CN1080292A

CN1080292A - 一种抗病毒药物组合物的制备方法

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Publication number: CN1080292A
Application number: CN93102155A
Authority: CN
Inventors: 沙德乔治·拉谦; 多萝茜·珍·马丁·普利佛
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1986-12-15
Filing date: 1993-02-27
Publication date: 1994-01-05
Also published as: EP0272065A2; IL95141A; CA1319143C; DK654287D0; NZ222898A; SU1731064A3; PL277927A1; FI941523A; NO167576B; FI941523A0; DK654287A; CS342591A3; MC1882A1; EP0486477A2; DK169991D0; AU626041B2; HU207735B; CS275398B2; DE3785651D1; HU200932B

Abstract

本发明涉及某些5-取代嘧啶核苷及其药学上可以接受的某些衍生物，及用于治疗和预防水痘带状疱疹病毒、细胞巨病毒和爱泼斯坦巴(Epstein Barr)病毒感染。本发明还提供了药物制剂和制备本发明所涉及的这些化合物的方法。

Description

本发明涉及某些嘧啶核苷，特别是介绍了这些嘧啶核苷在治疗或预防疱疹病毒感染方面的医疗用途。

DNA病毒中，疱疹类病毒是人最普通的病毒病源。这类病毒有HSV（单纯性疱疹病毒）、VZV（水痘带状疱疹病毒）、CMV（细胞巨病毒）和EBV（爱泼斯坦-巴病毒）。VZV是引起水痘和带状疱疹的疱疹病毒。水痘是在无免疫的寄主中产生的原发病，而对于儿童一般病情较轻，其表征是泡状疹和发烧。在曾感染过水痘带状疱疹的成人中，带状疱疹则是一种复发的病。带状疱疹的临床表现是神经痛，并为单侧的属皮肤病一类的水疱皮疹。炎症的发展会导致麻痹或惊厥。如脑脊膜受了影响，有可能发生昏迷。VZV在缺乏免疫力的患者中传播，会引起严重或者甚至是致死的病。对为了移植目的或为了治疗恶性病的形成而接受免疫抑制药物的患者来说，VZV有着利害的关系，由于其免疫系统的损伤，VZV又是艾滋病（AIDS）患者的一种严重的并发症。

同其他疱疹病毒一样，感染上CMV会导致病毒和寄主的终身结合，接着是原发感染，需多年才能摆脱病毒。由于其成长不健壮，对于无任何明显疾病影响的胸和耳易受感染。临床表现是有的会死亡，有的会患大病（如小头、肝脾大、黄疸、精神发育迟缓）。在艾滋病患者中，CMV感染是发病的一个主要原因，如在80%的成人中，这种病毒以潜伏的形式存在，而且在免疫遭到损害的患者中还可复能。

EBV引起传染性单核细胞增多症，也有人认为这种病毒是鼻咽癌、免疫细胞淋巴组织瘤、伯克特氏淋巴组织瘤和毛发粘膜白斑病的病源体。

对于治疗疱疹病毒感染，注意力已集中在核苷类似物上。2′-脱氧-5-乙炔基尿（嘧啶核）苷是一种一开始就具有兴趣的，作为中间体的化合物，Barr等人公开了这种化合物的合成〔（英国）化学会杂志，Perkin论文集Ⅰ（1978），1263页〕，对于这种化合物在体外对牛痘和单纯性疱疹的抗病毒活性，如Walker等人（《核酸研究》专刊第4号、1978年）及英国专利说明书1601020号中均对此进行了实验，但其用于人的药物化疗未证明有任何作用。

对于2′-脱氧-5-乙炔基及其在药学上可接受的衍生物，和在治疗或预防由于CMV或VZV所引起的对人的病毒感染中的用途，欧洲专利申请（86305297号）作了描述并提出权利要求。

我们惊奇地发现，在其5位上存在有一个不饱和基团的某些其他嘧啶核苷，正如下文将要介绍的那样，它们在药物治疗、特别是治疗某些病毒感染中是具有特殊价值的药物，正如细胞培养物体外毒性试验所测定的那样，发现这些化合物还具有毒性水平相对较低的优点。

在下文中将要叙述的，用于治疗VZV、CMV和EBV感染的某些5-取代核苷，特别是2′-脱氧-5-乙炔基胞（嘧啶核）苷、2′-脱氧-5-（1-丙炔基）尿（嘧啶核）苷、1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基尿嘧啶、1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶、1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基胞嘧啶，在下述刊物上曾有报导：医用化学杂志〔（1983），26（5），661-6〕、医用化学杂志〔（1983），26（9），1252-7〕、抗菌剂化学疗法〔（1980），17（6），1030-1〕、核酸论丛〔（1981）9期，103-6〕和生化药理学〔（1983），32（4），726-9〕。

上面谈到的嘧啶核苷可用下面的化合物（通式Ⅰ）制备

在通式（Ⅰ）中，X代表亚乙炔基;R¹代表氧

代或亚氨基团;R²代表氢原子、C_1-2烷基、C_3-4支链或环烷基（如异丙基或环丙基）;R³代表氢原子或酰基例如被一个或多个卤素、烷基、羟基或烷氧基等取代基任意取代的C_1-4链烷酰基或苯甲酰基;和R⁴代表氢原子或羟基;但须：在R²、R³和R⁴各代表一个氢原子时，R¹不代表氧代基团。

将会了解到如果R³不是酰基，化合物（Ⅰ）可以其互变异构体存在。

上述的嘧啶核苷还包括：药学上可接受的这类化合物的衍生物，即药学上可接受的任何盐、酯、或这类酯的盐，或当给人用药时，能提供（直接或间接）抗病毒活性代谢物或其残余物的任何其他化合物。

下面将涉及的这类嘧啶核苷和它们的衍生物为本发明的化合物。

分别具备下述条件的通式（Ⅰ）的化合物较好：a）尤其当其中的R²代表氢原子或甲基时，其中的X代表亚乙炔基。

b）其中的R³代表氢原子或苯甲酰基，和/或

c）尤其当其中的X代表乙炔基和R²代表甲基时，其中的R⁴代表氢原子。

根据其特有的抗病毒活性，特别由于对VZV和在某些场合对CMV的抗病毒活性，下面的新颖的化合物是本发明的优选化合物。

a）3-N-苯甲酰基-2′-脱氧-5-乙炔基尿（嘧啶核）苷;

b）3-N-苯甲酰基-2′-脱氧-5-丙炔基尿（嘧啶核）苷;

c）2′-脱氧-5-（1-丙炔基）胞（嘧啶核）苷;

d）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基胞嘧啶。

其中的b）和c）是已表现出具有强效的抗VZV活性的最优选的化合物。

此外，根据其特别强的抗病毒活性，尤其是对VZV，在某些场合对CMV和EBV的抗病毒活性，下面化合物也是优选的化合物。

e）2′-脱氧-5-乙炔基胞（嘧啶核）苷;

f）2′-脱氧-5-（1-丙炔基）尿（嘧啶核）苷;

g）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基尿嘧啶;

h）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶;

l）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基胞嘧啶。

根据其强效的抗VZV活性，其中的f）和g）是特别优选的化合物。

本发明还包括一些新颖的化合物：

j）1-（β-D-呋喃阿糖基）-3-N-苯甲酰基-5-丙炔尿嘧啶;

k）1-（β-D-呋喃阿糖基）-3-N-苯甲酰基-5-乙炔基尿嘧啶。

这类化合物的盐和酯，特别是化合物e）的二醋酸酯，即2′-脱氧-3′，5′-二-O-乙酰基-5-乙炔基胞（嘧啶核）苷也是药学上可接受的。所有上述化合物对VZV都有高的活性，而a）和e）对CMV的活性高，化合物g）对EBV的活性特高。

本发明还包括：

a）按本发明所述用于治疗或预防病毒感染的一类化合物，特别是VZV、CMV或EBV所引起的疱疹病毒感染;

b）一种治疗或预防由VZV、CMV或EBV所引起的病毒感染的方法，该方法包括用有效量的本发明的化合物来治疗患者;

c）本发明的化合物的用途，该用途可用于治疗或预防疱疹病毒VZV、CMV或EBV所引起的感染所用的药物的制造。

按照本发明可以治疗像CMV、VZV和EBV感染那样的疱疹病毒所引起的临床情况的例子，包括上面已提到的那些。

本发明的优选的单酯和双酯类包括：其中非羰基部分是从直链或支链烷基、烷氧基烷基（如甲氧基甲基）、羧烷基（如羧乙基）、芳烷基（如苄基）、芳氧基烷基（如苯氧基甲基）和芳基（如被卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基任意取代的苯基）中选出的羧酸酯类;诸如烷基、或芳烷基磺酰基（例如甲磺酰基）一类磺酸酯;保护或未保护的一、二或三磷酸酯;氨基酸酯和硝酸酯。除非另有说明，上述酯类的任何烷基部分优先选用的情况是含1至18个碳原子，最好含1-4个碳原子，这些酯的任何芳基部分最好含一个苯基;也包括上面涉及的任何化合物的药学上可接受的盐。

本发明的可方便地用于治疗目的盐，包括生理上可接受的碱性盐，得自碱金属（如钠）盐、碱土金属（如镁）盐、铵盐和NX⁺ ₄（X为C_1-4的烷基）盐。

本发明还提供了下面的新颖化合物，即通式（Ⅰ）B化合物，或其药学上可接受的衍生物。

通式（Ⅰ）B中：X代表1，2-亚乙烯基或亚乙炔基，R¹代表氧代基或亚氨基;R²代表氢原子或C_1-2烷基或C_3-4支链或环烷基，如异丙基或环丙基;R³代表氢原子或酰基，如C_1-4链烷酰基或被一个或多个卤素、烷基、羟基或烷氧基取代基任意取代的苯甲酰基;R⁴代表氢或羟基。但须：（a）当R¹为亚氨基，R³是氢和R⁴是氢或羟基时，则-X-R²不为乙炔基;（b）如R¹是氧代基;R³为氢原子和R⁴为氢原子或羟基时，则-X-R²不为乙炔基，1-丙炔基，

1-丁炔基或3，3，3-三甲基-1-丙炔基。

本发明还包括用于人的药物治疗，特别是用于治疗或预防病毒感染，尤其由诸如VZV、CMV和EBV所引起的疱疹病毒感染的具通式（Ⅰ）B化合物。

本发明的化合物可采用任何合乎病人治疗条件的途径给药，这些途径包括：口服、直肠给药、经鼻给药、局部给药（包括口腔和舌下给药）、经阴道和肠胃外给药（包括皮下、肌肉、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外给药），优选的给药途径随患者的实际情况而定。

对于上述的每一用途和适应症，所需的各活性成分的量是由许多因素所决定的，这些因素包括要予以治疗的病情的严重程度和患者的个性。此量最后由在场医生斟酌决定。一般而言，对于其每一应用和适应症，适宜和有效的用量范围为每日0.1-250mg/每公斤患者体重，优选的用量范围为每日1-100mg/每公斤体重，最优选的用量范围为每日5-30mg/每公斤体重;最佳用量约为每日15mg/每公斤体重（除非另有说明，所有活性成分的重量都是按此母体化合物计算的，对于其盐和酯，该数字应按比例增加）。如需要的话，在一天中分成适当的时间间隔给药，如两次、三次、四次或更多次数给药。在这种情况下，一次配药所含的活性成分为10-1000mg，优选范围为20-500mg，最好是100-400mg。

虽然本发明的化合物可以单独给药，然而最好还是将其制成药物制剂的形式给药。本发明的制剂至少含一种上面规定的活性成分及其一种或多种可以接受的载体和其他任何有治疗作用的成分。载体必须是“可以接受的”，其意思是说这些载体与制剂中的其他成分是可以配伍的，而且对患者没有损害。

所说的制剂包括适宜于口服、经直肠、鼻、局部（包括口腔和舌下）、经阴道或肠胃外（包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外）给药的制剂。可方便地配制成一次使用的剂型，其方法可以采用药剂学领域里熟知的任何方法。这些方法包括促使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合起来的步骤。一般而言，所采用的配制方法是，将活性成分与液体载体或细分散的固体载体或其两者结合起来，必要的话，再予成型。

适宜于口服的本发明的制剂为：诸如胶囊剂、扁囊剂或片剂形式的单剂，每一单剂所含活性成分的量是预先确定的;如散剂或粒剂;如于水液或非水液中的溶液或悬液;或如水包油型的液态乳剂或油包水型的液态乳剂。也可将此活性成分配制成丸剂、药糖剂或膏剂。

可将其与一种或多种辅助成分一起经压制或模制的办法制成片剂。其做法是，用一适宜的机器将自由流动形式如粉状或粒状的活性成分有选择地与粘合剂（如聚乙烯吡咯酮、明胶、羟丙基甲基纤维素）、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂（如羟基乙酸淀粉钠、交联聚乙烯吡咯酮、交联羧甲基纤维素钠）、表面活性剂或分散剂所组成的混合物进行压制即可。而模制则是用一适当的机器，将经某种惰性成分润湿的粉状化合物的混合物进行制模。然后再将其包衣或刻痕，并配制成缓慢释放或控制释放活性成分的片剂，用各种比例的羟丙基甲基纤维素，即可得到所要求释放形式的片剂。

对于眼或其他外组织如口或皮肤的感染，最好涂敷以局部软膏剂或乳膏，这种膏剂所含的活性成分为0.075-20%（W/W），优选值为0.2-15%（W/W），最好是0.5-10%（W/W）。如配制软膏剂，活性成分可与石蜡或与水可溶的软膏基料一道使用。还可采用另一种办法，即将活性成分与水包油型的乳膏基料一起配制成乳膏。

如需要的话，此乳膏基料的水相可包括至少30%（W/W）的多元醇，即具有二个或三个羟基的醇及其混合物，如丙二醇、丁烷-1，3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇。局部给药的制剂按需要可包括能提高经皮肤或感染处吸收或渗透活性成分能力的某种化合物。如二甲基亚砜和有关的类似物就是能提高皮肤渗透力的例子。

本发明的乳剂的油相可采用已知的办法，由已知成分来组成。虽然此油相仅仅含一种乳化剂，但还是要求含至少一种乳化剂与脂肪或油的混合物，或者与脂肪和油的混合物。最好是即有亲水性的乳化剂，又有作为稳定剂的亲脂性的乳化剂。即有油又有脂肪也是优选的。乳化剂（一种或多种）带或不带稳定剂（一种或多种）一起形成所谓的乳化蜡状物，此蜡状物与油和/或脂肪一起形成所谓的乳化软膏基料，后者形成此乳剂油分散相。

适宜用于本发明的此种制剂的乳化剂和乳剂稳定剂有吐温60、斯潘80、十八醇十六醇混合物、十四醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。

因为活性化合物在有可能用于药用乳液制剂的大多数油中的溶解度很低，所以是根据所希望得到的润肤剂性质，来选择适宜于配方的油或脂肪。这样，乳剂最好应为一种不滑腻的、不染色的、可洗涤的产品，为防止从管或其他容器中洩漏出来，还应具有适宜的稠度。可以使用直链或支链一或二元酸烷基酯，如二异己二酸酯，硬脂酸十六烷基酯，椰子脂肪酸的丙二醇二酯，十六烷酸异丙酯，油酸癸酯，棕榈酸异丙酯，硬脂酸丁酯，棕榈酸2-乙基己基酯或已知的例如醋酞纤维素（Crodamol CAP）一类支链酯类的混合物，最后三种是优选的酯类。根据所需要的性质，这些酯可单独使用，也可合起来使用。还可采用另一种办法，即用高熔点的类脂类，如白软石蜡和/或液态石蜡或其他矿物油。

适宜于经眼局部给药的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮于适当的载体，尤其是适宜于此活性成分的含水溶剂中。活性成分在这种制剂中的优选浓度为0.5-20%，较好是0.5-10%，最好约为1.5%（W/W）。

适宜于经口局部给药的制剂有：锭剂，它含有在调味基料（一般为蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶）中的活性成分;软锭剂，它含有在惰性基料（如明胶和甘油，或砂糖或阿拉伯树胶）中的活性成分;漱口药，它包含有在适宜液体载体中的活性成分。

经直肠给药的制剂可为栓剂，它含有栓剂适宜的基料，包括可可油或水杨酸酯。

适宜作经鼻给药的制剂，其中的载体为固体，含粒度为20-500微米的粗粉末，采用鼻吸的办法给药，即将盛有此粉的容器紧贴于鼻，经鼻通道迅速吸入。其载体为液体的，适宜于鼻喷或滴鼻方式给药的制剂，包括其活性成分的水或油溶液。

适宜于阴道给药的制剂有阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，其中除含活性成分外，还有本技术领域内所熟知的适宜的载体。

适宜于经肠胃给药的制剂有：水和非水无菌注射液，其中含有抗氧化剂，缓冲剂、制菌剂和能使该制剂与企图接受治疗的患者的血，成为等渗的溶质;以及含有悬浮剂和增稠剂的水和非水无菌悬液。这种制剂可配制成一次或多次注射的剂型，如封于安瓿和小瓶内并将其贮存于冰冻干燥的条件下，在使用前仅需加入无菌液体载体，如注射用水。临时用注射液和悬液可由前述的无菌粉剂，粒剂和片剂来制备。

优选的单一剂量的制剂有：如上述的含一日量或单位活性成分的制剂，含亚日剂量的制剂，或者将活性成分分成适当份数给药的制剂。

应该了解，除前面特别叙述的成分外，本发明的上述的剂型，还可含本技术领域内其他与所述剂型适应的常规添加剂，例如，适宜于口服的制剂还可包括调味剂。

可采用本技术领域内所熟知的制备与其相同或类似物的任何方法，来制备本发明的化合物，例如参见1601020号英国专利说明书，或参见Robins M.J.和Barr，P.J.有机化学杂志（1983年，48，1854-1862页）的报导;尤其用下文所述的实施例所描述的方法来制备。

本发明也提供了所涉及的化合物的制备方法，它包括：

A、将具通式（Ⅱ）的化合物与具通式（Ⅲ）的化合物缩合，

在通式（Ⅱ）中：R²如上文所规定，X代表亚乙炔基，R¹a代表经保护的羟基或氨基，M¹代表保护羟基的基团。

在通式（Ⅲ）中：y代表卤原子，M²和M³各代表保护羟基的基团，R⁴a代表氢或经保护的羟基。

B、将具通式（Ⅳ）的化合物与能提供必要的-X-R²（X为一个亚乙炔基，R²如上所规定）基团的化合物反应，以制备其中的X是亚乙炔基，而R³是氢的具通式（Ⅰ）的化合物，

通式（Ⅳ）中：R¹、M²、M³和R⁴a如上所规定，Z是一个离去基团。

C、将具通式（Ⅴ）的化合物与能以一个氨基置换通式（Ⅴ）中Q的试剂反应，以制备其中的X是亚乙炔基，R³是氢的化合物，以及

与此同时或之后，还可按任何所需的顺序进行下述的一个步骤或两个步骤：

ⅰ）除去任何遗留的保护基团;

ⅱ）如生成的化合物是具通式（Ⅰ）的化合物，将其转变为药学上可接受的衍生物，或者如生成的化合物是药学上可接受的衍生物，则将其转变为药学上可接受的其他不同的衍生物或具通式（Ⅰ）的化合物。

关于方法A），其原料物质可用常规的保护基团来保护，如酰基（链烷酰基），或芳酰基（对甲苯酰基），或三烷基硅烷基（三甲硅烷基），M¹和R¹a保护基团通常是硅烷保护基团。糖残基（通式（Ⅲ））卤素基团y一般是氯，反应是路易斯酸催化剂（例如四氯化锡）的存在下，在诸如1，2-二氯乙烷一类的适宜的溶剂中进行的。接着进行异头分离（anomeric separation），用甲醇钠一类的醇性碱，在甲醇中进行处理即可得到此母体化合物。Barr等人在（英国）化学会杂志perkin Trans 1（1978年），1263页以及下述有关部分也对该方法作了描述。

随着酸或碱水解，这些保护基团都能除去，除去酰基最好用碱水解，而硅烷基团则用酸水解来除去。

关于方法B），Robins，M.J.，和Barr，P.J.有机化学杂志，1983年，48，1854页及其他有关部分已举例说明。例如将上述保护基团适宜地保护的2′-脱氧-5-碘代尿（嘧啶核）苷一类的5-卤代核苷，与三甲基硅烷基乙炔一类的经适宜保护的乙炔，进行催化偶合反应（在三乙胺有机碱的存在下，升温至50℃，用钯催化剂和另一金属催化剂，如一价铜盐），即可得到保护的乙炔核苷。优选的钯催化剂是二氯化双（三苯膦）钯，而碘化亚铜则是优选的铜催化剂。除去任何保护基团即可容易地得到母体化合物，例如，用甲醇钠这类醇性碱，在甲醇中进行处理。

在方法C）中，其离去基团Q更有利的是一适宜的杂环基团，更有利的是1，2，4-三唑-1-基或卤基（如氯基），将具通式（Ⅴ）的化合物用氨处理，即可实现将基团Q去掉。

具通式（Ⅴ）的化合物可用下述方法制备，如在碱溶剂（最好在吡啶中），在4-氯苯二氯氧磷这类缩合剂存在下，将其相应的4-氧代化合物，以适宜的用于引入离去基团Q的官能剂进行处理，例如用1，2，4-三唑处理;或采取另一种方法制备，即在二甲基甲酰胺中，将其4-氧代化合物用亚硫酰氯处理。

上述原料化合物可用已知化合物、采用本技术领域内所熟知的常规方法技术来制备，如《核酸化学》中所描述的方法：新的改进的合成步骤、方法和技术（Ed.L.B.Townsend和R.S.Tipson，Wiley Interscience（1978）和《核苷类似物》：化学、生物学和医学上应用（编辑R.T.Walker，E de clercq和F.Eckstein，北约（NATO）高级研究所，Plenum出版1979年）。制备这些原料物质的方法将在下面介绍。

在方法A）中，其中的R²是氢，X是亚乙炔基的具通式（Ⅱ）的化合物可用如这样的方法制备，即在碱存在下，用磷酰氯这类适宜的卤化剂卤化5-乙酰基尿嘧啶，即得到其中的y是卤素的具通式（Ⅵ）的化合物。

再将通式（Ⅵ）化合物用氢氧化钾水溶液一类的无机碱处理，并予以保护，便得到具通式（Ⅱ）的化合物。

在方法B）中，特别是其中Z代表卤原子（如碘），R⁴a代表一经保护的羟基的具通式（Ⅳ）的化合物，可用类似于Schinazi等人在医用化学杂志（1979年，22（20），1273页）上所介绍的方法制备。

其中R³代表酰基的通式（Ⅰ）的化合物可用下述方法制备：用相应的其中R³代表氢原子的化合物作原料，用三烷基硅烷基团有选择性地保护此糖残基中的羟基，然后有利地在吡啶或三乙胺（作为此反应溶剂介质）等碱存在下，用适宜的酰基氯或酸酐酰化这些被保护的化合物。通过解除保护，例如用醋酸一类的酸处理，以去除三烷基硅烷基团，即可得到具通式（Ⅰ）的酰基化合物。

本发明的酯类也可用常规方法制备，例如将母体化合物（Ⅰ）或其酯（可以是被护的），分别用适宜的酯化剂或酯交换剂处理，例如在也可作为其溶剂的碱（如吡啶）存在下，用适宜的酰基卤（如酰基氯）或酸酐处理2′-脱氧-5-乙炔基尿嘧啶核苷，然后再除去其余的保护基团。

也可用常规方法制备本发明的盐类，例如，将此母体化合物与适宜的碱反应，即可得到相应的碱的盐。本发明的其他衍生物也可用常规方法制备。

下面将用一些实施例来说明本发明。

实施例1 2′-脱氧-5-丙炔尿（嘧啶核）苷

a）2′-脱氧-3′，5′-二-O-对-甲苯酰基-5-丙炔尿（嘧啶核）苷

在干燥氮气下，搅拌由3′，5′-二-O-对-甲苯酰-2′-脱氧-5-碘代尿（嘧啶核）苷（加拿大化学杂志，1982年，60，554页）（1.11g，2.0mmole）、碘化亚铜（30mg）、氯化双（三苯膦）钯（Ⅱ）（30mg）和80ml无水三乙胺组成的混合物，并向此混合物中通入丙炔气15分钟，然后搅拌，并于50℃下加热3小时，将冷却后滤出的白色固体溶解于二氯甲烷中，用2%乙二胺四乙酸二钠洗涤（2×50ml）此溶液，用MgSO₄干燥，蒸发，残余物用二氯甲烷/乙醇（1∶2）进行重结晶，制得0.63g（63%）的白色晶状标题化合物。熔点：238-241℃。

b）2′-脱氧-5-丙炔基尿（嘧啶核）苷半水合物

将a）步的产品（0.6g，1.2mmole）溶解在18ml，0.2M的甲醇钠（钠和甲醇新鲜制备）的甲醇溶液中，再于室温下搅拌此溶液2.0小时。分批加入Dowex50（H）离子交换树脂，将此溶液酸化到PH4-5，滤出树脂，并用甲醇洗涤。蒸发滤液，将此残余物分配于水和乙醚间，蒸发经乙醚洗涤后的水层，残余物用乙醇研制，滤出的白色固体，用乙醚洗涤，得到标题化合物0.18g（55%）。熔点：194-196℃。

计算值：C，52.36;H，5.49;N，10.23%

实测值：C，52.35;H，5.13;N，10.23%

实施例2 2′-脱氧-3′，5′-二-O-乙酰基-5-乙炔基胞（嘧啶核）苷

a）3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脱氧-5-乙炔基尿

（嘧啶核）苷

将5-乙炔基-2′-脱氧尿（嘧啶核）苷（医用化学杂志、26（5），661-6页，1983年）（1.26g，5.0mmole）、无水吡啶（10ml）和醋酸酐（1.22g，12.0mmol）一起于室温下搅拌20小时。蒸发所得的透明液体，其糖浆状残余物与乙醇一道共蒸得到一白色固体，经乙醇重结晶得到白色晶状的标题化合物1.49g（92%）。熔点152-154℃。

b）1-（2′-脱氧-3′，5′-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基）-5-乙炔基-4-（1，2，4-三唑-1-基）-嘧啶-2（1H）-酮

在室温下，将a）步的产品（304mg，1mmole）、1，2，4-三唑（207mg，3mmole）、无水吡啶（3.0ml）和对-氯代苯基二氯氧磷（352mg，1.5mmole）一起搅拌7天，蒸发所得到的深色溶液，将残余的棕色油状物溶解于二氯甲烷中，再用水洗涤此溶液二次，经MgSO₄干燥，蒸发得到浅黄色泡沫状标题化合物380mg（98%），此粗品用于下步合成。

c）2′-脱氧-3′，5′-二-O-乙酰基-5-乙炔基-胞（嘧啶核）苷·氢氯化物半水合物

于室温下，将b）步产品

（380mg，0.98mmole）于二噁烷/880氨（3∶1）（10ml）的溶液搅拌2.0小时，蒸发得到胶状残余物，将其溶解在热的乙醇中，用饱和氯化氢的2-丙醇溶液酸化，一经冷却就滤出白色晶状盐酸盐，先后用乙醇和乙醚洗涤，真空下用五氧化二磷干燥，得到130mg（35%），在160-162℃下分解的标题化合物。

计算值：C，47.31;H，5.03;N，11.03%

实测值：C，47.50;H，4.79;N，11.04%

实施例3

2′-脱氧-5-乙炔基胞（嘧啶核）苷

将实施例2（c）的化合物（250mg，0.66mmol）的二噁烷/880氨/水（3∶2∶1）（3.0ml）溶液，于室温下搅拌24小时，再加入880氨（1.0ml），并再继续搅拌4.0小时，蒸发此溶液，与乙醇一起共蒸此残余物，再用乙醇研制，滤出的固体用乙醚洗涤得到120mg（72%）标题化合物，熔点162-165℃。再用乙醇重结晶，得到分析纯样品，熔点190-193℃。

计算值：C，52.58;H，5.22;N，16.73%

实测值：C，52.80;H，5.20;N，16.38%

实施例4

3-N-苯甲酰基-2′-脱氧-5-乙炔基-尿（嘧啶核）苷

在用冰冷却下，向搅拌下的由2′-脱氧-5-乙炔基尿（嘧啶核）苷（医学和化学杂志，26（5）期，661-666页，1983年）（0.3g，1.19mmoles）、无水乙腈（8ml）和氯代三甲基硅烷组成的悬液中加入三乙胺（0.85ml，6.1mmoles），于室温下搅拌2小时，加入苯甲酰氯（0.18ml，1.54mmoles），搅拌此混合物1.5小时后过滤，浓缩滤液，残余物溶解在乙醇（10ml）中，加入冰醋酸（0.4g），搅拌0.5小时后蒸发溶剂，用硅胶柱色谱（用二氯甲烷/甲醇（19∶1）洗脱）纯化此残余物，得到标题化合物0.2g（47%），熔点156-157℃。

计算值：C，60.70;H，4.49;N，7.86%

实测值：C，60.44;H，4.336;N，7.69%

实施例5 1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基-尿嘧啶

a）O²，2′-脱水尿（嘧啶核）苷（Anhydrouridine）

于20ml温的，干燥二甲基甲酰胺中，溶入尿（嘧啶核）苷（10g，0.04mole），加入碳酸二苯酯（11.4g，0.06mole）和碳酸氢钠（0.2g）。搅拌此溶液，并于150℃下加热直至停止放出二氧化碳气体（约30分钟）。冷却后，边迅速搅拌边将此溶液倒入200ml乙醚中，滤出的固体用乙醚洗涤，用甲醇重结晶，得到7.2g（80%）标题化合物，为白色晶体，熔点235-240℃。

b）1-（β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶

将a）步的产品（7.0g，0.03mole）溶解在乙醇/水（1∶1）（585ml）中，加入1M氢氧化钠（41ml），于室温下搅拌2.0小时后，分批加入Dowex50（H）离子交换树脂，将此溶液酸化到pH4-5，滤出的树脂用100ml乙醇/水（1∶1）洗涤，将此滤液蒸发至干，残余物用乙醇重结晶，得到5.51g白色晶状标题化合物（75%）（熔点220-223℃）。

c）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-碘代尿嘧啶

将b）步产品（3.0g，12.3mmole）、碘（3g，11.8mmole）、氯仿（15ml）和1M硝酸（30ml）一起剧烈搅拌并回流2.0小时，冷却后滤出晶体状固体，用乙醚充分洗涤以除去多余的碘，用水将此固体重结晶，得到2.55g（56%）白色晶体状标题化合物，熔点191-193℃（分解）。

d）5-碘代-1-（2′，3′，5′-三-O-对-甲苯酰-β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶

于0℃下干燥的氮气氛中，边搅拌边向c）步产品（2.0g，5.4mmole）于无水吡啶（20ml）的溶液中加入对-甲苯酰氯（2.76g，17.85mmole）的二氯甲烷（5.0ml）溶液。在室温下搅拌此溶液5.0小时后蒸发至干，残余物用甲醇研制，滤出的白色固体用乙醚洗涤，得到2.61g（67%）标题化合物，熔点214-216℃。

e）5-三甲基硅烷乙炔基-1-（2′，3′，5′-三-O-对-甲苯酰-β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶

于50℃和干燥氮气氛中将d）步产品（1.45g，2mmole）、碘化亚铜（30mg）、氯化双（三苯膦）钯（Ⅱ）（30mg）、无水三乙胺（80ml）和三甲基硅烷乙炔（0.6g，6mmole）搅拌3小时，蒸发此经冷却的悬液至干，深色残余物用二氯甲烷溶解，相继用乙二胺四乙酸二钠水溶液（2%，2×50ml）和50ml水洗涤，经MgSO₄干燥后进行蒸发，用乙醇将此残余物重结晶，获得白色晶体状标题化合物1.03g（82%），熔点197-199℃。

f）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基尿嘧啶

于30ml、0.2M甲醇钠甲醇溶液（用钠和甲醇新鲜配制）中溶解e）步产品（1.0g，1.59mmole），在室温下搅拌所得溶液3.0小时，分批加入Dowex 50（H）树脂，将其酸化到pH4-5，滤出的树脂用甲醇充分洗涤，蒸发滤液至干，残余物分配于水和乙醚间，水层用乙醚洗涤，再蒸发至干，残余物与两份乙醇一起共蒸，然后用乙醇研制。用乙醚洗涤，滤出固体产物，得到0.30g（70%）标题化合物，200℃以上时分解。

计算值：C，49.25;H，4.51;N，10.45%

实测值：C，49.40;H，4.71;N，10.29%

实施例6

5-乙炔基-1-（2′，3′，5′-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶

于室温下，将实施例5（f）产品（0.35g，1.3mmole）、无水吡啶（2.0ml）和醋酸酐（0.48g，4.7mmol）一起搅拌16.0小时，蒸此透明液体至干，残余物同乙醇一道共蒸发，用乙醇重结晶，得到浅黄色立方晶状标题化合物0.4g（89%），熔点174-176℃。

计算值：C，51.78;H，4.60;N，7.10%

实测值：C，52.06;H，4.43;N，7.05%

实施例7 2′-脱氧-5-丙炔基胞（嘧啶核）苷

a）2′-脱氧-3′，5′-二-O-乙酰基-5-丙炔基尿（嘧啶核）苷

于实施例1（b）的2′-脱氧-5-丙炔基尿（嘧啶核）苷（1g，3.76mmole）的无水吡啶（10ml）溶液中，加入0.8ml醋酸酐。于室温下搅拌16小时后蒸发至干，得到泡沫状固体，用乙醇重结晶，得到0.98g标题化合物（75%），熔点148-149℃。

计算值：C，54.86;H，5.143;N，8.00%

实测值：C，54.82;H，5.114;N，7.805%

b）1-（2-脱氧-3，5-二-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基）-5-丙炔基-4-（1，2，4-三唑-1-基）-嘧啶-2（1H）-酮

于a）步产品（0.7g，2mmol）和0.45g1，2，4-三唑（6.5mmol）的无水吡啶（20ml）溶液中，加入对-氯苯基二氯氧磷（0.76g，3.10mmol），于室温下在干燥氮气氛中搅拌此溶液两天后蒸发至干，所得油状物经硅胶柱进行色谱纯化，乙酸乙酯作洗脱液，得到0.33g原料物质和0.2g（44%，按0.4g原料物计算）标题化合物（在室温下放置将进一步分解），这一部分产品不经纯化供下一步用。

c）2′-脱氧-5-丙炔基胞（嘧啶核）苷

将b）步的粗品（0.2g，0.5mmol）溶解在二噁烷/880NH₃/H₂O（3∶2∶1）（5ml）中，于室温下放置16小时后蒸发至干，残余物与乙醇一道共蒸，所得白色固体用乙醇重结晶，得到于195-200℃下分解的纯品0.04g（30%）。

计算值：C，54.34;H，5.60;N，15.85%

实测值：C，54.19;H，5.550;N，15.33%

实施例8 1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基胞嘧啶

a）5-碘代-1-（2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）-尿嘧啶

于实施例5（c）的1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-碘代尿嘧啶（1g，2.7mmol）于无水吡啶（10ml）的溶液中，加入醋酸酐（1.04ml，11mmol），室温下搅拌3小时后蒸去溶剂，其残余物同CH₂Cl₂一道共蒸几次，所得残余物用乙醇研制，将过滤出的固体经干燥后得到1.25g（93%）标题化合物，熔点175-179℃。

b）5-丙炔基-1-（2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶

于干燥氮气氛下，将由a）步产品（1.16g，2.3mmol），35mg碘化亚铜和35mg氯化双（三苯膦）钯（Ⅱ）和95ml无水三乙胺所配制的悬浮液，搅拌15分钟，向其通入丙炔气15分钟，再于50℃下，氮气氛中搅拌1小时，把过滤的滤液蒸发至干，残余物溶解在CH₂Cl₂（30ml），后用2%乙二胺四乙酸二钠（2×25ml）和水（50ml）洗涤，有机液用Na₂So₄干燥、蒸发、残余物用乙醇重结晶，得到0.38g（40%）标题化合物，熔点150-157℃

计算值：C，52.94;H，4.902;N，6.863%

实测值：C，52.86;H，4.827;N，6.784%

c）5-丙炔基-1-（2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）-4-（1，2，4-三唑-1-基）嘧啶-2（1H）-酮

于由b）步产品（0.5g，1.2mmol）、0.4g1，2，4-三唑和10ml无水吡啶所配制的溶液中，加入对一氯苯二氯氧磷（10.5ml）。在室温下，干燥氮气氛中搅拌6天后蒸发至干，残余物分配于二氯甲烷（30ml）和水（30ml）间，用25ml水洗涤有机层，Na₂SO₄干燥、蒸发得到将在下步合成用的粗品0.65g。

d）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基胞嘧啶

将c）步粗品（0.65g，1.39mmol）溶解在30ml二噁烷/880氨/水（3∶2∶1）中，于室温下放置该溶液过夜，蒸发至干，得到黄色油状物，用乙醇研制，得纯品0.22g，熔点241-243℃（分解）。分析C₁₂H₁₅N₃O₅·0.7H₂O

计算值：C，49.05;H，5.586;N，14.30%

实测值：C，49.28;H，5.32;N，13.95%

实施例9 3-N-苯甲酰基-2′-脱氧-5-丙炔基尿（嘧啶核）苷

在0℃下，于进行搅拌下的、由实例1（b）的2′-脱氧-5-丙炔基尿（嘧啶核）苷（0.4g，1.5mmol）、0.54g三甲基硅烷氯（4.97mmol）和10ml无水乙腈制备的悬浮液中，加入无水三乙胺（1.1ml），室温下搅拌此混合物2.5小时后加入0.3ml苯甲酰氯，继续搅拌5小时。滤出固体后的滤液蒸发至干，残余物用乙醇溶解后加入醋酸0.4g，室温下搅拌此混合物0.5小时，蒸发至干，残余物用硅胶柱纯化，CH₂Cl₂/MeOH（9∶1）洗脱，用无水乙醇重结晶几次后，得到0.14g产品（25%），熔点137-140℃。

分析C₁₉H₁₈N₂O₆·0.2H₂O

计算值：C，60.96;H，4.92;N，7.489%

实测值：C，60.69;H，4.681;N，7.478%

实施例10 1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶

于20ml二噁烷/880NH₃/H₂O（3∶2∶1）中溶解实施例8（b）的5-丙炔基-1-（2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶（0.3g，0.73mmol），于室温下放置18小时，蒸去溶剂后再同乙醇一道共蒸，残余物用乙醇重结晶，得到0.17g标题化合物（82%），

熔点225-227℃。

计算值：C，51.06;H，4.964;N，9.93%

实测值：C，50.8;H，5.055;N，9.8%

实施例11 1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基胞嘧啶

a）5-乙炔基-1-（2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）-4-（1，2，4-三唑-1-基）-嘧啶-2（1H）-酮

于无水吡啶（20ml）中，将实施例6的5-乙炔基-1-（2′，3′，5′-三-O-乙酰基-β-D-呋喃阿糖基）尿嘧啶（0.6g，1.5mmol）、1，2，4-三唑（0.33g，4.8mmol）和对一氯苯二氯氧磷（0.8ml，4.8mmol）一道搅拌72小时，蒸发所得的深色溶液至干，残余物用硅胶柱进行色谱纯化，用乙酸乙酯/己烷（9∶1）洗脱得到适宜于以其粗品形式作为下步合成用的产品0.44g。

b）1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-乙炔基胞嘧啶

于室温下，将由a）步产品（0.44g，0.9mmol）和二噁烷/880NH₃/H₂O（3∶2∶1）（12ml）配制的溶液搅拌48小时，蒸发得到一油状物，用硅胶柱加以色谱纯化，洗脱液为甲醇/二氯甲烷（1∶4），合并所收集的产品，蒸发后将其固体用乙醇重结晶，得到标题化合物0.03g，223℃分解。

分析C₁₁H₁₃N₃O₅·O·3H₂O

计算值：C，48.46;H，4.993;N，15.42%

实测值：C，48.22;H，4.889;N，14.99%

实施例12

2′-脱氧-5-乙炔基-3-N-（对-甲苯酰）尿（嘧啶核）苷

用冰冷却下，于搅拌的由2′-脱氧-5-乙炔基尿（嘧啶核）苷（医用化学杂志，26（5）期，661-666页，1983年）（0.4g，1.6mmol）、无水乙腈15ml和氯代三甲基硅烷（0.7ml，5.6mmol）配制的悬液中，加入三乙胺（1.13ml，8.1mmol），再于室温下搅拌2.5小时后，加入甲苯酰氯（0.3ml，2.1mmol），搅拌7小时后过滤，蒸发滤液至干，残余物溶解在乙醇（20ml）中，加入冰醋酸，并在室温下搅拌0.5小时，蒸去溶剂，同乙醇一道共蒸去除残存的醋酸。用薄层硅胶色谱法纯化产品，用甲醇/二氯甲烷（1∶24）作洗脱液，尔后经甲醇重结晶，得到标题化合物（0.03g），熔点176-179℃。

分析 C₁₉H₁₈N₂O₆·0.2EtOH

计算值：C，61.37;H，5.08;N，7.36%

实测值：C，60.92;H，4.87;N，7.40%

下面的实施例将用于说明本发明的各药用制剂，其中的活性成分是具通式（Ⅰ）的化合物。

实施例A 片剂

活性成分 100mg

乳糖 200mg

淀粉 50mg

聚乙烯吡咯烷酮 5mg

硬脂酸镁 4mg

359mg

其具体做法是，先将上述各成分通过湿法成粒后再压制。

实施例B 眼用溶液（眼药水）

活性成分 0.5g

氯化钠（分析纯） 0.9g

乙基汞硫代水杨酸钠 0.001g

纯净水至 100ml

调节PH至 7.5

实施例C 片剂

下面的制剂A和B的制备方法是，先用活性成分与聚乙烯吡咯酮（Povidone）溶液进行湿法成粒，尔后再加硬脂酸镁并进行压制。

制剂 A

mg/片 mg/片

(a)活性成分 250 250

(b)乳糖(B.P.) 210 26

(c)聚乙烯吡咯酮(B.P.) 15 9

(d)羟基乙酸淀粉钠 20 12

(e)硬脂酸镁 5 3

500 300

制剂 B

mg/片 mg/片

(a)活性成分 250 250

(b)乳糖 150 -

(c)微晶纤维素PH101 60 26

(d)聚乙烯吡咯酮(B.P.) 15 9

(e)羟基乙酸淀粉钠 20 12

(f)硬脂酸镁 5 3

500 300

制剂 C

mg/片

活性成分 100

乳糖 200

淀粉 50

聚乙烯吡咯酮 5

硬脂酸镁 4

359

下述的制剂D和E是将经混合的各成分直接压制而成的。E中所用乳糖是直接压制型的。

制剂 D

mg/胶囊

活性成分 250

预胶质化的淀粉NF15 150

400

制剂 E

mg/胶囊

活性成分 250

乳糖 150

微晶纤维素 100

500

制剂 F（控制释放型）

这类制剂的制备方法是，先将下述各成分用聚乙烯吡咯酮溶液进行湿法成粒，尔后加硬脂酸镁，并进行压制。

mg/片

（a）活性成分 500

（b）羟基丙基甲基纤维素 112

（Methocel K4M Premium）

（c）乳糖（B.P.） 53

（d）聚乙烯吡咯酮（B.P.C） 28

（e）硬脂酸镁 7

700

制剂中药物释放历时约6-8小时，12小时后释放完全。

实施例 D 胶囊剂

制剂 A

胶囊剂的配制方法是，将实施例c的制剂D中的各成分混合后，装入一个分成两部分的硬明胶囊中。下面的制剂B用类似办法制备。

制剂 B

mg/胶囊

（a）活性成分 250

（b）乳糖B.P. 143

（c）羟基乙酸淀粉钠 25

（d）硬脂酸镁 2

420

制剂 C

mg/胶囊

（a）活性成分 250

（b）聚乙二醇4000BP 350

600

胶囊剂的制备方法是，将聚乙二醇4000BP熔化，将活性成分分散于此熔化物中，再将该熔化物装入分成两部分的硬明胶囊中。

制剂 D

mg/胶囊

活性成分 250

卵磷脂 100

花生油 100

450

胶囊剂的制备方法是，将活性成分分散于卵磷脂和花生油中后，再装入软的且有弹性的明胶囊中。

制剂 E（控制释放型胶囊）

下述控制释放型胶囊剂的制备方法是，用一挤压机挤压成分a、b和c，接着再将此挤压物成球，并予以干燥，经干燥的球丸再用控制释放的膜（d）加以包衣，然后再装入分成两部分的硬明胶囊中。

mg/胶囊

（a）活性成分 250

（b）微晶纤维素 125

（c）乳糖BP 125

（d）乙基纤维素 13

513

实施例 E 注射用制剂

活性成分 0.200g

无菌，无热原的磷酸盐缓冲剂（pH7.0）至10ml

将此活性成分溶于大部分磷酸盐缓冲剂内（35-40℃），并使之到规定体积，用一无菌微孔过滤器将其滤入无菌的、体积为10ml的琥珀玻璃瓶（Ⅰ型）中，再加以无菌密封。

实施例 F 肌内注射剂

活性成分 0.20g

苯甲醇 0.10g

葡萄糖糠醛75（Glucofurol） 1.45g

注射用水（足量）至 3.00ml

将活性成分溶解在葡萄糖糠醛中，然后加苯甲醇并溶解，加注射用水至3ml，用一无菌微孔过滤器过滤此混合物，然后密封于3ml无菌玻璃瓶（Ⅰ型）中。

实施例 G：糖浆悬液

活性成分 0.2500g

山梨糖醇溶液 1.5000g

甘油 2.0000g

可分散的纤维素 0.0750g

苯甲酸钠 0.0050g

香料，Peach 17·42·3169 0.0125ml

纯化的水（足量）至 5.0000ml

将苯甲酸钠溶解在一部分纯净水中，然后加入山梨糖醇溶液，加入活性成分并分散之;将增稠剂（分散的纤维素）分散于甘油中。把由此制备的两种分散液混合，并用纯净水稀释到需要的体积，搅拌“剪切”此悬液使之达到所要求的稠度。

实施例 H 栓剂

mg/栓剂

活性成分（63μm）＊ 250

硬脂，BP（Witepsol H15-Dynamit NoBel）1770

2020

＊：所用的活性成分为粉末，其中有至少90%的粉粒的直径为63μm或更小。

于最高温度45℃下，用一蒸汽套层锅将五分之一的硬脂（witepsol H15）熔化。用200μm的筛将活性成分过筛，并将其加到此熔化的基料中，与此同时，用一装有切头的西尔弗森（silverson）搅拌器进行混合，直至混合均匀。维持此混合物在45℃，将剩余的Witepsol H15加到此悬液中，搅拌，确保混合均匀。将此全部悬液用不锈钢筛（250μm）过筛，随着不断搅拌使之冷却到40℃。于38-40℃下，把2.02g此混合物加到一适宜的塑料模中，让此栓剂冷却到室温。

实施例 Ⅰ：阴道栓剂

mg/栓剂

活性成分63μm 250

无水葡萄糖 380

马铃薯淀粉 363

硬脂酸镁 7

1000

直接混合上述各成分，再将生成的混合物直接压制，以制备阴道栓剂。

抗病毒和毒性试验

采用多孔板中的单层MRC5细胞（人胚胎肺）或Detroit 532细胞（人包皮纤维细胞）来鉴定HCMV（人细胞巨病毒）。根据斑的减少数来确定化合物的活性，其中，用HCMV悬液感染细胞单层;为确保病毒不蔓延到整个培养物，将其涂以凝胶形式的营养素琼脂糖。将已知克分子浓度范围的化合物，并入此营养素琼脂糖涂物中。每一浓度下的斑数以对照组的百分数表示，并画出剂量反应曲线，从此曲线上即可求出半数（50%）抑制浓度（IC₅₀）。用类似的检定HCMV的方法，在MRC5细胞中检定VZV病毒，但没用琼脂糖涂物。

检定实验是按下述步骤进行的，将产生病毒的细胞（P3HR-1）与药物接触14天，其后，用对EBV有专一性的c-RNA-DNA杂交，来测定每一细胞的EBV基因组复制。Epstein Barr病毒的检定是按Nonoyama和Pagano在Nature：New Biology，233卷，103-104页（1971）中所发表的方法进行的。其结果中所列出的IC₅₀值是：抑制每一细胞的EBV基因组数到50%时所需的浓度。

细胞毒性的鉴定是用细胞生长抑制实验来进行的。使生长在96孔微量滴定板内的Vero细胞亚融合培养物，与不同稀释浓度的药物接触，并根据复份培养物每天摄入四唑鎓染料（MTT）的量来评价细胞的存活率。在96小时时抑制50%的细胞存活率所需的浓度记作CCID₅₀。

其结果列于下表：

表

实施例 IC₅₀(μM) IC₅₀(μM) CCID₅₀(μM) IC₅₀(μM)

VZV HCMV 于96小时 EBV

1 1.0 >16 >500 <50

2 0.3/1.2 3/7 >500 -

5 1.5 >20 >300 <0.1

7 3.3 >20 >300 -

9 2.2 28.5 >500 -

Claims

1、一种药物组合物的制备方法，所述组合物包括一种活性物即1-(β-D-呋喃阿糖基)-5-丙炔基尿嘧啶或其药物上可接受的盐和一种药物上可接受的载体，该方法包括将所述活性物与所述载体混合到一起。

2、一种药物组合物的制备方法，所述组合物包括一种活性物即1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶和一种药物上可接受的载体，该方法包括将所述活性物与所述载体混合到一起。

3、权利要求1的方法，其中所述药物上可接受的盐是一种生理上可接受的碱盐。

4、权利要求3的方法，其中所述生理上可接受的碱盐是一种钠盐。

5、权利要求1-4中任一项的方法，所制成的组合物适于口服。

6、权利要求5的方法，所制成的药物是片剂或胶囊剂。

7、权利要求5的方法，所制成的药物是在含水液体或非水液体中的溶液或混悬液。

8、权利要求1-4中任一项的方法，所制成的药物适用于胃肠外给药。

9、权利要求8的方法，所制成的药物是水质的或非水质的灭菌的注射液。

10、权利要求8或9的方法，所制成的药物是封装在安瓿或小瓶中。

11、权利要求1-8中任一项的方法，所制成的药物是冻-干的制品。

12、权利要求1-11中任一项的方法，所制成的药物是单位剂量的形式。

13、权利要求12的方法，所制成的单位剂量药物含有10-1000毫克权利要求1所述的化合物或其盐。

14、权利要求13的方法，所制成的单位剂量药物含有100-400毫克权利要求1所述的化合物或其盐。

15、一种抗VZV（水痘带状疱疹）药物组合物的制备方法，所述组合物包括一种活性物即式（Ⅰ）的一种化合物或其药物上可接受的盐，以及药物上可接受的载体，该方法包括将所述活性物与所述载体混合到一起，

式（Ⅰ）中，R²代表氢或甲基。

16、一种抗VZV药物组合物的制备方法，所述组合物包括活性物即1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶和药物上可接受的载体，该方法包括将所述活性物与载体混合到一起。

17、权利要求15的方法，其中所述药物上可接受的盐是一种生理上可接受的碱盐。

18、权利要求17的方法，其中所述生理上可接受的碱盐是一种钠盐。

19、权利要求15-18中任一项的方法，所制成的药物适于口服。

20、权利要求19的方法，所制成的药物是片剂、胶囊剂或液体。

21、权利要求15-18中任一项的方法，所制成的药物适用于胃肠外给药。

22、权利要求21的方法，所制成的药物是水质或非水质的灭菌溶液。

23、权利要求16的方法，所制成的单位剂量药物含有10-1000毫克1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶或其药物上可接受的盐。

24、权利要求23的方法，所制成的单位剂量药物含有100-400毫克1-（β-D-呋喃阿糖基）-5-丙炔基尿嘧啶或其药物上可接受的盐。

25、权利要求23或24的方法，其中将所制的单位剂量一份或更多份给药，从而达到给药剂量为每天每千克受药者体重0.1-250毫克。

26、权利要求25的方法，其中所述给药剂量为每天每千克受药者体重5-30毫克。