CN110720350A - 一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法、以及培育的蛹虫草子实体 - Google Patents

一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法、以及培育的蛹虫草子实体 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，该方法包括制备蛹虫草菌种，制备金银花营养液，制备栽培培养基，接种培养，收获子实体等步骤。本发明以金银花提取液为基质来栽培蛹虫草子实体，使金银花中的营养物质被蛹虫草菌丝体吸收利用。该蛹虫草子实体制备方法简单，子实体中蛹虫草多糖、虫草素、虫草酸、SOD酶等有效成分的含量大幅度提高，用金银花提取液为基质来栽培蛹虫草子实体，使得本发明的蛹虫草活性成分含量大大提高，具有很高的药用价值。

Description

一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法、以及 培育的蛹虫草子实体
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法、以及培育的蛹虫草子实体。
背景技术
金银花(Flos Lonicerae)是忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb)的干燥花蕾或待初开的花，主要分布于我国的山东、山西、河南、河北等地。金银花的花、叶和茎均具有药理活性，主要活性成分包括有机酸、挥发油、黄酮类和萜类等。金银花味甘、性寒，中国有500多种处方药中含有金银花成分，其主要功效是清热解毒、疏散风热和抗菌消炎。金银花作为药食两用的植物在食品、药品和化妆品等领域具有重要的价值。
蛹虫草(Cordyceps militaris)，又名北冬虫夏草，是真菌寄生在鳞翅目等昆虫的虫体上形成的虫菌复合体，属于子囊菌门，肉座目，麦角菌科，虫草属，与冬虫夏草同属不同种。蛹虫草是一种名贵的药食兼用菌，含有虫草多糖、虫草素和虫草酸等多种活性物质，具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗菌、降血糖、降血脂等药理活性，具有良好的治疗保健功效。
野生蛹虫草资源有限，远远不能满足市场的需求，人工培育蛹虫草主要是利用大米、玉米、小麦、甘薯渣等作为基质，但是蛹虫草当中的虫草多糖、虫草素、虫草酸等活性物质的含量相对较低，无法满足人们对蛹虫草营养价值的需求，如何栽培出高活性物质含量的蛹虫草子实体，是亟待解决的问题。
而金银花作为重要的药用植物，以金银花提取液来栽培蛹虫草子实体的研究还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现状，旨在提供一种全新的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，用该提取液栽培得到的蛹虫草能大幅度提高虫草多糖、虫草素、虫草酸等活性物质的含量，从而提高蛹虫草的药用价值。
本发明一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤(1)制备蛹虫草菌种；步骤(2)制备金银花营养液：步骤(c)制备金银花提取液，取金银花1-1.5份，蒸馏水5-20份，提取4h，过滤，收集滤液即为金银花提取液，步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液30-80份，蒸馏水20-70份，混合在一起即为金银花营养液；步骤(3)制备栽培培养基取培养瓶，按照质量比加入燕麦20-40份，加入所述步骤(2)d中的所述营养液35-55份，用聚丙烯塑料膜封口，放灭菌锅内，121℃，灭菌30min后，放无菌室凉至室温备用；步骤(4)接种培养，在所述步骤(3)的栽培培养基的培养瓶中接种所述步骤(1)制备的所述蛹虫草菌种，培养得到蛹虫草子实体；以及步骤(5)收获蛹虫草子实体，收获所述步骤(4)培养的蛹虫草子实体，烘干。
本发明采用金银花提取液为基质栽培蛹虫草子实体，蛹虫草在生长期间吸收金银花的养分，使蛹虫草的虫草多糖含量由现有的2.0g/100g提高到本发明产品的2.9g/100g，虫草素含量由现有的2.29*103mg/kg提高到本发明产品的3.62*103mg/kg，虫草酸含量由现有的15.1g/kg提高的本发明产品的73.3g/kg，SOD酶活由现有的548U/g提高的本发明产品的747U/g，极大的提高了蛹虫草中活性物质的含量，提高了蛹虫草的药用价值。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，所述步骤(1)包括：步骤(a)蛹虫草菌种活化，配置PDA培养基：取土豆浸出液200g，葡萄糖20g，KH2PO41g，MgSO4 0.5g，琼脂20g，用蒸馏水定容至1L，pH自然，115℃灭菌30min，将母种试管转接到PDA平板上，22℃恒温避光培养7-10d，待菌丝长满PDA平板即可使用；步骤(b)制备蛹虫草种子液，配置PDB培养基：取土豆浸出液200g，葡萄糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g，用蒸馏水定容至1L，pH自然，115℃灭菌30min，取所述步骤(a)中直径为1cm的菌块，按照每100-150mL所述PDB培养基接种3-5块，18℃，120r/min，避光培养5-7d，菌丝生长成旺盛的菌丝球即可作为液体菌种。
本发明培养基配方简单，工艺简便，为蛹虫草的规模化人工栽培提供参考，具有很高的经济效益，用金银花提取液为基质来栽培蛹虫草子实体，可用于健康保健的功能性食品和医药卫生等行业。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，所述步骤(4)包括：在无菌操作台上，向每瓶所述栽培培养基内接种10mL蛹虫草种子液，16-18℃黑暗培养5-7d，当菌丝布满培养基表面及底部时，进行光照，20-22℃光照培养，原基生长阶段给予5-10℃温差刺激，光照培养40-45d，子实体不再长高，表明子座成熟分别进行采收。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，所述步骤(5)包括：将生长的8-10cm的成熟的蛹虫草子实体从培养基基质上采摘下来，50℃烘干4h，观察烘干状态，视情况可适当调整烘干时间，控制水份不超过12％。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(c)中所使用金银花部位为金银花花蕾、叶、茎中的一种或几种，所述金银花与蒸馏水比例为1份:10份；以及所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液30份，蒸馏水70份，混合在一起即为金银花营养液；或所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液50份，蒸馏水50份，混合在一起即为金银花营养液；或所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液80份，蒸馏水20份，混合在一起即为金银花营养液。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，所述步骤(3)制备栽培培养基具体包括：取培养瓶，按照质量比加入燕麦30份，加入步骤(2)中的营养液45份，用聚丙烯塑料膜封口，放灭菌锅内，121℃，灭菌30min，放无菌室凉至室温备用。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，制备金银花提取液(2)中所使用的提取温度为80℃-100℃。
作为本发明的一种实施方式，本发明所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法中，制备金银花提取液(2)中所使用的提取方式为冷凝回流提取。
本发明还提供所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法制备的蛹虫草子实体。
本发明制备的蛹虫草的虫草多糖含量由现有的2.0g/100g提高到本发明产品的2.9g/100g，虫草素含量由现有的2.29*103mg/kg提高到本发明产品的3.62*103mg/kg，虫草酸含量由现有的15.1g/kg提高的本发明产品的73.3g/kg，SOD酶活由现有的548U/g提高的本发明产品的747U/g，极大的提高了蛹虫草中活性物质的含量，提高了蛹虫草的药用价值。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
2、本发明培养基配方简单，用金银花提取液为基质来栽培蛹虫草子实体，可用于健康保健的功能性食品和医药卫生等行业。
3、本发明培养基配方简单，工艺简便，为蛹虫草的规模化人工栽培提供参考，具有很高的经济效益。
附图说明
图1为本发明以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法所得到的蛹虫草子实体，采用本发明得到的子实体长势良好，颜色橘黄，粗细均匀、长度约8-10cm，A为制备实施例5培育的蛹虫草子实体，B为制备实施例3培育的蛹虫草子实体。
具体实施方式
产品功能活性物质的检测方法和过程
将本发明实施例中制备得到的蛹虫草成品委托检测机构进行检测，检测方法如下表1所示：
表1活性物质检测方法
检验项目 单位 技术要求 检验方法
虫草素 m/kg - NY/T2116-2012
虫草多糖 g/100g - Q/JDSW0002S-2017
虫草酸 g/kg - 指定方法
SOD U/g - GB/T5009.171-2003
虫草素检测(NY/T2116-2012)
准确称取固体粉末0.5g(精确至0.0001g)于100mL容量瓶，加水80mL，至于超声波中超声提取3h，取出后用水定容，摇匀，取1mL样液离心后，将上清液过0.45μm滤膜，滤液供高效液相色谱分析使用。
色谱柱条件：C18柱，250mm*4.6mm，5μm；流动相：乙腈+水(5+95)，流速：1mL/min，柱温：35℃；波长260nm；进样量10μL。
配置1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL浓度的虫草素溶液，按照色谱条件，以虫草素质量浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，计算回归曲线，求得线性回归方程。
虫草素的量以w计算，单位为mg/kg，计算如下：
w＝A*ρs*V/(As*m)*f
A----试样中虫草素的峰面积；
As----标准工作液中虫草素的峰面积；
ρs----标准工作液中虫草素的质量浓度(μg/mL)；
V----试样液最终定容体积(mL)；
m----试样的最终质量(m)；
f----稀释倍数；
虫草多糖检测(Q/JDSW 0002S-2017)
准确称取样品1g，至于100mL的离心瓶中，加15mL热水(温度＞90℃)搅拌直至溶解，取此待测液15mL，加75mL无水乙醇搅拌均匀，在离心机中以4000r/min离心10min，小心弃去上清液，再加15mL热水(温度＞90℃)冲洗离心瓶中的沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心10min，小心用吸管将上清吸去，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至250mL，过滤，弃去初滤液即为待测液。
准确吸取葡萄糖标准液(0.1mg/mL)0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL具塞比色管中，加水至1.0mL，加入0.2％的蒽酮试剂5mL充分反应均匀，在沸水浴中加热10min，冷却20min后再620nm波长下，以试剂空白溶液调零，测定各管的吸收值绘制标准曲线。
准确吸取样品待测液1mL，按标准曲线的步骤于620nm波长下测定吸光值计算样品含糖量。
计算如下：
X＝V1*m1*100/(V2*m*100)
X----样品中粗多糖含量(以葡萄糖计)(g/100g)；
m1----由标准曲线查得样品液含粗多糖的质量(以葡萄糖计)(mg)；
m----样品质量(g)；
V1----样品定容体积(mL)；
V2----取待测液体积(mL)；
虫草酸检测
准确称取固体粉末0.5g，加水5mL，超声提取30min，将上清液以3500r/min离心15min，定容至10mL，过膜，上机分析测定。
色谱柱条件：正相氨基色谱柱，250mm*4.6mm，5μm；流动相：乙腈+水(78+22)；流速：1mL/min；柱温：30℃；示差折光检测器内部温度30℃；进样量10μL。
试样中虫草酸含量(X)计算如下：
X＝ρ*V/m
m----试样质量(g)；
ρ----试样溶液待测浓度(mg/mL)；
V----试样溶液定容体积(mL)；
SOD检测(GB/T5009.171-2003)
称取样品1.00g至于玻璃乳钵中，加入蒸馏水9mL，研磨5min，移入10mL离心管，用少量蒸馏水冲洗乳钵，洗涤并入离心管，加蒸馏水至刻度，经4000r/min离心15min，取上清液待测。
采用邻苯三酚自氧化法测定，在25℃左右，于10mL比色管中依次加入A液2.35mL，蒸馏水2mL，B液0.15mL。加入B液后立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光值，二者之差即邻苯三酚自氧化速率ΔA325(min-1)。
样液和SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率的测定按上述步骤分别加入一定量样液或酶液使抑制邻苯三酚自氧化速率约为1/2ΔA325(min-1)。
SOD活性测定加样程序见表2。
表2 SOD活性测定加样表
试液 空白 样液 SOD液
A液/mL 2.35 2.35 2.35
蒸馏水/mL 2.00 1.80 1.80
样液或SOD液/μL -- 20.0 20.0
B液/mL 0.15 0.15 0.15
按照下式计算：
SOD活力(U/g)＝((ΔA325-ΔA’325)/ΔA325*100％)/50％*4.5*(D/V)*(V1/m)
式中：
V----加入酶液或样液体积，单位为毫升(mL)；
ΔA325----邻苯三酚自氧化速率；
ΔA’325----样液或SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率；
D----酶液或样液的稀释倍数；
V1----样液总体积，单位为毫升(mL)；
m----样品质量，单位为克(g)；
4.5----反应液总体积，单位为毫升(mL)；
下面结合实施例对本发明的方法进一步说明。
制备实施例1
以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体，该蛹虫草子实体通过制备蛹虫草菌种，制备营养液，制备栽培培养基，接种培养，收获蛹虫草子实体等步骤获得。具体包括以下步骤：
1)蛹虫草菌种的制备
a)蛹虫草菌种活化
配置PDA培养基：取土豆浸出液200g，葡萄糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g，琼脂20g，用蒸馏水定容至1L，pH自然，115℃灭菌30min。
将母种转接到PDA平板上，22℃恒温避光培养7-10d，待菌丝长满PDA平板即可使用。
b)蛹虫草种子液制备
配置PDB培养基：取土豆浸出液200g，葡萄糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g，用蒸馏水定容至1L，pH自然，115℃灭菌30min。
取步骤1)a)中直径为1cm的菌块，按照每100-150mL液体种子培养基接种3-5块，18℃，120r/min，避光培养5-7d，菌丝生长成旺盛的菌丝球即可作为液体菌种。
2)制备营养液
c)制备金银花提取液
取金银花的花蕾1份，蒸馏水10份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花花蕾提取液。
d)制备营养液
取金银花的花蕾提取液30份，蒸馏水70份，混合在一起即为营养液。
3)制备栽培培养基
取培养瓶，按照质量比加入燕麦30份，加入步骤2)中的营养液45份，用聚丙烯塑料膜封口，放灭菌锅内，121℃，灭菌30min。放无菌室凉至室温备用。
4)接种培养
在无菌操作台上，向每瓶培养基内接种10mL蛹虫草种子液。16-18℃黑暗培养5-7d，当菌丝布满培养基表面及底部时，进行光照。以后20-22℃光照培养，原基生长阶段给予5-10℃温差刺激，光照培养40-45d，子实体不再长高，表明子座成熟分别进行采收。
5)收获蛹虫草子实体
将生长的8-10cm的成熟的蛹虫草子实体从培养基基质上采摘下来，50℃烘干4h，观察烘干状态，视情况可适当调整烘干时间，控制水份不超过12％。
制备实施例2
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花提取液
取金银花的花蕾1份，蒸馏水10份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花花蕾提取液。
d)制备营养液
取金银花的花蕾提取液50份，蒸馏水50份，混合在一起即为营养液。
制备实施例3
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花提取液
取金银花的花蕾1份，蒸馏水10份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花花蕾提取液。
d)制备营养液
取金银花的花蕾提取液80份，蒸馏水20份，混合在一起即为营养液。
制备实施例4
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花的叶提取液
取金银花的叶1.5份，蒸馏水15份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花的叶提取液。
d)制备营养液
取金银花的叶提取液30份，蒸馏水70份，混合在一起即为营养液。
制备实施例5
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花的叶提取液
取金银花的叶1.5份，蒸馏水15份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花的叶提取液。
d)制备营养液
取金银花的叶提取液50份，蒸馏水50份，混合在一起即为营养液。
制备实施例6
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花的叶提取液
取金银花的叶1.5份，蒸馏水15份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花的叶提取液。
d)制备营养液
取金银花的叶提取液80份，蒸馏水20份，混合在一起即为营养液。
制备实施例7
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花的茎提取液
取金银花的茎1.2份，蒸馏水12份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花的茎提取液。
d)制备营养液
取金银花的茎提取液30份，蒸馏水70份，混合在一起即为营养液。
制备实施例8
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花的茎提取液
取金银花的茎1.2份，蒸馏水12份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花的茎提取液。
d)制备营养液
取金银花的茎提取液50份，蒸馏水50份，混合在一起即为营养液。
制备实施例9
其他步骤同实施例1，不同之处在于原料具体配比有所调整：
2)制备营养液
c)制备金银花的茎提取液
取金银花的茎1.2份，蒸馏水12份，100℃回流提取4h，过滤，收集滤液即为金银花的茎提取液。
d)制备营养液
取金银花的茎提取液80份，蒸馏水20份，混合在一起即为营养液。
实施例10制备实施例1～9制备的蛹虫草子实体中不同活性成分含量和不使用金银花营养液制备的蛹虫草子实体中不同活性成分含量的比较
在培养瓶中加入燕麦30份，再加入上述的含有金银花的花蕾或叶或茎的营养液45份，营养液中金银花的花蕾或叶或茎的提取液与蒸馏水的比例见表3、4、5，不同比例的蛹虫草子实体的活性物质含量见表3、4、5。
表3
Figure BDA0002228698580000121
表4
Figure BDA0002228698580000131
表5
Figure BDA0002228698580000132
从检测结果来看：与不添加金银花叶、花、茎提取液的对照组相比，采用金银花提取液为基质栽培蛹虫草子实体，蛹虫草在生长期间吸收金银花的养分，使蛹虫草的虫草多糖含量由现有的2.0g/100g提高到本发明产品的2.9g/100g，虫草素含量由现有的2.29*103mg/kg提高到本发明产品的3.62*103mg/kg，虫草酸含量由现有的15.1g/kg提高到本发明产品的73.3g/kg，SOD酶活由现有的548U/g提高到本发明产品的747U/g，极大的提高了蛹虫草中活性物质的含量，提高了蛹虫草的药用价值。
本发明制备的蛹虫草子实体外观
图1为本发明以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法所得到的蛹虫草子实体，采用本发明得到的子实体长势良好，颜色橘黄，粗细均匀、长度约8-10cm，A为制备实施例5培育的蛹虫草子实体，B为制备实施例3培育的蛹虫草子实体。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤(1)制备蛹虫草菌种；
步骤(2)制备金银花营养液；
步骤(c)制备金银花提取液，
取金银花1-1.5份，蒸馏水5-20份，提取4h，过滤，收集滤液即为金银花提取液,
步骤(d)制备营养液，
取所述步骤(c)制备的金银花提取液30-80份，蒸馏水20-70份，混合在一起即为金银花营养液；
步骤(3)制备栽培培养基，
取培养瓶，按照质量比加入燕麦20-40份，加入所述步骤(2)d中的所述营养液35-55份，用聚丙烯塑料膜封口，放灭菌锅内，121℃，灭菌30min后，放无菌室凉至室温备用；
步骤(4)接种培养，
在所述步骤(3)的栽培培养基的培养瓶中接种所述步骤(1)制备的所述蛹虫草菌种，培养得到蛹虫草子实体；以及
步骤(5)收获蛹虫草子实体，
收获所述步骤(4)培养的蛹虫草子实体，烘干。
2.根据权利要求1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：
步骤(a)蛹虫草菌种活化，
配置PDA培养基：取土豆浸出液200g，葡萄糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g，琼脂20g，用蒸馏水定容至1L，pH自然，115℃灭菌30min，将母种试管转接到PDA平板上，22℃恒温避光培养7-10d，待菌丝长满PDA平板即可使用；
步骤(b)制备蛹虫草种子液，
配置PDB培养基：取土豆浸出液200g，葡萄糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g，用蒸馏水定容至1L，pH自然，115℃灭菌30min，
取所述步骤(a)中直径为1cm的菌块，按照每100-150mL所述PDB培养基接种3-5块，18℃，120r/min，避光培养5-7d，菌丝生长成旺盛的菌丝球即可作为液体菌种。
3.根据权利要求1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括：在无菌操作台上，向每瓶所述栽培培养基内接种10mL蛹虫草种子液，16-18℃黑暗培养5-7d，当菌丝布满培养基表面及底部时，进行光照，20-22℃光照培养，原基生长阶段给予5-10℃温差刺激，光照培养40-45d，子实体不再长高，表明子座成熟分别进行采收。
4.根据权利要求1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述步骤(5)包括：将生长的8-10cm的成熟的蛹虫草子实体从培养基基质上采摘下来，50℃烘干4h，观察烘干状态，视情况可适当调整烘干时间，控制水份不超过12％。
5.根据权利1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(c)中所使用金银花部位为金银花花蕾、叶、茎中的一种或几种，所述金银花与蒸馏水比例为1份:10份；以及
所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液30份，蒸馏水70份，混合在一起即为金银花营养液；或
所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液50份，蒸馏水50份，混合在一起即为金银花营养液；或
所述步骤(2)制备金银花营养液中步骤(d)制备营养液，取所述步骤(c)制备的金银花提取液80份，蒸馏水20份，混合在一起即为金银花营养液。
6.根据权利1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，所述步骤(3)制备栽培培养基具体包括：
取培养瓶，按照质量比加入燕麦30份，加入步骤(2)中的营养液45份，用聚丙烯塑料膜封口，放灭菌锅内，121℃，灭菌30min，放无菌室凉至室温备用。
7.根据权利1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，制备金银花提取液(2)中所使用的提取温度为80℃-100℃。
8.根据权利1所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法，其特征在于，制备金银花提取液(2)中所使用的提取方式为冷凝回流提取。
9.根据权利要求1～8所述的以金银花提取液为基质培育蛹虫草子实体的方法制备的蛹虫草子实体。
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