CN109328865B - 一种蛹虫草的制备方法及其制备的蛹虫草 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蛹虫草的制备方法及其制备的蛹虫草，该制备方法中使用的蛹虫草菌种培养基、蛹虫草培育培养基含有金银花粉末。该制备方法能降低杂菌生长和促进子实体的生长，所制备的蛹虫草颜色金黄，活性成分含量高，较常规方法所制备的蛹虫草保健效果更好。
Description
技术领域
本发明涉及一种蛹虫草的制备方法，以及制备的蛹虫草，属于真菌培育领域。
背景技术
蛹虫草又称北虫草，与冬虫夏草同科同属，化学成分基本一致，其抗肿瘤成分虫草素含量高于冬虫夏草，且是卫生部批准的新资源食品，具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎症、延缓衰老、提高免疫力等多种功效，适用人群广泛。因此蛹虫草被作为冬虫夏草的最佳替代品而渐渐走入人们视野并受到极大关注，蛹虫草产业目前已进入工厂化大面积栽培的充分发展时期。
然而现有技术中制备的蛹虫草其活性成分含量仍有一定不足，因此需要提供更优的蛹虫草制备方法，进一步提高其中各活性成分的含量，同时能降低杂菌生长和促进子实体的生长。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明提供了一种使用含有金银花、葡萄糖、蛋白胨的培养基制备蛹虫草的方法，将金银花蛹虫草菌种接种在所述培养基上可得到抗杂菌能力强，营养成分高于野生的冬虫夏草的金银花蛹虫草。
本发明涉及一种蛹虫草的制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤(1)制备蛹虫草菌种培养基，所述蛹虫草菌种培养基中含有金银花粉末，所述金银花粉末为干燥粉碎的金银花茎、叶、和/或花，所述金银花粉末含量为2％～8％W/V；步骤(2)在所述步骤(1)制备的蛹虫草菌种培养基中接种蛹虫草母种，培养得到蛹虫草一级菌种；步骤(3)制备蛹虫草培育培养基，所述蛹虫草培育培养基中含有金银花粉末，所述金银花粉末为干燥粉碎的金银花茎、叶、和/或花，所述金银花粉末含量为2％～8％W/V；以及步骤(4)在所述步骤(3)制备的蛹虫草培育培养基中接种所述蛹虫草一级菌种，培养得到蛹虫草。
本发明培养制备蛹虫草的培养基中添加了金银花作为金银花蛹虫草的营养来源；金银花，是许多中药配方中被广泛使用的草药之一。它有清热，解热，解毒，消炎、抗氧化等多种作用。经试验证明使用此培养基培育的蛹虫草菌种扩培不易感染杂菌，出菌率高，菌丝生长速度快。此外，原料成分简单易得，制备过程简单，成本低，利于产业上大规模生产。
所述蛹虫草母种可以用采集的野生菌种，也从商业上购买。
作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(1)中蛹虫草菌种培养基由20％W/V的去皮马铃薯、1％W/V的葡萄糖、1％W/V的蛋白胨、2％W/V的琼脂、0.05％W/V的蛹虫粉、0.05％W/V的磷酸二氢钾、0.03％W/V的硫酸镁、0.001％W/V的维生素B1以及2％～8％W/V的所述金银花粉末和余量的水组成，所述金银花粉末过60目筛，所述培养基pH为5.8。
作为本发明的一种优选实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(1)蛹虫草菌种培养基中金银花粉末含量为2％～5％W/V。
本发明的蛹虫草菌种培养基金银花粉末含量选择为2％～5％W/V时，经后续步骤制备的蛹虫草不仅活性成分含量高，其菌丝体外观更粗壮、更长。
作为本发明的一种更优选的实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(1)中蛹虫草菌种培养基中金银花粉末含量为2％W/V。
本发明的蛹虫草菌种培养基金银花粉末含量选择为2％W/V时，经后续步骤制备的蛹虫草不仅活性成分含量最高，其菌丝体外观相对也最粗壮、最长，长度可达10-11cm。
作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(2)中得到的所述蛹虫草菌种为金银花蛹虫草菌晶懋1号，保藏号为CGMCC No.15364。
所述金银花蛹虫草菌晶懋1号，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.15364，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日为2018年2月12日。
作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(2)中蛹虫草一级菌种培育条件为接入5％的蛹虫草菌种，20-22℃恒温避光培养7天。
作为本发明的一种实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(3)中所述蛹虫草培育培养基由大米，金银花混合粉末和蛹虫草液体培养基组成，大米、金银花混合粉末和蛹虫草液体培养基分别以30份、20～80份、35份的配比混合；所述蛹虫草液体培养基由20％W/V的去皮马铃薯、1％W/V的葡萄糖、1％W/V的蛋白胨、0.05％W/V的蛹虫粉、0.05％W/V的磷酸二氢钾、0.03％W/V的硫酸镁、0.001％W/V的维生素B1以及2％～8％W/V的所述金银花粉末和余量的水组成，所述金银花粉末过60目筛，所述培养基pH为5.8。
作为本发明的一种优选实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(3)中所述金银花粉末含量为2％～5％W/V。
本发明的蛹虫草培育培养基金银花粉末含量选择为2％～5％W/V时，制备的蛹虫草不仅活性成分含量高，其菌丝体外观更粗壮、更长。
作为本发明的一种优选实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(3)中所述金银花粉末含量为2％W/V。
本发明的蛹虫草培育培养基金银花粉末含量选择为2％W/V时，制备的蛹虫草不仅活性成分含量最高，其菌丝体外观相对最粗壮、最长，长度可达10-11cm。
作为本发明的一种优选实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(4)中接种蛹虫草一级菌种量为5-10ml蛹虫草一级菌种接入含有30g大米和35ml所述蛹虫草液体培养基的蛹虫草培育培养基中，培养。
作为本发明的一种更优选实施方式，在本发明所述的制备方法中，所述步骤(4)中培养条件为：在16-20℃黑暗培养5-7d，当菌丝布满培养基表面及底部时，进行光照，20-24℃培养，光照培养45-50d。
本发明还涉及所述方法制备的蛹虫草。本发明的金银花蛹虫草色泽颜色金黄，含有大量虫草素、虫草酸、腺苷、虫草多糖、蛋白质、SOD等活性成分，可以增强免疫力、防癌抗瘤、防衰老、补肺益肾等，可以作为人类营养滋补、延年益寿的食疗、药膳食用。虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶(SOD)含量高，不仅高于不添加金银花混合粉末的培育基制备的蛹虫草，还远远高于野生冬虫夏草中活性成分的含量。
附图说明
图1中1A为使用含2％W/V的金银花混合粉末的培养基制备的蛹虫草照片；1B为使用含5％W/V的金银花混合粉末的培养基制备的蛹虫草照片；1C为使用含8％W/V的金银花混合粉末的培养基制备的蛹虫草照片；1D为使用不含金银花混合粉末的培养基制备的蛹虫草照片。
具体实施方式
以下，对本发明的实施方式进行说明。
在本发明中“蛹虫草”，又叫北冬虫夏草，北虫草，为子囊菌门，肉座目，麦角菌科、虫草属的模式种；子座单生或数个一起从寄生蛹体的头部或节部长出，颜色为橘黄或橘红色，一般全长2～8厘米。蛹虫草已实现人工培育，将虫草菌接种至不同的培养基上，进行生长繁殖。人工使用虫蛹等为培养基培育的蛹虫草药用功效与野生虫草的功效相差无几，某些方面的医用表现甚至优于野生虫草。药化、药理和临床实验证明蛹虫草完全可以作为冬虫夏草的代用品，其中含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、超氧化物歧化酶(SOD)、腺苷等多种活性成分。
“蛹虫草菌种”是指蛹虫草的子实体，用于蛹虫草的扩增培养。
“蛹虫草一级菌种”是指蛹虫草菌种经一次扩培后的菌种，可作为蛹虫草后续的大规模的接种菌。
“金银花粉末”是指干燥粉碎的金银花茎、叶、和/或花，具有清热，解热，解毒，消炎、抗氧化等多种作用；干燥粉碎后，可以作为蛹虫草菌种培养基或蛹虫草培养基的添加成分。
“蛹虫粉”是蛹虫草菌种培养基或蛹虫草培养基的成分之一，为虫蛹的干燥粉末，为优质氮源。
“碳源”是微生物生长的一类营养物，为含碳化合物，碳源对微生物生长代谢的作用主要为提供细胞的碳骨架，提供细胞生命活动所需的能量，提供合成产物的碳骨架，为微生物或细胞的正常生长，分裂提供物质基础。
“氮源”是作为构成生物体的蛋白质、核酸及其他氮素化合物的材料，用于菌体细胞物质(氨基酸、蛋白质、核酸等)和含氮代谢物的合成，培养基中使用的氮源可分为两大类：有机氮源和无机氮源。常用的无机氮源包括各种铵盐、硝酸盐和氨水等。常用的有机氮源有花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、蛋白胨、麸皮、废菌丝体等。
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
本发明实施例中所用到化学试剂均为分析纯，购自国药集团。
本发明所述的实验方法，若无特殊说明，均为常规方法；所述的生物材料，若无特殊说明，均可从商业途径获得。
制备实施例1
1.1一级菌种制备
按配方配制金银花蛹虫草菌种培养基，金银花蛹虫草菌种培养基配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、琼脂20g、蛹虫粉5g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁3g、维生素B110mg、金银花混合粉末20g、纯净水定容至1L、PH5.8；其中金银花混合粉末为：金银花的茎叶花烘干，粉碎，过60目筛。
金银花蛹虫草菌种培养基分装在玻璃试管中塞好棉塞，置高压锅中，在121℃下保持30min进行灭菌；冷却后在无菌条件下接入5％的蛹虫草母种，20-22℃恒温避光培养7天，即为金银花蛹虫草一级菌种。
1.2金银花蛹虫草培育培养基配制：
先制备金银花蛹虫草液体培养基，配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、蛹虫粉5g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁3g、维生素B110mg、金银花混合粉末20g、纯净水定容至1L、PH5.8。
配制金银花蛹虫草培育培养基：500ml广口玻璃瓶中加30g大米，金银花混合粉末20g、35ml液体培养基。121℃灭菌，30分钟，备用。
1.3金银花蛹虫草培养：利用1.2中制备的培育培养基对金银花蛹虫草进行培养。
培养条件为：在1.2中制备的培育培养基接种实施例1.1制备的金银花蛹虫草一级菌种5-10ml，然后在16-20℃黑暗培养5-7d，当菌丝布满培养基表面及底部时，进行光照，20-24℃培养，光照培养45-50d，子实体不再长高，即可进行采收。
制备实施例2
2.1一级菌种制作
按配方配制金银花蛹虫草菌种培养基，金银花蛹虫草菌种培养基配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、琼脂20g、蛹虫粉5g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁3g、维生素B110mg、金银花混合粉末50g、纯净水定容至1L、PH5.8，其中金银花混合粉末为：金银花的茎叶花烘干，粉碎，过60目筛。
金银花蛹虫草菌种培养基分装在玻璃试管中塞好棉塞，置高压锅中，在121℃下保持30min进行灭菌；冷却后在无菌条件下接入5％的蛹虫草母种，20-22℃恒温避光培养7天，即为金银花蛹虫草一级菌种。
2.2金银花蛹虫草培育培养基配制：
先制备金银花蛹虫草液体培养基，配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、蛹虫粉5g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁3g、维生素B110mg、金银花混合粉末50g、纯净水定容至1L、PH5.8。
配制金银花蛹虫草培育培养基：500ml广口玻璃瓶中加30g大米，金银花混合粉末50g、35ml液体培养基。121℃灭菌，30分钟，备用。
2.3金银花蛹虫草培养：利用2.2中制备的培育培养基对金银花蛹虫草进行培养。
培养条件同实施例1.3中的培养条件。
制备实施例3
3.1一级菌种制作
按配方配制金银花蛹虫草菌种培养基，金银花蛹虫草菌种培养基配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、琼脂20g、蛹虫粉5g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁3g、维生素B110mg、金银花混合粉末80g、纯净水定容至1L、PH5.8，其中金银花混合粉末为：金银花的茎叶花烘干，粉碎，过60目筛。
金银花蛹虫草菌种培养基分装在玻璃试管中塞好棉塞，置高压锅中，在121℃下保持30min进行灭菌；冷却后在无菌条件下接入5％的蛹虫草母种，20-22℃恒温避光培养7天，即为金银花蛹虫草一级菌种。
3.2金银花蛹虫草培育培养基配制：
先制备金银花蛹虫草液体培养基，配方为：金银花蛹虫草液体培养基：去皮马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、蛹虫粉5g、磷酸二氢钾5g、硫酸镁3g、维生素B110mg、金银花混合粉末80g、纯净水定容至1L、PH5.8。
配制金银花蛹虫草培育培养基：500ml广口玻璃瓶中加30g大米，金银花混合粉末80g、35ml液体培养基。121℃灭菌，30分钟，备用。
3.3金银花蛹虫草培养：利用3.2中制备的培养基对金银花蛹虫草进行培养。
培养条件同实施例1.3中的培养条件。
比较实施例4
参照制备实施例1的配方配制蛹虫草菌种培养基、蛹虫草培育培养基、区别仅在于其中不含有金银花混合粉末。
按照制备实施例1的培养过程培养蛹虫草一级菌种、蛹虫草。
实施例5制备实施例1～3、比较实施例4制备的蛹虫草、野生冬虫夏草各活性成分检测试验：
本实施例使用常规测量方法检测制备实施例1～3、比较实施例4制备的蛹虫草和野生冬虫夏草中各活性成分含量，检测出的各成分和含量、蛹虫草外观描述见表1，各实施例制备的蛹虫草外观照片见图1，其中，图1A为制备例1培养的蛹虫草，图1B为制备例2培养的蛹虫草，图1C为制备例3培养的蛹虫草，图1D为比较例4培养的蛹虫草：
表1本发明制备的蛹虫草和野生冬虫夏草中各活性成分及含量
由上述表1和图1可见，本发明制备的蛹虫草由于在培养基中添加了金银花粉末，在培养的蛹虫草中产生了虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶(SOD)等活性成分，其含量水平超过了不添加金银花粉末的培养基制备的蛹虫草，更远远超过野生冬虫夏草中各活性成分的含量。
同时选择适当含量的金银花粉末(金银花粉末含量为2～5％)的培养基制备时，蛹虫草较不添加金银花粉末的培养基制备的蛹虫草更长更粗壮，外观品相更佳。
本发明制备的蛹虫草能作为野生冬虫夏草的功能性替代品，且其中的各活性成分含量更高，用于制备保健品能产生刺激机体，产生更好的生理活性功能。
以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种蛹虫草的制备方法，其中，所述制备方法包括：
步骤（1）制备蛹虫草菌种培养基，所述蛹虫草菌种培养基中含有金银花粉末，所述金银花粉末为干燥粉碎的金银花茎、叶、和/或花，所述金银花粉末含量为2%~8%g/mL；
所述蛹虫草菌种培养基由20%g/mL的去皮马铃薯、1%g/mL的葡萄糖、1%g/mL的蛋白胨、2%g/mL的琼脂、0.5%g/mL的蛹虫粉、0.5%g/mL的磷酸二氢钾、0.3%g/mL的硫酸镁、1%g/L的维生素B1以及2%~8%g/mL的所述金银花粉末和余量的水组成，所述金银花粉末过60目筛，所述蛹虫草菌种培养基pH为5.8；
步骤（2）在所述步骤（1）制备的蛹虫草菌种培养基中接种蛹虫草母种，培养得到蛹虫草一级菌种；
步骤（3）制备蛹虫草培育培养基，所述蛹虫草培育培养基由大米，金银花粉末和蛹虫草液体培养基组成，大米、金银花粉末和蛹虫草液体培养基分别以30g、20~80g、35ml的配比混合；所述蛹虫草液体培养基由20%g/mL的去皮马铃薯、1%g/mL的葡萄糖、1%g/mL的蛋白胨、0.5%g/mL的蛹虫粉、0.5%g/mL的磷酸二氢钾、0.3%g/mL的硫酸镁、1%g/L 的维生素B1以及2%~8%g/mL的所述金银花粉末和余量的水组成，所述金银花粉末过60目筛，所述蛹虫草液体培养基pH为5.8，所述金银花粉末为干燥粉碎的金银花茎、叶、和/或花；以及
步骤（4）在所述步骤（3）制备的蛹虫草培育培养基中接种所述蛹虫草一级菌种，培养得到蛹虫草。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（1）中所述蛹虫草菌种培养基中金银花粉末含量为2%~5% g/mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（1）中蛹虫草菌种培养基中金银花粉末含量为2% g/mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（2）中得到的所述蛹虫草一级菌种为金银花蛹虫草菌晶懋1号，保藏号为CGMCC No. 15364。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤（4）中接种蛹虫草一级菌种量为5-10ml蛹虫草一级菌种接入所述蛹虫草培育培养基中，培养。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述步骤（4）中培养条件为：在16-20℃黑暗培养5-7d，当菌丝布满所述蛹虫草培育培养基表面及底部时，进行光照，20-24℃培养，光照培养45-50d。
7.根据权利要求1~6任一项所述制备方法制备的一种蛹虫草。
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