CN107406833B - 新型乳酸球菌噬菌体Lac-GAP-1及其用于抑制乳酸球菌增殖的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及可以特异性地杀死乳酸球菌细胞的肌尾噬菌体科噬菌体Lac‑GAP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12686BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗乳酸球菌感染的方法。

Description

新型乳酸球菌噬菌体Lac-GAP-1及其用于抑制乳酸球菌增殖 的用途

技术领域

本发明涉及一种从自然界分离的感染和杀死乳酸球菌(Lactococcus garvieae)细胞的噬菌体，以及使用包含噬菌体作为活性成分的组合物用来预防和治疗乳酸球菌感染的方法。更具体地说，本发明涉及从自然界分离出来的并可以特异性地杀死乳酸球菌细胞的肌尾噬菌体科(Myoviridae)噬菌体Lac-GAP-1，其具有由SEQ ID NO：1(登记号：KCTC12686BP)的核苷酸序列表示的基因组以及预防乳酸球菌感染和之后使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物治疗乳酸球菌感染的方法。

背景技术

乳酸球菌是革兰氏阳性杆菌，根据荚膜抗原(K)的存在，具有两种血清型。乳酸球菌也被称为引起链球菌病的致病菌，特别是在水生物种中，并且有时在包括牛、水牛、猪和家禽在内的一些动物中引起心内膜炎和乳腺炎。

当被乳酸球菌感染时，鱼受到链球菌感染在水中旋转，并且身体颜色变暗、眼球突出、支气管帽出血、基底出血和腹胀。在解剖学症状方面，鱼体表现出肝脏变色、消化道扩大、内脏出血，进一步表现出血性腹水和腹部出血。链球菌的发作可能受到多个因素的影响，包括环境条件的恶化、不恰当的饲养方式和不合适的饲料。此外，链球菌常见于成年鱼而不是幼鱼，因此与其他细菌性疾病相比，所产生的经济损害可能相对较大。因此，有必要仔细观察养殖场中鱼的状况，观察其异常行为，特别是在水温变暖的危险时期。

鱼类养殖业每年都在持续快速发展，因为在野生鱼捕捞不足的时候，鱼类养殖业使食物资源容易获得。然而，随着水产养殖业的日益发展，饲料引起的环境污染在水产养殖场周围增加。特别是饲料中包含的大量抗生素广泛传播，对人类健康构成威胁。在鱼类养殖业中，抗生素主要用于防止由于卫生问题引起的细菌感染。但是，已指出的是，无节制的滥用抗生素，应该是最重要的问题。在实践中，由于在养殖场中的滥用，病原体变得对抗生素具有抗性。结果是，出现新的耐抗生素细菌菌株越来越多，并导致细菌菌群的变化，导致严重的情况。

在韩国，2011年7月全面禁止使用抗生素制备饲料添加剂。然而，由于发病率增加，生产率下降等原因，许多水产养殖场仍然在场内使用规定的抗生素。因此，急需开发用于预防细菌感染以及之后有效治疗的新方法。为了控制养殖场鱼类病情的爆发，已经开发出疫苗。然而，不同的疫苗不能满足各种疾病。另外，为了克服同时爆发的多种疾病，需要联合控制方法与疫苗一起治疗。

最近，使用噬菌体作为治疗细菌感染的新方法引起了我们的注意。特别地，我们对噬菌体非常感兴趣的原因是因为基于噬菌体的治疗是一种自然友好的方法。噬菌体是感染细菌的极小微生物，简称为噬菌体。一旦噬菌体感染细菌，噬菌体在细菌细胞内增殖。完全增殖后，后代破坏细菌细胞壁逃离宿主，这说明噬菌体具有杀菌能力。噬菌体感染的特征是特异性高，使得特定噬菌体仅感染特异性细菌。也就是说，可以被特定噬菌体感染的细菌是有限的，这表明噬菌体只能杀死特定细菌并且不会伤害其他细菌。

噬菌体首先由英国细菌学家特沃特(Twort)在1915年发现，当时他注意到微球菌菌落被未知的某种东西融化并变得透明。1917年，法国细菌学家d'Herelle发现，痢疾病人粪便的滤液中的痢疾志贺菌(Shigella disentriae)被某物融化，并进一步研究了这种现象。结果是，他独自鉴定了噬菌体，并将其命名为噬菌体，其意思是病菌杀手。从那时起，已经连续鉴定了特异性地作用于志贺菌(Shigella)，伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)和霍乱弧菌(Vibrio cholerae)等致病菌的噬菌体。

由于噬菌体杀死细菌的独特能力，已经研究并预期噬菌体是治疗细菌感染的更好的方法。然而，Fleming发现青霉素之后，由于抗生素的普及，只有东欧国家和前苏联的噬菌体研究在继续。2000年以后，常规抗生素的优点由于耐抗生素细菌的增加而褪色。因此，噬菌体再次被视为可以代替常规抗生素的新的抗菌剂。

此外，最近全球政府强化对使用抗生素的监管。对噬菌体感兴趣的越来越多，工业应用也越来越多。

因此，本发明人尝试通过使用从自然界中分离的可以选择性地杀死乳酸球菌的噬菌体而开发可用于预防或治疗乳酸球菌感染的组合物，并进一步建立使用该组合物预防或治疗乳酸球菌感染的方法。结果是，本发明人分离出适合于此目的的噬菌体，并确定了可将本发明的噬菌体与其他噬菌体区分开的基因组的核苷酸序列。然后，我们已经开发了一种包含分离的噬菌体作为活性成分的组合物，并证实该组合物可以有效地用于预防和治疗乳酸球菌感染，完成了本发明。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种从自然界分离出来的并可以特异性地杀死乳酸球菌细胞的肌尾噬菌体科噬菌体Lac-GAP-1，其具有由SEQ ID NO：1(登记号：KCTC 12686BP)的核苷酸序列表示的基因组。

本发明的另一个目的是提供一种适用于预防乳酸球菌感染的组合物，其包含可以感染和杀死乳酸球菌细胞的噬菌体Lac-GAP-1作为活性成分，以及使用所述组合物预防乳酸球菌感染的方法。

本发明的另一个目的是提供一种适用于治疗乳酸球菌感染的组合物，其包含可以感染和杀死乳酸球菌细胞的噬菌体Lac-GAP-1作为活性成分，以及使用所述组合物治疗乳酸球菌感染的方法。

本发明的另一个目的是提供一种用于使用所述组合物预防和治疗乳酸球菌感染的浸润剂(药浴剂)。

本发明的另一个目的是提供一种通过使用所述组合物预防和治疗乳酸球菌的感染而对养殖业有效的饲料添加剂。

为了实现上述目的，本发明提供了一种从自然界分离出来的并可以特异性地杀死乳酸球菌细胞的肌尾噬菌体科噬菌体Lac-GAP-1，其具有由SEQ ID NO：1(登记号：KCTC12686BP)的核苷酸序列表示的基因组，以及使用包含噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗乳酸球菌感染的方法。

噬菌体Lac-GAP-1由本发明人分离，然后于2014年10月1日保藏于韩国生物科学和生物工艺学研究院韩国典型培养物保藏中心(登记号：KCTC 12686BP)。本发明还提供一种适用于预防或治疗乳酸球菌感染的浸润剂、和饲料添加剂，其包含噬菌体Lac-GAP-1作为活性成分。

由于本发明的组合物中包含的噬菌体Lac-GAP-1有效地杀死乳酸球菌细胞，因此被认为对预防或治疗由乳酸球菌引起的各种疾病是有效的。因此，本发明的组合物可用于预防和治疗由乳酸球菌引起的疾病(感染)。因此，本发明的组合物可用于预防和治疗由乳酸球菌引起的链球菌病。

在本说明书中，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treat)”表示(i)抑制由乳酸球菌引起的链球菌病；和(ii)缓解由乳酸球菌引起的链球菌病。

在本说明书中，术语“分离(isolation)”或“分离的(isolated)”表示通过使用不同的实验技术分离噬菌体的所有操作，和确保能够区分该噬菌体与其他噬菌体的特征的操作，还包括通过生物工程技术增殖噬菌体使其有用的操作。

包含在本发明组合物中的药学上可接受的载体是通常用于制备药物制剂的药物载体，其实施例为乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露醇，淀粉，阿拉伯树胶，磷酸钙，藻酸盐，明胶，硅酸钙，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素，水，糖浆，甲基纤维素，羟基苯甲酸甲酯，羟基苯甲酸丙酯，滑石，硬脂酸镁和矿物油，但并不限于此。除了上述成分之外，本发明的组合物还可以包括润滑剂，润湿剂，甜味剂，香料，乳化剂，悬浮剂和防腐剂。

在本发明的组合物中，包含噬菌体Lac-GAP-1作为活性成分。此时，噬菌体Lac-GAP-1为以下浓度：1×10¹pfu/ml～1×10³⁰pfu/ml或1×10¹pfu/g～1×10³⁰pfu/g，优选1×10⁴pfu/ml～1×10¹⁵pfu/ml或1×10⁴pfu/g～1×10¹⁵pfu/g。

本发明的组合物可以由本领域技术人员通过使用单位剂量形式或在多剂量容器中的药学上可接受的载体和/或赋形剂通过本领域的方法来配制。制剂可以是在油或水溶性介质、提取物、粉末、颗粒、片剂或胶囊中的溶液、悬浮液或乳液的形式。此时，可以另外包含分散剂或稳定剂。

本发明的组合物可以根据使用目的制备为浸润剂或饲料添加剂，但不限于此。

有益效果

使用包含噬菌体Lac-GAP-1作为活性成分的组合物来预防和治疗乳酸球菌感染的方法与基于包括常规抗生素的化学物质的常规方法相比具有对乳酸球菌特异性高的优点。这意味着，本发明的组合物可以特异性地用于预防或治疗乳酸球菌的感染，而不会影响正常的微生物群落，因此具有较少的副作用。一般来说，当使用如抗生素的化学物质时，共生细菌也会受到损害，从而削弱动物的免疫力，具有各种副作用。同时，本发明的组合物使用从自然界中分离的噬菌体作为活性成分，因此其是非常自然友好的。

附图说明

参考附图可以最好地理解本发明的优选实施方式的应用，其中：

图1是示出噬菌体Lac-GAP-1的形态的电子显微照片。

图2是说明噬菌体Lac-GAP-1杀死乳酸球菌细胞的能力的照片。盘上的透明区域是通过溶解细菌细胞形成的噬斑。

具体实施方式

本发明的实际和目前优选的实施方式如下列实施例所示。

然而，应当理解的是，本领域技术人员在考虑到本发明公开内容的基础上可以在本发明的精神和范围内进行修改和改进。

实施例1：分离能够杀死乳酸球菌细胞的噬菌体

从自然界中收集样品以筛选具有杀死乳酸球菌能力的噬菌体。同时，用于本文中噬菌体分离的乳酸球菌细胞来自韩国生物科学和生物工艺学研究院韩国典型培养物保藏中心(登记号：KCTC 5619)。

噬菌体的分离过程在下文中详细描述。将收集的样品加入到TSB(胰蛋白酶大豆液体培养基)培养基(酪蛋白的胰消化物，17g/L；大豆的木瓜酶消化物，3g/L；葡萄糖，2.5g/L；氯化钠，5g/L；磷酸氢二钾，2.5g/L)，以1/1000的比例接种乳酸球菌，然后在30℃下振荡培养3-4小时。培养完成后，以8000rpm离心20分钟，回收上清液。回收的上清液以1/1000的比例接种乳酸球菌，然后在30℃下振荡培养3-4小时。当样品含有噬菌体时，为了提高噬菌体的滴定度，将上述步骤重复5次。重复5次后，培养物溶液以8000rpm离心20分钟，回收上清液。回收的上清液用0.45μm过滤器过滤。将得到的滤液用于斑点测试，以检查是否包括能够杀死乳酸球菌的噬菌体。

斑点测试如下进行：以1/1000的比例在TSB培养基上接种乳酸球菌，30℃振荡培养过夜。将上述制备的3ml乳酸球菌培养液(OD₆₀₀＝1.5)涂在TSA(胰蛋白酶大豆琼脂；酪蛋白的胰消化物，15g/L；大豆的木瓜酶消化物，5g/L；氯化钠5g/L；琼脂，15g/L)板上。将板放在室内干燥约30分钟。干燥后，将10μl所得滤液直接点在乳酸球菌菌苔的表面上并干燥约30分钟。干燥后，将板在30℃，培养一天，然后检查在细菌菌苔表面上透明区的形成。如果在滤液滴下的地方产生透明区域，则可以判断为滤液中包含能够杀灭乳酸球菌的噬菌体。通过上述步骤，可以获得含有能够杀死乳酸球菌的噬菌体的滤液。

之后，从上述确认具有能够杀死乳酸球菌的噬菌体的滤液中分离出噬菌体。常规的斑块测试用于纯噬菌体的分离。具体来说，通过使用灭菌的尖端拾取斑块测试过程中形成的斑块，然后将其加入到乳酸球菌的培养液中，然后在30℃下培养4-5小时。培养完成后，以8000rpm离心20分钟，得到上清液。在回收的上清液中以1/50的比例接种乳酸球菌培养物，然后在30℃下培养4-5小时。为了增加噬菌体的滴定度，将上述步骤重复至少5次。然后，以8000rpm离心20分钟，得到上清液。用获得的上清液进行斑块测试。一般来说，纯噬菌体分离不是一次性完成的，因此通过使用上述形成的斑块重复上述步骤。在重复操作至少5次后，得到含有纯噬菌体的溶液。通常重复分离纯噬菌体的步骤，直到产生的斑块在尺寸和形态上相似。通过电子显微镜观察确认最终的纯噬菌体分离。直到在电子显微镜下确认纯噬菌体分离之前，重复上述步骤。用常规方法进行在电子显微镜下的观察。简言之，将含有纯噬菌体的溶液装载在铜格栅上，随后用2％的乙酸铀酰阴性染色。干燥后，在透射电子显微镜下观察形态。本发明中分离出的噬菌体的电子显微镜照片如图1所示。从形态上观察，上述分离的噬菌体被鉴定为属于肌尾噬菌体科。

含有上述确认的纯噬菌体的溶液进行纯化。将乳酸球菌的培养液以噬菌体溶液总体积的1/50的体积加入到含有纯噬菌体的溶液中，然后再培养4-5小时。培养完成后，以8000rpm离心20分钟，得到上清液。重复该过程5次，得到含有足够数目噬菌体的溶液。将最终离心得到的上清液用0.45μm过滤器过滤，然后用常规聚乙二醇(PEG)沉淀。特别地，将PEG和NaCl加入到100ml滤液中，直到达到10％PEG 8000/0.5MNaCl，在4℃下静置2～3小时。然后，以8000rpm离心30分钟，得到噬菌体沉淀物。将所得噬菌体沉淀物重新悬浮于5ml缓冲液(10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)，10mM MgSO₄，0.1％明胶，pH 8.0)中。该溶液被称为噬菌体悬浮液或噬菌体溶液。

结果，收集上述纯化的噬菌体，将其命名为噬菌体Lac-GAP-1，然后于2014年10月1日在韩国生物科学和生物工艺学研究院韩国典型培养物保藏中心保藏(登记号：KCTC12686BP)。

实施例2：噬菌体Lac-GAP-1基因组的分离和序列分析

如下分离噬菌体Lac-GAP-1的基因组。将基因组从实施例1获得的噬菌体悬浮液中分离。首先，为了去除悬浮液中的乳酸球菌的DNA和RNA，将脱氧核糖核酸酶I和核糖核酸酶A各200U分别加入到10ml的噬菌体悬浮液中，在37℃下培养30分钟。30分钟后，为了去除脱氧核糖核酸酶I和核糖核酸酶A活性，加入500μl 0.5M乙二胺四乙酸(EDTA)，培养10分钟。将悬浮液在65℃下进一步培养10分钟，然后加入100μl蛋白酶K(20mg/ml)以破坏噬菌体的外壁，然后在37℃下培养20分钟。之后，加入500μl 10％十二烷基硫酸钠(SDS)溶液，然后在65℃培养1小时。加入10ml比例为25:24:1的苯酚：氯仿：异戊醇混合物，然后充分混合。将混合物以13,000rpm离心15分钟以分离每层。得到上层液体，向上层加入体积为上层体积的1.5倍的异丙醇，然后以13,000rpm离心10分钟以沉淀噬菌体的基因组。收集沉淀后，向沉淀物中加入70％乙醇，然后以13,000rpm离心10分钟以洗涤沉淀。回收洗涤的沉淀物，真空干燥，然后溶于100μl水中。重复该步骤以获得足够量的噬菌体Lac-GAP-1基因组。

通过在首尔国立大学环境管理国家仪器中心使用Illumina Mi-Seq装置进行下一代测序(NGS)分析上述获得的噬菌体Lac-GAP-1基因组的核苷酸序列。结果表明，噬菌体Lac-GAP-1的最终基因组的大小为34,587bp，全基因组的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

通过使用网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)上的BLAST研究了上述获得的噬菌体Lac-GAP-1的基因组序列与先前报道的噬菌体基因组序列的相似性。从BLAST结果看，很难发现与该噬菌体序列具有50％以上序列同源性的噬菌体序列。

基于该结果得出结论，噬菌体Lac-GAP-1应该是以前未报道的新型噬菌体。

实施例3：噬菌体Lac-GAP-1对乳酸球菌的杀伤能力的研究

研究了分离的噬菌体Lac-GAP-1对乳酸球菌的杀伤能力。为此，通过与实施例1中所述相同的方式通过斑点测试观察透明区域的形成。用于该研究的乳酸球菌共有9个菌株，其已经由本发明人分离并鉴定为乳酸球菌。噬菌体Lac-GAP-1显示了对本实验中使用的7个乳酸球菌的杀伤能力。杀伤能力试验的代表性结果如图2所示。同时，还研究了噬菌体Lac-GAP-1杀死爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)，鳗弧菌(Vibrio anguillarum)，鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)，副乳房链球菌(Streptococcus parauberis)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)的活性。结果是，确定了噬菌体Lac-GAP-1不具有针对这些微生物的杀伤活性。

因此，证实了噬菌体Lac-GAP-1具有杀死乳酸球菌细胞的特异性能力和针对乳酸球菌的广谱抗菌谱，这表明本发明的噬菌体Lac-GAP-1可用作用于预防和治疗乳酸球菌感染的组合物的活性成分。

实施例4：噬菌体Lac-GAP-1对乳酸球菌感染的预防作用

将100μl噬菌体Lac-GAP-1溶液以1×10⁸pfu/ml加入到含有9ml TSB的试管中。对于含有9ml TSB的另一个试管，仅添加相同体积的TSB。然后，将乳酸球菌培养溶液加入到每个管中直到OD₆₀₀为0.5。之后，将试管转移到30℃的培养箱中，然后振荡培养，期间观察乳酸球菌的生长。如表1所示，在添加有噬菌体Lac-GAP-1溶液的管中，乳酸球菌的生长受到抑制，而在没有噬菌体Lac-GAP-1溶液的管中，乳酸球菌的生长没有被抑制。

表1

乳酸球菌的生长抑制

上述结果表明，噬菌体Lac-GAP-1不仅抑制乳酸球菌的生长，而且可以杀死它们。因此，噬菌体Lac-GAP-1可以用作用于预防乳酸球菌感染的组合物的活性成分。

实施例5：噬菌体Lac-GAP-1对乳酸球菌感染的治疗作用

研究了噬菌体Lac-GAP-1对受乳酸球菌感染的链球菌病影响的比目鱼的治疗作用。特别地，准备共两组4个月大的幼年比目鱼(每组10条幼年比目鱼，体长为6-9cm)，分别在不同的水箱中培养14天。控制水箱周围环境。控制水箱所在的实验室的温度和湿度。根据常规饲料供应程序，从实验的第5天开始，每天两次提供加入1×10⁸CFU/g的乳球菌细胞的饲料，维持三天。在两个水箱中均观察到该程序的最后一天显示链球菌临床症状的比目鱼受试者。从提供添加乳酸乳球菌细胞的饲料3天之后的第二天起(实验第8天)，根据常规饲料供应程序，向实验组(添加噬菌体)的比目鱼喂添加噬菌体Lac-GAP-1 1×108PFU/g的饲料，对照组(不含噬菌体)的比目鱼喂相同的没有噬菌体Lac-GAP-1的饲料。实验第8天后，检查所有试验动物是否患有链球菌病。通过测量身体变暗指数检测链球菌的发作。身体变暗指数的测量通过获得暗色(DC)评分(0：正常，1：浅色，2：深色)的常规方法进行。结果示于表2。

表2

暗色评分(平均值)

天数	D8	D9	D10	D11	D12	D13	D14
								对照组(-噬菌体)	1.0	1.3	1.4	1.5	1.3	1.2	1.2
实验组(+噬菌体)	1.0	0.7	0.3	0.2	0.2	0.1	0

从上述结果可以确认的是，本发明的噬菌体Lac-GAP-1可以非常有效地治疗乳酸球菌的感染。

实施例6：饲料添加剂和饲料的制备

使用噬菌体Lac-GAP-1溶液制备含有浓度为1×10⁸pfu/g的噬菌体Lac-GAP-1的饲料添加剂。其制备方法如下：向噬菌体溶液中加入麦芽糖糊精(40％，w/v)，然后加入海藻糖到终浓度的10％。混合均匀后，将混合物冷冻干燥。最后，将干燥的混合物研磨成细粉末。上述干燥过程可以用减压干燥、温热干燥或在室温下干燥来代替。为了制备对照饲料添加剂进行比较，制备不含噬菌体但仅含有缓冲液(10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，10mM MgSO₄，0.1％明胶，pH8.0)的饲料添加剂。

将上述两种饲料添加剂分别与250倍体积的基于鱼的原始湿颗粒混合，得到两种最终的饲料。

实施例7：浸润剂(药浴剂)的制备

制备含有浓度为1×10⁸pfu/ml的噬菌体Lac-GAP-1的浸润剂。制备方法如下：将1×10⁸pfu噬菌体Lac-GAP-1溶液加入到1ml缓冲溶液中，混合均匀。为了制备对照组，制备与用于噬菌体溶液混合的缓冲液相同的缓冲液。

制备的两种浸润剂以1:1000的比例在水中稀释，得到最终用于实验的浸润剂。

实施例8：对比目鱼养殖业的影响

研究了实施例6和实施例7中制备的饲料、浸润剂对比目鱼养殖业的影响。特别地，研究重点是死亡率。共400条比目鱼，分成两组，每组200条进行以下实验(A组：饲料饲养，B组：浸润剂治疗)。每组分成两个小组，每小组分别包含100条比目鱼(小组-①：用噬菌体Lac-GAP-1治疗；和小组-②：未用噬菌体LAC-GAP-1治疗)。用于本实验的比目鱼是4个月大的幼年比目鱼，每小组比目鱼在分开的有一定间隔放置的水箱中饲养。每个小组被划分并如表3所示命名。

表3

比目鱼养殖实验的小组

按照表3所示的常规饲料供给方法提供饲料，提供实施例6中制备的饲料。根据表3中所示的常规步骤进行浸润剂的治疗。浸润剂如实施例7所述制备。结果示于表4。

表4

比目鱼养殖实验死亡率

组别	死亡率(％)
		A-①	5
A-②	22
		B-①	9
B-②	24

从上述结果可以确认，本发明制备的饲料和浸润剂在养殖的比目鱼死亡率方面是有效的。因此，可以得出结论，本发明的组合物可以有效地用于提高比目鱼养殖的生产率。

本领域技术人员将理解的是，在前面的说明书中公开的概念和具体实施方式可以容易地被用作修改或设计用于实现本发明的相同目的的其他实施方式的基础。本领域技术人员还将理解的是，这些等同的实施方式不脱离如所附权利要求中阐述的本发明的精神和范围。

保藏单位名称：韩国生物科学和生物工艺学研究院

保藏编号：KCTC12686BP

保藏日期：20141001

序列表

<110> 尹特荣生物科技株式会社

<120> 新型乳酸球菌噬菌体Lac-GAP-1及其用于抑制乳酸球菌增殖的用途

<130> DFP17KR3088

<160> 1

<170> PatentIn 版本 3.2

<210> 1

<211> 34587

<212> DNA

<213> 噬菌体 Lac-GAP-1

<400> 1

gaaagccaaa gggactaggt tacctgtgat agactggtta ggcgtgaagt acggagtaac 60

ccagagggag ggggatatgc ccccatagtt tctctcctaa gctctttaaa ttatttttaa 120

taatatttat cataaataat ttaagataca taagaagacc aatcacggct ctgtggcaaa 180

ttacgattac ctaatacctt tggttcttct tgcttcacat tgaatagctt gtcagacttc 240

tgacggttgc aagtccagtg agcaagctgt aagttatcca tcgctgaagg atgaccacct 300

ttgttaattg gaatgatgtg gtcaacaact ggactcaatg gatcaggagc tttcaatctc 360

ttatcgattg gcttgccaca tattccacaa gtgttctgtg tctttaaaag aatctttcta 420

ttcttatcaa aggctacacg atgcgcacca gtacggtcag cacgtaatgc tatgggaggt 480

cacctcactt tctccacaca aaaagccaac agaatatatc cgctggcttt atttgtttta 540

tttgatgata ctataataca acatttatct tgtcagtttt cgcccaaaag gtgacaaatt 600

accagaagcc gtcacatatc tcatcatact tctcaagtat tgctcttctc tttctaaagt 660

attggcgctc agttatgtga cacttatcag ctatctctgg tactgtataa cgtttaccag 720

ataaccaacg gtagtggaat accaattgca tatcttcatc ctctccaaac caatcttgta 780

actcattgat tcggttctta aactcatata gactttggag tttactgtca gcatcccatt 840

tcataaccat atcttctact ggctttgaga ttatacttga cctaccacca cctacattat 900

tatcatgtga ttgtttaact tctaactcat acttgcgata ttgaatagcg tggtcaattc 960

gttgacacat aaagagcttc ttctctatag ctttcaagtc gctgtcagta aggttatatc 1020

ttctactcat agtgtcttaa ctccttatat ttatgatata atagtagtta agaaatctgt 1080

ttttaaagcc cattgcagtg ggcttttttt ggtactcaag aaaattagtc attgaatact 1140

gtgctatagt gctataatat atttgagtta ataaatttaa ctacatcatt agaaaggaga 1200

attatatgtc taaaacagat aaagaattga cttcagaaat tgtaattgct tatttaggta 1260

atcataatta cgcttatagc aatgatgaaa ttactagctt gattaaagat gttcatgaaa 1320

ctttgcgtgc attagattaa ataattaatt tcgaagttca ccaattagct cactaatggc 1380

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catcacgttt aaagaaatca tttcaccagt ttcactatct ttgacatgaa accatttttt 1620

tccaaaactt ataacctcag ctaaattatc ttccgttgca acgaatttaa tgctatatcc 1680

tttgaatatt gctaaatagg tatgtttttt cattccacaa cctcctcgat ataggcaact 1740

ttgaaagctg cgttgttagc agtgtgccaa cctgagttgt tatcagtgca ccaacctgcg 1800

ttgctttcga tatactcaat aacatcagcg aaactaccag cttcaacaaa ctgttgtctt 1860

gaacgaatta ctccgtcttg gtccataaac gagctactta ctaatctaaa ttttttcatc 1920

tccacctcaa tccatatgtt tatgaagcca tttcatgata tagccaccta tcattccacc 1980

aataaagccc agtataatgt aactcatcat tcctccccga acacgttctc agactcgtca 2040

aggtctgagc ggttgatttc tcttgcgtac caccaccact taccacatct tttacaaaat 2100

atatctttat gaactgcttc aggcttatgc ccgaacagct tacacattag tttcattggt 2160

tgtcctcatt ttcgttaatt gttttagagc attgtagaaa gcatccacta tttttctaac 2220

agtttcacta actctaattc ctaattcagc aacgttctta aatccatatt ttctgacaaa 2280

attatttcgc catcttagaa gcttaatttg ccgtttttta gttgcttgtc tttgcttctt 2340

ccagcttgat ttcatttgac tacctcacct ttccaaacat aactattact ccgcagagca 2400

aaatcacagc tcctataatc attatccaaa aagctgggta aataaagctt gctgctcctg 2460

caattgtgaa tattttccaa agtaataatg ttgctatcca tacccagaat gatacaacca 2520

taacagtacc tccgagccat gctactatta ctgcaataaa ttcttttatc attttttatt 2580

tctccttgta atcactgcct ttataaggct ttttttattt tggttaaaac gggctatatc 2640

caaaatgggt tatatccaat taacggtgat tggaagtcgt catcaatgtc atccccatcg 2700

aattctaact ctctaaattc atcatccaat tggtcatagt cacgtgctaa tttatcatac 2760

tcgtgttcag cttcaatgag attagatttt aagacaacta cgtgtgctgt aagcaatcgg 2820

atttcatgat tcttacgttc gagaactttc tgaacttctt caatggtcat agatctaaca 2880

ctattactca cctgtaacct ccacaaatgg tcttgttaga ggattaagat atgctgtcat 2940

caactgattg ctttctgagt catatatcca ctttgttaat ccattttctt caatccaaaa 3000

ttcttcttct tcaaagcttt caaactctcg ctcatcatat ttttcaaaaa tttccgcaat 3060

cttcttcggt atgctgagtt tgggctggtt tgcaaactct actttcttga ttagtggctc 3120

ttctaaatca tagaatttcc cccagtcctt cttgttacct gtttttcccg ctttttcaaa 3180

agcaaagcag actttctcta cttcttgtcg tgctgtgtct ttactcatct ttactcctcc 3240

accaattcat ctaccgagca gccgagggct tgggcaacta cttgtaccat aagacccgta 3300

ccgtcagaat ttgatcctgc tccatctgct tctatacttg ctaaagtcat ggccataatt 3360

cctgctttaa aagatggttc aatctcattc accttttttg ctagctcaat tacagtcagc 3420

cccttcttct cacgcatgat ttgcagcttt gtttttgtca tactacctcc ttatttgctg 3480

attgatcata ttctaaaatt tttttgaaaa tatcatccac taatttcttt ggtatgtttg 3540

atcgttcgtt gtagtccttc gagaaatgac cccaagccac ttcttgcttg atcacctcat 3600

tttttaaacc tagaaaaata ttacttgcga actttgtagg cttttgtaat ggataatcat 3660

agttgttata cctggttaaa ttcttatatg gtaactcaaa gcctataatt gtttcgatat 3720

actcccatat ttttccgctt gcgggattct caatcacaaa atattttgga ttgtatctct 3780

tgatgatttc aatcgtatta aatacacaaa gttcaccatt tatccgagta ataaattgct 3840

tgtgatactt caaattatta tgagactctt cataatctct tttacttctg attgtaaaag 3900

ggcttggtgt catttgtggt tcaaacaagc tatcagatat atcttcacgt ttccaacatg 3960

cattgccatt ttttaaagca cttgcaacac tccagctctc acaaggtgga cttgcaataa 4020

ttaaatctgg ctttggtaac ttatccaagg tttcaaacat aagattattt ccaaacatcc 4080

tagagtaatc agcaagattc agattaataa agtgatggtt tttattttca atatccaacc 4140

caattgaata tatttctatt tcttcaaatt catcagcaga gcgtttataa cagccgtttc 4200

cgctgtcaaa taatgcccaa actatcatac tgtccaatcc ctcctaagca atttgcatta 4260

atgtcgcaat cattttctga tcgtcttttt tctgtaattc atccaggaca tgggcatagg 4320

tttcttgagt cactccaaca tccgcatgcc ctaatcttgc tgaaatactg tgaatcgaga 4380

cccctgcaga aagtaatact gatgcatgtg tatgtcttaa cccatgacaa ctaatttctg 4440

ttatccctgc ttctttacat tttctcgaca tgaaattatt gattgtcgaa ttaaagtatt 4500

ttttatagga cccattttcc aatttttgaa taaaaatagg ttcatgtggt ggcaaatctt 4560

cgagtttcgg cttcagtagt ccgatagtct gccaatccaa tgttattttt ctgactgatc 4620

cttttgtctt tgtgggttta aaaccaccat gaccagactt ataatcccaa gtcttatcaa 4680

tggagagttt attttcagtc cagtcaaagt cttctggtgt aatggccaag gcttccgcaa 4740

atcggattcc tgttttggca ataataaata ccatccaatc cacgcctagc tcattattta 4800

aatcaagagc atgcatcaac ttttgcaatt cttcaacttg taaaaacttc tttttcttgt 4860

ctgtagatgg agttttgcct tttatgactg ctcgataagt tggatcaact tcaagttgtc 4920

tgtcatggaa taaatctttt atacatgctt ttactaagtg gtgaaaatct ccagttgttg 4980

atttctcatg agttttagca tactcattaa gaattttttg atattgcgtg cggtcaaagt 5040

ctgataggag taatttcgga catgtttttc ttaaaaattc agatactatc cgatacttct 5100

tcaaagtgat atctgaaata tccccgactt tatatatttc tatccactca tcatagcaat 5160

ctacaaataa tttttctttt tgttttctct tagtcaaata aactcatctg tccttccttt 5220

tcttctctaa gtggaatcca atctgggaat ttactttcaa tatgttcaat ggcttcctcg 5280

gtccattcct tgattcccaa aaactccatg gcatctttgc tgtgcggaat aacatttact 5340

tctgaaaagc ctaatggatt atcagcacta ttttgaatga aatatacttg cttcgctgcc 5400

atttctaacg catctccatg aataatcacg ccgttcattc cacgaattgc aaaggcatga 5460

atcaagaaag aaatcgcttc gtctgataat tctagagctt gataccaata gttactcggc 5520

aaatagttaa aaaagtcagc attcattcga tcattttgcc atttttgaat aattagcgtt 5580

cctgttcctg ctccagttaa atcagaacct ccagaaccac ctacaagcaa cgctgtgagc 5640

ttaccaagtg aatctggtgt ataatgctgt ccttttgatg aaacagctga gtgagtcata 5700

aaataatctc tgaaaaaatc aatactcatg tcatggtgga tatttaagat tttagagtaa 5760

aattcttcac gtcctttttt atcaaacaca agttcttgaa ttcgatttgt aaaattcata 5820

tgctcatcaa catcgagcat gtcatagaat tgctgctcag taattgtcat catccaccac 5880

tttcactaaa tcaactccga gggctttgcc tgcgaggtag gcataaatga taggcatata 5940

ttcatcctcc ttccttttat tgcttatatt ttgcttttta agcacgttta tctttaatta 6000

gataaattgt tcattggact atctaaactc tcaatgtaac cgtaactttc acgaattaga 6060

gctattccag aacgataact acttctttca agttgcgatc aagaaaatca taaagttgta 6120

accaagtcat ttgctgcccc ttattgaaaa ccgtccgaat atctttgtaa tattggacta 6180

gctcttgctt atacttctta cgagcatcaa tatagataat cttatggccg tatccgtcat 6240

actttgcttt cttggccata ttgtagagct tcattaatgg tatagggtta aaagccgtca 6300

tcgcttgcct cctctatttc tatatctatc tggtttttgt ctaggtagta tttttttgca 6360

atgagtacta ctatctggct atcatctgtg taataaccta actttgtcat gtagtcttgt 6420

atatttttca tgagattatc caagtctggt cttgtagttt tgaattgcca ccactttttc 6480

ttttgcttaa tcgcattcca aaatgtcaca gtgagctgta agggcacatc tttatcatat 6540

ggtttacttg gagcattgcg ctttagtgca ttgacaagtt ccttattttc agtacctttt 6600

cggttataaa aagatatttt cccgttccta tagccaatac ctttttgttg ttgcgtaact 6660

ggcatttttt ctaagttgaa agaaaacttc attttccaag tctcgcaatc tgtttacgga 6720

attctttatg aaaatactta gtttctttgt tgttttctct agctcttttc atggcggtca 6780

tctcttcctt agaaactctg tcctgtacta atttttctgc tttagttggt ttttacataa 6840

tttactccca tgtgtataca gctggcatat cagccatgtc agctaatttt ttgatgagtt 6900

ctgtgtaaga aagttgctca accatttttc gttttacaga cttgcttaat ctataatttt 6960

cttgctcaaa agcattgatt aaataatgtt ttagcttatt tgccatttat cgtttatcct 7020

taattccatc aaaattgaca acactatccg ttgaatctcg tcctaagcga cttacaatct 7080

taggattgta cactgcgtta gggtctgcta ggttagtcgt tgtgataata caagggtttg 7140

cattgaccat cgcaaagagg aaacgttgaa cataatcaga agcttgttct tttcctgtga 7200

atgtactttc gcttcccaag tcatctaaga caacaaggtc tgcacttcta attaaggtca 7260

atacgttttc ttctgaccaa taagagtgag ggtcgcttat acttgcttta agttttctaa 7320

acatctcgtt agcatctaag aataacactc gcttgtttac tctgcgctgc ttagcttgat 7380

cgttcaccca ttgagcaatt gccatagcca gatgcgattt accagctcct ggagaacctt 7440

taaatatcgt gttgaactct tcaccattta ggtaacgcct tgcaatatca caagcttttt 7500

tgagtactac tgcttcccca tcgttgtctg tgttgtattt gaaattagta aagttagctg 7560

tgagaagcga tttatctggg acaatactgt ttttatccaa cacagctgta gtcttggctt 7620

cgtgttcctt acgtttctgt tccttggttt tcctatactc agtaataatc gaaccctcat 7680

agtatctgag cgcttgagaa taccctggta caattgactt ttctctgtga agaatatagt 7740

tgtttaactc acttaaattc ttatcaacaa cctcatctgg aatctcatta gatacaatga 7800

aatcccacac ttcagcatca gccatcactt tttctttagc aagatttcga gctgtatcga 7860

ctttttcttg tatttctgga gataaatcaa ataatccccc gcctcttttc attaccaccc 7920

cccacgatca ttgacatcga acttcgcatt tggatcagca aatactcctt gacccttatt 7980

tactggtttt tgattgaggt aactttcaaa cttaggtcca aataatgtct ctggacggag 8040

aaacttactc attttttcat cattacccca ttcagcaact tttatatcaa ttactcgttt 8100

aaagtcatca attgtaaaag tttcattgaa tcgagcgttt atcaaagatt gcgtcttctt 8160

gctggaagct cgatagctag tgcctgcttt ttcattgaga taggacaaga ttcccttaac 8220

atcgtcgagg ttactcgaca atatattatt cttatctaat ctattcttat ctaatctatt 8280

cttatctacg tcaacggcac gttgccgttc cgttaacggt tcgtcaacgg ctattaaatc 8340

cgcatattta ctgggtttgt aggtatcttt tctaattgtg ttttgctctt taaagtcaac 8400

aataaagtag accatttcgt catttaaggg tttaataaat tgttttacta ctaataaacc 8460

taaactatct tctgcagctc caaccattct tacaattggg aacgcttcga ctactccgtc 8520

atcatctgca tttaacataa gatgaaagta taatgcttgc gactccagag gcaatcttaa 8580

gaatttttga gtttgaattg ttcgtttatc tatcattctt cgttgtgcca tatatatttc 8640

atttccttat aaacaatagg ttagcgctgg gtctccctga gtacatagcg cccgacttac 8700

atgtccttcc cgcacaaagc ctagtgtctg ttatttagaa tgggagttgg tcatcgctga 8760

tttccatagg agaaccgcca aatggatcta cttgcggtgc tgcttgtgac tgttggccac 8820

cacccattga agcgaattct gagcgacaca agtagttttt aatttctgtc cctgtagcag 8880

ctttttcttc tccattttta tcgatgtaag ttcctgtacg ctctttcaca agaataaata 8940

cacgttttcc tttgaggaat ttaagtgtct gttcgttgtg tccgtaatca atcggggcaa 9000

tttgttggtt gttatcttcg atacttgcaa gaatacgttg caaaccgcta tcagaccatg 9060

gttttccgaa taagaaccag ttattagcag tttccccatt gctaccttca atatcaaatt 9120

taaacattgg atcaccattt ttagattgtt gatttttcac atcaacaata gttgcgatgt 9180

gtacgcctgc tgcgaatcct tggcctgtta agttgctcat ttcatttctg ttatattgca 9240

ttatttttgt tctccatttt cattagtttt cgttttttct actgtttgac caaatttaaa 9300

taaatcttca attttacaag ctatgcgatc atcaagtcga ttttttgcat aaactccgtc 9360

acttccttgg agtattgctc ctcttccgtg agttgctggg tttacttgaa tgcgacctac 9420

tacatcagtc agtcccaaaa gttggttaat aacttgattc cgtacgtcag gtatatattc 9480

agtcagcttt gtgccatctt ccaaatctac atctctctta ttctcccaag cggtaacata 9540

gatattgata gggaatgaat aaatcattgt gattagtctt agaaagtaat ttgtatagtc 9600

tccgtagtct tgaatttcat tacgaatacc attcttactt ttaaggccac gtgctacgaa 9660

ccaatctttt tcaaaagctg tgatattatc aataactaaa gtttgataac cttcaagaat 9720

tcctctggct tcatctaaaa attctttcat tgattgaatt ggattttctc gattaaatga 9780

aattacatca acacccttta atcctgctaa taccctactt gatccatcta aatcaagaac 9840

taatactttg cccgtcagtc ctttaattgc acttgtttta ccaagtcctg gtttcccata 9900

aaggagcact ctccattcat gggtacggct tatatccgtt gcttttttaa tttctaatgc 9960

cataattaaa acctcaaact ttctgattgc tgcaactcaa ccccttcaat aactgctcca 10020

ttcttcaaat cttcaagcat ttgtttctta tcaagcttag gtggttgagg aataaaatag 10080

ttatcataga actcgttctt cataaattgc tcctcattgt cgaatgttaa ggactttgca 10140

ttcttttgga tacgaatatt gaatactgcg ctttttattt tgtctattcc tactacgatc 10200

atgctatttt gtaggtagtc tttcagacct tgtttctttt taactactgc ttttttcttg 10260

tcttgaagtc gtttgatttc agcagccaag gctacttcat cggcttcaag gttttttaca 10320

acatagccaa tatttatagc tttgtcttta atttctcctt cgatactctc taaagtatct 10380

gcccacgttt cggcatccaa gtcctccata tcatagactt gttgccaatc ggcggttaaa 10440

tcgtataaac tcatttttat tcctccgaat ttttgttata atcagagtag aatctcgcaa 10500

agtttctact cagctcactc tgcaaagtga gcttttttat ttttctctga actcgttgat 10560

atcaacttct agagcatctg ctattttgca taccgtttca aatgaaggat tatcagtctg 10620

ttttaatttc atttgtgaaa aatactgttt tgatattcct gtcatttttg ataaacgata 10680

agtagagata tttttctctt gcattatttt ttctatttta ttccacatac tatatgttgt 10740

attgaccttt cttgatttaa cgtttaatga cactatatat agtaatatcc acttgactaa 10800

atatagtaat tcttgttaca atatacttat gaatgacaag ccgtggttgg taagtttatt 10860

cataaattca aacagaaagc tggtacctaa tgatgggcca ataccaaatt acacatgtcc 10920

gggtttcgga cgataatgca acttctgtag agaagattac tcacgttcaa cttaacgatg 10980

gaactccgtt cacagtttct caaatcgtta attttattga taaaggtcat gattttttct 11040

acactcatgg ttactttctt agtaaggctc ttgttgaagc tgttcaccca actaatcgtg 11100

atccgtatat ccgtactaag gcaaattcaa caactaatga taatttactt aatctaccaa 11160

ggttctaaga gcacacccat tacttttgtg atgggttttt atttttcgat cttagaacgg 11220

ttttcagata ttggttcatc aacttcatac ataaaagtaa ccaattgatt aacttttcct 11280

ttagttttac ttgattcatt gctcagtgcg tattcacctg gagtaacttc cccactcaat 11340

gtacgtgcta aaatttctac aagtttttct tcaaatgttt ttgatttcat atttttctcc 11400

tctcctccta gttgctgcta ggggcttttt attttgtcat aaatcgtaaa aagtctagta 11460

aatagaaaaa ttttcgttct atttttccac cagatacaat ccaaacttgt ttatcaggcc 11520

atgctgttac aataagacca tcagttgttg tgtactgctc aagcactctg ctccccctct 11580

cttttttcga tacccgataa gataattctg cctatttcta tagctatctc tccagtcaat 11640

ggattgtttc tgcaccactc tggccaatct tcttcactga ttcttgttcc atcagctaag 11700

atatttgtaa ccttgtactt tttaggtggt ctcctttgtt ttcccatctt cattcctttc 11760

tatgcactat tgcatgcaaa cgttctgcga taatatttaa tggccaaaca tttgcacatt 11820

ttcctgcaaa aaattcgtat acgatttcgc cagtatctat gacgacaatt tgatatgtga 11880

ttgtttgcat ggtataatat ccttatctaa attcatctag ctcactgttc ccgcagtggg 11940

cttttttgtt tatgcaactt cttgttcaac tactggaagg tatcctgccc ttttcaactt 12000

acgatacaaa aactcacgcc ccttttgagt ccaacaagta ttgattcgtg tatgttgctt 12060

gttgtcattt cctatatagt taaatgttcg acttctgata tagcctttgc cttgatacct 12120

tgagtacaac agccactgat tattttgctt atattgaatt cttagtttat tcaaaatttg 12180

attaaattta acagcgctca taccgtaatc ctgagcaatc tgcttaacaa tcaactcatc 12240

tgggctatct aagattaggt caagataacg agttttttct gttgcttcag caagttctaa 12300

attaagctga ctattttctt tttcaagtcc aagccgagct tgtcgctcat ctttgagttg 12360

tgttgcaaga tcgattaata tatctggatt aagtagcgct tcttccagtt tcgcatccgt 12420

catatatgct ccgtgcttgc ggattgtggg caggacttct cttgttaccc actttctaaa 12480

tggcttagca tttcgattat tggatcgaag caagatttga tacaatcctg attcattaat 12540

aatattttta ggacttcctg accctagact ttgtctagac ttgtcctcat catcaacgag 12600

ttttgctaag tcagttggat ttgttgcctc aatagctttc gcaacatctg ctactacaaa 12660

ccacggttca ctttcgataa gcactgttcg tacttgtaaa ttgttgaaat taaaattttg 12720

taactgattc atgttgttcc tttctaactc acccttttca atttgtcaag ttcttcatca 12780

aattttttta caacctccat tagttgcaaa aatcctactc ctgtaacttt tgacattgtg 12840

cctaatcgaa cagccgaaat tgtattagga tactttctta atctataaaa tacatcataa 12900

gaaataccca tccgttcagc aataacttcc atacgaagac cagatccttt tagcagatca 12960

tcaagtggct cataagtttt tttctctgcc atattgacac tcctctctat atttatcaaa 13020

ctgctactta cgtcgaggtg aatacgccgt gtacctacat ttgtatatca ttccgtctgc 13080

cgtactaaat atactatgtt cgttcgctac gcttgactat gaactcatta taaaacaacc 13140

tttacaattt gtcaagttat aactttgcaa attgacaagt ttttttcttt atgataatat 13200

ttatccaagg agatttacat atgaatgata tccacctcgg agaaatgatt aattactatc 13260

gtaaacagaa cggatggacc atgaaggaac tcggtgagaa aatgggcaaa acagagtctg 13320

ctatttctct ttggataagc aataaacgaa gtccaatggt agatgattta gataaactct 13380

caaagctatt taatgtttca ccagaagttc ttatgtttgg aaaggtaacc tctcctatta 13440

tagaagatac cgttgaaaca atgaaaaagc ttgatgaacc tcgtcaacaa gtagttcttg 13500

aaactgcaaa tattcaactt aaagaacaaa aagcaattaa acgtgagaaa caaatattac 13560

cttttaaaaa agcgcaacta gataagataa ataatcttgt accttacgat catgaacaag 13620

aaggatttgc tcccattatt ggtgaaattg ctgcaggtac tccaatattc tctgaacaaa 13680

attttgaggg tatgagacct gtttatggta agtatgccgg acgggacgac gtattttggc 13740

ttcatgtaaa aggggatagc atggaaagtg aaatacatga tggctccttt gctctgatat 13800

tattatcccc tgacattgat gatggagcaa taggggcagt aagatttaca gatgataatt 13860

cagccacttt aaaatgtgtt cattatgaat atgatgatgc tggatacgtt aagcgcatta 13920

gacttgaacc gttaaatcca aaatatccaa tccaatacgc agatgaatcc aatcctgctg 13980

aaattgcagg tcgactagtt aaagtggaac aagactatta attgtggagc atatatgaag 14040

tttggaatga gaaaacccag tataaaaaag agttttaaag ctcgaacaac tggaaaagtc 14100

aaaagaaaat ttaaaaaagc cctaattcca ggatatggaa aaaagggcat gggagtcatt 14160

aagaaaccta agaaagcaat gtataataaa gtttatagaa agacaacttt ttctttctgg 14220

aacctattta aataaaaaat acgtgcgcta accacgctaa aagggtaagg agaaatattt 14280

tatgaaacac agtacacctc agactaagaa gccaatttac aaacgtattt ggttttggat 14340

acttgtcgct gtaatcgtta ttggagtagg tggagccctt gggggtggat ctgatgacaa 14400

aaaagattct agcacttcta attctaccga gacaaaacaa agctcaaaag aggaaaaatc 14460

tactgaacaa agctcttcag ataaacctaa aaatggttgg actcaagaaa tttatgattc 14520

aatcactgta gctaaaatgg acttcgatgc taacggcaat atgtcttact ctggtggtac 14580

tccttatgct gatattgaag ctaaagttgg taagcctgat agttcttctg aaacaagcgt 14640

tggtgatcaa acaacagtca ctgcaacttg gtcttctgtt tcatggacta aaggaacaat 14700

ggaaagcatc actgttcaat atgacaaaac tagcggacaa atcacaagta aaaataaatt 14760

taatgcgtaa ttaaacaaaa aaaaaaccgt cctgtgactc tccaaagttt aggacggttt 14820

taaacaataa gtgtagaaaa tttacgactc acgtattttt tctatactct attatatcaa 14880

atagaggagt aagagcacaa tgaagaaagt agcaatttat gttcgagtct caactctcaa 14940

tcaagctgag gaaggttatt caatttctga acaaaccgac aaattaaaag cttattgtgt 15000

tgcaaaaggt tggaccgttg ctgaaatata caccgatgca ggattcactg gttcaaatat 15060

tgatagaccc ggactgcagc aacttataaa tgatatatca gtacaaaaat ttgacaccgt 15120

acttatttac aaattagatc gactatctcg gagcgttcgt gacactcttt accttgcaaa 15180

ggatgtgttc gcaaaaaata atattgactt tgtatcatta agtgaaaaca tagatacatc 15240

ttctgcaatg ggcgggttgt tcctaacaat attgtcagca atatctgaat ttgagcgtga 15300

aacgataaaa gaaagaatgc agctcgggaa attaggccgt gcaaaatctg gaaaatctat 15360

gatgtggtct agaacagctt tcggttattt gcataatact gatacgggag ttcttgagat 15420

tgagccatta caagcagagg ttgtaaaaca aatcttccaa gaatatctaa atggcatgtc 15480

cataactaaa ctacgagata aattaaattc agaagggcac actggaaaag ataagccttg 15540

gtcatataga gcgctaagag cgacacttgc taatcctgtt tatactggca aagttaaata 15600

taacaatcaa atatttgacg gactacacca agcgataata agcccagaat tattccaagc 15660

tgtacaatcc gagttagaaa ttagacagaa ggaagcatat cagaaaaata ataatccgcg 15720

accatttcag tcaaaatata ttttatctgg aattgcaaaa tgcggctatt gtaaaacacc 15780

actccaagta atactgggat ctgttcgaaa agatggatct agggatatta aatatcaatg 15840

caaaaataga tttccccgaa aaactaaagg ggtaaccata tataatgaca ataaaaaatg 15900

tgattctggc ttttattata tgagtgatat tgaagcggag gttattgatc agatttctct 15960

tctacagtta aataacggtg ctttagaaaa tctaatatct ataaactctg aaccggttat 16020

tgatacaact gagttcgaaa aacaactgat aaatattgat aacaaaataa aaagattatc 16080

cgacctatac attaacgata tgatttctct tgttgaaatg aagcaaagaa gtgagaactt 16140

gaaaaaagac agggatgctt taaaagccaa aataacatca tctaataaaa ccagcaccac 16200

tgatcgactt aaaaccgcaa gaaagttgat tgggaataag cctattgaaa gcttaagcta 16260

tgaccaacag aagaatatca tcaatcgcat aattagtcgc gtatatgtga cagctgagac 16320

tgttgatatt acatggagcc tataaataaa acacctaaat aaactcttta tttttttgaa 16380

aataaagagt tttactatcc ttcatttcaa ttaaagatag tgaaattctt tatttcagtt 16440

actttcttct atataaatga aaaactcccc catatggagg agtaaattga attgtgtttt 16500

tattataaca aaaaattccc aaccgaagta gggaattacc tataagaaca gacatgtaca 16560

ttatagcata ttttagattt tttcaaatag ctagttttgt ttgttctaga tttaatactt 16620

tagcgaatag gatttaattg agaaaataag aattataatt tgcattttca aaaaaaatca 16680

tctatactta aggtaagaag aataacttgt gaaggaaaac gactgggtcc caaaatgggg 16740

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ccttgttccc atagggaatt agcattgata atttctttta cagttggtag tatcggttct 30720

ttcaatttga aatctttcat ttcactcgtt aagatacttt gaccactttg accatcaata 30780

acaacttttt caacatctgc tttctttaag aaattaataa tccattggtt gccattcctt 30840

atggactgac aatcgattgt ttcaacaaat atcttccctg atagtgtttt aaccgcaata 30900

ctcattgcaa catttgcacc atcattccca tacttaatac caacaaagag cttccctttg 30960

ataactggca aacgattaac cttgagcgca ttccattctt gttctgaaat gactgatttc 31020

tggttatatt ttggccaata accaagacgt tgaacattat gatccaactt atcttcacca 31080

agctcggctt cgattttacg ttcgtttaag tggtagccca tagatggatt agaattgtac 31140

caggcttcga catcatgaat gtccttgaca tcttcaaccg accactccgc ccaacctgaa 31200

tactttgctt tcccagctaa ggtattatct cgataatttg taaaaacagt tccacttgat 31260

actggtgttg gaggtgttcc acacattata gtcattggat tatcactgtc agtaacagta 31320

tatttcaatg ctgattcttg ctcagtagta tattcctgag cttcatcaat tactaaaatg 31380

tcgaatcctt ctccaagacc accacttgat gttcttgttc tgaactgaat tactccacca 31440

gattcaatta attccaatct ttcttgccct ttagctttga tagatttgaa atcttctcct 31500

tcaacataac cactatcttc aagatatttt tttaatttct cataagatga gtgggacgta 31560

ctaattcggt gtgctgtatg aagaatgctt aagccttgtt caagtgacca taattcaagg 31620

atatatacaa tttctgtttt accattccgc cgtgggattg aatatccaaa cttttggtgt 31680

gtccataacc catcttcatc aatggccata acctctttca aaaggttctt ttgccatgga 31740

taacactcat gtttagattt ttcgtatatc tcaatagctt cttgatattt tgtttcagta 31800

aatggaagta ttaccgattg agtaggatac tgattgccaa atcttttttc agcagtcatg 31860

ttactcctcc ttcaatctaa atgcatgata accctatcgc tgggatgagt tattttttac 31920

tttttagatt caaattttta cgttcagcaa tctttgcttc tttatctggg tcaacccagt 31980

ttttagacca aacatcttga cgctttttat caatatctct agggtcgtat tctactgtgc 32040

aacggcaacg ctcatggcga tgatacacat cgcttggaac attaggataa tcgtatgaac 32100

ctgccaaatt tctacaccaa tcgcatgctt tacctactaa ctttcttaca attttgggtt 32160

ttaaacctgc ttttgcttga aaatcaatat ttttcttaag cgtatcatca acaacactct 32220

ggctaaatgt tactattggc tctttcaaaa gccaaagtat tttttcaaaa tcatcttcac 32280

tagaaatacg gttaacaatg ccatcaattc tatcttggtt taattctggt acttgtgatt 32340

ttaatttaaa tccagctaat tgattaagtt cactttgaac atccgttgaa taccctgaaa 32400

ttaaatcaaa atttttcttc aatatggaat tgaacaatct atctgcaatg ttgaaataca 32460

tttttccgtc aggtaaaaca tctactgtta cgtgagttcc caaaacatca gataaaattt 32520

gaccaacttc aataccaaat tcatttgctt gaatataagt tgctttttta gttttcaaca 32580

attccaatga ttgctttaac tttttactat ttgctgctct ttcatcaaaa tcttgattaa 32640

ttttttctaa aagagatggt aaaatgtctt ccattattca gctcctttaa ttccagttaa 32700

atcacgaata gtatctttat tgatgaactc aggaattgct tgattaagtt taatagcacc 32760

atctccaatt aaacttaaca tgcttgcatc agcttcaaac aatggttccc atttcggttt 32820

tgttttgcta aactgttctc ttagataagg tacatcatca cgcaaacatg ctgcaagata 32880

agctacattt agtaatcctg ctcccaaact tcgttgagcc tttctaccag ccaatcttaa 32940

attttcatga cttgccttaa ttgcttcaac cgatgatgga ttatcagaaa tgaatcctaa 33000

atcatcaaga gttaatccag tttcaccagc aaaaccagcc gctgcagttc tgagttgttc 33060

agtaaatggc gacatgcttg gttgagtaaa ttgtccaaga gttggtttat cgccatcctc 33120

gtcttttgta aattgcaaca tgcttgaaac tgttgctttc caagtttcca ttggctccgc 33180

atcatcactc aatccagtta catatttttg agggaaagaa taaaactcag cagttacatc 33240

agctctttca agtgttcgtt ttgcattgct ttgccaatac attcctgaac gtgtaatacg 33300

agaacgacca aaaggacgaa ctgcatcagg acggtgaatg ataggcacta acagtggatg 33360

acctgttgga tttgcaatcg aaatattatt acgtgaatca cgataataat aatctgttct 33420

atcaggcaag aaatgagctt caagaacaac attattgttt tcatctcgtt ctaaaactgc 33480

atatccctct gtcagtaatc cagtaattgg gtcaatgatt cctgttgcat tgatagcttc 33540

aataacttga agtcgtactg catcattttc acctttagaa atataagtaa agctacatga 33600

tgcaataagt gatgacaaaa cagcactatc aaaaaatata tcaggattat tttcctcaaa 33660

aatttcattt actgtaaagt catcattttc aaattctcga aaaacaagac ggtctgcaag 33720

actatcaact ccttttgcac accaccctaa tattgaacga tattgttggc ttaatgcttg 33780

tggaattgta atccctttga atctatcaac atatttcatc gcatattgct catagcgcat 33840

ttctgctctt cgtttatgaa cagatagctt aaatctcagg tatccaatac ctttttcagt 33900

caattttttg ctcctttctc tcgtctttaa gatattgaac aattctcata tatcttttcc 33960

gactaaaaac attactattt ttataccaaa caaaaaagtc atcattcctt ttactagaat 34020

tacaacttct acaagccgga actacatttc cataagaata tgcgccacca tcaattaatg 34080

ggacgacatg ttcatgatgt aaatgctcgc cataaatttc tagagacttt ttttcaggca 34140

taccacagta agcacagctg caacaaaaaa atgacttaat ttcaagccat tctttttctg 34200

tcaaggtact ttcagagcca tatttcaaag ttctagactt tgcacaagtc attcgtcgtc 34260

ttgtaggatt atttttacac caatcttttt ctgactgacg acacttacct ttattttcgt 34320

tgtaataacc taattgccgt tctttgattt tatctgcatt tttttcataa tatctctttt 34380

tctgctctaa aatcttttct tttttcgcct catatcttgc tttatcttta gcttttcggc 34440

agactttaca tcgcccttca aatccacctt ttctcttaaa atttttagga aaattatgtt 34500

catctagctc tttttcttgc ttacagatgc tacaaattct tttcattatt atctcctttt 34560

tctcgctcaa gaaaaaatat gtacagt 34587

Claims (7)

1.一种登记号为KCTC 12686BP的肌尾噬菌体科噬菌体Lac-GAP-1，其能够特异性地杀死乳酸球菌并具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组。

2.一种用于预防和治疗乳酸球菌感染的组合物，其包含权利要求1所述的噬菌体Lac-GAP-1作为活性成分。

3.一种浸润剂，其包含根据权利要求2所述的组合物。

4.一种饲料添加剂，其包含根据权利要求2所述的组合物。

5.根据权利要求1所述的噬菌体Lac-GAP-1在制备用于预防和治疗乳酸球菌感染的药物中的用途。

6.根据权利要求2所述的组合物在制备用于预防和治疗乳酸球菌感染的药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其中所述组合物以浸润剂或饲料添加剂的形式给药到受试者。

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