CS275402B6

CS275402B6 - Method of pyrimidine nucleosides preparation

Info

Publication number: CS275402B6
Application number: CS877675A
Authority: CS
Inventors: Saad George Rahim; Dorothy Jane Martin Purifoy
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1986-12-15
Filing date: 1987-12-14
Publication date: 1992-02-19
Also published as: JPS63165397A; DK169991D0; NO875209L; IL95141A0; PH24104A; CS275398B2; PT86356A; ATE88713T1; IL84810A; NO875209D0; AU626041B2; HU200932B; RU2036199C1; JPH0378370B2; PL277926A1; PL269462A1; CN1080292A; JPH03141292A; NO167576C; HU207735B

Description

Vynález se týká způsobu přípravy pyrímidinových nukleosidů, které jsou použitelné pro léčení nebo profylaxi infekčních onemocnění způsobených viry druhu herpes, přičemž tyto připravované sloučeniny mají následující obecný vzorec IB

X - R (IB), ve kterém znamená ethinylenovou skupinu, představuje iminovou skupinu, znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 2 atomy uhlíku nebo rozvětvenou skupinu obsahující 3 až 4 atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 4 atomy uhlíku, jako například isopropylová skupina nebo cyklopropylová skupina znamená atom vodíku nebo acylovou skupinu, jako je například alkanoylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylová skupina, případně substituovaná například jedním nebo více atomy halogenu, alkylovými skupinami, hydroxy skupinami nebo alkoxy skupinami, a výjimkou sloučeni3 substituent R j2 představuje atom vodíku nebo hydroxy skupinu, s ny kdy:

v případě, že substituent R^ je iminová skupina atom vodíku nebo hydroxy skupina, potom skupina ethinylovou. skupinu.

Z virů DNA jsou viry skupiny herpes zdrojem nejčastějších virových onemocnění u lidí. Do této skupiny náleží virus způsobující opar prostý (herpes simplex, HSV), virus způsobující plané neštovice (VZV), cytomegalovirus (CMV) a Epstein-Barrův virus (EBV).

Virus způsobující plané neštovice (VZV) je virus typu herpes, který způsobuje plané neštovice a pásový opar. Plané neštovice jsou hlavním onemocněním vyvolaným u nositele tohoto viru, který není imunní a u malých dětí způsobuje tento virus pouze mírné onemocnění, které je charakterizováno puchýřkovitou vyrážkou a horečkami. Pásový opar nebo plané neštovice jsou typem onemocnění, které se vrací, a které se vyskytuje u dospělých lidí, kteří již někdy předtím byli infikováni těmito viry. Klinické projevy pásového oparu je možno charakterizovat neuralgií a puchýřkovitou vyrážkou na kůži, která pokud se týče rozmístění je jednostranná. Rozšíření zánětů může vést k paralýze nebo ke křečím. Jestliže dojde k napadení měkkých blan ústředního nervstva, potom může nastat i smrt. U pacientů, kteří trpí selháním imunitního systému,'může. rozšíření tohoto viru planých neštovic (VZV) způsobit vážné onemocnění nebo může dokonce způsobit úmrtí. Viry způsobující plané neštovice představují vážný problém u pacientů, kteří berou léčiva potlačující imunitní systém za je

X-R^ neznamená

CS-275402 B 6 účelem provedení transplantace nebo za účelem léčeni maligních nádorů, a dále představuje vážnou komplikaci u pacientů trpících AIDS, vzhledem ke zhoršení imunitního systému u těchto pacientů.

Všeobecně je možno uvést, že infekce cytomegaloviry, stejně tak jako dalšími viry ze skupiny herpes, vede ke dlouhodobému shromažďování těchto virů u nositele těchto virů, přičemž po primární infekci se tyto viry mohou rozšiřovat po řadu let. Klinické příznaky se pohybují od úmrtí a těžkých onemocnění (jako například mikrocefalie, hepatospelnomegálie, žloutenka, mentální retardace), přes poruchy růstu a celkového prospívání, citlivostna infekční onemocnění průdušek a uší, až po stav, kdy se neobjevují vůbec žádné příznaky. Infekce cytomegaloviry u pacientů trpících AIDS je hlavní příčinou úmrtí, nebot u dospělé populace je v 80 % případů tento virus přítomen v latentní formě a může být u pacientů, u kterých je ohrožen imunitní systém znovu reaktivován.

Epstein-Barrův virus (EBV) způsobuje infekční mononukleosu, přičemž je rovněž považován za příčinu způsobující nasofaringicidní nádor, imuno-lymfoblastom, Burkittův lymfom s rozvlásněnou leukoplakií.

Při léčení virových onemocnění druhu herpes byla pozornost a výzkum zaměřena na analogy nukleosidových sloučenin. Jednou z těchto sloučenin, na kterou byla původně zaměřena pozornost jako na látku představující použitelný meziprodukt, je 2’-(j_eOxy.5__ethinyluridin, přičemž postup přípravy této sloučeniny je popsán Barrem a kol. v J. Chem. Soc. Perkin Trans I (1978), 1263. Tato sloučenina byla .testována naproti virovou účinnost in vitropacti. naočkovanémuviru neštovic a proti virům způsobujícím prostý opar (herpes simplex), což je například uváděno Walkerem a kol. v Nucleic Acid REs., Speciál Pub. No. 4, 1978, a v patentu Velké Británie č. 1 601 020, přičemž ovšem nebyl zaznamenán žádný účinek, který by byl použitelný při zdravotní chemoterapii u lidí.

Pokud se dále týče dosavadního stavu techniky, uvádí a nárokuje evropská patentová přihláška č. 86305297 použití 2'-deoxy-5-ethinyluridinu a jeho farmaceuticky přijatelných derivátů při léčení nebo profylaxi virových onemocnění vyskytujících se u lidí a způsobených cytomegaloviry (CMV) a viry planých neštovic (VZV).

Určité typy 5-substituovaných nukleosidů, zejména 2 -deoxy-S-ethinýlcytidin, 2-deoxy-5-(l-propinyl)uridin, l-(/3-0-arabinofuranosyl)-5-propinyluráčil, 1-(/3-D-arabinofuranosyl)-5-ethinylcytosin, a 1-(/3-D-arabinofuranosyl)-5-ethinyluracil, které jsou popisovány v dalším textu v souvislosti s použitím těchto látek při léčení infekčních onemocnění způsobených viry planých neštovic, cytomegalovirem a Epstein-Barrovým virem, byly již předtím uváděny v publikacích náležících do dosavadního stavu techniky, např. J. Med. Chem. (1983), 26 (5), 661-6, J. Med. Chem. (1983), 26 (9), 1252-7, Antimicrobial Agents Chemother. (1980), 17 (6), 1030-1, Nucleic Acids Sympt. Ser. (1981) 9, 103-6 a Biochem. Pharmacol. (1983) 32 (4), 726-9.

Podstata způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce IB

HO

R

X - R‘ ,2 (IB)

OH

CS 275402 Β 6 ve kterém znamená X rtl ethinylenovou skupinu, představuje iminovou skupinu, znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 2 atomy uhlíku nebo rozvětvenou nebo cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 4 atomy uhlíku, jako například isopropylová skupina nebo cykloprúpylová skupina, znamená atom vodíku nebo acylovou skupinu, jako například alkanoylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzylovou skupinu; které jsou popřípadě substituovány, například jedním nebo více atomy halogenu, alkylovými skupinami, hydroxy skupinou nebo alkoxy skupinami, a znamená atom vodíku nebo hydroxy skupinu, s výjimkou sloučenin, kdy:

v případě, že substituentem R³ je iminová skupina, substituentem R³ je atom vodíku a substituentem R⁴ je atom vodíku, nebo hydroxy skupina, potom skupina -X-R neznamená ethinylovou skupinu, nebo farmaceuticky přijatelných derivátů odvozených od těchto sloučenin, spočívá podle uvedeného vynálezu v tom, že se do reakce uvádí sloučenina obecného vzorce V:

ve kterém znamená Q vhodnou odštěpitelnou skupinu, kterou je heterocyklylová skupina, jako například 1,2,4-triažolová skupina,

M a M každý představují chránící skupinu hydroxy skupiny, .

R_g je vodík nebo chránící skupina hydroxy skupiny, a

X a R mají již shora uvedeny vyznám, při teplotě okolí s amoniakálním činidlem, které nahradí skupinu Q aminovou skupinou, a po této reakci nebo souběžně s touto reakcí se popřípadě provede jeden nebo oba následující stupně v libovolném pořadí:

odstranění veškerých zbývajících chránících skupin,

- v případě, že výslednou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce IB, potom se tato sloučenina převede na farmaceuticky přijatelný derivát této sloučeniny, nebo v případě, kdy je výslednou sloučeninou farmaceuticky přijatelný derivát, převede se tento derivát na jiný farmaceuticky přijatelný derivát nebo na sloučeninu obecného vzorce IB.

CS 275402 06

Sloučeniny připravené postupem podle uvedeného vynálezu, tzn. sloučeniny obecného vzorce IS, představují látky, které jsou použitelné pro léčení lidí, zejména pro léčení nebo profylaxi virových infekčních onemocněni, zejména způsobených viry druhu herpes, jako je například virus planých neštovic, cytomegalovirus a Epstein-Barrův virus.

Jako příznaky klinických projevů, které jsou způsobeny těmito viry druhu herpes, jako jsou například výše uvedený cytomegalovirus, virus planých neštovic a Epstein-Barrův virus, které je možno léčit těmito sloučeninami, je možno uvést příznaky uvedené výše.

Tyto určité typy pyrimidinových nukleosidů, připravené postupem podle vynálezu, které jsou charakterizované přítomností nenasycených skupin v páté poloze, jsou zejména vhodné pro terapii a zejména pro léčení určitých virových onemocnění, které byly již uvedeny výše. Tyto sloučeniny, připravené postupem podle uvedeného vynálezu, jsou rovněž výhodné z toho hlediska, že u nich bylo zjištěno, že projevují malou toxicitu, což bylo stanoveno na základě testů na toxicitu u kultivovaných buněk, prováděných in vitro. ·

K výše uvedenému je třeba poznamenat, že u připravovaných sloučenin, jestliže substituent R⁵ není acyluvá skupina, potom se sloučenina obecného vzorce IB může vyskytovat ve svých tautomerních formách.

Do rozsahu postupu příprav, uvedených pyrimidinových nukleosidů podle vynálezu rovněž náleží i postupy přípravy farmaceuticky přijatelných derivátů odvozených oď těchto sloučenin, jako jsou například, veškeré farmaceuticky přijatelné soli, estery nebo soli těchto esterů, nebo jakékoliv další sloučeniny, které v případě,' že jsou padány člověku, jsou schopné vytvořit.(přímo nebo. nepřímo) antivirově účinný metabolit nebo zbytek odvozený od těchto sloučenin.

Při provádění postupu podle uvedeného vynálezu je odštěpítelnou skupinou Q ve výhodném provedení vhodná heterocyklická skupina, výhodně 1,2,4-triazol-l-ylová skupina nebo halogenová skupina, jako je například chlorová skupina, přičemž odstranění uvedené odštěpitelné skupiny Q se provede vhodným způsobem zpracováním této sloučeniny obecného vzorce V amoniakem. .. -.

Výše uvedená sloučenina obecného vzorce V se připraví například zpracováním odpovídající 4-oxo-sloučeniny vhodnou látkou s funkční skupinou, která slouží k zavedení odštěpitelné skupiny Q do uvedené sloučeniny, jako je například zpracování s 1,2,4-triazolem, což se obvykle provádí v přítomnosti kondenzačního činidla, jako je například 4-chlorfeny1fosfodichloridát, například v bazickém rozpouštědle, což je ve výhodném provedení pyridin, nebo zpracováním uvedené 4-oxosloučeniny s thionylchloridem, což se provádí v dimethylformamidu.

Výše uvedené výchozí sloučeniny je možno připravit běžnými postupy podle dosavadního stavu techniky, přičemž se použije všeobecně známých sloučenin, a rovněž je možno použít všeobecně známé techniky podle dosavadního stavu techniky, což je možno nalézt například v publikacích: Nucleic Acid chemistry, Ed.L. B. Townsend a-R, S. Tipson, Willey Interscience (1978) a Nucleoside Analoques: Chemistry, Biology and Medical Applications, Ed. R. T. Walker, E de Clercq a F. Eckstein, NATO Advanced Study Institute, Plenům Press (1979). Příklady postupů přípravy těchto'výchozích látek jso.u uváděny v dalším textu.

Sloučeniny obecného vzorce IB, ve kterém substituent R^ představuje acylovou skupinu, je možno připravit z odpovídajících sloučenin, ve kterých substituent R^ představuje atom vodíku, například selektivním chráněním hydroxyskupin ve zbytku cukru, přičemž se použije například triaikyisilylových skupin, a v následujícím postupu se acyluje chráněná sloučenina, přičemž se použije například vhodný chlorid kyseliny nebo anhydric kyseliny, a tento postup se provede výhodně v přítomnosti bazické sloučeniny, jako je například pyridin nebo triethylamin, které mohou rovněž sloužit jako rozpouštědlo pro danou reakci. Takto získaná výsledná acylové sloučenina obecného vzorce IB vznikne odstraněním chránících skupin, například odstraněním triaikyisilylových skupin, což se provede například zpracováním s kyselinou, jako je například kyselina octová.

CS 275402 B 6

Estery sloučenin pudle uvedeného vynálezu je možno připravit běžně známými postupy podle dosavadního stavu techniky, jako je například zpracování základní sloučeniny obecného vzorce IB nebo esteru této sloučeniny (který je případně chráněn) se vhodným esterifikačním činidlem nebo transesterifikačním činidlem, například je možno uvést, že se toto zpracování provede tak, že se 2 -deoxy-5-ethinyluridin uvede do reakce se vhodným halogenidem kyseliny, jako je například chlorid kyseliny, nebo se vhodným anhydridem kyseliny v přítomnosti bazické látky, kterou je v obvyklém provedení pyridin, přičemž tato látka může rovněž sloužit jako rozpouštědlo. Zbývající chránící skupiny se potom odstraní.

Soli sloučenin podle uvedeného vynálezu je možno rovněž připravit postupy odvoditelnými od obdobných postupů podle dosavadního stavu techniky, což se provede například reakcí základní sloučeniny se vhodnou bazickou sloučeninou, za vzniku odpovídající bazické soli. Další jiné deriváty sloučenin podle uvedeného vynálezu je možno připravit obdobně.

Ve vhodném provedení podle uvedeného vynálezu jsou monoestery a diestery takové estery, které jsou odvozené od karboxylových kyselin, a u kterých nekarbonylová část esterové skupiny je vybrána ze skupiny zahrnující alkylové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, alkoxyalkylové skupiny (jako je například methoxymethylová skupina), karboxyalkylová skupina, jako je například karboxyethylová skupina, aralkylové skupiny, jako je například benzylová skupina, aryloxyalkylové skupiny, jako je například ienoxymethylová skupina, arylové skupiny, jako je například fenylová skupina případně substituovaná atomem halogenu, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxy skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, dále jsou výhodné sulfonátové estery, jako jsou například alkylsufonylové estery nebo aralkyIsulfonylové estery, jako je například methansulfonylavý ester, dále . monofosfátové, difosfátové nebo trifosfátové estery, kterémohou nebo nemusí být blokovány a dále estery odvozené od aminokyselin a estery odvozené od kyseliny dusičné. Pokud se týče výše uvedených esterů, pokud nebude výslovně uvedeno jinak, všechny alkylové části, které jsou přítomné v těchto esterech, ve výhodném provedení podle uvedeného .vynálezu obsahují 1 až 18 atomů uhlíku, zejména 1 až 4 atomy uhlíku. Všechny arylové části obsažené v těchto esterech ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezu představují fen.ylovou skupinu. Všechny odkazy na výše uvedené sloučeniny rovněž v sobě zahrnují i odkazy na farmaceuticky přijatelné soli těchto sloučenin.

Soli sloučenin připravených postupem podle uvedeného vynálezu, které mohou být běžným způsobeni použity pro léčení uvedených onemocnění, zahrnují fyziologicky přijatelné bazické soli, jako jsou například soli odvozené od vhodných bazických sloučenin, jako jsou například soli alkalických kovů, jako například sodíku, soli kovů alkalických zemin, jako například soli hořčíku, soli amonné a soli NX^, kde substituentem X je alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.

Sloučeniny připravené postupem podle uvedeného vynálezu je možno podávat jakýmkoliv vhodným způsobem, který odpovídá stavu, jaký se má léčit, přičemž vhodpá metoda podávání těchto sloučenin je orální podávání, rektální podávání, nazální podávání (neboli podávání nosem), topické podávání, které zahrnuje rovněž bukální·podávání a sublinguální podávání, dále vaginální podávání a parenterální podávání, které zahrnuje subkutální podávání, iritramuskulární podávání, intravenozní podávání intradermální podávání, intrathekální podávání a epidurální podávání. Předpokládá se jako samozřejmé, že výhodný způsob podávání se může měnit podle například stavu pacienta.

U všech výše uvedených použití a příznaků onemocnění závisí množství požadované aktivní složky, připravené postupem podle uvedeného vynálezu, na řadě faktorů, do nichž je možno zahrnout stádium nemoci, která se má léčit, a stav pacienta, přičemž v každém jednotlivém případě je třeba konečné rozhodnutí ponechat na ošetřujícím lékaři. Všeobecně je ale možno uvést, že v případě všech uvedených použití a příznaků onemocnění se vhodná účinná dávka pohybuje v rozmezí od asi 0,1 miligramu do 250 miligramů účinné látky, tzn. sloučeniny připravené postupem podle uvedeného vynálezu, na kilogram tělesné hmotnosti pacienta

CS 275402 B 6 na den, přičemž ve výhodném provedení se tato dávka pohybuje v rozmezí od 1 miligramu do 100 miligramů účinné látky na kilogram tělesné hmotnosti na den a v nejvýhodnějším provedení se tato dávka pohybuje v rozmezí od 5 miligramů do 30 miligramů účinné látky na kilogram tělesné hmotnosti za den. Optimální dávka je asi 15 miligramů účinné látky na kilogram tělesné hmotnosti na den (pokud nebude výslovně uvedeno jinak jsou všechny uvedené hmotnosti účinné látky počítány jako základní sloučenina, přičemž v případě solí a esterů těchto základních sloučenin jsou tyto hodnoty odpovídajícím způsobem zvětšeny). Uvedenou požadovanou dávku je možno v případě potřeby rozdělit na dvě, tři, čtyři nebo více menších dávek, které je možno podávat ve vhodných časových intervalech během jednoho dne. Tyto menší dávky je možno podávat ve formě jednotkových dávek, například ve formě dávek obsahujících 10 až 1 000 miligramů účinné látky, ve výhodném provedení obsahujících 20 miligramů až 500 miligramů účinné látky a v nejvýhodnějším provedení obsahujících 100 miligramů až 400 miligramů účinné látky v jedné dávkové jednotce.

I přesto, že je možné podávat sloučeniny připravené postupem podle uvedeného vynálezu samostatně, je výhodné tyto sloučeniny podávat ve formě farmaceutických prostředků. Tyto farmaceutické prostředky obsahují přinejmenším jednu aktivní složku, tzn. sloučeninu připravenou postupem podle uvedeného vynálezu, jak již bylo uvedeno výše, společně s jedním nebo více přijatelnými nosičovými látkami a s případně dalšími therapeuticky účinnými látkami. Tento nosičový materiál nebo nosičové materiály musí být přijatelné v tom smyslu, že musí být kompatibilní s ostatními složkami uvedeného prostředku a nesmí být nepříznivě působící na příjemce, kterému jsou tyto prostředky'určeny.

Tyto farmaceutické prostředky na bázi sloučenin připravených postupem podle uvedeného vynálezu zahrnují takové prostředky, které jsou vhodné pro orální, rektální, nazální, topické (zahrnující bukální a sublinguální), dále vaginální nebo parenterální (zahrnující subkutánní, intramuskulární, intravenózní, intrathekální a epidurální) podávání. Tyto farmaceutické prostředky mohou být výhodně připraveny ve formě jednotkových dávek, přičemž je možno je připravit za použití metod všeobecně známých a používaných ve farmacii. Tyto postupy přípravy zahrnují fázi, kdy se přivádí ke spojení účinná látka s nosičovým materiálem, který představuje jednu nebo více vedlejších složek. Všeobecně je možno uvést, že se tyto farmaceutické prostředky připraví tak, že se stejnoměrně a dokonale přivede do spojení účinná látka, tzn. sloučenina připravená postupem podle uvedeného vynálezu, s kapalnými nosičovými látkami nebo s jemně rozmělněnými pevnými nosičovými látkami nebo s oběma uvedenými materiály a potom se v případě potřeby tento produkt vytvaruje.

Farmaceutické prostředky obsahující jako účinnou látku sloučeninu připravenou postupem podle uvedeného vynálezu, které jsou vhodné pro orální podávání, mohou být vytvořeny ve formě samostatných jednotek, jako jsou například kapsle, prášek v oplatce nebo tableta, přičemž každá z těchto dávek obsahuje předem stanovené množství účinné látky, dále . ve formě prášku nebo granulí, dále ve formě roztoku nebo suspenze ve vodné kapalině nebo v nevodné kapalině, nebo ve formě kapalné emulze typu olej ve vodě nebo ve formě kapalné emulze typu voda v oleji. Účinná látka může být rovněž ve formě bolusu, lektvaru, ne bo ve formě pasty.

Tablety je možno připravit vytlačováním nebo vytvarováním, .které se provádí případně společně s jednou nebo více vedlejšími látkami. Vytlačované tablety je možno připravit tak, že se ve vhodném vytlačovacím stroji vytlačuje účinná látka připravená postupem podle uvedeného vynálezu, ve formě volně tekoucí látky, jako je například prášek nebo granule, přičemž tato účinná látka je případně smíchána s pojivovým materiálem (jako je napří, klad povidon , nebo želatina, hydroxypropylmethylceluloza a podobné další látky), dále s mazivem, s inertní ředící látkou, konzervační přísadou, desintegrátorem (jako je například amylglykolát sodný, zesítěný povidon, zesítěná sodná súl karboxymethylcelulozý), povrchově aktivním činidlem nebo s dispergačním činidlem. Vytvarovaná tableta se připraví vytvarováním na vhodném tvarovacím stroji, přičemž při této výrobě se směs práškové sloučeniny zvlhčí inertním kapalným ředidlem. Tyto tablety je možno případně opatřit povlakem nebo rýhovanou drážkou, přičemž je možno tyto tablety připravit tak, aby bylo zajištěno pomalé nebo kontrolované uvolňování účinné látky obsažené v této tabletě, přičemž

CS 2.75402 0 6 se například použije hydroxypropylmethylcelulozy v různých poměrech za účelem dosažení požadovaného uvolňovacího profilu.

V případě infekcí oka nebo jiných vnějších tkání, jako jsou například ústa a pokožka, se farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu připravenou postupem podle vynálezu aplikuje ve výhodném provedení jako topická mast nebo krém, který obsahuje účinnou složku v množství například v rozmezí od 0,075 4 do 20 % hmotnostních na hmotnost celkovou, ve výhodném provedení v rozmezí od 0,2 do 15 4 hmotnostních na celkovou hmotnost, přičemž podle nejvýhodnějšího provedení je toto množství v rozmezí od 0,5 do 10 % hmotnostních na celkovou hmotnost. Při přípravě této masti může být uvedená účinná látka použita buďto s niastí na parafinické bázi nebo s mastí mísitelnou s vodou. V alternativním provedení může být účinná látka vmíšena do krému společně s krémem na bázi oleje ve vodě.

V případě potřeby je možno vhodnou fázi, která je obsažena v krémové bázi, obohatit například vícemocným alkoholem v množství přinejmenším 30 4 hmotnostních vztaženo na celkovou hmotnost, přičemž títmo alkoholem může být alkohol obsahující dvě nebo více hydroxylové skupiny, jako je například propylenglykol, 1,3-butandiol, manit, sorbit, glycerin a polyethylenglykol a dále směsi těchto alkoholů. Tyto topické prostředky mohou v případě potřeby obsahovat sloučeninu, která zlepšuje absorpci nebo pronikání účinné složky kůží nebo jinými napadenými částmi. Jako příklad těchto látek zvyšujících pronikání účinné látky pokožkou je možno uvést dimethylsúlfoxid a odvozené analogické látky.

Olejová fáze emulzí může být tvořena známými složkami, přičemž je možno tyto emulze připravovat známým způsobem. I když tato olejová fáze může obsahovat pouze emulgátor (jinak označovaný jako emulgant), je výhodné jestliže tato olejová fáze obsahuje směs přinejměnším jednoho emulgačního činidla s tukem nebo olejem nebo jak s tukem tak i s olejem. Ve výhodném provedení je v emulzi na bázi sloučenin připravených postupem podle uvedeného vynálezu obsaženo hydrofilní emulgační činidlo společně s lipofilním emulgačním činidlem, které působí jako stabilizátor. Rovněž je výhodné, jestliže je v emulzi obsažen jak olej tak i tuk. Společně tvoří emulgační činidlo nebo emulgační činidla se stabilizátorem nebo se stabilizátory nebo bez tohoto stabilizátoru nebo stabilizátorů tak zvaný emulgační vosk, přičemž tento emulgační vosk společně s olejem a/nebo tukem tvoří tak zvanou emulgační bázi masti, která tvoří olejovou dispergovanou fázi krémového prostředku.

Mezi emulgátóry a stabilizátory emulze, které jsou vhodné pro použití v prostředcích výše uvedeného druhu, je možno zařadit Tween. 60 a Spán 80 (což jsou neionogenní povrchově aktivní činidla na bázi šestimocných alkoholů, alkylenoxidú a mastných kyselin), dále cetostearylalkohol, myristylalkohol, monostearát glycerinu a laurylsulfát sodný.

Výběr vhodných olejů nebo tuků, které se používají pro přípravu těchto prostředků, závisí na požadovaných dosažených kosmetických vlastnostech, i když je třeba uvést, že rozpustnost účinných sloučenin, připravených postupem podle uvedeného vynálezu, je v případě většiny olejů, které přichází v úvahu k použití u farmaceutických emulzních prostředků, velmi malá. Tento krém by měl být ve výhodném provedení ne mastný, netvořící skvrny a omyvatelný, přičemž by měl mít vhodnou .konzistenci, aby nedocházelo k unikání z tub nebo jiných použitých obalů. Pro přípravu těchto prostředků je možno použít jednosytných nebo dvojsytných alkylesterů s přímým nebo rozvětveným řetězcem, jako jsou například diisoadipát, isocetylstearát, diester propylenglykolu odvozený od kyselin z kokosových ořechů, isopropylmyristát, decyloleát, išopropylpalmitát, butylstearát, 2-ethylhexylpalmitát nebo směs esterů s rozvětveným řetězcem, které jsou známy pod označením Cromadol (isopropyl-; myristátové deriváty) CAP, přičemž poslední tři uvedené látky náleží k' výhodně používaným esterům pro přípravu prostředků výše uvedeného druhu. Tyto látky mohou být použity samotné nebo v kombinaci, což závisí na požadovaných vlastnostech. V alternativním provedení je možno použít lipidů s vysokou'teplotou tání, jako je například bílý měkký parafin a/nebo kapalný parafin nebo jiné minerální oleje.

CS 275402 8 6

Farmaceutické prostředky, které jsou vhodné pro topické aplikace na oči, zahrnují rovněž oční kapky, u nichž je účinná látka, připravená postupem podle uvedeného vynálezu, rozpuštěna nebo suspendována ve vhodné nosičové látce,, zejména je touto vhodnou nosičovou látkou vodné rozpouštědlo účinné látky. Účinná látka připravená postupem podle uvedeného vynálezu je ve výhodném provedení přítomna v těchto prostředcích v koncentraci v rozmezí, od 0,5 % do 20 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost, přičemž v ještě výhodnějším provedení je tato účinná látka přítomna v rozmezí od 0,5 % do 10 ‘i hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost, obzvláště se používá tato účinná látka v množství asi 1,5 % hmotnostního, vztaženo na celkovou hmotnost.

Farmaceutické prostředky, které jsou vhodné pro topické aplikace na ústa, zahrnují pastilky obsahující účinnou látku, připravenou postupem podle uvedeného vynálezu, která se používá ve formě s příchutí nebo aromem, přičemž obvykle jsou těmito chuiovými nebo aromatickými přísadami sacharoza a akácie nebo tragant, dále jsou to pastilky obsahující účinnou látku v inertní bazické látce jakými jsou například želatina a glycerin nebo sacharoza a akácie, a dále jsou to prostředky pro vyplachování úst, které obsahují účinnou látku ve vhodném kapalném rozpouštědle jako nosičové látce.

Farmaceutické prostředky pro rektální podávání mohou být vytvořeny ve formě čípků, přičemž tyto čípky mají vhodný základní materiál, kterým je například kakaové máslo nebo salicylát.

Farmaceutické prostředky, které jsou vhodné pro nazální podávání, tzn. podávání do nosu, a u nichž je nosičovým materiálem pevná látka, zahrnují prášky o hrubší zrnitosti, u nichž je velikost částic v rozmezí od asi 20 do 500 mikrometrů, přičemž tyto prostředky se podávají tak, že se vtahují nosem, to znamená rychlou inhalací nosními dutinami, přičemž se prášek nasává ze zdroje, který je umístěn v těsné blízkosti nosu. Vhodnými farmaceutickými prostředky, u nichž je nosičovou látkou kapalina, a které se podávají například jako spraye do nosu nebo jako nosní kapky, jsou například vodné nebo olejové roztoky účinné látky,připravené postupem podle uvedeného vynálezu.

Farmaceutické prostředky pro vaginální podávání mohou být vytvořeny ve formě pesarů, tamponů, krémů, želé, past, pěn nebo sprayových prostředků, které obsahují kromě účinné látky nosičové látky, které jsou vhodné pro tyto účely a které jsou dostateně dobře známyz dosavadního stavu techniky.

Farmaceutické prostředky na bázi sloučenin připravených postupem podle uvedeného vynálezu, které jsou vhodné pro parenterální podávání, zahrnují vodné a nevodné sterilní roztoky pro injekce, které mohou obsahovat antioxidační látky, tlumící látky, bakteriostatika a dále látky rozpuštěné v těchto roztocích, pomocí kterých se dosáhne u těchto roztoků, že jsou isotonické s krví uvažovaného příjemce, a dále vodné a nevodné sterilní suspenze, které mohou obsahovat suspendační činidla a zahušiovadla. Tyto farmaceutické prostředky mohou být vytvořeny ve formě jednotkových dávek nebo vícedávkóvých jednotkách, které jsou v odpovídajících baleních, jako jsou například zapečetěné ampule a farmaceutické lahvičky, přičemž tyto prostředky mohou být skladovány za podmínek, kdy dochází k sušení vymrazováním (to znamená v lyofilizovaném stavu), což je stav, který vyžaduje pouze přidání sterilní kapalné nosičové látky, jako je například voda pro injekce, těsně před použitím. Roztoky a suspenze pro injekce sestavené podle receptu mohou být připraveny ze sterilních prášků, granulí a tablet stejného druhu, které již byly popsány.

Ve výhodném provedení jsou farmaceutické prostředky na bázi sloučenin připravených postupem podle uvedeného vynálezu v jednotkových dávkách takové prostředky, které obsahují denní dávku nebo jednotku, dále částečnou denní dávku, jak již bylo shora uvedeno, nebo vhodnou část této denní dávky.

V této souvislosti je třeba uvést, že’je samozřejmé, že kromě látek, které byly částečně citovány ve shora uvedeném textu, mohou tyto prostředky obsahující sloučeniny připravené postupem podle uvedeného vynálezu obsahovat i další látky, které se běžně používají v

CS 275402 B 6 tomto oboru, přičemž se vezme V úvahu typ prostředku, který přichází v úvahu, například je možno uvést, že prostředky vhodné pro orální podávání mohou obsahovat chuiové a aromatizační přísady.

Postup podle uvedeného vynálezu bude v dalším ilustrován pomocí příkladů praktického provedení, přičemž tyto příklady postup blíže objasňují aniž by jej omezovaly.

Příklad 1

Příprava 3-N-benzoyl-2 ’-deoxy-5-ethinyluridinu

Podle tohoto postupu byl k míchané suspenzi, která obsahovala 2 -deoxy-5-ethiny1uridin (viz J. Med. Chem. 26 (5), 661-6, 1983) v množství 0,3 gramu, což odpovídá 1,19 mmolu, v suchém acetonitrilu v množství 8 mililitrů a chlortrimethylsilanu v množství 0,5 mililitru .přidán za chlazení směsi na ledové lázni triethylamin v množství 0,85 mililitru, což odpovídá 6,1 mmolu a takto získaná směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. K této směsi byl potom přidán benzoylchlorid v množství 0,18 mililitru, což odpovídá 1,54 mmolu, a takto získaná směs byla promíchávána po dobu další 1,5 hodiny a potom byla zfiltrována. Takto získaný filtrát byl zkoncentrována získaný zbytek byl rozpuštěn v ethanolu v množství 10 mililitrů a potom' byla přidána ledová kyselina octová v množství 0,4 gramu. Tato směs byla potom promíchávána po dobu 0,5 hodiny, přičemž potom byla odpařena použitá rozpouštědla a získaný zbytek byl přečištěn chromatografickým způsobem v koloně naplněné silikagelem, přičemž jako elučniho činidla bylo použito směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 19 : 1. Tímto způsobem byla získána požadovaná sloučenina, která je uvedena v záhlaví tohoto příkladu, v množství 0,2 gramu, což odpovídá výtěžku 47 %, přičemž teplota tání takto získaného produktu se pohybovala v rozmezí od 156 do 157 °C.

Analýza CHN: vypočteno 60,70 % C, 4,49 % H, 7,86 % N;

nalezeno 60,44 % C, 4,336 ·'. H, 7,69 % N.

Příklad 2 '

Příprava 2’-deoxy-5-propinylcytidinu

a) Příprava 2 ’-deoxy-3 ',5 '-di-Q-p-toluoyl-5-propinyluridin

Podle tohoto příkladu'provedení byla směs obsahující 3 ’, 5 ’-di-0-p-toluoyl-2-deoxy-5-joduridin (viz Can. J. Chem., 1982, 60, str. 554) v množství 1,1 gramu, což odpovídá

2,0 mniolům, dále 30 miligramů jodidu měďného, 30 miligramů bis(trifenylfosfin)paladiumchloridu, ve kterém má paladium oxidační mocenství II, a 80 mililitrů suchého triethylaminu, promíchávána pod atmosférou suchého dusíku a v další fázi byl touto směsí po dobu 15 ·>

minut probubláván plynný propin. Takto získaná směs byla potom promíchávána a zahřívána při teplotě 50 °C po dobu 3,0 hodin. Po ochlazení byl získán bílý pevný podíl, který byl zfiltrován a tato pevná látka byla potom ponořena do dichlormethanu. Tento roztok byl potom promyt dvakrát 50-ti milí litrovými podíly 2%ního roztoku dvojsodné soli ethylendiaminotetraoctové kyseliny, potom bylo provedeno sušení roztoku pomocí síranu hořečnatého a odpaření. Tákto získaný zbytek byl potom rekrystalován ze směsi dichlormethanu a ethanolu v poměru 1 : 2, přičemž tímto způsobem bylo získáno 0,63 gramu požadované sloučeniny (což odpovídá výtěžku 63 %) ve formě bílých krystalků, přičemž teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 230 do 241 °C.

b) Příprava 2 -deoxy-5-propinyluridinu ve formě hemihydrátu

Podle tohoto provedení byl roztok produktu získaný podle stupně a) v množství 0,6 gramu, což odpovídá 1,2 mmolu, v 18 mililitrech 0,2 M roztoku methoxidu sodného v methanolu (čerstvě připravený roztok ze sodíku a methanolu) promícháván při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin. Tento roztok byl potom okyselen na pH v rozmezí od 4 do 5 tak, že byla po částech přidávána iontovýměnná pryskyřice Oowex 50(H). Tato iontovýměnná pryskyřice byla potom odfiltrována a promyta methanolem. Získaný filtrát byl potom odpařen a takto získaný zbytek byl rozdělen mezi vodu a ether. Vodná vrstva byla potom promyta etherem

CS 275402 B 6 a potom byla odpařena. Takto'získaný zbytek byl potom triturován ethanolem a získaná pevná látka byla odfiltrována a promyta etherem, přičemž podle tohoto provedení bylo získáno 0,18 gramu požadované sloučeniny, což odpovídá výtěžku 55 %. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 194 do 196 °C.

c) Příprava 2 ’-deoxy-3 ',5 ’-di-0-acetyl-5-propinyluridinu

Podle tohoto příkladu provedení bylo 0,8 mililitru anhydridu kyseliny octové přidáno k roztoku obsahujícím 2 -ďeoxy-5-propinyluridinz postupu podle předchozího stupně b) v množství 1 gram, což odpovídá 3,76 mmolu, v 10 mililitrech suchého pyridinu. Tato směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a potom byla odpařena do sucha, přičemž byl získán napěněný pevný produkt. Rekrystalizací z ethanolu bylo získáno 0,98 gramu požadované sloučeniny uvedené v záhlaví,.což odpovídalo výtěžku 75 %. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 148 do 149 ^QC.

Analýza CHN: vypočteno 54,86 % C, 5,143 % H, 8,00 % N;

nalezeno 54,82 % C, 5,114 % H, 7,805 \ N.

d) Příprava l-[2-deoxy-3,5-di-0-acetyl-/3-0-ribofuranosyl]-5-propinyl-4-[l,2,4-triázol-l-yl]pyrimidin-2(lH)-onu

Podle tohoto provedení byl p-chlorfenylfosfodichloridát v množství 0,76 gramu, což odpovídá 3,10 mmolu, přidán kroztoku produktu získanému'podle stupně c) v množství 0,7 gramu, což odpovídá 2 mniolůni, a 0,45 gramu 1,2,4-triazolu, což odpovídá 6,5 mmolu, ve 20 mililitrech suchého pyridinu. Tento roztok byl potom promícháván pod atmosférou suchého dusíku při teplotě místnosti po dobu 2 dní a potom byl odpařen do sucha. Výsledný olejový produkt byl potom eluován v koloně naplněné silikagelem ethylesterem kyseliny octové, přičemž při tomto provedení bylo získáno 0,333 gramu výchozí látky a 0,2 gramu požadované výsledné sloučeniny uvedené v záhlaví, což odpovídá výtěžku 44 % vzhledem k 0,4 gramu výchozí látky. Takto získaný produkt se rozkládal jestliže byl ponechán stát při teplotě místnosti. Tento produkt nebyl v dalším přečišiován, ale byl použit přímo pro další stupeň.

e) Příprava 2-deoxy -5-propinylcytidinu

Surový produkt získaný postupem podle předchozího stupně d) v množství 0,2 gramu, což odpovídá 0,5 mmolu, byl rozpuštěn v 5 mililitrech směsi dioxan(880 amoniak)voda v poměru 3:2:1, přičemž takto získaná směs byla ponechána stát při teplotě místností po dobu 16 hodin. Tato. směs byla potom odpařena do sucha a získaný zbytek byl potom současně odpařen s ethanolem. Takto získaný výsledný bílý pevný produkt byl potom rekrystalován z ethanolu, přičemž bylo získáno 0,04 gramu čistého produktu, což odpovídá výtěžku 30 %, přičemž tento produkt se rozkládal pří teplotě v rozmezí od 195 do 200 °C.

Analýza CHN: vypočteno 54,34 % C, 5,60 % H, 15,85 % N;

nalezeno 54,19 % C, 5,550 % H, 15,33 % N.

Příklad 3

Příprava l-(/3-Q-arabinofuranosyl)-5-propinylcytosinu

a) Příprava 0 ,2 -anhydrouridinu

Podle tohoto postupu byl uridin v množství 10 gramů, což odpovídá 0,04 molů, rozpuštěn ve 20 mililitrech teplého, suchého dimethylformamidu, přičemž potom bylo přidáno 11,4 gramu difenyluhličitanu (0,06 ni) a 0,2 gramu hydrogenuhličitanu sodného. Takto získaný roztok byl potom promícháván a zahříván na teplotu 150 °C tak dlouho, dokud ustal vývin oxidu uhličitého (což trvalo přibližně 30 minut). Po ochlazení byl získaný roztok nalit do 200 mililitrů etheru za rychlého míchání. Tímto způsobem byla získána pevná látka, která byla odfiltrována, promyta etherem a rekrystalována z methanolu. Postupem podle tohoto příkladu bylo získáno 7,2 gramu požadované sloučeniny uvedené v záhlaví, což odpovídá výtěžku 80 %, ve .formě bílých krystalků. Teplota tání této sloučeniny se pohybovala v rozmezí do 235 do 240 °C.

CS 275402 Β 6

b) Příprava l-(/3-D-arabinofuranosyl)uracilu

Podle tohoto postupu byl produkt, získaný postupem podle stupně a) v množství 7,0 gramů, což odpovídá 0,03 molu, rozpuštěn v 585 mililitrech směsi ethanol/voda v poměru 1 : 1, přičemž potom bylo přidáno 41 mililitrů 1 M roztoku hydroxidu sodného. Potom byla tato směs promíchávána při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin, přičemž potom byl tento roztok okyselen na pH v rozmezí od 4 do 5 tak, že byla po částech přidávána iontovýměnná pryskyřice Oowex 50(H). Tato použitá iontovýměnná pryskyřice byla odfiltrována a promyta 100 mililitry směsi ethanol/voda v poměru 1 : 1. Takto získaný filtrát byl odpařen do sucha a získaný zbytek byl rekrystalován z ethanolu, přičemž bylo získáno 5,51 gramu požadované sloučeniny uvedené v záhlaví tohoto stupně, což odpovídá výtěžku 75 %, ve formě bílých krystalků. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 220 do 223 °C.

c) Příprava l-(/^-D-arabinofuranosyl)-5-joduracilu

Podle tohoto postupu byl produkt získaný postupem podle shora uvedeného stupně b) v množství 3,0 gramy, což odpovídá 12,3 mmolu, dále 3,0 gramy jodu, což odpovídá 11,8 mmolu, dále 15 mililitrů chloroformu a 30 mililitrů 1 M roztoku kyseliny dusičné, promíchávány a zahřívány pod zpětným chladičem při teplotě varu rozpouštědla po dobu 2,0 hodin. Po ochlazení byl získán pevný krystalický produkt, který byl oddělen odfiltrováním a potom byl řádně promyt eterem za účelem odstranění přebytečného množství jodu. Tato pevná látka byla potom rekrystalována z vody, přičemž bylo získáno 2,55 gramu požadované sloučeniny uvedené v záhlaví tohoto stupně, což odpovídá výtěžku 56 %, ve formě bílých krystalků. Teplota tání tohoto produktu byla v rozmezí od 191 °C do 193 °C (za rozkladu).

d) Příprava 5-jod-l-(2,3,5-tri-0-acetyl-/3-0-arabinofuranosyl)uracilu

Podle tohoto stupně byl anhydrid kyseliny octové v množství 1,04 mililitru, což odpovídá 11 milimolům, přidán k roztoku obsahujícímu 1 gram l-(/ó-0-arabinofuranosyl)-5-joduracilu z postupu podle předchozího stupně c), což odpovídá 2,7 mmolu, v 10 mililitrech suchého pyridinu. Tato směs byla míchána po dobu 3 hodin při tepoltě místnosti, přičemž použité rozpouštědlo bylo odpařeno a získaný zbytek byl současně odpařován s dichlormethanem CHjCl?, což bylo provedeno několikrát. Takto získaný zbytek byl triturován s ethanolem, přičemž byl získán pevný produkt, který byl odfiltrován a tímto způsobem bylo získáno 1,25 gramu požadavané sloučeniny uvedené v záhlaví tohoto stupně, což odpovídá výtěžku 93 %. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 175 do 179 °C.

e) Příprava 5-propinyl-l-(2,3,5-tri-0-acetyl-/3-D-arabinof uranosyDuracilu

Podle tohoto provedení byla suspenze produktu získaného postupem podle shora uvedeného stupně d) v množství 1,16 gramu, což odpovídá 2,3 mmolu, dále 35 miligramů jodidu niěďného a 35 miligramů bis(trifenylfosfin)paladiumchloridu, ve kterém je paladium v oxidačním mocenství II, v 95 mililitrech suchého triethylaminu, promíchávána pod atomosférou suchého dusíku po dobu 15 minut. Touto směsí byl potom probubláván plynný propin, což bylo prováděno po dobu 15 minut, a získaná směs byla promíchávána pod atomosférou dusíku při teplotě 50 °C po dobu jedné hodiny. Takto získaný roztok byl potom odfiltrován a získaný filtrát byl odpařen do sucha. Tímto způsobem vznikl zbytek,který byl vložen do dichlormethanu v množství 30 mililitrů, a tento roztok byl promyt dvakrát 25 mililitrovýffli podíly 2%ního vodného roztoku dvojsodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny a 50 mililitry vody. Získaný organický roztok byl. potom sušen síranem sodným a odpařen, přičemž rekrystalizací zbytku z ethanolu bylo získáno 0,38 grmau požadovaného produktu uvedeného v záhlaví tohoto stupně, což odpovídá výtěžku postupu 40 %. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 150 do 157 °C.

Analýza CHN: vypočeteno 52,94 % C, 4,902 % H, 6,863 4 N;

nalezeno 52,86 % C, 4,827 % H, 6,784 % N.

CS 275402 B 6

f) Příprava 5-propinyl-l-f2,}5-tri-0-acetyl-/3-D-arabinofuranosyl]-4-(j,2,4-triazol-l-ylj-pyrimidin-2-(lH)-onu ·

Podle tohoto provedení byl p-chlorfenylfosforodichloridát v množství 10,5 mililitru, přidán k roztoku obsahujícímu produkt získaný postupem podle shora uvedeného stupně e) v množství 0,5 gramu, což odpovídá 1,2 mmolu, a 0,4 gramu 1,2,4-triazolu v 10 mililitrech suchého pyridinu. Takto získaný roztok byl potom promícháván při teplotě místnosti a pod atmosférou suchého dusíku po dobu 6 dní, přičemž potom byl odpařen do sucha. Tímto způsobem byl získán 2bytek, který byl rozdělen mezi dichlormethan (30 mililitrů) a vodu (30 mililitrů). Organická vrstva byla potom promyta 25 mililitry vody, sušena síranem sodným a potom odpařena, přičemž bylo získáno 0,65 gramu surového produktu, který byl použit pro následující stupeň syntézy.

g) Příprava 1-(/3-0-arabinofuranosyl)-5-propinylcytosinu

Podle tohoto provedení byl produkt získaný postupem podle shora uvedeného stupně.f) v množství 0,65 gramu, což odpovídá 1,39 mmolu, rozpuštěn ve 30 mililitrech směsi dioxan/880 amoniak/voda v poměru 3:2:1a tento roztok byl potom ponechán stát při teplotě místnosti po dobu přes noc. Dále. byl tento roztok odpařen do sucha, přičemž vznikl žlutý olej, který byl potom triturován s ethanolem. Tímto způsobem byl získán čistý produkt v množství 0,22 gramu, přičemž teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 241 do 243 °c (_2a rozkladu).

Analýza CHN: vypočteno pro ^ci2^H15^N3^5 ' ^{0,7 H}2°

49,05 % C, 5,505 % H, 14,30 % N;

nalezeno 49,28 % C, 5,32 % H, 13,95 % N.

Příklad 4

Příprava 3-N-benzoy1-2 ’-deoxy-5-propinyluridinu

a) Přípravy 2 '-deoxy-3 ',5 ’-di-0-p-toluoyl-5-propinyluridinu

Podle tohoto příkladu provedení byla směs obsahující 3 ,5 -di-0-toluoyl-2 -deoxy-5-joduridinu (viz Can. 0. Chem., 1982, 60, str. 554) v množství 1,11 gramu, což odpovídá 2,0 mmolům, dále 30 miligramů jodidu měďného, 30 miligramů bis(trifenylfosfin)paladiumchloridu, ve kterém má paladium oxidační mocenství II, a 80 mililitrů suchého triethylaminu, promíchávána pod atmosférou suchého dusíku a v další fázi byl touto směsí po dobu 15 minut probubláván plynný propin. Takto získaná směs byla potom promíchávána a zahřívána při· teplotě 50 °C po dobu 3,0 hodin. Po ochlazení byl získán bílý pevný podíl, který byl zfiltrován a tato pevná látka byla potom ponořena do tíichlormethanu. Tento roztok byl potom promyt dvakrát 50-ti mililitrovými podíly 2%ního roztoku dvojsodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny, potom bylo provedeno sušení'roztoku pomocí síranu hořečnatého a odpaření. Takto získaný zbytek byl potom rekrystalován ze směsi dichlormethanu a ethanolu v poměru 1 : 2, přičemž.tímto způsobem bylo získáno 0,63 gramu požadované sloučeniny (což odpovídá výtěžku 63 %) ve formě bílých krystalků, přičemž teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 238 do 241 °C.

b) Příprava 2'-deoxy-5-propinyluridinu ve formě hemihydrátu

Podle tohoto provedení byl roztok produktu získaný postupem podle stupně a) v množství 0,6 gramu, což odpovídá 1,2 mmolu, v 18 mililitrech 0,2 M roztoku methoxidu sodného' v methanolu (čerstvě připravený roztok ze sodíku a methanolu) promícháván při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin. Tento roztok byl potom okyselen na pH v rozmezí od 4 do 5 tak, že byla po částech přidávána iontovýměnná pryskyřice Dowex 50(H). Tato iontovýměnná pryskyřice byla potom odfiltrována a promyta methanolem. Získaný filtrát byl potom odpařen a takto získaný zbytek byl rozdělen mezi vodu a ether. Vodná vrstva byla potom promyta etherem a potom byla odpařena. Takto získaný zbytek byl potom triturován ethanolem a získaná pevná látka byla odfiltrována a promyta etherem, přičemž podle tohoto pro13

CS 275402 8 6 vedení bylo získáno 0,18 gramu požadované sloučeniny, což odpovídá výtěžku 55 ’ί. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 194 do 196 °C.

Analýza CHN: vypočteno .52,36 % C, 5,49 % H, 10,23 % N;

nalezeno 52,35 % C, 5,13 % H, 10,23 % N.

c) Příprava 3-N-benzoyl-2 '-deoxy-5-propinyluridinu

Podle tohoto postupu byl suchý triethylamin v množství 1,1 mililitru přidán při teplotě 0 °C k míchané suspenzi obsahující 2'-deoxy-S-propinyluridinu, který byl získán postupem podle shora uvedeného stupně b), v množství 0,4 gramu, což odpovídá 1,5 mmolu, a 0,54 gramu trimethylsilylchloridu, což odpovídá 4,97 mmolu, v 10 mililitrech suchého acetonitrilu. Tato směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti po, dobu 2,5 hodiny a k tomuto roztoku bylo potom přidáno 0,3 mililitru benzoylchloridu a tento roztok byl potom opět promícháván po dobu dalších 5 hodin. Tímto způsobem byl:získán pevný produkt, který byl odfiltrován a získaný filtrát byl odpařen do sucha. Tím vznikl zbytek, který byl vložen do ethanolu a dále bylo přidáno 0,4 gramu kyseliny octové, přičemž takto připravená směs-byla promíchávána při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny. Získaná směs byla potom odpařena do sucha a získaný zbytek byl potom eluován v koloně naplněné silikagelem, přičemž jako elučního činidla bylo použito směsi Cí^C^/MeOH v poměru 9 : 1. Po několika rekrystalizacích z vodného roztoku ethanolu bylo získáno 0,14 gramu požadovaného produktu, což odpovídá výtěžku postupu 25 %. Teplota tání produktu se pohybovala v rozmezí od 137 do 140 °C.

Analýza CHN: vypočtenb pro ^ci9^Hig^N2^6 ' ^{0,2 Η}2θ

60,96 % C, 4,920 h H, 7,489 % N;

nalezeno 60,69 % C, 4,681 % H, 7,478 % N,

Příklad 5

Příprava 2’-deoxy-5-ethinyl-3-N-(p-toluoyl)uridinu

Podle tohoto příkladu provedení byl k míchané suspenzi, která obsahovala 2-deoxy-5-ethinyluridin (viz J. Med. Chem., 26 (5), 661-6, 1983), v množství 0,4 gramu, což odpovídá 1,6 mmolu, v suchém acetonitrilu v množství 15 mililitrů a chlortrimethylsilanu v množství 0,7 mililitru, což odpovídá 5,6 mmolu, přidán za chlazení na ledové lázni triethylamin v množství 1,13 mililitru, což odpovídalo 8,1 mmolu, přičemž míchání bylo prováděno při teplotě místnosti po dobu 2,5 hodiny. Potom byl do této směsi přidán toluoylchlorid v množství 0,3 mililitru, což odpovídá 2,1 mmolu, a v míchání bylo pokračováno po dobu dalších 7 hodin, přičemž potom byla směs odfiltrována, získaný filtrát byl odpařen do sucha a získaný zbytek byl rozpuštěn v ethanolu v množství 20 mililitrů. Potom byla do to-, hoto roztoku přidána ledová kyselina octová a míchání bylo prováděno po dobu 0,5 hodiny při teplotě místnosti^ přičemž potom bylo použité rozpouštědlo odpařeno a zbytkový podíl kyseliny octové byl současně odpařován s ethanolem. Získaný produkt byl přečištěn chromatografickým postupem v silné vrstvě, přičemž jako náplně bylo použito oxidu křemičitého a jako elučního činidla bylo použito methanolu a methylenchloridu v poměru 1 24. Získaný produkt byl potom přečištěn rekrystalizací z methanolu, přičemž títmo postupem byla získána požadovaná sloučenina uvedená v záhlaví tohoto příkladu v množství 0,03 gramu. Teplota tání tohoto produktu se pohybovala v rozmezí od 176 do 179 °C.

Analýza CHN pro Ο^Η^^Ο^ . 0,2 EtOH vypočteno 61,37 % C, 5,08 % H, 7,36 % N; nalezeno 60,92 % C, 4,87 % H, 7,40 % N.

V následujících příkladech jsou ilustrovány příklady farmaceutických prostředků podle uvedeného vynálezu, které obsahují jako účinnou látku sloučeninu obecného vzorce IB.

CS 275402 B 6

Příklad A

Tableta

Účinná látka	100	miligramů
laktoza	200	miligramů
škrob	50	miligramů
polyvinylpyrrolidon	5	miligramů
stearát hořečnatý	4	miligramy
celkem	359	miligramů

Tyto tablety se připraví z výše uvedených složek granulováním za vlhka, přičemž potom následuje vytlačování těchto tablet.

Příklad B

Oční roztok

Účinná látka 0,5 gramu chlorid sodný (analytická čistota) 0,9 gramu

Thiomersal 0,001 gramu vyčištěná voda, doplněk do 100 mililitrů hodnota pH upravena 7,5

Příklad C

Směsi pro tablety

Z následujících směsí A a B byly tablety připraveny granulováním za vlhka, přičemž uvedené složky byly granulovány s roztokem povidonu (což je l-ethenyl-2-pyrrolidinonový polymer) a potom následoval přídavek stearátu hořečnatého a stlačování na tablety.

Směs A:

	mg/tabletu	mg/tabletu
a) účinná látka	250	250
b) laktoza B.P.	210	26
c) povidon B.P.⁺	15	9
d) škrobový glykolát sodný	20	12
e) stearát hořečnatý	5	3
celkem	500	300
Směs B: .
	mg/tabletu	mg/tabletu
a) účinná látka	250	250
b) laktoza	150	-
c) Avicel PH 101⁺⁺	60	26
d) povidon B.P.⁺	15	9
e) škrobový gylkolát-sodný	20	12
f) stearát hořečnatý ·	5	3
celkem	500	300

⁺l-ethenyl-2-pyrrolidinonový polymer ⁺⁺mikrokrystalická forma celulózy . (C^H^O^^, což je polysacharid tvořený glukozovými jednotkami

Směs C :

účinná látka laktoza škrob povidon⁺ stearát hořečnatý celkem

CS 275402 B 6 mg/tabletu

100

200

359 viz výše uvedené směsi A a B.

Z následujících směsí D a £ složek,. Laktoza použitá pro směs byly tabelty připraveny přímým stlačováním promíchaných E je výrobkem pro přímé stalčování..

Směs 0:

mg/kapsli účinná látka 250 předem želatinizovaný škrob NF15 150 celkem 400

Směs E:

mg/kapsli účinná látka 250 laktoza 150 Avicel PH 101⁺ 100 celkem 500 ⁺viz směs B

Směs F:

(směs pro přípravu prostředku s kontrolovaným uvolňováním účinné látky)

Tento prostředek byl připraven granulováním složek uvedených níže za vlhka s roztokem povidonu, přičemž potom následoval přídavek stearátu horečnatého a stlačování.

mg/tabletu

a) účinná látka 500

b) hydroxypropylmethylceluloza (Methocel K4M Prémium) 112

c) laktoza B.P. 53

d) povidon B.P.C.⁺ 28

e) stearát hořečnatý 7 celkem 700 ⁺viz směs A a B

V tomto případě nastane uvolňování účinné látky v intervalu asi 6 až 8 hodin a k úplnému uvolnění dojde po 12 hodinách.

Příklad 0

Prostředky ve formě kapslí

CS 275402 B 6 .Směs A:

Prostředek ve formě kapsle byl připraven podle tohoto provedení smícháním složek, které tvoří směs D ve shora uvedeném přikladu C, přičemž touto směsí byla naplněna dvoudílná tvrdá želatinová kapsle. Prostředek ze směsi B (viz níže)byl připraven podobným způsobem.

Směs 8:

	mg/kapsli
a) účinná látka	250
b) laktoza 8. P.	143
c) škrobový glykolát sodný	25
d) stearát hořečnatý	2
celkem	420
Směs C:	mg/kapsli
a) účinná látka	250
b) Macrogol 4 000 BP⁺	350
celkem	600

⁺polyethylenglykol 4 000 HÍOCI^CI^lnOH, kde n = 68 - 84

Podle tohoto provedení byly kapsle připraveny roztavením Macrogolu 4 000 BP (což je výše uvedený polyethylenglykol), přičemž potom byla účinná látka dispergována do této taveniny a touto taveninou byla naplněna dvoudílná tvrdá želatinová kapsle.

Směs 0:

účinná látka lecithin podzemnicový olej celkem mg/kapsli

250

100

450

Kapsle podle tohoto provedení byly připraveny dispergováním účinné složky v lecithiňu a podzemnicovém oleji a naplněním této disperze do měkkých, elastických, želatinových kapslí.

Směs E :

(směs pro přípravu kapslí s kontrolovaným uvolňováním účinné látky)

Podle tohoto provedení byly připraveny kapsle s kontrolovaným uvolňováním účinné látky, přičemž se postupovalo tak, že složky a), b) a c) byly vytlačovány za pomoci extrudéru, přičemž potom následovala sferoidizace vytlačovaného produktu a sušení. Takto usušené pelety byly potom povlečeny membránou d) pomocí které se dosahuje kontrolovaného uvolňování účinné látky, přičemž tyto pelety se potom naplnily do dvoudílné tvrdé želatinové kapsle.

	mg/kapsli
a) účinná látka	250
b) mikrokrystalická celulóza	125
c) laktoza 8P	125
d) ethylceluloza	13
celkem	513

CS 275402 B 6

Příklad E

Prostředek pro vstřikování injekcí

Účinná látka sterilní fosfátový tlumící roztok neobsahující pyrogen (pH 7,0)

0,2000 gramu mililitrů

Podle tohoto provedení se účinná látka rozpustila ve větší části fosfátového tlumícího roztoku (při teplotě v rozmezí od 35 do 40 °C) potom se doplnil objem na uvedenou hodnotu a roztok se zfiltroval za pomoci sterilního mikroporézního filtru a naplnil do 10 niililitrových lahviček pro chemikálie z tmavého skla (typ 1) a tyto lahvičky se zapečetily sterilními uzávěry a opatřili vnějším Zapečetěním.

Příklad F

Intramuskulární injekce

Účinná látka	0,20	gramu
benzylalkohol	0,10	gramu
Glukofurol 75⁺ '	1,45	gramu
voda pro injekce, doplněk do	3,00	mililitrů

⁺ c4- [(tetrahydro-2-furanyl)methylj-Λ -hydroxy-poly-íoxy-l^-ethandiylltj^H^OjnCtjHic^

Podle tohoto provedení byla účinná látka rozpuštěna v Glykofurolu 75 (což je výše uvedená látka). Potom hyl přidán benzylalkohol, který byl rozpuštěn v této směsi a nakonec byla přidána voda jako doplněk do celkového objemu 3 mililitry. Tato směs byla potom zfiltrována za použití sterilního mikroporézního filtru a zapečetěna do sterilních skleněných lahviček pro chemikálie o objemu 3 mililitry (typ 1).

Příklad G

Suspenze pro sirup

Účinná látka	0,2500	gramu
roztok sorbitu	1,5000	gramu
glycerín	2,0000	gramy
dispergovatelné celulóza	0,0750	gramu
benzoát sodný	0,0050	gramu
příchuí a aromatizačni činidlo,
broskev 17.42-3169	0,0125	mililitru
vyčištěná.voda, doplněk do	5,0000	mililitrů

Podle tohoto provedení byl benzoát sodný rozpuštěn v části vyčištěné vody a potom byl přidán roztok sorbitu. Potom byla přidána účinná látka a tato látka byla v roztoku dispergována. V glycerínu bylo dispergováno zahušiovadlo (tzn. dispergovatelné celulóza). Tyto dvě disperze byly smíchány a objem byl upraven na požadovanou uvedenou hodnotu, přičemž tento objem byl upraven vyčištěnou vodou. Oalši zahušíování je možno provádět podle potřeby dodatečným střihovým zpracováním této suspenze.

Příklad H

Čípky .

Účinná látka (63 /um)⁺ 250 mg/čípek tvrdý tuk, 0P (Witepsol H 15Oynamit Nobel) 1 mg/čípek celkem 2 020 mg/čípek ⁺účinná látka byla použita ve formě prášku, u kterého přinejmenším 90 % částim mělo průměr 63 yum nebo menší:

CS 275402 8 6.

Podle tohoto provedení byla jedna pětina uvedeného tuku Witepsol H15 roztavena v nádobě opatřené pláštěm, který je vyhříván parou, při teplotě maximálně 45 °C. Potom byla účinná látka proseta za použití síta s oky 200 yum a prosetý podíl byl přidán do roztaveného podílu za míchání, přičemž bylo použito míchacího zařízení s řezací hlavou, a míchání bylo prováděno tak dlouho, dokud nebyla získána hladká disperze. Potom byla tato směs udržována na teplotě 45 °C, potom byl přidán zbývající podíl tuku Witepsol H15 k uvedené suspenzi a tato směs byla promíchávána tak dlouho, dokud nebyl získán homogenní produkt. Celý podíl této suspenze byl potom protlačován korozivzdorným ocelovým sítem s' velikostí od 250 yum a potom byl tento materiál za kontinuálního promíchávání ponechán ochladit na teplotu 40 °C. Potom byly při teplotě v rozmezí od 38 do 40 °C 2,02 gramové-podíly této směsi plněny do vhodných plastikových forem. Tyto čípky byly potom ponechány ochladit při teplotě místnosti.

Příklad 1

Pesary mg/pesar účinná látka (63 yum) 250 anhydrátová dextroza 380 bramborový škrob 363 stearát hořečnatý 7 celkem 1 000

Podle tohoto provedení byly výše uvedené složky přímo smíchány, přičemž pesary byly připraveny přímým vytlačováním této výsledné směsi. .

Testy na protivirovou účinnost, a na toxicitu

Při provádění těchto testů byl cytomegalovirus (HCMV) vyskytující se u lidí testován na monovrstvách buďto buněk MRC5 (embyronální plicní vzorky lidí) nebo na monovrstvách buněk Oetroit 532 (lidský předkožkový fibroblast), které byly' umístěny na vícejímkové plato. Účinnost sloučenin byla zjišiována pomocí testu na zmenšování skvrn, při kterém byla monovrstva buněk infikována suspenzí HCMV a potom bylo provedeno převrstvení výživnou agarozou ve formě gelu, přičemž účelem tohoto opatření bylo aby se virus nerozšiřoval uvedenou kulturou. Do výživné agarozové vrstvy byla aplikována účinná látka ve formě řady různých koncentrací této sloučeniny o známé molaritě. Počet skvrn u každé koncentrace byl vyjádřen jako procento vzhledem ke kontrolnímu vzorku a potom byla sestrojena křivka odezvy na jednotlivé dávky. Z této křivky byla odhadnuta hodnota 50%ní inhibiční koncentrace, tj..hodnota IC^g.

Virus planých neštovic (VZV) byl testován na buňkách MRC5, přičemž bylo použito podobné metody jako u viru HCMV, ale na rozdíl od tohoto postupu nebylo použito převrstvení agarozou.

Dále byl prováděn test, při kterém byly buňky produkující virus (P3HR-1) vystaveny účinku léčivé látky· po dobu 14 dní, přičemž po tomto časovém intervalu byl zjištěn počet genomových kopií Epstein-Barrova viru (EBV) na buňku za použití specifické hybridizace c-RNA-DNA. Epstein-Barrův virus byl testován metodou podle Nonoyama a Pagana, která je uvedena v Nátuře: New Biology Vol. 233, str. 103-4, (1971). Hodnota která je uváděna jako výsledná hodnota tohoto postupu, vyjadřuje koncentraci, která je nezbytná k inhibování genomu Epstein-Barrova viru u jedné buňky o 50 %.

Toxicita u buněk byla testována pomocí testu na inhibování růstu buněk. Při provádění tohoto testu byly subkonfluentní kultury Vero-buněk, které byly pěstovány v 96-jímkových mikrotitračních miskách, vystaveny působení různých roztoků s různými koncentracemi

CS 275402 0 6 účinné látky, přičemž životaschopnost těchto buněk byla zjišíována denně u zdvojených kultur na základě absorpce tetrazoliového barviva (MTT). Výsledky byly uvedeny v hodnotách CCIDjg, přičemž tyto hodnoty vyjadřují koncentraci, která je potřebná k 50%nímu inhibování životaschopnosti buněk po 96 hodinách.

Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.

Tabulka

Příklad	^50 /Um) VZV	^50 /Uíii) HCM	CCI0_5Q (yum) po 96 hodinách	IC_5Q (yum) EBV
2		3,3	>20	>300	-
4		2,2	28,5	>500	-

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

Způsob přípravy pyrimidinových nukleosidů obecného vzorce IB ve kterém znamená

X ethinylenovou skupinu,

R¹ představuje iminovou skupinu,

R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 2 atomy uhlíku nebo rozvětvenou nebo cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až .4 atomy uhlíku, jako například isopropylová skupina nebo/ cyklopropylová skupina, znamená atom vodíku nebo acylovou skupinu, jako například alkanoylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu, které jsou popřípadě substitovány, například jedním nebo více atomy halogenu, alkylovými skupinami, hydroxyskupinou nebo alkoxy skupinami, a

CS 275402 8 ó

A

R znamená atom vodíku nebo hydroxy skupinu, s výjimkou sloučenin, kdy:

v případě, že substituent je iminová skupina, substituentem R⁵4 je atom vodíku a substituentem R je atom vodíku, nebo hydroxy 2 skupina, potom skupina -X-R neznamená ethinylovou skupinu, nebo farmaceuticky přijatelných derivátů odvozených od těchto pyrimidinových nukleosidů, vyznačující se tím, že se do reakce uvádí sloučenina obecného vzorce V ve- kterém znamená vhodnou odštěpítelnou skupinu, kterou je heterocyklylová skupina, jako například 1,2,4-triazolylová skupina, činidlem, to reakcí

M a M každý představují chránící skupinu hydroxy skupiny,

R^A je vodík nebo chránící skupina hydroxy skupiny, a 2

X a R mají již shora uvedený význam, při teplotě okolí s amoniakálním které nahradí skupinu Q aminovou skupinou, a po této reakci nebo současně s touše popřípadě provede jeden nebo oba následující stupně v libovolném pořadí:

- odstranění veškerých zbývajících chránících skupin,

- v případě, že výslednou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce IB, potom se tato sloučenina převede na farmaceuticky přijatelný derivát této sloučeniny, nebo v případě, kdy je výslednou sloučeninou farmaceuticky přijatelný derivát, převede se tento derivát na >

jiný farmaceutický přijatelný derivát nebo na sloučeninu obecného vzorce IB.