CN110373365B - 一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2及其应用。所述所述菌株于2018年9月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No.60443，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2产酸能力较强，用于发酵新鲜虾壳，其脱钙率可达69.47～77.75％；用于发酵新鲜虾头，发酵液pH值可低至3.3，表观水解度最高可达到40.74％，蛋白脱除率达到97.0％，具有高效溶钙和溶蛋白能力；将本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，可以提高虾废弃物的利用率，同时具有较好的环境兼容性。

Description

一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2及其应用。
背景技术
我国拥有广阔的海洋资源，是虾养殖大国，有不少虾产品加工厂。目前我国虾加工主要以虾仁为主，在加工虾仁的同时也产生了大量的废弃副产物如约占全虾30％～40％的虾壳和虾头。这些副产物含有丰富的蛋白质、甲壳素和壳聚糖、虾青素、不饱和脂肪酸以及必需氨基酸，这些副产物具有广阔的开发和利用前景。但由于技术条件的限制，这些副产物的利用率不高，而且占用大量土地，造成环境污染。事实上，虾头、虾壳中含有大量的甲壳素、虾青素、蛋白质以及优质钙等宝贵资源。仅以甲壳素为例，甲壳素无毒、无味、无副作用，在医药、造纸、印染、植物生长素、日用化学品、食品工业、水果保鲜、纺织工业、环境保护等领域具有广泛的应用；此外，甲壳素脱乙酞基得到的重要衍生物为壳聚糖，是一种高附加值的精细化学品,国际上工业级壳聚糖价格相当昂贵而国内高品质壳聚糖以进口为主。
目前规模化利用虾头、虾壳主要有两种途径，一是将其干燥粉碎，作为动物饲料钙质等矿物质添加剂的原料；二是生产甲壳素。前者产值低，造成大量的资源损失；而传统甲壳素生产过程中大量使用强酸和强碱，不仅污染严重，而且虾头、虾壳中的蛋白质、脂肪等含有残留化学药物均作为杂质被除去，无法回收利用，造成资源的浪费，此外，溶钙不充分也导致不能充分回收虾壳中的甲壳素和矿物质，且终产品附加价值较低。也有些学者和企业通过使用酶解法处理虾废料，回收蛋白质、虾青素等。酶解法的优点在于原料方便易得，操作简便，不足是酶解液及回收的蛋白质腥涩味重，难以直接利用，往往需要添加剂或再加工去除腥涩味，如采用活性碳和酵母粉对虾头、虾壳酶解液进行脱腥脱苦；添加某些单体氨基酸及还原糖，发生美拉德反应，去除腥涩味，这些处理方法使得加工工艺复杂，增加成本。
为解决上述问题，国内外已有利用乳酸球菌发酵虾头、虾壳的研究报道，但目前还未能投入大规模的生产中。因为不同的微生物自身产酸和产蛋白酶的能力不一样，在不同的培养条件下微生物的生长以及发挥的效力也存在较大的差异。绝大多数微生物发酵研究结果都存在一个共性的问题，即产生的酸和蛋白酶不足，导致脱盐和脱蛋白不够充分，同时酸的生产速度慢，不能有效地阻止虾壳废料的腐败。因此，如何有效利用虾废弃物生产高附加值的生物活性物质已是当今国内外研究开发的热点，尤其是如何在传统酸碱法之外、研发具有生产应用价值的微生物发酵法是该领域的核心问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有利用乳酸球菌发酵虾头、虾壳的技术脱盐和脱蛋白不够充分，酸的生产速度慢，不能有效地阻止虾壳废料的腐败，从而无法大规模的生产应用的缺陷和不足，提供一种乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2。本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2产酸能力较强，用于发酵新鲜虾壳，其脱钙率可达69.47％～77.75％；用于发酵新鲜虾头，发酵液pH值可低至3.3，表观水解度最高可达到40.74％，蛋白脱除率达到97.0％，具有高效溶钙和溶蛋白能力；将本发明提供的乳酸球菌Lactococcusgarvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，可以提高虾废弃物的利用率，同时具有较好的环境兼容性。
本发明的另一目的在于提供上述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2在发酵处理虾废弃物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，所述菌株于2018年9月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No.60443，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
本发明的发明人从南美白对虾虾壳中分离纯化出一种菌株，经鉴定，其为乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，该菌株产酸能力较强，用于发酵新鲜虾壳，其脱钙率可达69.47％～77.75％；用于发酵新鲜虾头，发酵液pH值可低至3.3，表观水解度最高可达到40.74％，蛋白脱除率达到97.0％，具有高效溶钙和溶蛋白能力；将本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，可以提高虾废弃物的利用率，同时具有较好的环境兼容性。
对本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2进行鉴定，结果如下。
一、乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的初步鉴定
(1)形态特征
乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2在含有2％碳酸钙的MRS琼脂培养基上无透明环形成，菌落较小，呈乳白色或者淡黄色，表面有圆形凸起(图1A)。革兰氏染色结果为阳性(+)，菌体呈球形或卵圆形，常成对，无芽孢(图1B)。
(2)生理生化特性
菌株LGHK2生理生化特征见图2和表1，菌株LGHK2与格氏乳球菌的生理生化特征基本相似，初步确定菌株LGHK2为格氏乳球菌。
表1菌株LGHK2的生理生化测试结果
Figure BDA0002180967310000031
注：+：阳性；–：阴性。
二、分子鉴定结果与分析
(1)基因组DNA提取结果
用细菌基因组DNA快速提取试剂盒提取乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的总DNA，结果见图3，M：DL5000 Marker；1：乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2。
(2)PCR扩增结果
16S rDNA PCR产物的电泳条带为1500bp，gyrB基因的PCR产物电泳条带约为1200bp，由图4和图5可得，16S rDNA和gyrB两种序列的PCR扩增条带清晰明亮，与目的条带相符。
(3)16S rDNA测序结果分析
菌株LGHK2的16S rDNA基因片段大小为1464bp，登录NCBI使用BLAST 软件进行对比分析，菌株LGHK2与格氏乳球菌(登录号：AP017373.1)一致性高达99％，具体可见SEQ IDNO：2。
(4)gyrB测序结果分析
菌株LGHK2的gyrB基因片段大小为607bp，登录NCBI使用BLAST软件进行相似性比较可得，菌株LGHK2与格氏乳球菌(登录号：LC377166.1)一致性高达98％，具体可见SEQ IDNO：1。
综合菌株形态特征、生理生化测试结果以及16S rDNA和gyrB基因序列分析，可将菌株LGHK2定为精确鉴定为格氏乳球菌(Lactocousgarvieae)。格氏乳球菌属于硬壁菌门(Firmicutes)、杆菌纲(Bacilli)、乳杆菌目(Lactobacillales)、链球菌科(Streptococcaceae)、乳球菌属(Lactococcus)。细胞呈球形或卵圆形， 0.5～1.2μm×0.5～1.5μm，在液体培养基中成对和短链。不生芽孢，革兰氏阳性。不运动，无荚膜。兼性厌氧。化能异养，发酵代谢，以一些碳水化合物发酵产酸，以L(+)-乳酸为主，不产气。营养要求复杂，接触酶阴性，氧化酶阴性。最适温度30℃，能在10℃生长，不生长在45℃、0.5％NaCl，通常为Lancefield血清群 N。发现于乳制品和植物产品。
上述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2在发酵处理虾废弃物中的应用也在本发明的保护范围内。
乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2产酸能力较强，用于发酵新鲜虾壳，其脱钙率可达69.47％～77.75％；用于发酵新鲜虾头，发酵液pH值可低至3.3，表观水解度最高可达到40.74％，蛋白脱除率达到97.0％，具有高效溶钙和溶蛋白能力；将本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，可以提高虾废弃物的利用率，同时具有较好的环境兼容性。
本发明的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2发酵处理虾废弃物能增加虾头虾壳处理的自溶时间，高效降解虾废料中残留的蛋白质，简化后续生产甲壳素的工艺，为进一步提取甲壳素等高附加值产品提供新的实用方法。
另外，本发明的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，解决了现有化学法处理虾废弃物质获取高附加值产品的质量和效率不高、以及对环境造成污染等问题，且制备方法简单、作用高效，在养殖饲料和微生态制剂制备、甲壳素制备等领域具有广泛的应用开发和市场前景。
优选地，所述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2在发酵处理时，对虾废弃物中进行脱钙、脱蛋白处理。
发酵处理虾废弃物时，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的用量可根据常规经验得到，以充分发酵为准。
优选地，所述虾废弃物为虾头或虾壳中的一种或两种。
优选地，当所述虾废弃物为虾壳时，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2 发酵处理的添加量不小于4.08×108个/g。
优选地，当所述虾废弃物为虾头时，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2 发酵处理的添加量不小于1.02×108个/g。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2产酸能力较强，用于发酵新鲜虾壳，其脱钙率可达69.47％～77.75％；用于发酵新鲜虾头，发酵液 pH值可低至3.3，表观水解度最高可达到40.74％，蛋白脱除率达到97.0％，具有高效溶钙和溶蛋白能力；将本发明提供的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，可以提高虾废弃物的利用率，同时具有较好的环境兼容性。
(2)本发明的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2发酵处理虾废弃物能增加虾头虾壳处理的自溶时间，高效降解虾废料中残留的蛋白质，简化后续生产甲壳素的工艺，为进一步提取甲壳素等高附加值产品提供新的实用方法。
(3)本发明的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2应用于发酵处理虾废弃物，解决了现有化学法处理虾废弃物质获取高附加值产品的质量和效率不高、以及对环境造成污染等问题，且制备方法简单、作用高效，在养殖饲料和微生态制剂制备、甲壳素制备等领域具有广泛的应用开发和市场前景。
附图说明
图1为乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2菌落图(A)以及革兰氏染色图(B)；
图2为乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的生理生化实验结果；
图3为乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的基因组DNA提取结果；
图4为16S rDNA PCR产物的电泳条带；
图5为gyrB基因的PCR产物电泳条带。
具体实施方式
下面结合实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
实施例1菌株分离、纯化和特性鉴定
一、乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的分离、纯化
市场购买新鲜南美白对虾(Penaeus vannamei)，清水冲洗，剥下虾壳，剪碎，装进灭菌锥形瓶中，加蒸馏水适量，密封发酵数天；用含2％CaCO3的MRS培养基进行此虾源性乳酸球菌的常规分离、纯化、筛选和鉴定；常规甘油冷冻保藏有活性和功能的乳酸球菌菌种。
二、乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的初步鉴定
(1)形态特征
乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2在含有2％碳酸钙的MRS琼脂培养基上无透明环形成，菌落较小，呈乳白色或者淡黄色，表面有圆形凸起(图1A)。革兰氏染色结果为阳性(+)，菌体呈球形或卵圆形，常成对，无芽孢(图1B)。
(2)生理生化特性
菌株LGHK2生理生化特征见图2和表1，菌株LGHK2与格氏乳球菌的生理生化特征基本相似，初步确定菌株LGHK2为格氏乳球菌。
表1菌株LGHK2的生理生化测试结果
Figure BDA0002180967310000061
Figure BDA0002180967310000071
注：+：阳性；–：阴性。
三、分子鉴定结果与分析
(1)基因组DNA提取结果
用细菌基因组DNA快速提取试剂盒提取乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的总DNA，结果见图3，M：DL5000 Marker；1：乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2。
(2)PCR扩增结果
16S rDNA PCR产物的电泳条带为1500bp，gyrB基因的PCR产物电泳条带约为1200bp，由图4和图5可得，16S rDNA和gyrB两种序列的PCR扩增条带清晰明亮，与目的条带相符。
(3)16S rDNA测序结果分析
菌株LGHK2的16S rDNA基因片段大小为1464bp，登录NCBI使用BLAST 软件进行对比分析，菌株LGHK2与格氏乳球菌(登录号：AP017373.1)一致性高达99％，具体如下。
GTGAGAGGCGGGTGCCTATACATGCAAGTCGAGCGATGATTGAAGAT AGCTTGCTATTTTCATGAAGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACGCGTGGGAA ATCTGCCGAGTAGCGGGGGACAACGTTTGGAAACGAACGCTAATACCGCA TAACAATGAGAATCGCATGATTCTTATTTGAAAGAAGCAATTGCTTCACTA CTTGATGATCCCGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTAGTGTAAAGGACTACCAA GGCGATGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTG AGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCA ATGGGGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAAGGTTTTC GGGATCGTAAAACTCTTGTTGTTAGAGAAGAACGTTAAGTAGAGGTGGAA AATTACTTAAGTGACGGTATCTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGC CAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGG CGTAAAGCGAGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTAAAAGGCAGTGGC TCAACCATTGTGTGCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGGAGAGGAG AGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACAC CGGAGGCGAAAGCGGCTCTCTGGCCTGTAACTGACACTGAGGCTCGAAAG CGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGA TGAGTGCTAGCTGTAGGGAGCTATAAGTTCTCTGTAGCGCAGCTAACGCA TTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAA TTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAA CGCGAAGAACCTTACCAAGGTCTTGACATACTCGTGCTATCCTTAGAGAT AAGGGAGTTCCTTCGGGACACGGGATACAGGTGGTGCATGGTTTGTCGTC AGCTCGTGTCGTGAGAWKKTGGGTTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCT TATTACYWRKTKSCATCATTAAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGTG ATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGA CCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTCGCCAACCCG CGAGGGTGCGCTAATCTCTTAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGC AACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCC GCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGA AGTTGGGAGTACCCAAAGTAGGTTGCCTAACCGCAAGGAGGGCGCTCCTA AGTAGACCGATTGTG。
(4)gyrB测序结果分析
菌株LGHK2的gyrB基因片段大小为607bp，登录NCBI使用BLAST软件进行相似性比较可得，菌株LGHK2与格氏乳球菌(登录号：LC377166.1)一致性高达98％，具体如下。
GCTATATGTTTCTGGTGGTTTACACGGTGTTGGTTCATCCGTCGTGAA TGCTCTCTCTACACAGTTAGATGTTACCGTACATAAAGATGGTCAAAAAT ATTATCAAGAATATCATCGTGGTGTTGTTGTCGAAGATTTGGCTATTGTCG GTGAAACAGAGAAACGTGGTACGGTCGTTCACTTTACACCAGACCCAACG ATTTTCACTGAGACACAAATCTTTGACTATGATAAGTTGGTGACACGTGTC CGTGAATTAGCTTTCTTAAATCGTGGCTTACGTATCTCTATTACCGACAAA CGTGAAGGGCAAGAAGACAATCATGCTATGTTCCACTATGAAGGTGGGAT TCAATCTTATGTTTCCTTCATTAATGAAAATAAGGAAGTTATTTTTGACAC ACCCATCTATACAGAAGGTGAATTAAATGGTATTACTGTAGAAGTTGCTA TGCAATATACAGGGACTTACCATTCGACAATCATGTCTTTTGCAAATAATA TTAATACACACGAAGGTGGTACGCATGAACAAGGTTTCCGTACTGCTTTA ACGCGTGCGATAAACAACTATGCAAAAGCTCAAAAGCTTCTTAAAGATAA TGAA。
综合菌株形态特征、生理生化测试结果以及16S rDNA和gyrB基因序列分析，可将菌株LGHK2定为精确鉴定为格氏乳球菌(Lactocousgarvieae)。格氏乳球菌属于硬壁菌门(Firmicutes)、杆菌纲(Bacilli)、乳杆菌目(Lactobacillales)、链球菌科(Streptococcaceae)、乳球菌属(Lactococcus)。细胞呈球形或卵圆形， 0.5～1.2μm×0.5～1.5μm，在液体培养基中成对和短链。不生芽孢，革兰氏阳性。不运动，无荚膜。兼性厌氧。化能异养，发酵代谢，以一些碳水化合物发酵产酸，以L(+)-乳酸为主，不产气。营养要求复杂，接触酶阴性，氧化酶阴性。最适温度30℃，能在10℃生长，不生长在45℃、0.5％NaCl，通常为Lancefield血清群 N。发现于乳制品和植物产品。
实施例2乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2对虾壳的脱钙效果之一
称取剪碎的新鲜南美白对虾虾壳若干份，每份5g，分别装进灭菌锥形瓶中，以此虾壳为原料，添加30％葡萄糖，初始pH为6.8，温度为37℃，转速为60r/min，发酵36h，接种4mL浓度为5.1×108个/mL的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，不同固液比(培养液中固相与液相的质量之比，例如，在培养基内的固体物质(虾头、蔗糖等)质量为10g，此时溶剂水的质量如为40g，则培养液的固液比为1:4)下测定脱钙效果，在固液比为1:5时，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的脱钙率最大，为69.47％，pH为3.3，结果见表2。
表2固液比对乳酸球菌LGHK2脱钙效果的影响
Figure BDA0002180967310000091
Figure BDA0002180967310000101
实施例3乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2对虾壳的脱钙效果之二称取剪碎的新鲜南美白对虾虾壳若干份，每份5g，分别装进灭菌锥形瓶中，以此虾壳为原料，添加30％葡萄糖，固液比1:5，初始pH为7.0，温度为37℃，转速为60r/min，接种4mL浓度为5.1×108个/mL的乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，测定不同发酵时间对虾壳发酵液pH和脱钙率的影响，结果如表3。
从表3可以看出，在虾壳发酵0到36小时内，发酵液pH迅速下降到3.3，在36h 时，发酵液的脱钙率最大，可达到77.75％。此后脱钙率维持较高水平，综上可知，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2的发酵最佳时间为36小时。
表3发酵时间对虾壳发酵液pH和脱钙率的影响
Figure BDA0002180967310000102
实施例4乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2对虾头的脱蛋白效果之一
取新鲜南美白对虾虾头，去掉眼睛和须，剪碎虾头备用，每份20g，分别装进灭菌锥形瓶中，以此虾头为原料，添加15％葡萄糖，固液比1:10，初始pH 6.8，发酵温度恒温37℃，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2接种量为4mL(5.1×108个/ml)，于60rpm恒温振荡培养箱中发酵。设定发酵时间作为单一变量因素，其他发酵条件不变，置于37℃恒温摇床中进行发酵12h、24h、36h、48h、60h，分别测定发酵液中pH和氨基酸态氮、计算表观水解度。结果如表4所示，在36h 内，发酵液的pH值迅速降低为3.3，此后变化趋缓，氨基酸态氮的含量显著提高，达到3.61g/L。
表4发酵时间对乳酸球菌LGHK2发酵虾头脱蛋白质效果的影响
Figure BDA0002180967310000111
实施例5乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2对虾头的脱蛋白效果之二
取新鲜南美白对虾虾头，去掉眼睛和须，剪碎虾头备用，每份20g，分别装进灭菌锥形瓶中，以此虾头为原料，添加15％葡萄糖，固液比1:10，发酵温度恒温37℃，乳酸球菌接种量为4mL(5.1×108个/ml)，于60rpm恒温振荡培养箱中发酵36h。设定初始pH作为单一变量因素，其他发酵条件不变，初始pH分别取5.5、 6.0、6.5、7.0、7.5置于恒温摇床中进行发酵36h，分别测定发酵液中pH和氨基酸态氮、计算表观水解度。结果如表5所示，当初始pH为7.0时，发酵液的pH值降到最低(3.3)，氨基酸态氮含量(4.31g/L)和蛋白质表观水解度(40.51％)达到最高。
表5初始pH对乳酸球菌LGHK2发酵虾头脱蛋白质效果的影响
Figure BDA0002180967310000112
实施例5乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2对虾头的脱蛋白效果之三
取新鲜南美白对虾虾头，去掉眼睛和须，剪碎虾头备用，每份20g，分别装进灭菌锥形瓶中，以此虾头为原料，添加15％葡萄糖，初始pH为7.0，发酵温度恒温37℃，乳酸球菌接种量为4mL(5.1×108个/ml)，于60rpm恒温振荡培养箱中发酵36h。设定固液比作为单一变量因素，其他发酵条件不变，以研究固液比对脱蛋白效果的影响。固液比分别取1:1、1:2、1:3、1:4、1:5进行发酵，36h 后，分别取1mL测得发酵液中pH和氨基酸态氮含量，计算表观水解度，结果如表6所示，氨基酸态氮在发酵液固液比1:4时达到最大(4.33g/L)，虾头蛋白质表观水解度最高达到了40.74％，蛋白质得以充分液化分离，换算的脱蛋白率可达97.0％。
表6固液比对乳酸球菌LGHK2发酵虾头脱蛋白质效果的影响
Figure BDA0002180967310000121
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 岭南师范学院
<120> 一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 607
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
gctatatgtt tctggtggtt tacacggtgt tggttcatcc gtcgtgaatg ctctctctac 60
acagttagat gttaccgtac ataaagatgg tcaaaaatat tatcaagaat atcatcgtgg 120
tgttgttgtc gaagatttgg ctattgtcgg tgaaacagag aaacgtggta cggtcgttca 180
ctttacacca gacccaacga ttttcactga gacacaaatc tttgactatg ataagttggt 240
gacacgtgtc cgtgaattag ctttcttaaa tcgtggctta cgtatctcta ttaccgacaa 300
acgtgaaggg caagaagaca atcatgctat gttccactat gaaggtggga ttcaatctta 360
tgtttccttc attaatgaaa ataaggaagt tatttttgac acacccatct atacagaagg 420
tgaattaaat ggtattactg tagaagttgc tatgcaatat acagggactt accattcgac 480
aatcatgtct tttgcaaata atattaatac acacgaaggt ggtacgcatg aacaaggttt 540
ccgtactgct ttaacgcgtg cgataaacaa ctatgcaaaa gctcaaaagc ttcttaaaga 600
taatgaa 627
<210> 2
<211> 1464
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 2
gtgagaggcg ggtgcctata catgcaagtc gagcgatgat tgaagatagc ttgctatttt 60
catgaagagc ggcgaacggg tgagtaacgc gtgggaaatc tgccgagtag cgggggacaa 120
cgtttggaaa cgaacgctaa taccgcataa caatgagaat cgcatgattc ttatttgaaa 180
gaagcaattg cttcactact tgatgatccc gcgttgtatt agctagttgg tagtgtaaag 240
gactaccaag gcgatgatac atagccgacc tgagagggtg atcggccaca ctgggactga 300
gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtagggaat cttcggcaat gggggcaacc 360
ctgaccgagc aacgccgcgt gagtgaagaa aggttttcgg gatcgtaaaa ctcttgttgt 420
tagagaagaa cgttaagtag aggtggaaaa ttacttaagt gacggtatct aaccagaaag 480
ggacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtcccaagcg ttgtccggat 540
ttattgggcg taaagcgagc gcaggtggtt tcttaagtct gatgtaaaag gcagtggctc 600
aaccattgtg tgcattggaa actgggagac ttgagtgcag gagaggagag tggaattcca 660
tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aggaacaccg gaggcgaaag cggctctctg 720
gcctgtaact gacactgagg ctcgaaagcg tggggagcaa acaggattag ataccctggt 780
agtccacgcc gtaaacgatg agtgctagct gtagggagct ataagttctc tgtagcgcag 840
ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact caaaggaatt 900
gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct 960
taccaaggtc ttgacatact cgtgctatcc ttagagataa gggagttcct tcgggacacg 1020
ggatacaggt ggtgcatggt ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagawkktgg gtttaagtcc 1080
cgcaacgagc gcaaccctta ttacywrktk scatcattaa gttgggcact ctagtgagac 1140
tgccggtgat aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc 1200
tgggctacac acgtgctaca atggatggta caacgagtcg ccaacccgcg agggtgcgct 1260
aatctcttaa aaccattctc agttcggatt gcaggctgca actcgcctgc atgaagtcgg 1320
aatcgctagt aatcgcggat cagcacgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1380
ccgcccgtca caccacggaa gttgggagta cccaaagtag gttgcctaac cgcaaggagg 1440
gcgctcctaa gtagaccgat tgtg 1512

Claims (10)

1.一株乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，其特征在于，所述菌株于2018年9月5日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No.60443，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.根据权利要求1所述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，其特征在于，所述菌株的gyrB基因序列如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，其特征在于，所述菌株的16s rDNA基因序列如SEQ ID NO：2所示。
4.根据权利要求1所述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，其特征在于，所述菌株为格氏乳球菌，无芽孢，革兰氏阳性；不运动，无荚膜，兼性厌氧。
5.根据权利要求1所述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2，其特征在于，所述菌株在含有2％碳酸钙的MRS琼脂培养基上形成菌落，菌落呈乳白色或淡黄色，表面有圆形凸起。
6.权利要求1～5任一所述乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2在发酵处理虾废弃物中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述乳酸球菌Lactococcus garvieaeLGHK2在发酵处理时，对虾废弃物中进行脱钙、脱蛋白处理。
8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述虾废弃物为虾头或虾壳中的一种或两种。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，当所述虾废弃物为虾壳时，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2发酵处理的添加量不小于4.08×108个/g。
10.根据权利要求8所述应用，其特征在于，当所述虾废弃物为虾头时，乳酸球菌Lactococcus garvieae LGHK2发酵处理的添加量不小于1.02×108个/g。
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