SK279542B6 - U - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka nového použitia l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiolán-5-yl]-5-fluórcytozínu a jeho fyziologicky funkčných derivátov.

Doterajší stav techniky

Vírus hepatitídy B (HBV) je vírusovýpatogén, ktorý je veľmi dôležitý z celosvetového hľadiska. HBV je najbežnejší v ázijských krajinách a je veľmi rozšírený v subsaharskej Afrike. Vírus je etiologicky spojený s primárnym hepatocelulámym karcinómom a predpokladá sa, že je príčinou 80 % rakoviny pečene v celosvetovom meradle. V Spojených štátoch amerických je viac ako 10 000 ľudí každý rok hospitalizovaných s chorobami spôsobenými HBV a priemerne 250 zomiera na fulminantný priebeh ochorenia. V Spojených štátoch amerických je priebežne odhadovaný počet 500 000 až 1 000 000 infikovaných bacilonosičov. Chronicky aktívna hepatitída sa vyvinie u viac ako 25 % bacilonosičov a často smeruje k cirhóze. Odhaduje sa, že každý rok v USA zomiera 5 000 ľudí na cirhózu vyvolanú HBV a že snáď 1 000 úmrtí je spôsobené rakovinou pečene súvisiacou s HBV. I keď je k dispozícii univerzálna HBV vakcína, trvá potreba získať účinné zlúčeniny, ktoré pôsobia proti HBV. Vysoký počet trvalo infikovaných bacilonosičov, odhadovaný na celom svete na 220 miliónov, sa nepodrobuje výhodnej vakcinácii a trvá vysoké riziko choroby pečene, vyvolané HBV. Populácia týchto bacilonosičov slúži ako zdroj infekcie citlivých jedincov, čo spôsobuje opakujúcu sa situáciu prepuknutia chorôb, obzvlášť v endemických oblastiach alebo u vysoko rizikových skupín, ako jednotlivcov intravenózne zneužívajúcich drogy alebo homosexuálov. Takto pretrváva vysoká potreba účinných protivírusových prípravkov použiteľných tak na potlačovanie chronickej infekcie, ako aj na zníženie vývoja hepatocelulámeho karcinómu.

Klinické účinky infekcie vyvolané HBV sú v rozsahu od bolesti hlavy, horúčky, pocitov nepokoja, nútenia na zvracanie, zvracania, nechutenstva a bolestí brucha. Replikácia vírusu u človeka sa obvykle sleduje podľa imúnnej odozvy v priebehu rekonvalescencie trvajúcej týždne alebo mesiace, ale infekcia môže byť oveľa závažnejšia a môže viesť k úpornému chronickému ochoreniu pečene, ako je naznačené. Vo Viral Infections of Humans (2. vydanie, vyd. A. S. Evans (1982), Plénum Publishing Corporation, New York) je v kapitole 12 opísaná etiológia infekcií spôsobených vírusom hepatitídy. Európsky patentový spis č. 0 382 526 uvádza určité 1,3-oxatiolanové nukleozidové analógy, ktoré sú účinnými inhibítormi replikácie vírusu ľudskej imunitnej nedostatočnosti (HIV).

Podstata vynálezu

Pôvodcovia tohto vynálezu teraz s prekvapením zistili, že l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiolán-5-yl]-cytozínový derivát vzorca (I)

a jeho fyziologicky funkčné deriváty majú silný účinok proti vírusu hepatitídy B (HBV).

Podstatou vynálezu je použitie l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiolán-5-yl]-5-fluórcytozinu vzorca (I) alebo jeho fyziologicky funkčného derivátu na výrobu farmaceutického prostriedku na ošetrovanie alebo profylaxiu infekcie, spôsobenej vírom hepatídy B.

Zlúčenina vzorca (I) obsahuje dva chirálne stredy, a preto môže byť vo forme dvoch párov optických izomérov (to znamená enantiomérov) alebo ich zmesí vrátane racemickej zmesi. Tak zlúčenina vzorca (I) môže byť alebo cis-izomér alebo trans-izomér, alebo môže byť tvorená ich zmesou. Každý cis- alebo trans-izomér sa môže vyskytovať ako jeden z dvoch enantiomérov alebo ako ich zmes vrátane zmesi racemickej. Všetky takéto izoméry a ich zmesi, zahŕňajúce tiež racemické zmesi a tautoméme formy zlúčeniny vzorca (I) spadajú do rozsahu vynálezu. cis-Izoméry zlúčeniny vzorca (I) sú výhodné.

Vynález sa teda týka použitia zlúčeniny vzorca (I), zvlášť vo forme cis-izoméru alebo jej fyziologicky funkčného derivátu, ako vo forme soli alebo esteru na výrobu farmaceutického prostriedku na ošetrovanie alebo profylaxiu infekcií spôsobených vírusom hepatitídy B. Takýto farmaceutický prostriedok je vhodný na ošetrovanie alebo profylaxiu infekcií spôsobených vírusom hepatitídy B u hostiteľa, napríklad cicavca, ako je človek, pričom sa podáva vždy účinné množstvom zlúčeniny vzorca (I) alebo jej fyziologicky funkčného derivátu.

Výrazom fyziologicky funkčný derivát sa rozumie farmaceutický prijateľná soľ, amid, ester alebo soľ esteru zlúčeniny vzorca (I) alebo akákoľvek iná zlúčenina, ktorá po podaní príjemcovi (pacientovi) je schopná poskytnúť (priamo alebo nepriamo) túto zlúčeninu vzorca I alebo jej aktívny metabolit alebo zvyšok odvodený od tejto zlúčeniny.

Medzi výhodné estery podľa tohto vynálezu sa zahrnujú estery karboxylových kyselín, v ktorýchnekarbonylový zvyšok časti karboxylovej kyseliny, ktorý tvorí esterové zoskupenie, je zvolený z priamych alebo rozvetvených alkylových reťazcov, napríklad n-propylu, terc.-butylu alebo n-butylu, alkoxyalkylovej skupiny (napríklad metoxymetylu), aralkylovej skupiny (napríklad benzylu), aryloxyalkylovej skupiny (napríklad fenoxymetylu) a arylovej skupiny (napríklad fenylu), sulfonátových esterov, ako alkylsulfonylu alebo aralkylsulfonylu (napríklad metánsulfonylu), esterov aminokyselín (napríklad L-valylu alebo L-izoleucínu), esterov dikarboxylových kyselín (napríklad hemisukcinátu) a 5-, mono, di- alebo trifosfátových esterov. Fosfátové estery môžu byť ďalej esterifikované, napríklad alkoholom s 1 až 20 atómami uhlíka alebo jeho reaktívnym derivátom, alebo 2,3-diacylglycerolom s 6 až 24 atómami uhlíka v acylovej časti. Ľubovoľná alkylová časť prítomná v takýchto esteroch výhodne obsahuje 1 až 18 atómov uhlíka, predovšetkým 1 až 4 atómy uhlíka. Akákoľvek arylová časť prítomná v takýchto esteroch výhodne obsahuje fe

SK 279542 Β6 nylovú skupinu, ktorá je pripadne substituovaná, napríklad atómom halogénu, alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka alkoxyskupinou s 1 až 4 atómami uhlíka alebo nitro skupinou.

Uvedené farmaceutický prijateľné amidy zlúčeniny vzorca (I) zahrnujú deriváty, v ktorých aminoskupina cytozínu je prítomná vo forme amidu, napríklad ako skupina vzorca -NHCOR, kde R predstavuje alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo arylovú skupinu (napríklad fenylovú skupinu, ktorá je prípadne substituovaná atómom halogénu, alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinou s 1 až 4 atómami uhlíka, nitroskupinou alebo hydroxyskupinou).

Príklady farmaceutický prijateľných solí zahrnujú základné soli, napríklad odvodené od príslušnej bázy, ako soli alkalických kovov (napríklad sodné), kovov alkalických zemín (napríklad horečnaté), soli amónne alebo obsahujúce NX4⁺ (kde X znamená alkylovú skupinu a 1 až 4 atómami uhlíka). Farmaceutický prijateľné adičné soli s kyselinami zahrnujú soli organických karboxylových kyselín, ako je kyselina octová, kyselina mliečna, kyselina vínna, kyselina jablčná, kyselina izetionová (2-hydroxyetánsulfónová), kyselina laktobionová a kyselina jantárová, organických sulfóno vých kyselín, ako je kyselina metánsulfónová, kyselina etánsulfónová, kyselina benzénsulfónová a kyselina p-toluénsulfónová a anorganických kyselín, ako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a kyselina sulfamová.

Množstvo zlúčeniny vzorca (1) (ďalej tiež označované ako účinná zložka) alebo jej fyziologicky funkčného derivátu, ktoré je potrebné v liečive na dosiahnutie požadovaného účinku, bude závisieť od radu okolností, obzvlášť od špecifického použitia, povahy použitej špeciálnej zlúčeniny, spôsobu podania a stavu pacienta. Všeobecne vhodná dávka bude v rozmedzí od 3 do 120 mg na kilogram telesnej hmotnosti príjemcu za deň, výhodne v rozmedzí od 6 do 90 mg na kilogram telesnej hmotnosti príjemcu za deň, predovšetkým výhodne v rozmedzí od 15 do 60 mg na kilogram telesnej hmotnosti príjemcu za deň. Požadovaná dávka sa výhodne predkladá ako dve, tri, štyri, päť alebo šesť čiastkových dávok podávaných vo vhodných intervaloch v priebehu dňa. Tieto čiastkové dávky sa môžu podávať vo forme dávkovej jednotky, napríklad obsahujúcej od 10 do 1500 mg, výhodne od 20 do 1000 mg a najvýhodnejšie od 50 do 700 mg účinných zložiek na formu dávkovej jednotky.

V ideálnom prípade by sa účinná zložka mala podávať tak, aby sa dosiahli vrcholné koncentrácie účinnej zložky v plazme od približne 1 do asi 75 μΜ, výhodne od približne 2 do 50 μΜ a predovšetkým výhodne od približne 3 do asi 30 μΜ. Toto sa dá dosiahnuť napríklad intravenóznymi injekciami 0,1 až 5 % roztoku účinnej látky, prípadne vo fyziologickom roztoku, alebo perorálnym podaním vo forme bolusu, ktoré obsahuje od približne 1 do asi 100 mg/kg účinnej zložky. Požadovaná hladina v krvi sa môže udržiavať nepretržitou infúziou, ktorá poskytuje od približne 0,01 do asi 5,0 mg/kg účinnej zložky za hodinu alebo prerušovanou infúziou, obsahujúcou od približne 0,4 do asi 15 mg/kg účinnej zložky.

Pri výrobe farmaceutického prostriedku podľa tohto vynálezu, ďalej označovaného ako prostriedok, sa zlúčenina vzorca (I) alebo jej fyziologicky funkčný derivát ako účinná látka obvykle zmieša okrem iného s jednou alebo väčším počtom fyziologicky prijateľných nosných alebo pomocných látok a prípadne s inými terapeuticky účinnými prípravkami.

Prostriedky zahrnujú také prostriedky, ktoré sú vhodné na perorálne, rektálne, nasálne, lokálne (vrátane transdermálneho, bukálneho a sublinguálneho), vaginálne alebo parenterálne (vrátane subkutánneho, intramuskulámeho, intravenózneho a intradermálneho) podania. Prostriedky môžu byf obyčajne prítomné vo forme komplexnej dávky a môžu sa vyrábať ľubovoľnými spôsobmi, ktoré sú dobre známe v odbore farmácie. Takéto spôsoby zahrnujú stupeň uvedenia účinných látok do styku s nosnými látkami, ktoré pozostávajú z jedného alebo väčšieho počtu vedľajších zložiek. Zo všeobecného hľadiska sa prostriedky môžu vyrábať rovnomerným a dôkladným uvedením účinných látok do styku s kvapalnými nosnými látkami alebo jemne rozomletými pevnými nosnými látkami, prípadne s obidvoma týmito typmi nosných látok a potom, ak je to potrebné, tvarovaním produktu.

Prostriedky podľa tohto vynálezu, vhodné na perorálne podanie, môžu byť prítomné ako oddelené jednotky, ako napríklad kapsuly, tobolky alebo tablety, z ktorých každá obsahuje vopred stanovené množstvo účinných látok, ako prášky alebo granuly, ako roztoky alebo suspenzie vo vodnej alebo nevodnej kvapaline alebo ako kvapalné emulzie typu olej vo vode alebo voda v oleji. Účinná zložka môže byť tiež prítomná vo forme bolusu, lieku so sirupom alebo pasty.

Tablety sa môžu zhotovovať lisovaním alebo odlievaním, prípadne s jednou alebo s väčším počtom vedľajších zložiek. Lisované tablety sa môžu vyrábať vo vhodnom prístroji lisovaním účinnej látky vo voľne tečúcej forme, ako prášku alebo granúl, ktoré sú prípadne zmiešané so spojivom (napríklad povidonom, želatínou, hydroxypropylmetylcelulózou), mazivom, inertným riedidlom, konzervačnou látkou, látkou napomáhajúcou štiepenie (napríklad nátriumglykolátom škrobu, zosieťovaným povidonom alebo zosieťovanou nátriumkarboxy-metylcelulózou), povrchovo aktívnou látkou alebo činidlom napomáhajúcim dispergovanie. Odlievané tablety sa môžu vyrábať na vhodnom stroji zo zmesi práškových účinných látok zvlhčených inertným kvapalným riedidlom. Tablety sa môžu pripadne poťahovať alebo opatriť zárezom a môžu sa pripravovať tak, aby sa dosiahlo pomalé alebo riadené uvoľňovanie účinných látok pri ich použití, napríklad zavedením hydroxypropylmetylcelulózy v meniacich sa pomeroch na získanie požadovaného profdu uvoľňovania. Tablety sa môžu prípadne opatriť enterickým poťahom, aby sa dosiahlo uvoľňovanie v inej časti črevného traktu ako žalúdok.

Prostriedky vhodné na perorálne použitie opísané môžu tiež obsahovať tlmivý roztok určený na neutralizáciu kyslosti žalúdka. Takéto tlmivé roztoky môžu byť vybrané spomedzi rôznych organických alebo anorganických činidiel, ako sú slabé kyseliny alebo zásady, v zmesi so svojimi konjugovanými soľami.

Prostriedky vhodné na lokálne podanie do úst zahrnujú pastilky, obsahujúce účinné zložky vo vhodnej báze, obyčajne v sacharóze a akáciu alebo kozinec, pastäky, ktoré obsahujú účinnú látku a inertnú bázu, ako je želatína alebo glycerín, alebo sacharóza a akácia a ústne vody, ktoré obsahujú účinnú látku vo vhodnej kvapalnej nosnej látky.

SK 279542 Β6

Prostriedky na rektálne podávanie môžu byť prítomné ako čipky, ktoré napríklad obsahujú kakaové maslo alebo salicylát.

Prostriedky vhodné na vaginálne podávanie môžu byť prítomné ako pesary, tampóny, krémy, želé, pasty, peny alebo sprejové formulácie, ktoré obsahujú okrem účinných látok látky nosné, o ktorých je v odbore známe, že sú vhodné na tento účel.

Prostriedky vhodné na parenterálne podávanie zahrnujú vodné a nevodné izotonické sterilné injekčné roztoky, ktoré môžu napríklad obsahovať antioxidačné činidlá, puťry, bakteriostatické prípravky a rozpustené látky, pomocou ktorých sa dosahuje izotonicky stav krvi zamýšľaného príjemcu a vodné a nevodné sterilné suspenzie, ktoré môžu obsahovať napríklad suspendačné činidlá a zahusťovadlá a lipozómy alebo inc mŕkropartikuláme systémy, ktoré sú navrhnuté na dosiahnutie toho, že sa zlúčenina stane zložkou krvi alebo sa dostane k jednému alebo väčšiemu počtu orgánov. Prostriedky môžu byť prítomné v zásobníkoch na jedinú dávku alebo na väčší počet dávok, napríklad v uzatvorených ampulkách alebo fľaštičkách a môžu sa skladovať za lyofilných podmienok (dosiahnutých vymrazovaním) vyžadujúcich iba prídavok sterilnej kvapalnej nosnej látky, napríklad vody na injekcie, bezprostredne pred použitím. Extemporálne injekčné roztoky a suspenzie sa môžu vyrábať zo sterilných práškov, granúl a tabliet opísaných druhov.

Výhodné prostriedky tvorené dávkovou jednotkou sú prostriedky, ktoré obsahujú dennú dávku alebo dennú čiastkovú dávku účinných zložiek, ako je opísané, alebo jej príslušnú časť.

Rozumie sa, že okrem zložiek uvedených, prostriedky podľa tohto vynálezu môžu zahrňovať tiež iné látky bežné v odbore, s ohľadom na typ príslušného prostriedku. Napríklad prostriedky vhodné na perorálne podávanie môžu zahrňovať ďalšie látky, ako sú sladidlá, zahusťovadlá a aromatické činidlá (esencie).

Zlúčenina vzorca (1) sa môže vyrobiť napríklad tým, že a) prípadne chránená 5-fluórcytozínová zlúčenina sa nechá reagovať s 1,3-oxatiolánom všeobecného vzorca (ΠΑ)

v ktorom

R1 znamená atóm vodíka alebo skupinu chrániacu hydroxyskupinu a

L predstavuje odštiepiteľnú skupinu, alebo

b) zlúčenina všeobecného vzorca (HB)

v ktorom

RÍ má význam uvedený a

Ria predstavuje skupinu chrániacu aminoskupinu, sa nechá reagovať s fluoračným činidlom slúžiacim na zavedenie atómu fluóru do polohy 5 cytozínového kruhu, alebo

c) zlúčenina všeobecného vzorca (HC)

R¹ má význam uvedený, sa nechá reagovať s činidlom slúžiacim na premenu oxoskupiny v polohe 4 uracilového kruhu na aminoskupinu a ľubovoľné chrániace skupiny sa odstránia napríklad hydrolýzou za kyslých alebo bázických podmienok, za vzniku požadovanej zlúčeniny.

S ohľadom na spôsob a), skupina chrániaca hydroxyskupinu zahrnuje chrániace skupiny, ako je acyl (napríklad acetyl), arylacyl (napríklad benzoyl alebo substituovaný benzoyl), trityl alebo monometoxytrityl, benzyl alebo substituovaný benzyl, trialkylsilyl (napríklad dimetyl-terc.-butylsilyl) alebo difenylmetylsilyl. 5-R-cytozínová zlúčenina môže byť prípadne chránená silylom, napríklad trimetylsilylovými skupinami. Takéto skupiny sa môžu odstrániť zvyčajným spôsobom. Odštiepiteľná skupina L je odštiepujúca sa skupina typu známeho v odbore chémie nukleozidov, napríklad halogén, ako atóm chlóru alebo atóm fluóru, alkoxyskupina, ako metoxyskupina alebo etoxyskupina alebo acyl, ako je acetyl alebo benzoyl.

Reakcia pri spôsobe b) sa môže uskutočňovať v organickom rozpúšťadle (napríklad 17-dichlóretáne alebo acetonitrile) v prítomnosti Lewisovej kyseliny, ako je chlorid ciničitý alebo trimetylsilyltriflát.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (HA) sa môžu získať z vhodne chráneného 2-hydroxyacetaldehydu všeobecného vzorca (III)

R1OCH2CHO (ΙΠ), v ktorom

R1 má význam uvedený, ako je opísané vCan. J. Research, 8, 129 (1933) a v Európskom patentovom spise č. 0 382 526. Reakcia zlúčenín všeobecného vzorca (ΙΠ) s merkaptoacetálom všeobecného vzorca

HSCH2CH(OR)2, v ktorom

R znamená alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, ako so zlúčeninou vzorca

HSCH2CH(OC2H5)2, známa v odbore (Chem. Ber. 85, 924 až 932 (1952)), poskytne zlúčeniny všeobecného vzorca (ΠΑ), v ktorom L predstavuje skupinu vzorca OR (alkoxy-skupinu), napríklad metoxyskupinu alebo etoxyskupinu. Podľa iného uskutočnenia sa zlúčeniny všeobecného vzorca (ΠΑ), v ktorom L znamená alkoxyskupinu, môžu previesť na zlúčeniny všeobecného vzorca (HA), v ktorom L znamená atóm halogénu alebo acylovú skupinu, spôsobmi známymi v odbore chémie cukrov.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (IH) sa môžu vyrobiť z

I, 2-O-izo-propylidénglycerolu zavedením substituenta Rl (napríklad trisubstituovaného silylu, benzylu alebo tritylu) a odstránením izopropylidénovej skupiny pôsobením miernej kyseliny (napríklad kyseliny mravčej alebo kyseliny octovej) alebo bromidu zinočnatého v acetonitrile a následnou oxidáciou alkoholového zvyšku s vodným roztokom jodistanu.

Podľa spôsobu b) sa fluór ako substituent polohy 5 môže zaviesť spôsobmi známymi v odbore (M. J. Robin a kol. v Nucleic Acid Chemistry, časť 2, L. B. Towsend a R. S. Tipson, vyd. J. Wíley and Sons, New York, str. 895 až 900 (1978) a odkazy tam uvedené, R. Duschinsky v Nucleic Acid Chemistry, časť 1, L. B. Townsend a R. S: Tipson, vyd.

J. Wíley a Sons, New York, str. 43 až 46 (1978) a odkazy tam uvedené. Fluoračným činidlom môže byť napríklad trimetylhypofluorit v fluórtrichlórmetáne.

S ohľadom na spôsob c) sa uvádza, že sa zlúčenina všeobecného vzorca (IIC) výhodne spracuje s 1,2,4-triazolom, výhodne spolu s 4-chlórfenyldichlór-fosfátom, za vzniku zodpovedajúcej 4-(1,2,4-triazolylovej) zlúčeniny, ktorá sa potom prevedie na požadovanú 4-amino(cytidínovú) zlúčeninu reakciou napríklad s metanolom

Východiskové zlúčeniny všeobecného vzorca (ΠΒ) a (AC) sa môžu vyrobiť napríklad reakciou vhodnej (prípadne chránenej) bázy so zlúčeninou všeobecného vzorca (IIA) analogickým spôsobom, ako je opísaný pod spôsobom a). 5-Fluóruracyl a 5-fluórcytozín sú obchodne dostupné zlúčeniny firmy Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin 53233, USA.

Oddelenie (±)-cis-izoméru a (±)-trans-izoméni zlúčeniny vzorca (I), napríklad v chránenej forme, sa môže uskutočňovať chromatografický na silikagéli s použitím zmesi organických rozpúšťadiel, ako zmesi etylacetátu a metanolu, etylacetátu a hexánu alebo dichlórmetánu a metanolu. Akákoľvek chrániaca skupina sa môže potom odstrániť s použitím príslušného reakčného činidla pre každú skupinu.

Zlúčenina vzorca (I) sa môže previesť na svoje farmaceutický prijateľné estery alebo amidy reakciou s príslušným acylačným činidlom, napríklad halogenidom alebo anhydridom kyseliny, slúžiacich na acyláciu hydroxyskupiny v polohe 5' a aminoskupiny v polohe 4. Acylová skupina sa môže potom selektívne odstrániť z hydroxyskupiny v polohe 5' alebo z aminoskupiny v polohe 4 alebo z oboch týchto skupín. Napríklad spracovaním diacylovanej zlúčeniny za kyslých podmienok, napríklad pôsobením Lewisovej kyseliny, ako bromidu zinočnatého v metanole, sa odstráni 4N-acylová skupina za vzniku zodpovedajúceho 5'-OH esteru, zatiaľ čo spracovaním diacylovanej zlúčeniny za alkalických podmienok, napríklad pôsobením metoxidu sodného, sa odstráni 5'-OH acylová skupina za vzniku zodpovedajúceho 4N-amidu. Acylové skupiny sa môžu tiež odstrániť selektívne spracovaním s komerčne dostupnými esterázovými alebo lipázovými enzýmami, napríklad esterázou z pečene ošípaných alebo lipázou z podžalúdkovej žľazy, alebo spracovaním podľa spôsobov, ktoré sú opísané v US patentovom spise č. 5 071 983. Zlúčenina vzorca (I) sa môže premeniť na svoju farmaceutický prijateľnú soľ obvyklým spôsobom, napríklad spracovaním s vhodnou bázou. Ester alebo soľ zlúčeniny vzorca (I) sa môže previesť na základnú zlúčeninu napríklad hydrolýzou.

Na lepšie pochopenie vynálezu sú v ďalšom uvedené príklady, ktoré sú určené len na ilustráciu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Spôsob výroby cis-l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiolán-5-yl] -5 -fluórcytozínu

Spôsob A

Vyrobí sa zmes (±)-cis- a (±)trans-2-benzoyloxymetyl-5-(N4-aeetyl-cytozín-l-yl)-l,3-oxatiolánu a rozdelí sa na (i)-cis- a (±)-trans-izomér, ako je opísané v Európskom patentovom spise č. 0 382 526. (±)-cis-Izomér sa fluóruje pôsobením trifluórmetylhypofluoritu v fluórtrichlórmetáne a chloroforme pri teplote -78 °C podľa spôsobu, ktorý opísal Robins a kol. v Nucleic Acid Chemistry, časť 2, str. 895 až 900 (1978). Nzj-Acetylová a 2-benzoylová skupina sa odstráni pôsobením dimetylamínu v etanole a izoluje sa výsledná zlúčenina, (±)-cis-l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiazolán-5-yl]-5-fluórcytozín.

Spôsob B

Zmes (±) cis- a (±)-trans-2-benzoyloxymetyl-5-(uracil-l-yl)-l,3-oxatiolánu sa vyrobí ako je opísané v Európskom patentovom spise č. 0 382 526. Po odstránení 2-hydroxvskupiny nasýteným metanolickým roztokom amoniaku sa izoméry oddelia na silikagéli s použitím zmesi etylacetátu a metanolu ako elučného činidla (Európsky patentový spis č. 0 382 526). (±)-cis-Izomér sa nechá reagovať s anhydridom kyseliny octovej v pyridíne za laboratórnej teploty na 2-acetát. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku pri teplote nižšej ako 30 C. 2-Acetát sa potom rozpustí v chloroforme a premyje vodným roztokom hydrogenuhličitanu. Oddelená organická vrstva sa vysuší a chloroform sa odparí za zníženého tlaku. (+/-)-cis-2-Acetyloxymetyl-5-(uracil-l-yl)-l,3-oxatioláu sa fluóruje ako je opísané (spôsob A) spôsobom, ktorý opísal Robins a kol. Konverzia 5-fluóruracilovej bázy na 5-fluórcytozínovú bázu sa uskutoční tým, že sa pripraví 4-(1,2,4-triazol-l-ylový) derivát podľa spôsobu, ktorý uviedol C. B. Reese v J. Chem. Soc., Perkins I, 1171 (1984) a W. L. Sung vNucleic Acids Res., 9, 6139 (1981) s použitím 1,2,4-triazolu a 2 ekvivalentov 4-chlórfenyldichlórfosfátu v suchom pyridíne pri laboratórnej teplote. Po tejto konverzii sa uskutoční reakcia s metanolom vopred nasýteným amoniakom pri teplote 0 °C a 2-acetát sa hydrolyžuje, čím sa získa (±)-cis-l-[2-(hydroxymetyl)-l ,3 -oxatiazolán-5 -yl] -5-fluórcytozín.

Farmaceutické prostriedky

V ďalej uvedených prostriedkoch účinná zložka označuje cis-1 -[2-(hydroxvmetyI)-1,3 -oxatiolán-5 -yl] -5-fluórcytozín.

Príklad 2

Prostriedky vo forme tabliet

Ďalej uvedené prostriedky A, B a C sa vyrábajú granuláciou zložiek za vlhka s roztokom povidonu, potom pridaním stearátu horečnatého a zlisovaním.

SK 279542 Β6

Prostriedok A	mq/tableta	mo/tableta
účinná zložka	250	250
laktóza B. P.	210	26
povidon B. P.	15	9
nátriumglykolát Škrobu	20	12
stearát horečnatý	5	3
celkom	500	300
Prostriedok B
	ma/tableta	ma/tableta
účinná zložka	250	250
laktóza	150	-
Avicel PH 101	60	26
povidon B. P.	15	9
nátriumglykolát škrobu	20	12
stearát horečnatý	5	3
celkom	500	300
Prostriedok C
		ma/tableta
účinná zložka		100
laktóza		200
škrob		50
povidon		5
stearát horečnatý		4
celkom		359
Ďalej uvedené prostriedky D a	E sa vyrábajú priamym
zlisovanim premiešaných zložiek. Laktóza v prostriedku E
je typu určeného na	priame zlisovanie (Zeparox - Dairy
Crest).
Prostriedok D
		ma/tableta
účinná zložka		250
predželatlnizovaný škrob NF15	150
celkom		400

Prostriedok E

ma/tableta
účinná zložka	250
laktóz? B.P.	150
Avicel	100
celkom	500

Prostriedok F (Prostriedok s regulovaným uvoľňovaním)

Prostriedok sa vyrobí granuláciou zložiek za vlhka s roztokom povidonu, potom pridaním stearátuhorečnatého a
zlisovanim.	ma/tableta
účinná zložka	500
hydroxypropalmetylcelulóza	112
(Methocel K4M Premium)
laktóza B. P.	53
povidom B. P.	28
stearát horečnatý	7
celkom	700

Uvoľňovanie účinnej látky nastáva v priebehu 6 až 8 hodín aje ukončené po 12 hodinách.

Príklad 3

Prostriedok vo forme kapsúl

Prostriedok A

Prostriedok vo forme kapsúl sa vyrobí zmiešaním zložiek z prostriedku D uvedeného v príklade 1 a naplnením zmesi do dvojdielnych tvrdých želatínových kapsúl. Prostriedok B (opísaný ďalej) sa vyrobí podobným spôsobom.

Prostriedok B	ma/kaosula
účinná zložka	250
laktóza B. P.	143
nátriumglykolát škrobu	25
stearát horečnatý	2
celkom	420

Prostriedok C

ma/kaosula
účinná zložka	250
Macrogel 4000 B. P.	350
celkom	600
Prostriedok D
	ma/kaosula
účinná zložka	250
lecitin	100
arašidový olej	100
celkom	450

Kapsuly z prostriedku D sa vyrobia dispergovaním účinnej zložky v lecitíne a arašidovom oleji a plnením disperzie do mäkkých elastických želatínových kapsúl.

Prostriedok E (Kapsuly s regulovaným uvoľňovaním)

Ďalej uvedený prostriedok tvorený kapsulami s regulovaným uvoľňovaním sa vyrobí vytlačovaním zložiek a), b) a c) s použitím extrudéra, potom téronizáciou extrudátu a vysušením. Vysušené granuly sa potom potiahnú membránou d) regulujúcou uvoľňovanie a plnia sa do dvojdielnych tvrdých želatínových kapsúl.

SK 279542 Β6 ma/kaosula

a) účinná zložka	250
b) mikrokryštalická celulóza	125
c) laktóza B. P.	125
d) etylcelulóza	13
celkom	513
Príklad 4
Prostriedok na zavedenie injekcie
Prostriedok A
účinná zložka	0,200 g
0,1 M roztok kyseliny
chlorovodíkovej alebo
0,1 M roztok hydroxidu sodného
podľa potreby na úpravu hodnoty pH	na 4,0 až 7,0
sterilná voda podľa	i potreby do 10 ml
Účinná látka sa rozpustí ako je najviac možné vo vode

(s teplotou 35 až 40 °C) a hodnota pH sa upraví na 4,0 až 7,0 podľa potreby pridaním kyseliny chlorovodíkovej alebo hydroxidu sodného. Násada sa potom doplní na potrebný objem vodou, filtruje cez sterilný mikroporézny filter do sterilných sklenených fľaštičiek jantárového sfarbenia s objemom 10 ml (typu 1), uzatvorí strerilným uzáverom a opatri záklopkou na fľaštičky.

Prostriedok B účinná látka sterilný fosľátový tlmivý roztok, neobsahujúci pyrogénne látky s hodnotou pH 7

0,125 g podľa potreby do 25 ml

Príklad 5

Intramuskuláma injekcia účinná látka 0,20 g benzylalkohol 0,10 g

Glycofurol75 1,45 g voda na injekcie podľa potreby do 3,00 ml

Účinná zložka sa rozpustí v glukofurole. Potom sa pridá benzylalkohol a rozpusti sa a ďalej sa pridá voda do 3 ml.

Zmes sa potom filtruje cez sterilný porézny filter a uzatvorí sa do sterilných sklenených fľaštičiek jantárového sfarbenia s objemom 3 ml (typu 1).

0,25 g

1,50 g

2,00 g

0,005 g

0,0125 ml podľa potreby do 5,00 ml

Príklad 6

Sirup účinná látka roztok sorbitolu glycerol benzoát sodný príchuť, Peach 17.42.3169 čistená voda

Účinná zložka sa rozpusti v zmesi glycerolu a väčšej časti čistenej vody. Potom sa k roztoku pridá vodný roztok benzoátu sodného, ďalej roztok sorbitolu a napokon príchuť. Objem sa upraví čistenou vodou a všetko sa dobre premieša.

Príklad 7

Čípok účinná látka tvrdý tuk, B. P (Witepsol H15-Dynamit Nobel) ma/člook

250

1770 celkom 2020

Jedna pätina Witepsolu Hl 5 sa roztaví v panvici opátrenej parným plášťom pri maximálnej teplote 45 °C. Účinná zložka sa preoseje cez sito s veľkosťou otvorov 200 pm a pridá sa k roztavenej báze za miešania, pri použití Silversonovho miešadla s reznou hlavou, pričom miešanie pokračuje pokiaľ sa nezíska hladká disperzia. Zmes sa udržiava pri teplote 45 °C, k suspenzii sa pridá zvyšný Witepsol Hl 5 a všetko sa mieša, aby sa získala homogénna zmes. Celá suspenzia sa nechá prejsť cez sito z nehrdzavejúcej ocele s veľkosťou otvorov 250 pm a za nepretržitého miešania sa nechá ochladiť na teplotu 40 °C. Pri teplote 38 °C až 40 °C sa 2,02 g zmesi plní do vhodných foriem s objemom 2 ml z plastickej hmoty. Čipky sa nechajú vychladnúť na teplotu miestnosti.

Príklad 8

Pesar mq/pesar

účinná látka	250
bezvodá dextróza	380
zemiakový škrob	363
stearát horečnatý	7

celkom 1000

Opísané zložky sa priamo zmiešajú a pesary sa pripravia priamym zlisovaním výslednej zmesi.

Príklad 9

Protivírusový účinok proti vírusu hepatitídy B (HB V)

Zlúčenina 1 -[ 2-(hy droxymetyl)-1,3-oxatiolán-5 -yl] -5 -íluórcytozín sa testuje ako je opísané ďalej.

Producent ľudského HBV bunkovej línie Hep&2, 2.2.15, ktorý opísal a charakterizoval Sells a kol. vPNAS 84 1005 (1987) a v J. Virol. 62 2836 (1988) má podiel v celom rade charakteristických znakov hepatocytu chronicky infikovaného vírusom hepatitídy B, ktorý je infekčný, ako je doložené jeho schopnosťou spôsobiť ochorenie u šimpanzov. Táto bunečná línia sa použije in vitro na stanovenie anti-HBV účinku zlúčenín.

Pri testovaní zlúčeniny na protivírusový účinok sa monovrstva kultúry uvedie do styku s 50 až 200 μΜ zlúčeniny počas 10 dní. Supematant prostredia obsahujúce extracelulámy virion DNA (častica Dane) sa zachytáva v dňoch 3, 6 a 10, spracuje s 1 mg/ml proteinázy K a 1 % dodecylsulfátom sodným a inkubuje pri teplote 50 C počas jednej hodiny. DNA sa extrahuje rovnakým objemom fenolu a potom chloroformu a následne sa vyzráža octanom amónnym a propanolom. Vyzrážaná DNA sa rozpustí a zachytí na nitrocelulóze spôsobom, ktorý opísali Schleicher a Schuell (S & S, 10 Optical Ave., Keene, NH 03431, publikácia č. 700 (1987)) a ďalej spracuje, ako opísal Southem v J. Mol. Biol. 98 503 (1975). Bunky sa zachytia a intracelulárna DNA sa získa po lýze buniek pôsobením guanidínizotiokyanátu. Intraceluláme bunky DNA sa spracujú rovnakým spôsobom ako extraceluláma DNA. Po vyzrážaní oc7

SK 279542 Β6 tanom amónnym a propanolom sa zrazenina intracelulárnych buniek rozpustí, vykoná sa rez reštrikčnou endonuklcázou, Hind III, aplikovanou na agarózovom géli, a potom sa spracuje ako opísal Southem na stanovenie množstva replikačnej inteimediátovej formy. Protivírusový účinok zlúčeniny sa stanovuje meraním pri najmenej stonásobnom znížení množstva častíc Dane extrudovaných do kultivačného prostredia a podobnom poklese v intracelulámych replikačných intermediátoch.

Výsledky sú uvedené ďalej v tabuľke,

Tabuľka

Účinok cis-1 -[2-(hydroxymetyl) -1,3 -oxatiolán-5 -y 1] -5 -fluórcytozŕnu na HBV produkciu v bunkových kultúrach 2.2.15

Intraceluláma HBV DNA*

Testovaná Celkovo Monomér Reclkatný HBV DNA v kultivačnom prostredí

Zlúéenra (mM)	Herrnedlát	deň Q		(pfl/ml)“ deň ô	der 10
A. neošetrené	1,1	2.0	81	58	67	93	77
bunky	0,8	2,3	77	69	110	100	88
100	1.9	0.8	2	64	11	3	0
	1,5	1.9	1	34	19	2	0
B. neošetrené	1.5	1.9	110	65	44	86	71
bunky	1.0	2.3	67	90	120	60	82
100	1.6	0,8	1	90	16	0	0
	1.0	0,7	1	74	10	0	0

* Analýza intracelulámej HBV DNA (častica Dane) sa uskutočňuje za 24 hodín po 10 dňoch spracovania ** Číslo nula (0) je ukazovateľom neidentifikovateľnej hladiny HBV DNA, hraničná citlivosť je 0,1 pg/ml

Claims (3)

1. Použitie l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiolán-5-yl]-5-fluórcytozínu vzorca (I)

NH, u

alebo jeho fyziologicky funkčného derivátu na výrobu farmaceutického prostriedku na ošetrovanie alebo profylaxiu infekcie spôsobenej vírusom hepatitídy B.

2. Použitie podľa nároku 1, l-[2-(hydroxymetyl)-l,3-oxatiolán-5-yl]-5-fluór-cytozínu vzorca (I) alebo jeho fyziologicky funkčného derivátu vo forme cis-izoméru.

3. Použitie podľa nároku 1, pričom fyziologicky funkčným derivátom je farmaceutický prijateľná soľ alebo ester l-[2-(hydrOxymetyl)-l,3-oxatíolán-5-yl]-5-fluórcytozínu vzorca (I).