CN114592013A

CN114592013A - 一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用

Info

Publication number: CN114592013A
Application number: CN202210211637.XA
Authority: CN
Inventors: 邱欣; 周康; 徐建强; 陈安徽; 王卫东
Original assignee: Guoke Xuzhou Maternal And Infant Health Research Institute Co ltd
Current assignee: Guoke Xuzhou Maternal And Infant Health Research Institute Co ltd
Priority date: 2022-03-04
Filing date: 2022-03-04
Publication date: 2022-06-07

Abstract

本发明公开了一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用，包括以下步骤：取大豆水解蛋白1重量份、动物蛋白胨1重量份、白砂糖4重量份、水94重量份，混匀，121℃灭菌20min后，冷却至25℃，接入蝉花虫草试管母种，置于25℃恒温摇床发酵2.5～3.5d，获得液体种子；将固体培养基接入液体种子；避光培养至长满菌丝体后，将蝉花子实体和固体培养基一起粉碎，粉碎后加水混合后进入胶体磨进一步破碎，获得浆液，浆液发酵完成后过滤，澄清获得蝉花虫草酵素。

Description

一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用

技术领域

本发明属于虫草酵素制备技术领域，尤其涉及一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用。

背景技术

蝉花又名虫花、金蝉花、大蝉花、蝉棒束孢，与冬虫夏草和蛹虫草同属于菌物界、真菌门、子囊菌纲、麦角菌目、麦角菌科、虫草属，是蝉在土中的若虫被麦角菌科真菌大蝉草的分生孢子寄生致死的带菌尸体，在其头部长菌丝形成的子座，形似花蕾故名蝉花。蝉花虫草性寒味甘，有散风清热、镇惊、透疹、明目退翳的功效，产于浙江、四川、云南、江苏等地，是一种药食两用真菌，亦是我国传统名贵中药材之一。蝉花早在公元五世纪的南北朝时期即有记载，雷斅在《雷公炮炙论》记载了蝉花的加工方法：“凡使，要白花全者。凡收得后，于屋下东角悬干，去甲土后，用浆水煮一日，至夜，焙干，碾细用之”；隋、唐年间的甄权所著《药性论》记述说：“其蜕壳，头上有一角，如冠状，谓之蝉花，最佳。味甘寒，无毒。主小儿天吊，惊痫螈，夜啼心悸”；《本草纲目》记载为“蝉花可治疗惊痫，夜啼心悸，功同蝉蜕”，“功同蝉蜕，又止疟。”此外，还有记载可明目，治眼疾。千余年来，蝉花一直应用于强身健体，防病疗疾。1991年陈祝安等进一步证实了中药蝉花主要是由有性型大蝉草和无性型蝉拟青霉组成，其中有性型大蝉草的比例仅占0.4%左右。当前市场上供应的为野生蝉花，其无性型以蝉拟青霉为主，无性型蝉拟青霉的分生孢子梗上的分枝多局限于分生孢子梗顶部，瓶梗粗而短，密集，分生孢子大，约6～11×2.0～3.5 μm。国内主要分布于安徽、浙江、云南、广东、陕西、江西、四川等省，以及其他亚洲热带、亚热带地区。

现代研究表明，蝉花的化学成分较多，也含有丰富的活性成分。陈祝安等对浙江省的多个蝉花样品进行检测发现，蝉拟青霉的化学成分主要包括糖原、甘露醇、多种生物碱及麦角甾醇等。高增平等对蝉花中的甘露醇、糖类等营养成分进行分析测定，发现甘露醇占2.18%，总糖含量为23.67%，其中多糖占21.73%。1997年俞滢等测定麦角菌科真菌大蝉草的蛋白质总量为39.35%，其中包括以谷氨酸、天门冬氨酸为主的16种氨基酸，而多糖含量为4.44%，脂肪含量为 6.97%，且含有Mg等多种微量元素。宋玉良等分别应用高效液相色谱法和分光光度法测定蝉花中腺苷及多糖的含量，分别为129、24.16 mg/g。综上可见，蝉花中含有糖原、甘露醇、多种生物碱、蛋白质、多种氨基酸以及多种微量元素等化学成分，且糖类和蛋白质的含量相对较高，这也表明蝉花作为珍稀的食药用菌具有良好的营养价值。但不同文献报道的化学成分的含量差异较大，可能是因为测定的样品来自不同地区，不同的生长环境条件可能会导致其所含化学成分不同。另外，蝉花品质的地域差异性也可为蝉花种植资源优化和创新提供丰富的样本。

人类对酵素的无意识应用可以追溯到远古时代，中国早在4000多年前的夏禹时代，酿酒就已盛行；3000多年前的周朝，中国人就会利用麦曲将淀粉降解为麦芽糖制造饴糖；2500多年前的春秋战国时期，中国人的祖先就用酒曲来治疗肠胃病。酵素是融合多种植物营养物质和微生物发酵代谢营养物质的混合体，富含维生素、氨基酸、矿物质、有机酸、低聚糖等，是一款营养丰富且平衡的健康饮品。酵素广泛的保健作用使其备受欧美、东南亚等国家和地区人们的推崇。真正的微生物酵素以一种或多种新鲜蔬菜、水果、菌菇、中草药等为原料，经多种有益菌发酵而产生的，含有丰富营养成分的功能性微生物发酵产品。现代酵素是指通过人工接种多种微生物对水果、蔬菜等原料进行多阶段定向发酵技术发酵生产的一种富含有机酸、寡糖、酶、氨基酸、维生素等多种营养成分的功能性保健饮品。

传统酵素生产一直沿用自然发酵工艺，发酵耗时较长，且在发酵生产过程中容易受到环境微生物、发酵体系和季节等因素的影响，易感染杂菌，产品质量难以控制，而且对蝉花虫草的培养基做功能性废弃处理，有的作为饲料，更多的时候用于沤肥。不仅没能将培养基中蝉花菌根、菌丝体中有效成分的利用，更是造成资源浪费。为此，需要设计出一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用，以解决现有技术的培养基中的有效成分没有充分利用的技术问题。

为实现上述目的，本发明的一种蝉花虫草酵素制备方法及其应用的具体技术方案如下：

一种蝉花虫草酵素制备方法，包括以下步骤：

第一步，取大豆水解蛋白1重量份、动物蛋白胨1重量份、白砂糖4重量份、水94重量份，混匀，121℃灭菌20min后，冷却至25℃，接入蝉花虫草试管母种，置于25℃恒温摇床发酵2.5～3.5d，获得液体种子；

第二步，取葛根粉5重量份、麸皮5重量份、燕麦40重量份、水50重量份，混合后静置1h，121℃灭菌30min，获得固体培养基，冷却后接入液体种子；

第三步，将接入液体种子后的固体培养基进行恒温避光培养，至固体培养基表面长满菌丝体后，见光培养13～15d，蝉花子实体长到8～10cm时，将蝉花子实体和固体培养基一起粗粉碎，粗粉碎后加入5倍重量份的水，充分混合后进入胶体磨进一步破碎至细度不大于40um，获得浆液；

第四步，将浆液加热到35～40℃，加入低温α-淀粉酶和糖化酶保温2h后冷却至28℃，接入酿酒酵母和甜酒曲，密闭恒温28℃发酵24h，接入醋酸菌和乳酸菌，继续恒温28℃厌氧发酵3d；

第五步，将第四步所得的料液过滤，澄清，获得蝉花虫草酵素。

本发明通过制备蝉花虫草液体种子、固体培养基栽培蝉花子实体，待子实体生长后，将蝉花虫草子实体连同培养基质直接加水破碎，制备成浆液，接入酿酒酵母发酵，然后，接入醋酸菌和乳酸菌群，密闭发酵，即可获得蝉花虫草酵素。该制备方法不仅使栽培的蝉花虫草子实体和培养基做到全部利用，无废弃，且在酵素发酵过程中应用淀粉酶将原料中淀粉等物质分解，将酵母菌和甜酒曲有机结合应用，后期接入醋酸菌和乳酸菌发酵，并且整个发酵周期仅为5d，发酵液中较好地保留了蝉花虫草的功能性成分。

进一步的，所述第三步见光培养的条件为培养温度22～24℃，空气湿度80～95％，蓝光光照强度50～100勒克斯。

进一步的，所述葛根粉为干燥葛根直接粉碎，过35～45目的筛所得。

进一步的，所述第三步中粗粉碎为粉碎至过80～200目的筛。

本发明还要求保护通过上述制备方法得到的蝉花虫草酵素。

本发明所述的蝉花虫草酵素可用于制备抗氧化的保健品。

本发明所述的蝉花虫草酵素可用于制备抗氧化的药品。

相比较现有技术而言，本发明具有以下有益效果：

1.本发明通过制备蝉花虫草液体种子、固体培养基栽培蝉花子实体，待子实体生长后，将蝉花虫草子实体连同培养基质直接加水破碎，制备成浆液，接入酿酒酵母发酵，然后，接入醋酸菌和乳酸菌群，密闭发酵，即可获得蝉花虫草酵素。该制备方法不仅使栽培的蝉花虫草子实体和培养基做到全部利用，无废弃，且在酵素发酵过程中应用淀粉酶将原料中淀粉等物质分解，将酵母菌和甜酒曲有机结合应用，后期接入醋酸菌和乳酸菌发酵，并且整个发酵周期相较于传统的发酵周期大大缩短，发酵液中较好地保留了蝉花虫草的功能性成分。

2.本发明所得的蝉花虫草酵素具有较好的机体抗氧化活性，有延长寿命、延缓衰老的功效。

附图说明

图1为本发明制备方法的工艺流程示意图；

图2为不同组别的蝉花酵素对果蝇寿命的影响比对表；

图3为不同组别的蝉花酵素对果蝇SOD活力和MDA含量的影响比对表；

图4为蝉花虫草酵素对小鼠体重的影响；

图5为蝉花虫草急性毒性观察情况；

图6为蝉花虫草酵素Ames实验；

图7为蝉花虫草酵素对小鼠嗜多染红细胞微核试验结果。

具体实施方式：

为了更好地了解本发明的目的、结构及功能，下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

如图1所示，本实施例提供一种蝉花虫草酵素制备方法，包括以下步骤：

第一步，取大豆水解蛋白1重量份、动物蛋白胨1重量份、白砂糖4重量份、水94重量份，混匀，121℃灭菌20min后，冷却至25℃，接入蝉花虫草试管母种，置于25℃恒温摇床发酵3d，获得液体种子；

第二步，由干燥葛根直接粉碎，过40目的筛得葛根粉，取葛根粉5重量份、麸皮5重量份、燕麦40重量份、水50重量份，混合后静置1h，121℃灭菌30min，获得固体培养基，冷却后接入液体种子；

第三步，将接入液体种子后的固体培养基进行22℃恒温避光培养5d，至固体培养基表面长满菌丝体后，见光培养14d，见光培养的条件包括：培养室温度22℃，空气湿度95%，蓝光光照强度为100勒克斯，蝉花子实体长到8～10cm时，将蝉花子实体和固体培养基一起粗粉碎，粉碎至过100目的筛，粗粉碎后加入5倍重量份的水，充分混合后进入胶体磨进一步破碎至细度不大于40um，获得浆液；

第四步，将浆液加热到38℃，加入食品级低温α-淀粉酶（2万U/g，每升料液加1000U）和食品级糖化酶（5万U/g，每L料液加800 U）保温2h后冷却至28℃，接入酿酒酵母和甜酒曲，酿酒酵母选用高活性干酵母，每L料液中接入酿酒酵母和甜酒曲各2g，密闭恒温28℃发酵24h，接入醋酸菌和乳酸菌，继续恒温28℃厌氧发酵3d；

第五步，将第四步所得的料液利用管式离心机进行过滤去除固形物后，经超滤膜澄清后即获得蝉花虫草酵素。

实施例2

第一步，取大豆水解蛋白10g、动物蛋白胨10g、白砂糖40g、水940g重量份，混匀，121℃灭菌20min后，冷却至25℃，接入蝉花虫草试管母种，每1L液体培养基接入5cm²的试管菌，然后置于25℃恒温摇床发酵2.5d，获得液体种子；

第二步，由干燥葛根直接粉碎，过45目的筛得葛根粉，取葛根粉500g、麸皮500g、燕麦4000g、混匀后装入5只栽培盆，每盆加水1000g，混合后静置1h，121℃灭菌30min，获得固体培养基，冷却后接入液体种子，每盆接入液体种子100ml；

第三步，将接入液体种子后的固体培养基进行恒温避光培养，至固体培养基表面长满菌丝体后，见光培养13d，蝉花子实体长到8～10cm时，将蝉花子实体和固体培养基一起粗粉碎，粉碎至过80目的筛，粗粉碎后加入5倍重量份的水，充分混合后进入胶体磨进一步破碎，循环3次，至物料细度不大于40um，获得浆液；

第四步，将浆液加热到35℃，加入食品级低温α-淀粉酶和食品级糖化酶保温2h后冷却至28℃，接入酿酒酵母和甜酒曲，密闭恒温28℃发酵24h，接入醋酸菌和乳酸菌，继续恒温28℃厌氧发酵3d；

第五步，将第四步所得的料液过滤，澄清，进一步脱醇后即获得蝉花虫草酵素。

实施例3

第一步，取大豆水解蛋白1重量份、动物蛋白胨1重量份、白砂糖4重量份、水94重量份，混匀，121℃灭菌20min后，冷却至25℃，接入蝉花虫草试管母种，置于25℃恒温摇床发酵3.5d，获得液体种子；

第二步，由干燥葛根直接粉碎，过35目的筛得葛根粉，取葛根粉5重量份、麸皮5重量份、燕麦40重量份、水50重量份，混合后静置1h，121℃灭菌20min，获得固体培养基，冷却后接入液体种子；

第三步，将接入液体种子后的固体培养基进行恒温避光培养，至固体培养基表面长满菌丝体后，见光培养15d，蝉花子实体长到8～10cm时，将蝉花子实体和固体培养基一起粗粉碎，粗粉碎后加入5倍重量份的水，充分混合后进入胶体磨进一步破碎至细度不大于40um，获得浆液；

第四步，将浆液加热到40℃，加入低温α-淀粉酶和糖化酶保温2h后冷却至28℃，接入酿酒酵母和甜酒曲，密闭恒温28℃发酵24h，接入醋酸菌和乳酸菌，继续恒温28℃厌氧发酵3d；

一．功效验证：

实验方法及结果

1.本制备方法所得的蝉花虫草酵素对果蝇寿命的影响，详细如下：

将蝉花酵素分别按照 0.5%、1%、2%（V/V）的比例添加到果蝇基础培养基，并将在此种培养基中饲喂的果蝇设置为实验组，以基础培养基饲喂的果蝇为对照组（CK）。选取 8 h内孵化的果蝇，乙醚麻醉并鉴定性别后选取大小均一的个体于大斜面试管中进行饲喂，每只试管放 10 只果蝇，每个样品雌、雄果蝇各设置 3 个重复。将各组果蝇置于 25 ℃恒温培养箱中培养，每日观察并记录果蝇的存活情况，统计果蝇半数死亡时间、最高寿命和平均寿命，实验结果及详细数据如图2所示。

2. 蝉花酵素对果蝇体内 SOD 活性和 MDA含量的影响，详细如下：

果蝇组织匀浆的制备将蝉花酵素分别按照 0.5%、1%、2%（V/V）的比例添加到果蝇基础培养基中，将在此培养基中饲喂的果蝇设置为实验组，以不添加酵素仅以基础培养基饲喂的果蝇为对照组（CK）。乙醚麻醉并鉴定性别后选取大小均一的个体于斜面试管中饲喂，每只试管放 10 只果蝇，每个样品雌、雄果蝇各设置 3 个重复。将各组果蝇置于 25 ℃恒温培养箱中培养 20 d 后准确称量每只试管中果蝇的重量，用0.15 mol/L 的生理盐水充分研磨后配制成 1%（m/V）的组织匀浆并于 6000 r/min 离心 10 min 取上清液备用。果蝇体内 SOD 活性和 MDA含量的测定按照试剂盒操作进行，实验结果及详细数据如图3所示。

根据《中国保健食品的进展》中延缓衰老功能的检测方法的规定，如果任一剂量组(或二组、三组)的任一性别(或两性)的最高寿命和(或)平均寿命显著长于对照组，即可判定试验样品对果蝇有延缓衰老的功能。因此，从实验结果判断本发明蝉花酵素对果蝇具有显著的延长寿命、延缓衰老的作用。本实验的体内抗氧化活性显示，2%添加剂量组雌、雄果蝇体内的 SOD 活力均显著高于对照组（p<0.05）；饲喂蝉花酵素同样降低了果蝇体内MDA的含量，培养基中添加 1%和 2%的蝉花酵素可显著降低雌果蝇体内的 MDA 含量，而在雄性果蝇培养基中仅添加0.5%的酵素也可显著降低其体内MDA含量（p<0.05），说明酵素具有较好的机体抗氧化活性。

二．安全性评价：

对开发的蝉花虫草酵素进行了安全性评价。

蝉花酵素样品为黄褐色液体。为了给蝉花酵素的安全使用提供依据，在参考GB/15193-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》等文献的基础上，通过小鼠急性经口毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞细胞微核试验、小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验，对蝉花虫草酵素进行了毒理学安全性评价，考察酵素的安全性。

结果表明：根据小鼠急性经口毒性分级标准，样品属无毒级；Ames试验未检出样品有明显地诱变活性；小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验也未见对小鼠骨髓嗜多染红细胞具有诱发微核作用；小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变分析表明样品对雄性小鼠睾丸初级精母细胞染色体无诱变活性。试验结果说明蝉花虫草酵素作为食品是安全的。

具体试验方法如下：

1.材料和方法

1.1实验材料

菌株：经鉴定基因型符合要求的TA97a、TA98、TA100和TA102，各菌株过夜培养液细菌浓度均在109个/ml或以上。

试验动物及饲养：健康ICR小鼠20只，雌雄各半，体重18-22g。上海斯莱克试验动物有限责任公司提供，二级，合格证号：SCXK(沪)2004-0005号。实验动物环境设施合格证号：SYXK(苏)2002-0004号。饲料来源及证号：江浦振兴试验动物饲料厂，苏动(饲)字第95001号。

主要试剂：总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）等试剂盒均购自北京中生北控生物科技有限公司。二甲基亚砜（DMSO）、敌克松（Dexon）和2-氨基芴（2-AF）、1,8-二羟基蒽醌和环磷酰胺等其他试剂均为国产AR级。

主要仪器：DHG-9053A电热鼓风干燥箱：上海益恒实验仪器有限公司；YXQ.SG4/.280手提式压力蒸汽灭菌器：上海华线医用核子仪器有限公司；BP211D型电子天平：德国Sartarius生产；PT3100型高速分散器：瑞士POLYTRON生产；TL-15高速离心机：图门离心机厂；MD-100半自动生化分析仪：美国Ieyte Driver Torrance化学仪器公司生产。

1.2 实验方法

小鼠经口急性毒性试验方法：采用一次最大限度试验法。小鼠禁食过夜后，设计剂量为15000mg/kg b.wt，受试物分两次灌胃给予，中间间隔3h，每次灌胃容量均为20ml/ kgb.wt。末次灌胃后4 h给食，自由摄食。观察期14d。并记录观察动物的中毒症状及各个系统和器官发生的变化，记录动物的死亡时间和各组动物的死亡数。

Ⅰ.Ames试验方法：

试验菌株经鉴定基因型符合要求的TA97a、TA98、TA100和TA102，各菌株过夜培养液细菌浓度均在109个/ml或以上。

S9的制备：由Aroclor1254诱导的大鼠肝匀浆，S9混合液中S9浓度为10％。

称取样品500 mg，用二甲基亚砜（DMSO）定容至10 ml，并以此连续用DMSO作5倍稀释，共设5个剂量组、2个溶剂对照组，另设3个阳性对照组，阳性对照物为敌克松（Dexon）和2-氨基芴（2-AF）、1,8-二羟基蒽醌分别用双蒸水和DMSO溶解。平板渗入法，共测试两次，每次每个剂量设平行样3个。记录样品各剂量组的回变菌落数。

Ⅱ.小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验方法：

分别称取蝉花虫草酵素1875mg、3750mg、7500mg加双蒸水至20ml配成图7中各受试物剂量。阳性对照取环磷酰胺50mg加双蒸水至25ml。

小鼠按体重随机分入1875 mg/kg b.wt.、3750 mg/kg b.wt.、7500 mg/kg b.wt.三个剂量组、一个溶剂对照组（双蒸水）和一个阳性对照组（环磷酰胺40 mg/kg b.wt.），每组10只，雌雄各半。各组均用30 h两次灌胃法（间隔24 h），每次灌胃容量均为20 mg/kgb.wt.，第二次灌胃后6h杀鼠，取股骨骨髓悬于小牛血清中直接涂片、固定、染色，镜检嗜多染红细胞1000个/鼠，计数具有微核的细胞，观察嗜多染红细胞和正染红细胞比率（PCE/NCE）。

Ⅲ.小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验方法

分别称取蝉花虫草酵素1875mg、3750mg、7500mg加双蒸水至20ml配成受试物各剂量。配制周期2d。阳性对照取丝裂霉素C（MMC）2mg加生理盐水10ml使之成0.2mg/ml的浓度。

小鼠按体重随机分入3个样品剂量组，1个溶剂对照组（双蒸水）和1个阳性对照组，每组5只。样品各剂量组和溶剂对照组动物连续灌胃5d，每次灌胃容量均为20ml/kg，每天一次。阳性对照物丝裂霉素C（MMC）以10 mg/kg b.wt.的量一次腹腔注射。各组动物均于处死前6h腹腔注射秋水仙素4 mg/kg b.wt.，试验第12d杀鼠取睾丸，拉开精曲细管，低渗，固定，软化，制片，染色，镜检。按二项分布进行数据统计处理和推断。

数据统计分析

试验数据由spss11.0软件进行数据统计处理。

具体结果与分析如下：

急性毒性试验结果

蝉花虫草酵素灌胃后，小鼠活动减少，1h后，小鼠活动逐渐恢复正常；小鼠排便正常，肛门清洁，无分泌物增多的现象；皮毛光洁，未见皮肤发红、皮疹等现象；小鼠眼角膜未见浑浊，无血性分泌物。小鼠灌胃后第1日食欲明显下降，1日后恢复正常；在观察期14日内小鼠未见明显中毒症状，基本正常。

试验期末，将小鼠断头处死后，剖开胸、腹腔未见异常液体，主要脏器心、肝、肾、脾、肺未见颜色和形态异常，黏膜颜色红润，无出血、溃疡、水肿或其他改变。样品对小鼠体重的影响及小鼠经口急性毒性试验观察情况分别见图4和图5，以上实验数据可以看出，雌雄小鼠经口LD₅₀值均大于15000 mg/kg b.wt，根据小鼠急性经口毒性分级标准，说明蝉花虫草酵素培养属无毒级。

Ames试验结果

试验结果见图6，两次试验，样品各剂量组的回变菌落数，不论加S9与否，均未超过相应的溶剂对照组的两倍，也无剂量效应关系。试验结果可以看出，将蝉花虫草酵素采用平板渗入法进行Ames试验发现剂量达500µg/皿时，发现加及不加蝉花虫草酵素对标准测试菌株TA97a、TA98、TA100和TA102均无明显的诱变活性。

小鼠骨髓嗜多染红细胞细胞微核试验

试验数据用卡方检验法进行统计分析。具体结果见图7。各样品受试组的微核率与溶剂对照组相比，均无显著差异，也无剂量-效应关系，阳性对照组微核率与溶剂对照组相比，则有显著差异。各组动物的PCE/NCE比率均大于0.1，说明骨髓红细胞系统的增殖并无明显受抑，对嗜多染红细胞微核的观察无明显影响。以上试验结果表明，蝉花虫草酵素在受试剂量下，对小鼠骨髓嗜多染红细胞无诱发微核作用。

小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变分析结果

试验数据按二项分布进行统计处理和推断。具体试验结果见图7。各样品剂量组小鼠具染色体畸变的初级精母细胞率与溶剂对照值之间均无统计学差异，也无剂量-效应关系。阳性对照值与溶剂对照值之间有极显著差异。

试验结果表明，在受试剂量下，未检出该蝉花虫草酵素对雄性小鼠睾丸初级精母细胞染色体的诱变活性。

可以理解，本发明是通过一些实施例进行描述的，本领域技术人员知悉的，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种改变或等效替换。另外，在本发明的教导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体的情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明所保护的范围内。

Claims

1.一种蝉花虫草酵素制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的蝉花虫草酵素制备方法，其特征在于：所述第三步见光培养的条件为培养温度22～24℃，空气湿度80～95％，蓝光光照强度50～100勒克斯。

3.根据权利要求1所述的蝉花虫草酵素制备方法，其特征在于：所述葛根粉为干燥葛根直接粉碎，过35～45目的筛所得。

4.根据权利要求1所述的蝉花虫草酵素制备方法，其特征在于：所述第三步中粗粉碎为粉碎至过80～200目的筛。

5.根据权利要求1-4中任意一项权利要求所述的一种蝉花虫草酵素制备方法得到的蝉花虫草酵素。

6.根据权利要求5所述的蝉花虫草酵素在制备抗氧化的保健品中的应用。

7.根据权利要求5所述的蝉花虫草酵素在制备抗氧化的药品中的应用。