CN1379082A

CN1379082A - 樟芝的固体培养方法,所得固体培养物及其产品与用途

Info

Publication number: CN1379082A
Application number: CN01123613A
Authority: CN
Inventors: 蓝明煌; 蓝苍洲; 蓝仲良; 蓝仲民
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2001-08-10
Filing date: 2001-08-10
Publication date: 2002-11-13
Anticipated expiration: 2021-08-10
Also published as: CN1195843C; HK1051217A1

Abstract

本发明提供一种樟芝的固体培养方法,该方法包括将樟芝菌种以太空包进行菌丝体培养,接着于空气中进行子实体栽培。本发明还提供利用该方法培养得到的樟芝固体培养物,其加工产品及其用途。

Description

樟芝的固体培养方法，所得固体培养物及其产品与用途

技术领域

本发明涉及樟芝的培养方法，更具体地说，本发明涉及樟芝的固体培养方法。另外，本发明还涉及由所述方法培养所得的樟芝固体培养物及其加工产品与用途。

背景技术

樟芝(Zang Zhi)，其学名为Antrodia camphorata，又名樟菇、红樟菇、红樟芝、牛樟菇或牛樟芝，为本省特有真菌，仅生长在台湾的牛樟树(Cinnamonum kanehirai)的中空心材内壁，子实体具强烈的樟树香气，其外形为板状或钟状。民间传说具有安神、怯风行气、化瘀活血、温中消积、解毒消肿、及镇静止痛之效，为上好的防腐解毒剂，被视为台湾市场上最昂贵的野生真菌。更甚者，相对于灵芝提高免疫力而抗癌的间接作用，樟芝实为直接抑制或杀死癌细胞的作用机制，同时具有强心、免疫调节、抗副交感神经作用、抗血清素活性的功效。特定言之，樟芝可治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、糖尿病、痛风、肾炎、关节炎、发炎、过敏、尿蛋白过高、尿毒症、肝硬化、肝癌及流行性感冒等。

已有众多研究单位投入人力与物力，致力于樟芝活性成分的研究，其中行政院国家科学委员会专题研究计划是利用化学方法、核磁共振光谱分析(NMR)及和已知化合物光谱比较，以建立樟芝有效成分化合物的结构特性，又针对樟芝有效成分进行的研究成果指出，樟芝的水提及甲醇提取物对金黄色葡萄球菌及须疮小芽癣菌的生长有抑止作用，另外樟芝的甲醇提取物樟菇酸A(zhankuic acid)对p-388鼠的淋巴肿瘤细胞有明显抑制作用及血小板凝集作用；而樟菇酸B具微弱抗胆碱及抗5-羟色胺(serotonin)的功能。

高晓薇硕士论文针对台湾灵芝属新种樟芝的三萜类成分研究指出，樟芝(Ganoderma comphoratum Zang et Su)为1990年发表的灵芝新种，以丙酮萃取樟芝子实体得到粗萃取物，接着以色谱分析法(LC、PLC)分离与重结晶方式纯化；薄层液相色谱扫描(TLCScanning)和高效液相色谱法(HPLC)鉴定纯度。经由质谱、红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱仪(H-NMR和C-NMR)进行结构测定。其中3，11-二氧-8，23-二烯-26-酸(3，11-dioxo-8，23-dien-26-oicacid)对于以四氯化碳(CCl₄)诱发急性肝炎的小鼠血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(GPT)值有下降作用。

由于樟芝现多分布于台湾台东海岸山脉阔叶林区内，但根据林务局牛樟保育公告，此区已被划为自然保护区，在保育区外生长的樟芝数量极少且已被采集殆尽。因此，市场上实已无法取得天然野生樟芝。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种樟芝的固体培养方法，其可以以人工培养方式栽培出具有与天然野生樟芝同等药理功效的樟芝固体物。

本发明的另一目的是提供一种樟芝的固体培养物，其是用寄存于台湾食品工业发展研究所，编号CCRC 35398的菌种为来源，该菌种为市售菌种，以固体培养方法培养所得的固体培养物。

本发明的再一目的是提供本发明固体培养物的加工产品。

本发明的又一目的是提供本发明固体培养物的各种活性用途。

附图说明

图1表示根据本发明培养方法所栽培樟芝的子实体外形。

图2表示樟芝成分的高效液相色谱图(HPLC)分析比较，包括A表示根据本发明培养方法所得的樟芝子实体，B表示以其他液体栽培方式所得樟芝，与C代表野生樟芝子实体。

图3表示以亚铁离子刺激大鼠脑均质液以引发自由基的脂质过氧化反应，造成脂质过氧化成分(TBARS)增加。根据本发明培养方法所栽培樟芝的子实体的三倍与八倍浓缩液随其浓度提高，而增强抑制过氧化反应。以抑制过氧化反应百分比表示(n＝3)。

图4代表不同浓缩倍数的樟芝对四氯化碳造成肝功能生化值谷氨酸-丙酮酸转氨酶(GPT)酶活性变化的影响。#代表正常组与伤害组间具统计意义的差异(P＜0.01)；*代表喂食组与伤害组有统计意义的差异(P＜0.01)。数值以平均值±标准误差表示。

图5表示不同浓缩倍数的樟芝对四氯化碳造成肝功能生化值谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(GOT)酶活性变化的影响。#代表正常组与伤害组间具统计意义的差异(P＜0.01)；*代表喂食组与伤害组有统计意义的差异(P＜0.01)。数值以平均值±标准误差表示。

图6代表不同浓缩倍数的樟芝对四氯化碳造成肝脏组织宏观变化的影响(A表示正常组、B表示四氯化碳伤害组、C表示喂食樟芝三倍浓缩组及D表示喂食樟芝八倍浓缩组)。

图7代表不同浓缩倍数的樟芝对四氯化碳造成肝脏组织变化的影响。小鼠分组喂食不同浓缩倍数的樟芝五周后，取其肝脏，进行切片及染色，观察肝脏组织变化(A表示正常组、B表示四氯化碳伤害组、C表示喂食樟芝三倍浓缩组及D表示喂食樟芝八倍浓缩组)。

图8表示樟芝粉末萃取液对肠癌细胞(COLO 320HSR)生长的影响。

具体实施方式

本发明提供一种樟芝的固体培养方法，期以人工方式大量栽培具天然野生樟芝的成分及活性的樟芝子实体。本发明的樟芝的固体培养方法包含将一樟芝菌种以太空包(PP bag)进行菌丝体培养，接着于空气中进行子实体栽培。

菌丝体培养阶段前，通常可先经过增殖步骤，例如以下列步骤培养制备大量菌种供太空包培养使用，可包含三个步骤：(1)自液态氮保存活化的菌种取一小块洋菜菌丝块，移入新鲜培养基中于恒温下培养，待菌种生长至旺盛；(2)将该菌种接种至杀过菌的纤维物(例如麦粒或木屑)的太空包中，接着于恒温下培养；(3)待该于太空包中的菌种长满菌丝时，去除最上面较老的菌丝块，然后即可大量接种至太空包中。

菌丝体培养阶段前的增殖步骤，又或以液体培养发酵以大量培养菌种，再接种至太空包。发酵培养液的配方为1-3％果糖、0.01-0.1％硫酸镁、0.1-1％酵母提取物、0.05-0.5％磷酸二氢钾。优选组成为2％果糖、0.05％硫酸镁、0.5％酵母提取物及0.1％磷酸二氢钾。

斜面试管培养后，将大量繁殖好的菌种接种至5升发酵培养液中，于24-26℃下以240rpm旋转振荡培养约14天，接着以90rpm往返振荡培养约14天，又接种至20升液体发酵液中搅拌培养14天。

此处所指太空包是以塑料袋内装以重量百分比计，10-70％的任何蕈类或植物的茎、梗、果实或木屑等纤维物(优选为草本植物的茎、梗、果实或纤维木屑)、10-30％的淀粉源(优选为马铃薯)，以及5-15％的五谷杂粮类(优选为米糠)、1-10％的糖类(优选为葡萄糖)、0.5-2％磷酸盐(优选为磷酸二氢钾)，及0.1-1％硫酸盐(优选为硫酸镁)。其湿度约为60-90％，优选为80％，并调整其pH值接近中性。

本文中所指菌丝培养阶段是指菌种植入太空包约60天之内，其中菌丝体生长温度介于5至32℃间，优选为28℃。太空包的湿度优选介于60-80％，更优选为80％。至于其空气条件，则优选含0.2-1％二氧化碳。

菌丝体培养完成后，进行子实体栽培阶段，亦即在约61-90天内将太空包去除，使之完全暴露在空气中。子实体生长期间的日夜温差须经严格控制，日间温度一般介于20至30℃间，优选为25℃±1℃；夜间温度优选为11℃±1℃；日夜温差优选为15℃。子实体栽培阶段的空气湿度应控制于90-95％之间；另外子实体须于空气流通下进行培养，其中二氧化碳含量不能超过1％，一般在90-120天内即可采收固体培养物。

根据本发明，使用寄存于台湾食品工业发展研究所，编号CCRC35398的菌种为来源，该菌种为市售菌种，依固体培养方法得到的固体培养物如图1所示，类似圆锥形，直径约为10-30厘米，高度约为15-35厘米而重量约为0.2-0.6公斤。

利用上述培养方法所获得的樟芝固体物可经由任何已知技术所熟悉的加工处理方式，如利用水提或酒精萃取该固体培养物的活性成分，接着以已知的浓缩法，如真空浓缩或冷冻浓缩制备浓缩制品。

或以干燥方法予以干燥处理，例如喷雾干燥、冷冻干燥等，其中以无加热的喷雾干燥，可得到完全不受热影响的干燥粉末。优选为冷冻干燥法，于0℃以下的低温至常温间，除去该固体物的水分，同时在干燥期间该固体培养物亦不受氧气的影响而改变其性质。

或使喷雾干燥的微粉末粒子或其他干燥法制备的微小粒子，经附聚作用(agglomeration)增加粉体的凝集及其粒径，该附聚物的构造为多孔质，具备良好的可湿性。

本发明的樟芝固体培养物、已知液体培养法所得的樟芝及野生樟芝的高效液相色谱(HPLC)图谱数据比较，如图2。经HPLC分析，本发明固体培养方法所得的子实体具有与天然野生樟芝十分类似的组成，应当具有与天然野生樟芝相同的活性及用途，包括安神、怯风行气、化瘀活血、温中消积、解毒消肿、及镇静止痛之效，以及具有抑制细菌、病毒及肿瘤细胞的能力，及强心、免疫调节、抗副交感神经作用、抗血清素活性的功效。可用以治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、糖尿病、痛风、肾炎、关节炎、发炎、过敏、尿蛋白过高、尿毒症、肝硬化、肝癌及流行性感冒等。甚至具有皮肤再造的能力，又可作为人体皮肤或愈伤的材料，对褥疮、皮肤外伤可作成贴剂。

根据本发明，更进一步具体实证本发明的固体培养物具有抗自由基及抗脂质过氧化能力，保肝功能，以及抑制癌细胞功效。显然本发明的固体培养物可作为养生的健康食品之用，或可进一步开发为各种药物。

下列实施例用对本发明作进一步的例示说明，并非用以限制本发明，本领域技术人员根据本发明说明书的内容所完成的修饰及应用，皆属本发明的范畴。

实施例1

将取自食品工业发展研究所，寄存编号CCRC 35398的菌种，该菌种为市售菌种，以液体培养发酵以大量培养菌种，再接种至太空包。发酵培养液的配方为2％果糖、0.05％硫酸镁、0.5％酵母提取物及0.1％磷酸二氢钾。再以太空包方式进行菌丝体培养，太空包组成为65％草本植物的茎、梗、果实及木屑纤维物、20％马铃薯、10％米糠、3.5％葡萄糖、1％磷酸二氢钾及0.5％硫酸镁，并调整其湿度为80％及其pH值为7。其湿度约为60-90％，优选为80％，并调整其pH值接近中性。

本文中所指菌丝培养阶段是指菌种植入太空包约60天之内，其中菌丝体生长温度介于5至32℃间，优选为28℃。太空包的湿度为80％，空气条件为含0.2-1％二氧化碳。

菌丝体培养完成后，进行子实体栽培阶段，即在约61-90天内将太空包去除，使之完全暴露在空气中，子实体生长期间的日夜温差须经严格控制，日间温度一般介于20至30℃间；夜间温度则为11℃±1℃；日夜温差维持在15℃。子实体栽培阶段的空气湿度控制于90-95％之间；另外子实体须于空气流通下进行培养，其中二氧化碳含量不能超过1％。

在90-120天内，待圆锥形子实体长成直径15厘米、高度25厘米时即可采收固体培养物，其重量约为0.4公斤，如图1。其主要活性成分三萜类的高效液相色谱(HPLC)图谱分析如图2A所示，其数值如下表1所列。

表1 本发明培养方法所得的樟芝子实体的高效液相色谱图谱数据

保留面积浓度成份编号面积％相对高度高度％浓度基线码

时间 (UV*秒) 单位名称1 2.060 27958870 9.3018 1000.279 6.9342 0.0000 PV2 2.547 6320387 2.1028 999.303 6.5299 0.0000 VV3 2.663 6333234 2.1070 999.158 6.5289 0.0000 VV4 2.823 13521140 4.4984 998.886 6.5271 0.0000 VV5 3.117 3933511 1.3087 328.263 2.1450 0.0000 VV6 3.413 4414312 1.5352 303.141 1.9808 0.0000 VV7 3.673 2519874 0.8384 182.128 1.1901 0.0000 VV8 3.973 2084553 0.6935 144.477 0.9441 0.0000 VV9 4.367 4265658 1.4192 149.456 0.9766 0.0000 VV10 5.150 7601131 2.5289 460.320 3.0079 0.0000 VV11 5.773 1671478 0.5561 71.272 0.4657 0.0000 VP12 6.043 441685 0.1469 54.184 0.3541 0.0000 VV13 6.360 1264481 0.4207 62.749 0.4100 0.0000 VV14 6.597 1359149 0.4522 56.000 0.3834 0.0000 VV15 7.263 1946283 0.6475 56.407 0.3686 0.0000 VV16 7.660 517391 0.1721 43.061 0.2815 0.0000 VV17 8.167 5862269 1.9504 317.837 2.0769 0.0000 VV18 8.983 932610 0.3103 29.915 0.1955 0.0000 VV19 9.990 1253931 0.4172 34.691 0.2267 0.0000 VV20 10.343 538013 0.1790 22.699 0.1496 0.0000 VV21 10.823 164318 0.0547 12.337 0.0806 0.0000 VV22 11.327 1233415 0.4104 29.716 0.1942 0.0000 VV23 12.193 628302 0.2090 19.258 0.1258 0.0000 VV24 12.990 1259055 0.4189 37.378 0.2442 0.0000 VP25 14.810 2982581 0.9923 80.403 0.5254 0.0000 PP26 17.313 2521967 0.8390 68.342 0.4466 0.0000 PV27 18.113 627346 0.3087 19.934 0.1303 0.0000 VV28 18.990 117338 0.0390 4.690 0.0306 0.0000 VV29 19.867 663514 0.2207 20.198 0.1320 0.0000 VV30 20.867 2932057 0.9755 52.760 0.3448 0.0000 VV31 22.323 252149 0.0839 9.636 0.0630 0.0000 VV32 23.080 3131682 1.0419 79.476 0.5193 0.0000 VV33 23.960 1130832 0.3762 31.023 0.2027 0.0000 VV34 25.857 4135840 1.3760 78.025 0.5098 0.0000 VV35 26.910 1070268 0.3561 22.420 0.1465 0.0000 VP36 28.940 2127664 0.7079 44.217 0.2889 0.0000 PV37 30.503 15997700 5.3224 304.304 1.9885 0.0000 VV38 33.793 5256445 1.7488 92.365 0.6036 0.0000 PV39 35.573 462920 0.1540 8.405 0.0549 0.0000 VV40 37.360 4416830 1.4695 79.089 0.5168 0.0000 VP41 39.193 261669 0.0871 5.522 0.0361 0.0000 PV42 41.267 4411946 1.4678 73.326 0.4791 0.0000 VV43 42.667 2821209 0.9386 50.936 0.3328 0.0000 VV44 44.323 36608 0.0122 1.071 0.0070 0.0000 VP45 46.630 10087950 3.3562 134.950 0.6818 0.0000 PP46 50.090 333401 0.1109 4.502 0.0294 0.0000 PV47 52.383 4896649 1.4291 60.376 0.3945 0.0000 VP48 55.280 124357 0.0414 2.047 0.0134 0.0000 PP49 56.593 4986938 1.4591 340.488 2.2249 0.0000 PV50 56.953 7314754 2.4336 625.513 4.0874 0.0000 VV51 57.290 4586732 1.5260 463.198 3.0267 0.0000 VV52 57.800 3699588 1.2308 189.756 1.2399 0.0000 VV53 58.087 1056724 0.3516 118.120 0.7718 0.0000 VV54 58.477 2468879 0.8214 134.218 0.8770 0.0000 VV55 58.690 1982234 0.6595 157.526 1.0233 0.0000 VV56 58.927 1445816 0.4810 124.837 0.8157 0.0000 VV57 59.210 3138696 1.0442 171.327 1.1195 0.0000 VV58 59.520 1098725 0.3655 89.794 0.5867 0.0000 VV59 59.840 1481909 0.4930 102.506 0.6698 0.0000 VV60 60.093 3406697 1.1334 202.433 1.3228 0.0000 VV61 60.483 1645084 0.5473 104.449 0.6825 0.0000 VV62 60.980 10587770 3.5225 757.281 4.9484 0.0000 VV63 61.403 1626563 0.5412 117.086 0.7651 0.0000 VV64 61.700 856049 0.2848 79.162 0.5173 0.0000 VV65 61.907 1498212 0.4984 88.354 0.5773 0.0000 VV66 62.297 7358936 2.4483 538.464 3.5185 0.0000 VV67 63.713 1007688 0.3353 76.731 0.5014 0.0000 VV 68 62.980 953127 0.3171 76.873 0.5023 0.0000 VV69 63.187 1992004 0.4627 49.894 0.4567 0.0000 VV70 63.803 776093 0.2582 55.283 0.3612 0.0000 VV71 64.203 6164886 2.0510 515.260 3.3449 0.0000 VV72 64.537 761873 0.2535 72.303 0.4725 0.0000 VV73 64.773 2147592 0.7145 124.955 0.0165 0.0000 VV74 65.287 2333203 0.7762 110.636 0.7229 0.0000 VV75 65.987 1814540 0.6037 53.283 0.3482 0.0000 VV76 66.617 1221936 0.4065 56.684 0.3704 0.0000 VV77 67.103 1666644 0.5545 81.135 0.5302 0.0000 VV78 67.617 1226534 0.4081 46.888 0.3064 0.0000 VV79 68.340 3797130 1.2633 106.221 0.7072 0.0000 VV80 68.910 3980780 1.3244 176.942 1.1562 0.0000 VV81 69.637 2559917 0.0517 76.359 0.4990 0.0000 VV82 70.970 480358 0.2264 16.357 0.1069 0.0000 VV83 71.683 264668 0.0881 12.546 0.0820 0.0000 VV84 72.387 686349 0.2283 14.902 0.0974 0.0000 VV85 73.070 513554 0.1709 13.848 0.0905 0.0000 VV86 73.730 419796 0.1397 9.953 0.0650 0.0000 VV87 74.950 357733 0.1190 12.698 0.0830 0.0000 VV88 75.373 465804 0.1550 15.474 0.1011 0.0000 VV89 76.253 356155 0.1185 10.162 0.0664 0.0000 VV90 77.137 133340 0.0444 4.645 0.0304 0.0000 VV91 77.850 272953 0.0908 11.805 0.0771 0.0000 VV92 78.420 752948 0.2505 30.824 0.2014 0.0000 VV93 78.690 869866 0.2894 31.809 0.2079 0.0000 VV94 79.653 66206 0.0220 2.235 0.0146 0.0000 VP95 80.730 79648 0.0265 2.862 0.0187 0.0000 PP96 81.753 27502 0.0091 1.070 0.0070 0.0000 PP97 83.147 186611 0.0621 4.143 0.0271 0.0000 PV98 83.923 293714 0.0977 9.081 0.0593 0.0000 VV99 84.520 361025 0.1201 9.061 0.0592 0.0000 VV100 85.820 820423 0.2750 29.144 0.1904 0.0000 VV101 86.260 1531752 0.5096 35.706 0.2333 0.0000 VV102 87.803 1945022 0.6471 51.978 0.3396 0.0000 VV103 89.500 271109 0.0902 7.353 0.0480 0.0000 VP104 90.683 26832 0.0089 0.533 0.0035 0.0000 PP105 92.080 55385 0.0184 1.398 0.0091 0.0000 PP106 96.443 3758662 1.2505 52.867 0.3455 0.0000 PP107 100.237 94086 0.0313 1.137 0.0074 0.0000 PP108 106.650 1435702 0.4777 41.107 0.2686 0.0000 PV109 107.300 1158655 0.3855 55.895 0.3652 0.0000 VV110 107.720 1487062 0.4947 71.435 0.4868 0.0000 VV111 108.190 709049 0.2359 37.254 0.2434 0.0000 VV112 108.493 618254 0.2722 38.627 0.2524 0.0000 VV113 109.013 631416 0.2101 35.016 0.2286 0.0000 VV114 109.507 1010342 0.3361 33.653 0.2199 0.0000 VV115 109.900 446664 0.1486 27.863 0.1821 0.0000 VV116 110.160 598899 0.1993 33.360 0.2180 0.0000 VV117 110.493 840683 0.2797 57.202 0.3738 0.0000 VV118 111.023 2135668 0.7105 103.717 0.6777 0.0000 VV119 111.450 547756 0.1822 42.198 0.2757 0.0000 VV120 111.833 1597280 0.5314 56.890 0.3717 0.0000 VV121 112.473 967994 0.3220 55.981 0.3658 0.0000 VV122 112.607 679050 0.2259 59.614 0.3895 0.0000 VV123 112.820 536941 0.1786 49.913 0.3261 0.0000 VV124 113.067 987108 0.3284 35.926 0.2348 0.0000 VV125 113.807 1383823 0.4604 34.665 0.2265 0.0000 VV126 114.563 1002529 0.3335 36.357 0.2376 0.0000 VV127 114.970 520199 0.1731 24.136 0.1577 0.0000 VV128 115.540 1143580 0.3805 28.119 0.1837 0.0000 VV129 116.577 338256 0.1125 11.209 0.0732 0.0000 VV130 117.017 176187 0.0586 8.880 0.0580 0.0000 VV131 117.400 169393 0.0564 8.586 0.0561 0.0000 VV132 118.133 518740 0.1726 11.014 0.0720 0.0000 VV133 118.763 134439 0.0447 7.091 0.0483 0.0000 VV134 119.237 368278 0.1225 10.127 0.0662 0.0000 VP135 121.140 64584 0.0215 2.560 0.0167 0.0000 PV136 121.620 185059 0.0616 6.282 0.0410 0.0000 VV137 122.620 30314 0.0101 1.935 0.0126 0.0000 VV138 123.090 254238 0.0846 8.468 0.0553 0.0000 VV139 124.110 141072 0.0469 6.206 0.0406 0.0000 VP140 125.877 378418 0.1259 7.976 0.0521 0.0000 PP141 127.977 27554 0.0092 1.016 0.0066 0.0000 PP142 129.813 187915 0.0625 9.937 0.0649 0.0000 PP总和 300574926 15303.40 0.0000

为比较本发明樟芝固体物与其他栽培方式所得樟芝的不同，并以液体培养法所得的樟芝及野生樟芝进行HPLC，其图谱如图2B及图2C，其数据如表2及表3。由图谱可见，本发明培养得到的樟芝子实体具有与野生樟芝相同峰形的图谱，亦表示本发明方法培养的子实体应当具有与野生樟芝相同的活性及用途。

表2 液体栽培法所得樟芝的高效液相色谱图谱数据

保留面积浓度成份编号面积％相对高度高度％浓度基线码

时间 (UV*秒) 单位名称1 1.620 262998 1.2184 38.745 2.2045 0.0000 PV2 1.857 8294342 38.4242 660.685 37.5912 0.0000 VV3 2.520 5417476 25.0969 726.398 41.3301 0.0000 VV4 2.820 1692634 7.8413 99.406 5.6559 0.0000 VV5 3.790 731157 3.3871 23.209 1.3205 0.0000 VB6 4.123 271974 1.2599 11.713 0.6664 0.0000 BV7 4.623 154068 0.7137 7.810 0.4444 0.0000 VV8 5.023 154230 0.7145 4.580 0.2606 0.0000 VV9 5.897 29822 0.1382 1.652 0.0940 0.0000 VP10 7.860 150572 0.6975 5.210 0.2964 0.0000 PP11 9.210 123419 0.5717 3.914 0.2227 0.0000 PP12 11.930 130807 0.6060 3.563 0.2027 0.0000 PV13 12.740 37712 0.1747 1.232 0.0701 0.0000 VP14 15.103 504463 2.3370 11.048 0.6286 0.0000 PP15 16.890 143477 0.6647 3.512 0.1998 0.0000 PP16 19.350 56660 0.2634 1.827 0.1039 0.0000 PP17 23.510 806678 3.7379 11.274 0.6415 0.0000 PP18 27.167 92042 0.4264 1.224 0.0696 0.0000 PP19 30.633 144285 0.6684 2.243 0.1276 0.0000 PP20 33.747 289568 1.3414 3.947 0.2245 0.0000 PP21 38.727 250488 1.1604 3.231 0.1839 0.0000 PP22 41.340 61644 0.2856 0.771 0.0438 0.0000 PP23 43.727 29928 0.1386 0.470 0.0267 0.0000 PP24 57.047 112074 0.5192 9.096 0.5175 0.0000 PV25 57.433 175711 0.8140 10.275 0.5846 0.0000 VV26 57.907 107598 0.4985 4.508 0.2565 0.0000 VV27 58.137 25810 0.1196 2.279 0.1296 0.0000 VP28 61.380 23245 0.1077 2.024 0.1152 0.0000 PV29 62.743 196612 0.9108 21.767 1.2385 0.0000 VV30 64.223 30411 0.1409 2.094 0.1192 0.0000 PV31 64.717 441196 2.0439 41.620 2.3681 0.0000 VV32 64.997 48524 0.2248 4.870 0.2771 0.0000 VV33 65.420 40354 0.1869 3.529 0.2008 0.0000 VV34 65.833 67766 0.3139 3.823 0.2175 0.0000 VP35 66.950 21298 0.0987 1.691 0.0962 0.0000 PP36 67.773 32193 0.1491 1.708 0.0972 0.0000 PP37 79.013 29414 0.1363 0.920 0.0523 0.0000 PP38 97.297 21884 0.1014 0.456 0.0260 0.0000 PP39 100.053 38474 0.1782 0.738 0.0420 0.0000 PP40 104.457 126686 0.5869 2.358 0.1342 0.0000 PP41 107.010 57252 0.2652 2.113 0.1202 0.0000 PP42 111.397 35854 0.1661 4.236 0.2410 0.0000 VV43 111.813 28337 0.1313 2.512 0.1429 0.0000 VP44 113.790 25408 0.1177 1.810 0.1030 0.0000 VP45 115.883 43858 0.2032 3.808 0.2167 0.0000 PV46 119.590 25451 0.1179 1.656 0.0942 0.0000 PP总和 21586254 1757.553 0.0000

表3 野生樟芝的高效液相色谱图谱数据

保留面积浓度成份编号面积％相对高度高度％浓度基线码

时间 (UV*秒) 单位名称1 1.550 1332009 0.5787 162.045 1.1488 0.0000 PV2 1.913 12708000 5.5210 797.430 5.6535 0.0000 VV3 2.607 7990504 3.4715 374.149 2.6526 0.0000 VV4 2.997 3336181 1.4494 151.464 1.0738 0.0000 VV5 3.480 827969 0.3597 90.536 0.6419 0.0000 VV6 3.687 2100942 0.9127 89.231 0.6326 0.0000 VV7 4.110 1665378 0.7235 80.468 0.5705 0.0000 VV8 4.590 986857 0.4287 61.543 0.4363 0.0000 VV9 4.867 1300649 0.5651 59.445 0.4214 0.0000 VV10 5.377 620409 0.2695 37.086 0.2629 0.0000 VV11 5.623 712514 0.3095 37.666 0.2670 0.0000 VV12 6.020 617412 0.2682 32.787 0.2324 0.0000 VV13 6.347 380678 0.1654 24.939 0.1768 0.0000 VV14 6.660 622333 0.2704 24.053 0.1705 0.0000 VV15 7.060 557302 0.2421 18.364 0.1302 0.0000 VV16 7.710 585765 0.2545 27.106 0.1922 0.0000 VV17 8.353 276221 0.1200 10.957 0.0777 0.0000 VV18 8.867 379887 0.1650 19.904 0.1411 0.0000 VV19 9.327 316284 0.1374 21.157 0.1500 0.0000 VV20 9.623 72843 0.0316 4.914 0.0348 0.0000 VV21 10.593 120581 0.0524 6.584 0.0467 0.0000 PP22 11.260 57846 0.0251 2.283 0.0162 0.0000 PV23 11.747 32476 0.0141 2.199 0.0156 0.0000 VV24 12.263 209326 0.0909 11.437 0.0811 0.0000 VV25 12.837 131315 0.0570 6.603 0.0468 0.0000 VV26 13.733 270732 0.1176 7.438 0.0527 0.0000 VP27 15.300 156380 0.0679 6.542 0.0464 0.0000 PP28 17.513 346774 0.1507 10.369 0.0735 0.0000 PV29 18.270 1011777 0.4396 25.904 0.1837 0.0000 VV30 19.863 298337 0.1296 7.175 0.0509 0.0000 VP31 21.567 237547 0.1032 6.715 0.0476 0.0000 VV32 22.657 261555 0.1136 7.129 0.0505 0.0000 VV33 23.960 419821 0.1824 8.165 0.0579 0.0000 VP34 26.780 1014237 0.4406 20.361 0.1444 0.0000 PP35 29.320 4482109 1.9472 103.960 0.7370 0.0000 PP36 32.017 6999710 3.0410 156.204 1.1074 0.0000 PV37 33.343 399151 0.1734 8.733 0.0619 0.0000 VP38 35.053 97125 0.0422 2.428 0.0172 0.0000 PV39 37.007 3062612 1.3305 46.150 0.3272 0.0000 VP40 39.587 832484 0.3617 15.926 0.1129 0.0000 PV41 40.897 2411303 1.0476 30.354 0.2152 0.0000 VP42 43.603 94412 0.0410 2.102 0.0149 0.0000 PP43 46.093 950329 0.4129 12.948 0.0918 0.0000 PP44 47.820 29686 0.0129 0.697 0.0049 0.0000 PP45 51.273 22016 0.0096 0.505 0.0036 0.0000 PP46 53.253 391511 0.1701 6.542 0.0464 0.0000 PP47 55.177 418679 0.1819 6.082 0.0431 0.0000 PP48 57.243 3988680 1.7329 240.883 1.7078 0.0000 PV49 57.500 4155318 1.8053 345.611 2.4503 0.0000 VV50 57.787 3545656 1.5404 257.829 1.8279 0.0000 VV51 58.010 1206951 0.5244 175.620 1.2451 0.0000 VV52 58.257 2986313 1.2974 222.955 1.5807 0.0000 VV53 58.400 5093407 2.2128 431.601 3.0599 0.0000 VV54 58.673 2540255 1.1036 286.541 2.0315 0.0000 VV55 58.943 5661787 2.4597 471.025 3.3394 0.0000 VV56 59.233 2400643 1.0430 197.347 1.3991 0.0000 VV57 59.543 3531683 1.5343 200.445 1.4211 0.0000 VV58 59.850 2228945 0.9684 164.165 1.1639 0.0000 VV59 60.060 2828869 1.2290 335.781 2.3806 0.0000 VV60 60.410 17547630 7.6235 994.818 7.0529 0.0000 VV 61 60.743 13833800 6.0101 994.628 7.0516 0.0000 VV62 60.920 9930270 4.3142 941.167 6.6726 0.0000 VV63 61.343 3601150 1.5645 265.761 1.8842 0.0000 VV64 61.723 6048523 2.6278 525.238 3.7238 0.0000 VV65 62.127 2249845 0.9774 180.527 1.1381 0.0000 VV66 62.357 2849680 1.2380 152.131 1.0786 0.0000 VV67 63.207 11335680 4.9248 886.220 6.2830 0.0000 VV68 63.460 3758168 1.6327 214.761 1.5226 0.0000 VV69 64.087 17403430 7.5609 992.676 7.0377 0.0000 VV70 64.807 6379895 2.7717 332.965 2.3406 0.0000 VV71 65.487 1105522 0.4803 48.756 0.3457 0.0000 VV72 66.060 1061718 0.4613 41.562 0.2947 0.0000 VV73 66.490 1903467 0.8270 65.469 0.4642 0.0000 VV74 67.563 1016818 0.4418 30.915 0.2192 0.0000 VV75 68.387 1511594 0.6567 37.104 0.2631 0.0000 VV76 69.390 10743430 4.6675 526.207 3.7306 0.0000 VV77 70.583 358833 0.1559 13.087 0.0928 0.0000 VV78 71.257 2732845 1.1873 127.212 0.9019 0.0000 VV79 72.317 237862 0.1033 7.948 0.0563 0.0000 VV80 72.730 245290 0.1066 6.784 0.0481 0.0000 VV81 73.783 87523 0.0380 3.200 0.0227 0.0000 VV82 74.250 127009 0.0552 4.136 0.0293 0.0000 VV83 74.890 86115 0.0374 2.980 0.0211 0.0000 VP84 75.973 28738 0.0125 1.165 0.0083 0.0000 PP85 77.503 92275 0.0401 1.898 0.0135 0.0000 PP86 80.060 508744 0.2210 11.408 0.0809 0.0000 PP87 82.200 28158 0.0122 0.871 0.0062 0.0000 PP88 84.293 79909 0.0347 1.534 0.0109 0.0000 PP89 87.500 1092447 0.4746 24.011 0.1702 0.0000 PV90 87.630 300046 0.1304 24.553 0.1741 0.0000 VV91 87.893 382295 0.1661 25.603 0.1815 0.0000 VV92 88.107 224523 0.0975 21.631 0.1534 0.0000 VV93 88.397 717983 0.3119 37.094 0.2630 0.0000 VV94 89.010 518852 0.2254 22.242 0.1577 0.0000 VV95 89.237 307090 0.1334 21.551 0.1528 0.0000 VV96 89.473 302635 0.1315 19.158 0.1358 0.0000 VV97 90.007 4050733 1.7598 326.533 2.3150 0.0000 VV98 91.020 376589 0.1636 16.743 0.1187 0.0000 VV99 91.427 152969 0.0665 11.423 0.0810 0.0000 VV100 91.643 205346 0.0892 11.033 0.0782 0.0000 VV101 92.013 142333 0.0818 11.613 0.0823 0.0000 VV102 92.157 288901 0.1168 11.479 0.0814 0.0000 VV103 92.633 124915 0.0543 8.073 0.0572 0.0000 VV104 93.083 908307 0.3946 88.376 0.6266 0.0000 VV105 93.690 210904 0.0916 15.423 0.1093 0.0000 VV106 94.063 323059 0.1404 22.173 0.1572 0.0000 VV107 94.547 63428 0.0276 3.102 0.0220 0.0000 VV108 95.123 29222 0.0127 2.059 0.0146 0.0000 VP109 95.963 45135 0.0196 2.967 0.0210 0.0000 VP110 98.950 58309 0.0253 3.644 0.0258 0.0000 VP111 100.273 20525 0.0089 0.713 0.0051 0.0000 PP112 105.563 38299 0.0166 1.804 0.0128 0.0000 PP113 112.263 55710 0.0242 1.468 0.0104 0.0000 PP114 126.417 44605 0.0194 0.861 0.0061 0.0000 PP总和 230177556 14105.03 0.0000

下述成分分析检验及药理检验，说明根据本发明培养方法所得樟芝子实体固体物其浓缩产品的成分及功效。经分析，主要成分包括三萜类化合物、水溶性多糖及几丁质。

水溶性多糖

经日本食品分析中心检测，发现本发明培养方法所得樟芝子实醴固体物具高量水溶性多糖，每100克约含有1.2至6.5克的水溶性多糖。

重金属含量

根据国立清华大学原子科学系微量分析实验室以原子光谱仪，对根据本发明方法所栽培的樟芝固体物进行重金属分析，结果显示如下：

Na：48.7ppm Mn：10.9ppm Cd：ND

Mg：767ppm Fe：100ppm Cr：ND

Al：41.6ppm Zn：16.4ppm

Ca：605ppm As：ND

K：0.560％ Hg：ND

总抗氧化活性(Total antioxidant activity)

根据本发明的樟芝固体物的浓缩粉与野生樟芝粉末及灵芝子实体浓缩粉进行比较，检测每克粉末的含量，其相当于维生素C的毫克数。来源每克粉末的含量/相当于维生素C的毫克数野生樟芝粉末 633微克抗坏血酸/克灵芝子实体浓缩粉 854微克抗坏血酸/克本发明樟芝固体物的浓缩粉 1180微克抗坏血酸/克

该结果显示本发明的樟芝固体物的抗氧化力远高于灵芝子实体及野生樟芝。

毒性试验

根据本发明的樟芝使用小鼠进行急性口服毒性试验LD50，实验组小鼠口服一次2000毫克/千克根据本发明的樟芝，对照组则给予精制水作为溶媒对照。实验结果显示，实验组小鼠并未出现异常或死亡例。因此，急性口服毒性试验LD50值为2000毫克/千克以上。

埃姆斯试验(Ames test)

根据本发明的樟芝利用平板混合试验法，来进行埃姆斯试验(Ames test)。测试菌株包括有鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535五株，五个浓度分析，分别为312.5、625、1250、2500及5000微克/平板，同时包括阴性对照组与具菌株专一性的阳性对照组，每组皆做三个重复。测试结果显示阴性对照组引发的逆突变菌落背景皆落在可接受的范围内；而阳性对照组亦引发逆突变菌落数显著增加。根据本发明的樟芝在不论是否含有大鼠肝脏酶(S9)代谢系统的处理下，所有测试浓度均未显著引起测试株逆突变菌落数的增加，如表4所示。

表4埃姆斯试验

实验对象	实验例数	摄取量·期间	实验结果
实验对象	实验例数	摄取量·期间	实验结果	鼠伤寒沙门菌	各5株TA97TA98TA100TA102TA1535需组氨酸突变株	测试浓度(微克/平板)312.5，625，1250，2500，5000平板混合试验重覆三次37±1℃恒温培养48～72小时计算突变菌落数	所有测试浓度，在加或不加大鼠肝脏酶代谢系统(S9)的处理下，均未显著引起测试菌株逆突变菌落数的增加。试验结果为阴性

抗脂质过氧化能力的试验

利用大鼠脑均质液的脂质过氧化反应，以检测根据本发明的樟芝固体培养浓缩液的抗自由基及抗氧化能力。图3显示以亚铁离子刺激大鼠脑均质液引发自由基的脂质过氧化反应，并造成脂质过氧化成分(TBARS)增加，而根据本发明的樟芝固体培养物的三倍与八倍浓缩液随其浓度的增加，其结果显示可显著抑制过氧化反应，并具有抗自由基能力。

保肝功能实验

建立以四氯化碳诱导小鼠慢性化学性肝损伤的实验模型，探讨不同浓缩倍数的樟芝对于小鼠慢性肝损伤的影响。

24只不具疾病的小鼠(ICR品系)分成四组，如表5所示。

表5樟芝试验剂量与动物组别分布组别四氯化碳CCl₄剂量剂量程度小鼠只数A 0(对照组) 0(对照组) 6B 40％CCl₄/橄榄油 0(对照组) 6

(0.3毫升/100克体

重)C 同上 50毫克(三倍)/公斤 6D 同上 50毫克(八倍)/公斤 6

对A及B至D组小鼠分别皮下注射橄榄油(0.1毫升/10克体重)及40％四氯化碳CCl₄橄榄油(0.1毫升/10克体重)，每周两次，并对A及B组小鼠以胃管灌予食盐水，在C与D组则分别口服喂食两种剂量的根据本发明方法所培育的樟芝浓缩样品，共维持五周。所有小鼠分别于第五周后以眼窝采血方式检测肝脏相关功能生化值，随之处死小鼠，取其肝脏并固定最大右叶肝组织以进行组织病理学观察，例如肝细胞受损、脂肪变性、坏死及纤维化等变化程度。生化功能测定包括血中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(GPT)与谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(GOT)酶活性，GPT及GOT检测原理是根据国际联邦临床化学的标准方法。

实验结果显示，以四氯化碳慢性肝伤害下的小鼠血浆中GPT及GOT值在实验五周后明显升高，其中GPT值约为850单位，此为正常值的20-22倍；而GOT值约为1700单位，此为正常值的40-42倍(图4、5)。另外，喂食三倍及八倍本发明的浓缩樟芝明显抑制因四氯化碳所引起GPT及GOT数值的升高。特别当GPT及GOT值达到高峰时，使用三倍浓缩剂量可抑制约37％GPT及65％GOT值的升高。如图6所示，相较于正常小鼠的肝脏组织，以四氯化碳处理六周后的小鼠，其肝脏组织明显肿大且表面呈灰白粗糙状；然而喂食不同浓度樟芝浓缩物小鼠的肝脏，未发现肿大或灰白粗糙的表面。另外，在染色下发现脂肪颗粒明显堆积，中心静脉附近的肝细胞明显肿大、含铁代谢物的巨噬细胞与其他发炎性白血球浸润在肝细胞间，且部分细胞坏死可见结节状转化(nodulartransformation)。喂食不同浓度樟芝的小鼠的肝脏组织则未发现上述的病理性变化(见图7)。此外，表6是例示小鼠肝脏病理组织半定量分析(N表示正常组、D表示四氯化碳伤害组、X3表示喂食樟芝三倍浓缩组及X8表示喂食樟芝八倍浓缩组)，其中应当可确认樟芝浓缩物明显改善病理性的变化。

表6小鼠肝脏病理组织半定量分析

肝脏脂质细胞坏死胆管增钙化

发炎变性生

局部坏死连接坏死结节状转化N 0 0 0-1 0 0 0 0D 2-3 2-3 2 2 0-1 1 0-1X3 1 1-2 0-1 1-2 0-1 0-1 0-1X8 0-1 0-1 0-1 1 0 0-1 0-1

癌细胞抑制试验

食品工业发展研究所接受委托进行本发明的樟芝固体培养浓缩液对宫颈癌(HeLa)、胃癌(AGS)、乳腺癌(MCF-7)、肝癌(HepG2)及肠癌(COLO 320HSR)等癌细胞抑制试验，细胞成长抑制率如表7所示，本发明的樟芝固体培养浓缩液对肿瘤细胞具强效抑制力(75％-87％)，其中对乳腺癌细胞(MCF-7)的抑制力最强。

表7樟芝固体培养浓缩液抑制肿瘤细胞试验结果

细胞成长抑制率(％)细胞株种类平均值(％) ± SDHela 83 ± 3.1AGS 84 ± 2,7HepG2 75 ± 2.4MCF-7 87 ± 1.4^*测试样品最后浓度为原始样品浓度的十分之一

另外，分别用粉末样品(10毫克/毫升)五种(New1、New2、New3、New4及New5)与液体样品十一种(20L、New2、New3、520、521、522、523、524、525、526及527)及其10倍稀释样品以微量培养四唑鎓检测(microculture tetrazolium assay)进行肠癌细胞(COLO320HSR)抑制试验。其结果如图8所示，显示于最后浓度为1/10原液时具有至少30％抑制力，而以样品20L的抑制力最强，可高达90％的抑制肠癌细胞能力。

体外染色体结构变异分析

又进一步利用根据本发明的樟芝进行体外染色体结构变异分析，其方法是以根据本发明的樟芝处理中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamster ovary cell)，之后分析分裂中期的细胞，观察并计算其引发异常型态染色体的频率。该染色体结构变异分析法可用以评估根据本发明的樟芝对细胞染色体造成伤害的能力。该分析分别以下述三种处理方式进行，第一种是不加大鼠肝脏活化酶(S9)系统下，以根据本发明的樟芝处理3小时；第二种是加入S9，处理细胞3小时；第三种是在不加S9下，连续处理细胞20小时。其测试浓度与实验结果则如表8所示，根据本发明的樟芝在三种处理方式下的各测试浓度，均未显著引发染色体变异的频率增加。

表8 体外染色体结构变异分析

实验对象	实验例数	摄取量·期间	实验结果
实验对象	实验例数	摄取量·期间	实验结果	中国仓鼠卵巢细胞(ATCC，保藏号CC1-61CHO-K1)	依测试浓度每一平板植入60mm的细胞培养皿，每种浓度2个，依不同处理条件分为3组	第一、二组测试浓度均0，312.5，625，1250，2500与5000微克/毫升。第三组测试浓度是0，30，100，300，1000与3000微克/毫升依个别条件培养后选择染色体数目18～21且均匀散开的细胞作观察	在三组处理试中的结果皆显示：根据本发明的樟芝在代谢活化前后及不同时间处理下，对中国仓鼠卵巢细胞所引发染色体异常频率并无显著增加。故本实验结果为阴性。

动物体内小核分析

根据本发明的樟芝在小鼠网状红血球造成小核的情形，藉此判断根据本发明的樟芝在动物体内是否具有诱裂(clasiogeniciiy)的能力，并进一步提供根据本发明的樟芝对人类是否具有遗传毒性的风险评估。25只小鼠分成五组进行试验，其试验方法与实验结果如表9所示。由小鼠的小核分析显示，根据本发明的樟芝对小鼠周边血液的小核分析结果为阴性反应。

表9 动物体内小核分析

实验对象	实验例数	摄取量·期间	实验结果
实验对象	实验例数	摄取量·期间	实验结果	ICR小鼠	计分1.溶剂对照组2.高剂量组3.中剂量组4.低剂量组5.阳性对照组每组各5只雄鼠	1～4组各口服投与0，500，1000及2000毫克/千克的剂量；阳性对照组投与1.0毫克/千克MMC依条件采血于萤光显微镜下观察网状红血球	1.剂量组及溶剂对照组之间体重并无明显差异2.网状红血球比例分析：证明未造成小鼠骨髓毒性3.小核比例并无剂量—反应的趋势，对照比较亦无显著增加故根据本发明的樟芝对小鼠周边血液的小核分析结果为阴性反应。

基于上述药理数据应当可支持根据本发明的樟芝固体物不但具有与野生形相似的成分，如多糖及三萜类化合物，及其抗脂质过氧化能力、抗自由基或抗氧化等同的功效，另外还发现根据本发明的樟芝固体物具有保肝及抗癌的功效。

Claims

1.一种培养固体樟芝的方法，其包括将樟芝菌种以太空包进行菌丝体培养，移除太空包，使之暴露于空气中进行子实体栽培一段时间至圆锥形子实体形成；其中该太空包中含有10-70％纤维物、10-30％淀粉源、1-10％糖类、5-15％五谷杂粮类、0.5-2％磷酸盐及0.1-1％硫酸盐；

又其中太空包栽培阶段的湿度为60-80％，并调整其pH值为中性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该太空包是由60-70％纤维物、20％淀粉源、10％五谷杂粮类、5％糖类、1％磷酸二氢钾及0.5％硫酸镁所组成，其中湿度为80％，并调整其pH值为中性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该纤维物为蕈类或植物的茎、梗、果实或木屑。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中该淀粉源为马铃薯。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中该五谷杂粮为米糠。

6.根据权利要求1或2所述的方法，该太空包是由65％草本植物的茎、梗、果实或木屑、20％马铃薯、10％米糠、3.5％葡萄糖、1％磷酸二氢钾及0.5％硫酸镁所组成。

7.根据权利要求1所述的方法，该菌丝体培养的温度介于5℃至32℃之间。

8.根据权利要求7所述的方法，其中菌丝体培养的温度为28℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其中太空包湿度介于60-80％之间。

10.根据权利要求9所述的方法，其中太空包湿度为80％。

11.根据权利要求1所述的方法，其中菌丝体培养时的空气条件为含有0.2-1％的二氧化碳。

12.根据权利要求1所述的方法，其子实体栽培于空气流通下进行。

13.根据权利要求12所述的方法，其子实体栽培期间的日间温度介于20至30℃之间，而夜间温度介于8-14℃间。

14.根据权利要求13所述的方法，该子实体栽培时的日间温度为24-26℃，而夜间温度为10-12℃。

15.根据权利要求14所述的方法，其日夜间温差为15℃。

16.根据权利要求1所述的方法，子实体培养的空气湿度介于90-95％之间。

17.根据权利要求16所述的方法，其中空气中二氧化碳含量低于1％。

18.根据权利要求1所述的方法，菌丝体培养进行50-80天，而子实体培养须20-50天。

19.一种如权利要求1所述的方法所栽培的樟芝子实体固体物，其特征在于具有与野生形樟芝一致的类三萜成分的生理活性。

20.根据权利要求1所述的方法，其于菌丝体培养阶段前包含菌种大量培养步骤，包含(1)自液态氮保存活化的菌种取一小块洋菜菌丝块，移入新鲜培养基中于恒温下培养；(2)待菌种生长至旺盛时，将该菌种接种至杀过菌的纤维物(例如麦粒或木屑)的太空包中，接着于恒温下培养；(3)待该于太空包中的菌种长满菌丝时，去除最上面较老的菌丝块，然后即可大量接种至太空包中。

21.根据权利要求1所述的方法，其于菌丝体培养阶段前包含菌种大量培养步骤，包含以液体培养发酵以大量培养菌种，斜面试管培养后，将大量繁殖好的菌种接种至5升发酵培养液中，于24-26℃下以240 rpm旋转振荡培养约14天，接着以90 rpm往返振荡培养约14天，又接种至20升液体发酵液中搅拌培养14天；其中发酵培养液的配方为1.3％果糖、0.01-0.1％硫酸镁、0.1-1％酵母提取物、0.05-0.5％磷酸二氢钾。

22.根据权利要求21所述的方法，其中发酵培养液的配方为2％果糖、0.05％硫酸镁、0.5％酵母提取物及0.1％磷酸二氢钾。

23.一种樟芝子实体固体物，其是以食品工业发展研究所寄存编号CCRC 35398为菌种来源，该菌种为市售菌种，并如 1所述的方法栽培而得到的樟芝子实体固体物，其特征在于其具有与野生形樟芝一致的类三萜成分的生理活性，且其外形为圆锥状、直径为10-20厘米、高度为20-30厘米且重量为0.3-0.5公斤。

24.一种樟芝子实体固体物的产品，其特征在于权利要求23所述的樟芝子实体固体物经粉碎，并以醇或水提取浓缩至粘稠状，以得浓缩液。

25.根据权利要求24所述的产品，其可进一步以干燥处理制成干燥粉末状。

26.根据权利要求25所述的产品，其干燥粉末可经水调湿再行干燥，以得附聚物。

27.根据权利要求24所述的产品，其是作为一种食品组合物。

28.根据权利要求23所述的樟芝子实体固体物，其具有保肝功能。

29.根据权利要求23所述的樟芝子实体固体物，其用于治疗或抑制癌细胞生长。

30.根据权利要求29所述的樟芝子实体固体物，其中癌细胞是指宫颈癌细胞(HeLa)、胃癌细胞(AGS)、乳腺癌细胞(MCF-7)、肝癌细胞(HepG2)及肠癌细胞(COLO 320HSR)。

31.根据权利要求23所述的樟芝子实体固体物，其用于抑制过氧化反应。

32.根据权利要求23所述的樟芝子实体固体物，其用于抗自由基或抗脂质过氧化反应。

33.一种具有保肝功能的食品组合物，其包括如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品。

34.一种用于治疗或抑制癌细胞生长的食品组合物，其包括如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品。

35.一种用于抑制过氧化反应的食品组合物，其包括如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品。

36.一种用于抗自由基或抗脂质过氧化反应的食品组合物，其包括如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品。

37.一种用于保肝功能的医药组合物，其是自如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品制得。

38.一种用于治疗或抑制癌细胞生长的医药组合物，其是自如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品制得。

39.一种用于抑制过氧化反应的医药组合物，其是自如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品制得。

40.一种用于抗自由基或抗脂质过氧化反应的医药组合物，其是自如权利要求23所述的樟芝子实体固体物，或其加工产品制得。

41.根据权利要求23所述的樟芝子实体固体物，其具有与天然野生樟芝相同的功能，包括安神、怯风行气、化瘀活血、温中消积、解毒消肿、及镇静止痛之效，或可作为防腐解毒剂；及具有抑制细菌、病毒及肿瘤细胞的能力，具强心、免疫调节、抗副交感神经作用、抗血清素活性的功效；以及可用于治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、糖尿病、痛风、肾炎、关节炎、发炎、过敏、尿蛋白过高、尿毒症、肝硬化、肝癌及流行性感冒。

42.根据权利要求23所述的樟芝子实体固体物，其具皮肤再造功能，可用以作为人体皮肤或愈伤的材料。

43.根据权利要求41所述的樟芝子实体固体物，其可作为治疗褥疮、皮肤外伤的贴剂。