacBioRSII 를 이용하여 유전자 시퀀싱을 시행하였다 (마크로젠, 한국). 시퀀싱 결과로 얻은 박테리오파지 E13의 유전자 맵을 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 EC13의 전체 유전자의 크기는 48,932 bp 이며, GC함량이 44%, 전체 ORFs의 수는 44개임을 확인하였다. 분석한 박테리오파지 EC13의 전체 유전자 서열을 서열번호 1로 나타내었다.

실시예 3: 박테리오파지 EC13의 형태학적 특성

박테리오파지 EC13의 형태학적 특성을 알아보기 위해, 그리드를 고정한 뒤 0.01%의 BSA 용액 (Bovine serum albumin) 10 μL를 처리하고 10 초 후 필터 페이퍼로 제거하였다. 준비된 박테리오파지 EC13을 10 μL 취하여 그리드 위에 분주하고 1~2분간 방치 후 필터 페이퍼로 제거하는 과정을 2회 반복한 뒤, 포스포텅스텐산(phosphotungstic acid) 용액 10 μL를 시료를 처리한 그리드 위에 처리하고 5분간 방치한 후 필터 페이퍼로 제거하는 과정을 2회 반복하여 염색한 다음 투과전자현미경 (Carl Zeiss transmission electron microscope, 80 kV, 120,000~200,000)으로 검경하였으며 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 EC13은 50 nm의 크기로, 정이십면체의 머리를 가지며 꼬리가 없거나 짧은 형태인 포도비리데 (Podoviridae)에 속함을 확인하였다.

실시예 4: 박테리오파지 EC13의 단백질 패턴 분석

박테리오파지 EC13의 단백질 패턴을 분석하기 위해, 1.0×10¹⁰PFU/mL로 준비된 박테리오파지 EC13 40 μL를 10 μL의 5X 로딩 완충액과 혼합하고, 10분간 끓인 다음 12.5% SDS-PAGE를 수행하였다. SDS-PAGE 수행 후 단백질 전기영동 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 EC13은 100 kDa, 70 kDa, 47 kDa, 그리고 35 kDa 크기의 주요 단백질을 가지는 것을 확인하였다.

실시예 5: 박테리오파지 EC13의 다양한 세균에 대한 감염성 조사

박테리오파지 EC13의 다양한 세균에 대한 감염성을 조사하였다.

우선, 박테리오파지 EC13의 조류 병원성 대장균에 대한 감염성을 소프트 아가 오버레이법을 통해 확인한 결과를 표 1에 나타내었다.

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 대해서는 모두 용균활성이 탁월함을 확인하였다.

또한, 다른 혈청형의 병원성 대장균을 포함하는 다양한 세균에 대해서 용균활성을 나타내는지 확인하기 위하여 ㈜옵티팜에서 분리하여 보유하고 있는 균주와 미생물 자원센터 등에서 분양받은 균주를 대상으로 소프트 아가 오버레이법을 통해서 감염성을 확인하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.

표 2에 나타낸 바와 같이, 조류 병원성 대장균 외에도 다른 미생물을 대상으로 감수성 검사를 진행한 결과, 박테리오파지 EC13은 다른 대장균 종에도 약하게 용균성을 가지는 것을 확인하였다. 그러나 다른 Salmonella 종이나 Bacillus cereus , Lactobacillus plantarum 등 다른 속의 세균에 대해서는 용균활성이 없는 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 특이적으로 용균활성을 나타내는 박테리오파지임을 확인하였다.

실시예 6: 박테리오파지 EC13의 pH 안정성 조사

박테리오파지 EC13의 pH 안정성을 확인하기 위하여, 다양한 pH 범위 (pH 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11)에서 박테리오파지의 수를 측정하였다. 소듐 아세테이트 완충액, 소듐 포스페이트 완충액, Tris-HCl을 이용하여 각각의 pH에 맞게 조제한 후 1 mL로 분주하여 준비하였다. 1.0×10¹⁰PFU/mL로 준비한 박테리오파지 EC13 배양액 10 μL을 상기 용액에 첨가하여 2시간 동안 상온에서 방치하였다. 방치 후 각 반응액을 단계희석하여 소프트 아가 오버레이법에 의한 타이터(titer) 측정을 수행한 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타낸 바와 같이, pH 4-11의 범위에서는 박테리오파지 EC13이 2시간 동안 안정한 것으로 확인되었으며, pH 2에서는 박테리오파지의 수가 3 log, pH 3에서는 2 log가 감소됨을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 pH 4-11의 범위에서 안정함을 확인하였으므로, 박테리오파지 EC13은 pH 안정성이 우수한 박테리오파지임을 알 수 있다.

실시예 7: 박테리오파지 EC13의 열 안정성 조사

박테리오파지 EC13의 열 안정성을 확인하기 위하여, 다양한 온도 범위 (40℃, 50℃, 60℃, 그리고 70℃)에서 박테리오파지의 수를 측정하였다. 박테리오파지 EC13 배양액 (1.0×10⁸PFU/mL) 5mL을 멸균된 튜브에 분주한 후 박테리오파지를 첨가하여 2시간 동안 각 온도에서 방치하였다. 방치 후 각 반응액을 단계 희석하여 소프트 아가 오버레이법에 의한 타이터 측정을 수행한 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타낸 바와 같이, 40-70℃의 범위에서는 30분까지 안정한 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 내열성이 우수한 박테리오파지임을 알 수 있다.

상기 실험으로부터 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 대한 특이성이 매우 높고, 조류 병원성 대장균에 감염하여 대장균 내에서 100배 이상 증식함으로써 용균 활성이 우수하고 물리화학적 자극에 강하다는 장점을 가지고 있음을 확인하였다. 또한 본 발명의 EC13은 사람, 동물, 식물 등 세균외의 다른 숙주에는 감염되지 않으므로, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성균의 문제점, 식품 내의 항생제의 잔류 문제, 광범위한 숙주범위의 문제점을 해결할 수 있는 장점이 있다. 따라서, 본 발명의 박테리오파지 EC13은 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료, 항생용 조성물, 사료 첨가용 조성물, 사료, 소독제, 또는 세척제 분야에서 다양하게 사용될 수 있다.

비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한 첨부된 청구 범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

제제예 1: 의약품의 제조

1.1 주사제의 제조

박테리오파지 EC13 1 ×10⁶ PFU/mL

주사용 멸균 증류수 적량

pH 조절제 적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 mL) 상기의 성분 함량으 로 제조한다.

1.2 액제의 제조

박테리오파지 EC13 1 ×10⁶ PFU/mL

설탕 20g

이성화당 20g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 1,000 mL로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조한다.

1.3 정제의 제조

박테리오파지 EC13 1 ×10⁶ PFU/mL

옥수수전분 100mg

유당 100mg

스테아린산 마그네슘 2mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

한국미생물보존센터

KFCC11679P

20160722

<110> Optipharm.CO.,LTD <120> Novel avian pathogenic Escherichia coli specific bacteriophage EC13 and antibacterial composition comprising the same <130> 1.16P <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 48932 <212> DNA <213> bacteriophage EC13 <400> 1 ccttgcagaa ttcctcgata cttttcttac gcagagtctc agtcatagct gtttcctctg 60 ccagtttatt aacaaaggta tgcatttcta atttagtacg aatggcttgt ttctctgcca 120 tagtacttac atatgaatta agcataccta ctgctttagt tgctgtaccg aaggtatctg 180 caacagtagt agcagctgag ttaacagtac caagtaaagt tcctgcggtc atacgtacag 240 tagcttgagt agtcatgatg atagctccaa tagttgatga taggacgaca tgtccataac 300 atgcggagca tgtgtaacgt gtaaggtggg gtagggtagt ggctacaccg tcaacatacc 360 gggggggatg gttgagtgta agggtgtagc cccagccaca ccactgtagc catacataac 420 tatgctactt ttcatatgca aaaatatgat agctatccta cttataagca gttaaatagg 480 aggaagcata taccaagtga ggagtttgca gttcactggt aataccaaag gtaagagtgt 540 acttatccgt attcacatgc cagggggagt acatgtagga ggaccacggt aattcctttc 600 ctggttcaag aacttctaca atagtcacct tatttagtag taaagctaat cctttaactt 660 cgtgtagagt ctgatcatct ggtactagga taataggagt gagtctacca ggtacaaggt 720 cttgtaaggt tgtatgggta gtggaaatag gtccatcagc ataacctatc ttagtaagtt 780 tcatttaata tccttaagag cttaattgtg taagttatcc tgtaagatgg ggctttctgg 840 tgatgatgcg tgctatacca gagtaatagt ccggatggtt aggattacca ctactatttc 900 ttacggtagc atctttgcta aatacatagg cataatcacc gtatggtatg aatactgact 960 caccattttg caggataact atctctgcat tactgttagt aattagctta tgtccctgtg 1020 caaagtctgc taactctcct ggctccatta ttagcgttga ggttccgtag gacataatgt 1080 gaatgattgc tttccctggt tcagaggaat agtgcagtaa gtcagtacct ttcataccta 1140 atagtttaac gttcattctt cagtacctgt tcaagaatgc tatccatgta gtaacagtac 1200 gcttcactat tactactgtt tataggcata ccattataat cgaataccca taagcagaag 1260 tggtttactt catggataag cgttggcaag gggtctgaga agatgcccat aagaacctta 1320 ttatcagagt atgtagtata ccccttacaa ccttccaaat ctggctcata ccctttaagt 1380 ttcttgtact ttttaatgaa ggtatcccgg tcgagtacta cttctaactg caccggatag 1440 ggtgatgtgt ttagtttcat tgtctttcct tatagattgg ggtgttatcc tcgaaggata 1500 ggatgtactt gtctgtattg agatgccatg gactgaatct accctgccag gacatcggtg 1560 ttcctggttc aagtagatgt acttccgaat tcttattgta taagaagagt aatccttgta 1620 gttcatgcaa ggactgttcg tctggaacca gtatgagtac atcagcatcc aggttagtta 1680 attctttatg gtgggtgtat tcatccccag gtagctctga ataaatttta ctgataacca 1740 ttagtagctt ccgtcgctag ataaatatga ggaaggatag agggtaatga gtctgcctgt 1800 aagagtagta gctaccatag gttcactgga ggagaagatg tatacagcga catcctctgg 1860 aacttcgatg gaagtattta tcttaataaa ggtaataggt gcacctaaca ttagacaggt 1920 tcctatgaac tcatctgctt ctttacaggg ttcatagtac atggtcatgg gtttacttat 1980 tcccaaccag ggggatttac ctactcccag attaagggga catgtactac gactacttaa 2040 accgaagaag tgcataactt acttccttac atagtagtaa tggtattctt cattcttatg 2100 gcgactatcc cattggtatt catcggatac catcatgaaa ggtagagcgt catatgcatc 2160 actaaaggag tagacggaag gtgggacaat acatacaacc ttacggtcat tacctgctaa 2220 gaataactgg ccccttactt catggtagtc ctctaaggta ggaactagga ttacatgttg 2280 ggggctacta ttcatgactt cttctaaaga gaagtcattt gtatacatag actccctttc 2340 agcaaaactg gggatggtca ttatgaattt catgattgat tctccttcct ttagggatag 2400 gtctgaagta aatggaaagt gttttattaa agacgttatg gtcagctatc aattcccaac 2460 caggtatttt atagaaacgt acacctggga aaatcatact aaagtcactg taaaaggaaa 2520 ggtcatacac ctttggttca gtaagtatct tagtattgag ttgcagattg gataggaaga 2580 gagaaccaat aacctcatgg gactcttcac agtcaggtaa gaatactgtt tgccacggag 2640 taatgaactt acttactgct tctggttccc caaggtaata aggttcttga ttacgtagta 2700 caccggtaat atcaatatca aaagcgtaga tgctcatagt tgcatacctc ctgaaaaaga 2760 aatggggtag agcctctcga ctctacccct taccgttttc aatcacgggt cagttcatca 2820 ccctagatac atgtgtatcg ttagcctact aggtaggaaa ggagccgggc aaccctgact 2880 gtagaagtta ttaactcttt acgagtaccg ccactgtcta ctaggcggca tgactaatca 2940 catcgtcacc gtcaaccgaa cactgtcttt gcttcgcctg acggagacac tatgaggtaa 3000 ttttgtgaag aacacaagag atgaaattgt tttatctaaa gagtaagttt ctcttggttc 3060 taagacttta atgcctggac gattctctaa cagcatcatc ccagctaatt catggtaggt 3120 gtcttcatca tgtgtaatga taatatcatc tgaaaggaag ccaatcttag tgtggtctag 3180 ttcgaagtac ttgtcactag agtctggggc tttcatatag attctcaaag gttactcctt 3240 ttgggaatag ggtcatcgga acattacata ctatttagta tcatgaactt tttctatatc 3300 atgactaaag tgtaactgta tggtatcgtt tcttcaaggg gtaactcacc ccaagaaaag 3360 aatcttcttt aatagacata actttgtagc gagataagta tgagtgaact aactaagcag 3420 cagattgtta atgccttacc tgctaacttc aaaaacagtg tgacccagga gttggtagac 3480 acgatcaaca acataaccca agaccaactg gttgctgagt ccttccgtga aaactttatc 3540 tcctactctg gtgtaatgaa ggaaggtaag tttaagacac aggactacat gaatgcagtt 3600 cagtatgtga cttataaaca catgggttat tccaataagg aagcctactt caagacattc 3660 cctaaccgac aagcagaact tgttgcacga ggaaccagcg agaaagatat tagtgcttat 3720 gtatctgcat atcacagagg taagttagtt aacctcatca tggaacaaag tttggttcca 3780 gtgtggattg tgaaccagga caactatcag aaggcaatca acgttcaggt cgaactgatg 3840 actacagcag caagtgagaa ggtaagatgt gatgcagcta actctattct tactcactta 3900 gctaaaccga aggatcaggt aacgaatatc aatctggact tgagagagaa ctctggatta 3960 actgacctca aggcaacact tgctgcattg gctgaacagc aaattaatgc aatcaacagt 4020 ggtgtaccta ccaaagaggt tgctggttct aaactagtac gtgcagatga ggacattaca 4080 gatgtctgag ttaattaaac aggaactaga tgaatggcta gaccaggtgg attactccca 4140 ccttaattct tccaactatg ttcctagtca gtttgctctt acctttgcca actttattaa 4200 gttggttaat ggcaaagaag gtgaatccaa caaaacacca ccagttcact tgaagatgtt 4260 ggataagatg attagcccaa accagtatgt agttaacctg tgcttccgtg gtgcaggtaa 4320 gactgctgtg ttcatggaat actttacttt attcctggca gtgttcggtc acttacctag 4380 cctgggtaaa gtagaaggaa tgatttacgt atctgactca atggataacg gtgctaagtc 4440 tgcacgtaag aacattgagt ttcgttataa gaatagtgag ttccttcagc aatggatacc 4500 tgaagctact tttacggata acctgttaga gtttcgcaat gtagaaggac atagacttgg 4560 tgttaagctg tttggtgcta agacaggtct tcgtggtacg aagatatacg gtaaacgtcc 4620 aacactctgt gtactggatg acttgattag tgatggtgat gctaactcta agacaagcat 4680 ggaagctatt aaagataccg tctataaagg tgtgaaccat gctcttgacc ctacacgtcg 4740 taaagtaatc ttcaatggta ctccctttaa taaggaagat attatcattg aagcagtaga 4800 gtctggtgca tgggatgtca acgtatggcc tgtgtgtgag aagttccctt gtagtaggga 4860 agaatttcaa ggtgcatggg atgaccgttt ctcctacgac tacatcaaag cccaatatga 4920 catggcagtt aagacgggta agctggcagg cttctatcag gaacttatgc tccgtattag 4980 ctctgaagat gagagactgg ttcaggatag tgaaattaga tggtatagca gacagcaact 5040 attaaggatg aagtcctgct acaactatta tattacaact gactttgcta catcggagaa 5100 acagaccagt gactatagtg tcatatcagt ttgggcttat agttctaatg gagattggtt 5160 ctgggttgat ggtgtggcta atcgtcagct tatggataaa aactttgatg acctgttccg 5220 tctggttcaa gaataccaac cacaaaacgt tggtgtcgaa atcacagggc agcaaggtgg 5280 attcatttcg ctccttcaga aagaaatgat taaccgtaat gtcttcttta actttgcatc 5340 ttctgaaggt ggtaagccgg gtatacgtcc tgtaacctct aagctgtcac gctttaacct 5400 ggtagttcca tggttcaaag ctggtaagat gtacttcccg gaagagttga gagattcaac 5460 tattatgggt ctgttcatgg gccagattaa actagctacc attaatggaa tcaaaggtaa 5520 ggatgactgt attgatacta tctccatgct gggttatctc aatccttgga aaccacaagc 5580 aggtatgact atggtggata ataagggtga cccaatgtgg gatgatgaag aagaagatag 5640 tgttaacccc ctacgttcat acattgtgtg aggaaccatg cagaaattat cggaagtata 5700 ccgtggcttg gcactaagta ccttaaaagg tactggtgca gtcactgatg acagattaga 5760 tattgaacca gatagtaagc cagagatatt ggctgctatt aatgaaggac tggtacgact 5820 gcatagtcgt ttccctctga ggactaatag ctgcattgtg gagatgaagg aaggtcgtac 5880 tgattatccc cttcaatcca aatatgctta ctccagattt actaagccta ctcttgagat 5940 tcaatatcca tacatcatgg atgggttcat gaaacctttc caggatgacg ttattaaaat 6000 cctaaatgtg tttgataact cagggaatcg acgtagactg aacgacgact cagatcctca 6060 tgcaattttc acccctcggc ctgatactat tcagtgtatg cgacctcgac actttgaggc 6120 acttaacgta acttatcaag ctaagcaccc agtacttacg ggtgatgaag aacaggaagt 6180 tgacttagca gatacgctaa tgacagcact tcataactgg gtaggttatc gttaccacac 6240 tggtttgaat actcctgaag ctaacgctaa ggcagcagag tatctgcaaa catatgaaag 6300 catctgtggt gaggttgttg attacgacct ggctaatgga agtatttcaa ttaccgaaac 6360 taaatttgaa caacgaggat ggcgatgaac gcacataccc cctttgatgc aaaacaggat 6420 tggaccaatc cttactgcca gaacagttcc aatgacccaa tggtagatgc actacttggt 6480 aatgcttacc atgtggttcg aactgtttac tgcaatctag gtaaccttaa actcatttat 6540 gatttcttga ataaatatgg aatggtgtta ggtgttcaat cagaaactga actgaaggcc 6600 atgcctacca gtgcatctta tgtacgactg tatggttttg ataatactct taaaagagtt 6660 gttacagact atctgtatgt agagggtgac cgtacaggtg taattccgga tgactcttca 6720 gctactggtt cctggattct ggttgccact tctaattcag acagtggtgg agatgatggt 6780 gaaggtaaag catcaccacc atacattcca tactcatata ataatggttc tgctatcggt 6840 ggtgaaacta ctatcccagt acctgctggt acggttggtg taccgatgat tgtaattggt 6900 ggctatacca acttggttgg ttatggtttt acttatgatg catctacact aactgttact 6960 ctggctcaac cattggaacc aggtgatgaa gtgcacctgt tcctgactgg tactccagca 7020 gttcctaata atcctaatgt gtctgactgg gttcagatca actggctgta caacggtgga 7080 tatgcttcag gtggcgagca agtaattgct attccttaca catttgaatc agtatcggct 7140 atctataaga atggcgaacg ttactatgca ggtttagcag ataagtctta cgcagttgat 7200 gctgctaacc aacgtatcct attgactgag ccattagcta ccaatgaccg tctgattgtt 7260 cagattggtg gtgaatccac tactctcatt atgtctgacc gtactgttca ggaagtagct 7320 cgttctgcta acgtacatga gaatgatgtc attctgagta caaataccac tcagtatttg 7380 aatggtatga aggtagtata tgatgtggta gggcagaaga tttatggtct tcccactcta 7440 cctgctaacg tttacatcaa ttctgtatcc aacggtcagt taacttactc accagggaat 7500 atcactgtag acctggttcc tactccggat tcttatgaga atctggctgc acctaagggt 7560 gctggcgaga ttgggtacga cccagcagaa ttatatgatg atggaactgt tgggggaatg 7620 ttggaagacc tcactgaccg taccttgtct atggatgact tttctggctc agatgtgggc 7680 attaagatta acgctggatt agattttctc cgttcgcaga acaccaccta taaagtggga 7740 ggacgtctca atctaccacg tagacaaatg tcgctagata ccccaatagt gtttgaccgt 7800 gttccagcag gtgaaggcga tacgggggat gaatacttaa tctctggttc aggtaagggt 7860 agcactcttc ttgttgctgc ttctggtttc ccggcaggaa gtgcaatctt aaatactaat 7920 ctaccaagtg gtaaatatgt tcaaggcttc aagttgaagg acttaggaac caaaggtgga 7980 tacaacgggt tgcgtgttga aactgcatct cgtacaacca ttgatagcct taaggtatct 8040 actgctacat cggatggtgt gtatatcggt aatagttggg ttaacgtcta taaccaggtt 8100 cttgctgacc aatgtactgg caatggtgtt aacttctcag tatcagcaca gaaaaccagt 8160 accaccaccc ttgcagggta tcaattgaag aatggtggca atggttggcg atttgggttt 8220 atgaactact ctgctgccat tgctccagca tctgaccaga atgctggaca tgggtatgct 8280 attgccaagt cggaaggttt tgttatggtt gctcctggtg ctgagagtaa taccggtgcc 8340 ggtattatgg ttgaagcatc aagcagcctg ggagaaaaca gaagtattgc tattcatggc 8400 gccttttgcc acaacaatgg ttcaggtact catgcaaacc tgcttcatgc aattagtgca 8460 cagaatacca tcaaccgtgt tcgaatagcg gatagtacag cccacgctag tattggtaca 8520 accccagata ttattgctga tggcaatgaa actgtggtta ttgtagataa ctgtgttctg 8580 cctaatggtt ggcaatcacg taatggtggt tacattgatt gggtacacca tactttatac 8640 acccagaagt ctggtgtatc agggccggta gcagtatgta acctgagaag tacccaagga 8700 catggtaata actctgaatc tagtactgag tcgtttgccg gtgaagtaac tatagtcgct 8760 agtgttaacc caccttctac agctacacgt cgtattgcta tttataaact gctagtctgt 8820 tctggtgcag atacaggtaa agagtgtgag ttaattaagc agcttggtta cgtgtcgggt 8880 aacttaccag gaacacctag ctttacctgg tcaatcggtt catccaacga actcattgct 8940 acgccgattg gttctgctgc gggtacattc tacttcgaaa ttactactga ttctcaggta 9000 gtagcactta agcgttaaac aaattcaccc ctcttcggag gggtttccta gaaaaacaat 9060 gaggtactta tgaacgaaat gttctcgcaa ggtggtaaag gctctactgg tatccttacc 9120 aataagcaag ccattgcccg taagtttggt gttaagcaga atgaagtagt ctactttgct 9180 gtaggcgtag acttaggtgg ttacaaagtc atttatgata aggctactca gcgtgcttac 9240 tcattacctg tgctttcggt aggaaccact gctgtaagcc ttaatgaaca tgcagtcttg 9300 gttcattcgg caggtacagt tgatttgggt gaactggctg ctgcacgcag agagtttgta 9360 tgcttatctg attcatttac tacgggctta gtagtaaata ctcgaaatga gcttttgatg 9420 cataatggta ttggttatac ctacttaggt tctctacccg taactattgt tgaaggggcc 9480 aaccctgttg gcaacacgga ttggaagtcc caaacggatc ctaatttgcg tgctcagttg 9540 gcatctcagg atggtatgac tttaattggt agtgtacccg acgtaactgc cctggcttct 9600 gttggagcaa cagtagggtc tagtataatg ctagattcgt actcaggctc ttccgttggt 9660 gggggtatta tgattgcggt tcctaatact actcctgtag atgaagttgt aactttcacc 9720 ggtgcaggtg tggtctggaa gcgtaagttc tttgaaggta ctgctacggt atatgatgca 9780 ggctatactg gtactgggga cattgctccg ttcattaaca aggtaaactc tgccggttac 9840 gattgtcttg tacctacatc agggactatt agtgcaccta tcatactgga tgtatctaag 9900 ggggctttag taggagccaa taggtgtacc cttacggaaa tggaaggtgt aacgggagag 9960 tattacttaa ccataatcaa ttctaataca gattacacag cccgtgatgc cattaatgct 10020 actgccctat taacaggtat ttcctttgta ggtaaaggta ctcgaaagat gtgtttgggc 10080 agtagtactg gaggggagat agcagaatta cgtatatcta actgtgggtt tatatctacc 10140 gcaggtattg agtttaaaga taatgcatac cgtatcctgt ttgataagtg cactatttct 10200 cgcagtttta ctaactctgt aatctttaat tccccggcta atgctggtga ggttataaaa 10260 ttcaaccact gctggatggt tgataatggg ggtccattta catttgagaa tgggcagttc 10320 atctttgatt catgctcatt accagcaggt aaaaaggcag gctactttga tccagtagtg 10380 gcattaagtg ataatgctac cctagtattt gctaacggta atattgagta tcaacccggg 10440 cagagctttg taggctttac tgtgagtgga agctcacgcc tcagtattaa agattctact 10500 attctgcttc cggaaggcta cagtacagtg cctattgtta gtaatggtga cggggtagtt 10560 agtttaaata actgctcatt gcctctctac ggtaacacaa cgattgctac tggatttccc 10620 acaagacagt tgataggcgg tgcaagtaaa aaagtaatgt ccagagggtg cttccctcgt 10680 gcaggattta ttacaactaa ctggaatcta gggagcattg taagcccata tattaatagt 10740 attagtaatg gctcaggaca gtttggaaat acatctaact ggacactctc gcaaactgga 10800 acaggtgctg tcactgctac tacagcaaac gatgttccta acgatttaat gtttacaact 10860 tcttttgttt tatctgtacc atcagcagat gcagcagcta acttcaccca aacaatcatt 10920 gattgtgaac cgggtcgtta ttttcagctt ggtttttggg ctaaaaatac aacaaccacc 10980 ctggcgtcaa ttagattcct ggaccagcaa ggaaatgctg ttgcggattc cataggatat 11040 atcatcccag tggtaaacac gttcaacttt tacgctttgg tggattgcgt tccacaagga 11100 gcctacaaag ctgaaattaa ttttaatgtt tcttcagttg ttgggggcgt cgtaatacac 11160 aatgcagttt acggattgat ttaattaaaa ctaaggccca gtttgggcct tttcttatat 11220 agagttactg tttgcattac cctaaccgat actgctgtta gggtaattac ttgcccggat 11280 atgttaaaca tacctaactg aataccatcc accatgggtt gctaccagac actatgtctg 11340 gatgtatccc atcatactaa gtattatcta agagtcatct tatgatatgg ccctgttggg 11400 gaatctaact acatcactac ggtaatttta tgaatgaatc aggtgaactg cttctagtca 11460 gactggagga acgattgaag actctgtttg agaaccagac aagggacagg caggatcgtg 11520 agaagctgga ggaaactctg gtagaactac gggattcaat caatgacata ggcaatagac 11580 taaaaaatgt ggaggatagc ttagctaaga atgaacctac tattgaagag ttcatcacca 11640 ttaagcataa agttgttggt gctggaattt ttggtaagtg ggtgtgggct ggggcaggtg 11700 caattattgg tgtattggct gctgcaagac gggagatatt cgcatggttc gcaggctaaa 11760 aagaaaagta gagttagtac ctaactggaa aagatgctgg aagtgggcat ccatccagat 11820 tagtacgctc gggttaatta tgttttctac catagatatc attcaaccaa tgctgacagg 11880 attacctcgt cacatcctgg aagatattcc ccatggttcc aatattgcaa tcgcgctgtt 11940 tgccttaaat attgtaggca gattaatacg attccgatca aaggaagatt cacatgaaag 12000 ctaaacagaa acttgctacg aaaggtggtg cagtgggagg agttgtcgct gctatcctgg 12060 gggcagtgtt ttatatggaa gggggatatg taaataatcc tcgtgaccca ggtggtgaaa 12120 ccaatcatgg tattacccaa gctgtagcta aatctcacaa agaagttctg gctactgagt 12180 atggctggga tggttctatg aagggtttat ctaaagagat ggctgctgag atatacattg 12240 atgattacgt acttaagcct aacttcgtag ccttcgctga tatatctcct gctgtaacac 12300 ataagctggt agatgctggt gttaatacgg gtgtaacccg tccggctaag tggttgcagc 12360 aatctcttaa tgaaatgtcc cgtgatggca aagactaccc taaaatacag gttgatggta 12420 aagtcggtac aagtactgtt aatgcatata aagcattaca gaaaaaacga ggcaaagttg 12480 cagcatgtca ggtaatgatt aagttacttg atgctaaaca acttaaccac tacacctcat 12540 taaacatgcc agactttacg tatggttggg tagctaaccg aataggcaat gtgccactgg 12600 aggcatgtaa tgaagatgct aatctctaaa ggttggcctt atcttctggt ggtggtcctc 12660 ggggccacca tttacttttg gggtaatttc aatggacagt ctactgttca aaagaagtgg 12720 gatgcccaaa aggttgaaga tcagaaggca ctacaaaaat tacaggacaa atacaatgct 12780 ctccaaagaa accatagtta cgaagtcggg ttactcactt cccggttgca gacggctgag 12840 agtaattacg caagcgagct tgctcgcgtt agcagtgatt atgacagccg gatgcaacag 12900 tctgaaagac gagcatcggt atataaacgt caagccgaag ccggaacctt tgagtgcaga 12960 agtcttgcaa gccatgcagc cagactcgac aacagtcttg aagaaggcag acgtttggtt 13020 gaagaactcc gggcaactgt tagactccgt gacagccaac taattgagtt gggtaaacag 13080 attcaggctg accgtaaact ttttgaacag gaataactat ggaacaccaa gacactttta 13140 agcctttacc ggacccggct caatcagaga agttaacgga ctggaagaag gaaccaagta 13200 tccaattact gaagggtgat ttggaatcag ctaaacctgc tcacgatgca atcatggctc 13260 agattcgtga gtggaatgac ttgatggaag tcaaaggcaa ggctaaaccc ccaaaggtta 13320 aaggacgctc acaagtccaa cctagactgg ttcgccgtca ggcagagtgg cgttatgcac 13380 cattatctga accatttctc tcatctaata aactctttaa ggtaacccct gttacttttg 13440 aggatgagtt agctgcacga cagaatgaat tagttcttaa ctaccaattc cgtacccagc 13500 ttaataaagt aaaactggtg gatgattacg tacatagtgt cgtagatgat ggtactggta 13560 ttgcccgtat tggttgggaa cgtaagaccg ttaagattaa aacagaaaca ccagtcttcc 13620 agttgtatcc aattgagaac caggaacaag cagatattct tcagcaggct ttacagcttc 13680 aggcagaaaa tccccgtgag tatgacgaaa caatgccgga agatattaag gaagctgtta 13740 actacttcaa tgaaactgga gaagctactt atgcaatcca gactggagtt actgaggtag 13800 aggtagagaa ggcactggtt aacagaccta ctgttgaaat gcttaatcct aataacgtag 13860 ttattgaccc gagttgtaat ggtgatttgg acaaggctct gtatgcagtt atctcgtttg 13920 agacgtgcaa agcagacctc atgaagaaca aagaccgtta tcacaatttg gataagattg 13980 actgggaaag ttccagtcct atgactgacc cagaccatga aagtaaaact cctggtgact 14040 tccagtttaa agatgcacta cgtaagaaag tagtcgctta tgaatactgg ggattttacg 14100 acattaatga tgatggttca ctggaaccga ttgttgctac ctggattggt tctactctta 14160 ttcgtatgga gaagagccca ttccctgatg gtaagttacc tttggtagtt gttccataca 14220 tgccacgtaa acgtgaactc tacggtgaag cagatgcaga attgttagga gataaccaag 14280 caattcttgg tgcaactatg cgtgggatga ttgacctgtt aggtcgaagt gcaaacggac 14340 aacgtggtta tccaaaaggg atgttagata cccttaaccg tcgtcgatat gatgatggac 14400 aagactatga gtataaccca atgcagggta atcctagtca ggccattatg gaacataagt 14460 tcccggaatt acctcagtca gcaatagtaa tgactcagat gcagaaccag gaagcagaag 14520 cactaactgg tgttaaagca ttctctggag gtgtaactgg tgcagcttat ggagatgtgg 14580 ctgctggtat tcgtggtgca ctcgatgcag catccaaacg tgagatggca atccttcgtc 14640 gattagctaa gggtatggca gacattggta ctaagatttg tgcaatgaat gccgtattct 14700 tatctgagaa ggaagtagta cgtattacca atgaacagta cgtagaaatt aaccgtgaag 14760 accttaaagg taatttcgat attgaggttg atattaatac tgctgaaatt gataaccaga 14820 aatctcagga cttgagcttc atggttcaaa cgttaggtaa tacagttgac cagactatta 14880 cattatctct cgtagctaaa attgcagaac ttaagcgtat gccagacctt gctcatgaat 14940 tacgtacctg gcgaccacaa ccagacccta tggaagaaca gcttaagcaa ttggcaattc 15000 aaaaagcaca gcttgagaat gaagagttga aaagtaagat tgcactcaat aatgctaagg 15060 ctaaagaagc tatttctagt ggtgacctta aagacctgga ttatctggaa caggaatctg 15120 gtactaaaca tgctcgtgat atggaaaaac aaaaagcaca atctcaagga aaccagaacc 15180 ttcaaataac taaggcgttg acaacaccta ctaaagaagg tgaaactacc cccaacatat 15240 ctgctgctgt cggatataac gctttgacta acgggaactc tttacaggaa cgtgacttag 15300 ctgcacagca agacccgact tattctctta gttcccaatt ttatgaccct agccaagacc 15360 cagcatcggc tcttggtatg aacttataag gcagaccttc acatgagtaa agaatcaaca 15420 atcgcaggac tggaacatcg actggaagct gctaaaggtg cagttgcaca cgcagaggat 15480 gtacgtaaac ttctggagaa tccactgttc cgtaaagtaa tccttcgaca gttctgtgta 15540 gaagattgtg cacgttacgt gcaggagtct ggtgacccac tgcttgaacc gaataaccgt 15600 gcagatgcac ttaacatggc tcaagctgct ggtcacttac gtcgttggct cgacctcgcc 15660 attcgtatgg gtgaaaatga agctgacgtt attcttcagg tagaagaaga actcgatgca 15720 gttcgtgctg aacccgaaga cgaataatta accggagata tttcctatga ctacggaagc 15780 tgcaaccaca gcttccgaca ttctcgcaat gtcggatgat gagattctga atatggaagc 15840 cccagctatt attgctgagg aagatacttc cactcagaac aacccagaaa ccaacggcgt 15900 acagactcct gatgaagaag ttgacacccc tgctgttgaa gacctaccaa ccgaagaaac 15960 ctcccccgaa actgacgcag atgaagatga ttcagcaaat tctttaactt ctgataaagt 16020 tgatgataaa gttgttgaca cagaagttga tagtaacggt aagccgatta ctgaagctga 16080 accttctact gctgaaccag gccaggaaca gaaagaagaa ggcaaacagt ctgaaggtct 16140 gcctgctgac ttcaactata aggaaggtta tgagaagttg atggctcctt ttaaagctaa 16200 cggcaaaatg attactcccc gttcaccgga ggaggccatt agcctgatgc agatgggtgc 16260 taactatact cgtaagatgc aagaacttca gccgtaccgt aaggtaatgc tgatgttaca 16320 gaacaacggt ttaatggatg aggaaaaact ttctttcctg attgacctgg ataagaagaa 16380 tcctgaagcc attaaaaagt tgttgaaaga ctctggtaca gatcctctgg actttaatcc 16440 ggaagaggaa attaactacc agggtggcaa acaccgtgtt acagacaccg aagcagattt 16500 tgcaaccgaa attgacgact taaagtctac tcaagaagga caagctacat taggtgttat 16560 tagctcgaca tgggatgctg ccagtaaaga tgctctttat cagaatcgtg gcttactcca 16620 caccattcac gaacagcgtg agaatggtat ttatgacacc attgctaatg aagtgaatcg 16680 tcttcaggtg ttaggtcaga ttccggtagg tactccgttt attcaggctt ataactacgt 16740 tggtaacctt cttgcacagc agggagcatt taaccaagtg tctaagcctg aaccagtaca 16800 agcagttaaa ccagcagttc agccggtagt gcgtgtagca caacctaagc agactctggc 16860 taacagtgag caagctaaag cagcttccct taatcgggct gctacacgta aagcaacgcc 16920 tattgtaaac ccactcgcta tgagtgatga agatttcgct aaactcccag taccgggtag 16980 tctttaaaca ggaatgagat gatatgttaa actataacgc tccaattgac ggtcagaaat 17040 ctagcattga tggtgctggt tccgaccaga tgaataccta ttactggctg aagaaggcta 17100 ttattcagtc tcgtaaagac cagtatttta tgcctctggc taacaccgtt aacatgccga 17160 agaactacgg taagactgtt aaggtgtacg agtatgttcc tttgctcgac gataagaaca 17220 ttaacgacca gggtattgat gctaatggtg ctaccatcgt taacggtaac ctttatggct 17280 cttccaaaga cgttggtaac atcacttcta aactgcctct gctgtcagag aatggtggtc 17340 gtgttaaccg tgtaggcttt actcgtctgg ctcgtgaagg ctctattcat aaattcggct 17400 tcttctacga atttactcaa gagtccctgg actttgattc tgatgaccaa ctgaaagaac 17460 acctgtctcg tgaactgatg aacggtgctg tacagttgac tgaagctgtt ctccagaaag 17520 acctgctggc tgctgctggt actgtactgt atgcaggtgc tgccgtctct gatgctacca 17580 ttactggtga aggttctacc ccgtctgtag tttcttataa gaacctgatg cgtcttgacc 17640 agattcttac tgagaaccgt accccgaccc agactactat cattactggt tctaaactga 17700 cagataccaa agtactcggt ggtactcgtg taatgtacgt tggttctgaa ctggttccag 17760 aactgaaagc gatgaaagac ctgtttggta ataaagcatt catcgaagtt cagcactatg 17820 ctgatgctgg tactctgatg aatggtgaaa ttggttgtat tgataagttc cgtatcatcc 17880 aggttccaga gatgctgcat tgggcaggtg ctggtgctca ggttactact aacccgggtt 17940 accgtacctc tatggtatct ggtcaggaac actacgatgt attcccgatg ctggtagttg 18000 gtgatgactc cttctctacc attggcttcc agactgatgg taagtctgtt aagttcacca 18060 tcatgactaa gatgccgggt aaagaaactg ctgaccgtaa tgacccgtat ggcgaaactg 18120 gcttcagttc tatcaagtgg tactatggta tcctggttaa acgtccagaa cgtctggctc 18180 tgattaagac tgttgctcct ctgtaatagt ccgaaataaa acaaggggga cataagtccc 18240 cctcttaata aaactaaatg aaccacagga aatatgaaca tgagcattaa cgataaaccg 18300 accactgacg tagaagtgaa cgtacagggc aacgaagata ccgttaacga tattgcaatg 18360 cctagcgaac ttgaagttct taagcaacgt gcaacgttga tgaatattaa gttctctaac 18420 aacatttccg ttgaaaagct tcgtgagaag attgaagctg cacaagtaaa agatgaacca 18480 gtagtagaag aagctgctgt taacccattg ggtgctaagc aggaagctgg tgttaagaag 18540 atgaccctgg gtcagaagat tcgtgcagaa cagactcgac tgattcgtgt acgtatccag 18600 aaccttgacc ctaagaagaa agacctgccg ggtgaaatta tcaccgtagc taacgaatat 18660 atgggtactg tacgtaagtt tgttccgttc ggtgaagtaa ccgacaatgg ttatcatatt 18720 ccgtactgta tctacgagtt ccttaaagaa cgtaagttca ttaacattac tactcgtaaa 18780 ggtaagaatg gcttaccaga cattcgtgca acagaagcac gtgagttctc cattgaagta 18840 ctgcctccgt tgactgaagc tgaattggct cagctggctc aagcacagat tgctgctggt 18900 agccttaacg attaacgtat aagctacagt tcaacacggc tcactggggt aactccgtgg 18960 gccgtttctt tttgaaccaa gaggaatgat tatgtcttgt tctgctgagg tagaagctaa 19020 ccgactccta gaagagttaa ctaagggtga tgactttacc cttcctgata ttgatatgtc 19080 tggtcctgaa tgggatatcc ctggtggaga tgattctcca atctttgggg ctattactaa 19140 aataaccaat gaatctctta ctacccgtga agtaggaggc agtggtacgt ttgattcatt 19200 aatggaatct gctcacaatc accttaaagc tgagtttaaa gctaaccgta ttactggtgg 19260 tgaatatacc aaagcataca ttgctatgat ggaatcatgc atgagtaatg ctgttcagtt 19320 cttacttgga cgtgaccagg catactgggc tgctgctatg gcacagattc aggcagttac 19380 tgctcgtgtt caactggcta cttctaaggc tcagtttgta ctggctaaga ttcaggcatt 19440 gtctgctaag agtgaatacg ctcttactaa gatgaagatt gctactgagt ctgagacgta 19500 ttgtgctgca ttgtttaatg ctaatcagat gttacctcaa cagcttaaat tgcttactga 19560 gcagacagaa gcacaacgtg cacagacact ggatactcgt agtgatggtg ctactgttac 19620 tggttctgta ggtaaacaga aagagttgta ctctcaacag attacctctt accaacgtga 19680 tgcagaagtc aaagcatcta agttgtttac tgatgcatgg attacacaga agactattga 19740 tgaaggcttg aatcctccta atggtttcac taacgcaagt attgatacca ttttgaccaa 19800 gctgaagact aacaacgggc tgaactaata tgggcttatt cagtgggaag actaaagtat 19860 acgtagcatc ctctgtctat aacatggcag gggatataca caaacgtcct aactatatga 19920 agactgtagt catcggtaac attgtttcca atacaggatt cactatggca gacactatct 19980 ctgatagtta tctgaatgga cctggtattc gtatgcgatt gttctccagc tggagtaaga 20040 accactatga ttcagaagtt ggtatggctg gttcttcgtt gggtgtattg gctaagattg 20100 accctactgt tatagagggt caaattacac cacctgctgg agagtctgtc tatgttcagg 20160 cagcagaaat tggctttgct gactttgagc aatggtgtga ccaatatctt tatgaaaatg 20220 ctcctagtcg aatcatggaa cgattcgaca tagacatcaa tgaagatact aatgaaatta 20280 ctatgacctc cctggatggt ggttctacta ttaaattcac acctactaac tttgaaccag 20340 gtgctttgta tctctatgct gattactctt tctataaatc tccctctacc aatccaccgg 20400 tagtaggacc gactactgtc tatgatagtg agggtgactt accttccact ttgctatgga 20460 ctaccatatc aagtgataca acagctaata caactaacct tactaagacc atacatactc 20520 actctgttta ctctgatggt agaccagatg aagacaatac tgttactgaa ccaagtgtgg 20580 ataactggaa ctcttacgtt aaggtttacc gtaaaggatt cactgagaaa cccgatgatg 20640 taactgtagt tgtatctgac agggtaatga ctcataaaaa gtttggtgag attcaatcca 20700 gcactactgt aactaccaac gtagttgata taggtggtgg tgttactcgt actgatacaa 20760 ttactacaac cacagagaca ctggttcgta agtattcctc ccagactact cgtacagata 20820 cagagatgac tgctgttggt acacctaaga tgcttatcta taagcagaac tctggtaacg 20880 ttgcactaga ctcactgttc gatactgagg ctaccgataa tcgattctat ccatttattc 20940 caatcaggaa cgataaacaa tgggtagaga atgacccaat ctatccatac tgtaagaaag 21000 ctctttataa agctaccggt ggaaaaattg ataaggtagt aacagagctt aagaagaatg 21060 atgatatagg tgatattcag tacatttatg gcacatttgg cgtatctctt aatactcctg 21120 aagatactgc taaggaatac atctaccgtt tctttcagat ggctactgaa gcattcccac 21180 ctgacccaac ctatccaacc ttggaggcag tgattgcagg ttatcaggca gctaatgatg 21240 cagttgatgc atatgtagaa tggtggaata ggactgaagg gcacactatt ggaactcctc 21300 caccactgcc agaataccca gtcataccta agagagaatt tagggtacat agtaataagc 21360 attacaagta tgacatgacc attggttgga attacgtatc tgaaactacc cactcagggc 21420 aagcatggtc tggtgctaag caaggacaac ttcgagccag gtatgcaggg gacataactc 21480 ttactcgcaa gaacatacga actgctagta actccggttc agctaagaag ttagaggtta 21540 ccactacatt ctattctatg caggagtatg aactgctttg gcaggatggt aataacactt 21600 accgtaaact tagagtactg ggtctaaatc acaataacag ggtatataag aataagtcag 21660 tgcatattga tgttgccgaa gcaatgggtg atgcagagga gagtgggttc attattccac 21720 tacatactaa catctatcgt tcaatgtcac tgattcgaag tactcagcta tccactgcct 21780 gctcctactt agtgatgaac tcatataaga aggttaagca gaagtggtat caaacatctg 21840 cctttaagat tgtggttgtt gtggttgctg tcgttgtatc cgtattcact atgggtactg 21900 gtggtgcagg tatacttggg gcatatggag cagttggggc gtcactcggt tttgttggat 21960 tagctgctgt aatagtaggt gctgtagcaa actccattgc tgcaatgatt ctggtatcta 22020 ttatcactaa agtatccact tcactctttg gtgataagct aggttttatc attgctgctg 22080 ttgcttcaat ggtagctatg aatgttggta ctgctctatc tactggttca tccttatcta 22140 ccttagccag tgaaatgatg aatgctcaga acatcatgca gcttaccagt tcagtaggta 22200 atggtattag ccagtatatt aatgcatcta cggctgctac tattcagaaa gcagagaaag 22260 taatgcagca gtacaatact gatatgatgg caatcaataa gcagtatgaa gagatgtttg 22320 gtactgctgg gcagggtgta attgacccta tgcaatttgt gtcaatggag tcgatggatt 22380 ctttcctctc acgtactctc atgactggtt cggatatagc tgacatgtct ttaaacatga 22440 ttggaagcta ctctgatatg actcttaata ctgaccttgt ttaacaggag aatccctatg 22500 gatttgtcat tcttaacagg caaccaaacc ccacagccag ctgctatgtc ttggatgtct 22560 aataacaatc agaattttaa taccccagct atgaactaca atccgggtgc agctattggt 22620 atgaatgcag gtacaggagt agcctcccct acttccttct tgtctggttc agctaatcag 22680 ttgggtatga atgtacccac cttccaacta ggactcggtg cacttggttc cttagctggt 22740 atctatagtg gtttccaggc taacaagtta gccaaagacc agctgaactt tactaagagt 22800 gttactaaca ctaacctgaa taaccagatt aagtcttata acactgcact ggaagaccgt 22860 gctcgtagcc gtgctacagc agaaaatcgt gaccagtctt cggctgatgc ttatattgca 22920 gccaataaac taacccgtta ataggaaacc accatggctc agataacgtg gagaaatgtt 22980 gatgcaccta acttctctgg agttggtgac agcattcgca catttggtag catgattggt 23040 aacgccacct ccggcttaag tgatgcactg ggtaatttcc agaacgctgc caagcaggag 23100 gctggcaatg ccgtcatgat gaatgctatg cagtaccaag acccgaatga gtaccgtaat 23160 gctttggcat ctggtgcact gtttcagggg gttgatcctt cactggtaaa tcagcgtact 23220 ctccaaaacc tggatgaacg agcaggtaca ttactgacac aacaaggaca gcagggaacc 23280 aatgactaca ttgcttatcg ctttggtcgt ttacaggata ctaacactgc attagataat 23340 gcttccccgg ctattcgttt actgtctgag gcttatcagt ccggtgacca gaaccgtatt 23400 aatgctgcat taagtcagac ccgtgatgca ctgtctgcac tccctgctga ccaacaactg 23460 gagatgatgg gtcgtctaca aggtcagggt ggtcaggcta ttaatcaggc acagaatcgt 23520 tttgatttag gtgttgctca acgtaatgat gctgacagtc aggcagctat gggtgtaatg 23580 tcacagatta cccgtggtgc tgagaaccct aatgatgccc gtctgttggc agaagcatac 23640 agtaagaact tgtccccagt tgcacaggca cgtttacaga gtttactggc tagtacttac 23700 ccgggtgtat acggcaatgg cgtaggtgct gcgtctgctc ctggtactgc tggtactcgt 23760 cagggttccc cttacgatgt tacttaccag tttgccggta catctacccc tattactcaa 23820 atgagtattg gtgatgtaat taaacaccag gatggtatga agtcgaatca aggtgcttca 23880 cctgttggtg cattccagat taaccaagct actctgaaag acttcgctcc caaagttctt 23940 ggttcagatt ggcaaagcca gcctctttct cctgagaacc aggataagat tggtaaggct 24000 atcttcgagt ctcgtaagaa cggtaacctt aaagatactt gggctgctct gcctaactct 24060 accccaggtg cttataagga tatgacttgg gaacagatta aacctgttat tgctcaagct 24120 gaagtagggg ctgacccact tgctatggtt cagaataatc aaggtaatca ggcagtatct 24180 actctggctc agggtatgat tggtactcgt tctatgcagg ataacactgg tagtcttaac 24240 acagacttcc ttggtactgt cgctgataat accccagtag gtgagattgc taatcgtttg 24300 ctggagggtg attttaaagg tgctgaccgt aactgggtac tgaatcgact gaacgatatt 24360 tctcaacgtg ggaatatgtc acctgctatg gctgctgctg ttatgcaacg tgcacagact 24420 ggtgtaccag agggttatat tagtcgtgct attgatgcag ttaacccatt cattaccaat 24480 gaagcaggta atggtatgcg tcttaatgac cgtcaggtag aacagttaat cgagagtgtg 24540 aaacggggtg aaccactgga aggtagtgtt cgtaaccttg gtcgtgctca agctatgcag 24600 aatattcagg cggcacagac tgcatatgat gctgctgtag ctgcactggc aaatacccag 24660 aataagatta acaccggaca aagcggtctt actgctcttt tacctgcacg tcaggaggct 24720 gttactaaag ctgctgcaat gctccaagct gcacaggcac aagtacaggc tgacccagct 24780 aacctggctc caagaggttt ccagtcacag gctagtgtgg atagagcacg agccaaggaa 24840 gatgaagaac gtgctgcacg gtacttacgt caggcacaag gactgcctga gtatatgcaa 24900 cccagacaaa atcggtaata ctaataaaag ccctacgggg cttttttctt taactggctt 24960 actgtagagt aagttaccta tatacgatat aagtttgaac aggaaacatg ctatgtcaac 25020 atttgaccgt ctggcaggtt tcgcagacag catcactaat gctaagcaag tcgatgtctc 25080 tactgcaacc tctcagaagc aagctgcaca agggcaaagc cctttccaat taaccccaga 25140 gaatgcttac aatctccaga ctggacgagt aggtaatctt ggaatcggtg cattcgaacc 25200 aggttcactt caggcagatt tcactcaagc ctccccatta gaaatcatta ataagtacgg 25260 taatgagcaa ggtttacaaa ttcttaatag ccgagctaat gctgctgatg ttgtacgtca 25320 ggacttatct aaacaacgta ctaacgcaga agcatttggc gatactcttt ctggtgttgg 25380 tcttggtgtt gctaataccc ttgggggcat tgctgctctt ggtacaggct tggtcaatga 25440 taatgccggg gcatccattg cttccggtct tgactggttg aataaaggtg tacacaacct 25500 acagtctgat gcactgaatg ctcgtcgtaa tgtagtacag aaccagaacg taatatctgc 25560 gcaagagaat gagaaactct ataagcaaga tattgctaaa ggagaaagtg aactcgttgc 25620 ttctctgtct cgtattggac gagatgccta tgattctgtt gctaacaccc tgtctaatga 25680 catggctgct acagatggcc tggctgaagg tgttggttca ttctttactg gcggtccact 25740 tatccgtggt gtatctgcac ttggtaaagt aatggtaggt ggtgataaag ctgttaaggg 25800 tattacccta gctgctgggt taggttcacg ccctgcacag gttgcactgt ctgctggtcg 25860 tgttgctgca cctgctattg caatcggtgg tatggaagct ggtggtgcat accaacagac 25920 tgcttctgaa atcatgaaga tgtcccatcg agaactggca agtaagtctc ctgtttacca 25980 acaacatatt gctgatggat tatctcctga tgaagcacgt cgtcagactg cgtctgaaac 26040 aggtatcata gctgctggct taactgctcc agttgctgct cttactgctc cactggtatc 26100 caagtttgaa cttaacccac ttaaggtagg ttcactggct ggtgctggtt ctaacatgct 26160 gcgtgagact gtagaagaag gtatccagtc tggtacaagt cagtttgcac aaaacaaggc 26220 aattcagggc aatgtagatg ctgagcgtga tttgcttaaa ggtgtgggtg aacaaactgg 26280 tctgggtgca ttgtatggct tcggttctgc tggagttgct caagctcctg gtgcaactgt 26340 taaggctgct ggtgctgccg ttggtcctgc tgtacgtact accctggctg gtgcttcttt 26400 ggctggtaag gcactagcaa aagtagcttc acctattact aacatcctgg ttcaacgtgg 26460 ggaagaagtt gctaagcgta atgaacaagc atcccccgta tctgatgcta cggttaacgc 26520 tgctgcacaa gaagctactg ctcaggcaga acaagctcaa gcaactgttc aggaagcagt 26580 ggatgcaatg gatatttctc cagaagagaa agctgctgct acccagtatg ctgctgactt 26640 aactcaggca atgaagtttg acccggtaga attggaacaa actaacccag caatccgtga 26700 agctgtttct ggttccacta accgtgtaga agctattcag aagatggctg acttggttaa 26760 tactgccgaa gaccctaacg ttcaaatgga agctgcaatc cagatgtatg acaatatcat 26820 gtctatggat agcttcatta accgtgaccc gggtgctttg gctaatctgg aacaagattc 26880 ccctgctgct gcaatcgtag accaattctc cggcctgatg gctaacgtac agaatacccc 26940 taaagtactc cgtgcatttc gtgccatcca ttccatgatt caggaacagg ctgaagcggg 27000 taagctgaaa gctactgaag aagctaatca agcccaagca aacaacattg ctatggctgc 27060 tgatgtatct ccagaagtgc tggatgcaga ttcagtgaac atggttctga aacatgcaag 27120 tgaaggtaag attacactgg ggaatcgtca acgtgctgcc ctgcaatctg ctgctgcctt 27180 attacagggt gcacgagagt tcgacgctaa agcagaagaa ctaggcttac gtcctcaaga 27240 cattgttagt aaacaaatta aaaccgatga gtctcgttct aatgaaggac agtactctgc 27300 gttgcaacat gcgaaacgca ttcgttctgc gtataactct ggtaacttcg atttggcctc 27360 cgcttatctg agcgatttta tgaagttcgc ccagcacatg cagaataagg tcggagcgtt 27420 gaatgagcat ctgatttcgg ggaatgcgga taagaataag tctgttcatt atcaggctct 27480 ctcgccttcc cgtgaatggg tacgtagtcg tactggcctc ggtgtcaatc cttacgatac 27540 caagtctgtt aagtttgccc agcaagtagc actggaagct aagaccgtag ctgacattgc 27600 taacgcactt gctacggctt acccggagct taatgtttct catgtgaaag ttacctcgtt 27660 ggattcacgt ctgaacaagc cagctgccca ggtagttaaa gagttccgtc aaggtggtct 27720 tgatgccact cagtctcaac agactaatga accagtgaat caggttgatg aaactcctgt 27780 tacaaaacag gaaccagtta cccctactgt acagactaaa ccctctgtta gtgaagctgt 27840 taaaacagaa cctactatta aagagtctaa accacagacc gtaaaagaac ctgagaacca 27900 gtctgaaaaa caggatatcg ttgaacagcc tacggaatct gaaagagatt cttatgtgaa 27960 agagaatact atttcacaag atactcttaa taagtatggt gaccgtagag agagtccatg 28020 gctctttgca gatggtactg ttgttggttc taatggtgac catatcagtc tgtctgacgt 28080 atttggtcat gatggttatc gtgacatgtc tctggatact ggtgctattc gttctacctt 28140 ctataaaggc agtgaacaac catttgtatc attgcaactg tttgataatc agaaactgac 28200 tgctgaacaa ttcaatactg ttcaatcttt cgttgaagca aacaatgcac ttattcagat 28260 tggtgtagat acgtctgaac gtaataccaa taacgttgag aaggaagaag tatcactggc 28320 tcaactgaaa gcagactata ccgttggtgg taaaccttta tcggaaatgg aaacagtgtt 28380 ccctgtctat aataatgata agacaccaaa ccagttcctt aaagcatttt ccctaccaga 28440 agagcctaag tctcgtacca ttggttctga atctcctttg actgatgtta agaaagcact 28500 gtcttctgct gctcgctttg aagcattcac tcaaaaagaa gataacgctc tcacaagtga 28560 tgtgattaag cgttatcagg acttatttga gtttggtgaa actctgaaga ctactctgtc 28620 tgaccgtctg gctaagttcc ttgctaacaa gaacgttggt aaacgttttg cggaaggtac 28680 tgaggctaac cgttgggtag gtggtaagtt acttaacatc gtagagaaag atggtgacac 28740 ctttaagttc aatgaccagc tattagaaac tgctgtactt gctggtctgc aatggcgatt 28800 gactgctaca cagaatgctg ctgttaaaga catgaaagac gtagctgcta ttactggtgt 28860 ggaagcatct ctgctaccag aaggtattct ggctgacttc gagaatgctc agaccctggt 28920 tgaagctact aactcactgg ctcaaaagat tgaatcctat tggggtttga atcgtaatcc 28980 taatgcacct ctggggtata ccaagggtat cccaatggca atggctacag agattctgtc 29040 ttcccttatt gagatgggtg aagttaaaga gtccatgtta gatgtgtctg agattgaccc 29100 agaatctaat aagactgttg gtctgtatac cattgagaag ctggatgata acgatgccat 29160 taataaattc cctactgcta ttgaggaaac tgtcctttta gaaccagtag agaaattgta 29220 tctgggtgat gacattcctt ccgtggctca aactcagtta cgtaacccgg ctgttaagaa 29280 taccccggaa cagaaagctg ctctcaaagc agaacaagct actgagtttc gtgtacatat 29340 gccgatggtt aatttctatg aagcattggg ttgtgacaac attctggagt taatgggtgc 29400 tggtgctctt aatccagaat tgctgaatgt gaatactgct aagtctctgg aaggtaaaaa 29460 cctgtccgtg tccatggcgt atgattcctt gtttggtgta atcaatcaaa ttaaggaaca 29520 ggagaatgga ctggatacac ctattcacta cggctacaac atgacccgtg taggtcgtat 29580 gcagatgctt ggtaagaaca acccacaatc cagcaagctg gtacgtgaag caatcctacc 29640 aactttctct accatcgact taagtaatga aaacagtcaa acgttctctg acttccagct 29700 tggactggct caggcattgg gtatcaaagt tcataaaatg tcccgtgaag ttatgtcgga 29760 tgagctgact aaagctctgg aaggtaaatt gaaacctgcc gttgatatga tggttgagtt 29820 tgataagtct gggcacttac ctactgatgc tgtggatatt ctgaagacct ctttgggtaa 29880 tgataaatca tttgtagctc tcatggctct gatggagtat gcccgttact tgaacagtgc 29940 tgaccgagcc aactttaata ctccactgta cgttgaagct gatggtgtaa ccaacgggcc 30000 aatcaacgca atggtattaa tgactggtgg taagttcact tcagactgga ttaagaatac 30060 tgctaagggt ggtttgttct tcggtaaagc tggcaagact atgaacgagc atcattcgca 30120 tgaggacagt gttgacctgt atgaagcatc cactaatggt ctacaacagg cactgaatga 30180 attacgaagt acttatcgta acaacgttcc tgttatgaac cagatgaacc atctacagaa 30240 attaatggac ctgttcatta aagatttcaa tcttaatgaa gatggtactc tggacctgaa 30300 acgtggtatc gctaaaaacc cactgaccat taccatctat ggttctggtg ctcgtggtat 30360 tgctggcaag atggttagtg caattaccga tgtcatctat gaacgcttca gtgacgttct 30420 gcaagcccgt gctgctgacc ctagcatttc cccagctatg gcgatgtttg gtaaggaggc 30480 tgcgtctgag gccgatgctc aggctatgct ggatactttc cttacttcta tggaagcact 30540 gactggtaat gttccggtta tgcgtaaagg tgagttgtct attcagcagg tagatggtgc 30600 tctgactggt aagttagacc ctcagaagtt tactgtatca ggtaatgctc tgaagaactt 30660 gcaggagaat atgctccatc tgttcgttga accaatgcgt actggtatcc gaaataccgt 30720 gggtgaaggt ctgatgtact ctactgagaa tttgcagaag gctacccaga ttcaatctct 30780 ggtattgcag gatatgttcc aacaggctgt acaggctaag ctggcagaaa aagaaaaaga 30840 cccaacatgg aagaagggtg attttttaac acagaaagaa ctgaatgaaa tccaggaatc 30900 attatctcca ttggctccaa tgattgagac tggttcccag actttctaca ttgctggtag 30960 tgagaatact gatgttgcta accaagtatt ggctaccaac ttagatgacc gtatgcgtgt 31020 gccaatgagc atctatgctc cttcacaggc aggtgtagca ggtattccat ttatgaccat 31080 cggtactggt gatggcatga tgatgcagac cctttctact atgaaaggtg ctccgaagaa 31140 taccctgaaa atctttgatg gtatgaacat tggtatcaat gacattactg atgcaagtcg 31200 taaagctaat gaggctgtat atacttcctg gcagggtaac cctatcaaga atgtttatga 31260 ctcctacgct aagttcatga agaatgtaga cttcagcaaa ctgtctgata aaaccaaaca 31320 ggctatcgct aagtctgctc tggaatatga ccagcgtgaa ggtgctactg atgacctgtt 31380 acgtgttggt gctgaacaga ttgaacgtaa cctgcgtaac attgctctgg gtgtagatat 31440 tcgccacaag gtaatgaacc aggtacaagt cactgttgac cagatggctg ctgttggtgc 31500 tcctattgaa gctatctctt gaagaggaaa taagctatgt ctaaagtatt cagaagtaat 31560 cgcaaagcaa ctgatgaaga catcattcgt atgaatgctg ttggtctatc cctcgcaact 31620 atcgctaaga cgctgggggt tcaccccact acggttactc tgcgattgcg ttctctaaat 31680 attgaaccag ccgatacacg tcggacgttc atggaaaacg tattacaacc tttaccaacc 31740 catgtggctg attggctatc agaacaagtt ggtcctgctt atgagattcg ctcatatgta 31800 agagacttga ttctggaggc atataataat cgccacctta accaagagag tgagcatgac 31860 aagttcatcc gtttgtacgc tggcaaatac ggaagcctgg ttccggaaag cagtaccaaa 31920 tccaacgagt aagaacatta gtacccagat tggctgccat ctggaagaag tatgtgaaat 31980 gttagatgag ttaaccccat cctgcgagga tagtatgcaa gtgttagccg atgcacaggc 32040 tgctttgggt aaattatctc tgctaatgaa atcaaaccac atggctatct tcccagcgaa 32100 tagcaatcgc ttagctttgc tggattcact ggcagaccag attgttacag caactggcgt 32160 cggtactttc cttgggatga atgtccctgg agcattggct gaagtcaatc gctcaaacta 32220 ttctaagttt gaagatggga aacctgtctt caatgagaat atgaaagtta tgaaagggaa 32280 agactatact cccccagatt taacccctta catctaaccc tctacggagg gttttttact 32340 ggagatttta atgttttcca aacctaccaa agccccactg aacaaggggc aaaaagcggt 32400 tgcgaaggag ttcttcgact tcctgctcaa ccctaatgct accgaattca atattagtgg 32460 ccctggggga actggcaaga cattcctgat gtcgcacctc attgatgaca ctatgcctgc 32520 atatatggaa acttgctccc ttatgggaac caagcctctg tataacgaag ttgttatgac 32580 tgcgaccacg aacaaagctg ccgaagttct ggctcaggct actggacgtc ctacatctac 32640 ttatcattcc ttccagggat tgattgttaa gaatgacttt aagactggtg aggctaatgt 32700 cgtaccatct aaatcattca atattaagaa gaacaaaatc atcttcgtag atgaagcatc 32760 catgattgat cgtcagttac ttaagtatgc tcgtgaaggt actcaccagt gcaagctggt 32820 attcgtagga gatgcttctc agcttctacc tgttaaagag aataagtctc cagtgtatgc 32880 aggtaatatc ccaacacact atctgactga acagatgcgt accgatgcac cggaactcaa 32940 agcattgcac caacaattgc gtgatacggt ggaaggtaag acgggcttcc tgcctattaa 33000 gtgtattcca ggcattattg actgggtaca agaggaagag atggagaaat tggttctcag 33060 tcacttcact caacctacta atagccgtat tgttgcttat acgaatgacc aggttattaa 33120 ttacaataac tacattcgtg aggccaacgg atacgtaggt gaatactcca ttggtgagca 33180 gctagtctct aactctgctg ttcgcttagg tgtggataat cgtctgtcta tcgagcagga 33240 cgtaaaactc attgaccagg atagcagtac tcgcatgatt ccagttacag gtgacctgga 33300 actggaagtt cgtgatagta ctctggacct tggctatggt ggtattgtaa gtgaagttcc 33360 agtacctacc gatccggaat acttcaaccg tttggttaag tggctaggta aagagaagaa 33420 ctgggaacct tacttccgtc ttaaagaaac cattccagac ttacgtgcta ctcatgcatg 33480 tactgtccat aaatcacaag gctctaccta cgacacgatc ttcattgatg cagatgacct 33540 ctcaagctgt cgccaacctg atatggttgc ccgtctgctt tacgtcgctg tgtctcgtgc 33600 ccgtaagcga gtagtgttct atggcaatct tgccagtaag tatggtggtc taactttcta 33660 agggaggata tatgcctcag attggttcag cgactattgg tcaggttgcc aatagcagtg 33720 agatagtcaa acacctgttc ttagcagaac tggttcgtct tgatagtgtg ttaaacggta 33780 tcattgataa gaacgaccgt atcaatggta ttgatgtatc ggctggattt ctttatcaag 33840 gtgagttcta tcagcgttct aatgcttcca gacctccgac ctacggtgaa cgattaacac 33900 ttaatccaga actctggcct gcaatggaca agtatctgaa agcctccagt cgtctgatta 33960 tggaagtaca cctcgtgaac cagactgtat atcgcctggt tcgtggttgt atgtcctatc 34020 aggatgtacg tgatgcttta cccgaatgcc tggtagccca ggaccagact ggtaagtaca 34080 aggaactgcc acgtactcgt gaagcagcct ggacacttgc tggtgatcct atggcaataa 34140 aacagtatga gaagattctt ccatctattg agtactatgc agcttcccat ctgattttct 34200 aaggtaaagc tatgcgttac atcacctctc aagatacggg taagtatcct attgctatcc 34260 tcggtcatca aatccgaagg gaggagatga ttaaaaccta cctgctgcct aatgacctaa 34320 gcatggaaga tttcatcttc attgaacttc attctgcccc cggcaagaag aagactcctg 34380 caagggaaat taaagagttc atacagcagg aactgcaaca ggtactggat gatgcagaga 34440 ctcagtacat tatctgtacc gattctgatt acttcaaaat actgactaaa gaagctaaag 34500 cagaggctaa ccttggctat atttgtgact cagtatgggg taagcagaag gttatctatg 34560 cacctagcta caggcaggtc ttttatgacc cacctgtagt gaaatccaag attgctcagg 34620 gtatggatgc attacttaac cacatacgtg ggcagtatgc agaaccaggt catggaatca 34680 ttgagtttga agcctaccca gatactccag aaaagattaa agcctggtta gaccaattgc 34740 ttgagatgaa taagccactg gctatagaca ttgaagcatt cggtttaaag cactataacg 34800 ccggtatagg aacaattaca ttctgttgga gtaagacaca aggcatagcc tttaatgtgg 34860 actacgagcc gattcctggg gctacagaag caccttacgg gcgtatcaac agaaatgata 34920 ttgttcgaaa tcttctacgt gagttcttca ttaagtacac tcaacggcag atgtatcaca 34980 acattagcta tgacgtatat gtgcttatct atcagttatt catggataac ctgattgata 35040 cagaaggctt actgcatggc atggacatca tgctgcgtaa ctgggactgt actaagctaa 35100 tcacctactt agctactaac agctgtgctg gtaatcacct tagtctgaaa gaccaggctc 35160 aggaatatgc cggtaactat gctcaggatg atattaaaga catccgtctt attcctaatg 35220 agcaactgtt acgctacaac ctcattgatg gtttatgtac gtggtacacc tatgagaagc 35280 actgggatac tttagtagct gatgatcaac tagatgttta caacaacatc tttaagccag 35340 cctgtgaaga catcatccag atgcagttaa ccggtatgcc catgaatatg gataccgtta 35400 accaagtagc taaagagatg gaaactgaca ggaaccaggc tctgaaaact attcgtgagt 35460 ctaagctcat gaagaacttc accctgatgc ttcgtcagga atgggtagat gataagaatg 35520 ctaagctcaa gaagaagcaa gtaacacttg ctgattgtga tatcgagttt aatccaaact 35580 ctggtccaca gttacaaaag ctgttatttg actatattgg cttaccggtt cttggtctta 35640 ctaagagcaa gcaacctgct actgacggtg acaccattaa agcactgcgt acacatacgc 35700 agagtgaaga tgttaaggaa ctgctaaatg cacttatcga ctataagctc gtggataaga 35760 ttatcactag ctttatacca gctttcagga atgcccaacc gggaccggat ggctggcact 35820 acctattcgg taacctcaat ctgggaggca cagtctccgg taggctatcg gcttcagagc 35880 caaatctaca aacaattcca tccggctcta aatatgccaa gaagattaag aaatgcttcg 35940 aagcccctcc aggctggata ttttgcggct tggatttcgc ctcgctggaa gacagaatct 36000 ctgcactgac taccaaagac ccacagaagc ttaaggtgta taccgacggc tatgatggac 36060 acagtcttcg tgcatatgct tactttggtg agcagatgcc agacatagaa gacacagtag 36120 aatccattaa ctccatccag cataagtaca aatcattacg tagtgactcg aaggctccaa 36180 ccttcttgct tacctatggt ggtacgtata tgggcttaat gaaaaactgt ggcttctctg 36240 aagagaaggc taaaactaca gagaaacgtt atcacgacct ctacgtagtt agtgacaggt 36300 gggttcaggc taaactagac gaagctgcca aaactggtta tgttactgcc gcattcggtt 36360 tgagagtgcg tactccttta ctggctcaag tattacgtgg gacatgtaag actccgtatg 36420 aagcagaagc agaaggcaga actgctggta atgctttagg gcaaagctgg tgtctactaa 36480 ataaccgtgc tggttcagag tttatgcgta aagtcagagc cagtgagttc aggttagata 36540 ttcgtcctag tattcatatt catgatgctc agtacttcat gattcgtgac aacatggata 36600 ctttgcaatt cacgaacaag cacttggttg aagccgttaa ctggcaagac catcctgata 36660 ttgctcaccc agaagttggt ttgggtgggg aactatcctt gttttaccca acgtgggcta 36720 acgagattga aattccaaat cacgctaccc cagaagaagt tcatcaaata attcaaaagg 36780 cattcgcatg accaaaagta ctaaagaaac tgttgtcaga aaatatcatt ggatggtagc 36840 agcacaggta gtattccaac ttcctaaagt ggatgatggt tccctgctta ccatgaacac 36900 aatgttgctc acagatgaac cttacgtgac ctataaagat ttggctcgtg ccaatcgctc 36960 tctgaaaatc agtctggacc agcgtttcga cacttcagtt gacttgaaag acatcgttta 37020 tctgtctctt agcaacctgg gtctgatgtc tgaacaagag ttccaggcaa acatgattcc 37080 caaggagaaa taatggctaa gctctccggt ggattgaata actggtatgt agtaccagtt 37140 aagcaccctc aacggaaaga gcaagagcca taccaagcag agtgtgagga tattatccaa 37200 gcactgggca tgaccttcga tgaaggttgt gcctttaaag ctctatggcg aaatgctgct 37260 gcccgtatgg gtaatggtaa acctggaaac actgctgttt acgatgcaga gaagctggtt 37320 cattatgcta atcgtattct tgctaaggag aagttagcta gtgagttatt tccggatcct 37380 gctacgaatg taaataccgt tggtagttat tggcaccata caaacaatgg taaacctcat 37440 ttcactaaag aattttcatt cattgagatt gtttataaag ataaacgaga tgaaatttgc 37500 tcgtataact tcaatcagct aagtgaaatt aagtggaact gggttcacag atacaggatt 37560 acttactaat gaagataacc aacaatcatg atgtctcact ggctctggct gtatggctat 37620 tgcatgacga gtaactaatt atgaaacaga ggattgccca tgacaggctt ttacagcttg 37680 ttagttatga ccctatttcc gggattttta ctcgtaggaa taccggaaag gtatctggtt 37740 acctaatgaa gagtggttac gttcaactcc gtgtggatag tgtgttgtac tatgggcata 37800 tccttgcatg gttctatgtg cacggtgtat ggcctacgga tagaattgac cataaggaca 37860 atattcgcca tcacaactgg atagataacc tcagagaagc gacccacaag cagaataacc 37920 agagtgctgt tttatctaaa acaaacacat ctggatttaa gggggtatcc ttttcaaaga 37980 atttaggtaa atacagagca actatttggg ttaacagtaa accaattaca ttaggtttta 38040 cagatgaccc aagagaagct gctgttctct atgatgaagc tgctataact cattatggtg 38100 agtttgctaa aactaataag caattgggac tgttatgaaa cttaccaaca aacacgacgt 38160 tagtcttgca ctagctgtat ggcttgtaac ggatgattat gattatgtag acaatcctaa 38220 gtatctgtct gttactacct tgcttaagcc cattaagcaa atagtcatga agcatcgtgt 38280 agatcttagt gaccagtcaa ttgatgttat ggatttcgtc tccacatcaa tgggtactgg 38340 tttacatgat tctatcgaga aggcctggaa gctgggtcat aagactgcat tgaaaaagtt 38400 gggttatcct caacgagtaa ttgatgcagt agtcattaac ccaaccaaag cagactttga 38460 tgctaaccct gaccttatcc caatctacgt tgaacagcgt ggaaccagga tagttaaggg 38520 ttggactatc ggtggtaagt tcgacatcgt aacagaaggt ctgttgcagg actttaagtc 38580 tacctcaacc tattcctggg ttgctggttc ccgtgatgat gaacataaga tgcaaggcag 38640 cttgtatcgt tggattcaca acgacatcat taccgaagat gtaatccgta ttaactacat 38700 cttcactgac ttcatgaaac acatggctaa tagcaatccg aactatcctg ctaatcgtat 38760 tatgcataag gatattccgt tgctatctgt cgagaaaact gaacgttggg tagaagagaa 38820 gattcacctc attgaaaagt actggaatgc acctgaagag gaaattcctg aatgtactga 38880 tgaggagttg tggcgaacag agccacagtt caaatacttc tctgatgctt ctaaggtaga 38940 tgtacctgga gccagaagta ccaaaaaatt tgacgatatg gcatctgctc gtatcttcat 39000 ggctgaaaaa ggtggcaagg gtgctatcaa ggtcgtggag gggcaggtta agcgttgtct 39060 atactgccct gtcgcgtcca tttgcaaaca aagagagaga tattttccat catgagtatt 39120 gacctgaccg gagtcactca ccaccctgca attgaagaaa ttgtagacgt gctgtgtaac 39180 aagacacaaa acaacgacag aggattcttc cgtgtcgaag tagcctactt cctggctaaa 39240 atggcatcct gcatgggtgc aaccattgtc actaaagacc gtggtgactt accagtcaac 39300 atttacgcta tggcattagc aacgtctggc ttcggtaaag gtcactcggt aaatattatt 39360 gaagacggct tcatgactgg cttccgtaaa cgttttatgg aagacaccat gcccgtcatt 39420 gcaaatgacc gtttatggaa gattgctaac gaacgtgctg ctcgacaagg tacagaccag 39480 aatgatgagt ttgataaagt cgaagcagag tataaacgtg ctggagcata tccgtttacg 39540 tttgactctg gtactccacc agcagttaaa cagctacgac ataagctgtt aatggctggg 39600 tgtggttcaa tcaacctaca gattgatgaa attggttcaa acctgttggc taacacggat 39660 gtattaactc tgttcctgga attatatgac cagggtaagg ttaaacagaa gttaaccaag 39720 aacactgctg aaagtgttcg tggtgaagaa ctggatggta agactccagc taacctgttg 39780 ctgtttggca cgccaagtaa gctactagat ggtggtcaga ccgaagacca gttctatgac 39840 tttctggata cagggtatgc acgtcgttgc ttatttgcca ttgggcattt agataaacga 39900 gcacatgcaa caatgtcccc agaagaaatc taccgtaacc tgattaagca ggataacgta 39960 cagtctctgg gtaagtgggc taatcacttc cacagtctgg ctgatccaaa cttgttcggc 40020 tttaagatgg ttgtagaaga tgctgtgggt attgctctga ttacttacaa gatcgattgt 40080 gagaaacaag cagaagctat ggctgaccac gaagaaattc gtaaggctga aatctcccac 40140 cgttacttta aagctcttaa gctggctgga gcactggcat ttgttgacca aagttcattc 40200 attgaaatgt ctcatcttaa acaagcaatc ttgcttgtag aagaatccgg ggcagcattc 40260 cagggtattc tcaatcgtga gaaagcctat gtgaagctgg ctaagtatat cgcttctgta 40320 ggtaaagaag tgactcatgc tgacttactg gagtcgttgc cgttctataa gagtggcaat 40380 gcagctcgta atgagatgat gactcttgct acagcatggg gatacaaaca gcacatcatc 40440 attaagaaaa cttttaatga aggtattgag ttcttccgtg gagagactct gaaagagact 40500 gacatcaatg agatgatagt ggcctatagt gatagctttg cttatgacta cattggtgaa 40560 cgtgtaccgt tcgaccagtt gcatgtatta acccaagctc ccggtatgca ctgggtaaac 40620 catcacatga agaacgggca tcgttccgaa gagaacgtta ttccaggatt taacatgatt 40680 gttattgact gtgatggtgg agtaccactg catacgtgcc atgaactgat gaaggaatat 40740 aagttcatga cctataccac taaacgtcat tctgatgaag agaaccgctt ccgactgatt 40800 attccaatga actatgagtt acacctcgac actgaggaat acaaagagtt tatgaataac 40860 gttatgtctt ggctaccgtt cgaaacggat gaatctgcta accagcgagc caagaaatgg 40920 atgtcctgtg agactggttc ctatcattac aatcttgaag caaatctgtt ggacgtgcgt 40980 gactttattc ctcgtactag taagaacgag cagttccaga accagatgaa ggaagtacag 41040 tcgttggata atctggagcg ttggttcgct agtcgtattg ctaccggtaa tcgtaataat 41100 caaatgatta agtacgcact ggcattggtt gacagtggtt gggattttgc ccaagtacag 41160 caagccgtcc actcattcaa taagaaactg gctaatccat taccagatga tgaattgaat 41220 gcaaccgtaa tggtcaccgt ggctaaacgc ttcgctggca aataagcaaa caggagtctt 41280 tctttggttt gaaggactcc taaattaaat gaggaaaaat aatgtccgaa gtaattccca 41340 atgatatgaa cactcagcta atcctgattg caggattctc agcgagtggt aaatcagcat 41400 cactgcgtaa catcaggaac caggaacgct ggctctatct gaacactgag gcaggtaaac 41460 gtctaccttt ccgtaacaag ttcaatacct acaacatcga agacccatac caaatctggg 41520 aagcatttga tgttgcatct cctggtggag aaatggcaga tgatgttgat ggtatcatca 41580 ttgactcagc aacttttatg atggatatgc tggaatccca gtatgttctg ccttctgcaa 41640 acacgcaaaa ggcatggggg gattttgcac agttctttaa gatactgctg caacaaaaag 41700 tcgttaagtt tggtaagcca gtaatcatta ctgctcatgc taaagacgaa ctggatgaag 41760 ctgctggtgt gatgaaaacg ttcatcccag tgaaaggctc tctgaagaat aacgggcttg 41820 aagcctactt ctctacagtg gtttacgcag aacgtgtaga cattaaagaa ctggagaagt 41880 atggaaacaa gatgcttgaa attacggagg aagaacgtga tttaggctat aaacatgtat 41940 tccagacccg tccaaccaag aagtctgttg gtaaacgact tcgttctcct atgggtatgt 42000 tcgataagtc cgagacttac attgataacg atgcccagaa actcttagac cacctggctg 42060 aatactacgc ttaagcgttt gtctggttgt taatcactta ttaggaaaat catatgtcat 42120 tgttcagtaa tctgaaagaa aaaaccaaaa acgttgaagc tgctaaagac tctctgggtg 42180 gtggtggctt cggtgcaaaa gaaaccgata tctacactgg tactgtaaaa gtagcttacg 42240 taggcaaagc tgattctggt gcagactgga tgcagttaat tattgaagac ctgaaaaact 42300 ctgatggcgt gcctgctggc gagttccgtg ctcaggtgta cttcacttct ggtaatgcta 42360 aaggcaacaa gccgacttac gagaaaaatg gtaaagagta cttcctgcct ggctacactg 42420 tcattaacga catgatgctg atggctactg gtactgaact gcctgaagca gacttcgaag 42480 agaagattgt taaagtctac gactacgacg ctaaagcaga agttaataaa tctgtcatgg 42540 ttccagttga cctggtaggc cagactgtta ccttcgctct ggaaaaagtt ctggaaaaca 42600 agcaggttaa aggcgacaac ggttatgtag actctgacga aactcgtgaa gtaaacgaga 42660 ttcagaaagt gtttcacccg gaactgctgg tcacagtcgt cgaggctcag gaagcagaga 42720 aggctgaaaa agaactaacc ccagaactgg ctgtattcta tgcagcatgg ctggaaaaga 42780 acaaaggcaa aactcgtgac aagactaaga gttctgctgg tggtaatggt aaaggtggct 42840 tgcctcctaa accaggtgca ggtgctggca cgggtactgc tcctgctggt ggtaaatcac 42900 tgtttggtaa acgttaatga aaatcccaat tgtcggtgca gacattagtc tccgcaattg 42960 gggtttagct cgtgggatgc tggacattga gtccggcgtc ttcgagcagg tcgaacttaa 43020 actggttcaa actgaagttg accacaacaa acaagttcga accaactcca aagatataca 43080 agccgctcac gatttgtttc ttggttgtga ggaatggtta cggtctgcta aagcagtatt 43140 cgtagaagta ccagtaggct ctcagtctgc taacggtatg aaatcctatg gcgtatgcgt 43200 aggattaata ggtgcatttc gtgcattggg ttgtccaatc tttgaagtat ccccaattga 43260 aaacaaactt gcactggtcg gtgataaaac tgcatctaag gacacgatga ttcgtgctgc 43320 tcatgccatc tatcctgaag ccaactggct cacagataag aagggcaaac ttctgaataa 43380 gaatgagcac ttagctgatg caatcggtgc aatccatgct ggtgtaaatc tcccagcttt 43440 ccaaaacctc cttaatttaa taaaggcgta acatgcaaat cattttgaac cagtccgaag 43500 tagaagctgc tgtacaggct tatgtcgatg atcaaatcaa tcttgctggt gacatcaata 43560 ttgtcatcaa tgcagacggt acagcttccg ttggtatcaa cgaagaggtt catgaagata 43620 ctccacccgt gggagtagag aagaaaactc gtcgttctcg taagaaccca caggaagcta 43680 aacatcgtcc ggtagaacca gagccggaag aagtagttga agaggtaaag gtagaagaaa 43740 cccagacctc tactggtggt cagaacgaga gttctacgcc ggaacctgaa gaagaagcag 43800 tatctgaacc agaagcacaa gaagaagttg tgcaggaaga ggctaaggct gaagaaccag 43860 cagagaaacc tgctactaag ccttcactgt tcgctggcct taaacgtagt taatctggta 43920 ggtggctcag aagctgctgc taggtgtggt agtgtttata gtcctaatgc tactactggt 43980 caggattata gacgtgtcgg ctccatacat agcttttatc atcactgtca ttatcctgtg 44040 gaaatgcagt ggtaaacacg gtggtgacaa gccgccagag taacaacaac aaccgaacca 44100 gtggacttta atactctccg aagtccattg gttcaactga gactaatata aacaaattta 44160 ctattcactg gctcaatgga aaagttagtt ctttcatggg tggagaaccc gttgaaggaa 44220 agaaagcatt tcacattgaa tcagaaggct gcaaaatctt agtaccatat gcttggtata 44280 gagagggtga agtagaagca ttaaaaaaga gtagttaata tcgtgaaggg ttctgttaga 44340 atcctttgag ataggaactc ctatcataac ctttcttaac ttaatctttg ccgtatggca 44400 ctgacgctag gggtggcccc ccatccgtca ggtaaactat tttaagaatg ggttatcaca 44460 gaaaatgtaa agcaacattc gggttaatca atggcctctc cctatagggg ccatttctga 44520 atgataggct atatcccaaa ggttagtatc tttgggataa ggcttcagat cccttatcaa 44580 actaaccgct caatgttgag cattttaatc acataagccc ctatatgggc tgggttaaat 44640 gtcggatagc atagctacct acagcatcga attgttaggt cttacatgca atatagggta 44700 taaagggagg actcgtcccc tccctcctat tataatggtc gaggtagcac gtaggcatgt 44760 gcagagggtc gctacttctc tcgctggttc gaatccagcc cccgacctac tgacatccta 44820 tcaatgagta cattaagcta acgtgcggag gtttacactg tagccggtgt aggtggagaa 44880 gacggcaggg tagctacctg tgcttagtgt actctttgat agttttcgta agcgattatg 44940 cggtttttta gaaacgaacc aataacataa atgcaaacga tgatgttgtt ctgatggcag 45000 cctaataagc caagcgtcag tcgggagtga gtcgtcctga ttatcaaacg accatggagt 45060 gtcctcgtcc gtgtattaga aacggggagt taatcaatgg tgtgtgatag ctcaaatagg 45120 tagagcgtga ggctacagtg ctgaatggtt tgtgggttcg attcccaccc atgcctacag 45180 tccagacgat atctgagtga ctataaaaac agatggagcc aggtggaatc cctggcaatt 45240 aattccggtg taggtactag tgtcgtgcac ggcataagtg ttctggttcg agtccagacg 45300 ccggaaccaa ttaccagttg cacgagatgg cttgatatgt tcaagtttgg actaagtgtg 45360 acaccgctag attggagagc tgctgcggta agctatagac tccaaccggg ggttcgaatc 45420 cctcactggt aaccaattca aagtagcatt gcactaatcc atcccggagt tcaaaggcca 45480 aacatggagc agtgctactt tgaattagaa agattatggg ggtaagtcgt aaccatacga 45540 cggcgtaagt accagatgag acttctggac gcccctacca gatttggggt gtaacagtta 45600 aatccagttg ccggaagtgc tattctagat acgctgccaa tgtgtgaacg gtaaggctgt 45660 acaggactcg gactcccgcc tcaaaccaaa gtcgccaggt acttatggca aacgggtagt 45720 aacgaactag tcattcgtca aacgcccacc ctattatgag tcagcaagaa cgccttcact 45780 taaacttaaa caatataagc ttaacgcaat aattatgtag gggtatgtaa ggattgcgaa 45840 gaaggagcca gttaaagtct ggcatgactc actcatttat gcccacttag cttagacggg 45900 gaaagcaacc gactaataat cggaaggtca ctggttcaaa tccagtagtg ggtacttatt 45960 aatagaaaac atagtcctga ttgcattgca ctctaaagac aatgccggtg agacagtccg 46020 gcactctaat tattgaaaac atacctaacg gtgtgagtat gagcagacta taatgctcaa 46080 ttacagttaa ctattatcgg actatcaatc ttgtttgctg gtacaagcac cggtggtaat 46140 agttaactgg cctagcctcg ttagctgcgt taaagctact aagtccctct tcggagggac 46200 ttttttattt gagtattgat gaacgcaatc atgcttaagt acaaattcaa accactctat 46260 gaggctaata atggcaacag taagtaaaga agcaatcgaa gctaagatta agagcgttta 46320 ctattttaat ggtgctgatg cagtgaaatc tgcattcgtt gatccttctg cactcccggc 46380 agatgatttg gctaacctgg gtctggtaac ctattgtgtt atcattctgg aaaacaattt 46440 taaagttgaa ggtgtatctg cttgcgtaga cccaactatc tatgatgagc agttaggtcg 46500 ccagtatgca tatgaaaatg cattcaataa gatttgggaa ttagagggct acctactacg 46560 tcaggcactg catgagaagg aagagactgc taaagctttg gcttcctttg cagaaaacaa 46620 tacctgtgat ggtggtggtt gtacaatttg attcaaaggt gtatggtagt ttttaccgaa 46680 aggtactgaa ctacccgaca aagtagtaag gctcatgaag ccaaaacaaa acaagccctc 46740 ctagtgaggg ctttctcatt tgaggtagtt atgtcagaag aaattaaagt ccatttcacc 46800 aactacattg gaaccaagtg tgtaaatggt tttccgatga gcaaagaaac atactgcaaa 46860 cttcgtggtt gggatgtacc agcagatgaa gacccgctag aagaaggcta cttagtcgag 46920 tatccagact ctaagtccaa ccatccccaa ttccgtggct atattagctg gtcacctaaa 46980 gctgcattcg aagctgcata ccgtgacgta gaaaaaggtt gtacctttgg tcatgcagta 47040 gagcttttca aatcaggctt tagaatgacc cgtaaaggtt ggaacggaaa aggaatgtat 47100 atcaccttag tatctggtga aaattgggcc atggataaac atgaaaatac cgtttgtgag 47160 aaacgggatt ggctgggtat taaaaccgtt gataaccagt ttatgccatg ggttccatct 47220 caatcagatg tattagcaga agattgggtg ttagctcagt aaaaataaaa gcccctcatt 47280 agaggggctt tttcatttag ttagtaaggt tgagccaagg gttcaggttg tgggcacgta 47340 agccttgacc gaaaccaaag gagtaaccaa gattgccttg tgcagcaata ctaaagatgt 47400 tgtcctgaat aggaagacca acgttaccaa acatggtagg ggttggagcc aacatagcca 47460 tagcagcatg tactgggtta ttacgaatca tggacactgc aacttttgca gaacgaatct 47520 taaagttgta gaaccacatc aaaccaacac tttccatata cccacggaat cgaccaggca 47580 gacggtcata gttaatgaac tcttccgtta cacgccccag tgcttcttca cgagtcttac 47640 ctttacgctg agtcagttca tcatagatga ttgctttagc aataaagtca gagtactcaa 47700 ccgtcttctg aataccctgg aagagagcag tatccttagt gataagtgca tagcgacctg 47760 cgttacgaac agacttaggc agcttatcag ccagcttttc catgtattcg tggagtttac 47820 cttcagtaat caggatgtca tcacgaccaa taccagcatc tgcaattgaa gagaactcac 47880 cagcttccaa cagaggccag atactcaaac gtttatggct atcagagatg gactgaatct 47940 cagccttgag tttacgaatc tggttcgggt tagtagctgc acgtaattct gcttctgcat 48000 ctacctgacg cagacgagat ttcaggtact ggttaatctc agcagtcttc tgtggaatgc 48060 tcttagcaat gttcttaacc ggtacaccac gagcaaccat ctgataaagg ttagccagga 48120 agttaacagc aggtacgact actgacttaa ccacaatcag agtcttagct tctttaacta 48180 agttttgaac caggttctca ccacccatta catacttata ggcacggttg ccaaagacac 48240 ccagcatagc tttcttgaag gtatccagtg tttctggtga ccaacgggaa ttaccagacc 48300 aggcatcacc tacagaagct gcacgataac ccagagcatc gttgagcatg tcacgacgta 48360 cccataattc acccggacca aacaaacttt ctgctttctg acgggtttca ctgttcatca 48420 gcttaagtgc atcggcagtt actgggtcca gtttagaacc aagaaggtta acgtactggg 48480 acttattaga agcagacatc ttaatgtcgt tctcatacat gctatgcagg ttttcaatca 48540 gcatatcgtt gaatcgctga gccttagctt cttccacctg acgaccacgc catacaccga 48600 ttgcacgagc aagatggttc tcaccttcaa tgtgcttcag catgttaggg tcaatggatt 48660 gctcataagc aaccacatta ccattggcat catatacagg cagcagtggt tcattaccac 48720 gttcaccacg agccagtgct ttagtgatac ggtctacgga aggcttgtca gtgatacgac 48780 cagctaccat ggttcccata gtaaagcccg taccgagatc tacaccacca gcagtattac 48840 gaacgttctg taagatacct tgcgagaaag gagcctgtgc ctgtactggt gcaaagtagt 48900 agctacgtgc tggtccacga ttagcagagc ta 48932

Claims

조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli)에 특이적인 사멸능을 갖는, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 박테리오파지 EC13(기탁번호 KFCC11679P).
삭제
삭제
삭제
삭제
제1항의 박테리오파지 EC13을 포함하는, 항생용 조성물.
제1항의 박테리오파지 EC13을 포함하는, 사료 첨가용 조성물.
제7항의 사료 첨가용 조성물을 포함하는, 사료.
제1항의 박테리오파지 EC13을 포함하는, 소독제.
제1항의 박테리오파지 EC13을 포함하는, 세척제.
제1항의 박테리오파지 EC13을 가금류에 투여하는 단계를 포함하는, 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법.
제11항에 있어서, 상기 가금류는 닭, 오리, 꿩, 메추리, 타조, 거위 및 칠면조로 구성된 군에서 선택되는 것인, 조류 병원성 대장균에 의한 감염성 질병의 예방 또는 치료 방법.