CN108260808A - 一种诺丽酵素及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及诺丽果加工技术领域，特别涉及一种诺丽酵素及其制备方法。该制备方法包括如下步骤：将灵芝、黑木耳、香菇混合，得到混合菌种；将混合菌种接种于液体培养基进行培养，得到种子发酵液；将诺丽果打浆，浆液采用复合酶进行酶解，得到诺丽果酶解液；在诺丽果酶解液中加入种子发酵液进行厌氧发酵，过滤，将滤液进行后熟发酵，得到诺丽酵素。本发明所制诺丽酵素粉口味醇厚，诺丽酵素汁固形物含量高，营养丰富，具有诺丽酵素特有的香气，抗衰老、促进肠胃消化、祛毒排毒等功能非常明显，深受不同群体好评。

Description

一种诺丽酵素及其制备方法
技术领域
本发明涉及诺丽果加工技术领域，特别涉及一种诺丽酵素及其制备方法。
背景技术
诺丽果(Noni)是Morinda Citrifolia的俗称，中文学名为海巴戟，国内主要产地为海南岛、西沙群岛和台湾岛。诺丽果被称为“超级水果”，果实富含227种营养成分，其中包括13种维生素(A、B、C、E等)，16种矿物质(钾、钠、锌、钙、铁、镁、磷、铜、硒等)，8种微量元素，20多种氨基酸，10多种具有抗氧化作用的物质，还含有赛洛宁、赛洛宁原、生物碱、多糖体等成分。诺丽果酵素具有抗衰老、促进肠胃消化、祛毒排毒等功效。
诺丽酵素是经诺丽果发酵而得，诺丽果的发酵制备过程能够促进诺丽果中碳水化合物、蛋白质等物质的代谢反应，产生和积累初级及次级代谢产物，生成有机酸、多糖、氨基酸、肽、赛洛宁、赛洛宁原等多种有益成分，诺丽酵素还含有膳食纤维等物质，可促进肠道有益菌的增殖，起到调节肠道菌群平衡、祛毒排毒、延缓衰老等作用。
目前国内诺丽酵素汁发酵工艺主要采用传统的发酵工艺进行生产，产品生产周期长，基本1年以上，诺丽酵素汁固形物含量较低，基本在8％左右，产品质量存在不稳定因素，批次不同的产品很难做到一致，这也是导致目前诺丽酵素产品质量参差不齐、品牌不好做的原因。比如专利号为CN201610180993.4，名称为《一种纯诺丽酵素的自体发酵加工方法》，其发酵方法为自体发酵，发酵时间6个月以上，发酵时间长，发酵过程以细菌的自我生长为主，无法控制优势菌落，容易混入杂菌，影响最终的产品。比如专利号为201410388872.X，名称为《一种诺丽酵素的加工方法》，其采用的方法为诺丽果打浆，自然发酵，发酵时间360天，发酵过程也无法控制优势菌落容易混入杂菌，影响最终的产品。目前诺丽酵素的生产方法基本采用自然发酵的方法，此法存在发酵时间长，发酵过程容易混入杂菌等技术问题。
申请公布号CN 102578508 A(申请号为201210050108.2)的发明公开了一种诺丽果提纯发酵液的制备方法，包括如下过程:干燥、脱核、杀菌消毒、接种醋酸菌进行发酵、榨取和过滤、过滤和提纯。申请公布号CN 107232588 A(申请号为201710363882.1)的发明公开了一种诺丽果酵素的加工方法，包括以下步骤:(l)选料处理；(2)酶解；(3)第一次发酵：接种乳酸菌进行发酵；(4)第二次发酵：接种酵母菌进行发酵；(5)第三次发酵：接种酵母菌进行发酵；(6)冷滤；(7)调配。申请公布号CN 107495342 A(申请号为201710761982.X)的发明公开了一种诺丽果酵素原液的生产方法，包括以下步骤：(1)将诺丽果原汁升温至80～85℃，并与绵白糖按质量比8:3～5混合，搅拌均匀；(2)将混合液转移至陶制发酵缸内，按混合菌种(所述混合菌种由乳酸菌、酵母菌和米曲霉组成)与混合液的质量比1:1000～2000将混合菌种接入到混合液中，搅拌均匀；(4)初发酵：将接好菌种的发酵缸加盖遮挡，常温发酵，发酵时间为20～60天；(5)成熟发酵：将初发酵结束的发酵液转移至发酵罐中，常温发酵6～12个月；(6)成品：发酵液经过滤、去除酒精、杀菌、灌装后成为成品诺丽果酵素原液。但采用上述菌种发酵技术，仍存在诺丽酵素液固形物含量较低的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种诺丽酵素及其制备方法。该诺丽酵素的固形物含量较高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种诺丽酵素的制备方法，包括如下步骤：
将灵芝、黑木耳、香菇混合，得到混合菌种；将混合菌种接种于液体培养基进行培养，得到种子发酵液；
将诺丽果打浆，浆液采用复合酶进行酶解，得到诺丽果酶解液；
在诺丽果酶解液中加入种子发酵液进行厌氧发酵，过滤，将滤液进行后熟发酵，得到诺丽酵素。
作为优选，灵芝、黑木耳、香菇的质量比为(1～2)：(1～2)：(1～2)。
优选地，灵芝、黑木耳、香菇的质量比为1：1：1。
作为优选，按质量百分含量计，液体培养基的组成为：马铃薯淀粉6％～10％，葡萄糖1％～3％，蛋白胨0.1％～0.3％，磷酸二氢钾0.05％～0.15％，硫酸镁0.03％～0.07％，水补足。
优选地，液体培养基的组成为：马铃薯淀粉8％，葡萄糖2％，蛋白胨0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，水补足。
作为优选，混合菌种的接种量为液体培养基重量的0.1％～1.0％。
优选地，混合菌种的接种量为液体培养基重量的0.5％。
作为优选，培养的条件为26～30℃、100～140r/min摇床培养2.5～3.5d。
优选地，培养的条件为28℃、120r/min摇床培养3d。
作为优选，复合酶由果胶酶、淀粉酶和纤维素酶组成，果胶酶、淀粉酶与纤维素酶的质量比为(1～2)：(1～2)：(2～3)。
优选地，果胶酶、淀粉酶与纤维素酶的质量比为1:1:2。
作为优选，复合酶的用量为浆液重量的0.1％～0.5％。
优选地，复合酶的用量为浆液重量的0.3％。
作为优选，酶解的条件为：酶解温度50～60℃，酶解时间1.0～2.0小时。
优选地，酶解的条件为：酶解温度60℃，酶解时间1.0小时。
作为优选，酶解后还包括灭酶的过程，灭酶为酶解结束后加热至90℃以上10～12分钟，降温。
优选地，灭酶为酶解结束后加热至90℃10分钟。
作为优选，种子发酵液的接种量为诺丽果酶解液重量的0.1％～3％。
优选地，种子发酵液的接种量为诺丽果酶解液重量的1％。
作为优选，厌氧发酵的时间为20～40天。
优选地，厌氧发酵的时间为20天。
作为优选，后熟发酵的时间为10～40天。
优选，后熟发酵的时间为20天。
在本发明提供的实施例中，后熟发酵后还包括浓缩、巴氏灭菌、真空干燥、粉碎的步骤。
作为优选，浓缩为浓缩至固形物含量为40％～65％。
作为优选，巴氏灭菌为加热至70～80℃，维持5～10分钟。
作为优选，真空干燥的条件为：干燥温度45℃～65℃，真空度90～99Kpa。
作为优选，粉碎的目数为50～80目。
本发明还提供了由本发明的制备方法制得的诺丽酵素。
本发明提供了一种诺丽酵素及其制备方法。该制备方法包括如下步骤：将灵芝、黑木耳、香菇混合，得到混合菌种；将混合菌种接种于液体培养基进行培养，得到种子发酵液；将诺丽果打浆，浆液采用复合酶进行酶解，得到诺丽果酶解液；在诺丽果酶解液中加入种子发酵液进行厌氧发酵，过滤，将滤液进行后熟发酵，得到诺丽酵素。本发明具有如下有益效果：
本发明所制诺丽酵素粉口味醇厚，诺丽酵素汁固形物含量高，营养丰富，具有诺丽酵素特有的香气，抗衰老、促进肠胃消化、祛毒排毒等功能非常明显，深受不同群体好评。
具体实施方式
本发明公开了一种诺丽酵素及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的诺丽酵素及其制备方法中所用原料或辅料均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1诺丽酵素发酵汁
(1)种子发酵液制备：
发酵菌种：以灵芝、黑木耳、香菇为诺丽果发酵的菌种，按重量比例为1:1:1进行混合，备用。
培养基制备：称取马铃薯淀粉8％，葡萄糖2％，蛋白胨0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，用蒸馏水定容，备用。
发酵液制备：将3种菌种按0.5％的接种量接种于液体培养基中，28℃，120r/min摇床培养3d，得种子发酵液，备用。
(2)取诺丽果打浆，加入0.3％的植物复合酶酶解(以质量比计算，果胶酶：淀粉酶：纤维素酶＝1:1:2)，酶解温度60℃，酶解时间1.0小时，酶解结束后加热至90℃以上10分钟，降温至60℃，备用；
(3)诺丽酶解液装至厌氧发酵罐中，加入诺丽果重量1％的种子发酵液，发酵20天。
发酵成熟指标：可溶性固形物(固形物12％以上)，颜色(黑褐色)，气味(具有诺丽酵素特有香气)；
(4)取成熟诺丽发酵液(含果)进行过滤，取诺丽酵素汁，得诺丽酵素发酵汁，备用；
(5)取诺丽酵素发酵汁，装入密闭容器中进行后熟发酵，发酵时间为20天。
对比例1诺丽酵素发酵汁
本对比例只以灵芝作为诺丽果发酵的菌种，其它步骤与实施例相同，具体如下：
(1)种子发酵液制备：
发酵菌种：以灵芝为诺丽果发酵的菌种，备用。
培养基制备：称取马铃薯淀粉8％，葡萄糖2％，蛋白胨0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，用蒸馏水定容，备用。
发酵液制备：将灵芝菌种按0.5％的接种量接种于液体培养基中，28℃，120r/min摇床培养3d，得种子发酵液，备用。
(2)取诺丽果打浆，加入0.3％的植物复合酶酶解(以质量比计算，果胶酶：淀粉酶：纤维素酶＝1:1:2)，酶解温度60℃，酶解时间1.0小时，酶解结束后加热至90℃以上10分钟，降温至60℃，备用；
(3)诺丽酶解液装至厌氧发酵罐中，加入诺丽果重量1％的种子发酵液，发酵20天。
发酵成熟指标：可溶性固形物(固形物12％以上)，颜色(黑褐色)，气味(具有诺丽酵素特有香气)；
(4)取成熟诺丽发酵液(含果)进行过滤，取诺丽酵素汁，得诺丽酵素发酵汁，备用；
(5)取诺丽酵素发酵汁，装入密闭容器中进行后熟发酵，发酵时间为20天。
对比例2诺丽酵素发酵汁
本对比例只以黑木耳作为诺丽果发酵的菌种，其它步骤与实施例相同，具体如下：
(1)种子发酵液制备：
发酵菌种：以黑木耳为诺丽果发酵的菌种，备用。
培养基制备：称取马铃薯淀粉8％，葡萄糖2％，蛋白胨0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，用蒸馏水定容，备用。
发酵液制备：将黑木耳菌种按0.5％的接种量接种于液体培养基中，28℃，120r/min摇床培养3d，得种子发酵液，备用。
(2)取诺丽果打浆，加入0.3％的植物复合酶酶解(以质量比计算，果胶酶：淀粉酶：纤维素酶＝1:1:2)，酶解温度60℃，酶解时间1.0小时，酶解结束后加热至90℃以上10分钟，降温至60℃，备用；
(3)诺丽酶解液装至厌氧发酵罐中，加入诺丽果重量1％的种子发酵液，发酵20天。
发酵成熟指标：可溶性固形物(固形物12％以上)，颜色(黑褐色)，气味(具有诺丽酵素特有香气)；
(4)取成熟诺丽发酵液(含果)进行过滤，取诺丽酵素汁，得诺丽酵素发酵汁，备用；
(5)取诺丽酵素发酵汁，装入密闭容器中进行后熟发酵，发酵时间为20天。
对比例3诺丽酵素发酵汁
本对比例只以香菇作为诺丽果发酵的菌种，其它步骤与实施例相同，具体如下：
(1)种子发酵液制备：
发酵菌种：以香菇为诺丽果发酵的菌种，备用。
培养基制备：称取马铃薯淀粉8％，葡萄糖2％，蛋白胨0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，用蒸馏水定容，备用。
发酵液制备：将香菇菌种按0.5％的接种量接种于液体培养基中，28℃，120r/min摇床培养3d，得种子发酵液，备用。
(2)取诺丽果打浆，加入0.3％的植物复合酶酶解(以质量比计算，果胶酶：淀粉酶：纤维素酶＝1:1:2)，酶解温度60℃，酶解时间1.0小时，酶解结束后加热至90℃以上10分钟，降温至60℃，备用；
(3)诺丽酶解液装至厌氧发酵罐中，加入诺丽果重量1％的种子发酵液，发酵20天。
发酵成熟指标：可溶性固形物(固形物12％以上)，颜色(黑褐色)，气味(具有诺丽酵素特有香气)；
(4)取成熟诺丽发酵液(含果)进行过滤，取诺丽酵素汁，得诺丽酵素发酵汁，备用；
(5)取诺丽酵素发酵汁，装入密闭容器中进行后熟发酵，发酵时间为20天。
试验例1诺丽酵素的检测
取实施例1的诺丽酵素发酵汁中的固形物和多糖含量进行检测，同时以专利201410388872.X、201610180993.4、201710363882.1、201210050108.2、201710761982.X的产品、对比例1-3作为对比。试验结果如下：
表1诺丽酵素发酵汁中的固形物和多糖含量指标对比
从试验结果可知，本发明实施例1制得的诺丽酵素发酵汁中的固形物和多糖含量显著高于现有专利产品，并好于灵芝、黑木耳、香菇中的一种单独使用的效果。
试验例2口感品评试验
在东北、华北、华南、华东四个区域中分别选取400名多个年龄段、多种职业种类的志愿者，每个区域的志愿者随机分为4组，对实施例1、对比例1-3的诺丽酵素发酵汁进行口感品评试验。评价标准为：
表2品评表
评分 5 4 3 2 1
色泽 深褐色 褐色 浅褐色 偏浅 发暗发黑
香气 浓郁 纯正 偏淡 无香气 有异味
口味 醇厚 纯正 偏酸 偏酸带涩 酸臭
评价结果如下：
表3诺丽酵素发酵汁品评试验结果
序号 产品 色泽 香气 口味 总分
1 本发明实施例1产品 4.7 4.6 4.8 14.1
2 本发明对比例1产品 4.1 3.1 3.3 10.5
3 本发明对比例2产品 3.8 3.7 3.0 10.5
4 本发明对比例3产品 3.7 3.6 2.9 10.2
从试验结果可知，本发明实施例1制得的诺丽酵素发酵汁的口味醇厚，受欢迎程度显著高于灵芝、黑木耳、香菇中的一种单独使用的效果。
实施例2诺丽酵素粉的制备
(1)取实施例1步骤(5)的诺丽发酵汁浓缩汁固形物为40％-65％，加热至70-80℃，维持5-10分钟，备用；
(2)诺丽酵素浓缩汁真空带式干燥，干燥温度45℃-65℃，真空度90-99Kpa，得诺丽酵素粉，粉碎，过50-80目筛，得诺丽酵素粉；
(3)取诺丽酵素粉检测水分、微生物、颜色及气味等指标(表4)。这些指标均符合规定。
表4水分、微生物、颜色及气味等指标检测标准
对比例4诺丽酵素粉的制备
采用对比例1的诺丽发酵汁按实施例2方法制备诺丽酵素粉。
对比例5诺丽酵素粉的制备
采用对比例2的诺丽发酵汁按实施例2方法制备诺丽酵素粉。
对比例6诺丽酵素粉的制备
采用对比例3的诺丽发酵汁按实施例2方法制备诺丽酵素粉。
试验例3抗癌试验
1.试验药品：
样品：诺丽酵素粉(本发明实施例2、对比例4-6产品)；
对照品：环磷酰胺。
2.动物
NIH615纯系小鼠。
3.瘤株
SI180A、EAC和L615小鼠由中国医学科学院血液研究所提供。
4.实验方法与结果
诺丽酵素汁对小鼠S180的影响：
取NIH纯系小鼠，体重20±2g，雌雄兼用，按《全国抗肿瘤药物体内筛选规程》的方法接种，瘤源为接种6天-9天肿瘤生长良好的S180A，取出腹水，用灭菌的生理盐水按l:4比例稀释制成肿瘤细胞混悬液(5×106细胞/ml)。分别以0.2ml/R接种于小鼠右侧腋窝皮下或者接种于小鼠腹腔内。
24h后随机分组，每组10只，分别每天腹腔或者皮下注射给药一次，诺丽酵素粉的剂量均为60mg/kg/d，环磷酰胺的剂量为60mg/kg/d，对照组给同体积的生理盐水，连续给药10d，停药后次日将接种皮下的小鼠处死，取出瘤块称重，计算抑瘤率。接种腹腔的小鼠停药后观察寿命天数，计算生命延长率。结果见下表。
表5：诺丽酵素粉对小鼠S180的影响
表6：诺丽酵素粉对小鼠S180A的影响
从试验结果可以看出，诺丽酵素粉具有显著的对抗小鼠S180的作用，无论是对实体瘤S180还是对腹水型S180(S180A)都具有强大的对抗作用，效果好于对比例4-6产品。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种诺丽酵素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将灵芝、黑木耳、香菇混合，得到混合菌种；将混合菌种接种于液体培养基进行培养，得到种子发酵液；
将诺丽果打浆，浆液采用复合酶进行酶解，得到诺丽果酶解液；
在诺丽果酶解液中加入种子发酵液进行厌氧发酵，过滤，将滤液进行后熟发酵，得到诺丽酵素。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，灵芝、黑木耳、香菇的质量比为(1～2)：(1～2)：(1～2)。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，按质量百分含量计，所述液体培养基的组成为：马铃薯淀粉6％～10％，葡萄糖1％～3％，蛋白胨0.1％～0.3％，磷酸二氢钾0.05％～0.15％，硫酸镁0.03％～0.07％，水补足。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述混合菌种的接种量为液体培养基重量的0.1％～1.0％。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述培养的条件为26～30℃、100～140r/min摇床培养2.5～3.5d。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述复合酶由果胶酶、淀粉酶和纤维素酶组成，所述果胶酶、所述淀粉酶与所述纤维素酶的质量比为(1～2)：(1～2)：(2～3)。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的条件为：酶解温度50～60℃，酶解时间1.0～2.0小时。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子发酵液的接种量为诺丽果酶解液重量的0.1％～3％。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述厌氧发酵的时间为20～40天，所述后熟发酵的时间为10～40天。
10.由权利要求1至9中任一项所述制备方法制得的诺丽酵素。
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