CN102627789A - 一种食用菌复合多糖的制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种食用菌复合多糖的制备工艺，包括以下步骤：将香菇、银耳、猴头菇的子实体为原料，分别经过清洗、干燥至含水量5％～10％、粉碎过筛，制得食用菌粉末；将香菇、银耳、猴头菇的食用菌粉末按1∶1∶1的重量比进行混合，混合后的食用菌粉末经脱脂、超声水提、过滤、再次超声水提、浓缩、洗涤、干燥后制得食用菌复合多糖，采用本发明制备的食用菌复合多糖活性强，自由基(O2-·)清除率较单一提取多糖增加10％以上，功效高，制备工艺简单、可操作性强。

Description

一种食用菌复合多糖的制备工艺
技术领域
本发明涉及一种食用菌复合多糖的制备工艺，尤其是涉及香菇、银耳、猴头菇复合多糖的制备工艺。
背景技术
食用菌又称食(药)用菌，是一类具有较高食用及药用价值的大型可食(药)用真菌，我国常见的用于保健及预防疾病的食用菌种类主要有：猴头菇、香菇、灰树花、银耳、鸡腿菇、黑木耳、北冬虫夏草以及灵芝等二十多种，这类食用菌中富含生物活性物质，如：多糖、多肽类、核苷类和三萜类等，经科学实验证实这些生物活性物质具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、抗病毒、增强机体免疫和保护心脑血管等多种功能。
食用菌多糖是从食用菌子实体、菌丝体发酵液中分离出的一类活性多糖，多糖组分中以葡聚糖为主，以具有β-1，3葡萄糖苷键结合的直链和β-1，6葡萄糖苷键结合的支链构成为特殊的空间结构，具有广泛的药理活性，对于抗氧化、抗疲劳、延缓衰老、抗肿瘤、抗突变、抗风湿、抗辐射、抗菌消炎、降血脂、降血糖、防止心脑血管疾病的脑血栓、动脉粥样硬化、糖尿病都是一种很好的免疫调节增强剂，在保护肝、肾功能，提高血液学指标等具有明显作用。总之，食用菌多糖在增强机体免疫力、调节人体机能平衡、延缓衰老等方面起着重要作用，对免疫功能低下和多种免疫缺损疫病及各种中老年性疾病具有良好的辅助治疗效果和保健功能。因此，食(药)用菌越来越多的受到世界范围的重视和研究，多糖还在国际上被称为“生物反应调节物”(Biological Responce Modifier，BRM)。
试验发现，单味的食用菌多糖的生物活性往往是单一或侧重于某一生物活性的，作用单一，且不持久。据文献报道，一些食用菌多糖进行等量复合使用后，呈现出协同作用，具有更好的抗氧化作用，而对肿瘤细胞的生长抑制作用也更强，这对研发新药和保健食品具有重要的指导意义。目前，食(药)用真菌的多糖也正由单独的应用研究，向多糖与不同分子量及不同分子结构多糖、细胞因子、肿瘤杀伤效应细胞、放疗、化疗的联合应用研究转变，向多糖之间的协同效应研究转变。
中国专利文献CN1765935A(申请号：200510017261.5)公开了一种分离香菇多糖及香菇菌多糖的新方法，中国专文献CN101736055A(申请号：200810162120.6)公开了一种黑木耳多糖的提取方法，以上多糖的制备工艺都是针对单一的多糖产品提出的，食用菌多糖单独提取费时费工、且食用多糖活性不强。中国专利CN102093598A公开了“一种复合食用菌多糖及其制备方法”其是选取香菇、黑木耳、灵芝和灰树花干子实体为原料，按1∶2∶2∶1比列称重混合后粉碎，加入蒸馏水混合均匀后依次进行微波提取、冷凝回流提取；渣、液分离；醇沉，醇沉后真空干燥、粉碎，得复合食用菌多糖。但该法是采用微波法结合冷凝回流提取，该专利存在以下不足：1)步骤繁琐，提取时间相对较长，费时费工，2)微波结合冷凝回流提取时间较长，微波辐射至一定程度，会破坏目标提取物的组份，制得的食用菌复合多糖活性极大降低。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种省时省工的食用菌复合多糖的制备方法，该法制备的食用菌复合多糖活性强，自由基(O2-·)清除率较单一提取多糖增加10％以上，功效高，制备工艺简单、可操作性强。
本发明的技术方案如下：
一种食用菌复合多糖的制备方法，步骤如下：
(1)选取香菇、银耳、猴头菇的子实体为原料，分别经过清洗、干燥至含水量5～10wt％、粉碎过筛，制得食用菌粉末；将香菇、银耳、猴头菇的食用菌粉末按(1～2)∶(1～2)∶(1～2)的重量比混合均匀，得混合食用菌粉末；
(2)将步骤(1)制得的混合食用菌粉末加入无水乙醚进行回流脱脂；无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为2～4∶1；
(3)回流脱脂后的混合食用菌粉末加入蒸馏水混合均匀，得混合物；所述混合食用菌粉末与蒸馏水的重量比为1∶(10～40)。
(4)将步骤(3)制得的混合物进行超声水提，温度为50～80℃，时间20～50min；
(5)经超声水提后的混合物室温下冷却，过滤，得提取液与残渣；
(6)将步骤(5)制得的提取液加热，制得提取液的浓缩液，所述浓缩液的体积为浓缩前提取液体积的1/3～1/4；
(7)将步骤(6)制得的浓缩液与加入乙醇进行醇沉，静置20-24h后进行离心，得沉淀物；所得的沉淀物用乙醇清洗1～3遍；
(8)将步骤(7)得到的沉淀物真空干燥，即得食用菌复合多糖。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的香菇、银耳、猴头菇的子实体粉碎过40～120目筛。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中香菇、银耳、猴头菇的食用菌粉末按1∶1∶1的重量比混合。
根据本发明优选的，步骤(2)中脱脂用无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为3∶1。脱脂过程选用加入无水乙醚是为了使脂溶性物质溶解，使制得的食用菌复合多糖纯度更高。
根据本发明优选的，步骤(4)中超声水提的超声波功率为200～600w。
根据本发明优选的，步骤(7)中醇沉时所用乙醇的浓度为70～85wt％，所用乙醇的体积为浓缩液体积的4～5倍，静置24小时后以转速为4000r/min离心10～15min。
根据本发明优选的，步骤(7)中洗涤的步骤如下：向离心后所得的沉淀物中加入85wt％的乙醇混合、搅拌，搅拌均匀静置2h，再进行离心。
根据本发明优选的，步骤(8)中真空干燥时的真空度-0.095MPa，干燥温度20～40℃，干燥时间20h。
本发明为了使食用菌复合多糖提取的含量更高、提取的更充分，进一步的，步骤(5)过滤后得到的残渣加入蒸馏水进行超声水提，过滤后制得的提取液与步骤(5)过滤后得到的提取液合并。
经分析检测对比发现，采用本发明所述方法所制得的食用菌复合多糖活性较强，自由基(O2-·)清除率较单一提取多糖增加10％以上。
与现有技术相比，本发明优良效果在于：
1、本发明所述方法提取的食用菌复合多糖自由基(O2-·)清除率较单一提取多糖增加10％以上，食用菌复合多糖活性强。
2、本发明所述的方法采用超声波进行提取食用菌复合多糖，一方面缩短了提取时间，极大地提高提取效率，大大降低了提取成本，另一方面最大限度的保存了食用菌中的热敏性成份多糖的活性。
3、本发明采用脱脂、重复洗涤去除脂溶性物质、杂质，使制得的食用菌复合多糖纯度更高。
4、本发明采用重复洗涤、重复超声水提使食用菌复合多糖提取更充分，并增加复合多糖的提取率。
5、本发明制备工艺简单、可操作性强。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，实施例中的％均为质量百分比，有特别说明时除外。实施例中所用原料均为市场购得。
实施例1
香菇、银耳、猴头菇食用菌复合多糖的制备方法，按以下步骤进行：
1、原料预处理：将香菇、银耳、猴头菇子实体经过清洗、干燥至含水量10％后，进行粉碎过60目筛，制得食用菌粉末；
2、分别称取香菇食用菌粉末100g，银耳食用菌粉末100g，猴头菇食用菌粉末100g，将三者混合均匀后加入无水乙醚进行回流脱脂，无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为3∶1；
3、超声水提：回流脱脂后的混合食用菌粉末与蒸馏水按1∶20的重量比混合，混合均匀后在50℃温度条件下超声水提20min，超声波功率为400w；
4、过滤：经超声水提后的混合食用菌粉末与水的混合物室温下冷却，冷却后进行过滤，得提取液与残渣；
5、再次超声水提：步骤4过滤后得到的残渣再与蒸馏水进行混合，然后进行超声水提、过滤，过滤后制得的提取液与步骤4过滤后得到的提取液合并；
6、提取液浓缩：将合并后的提取液80℃条件下加热浓缩，制得提取液的浓缩液，浓缩液的体积为浓缩前提取液体积的1/4；
7、将步骤6制得的浓缩液中加入75％乙醇混合、搅拌，乙醇的体积为浓缩液体积的5倍，搅拌均匀后静置24h，然后以转速为4000r/min离心15min，离心后得到沉淀物；
8、洗涤：将步骤7离心后所得的沉淀物中加入85％的乙醇混合、搅拌，搅拌均匀静置2h后进行离心，离心后得到沉淀物；
9、重复洗涤：按步骤8重复洗涤3次；
10、干燥：步骤9得到的沉淀物于真空度-0.095MPa，温度40℃干燥20h，即得食用菌复合多糖，经检测制得的食用菌复合多糖5.9g。
对比例1、香菇多糖
香菇多糖的制备方法步骤如实施例1所述，不同之处在于：取香菇子实体为原料经过清洗、干燥、粉碎过筛，制得香菇粉末，香菇粉末称取300g，所制得的香菇多糖用于实施例5的对比分析。
对比例2、银耳多糖
银耳多糖的制备方法步骤如实施例1所述，不同之处在于：取银耳子实体为原料经过清洗、干燥、粉碎过筛，制得银耳粉末，银耳粉末称取300g，所制得的银耳多糖用于实施例5的对比分析。
对比例3、猴头菇多糖
猴头菇多糖的制备方法步骤如实施例1所述，不同之处在于：取猴头菇子实体为原料经过清洗、干燥、粉碎过筛，制得猴头菇粉末，猴头菇粉末称取300g，所制得的猴头菇多糖用于实施例5的对比分析。
实施例2
1、原料预处理：将香菇、银耳、猴头菇子实体经过清洗、干燥至含水量10％后，进行粉碎过80目筛，制得食用菌粉末，
2、分别称取香菇食用菌粉末100g，银耳食用菌粉末100g，猴头菇食用菌粉末100g，将三者混合均匀后加入无水乙醚进行回流脱脂，无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为3∶1，
3、超声水提：回流脱脂后的混合食用菌粉末与蒸馏水按1∶30的重量比混合，混合均匀后在50℃温度条件下超声水提30min，超声波功率为300w，
4、过滤：经超声水提后的混合食用菌粉末与水的混合物室温下冷却，冷却后进行过滤，得提取液与残渣；
5、再次超声水提：步骤4过滤后得到的残渣再与蒸馏水进行混合，然后进行超声水提、过滤，过滤后制得的提取液与步骤4过滤后得到的提取液合并，
6、提取液浓缩：将合并后的提取液80℃条件下加热浓缩，制得提取液的浓缩液，浓缩液的体积为浓缩前提取液体积的1/4；
7、醇沉：将步骤6制得的浓缩液中加入80％乙醇混合、搅拌，乙醇的体积为浓缩液体积的5倍，搅拌均匀后静置24h，然后以转速为4000r/min离心15min，离心后得到沉淀物；
8、洗涤：将步骤7离心后所得的沉淀物中加入85％的乙醇混合、搅拌，搅拌均匀静置2h后进行离心，离心后得到沉淀物；
9、重复洗涤：按步骤8重复洗涤3次；
10、干燥：步骤9得到的沉淀物于真空度-0.095MPa，温度40℃干燥20h，即得食用菌复合多糖，经检测制得的食用菌复合多糖7.3g。
实施例3
1、原料预处理：将香菇、银耳、猴头菇子实体经过清洗、干燥至含水量5％后，进行粉碎过120目筛，制得食用菌粉末，
2、分别称取香菇食用菌粉末100g，银耳食用菌粉末100g，猴头菇食用菌粉末100g，将三者混合均匀后加入无水乙醚进行回流脱脂，无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为3∶1，
3、超声水提：回流脱脂后的混合食用菌粉末与蒸馏水按1∶40的重量比混合，混合均匀后在70℃温度条件下超声水提40min，超声波功率为300w，
4、过滤：经超声水提后的混合食用菌粉末与水的混合物室温下冷却，冷却后进行过滤，得提取液与残渣；
5、再次超声水提：步骤4过滤后得到的残渣再与蒸馏水进行混合，然后进行超声水提、过滤，过滤后制得的提取液与步骤4过滤后得到的提取液合并，
6、提取液浓缩：将合并后的提取液80℃条件下加热浓缩，制得提取液的浓缩液，浓缩液的体积为浓缩前提取液体积的1/4；
7、醇沉：将步骤6制得的浓缩液中加入85％乙醇混合、搅拌，乙醇的体积为浓缩液体积的5倍，搅拌均匀后静置24h，然后以转速为4000r/min离心15min，离心后得到沉淀物；
8、洗涤：将步骤7离心后所得的沉淀物中加入85％的乙醇混合、搅拌，搅拌均匀静置2h后进行离心，离心后得到沉淀物；
9、重复洗涤：按步骤8重复洗涤3次；
10、干燥：步骤9得到的沉淀物于真空度-0.095MPa，温度40℃干燥20h，即得食用菌复合多糖，经检测制得的食用菌复合多糖7.8g。
实施例5、自由基(O2-·)清除率/％的检测
分别称取本发明实施例1中的食用菌复合多糖、对比例1中的香菇多糖、对比例2中的银耳多糖、对比例3中的猴头菇多糖加水配制成浓度0.5mg/mL的食用菌复合多糖溶液、0.5mg/mL的香菇多糖溶液、0.5mg/mL的银耳多糖溶液、0.5mg/mL的猴头菇多糖溶液；
将以上配制好的0.5mg/mL的食用菌复合多糖溶液、香菇多糖溶液、银耳多糖溶液、猴头菇多糖溶液各取2mL于具塞试管中，每支试管中加入50mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液(pH8.2)2mL，混匀并于25℃水浴中预热10min，后加入10mmol/L的邻苯三酚溶液0.4mL，于25℃水浴中反应5min后，加入12mol/L的HCl溶液0.2mL终止反应，然后于325nm处测定吸光度，按以下公式计算清除率，每组测定3次并取其平均值，测定的结果如下表1所示。
S％＝1-(A3-A4)/(A1-A2)
A1：不含有样品的吸光度值；
A2：不含有样品和邻苯三酚的吸光度值；
A3：含有样品的吸光度值；
A4：含有样品，但是不含有邻苯三酚的吸光度值。
实验结果列于表1中：
表1、自由基(O2 -·)清除率
  自由基(O2 -·)清除率/％
  香菇多糖   10.4±0.6
  银耳多糖   18.2±0.7
  猴头菇多糖   21.7±1.6
  实施例1食用菌复合多糖   37.6±0.6
由上表1中4组测定所得的结果对比可见，在同样的浓度条件下，本发明所述的方法制备食用菌复合多糖自由基清除率大于其单一提取多糖的，因此，发明所述的方法制备食用菌复合多糖自由基(O2-·)清除率大于其单一提取多糖的，香菇、银耳、猴头菇复合提取的多糖之间呈现协同作用，其抗氧化作用更强。

Claims (9)

1.一种食用菌复合多糖的制备方法，步骤如下：
(1)选取香菇、银耳、猴头菇的子实体为原料，分别经过清洗、干燥至含水量5～10wt％、粉碎过筛，制得食用菌粉末；将香菇、银耳、猴头菇的食用菌粉末按(1～2)∶(1～2)∶(1～2)的重量比混合均匀，得混合食用菌粉末；
(2)将步骤(1)制得的混合食用菌粉末加入无水乙醚进行回流脱脂；无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为2～4∶1；
(3)回流脱脂后的混合食用菌粉末加入蒸馏水混合均匀，得混合物；所述混合食用菌粉末与蒸馏水的重量比为1∶(10～40)。
(4)将步骤(3)制得的混合物进行超声水提，温度为50～80℃，时间20～50min；
(5)经超声水提后的混合物室温下冷却，过滤，得提取液与残渣；
(6)将步骤(5)制得的提取液加热，制得提取液的浓缩液，所述浓缩液的体积为浓缩前提取液体积的1/3～1/4；
(7)将步骤(6)制得的浓缩液与加入乙醇进行醇沉，静置20-24h后进行离心，得沉淀物；所得的沉淀物用乙醇清洗1～3遍；
(8)将步骤(7)得到的沉淀物真空干燥，即得食用菌复合多糖。
2.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的香菇、银耳、猴头菇的子实体粉碎过40～120目筛。
3.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中香菇、银耳、猴头菇的食用菌粉末按1∶1∶1的重量比混合。
4.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：步骤(2)中脱脂用无水乙醚与混合食用菌粉末的重量比为3∶1。
5.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：步骤(4)中超声水提的超声波功率为200～600w。
6.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：步骤(7)中醇沉时所用乙醇的浓度为70～85wt％，所用乙醇的体积为浓缩液体积的4～5倍，静置24小时后以转速为4000r/min离心10～15min。
7.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：步骤(7)中洗涤的步骤如下：向离心后所得的沉淀物中加入85wt％的乙醇混合、搅拌，搅拌均匀静置2h，再进行离心。
8.根据权利要求1所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：步骤(8)中真空干燥时的真空度-0.095MPa，干燥温度20～40℃，干燥时间20h。
9.根据权利要求1-8所述的食用菌复合多糖的制备方法，其特征在于：步骤(5)过滤后得到的残渣加入蒸馏水进行超声水提，过滤后制得的提取液与步骤(5)过滤后得到的提取液合并。
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