JPH06505725A - ５−フルオロ−２’−デオキシ−３’−チアシチジンのｂ型肝炎治療への使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ５−フルオロ−２′−デオキシ−３′−チアシチジンのＢ型肝炎治療への使用 本発明は、１−（２−ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル ）−シトシン誘導体およびそれらの生理学的機能性誘導体の、Ｂ型肝炎ウィルス 感染の治療への使用に関する。

Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢ　Ｖ）は、世界的に非常に重要な病原ウィルスである。

ＨＢＶは、アジア諸国においては非常に一般的で、アフリカのサハラ周辺［５ｕ ｂ−３ａｈａｒ＋＋ｎ　Ａｆｒｉｃａ］においてはよくみられる。このウィルス は、病因学的には、主要な肝細胞カルシノーマと関連しており、世界の肝臓癌の ８割を引き起こしていると考えられている。合衆国においては、毎年１万Å以上 の人々が、ＨＢＶ疾病のために入院しており、平均２５０人の人々が劇痛を伴う 疾病で亡くなっている。現在、感染性保菌者は、合衆国に５０万人から１００万 人存在するものと見積もられている。慢性活動型肝炎は、保菌者の２５％以上の 人々にみられ、しばしば硬変症へと進行する。合衆国では、毎年、ＨＢｖ関連の 硬変症で５０００もの人々が、そしておそら＜　１０００人がＨＢＶ関連の肝臓 癌で死去しているものと見られている。普遍的なＨＢＶワクチンが存在したとし ても、効果的な抗ＨＢＶ化合物の必要性はなくならないであろう。世界中で２億 ２千万人と見積もられている、感染持続性保菌者の大きなレザバーは、予防接種 からは何ら益を受けず、ＨＢＶ誘発肝臓疾病に対し高い危険性を負い続けている 。この保菌者の集団は、感受性の高い人々の感染源となる。そしてそれは特に特 定の地域内に住む人々やホモセクシャルもしくは静注薬物濫用者のような高い危 険性を有する集団における症例を永続的なものとする。

すなわち、慢性感染の制御と肝細胞カルシノーマへの進行の減少との両者に有効 な抗ウィルス剤に対する多大な要求が存在する。

ＨＢＶ感染による臨床的な影響は、頭痛、発熱、不定愁訴、悪心、嘔吐、食欲不 振、腹痛にわたる。ウィルスの複製は、通常免疫反応により制御されており、人 においては数週間もしくは何カ月にもわたる回復期をともなう。しかしながら、 上に概略述べたように、感染は永続的な慢性肝疾患につながるより厳しいもので あり得る。［人のウィルス感染ＩＪｉｒａｌＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｈｕ ｍａｎｓ］　Ｊ　（第２版、Ｅｄ、　Ｅｖａｎｓ、　Ａ、　Ｓ、　、　（１９８ ２）Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　、　Ｎｅ ｗ　ｙｏｒｋ）の１２章には、ウィルス性肝炎感染の病因についての記述がある 。ヨーロッパ特許明細書０３８２５２６は、ヒト免疫不全性ウィルス（ＨＩＶ） の複製阻害に効果的である特定の１．３−オキサチオランヌクレオシド・アナロ グを開示している。

我々は、今回、驚くべきことに、式（１）に示す１−　（２−（ヒドロキシメチ ル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−シトシン誘導体、すなわち、１− 　（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオランづ−イル）−５−フル オロシトシン並びにそれらの生理学的機能性誘導体が、ＨＢＶに対する強力な活 性を有することを見出した。

式（１）に示す化合物は２つのキラル中心を有し、そのため２対の光学異性体（ 例えば鏡像体）並びにラセミ化合物を含むそれらの混合物の形で存在することに 留意すべきである。

合物を含むそれらの混合物として存在し得る。式（Ｉ）の化合物のそのような異 性体、ラセミ化合物を含む混合物および互変体は、本発明の範囲内にある。式（ １＞の化合物の’ｙＺ異性体が好ましい。

本発明の１つの特徴に従い、我々は、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療もしくは予防 に用いられる、式（Ｉ）の化合物およびそれらの生理学的機能性誘導体を提供す る。本発明のさらなる詳細に従い、我々は、Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療もしく は予防のための医薬の製造における式（１）の化合物およびそれらの生理学的機 能性誘導体の使用を提供する。本発明のさらなる側面においては、宿主、例えば 人のような哺乳動物、におけるＢ型肝炎ウィルス感染を治療もしくは予防する方 法が含まれる。そしてこの方法は、治療上効果的な量の式（Ｉ）の化合物もしく はそれらの生理学的機能性誘導体で宿主を治療することを具備する。

「生理学的機能性誘導体」とは、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容しうる塩、アミ ド、エステルもしくはエステルの塩を意味する。またそれは、患者に対して投与 した際に、（直接的もしくは間接的に）前記式（Ｉ）の化合物またはそれらの活 性型代謝物もしくは残基を提供し得る他の化合物をも意味する。

本発明による望ましいエステルには、カルボン酸エステルである。エステル基の カルボン酸部分の非カルボニル部が直鎖もしくは分岐鎖アルキル、例えば、ｎ− プロピル、１−ブチル、ｎ−ブチル、アルコキシアルキル（例えばメトキシメチ ル）、アリールアルキル（例えばベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば フェノキシメチル）およびアリール（例えばフェニル）から選ばれるカルボン酸 エステル；アルキル−もしくはアリールアルキルスルホニル（例えばメタンスル ホニル）の様なスルホン酸エステル；アミノ酸エステル（例えばＬ−バリル、Ｌ −イソロイシル）；ジカルボン酸エステル（例えばヘミスクシネート）；および ５′−モノ、ジもしくはトリリン酸エステルが含まれる。リン酸エステルは、例 えばＣｌ−２０アルコールもしくはそれらの反応性誘導体、または２．３−ジ（ Ｃ６−２４）アシルグリセロールにより、さらにエステル化することもできる。

それらのエステルに含まれる如何なるアルキル部分も、　■ないし１８個の炭素 原子、特にｌないし４個の炭素原子を有利に含む。それらのエステルに含まれる 如何なるアリール部分も、例えば／ＸＸロジンＣｌ−４アルキル、Ｃ１−４アル コキシルもしくはニトロで任意に置換されたフェニル基を有利に含む。

上に述べた医薬上許容しうる式（Ｉ）の化合物のアミドには、シトシンアミノ基 がアミドの形態、例えば、ＲがＣｌ−６アルキルもしくはアリール（例えば、） １０ゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃｌ−４アルコキシ、ニトロもしくはヒドロキシ ルで任意に置換されたフェニル）である−ＮＨＣＯＲ，で存在する誘導体が含ま れる。

本発明による医薬上許容しうる塩の例には、例えばアルカリ金属（例えばナトリ ウム）、アルカリ土類金属（例えばマ＋ グネシウム）塩、アンモニウムおよびＮＸ　（ここでＸはＣ１−４アルキル）の ような適当な塩基から誘導される塩基性塩が含まれる。医薬上許容しうる酸付加 塩には、酢酸、酪酸、酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸および 琥珀酸のような有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼ ンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸のような有機スルホン酸；並びに塩 酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸ような無機酸の塩が含まれる。

薬物治療において所望の効果を達成するために要求される、式（Ｉ）の化合物（ 以下「活性成分」と称する）もしくはそれらの生理学的機能性誘導体の量は、多 くの因子、特に、特定の用途、使用する特定の化合物の特性、投与の様式、患者 の状態に依存する。一般的に、適切な投与量は、−日につき患者の体重ｋｇ当り ３．０ないし１２０ｍ　ｇの範囲、望ましくは、−日につき患者の体重ｋｇ当り ６ないし９０ｍ　ｇの範囲、最も望ましくは一日につき患者の体重ｋｇ当り１５ ないし６０ｍｇの範囲にある。所望の一日投与量は、好ましくは、−日を通して 適切な間隔で投与される、２．３．４．５．６もしくはそれ以上のサブ投与量と して提供される。これらのサブ投与量は、例えば、１０ないし１５００ｍ　ｇ　 、望ましくは２０ないし１０００ｍｇ、最も望ましくは５０ないし７００ｍ　ｇ の活性成分を含有する投与剤形単位で投与することができる。

理想的には、この活性成分は、活性成分の血漿濃度ピークが約１ないし７５μＭ １望ましくは約２ないし５０μＭ１最も望ましくは約３ないし３０μＭの濃度に 達するように投与されるべきである。これは、例えば、活性成分を任意に生理食 塩水に溶解した０、１ないし５％溶液の静脈注射、または約１ないしｌｏｏｍ　 ｇ　／　ｋ　ｇの活性成分を含有する火剤としての経口投与により達成すること ができる。望しい血液レベルは、活性型成分が約０．Ｏｌないし５．０ｍｇ／ｋ ｇ／時間になるような連続注入、もしくは活性成分的０．４ないし１５ｍｇ／ｋ ｇを含む断続的な注入により維持することができる。

本発明による医薬（以下、「製剤」と称する）の製造において、ここで「活性成 分」と称される式（１）の化合物もしくはそれらの生理学的機能性誘導体は、典 型的には、とりわけ１種もしくはそれ以上の医薬上許容しうる担体や賦形剤、お よび任意に他の治療剤と混合される。

この製剤には、経口、直腸、鼻腔、（経皮、頬、舌下を含む）局所、膣内もしく は（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）非経口投与に適したものが含まれ る。この製剤は、便宜上投与剤形単位で提供されてもよく、薬学分野でよく知ら れる方法によって調製してもよい。そのような方法には、活性成分と１種もしく はそれ以上の補助成分を構成する担体とを関連付ける工程が含まれる。一般的に は、この製剤は、活性成分を液体担体もしくは細かく粉砕された固体担体もしく はその両方と均一にかつ緊密に関連付け、その後、必要ならば、その生成物を成 型することにより調製される。

経口投与に適した本発明の製剤は、各規定量の活性成分を含有するカプセル、カ シャ剤、錠剤のような別個の単位として；粉末もしくは顆粒として；水性もしく は非水性液体の溶液もしくは懸濁液として；または油中水液体乳剤、水中油水液 体乳剤として提供することができる。本活性成分は、丸薬、砥削またはペースト として提供されてもよい。

錠剤は、随意に１種またはそれ以上の補助成分を伴い、加圧もしくは成型により 作製することができる。圧縮錠は、適当な装置内において、粉末もしくは顆粒の ような自由流動形態の活性成分を圧縮することにより調製することができる。

その際活性成分は、結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメ チルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプン ナトリウムグリコラート、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナト リウム）、界面活性剤または分散剤と任意に混合されている。

成型錠は、適当な装置において、不活性希釈液で湿らせた粉末化合物の混合物を 型にいれて作ってもよい。この錠剤は、任意に被覆し、もしくは刻み目を入れる ことができ、さらにそこに含まれる活性成分の溶出を遅らせ、もしくは制御する ように製剤することもできる。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを 種々の割合で用い、望ましい溶出特性を付与するようにする。錠剤は、任意に、 胃の他に腸の各部分で溶出するように腸溶性コーティングを施して提供すること ができる。

上述の経口使用に適した製剤は、胃酸過多を中和するように設計された緩衝剤を 含んでも良い。そのような緩衝剤は、各々の共役塩と混合した弱酸もしくは塩基 のような種々の有機もしくは無機剤から選択することができる。

口内の局所的な投与に適した製剤には、風味付けした基材、通常、ショ糖、アカ シアもしくはトラガカントゴム中に活性成分を含有するロゼンジ；ゼラチンとグ リセリン、もしくはショ糖とアカシアゴムのような不活性基材中に活性成分を含 有する香剤；および適当な溶液担体生活性成分を含有する口内洗浄剤が含まれる 。

直腸投与のための製剤は、例えばココアバターもしくはサリチル酸塩を含有する 適当な基材を備えた半割として提供することができる。

膣内投与に適した製剤は、活性成分に加えて、この分野で適切であることが公知 の担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、噴霧製剤とし て提供することができる。

非経口投与に適した製剤には、血液成分もしくは１種以上の器官を化合物の標的 とするように設計されたリポソームもしくは他の微粒子系と同様に、酸化防止剤 、緩衝剤、静菌剤、そして製剤を投与対象とする患者の血液と等張にする溶質を 含有してもよい、水性もしくは非水性の等張滅菌注入溶液；懸濁剤もしくは増粘 剤を含んでもよい水性もしくは非水性の滅菌懸濁液が含まれる。製剤は、単位用 量もしくは複数用量密封容器、例えば、アンプルおよびバイアルの形で提供する ことができ、使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを要する凍結 乾燥［１ｒｅｅｘｅ−ｄｒｉｅｄ］　（Ｉｙｏｐｈｉｌｉｘｅｄ　）状態で保存 することができる。即座に使う注射溶液や懸濁液は、前述の滅菌粉末、顆粒およ び錠剤から調製することができる。

望ましい投与製剤単位は、上に列記したように、活性成分の一日投与量もしくは 単位、−日サブ投与量、もしくはそれらの適当な画分を含んでいる。

本発明の製剤は、特に上で言及した成分に加えて、問題の型の製剤に関連を有す る分野においては通常の他の剤を含み得ることを理解すべきである。例えば、経 口投与に適した製剤は、甘味料、増粘剤および矯味矯臭剤を含み得る。

式Ｉの化合物は、例えば、 ａ）任意に保護されている５−Ｆ−シトシン化合物を式ｎＡの１．３．−オキサ チオランと反応させ、ここで、Ｒｉは水素もしくはヒドロキシ保護基であり、Ｌ は遊離基であり；または、 ｂ）式ＩＩＢの化合物 （ここで、Ｒｉは上で定義された通りであり、かつＲ１はアミノ保護基である） を、シトシン環の５−位にフ・ノ素原子を導く働きをするフッ素化剤と反応させ ；または、Ｃ）式ｎｃの化合物の化合物 （ここで、Ｒ１は上で定義された通りである）を、ウラシル環の４−位のオキソ 基をアミノ基に転換させる剤と反応させ；残余の保護基は、例えば、酸性もしく は塩基性加水分解により除去して所望の生成物を生成させる、ことにより調整す ることができる。

プロセスａ）に関して、ヒドロキシ保護基には、アシル（例えばアセチル）、ア リールアシル（例えばベンゾイルもしくは置換ベンゾイル）、トリチルもしくは モノメトキシトリチル、ベンジルもしくは置換ベンジル、トリアルキルシリル（ 例えばジメチル−１−ブチルシリル）またはジフェニルメチルシリルのような保 護基が含まれる。５−Ｒ−シトシン化合物は、例えばトリメチルシリルのような シリル基で任意に保護することができる。そのような基は、通常の方法で除去す ることができる。遊離基りは、ヌクレオシド化学の分野で知られている典型的な 遊離基、例えば、臭素や塩素のようなハロゲン、メトキシもしくはエトキシのよ うなアルコキシ、あるいはアセチルもしくはベンゾイルのようなアシルである。

プロセスａ）における反応は、塩化スズまたはトリメチルシリルトリフレートの ようなルイス酸の存在下で、有機溶媒（例えば１．２−ジクロロエタンまたはア セトニトリル）中で達成することができる。

式ＩＩＡの化合物は、Ｃａｎ、Ｊ、　Ｒ＊５ｅａｃｈ、　８．１２９　（１９３ ３）および欧州特許明細書０３８２５２６に記載されているように、Ｒｔが上で 定義されている、適当に保護された式■の２−ヒドロキシアセトアルデヒド ＲＩＯＣＨ２ＣＨＯ（ｍ） から得られる。式■の化合物を、この分野で公知（Ｃｈｅｍ。

Ｂｅｒ、　８５：９２４−９３２．１９５２））のメルカプトアセタールＨ３Ｃ Ｈ２ＣＨ（ＯＲ）２ （ここで、Ｒは、Ｈ８ＣＨＣＨ（ＯＣ２Ｈ５）２のようなＣ１−４アルコシル基 である）と反応させることにより、ＬがＯＲ（アルコキシ）、例えば、メトキシ もしくはエトキシである式Ｉ［Ａの化合物が得られる。代わりに、Ｌがアルコシ ルである式ＨＡの化合物を、炭化水素化学の分野において公知の方法により、Ｌ がハロゲンもしくはアシルである式ｍＡの化合物に転換してもよい。

式■の化合物は、Ｒ１（例えば三置換シリル、ベンジルもしくはトリチル）を導 入し、アセトニトリル中で穏和な酸（例えばギ酸もしくは酢酸水溶液）または臭 化亜鉛でイソプロピリデンを除去し、続いて過ヨウ素酸塩水溶液でアルコール基 を酸化することにより、１．２−０−イソプロビルリデングリセロールから調製 することができる。

プロセスｂ）に関して、この分野で公知の方法（Ｍ、　Ｊ。

ＲｏｂｉｎｓらＮｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　Ｃｈｅｍｉｓｌｒ７．ｐａ目２．　 Ｌ、Ｂ、Ｔｏｗｎｓｅｎｄ　ａｎｄＲ，Ｓ、Ｔｉｐｓｏｎ、ｅｄ自ｏｐｓ、Ｊ、 Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　８９５−９００　（１９７ ８）、ＲｏＤｕｓｃｈｉｎｓｋｙ、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　Ｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙ。

ｐａｒｌｌ、　Ｌ、Ｂ、Ｔｏｗｎｓｅｎｄ　ａｎｄ　Ｒ，Ｓ、Ｔｉｐｓｏｎ、ｅ ｄｉｔｏｒ、１Ｗｉｌｅｙａｎｄ　５ｏｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　４３−４６　 （１９７８）　）によって、５−フルオロ置換基を導入することができる。フ・ ソ素化剤は、例えばフルオロトリクロロメタン中のトリメチルヒポフルオライド でもよい。

プロセスＣ）に関して、式■Ｃの化合物は、対応する４−（１，２，４−トリア ゾイル）化合物を形成させるために、有利には４−クロロフェニルジクロロリン 酸と共に、有利にはｌ、　２．４−トリアゾールで処理する。そしてその後、例 えばメタノールと反応させることにより、望ましい４−アミノ（シチジン）化合 物に転換する。

式ＩＩＢおよび■Ｃの出発原料は、例えば、プロセスａ′）＆こ記載された方法 に類似の方法で、適当な（任意に保護された）塩基と式ＩＩＡの化合物とを反応 させることにより調製することができる。５−フルオロウラシルと５−フルオロ シトシン叱＾１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ 、　Ｗｌ　５３２３３．　ＵＳＡ力１ら市販されている。

例えば保護された形態の（±）　−＞７．、（±）−トランス異性体の分離は、 酢酸エチル／メタノール、酢酸エチル／ヘキサンもしくはジクロロメタン／メタ ノールのような有機溶媒の混合物を用いる、シリカゲルでのクロマトグラフィ一 により達成することができる。次いで、如何なる保護基も、各基に適した試薬を 用いることにより除去することができる。

式（Ｉ）の化合物は、適当なアシル化剤、例えば、５′−０Ｈ１４−Ｎ　Ｈ２基 をアシル化する酸ノ１ライドもしくは無水物を用いる反応により、医薬上許容し うるエステルもしくはアミドに転換することができる。その後、アシル基は、１ 種もしくは他の５’−ＯＨおよび４−　Ｎ　Ｈ２基から選択的に除去することが できる。例えば、ジアシル化化合物をアルカリ条件下、例えばナトリウムメトキ シドを用いて処理することにより、５’−ＯＨアシル基が除去されて対応する４ Ｎ−アミドが生成するのに対し、酸性条件下、例えばメタノール中での臭化亜鉛 のようなルイス酸存在下でジアシル化化合物を処理することにより、４Ｎ−アシ ル基が除去されて対応する５’−ＯＨエステルが生じる。アシル基は、市販の酵 素であるエステラーゼやリパーゼ、例えば、ブタの肝臓エステラーゼやすい臓り ／り一ゼを用いる処理により、または米国特許明細書Ｎｏ　５０７１９８３に記 載された方法に従う処理により、選択的に除去することもできる。式（Ｉ）の化 合物は、通常の方法、例えば適当な塩基での処理により、それらの医薬上許容し うる塩に転換することができる。式（１）の化合物のエステルもしくは塩は、例 えば加水分解により、もとの化合物に転換することもできる。

本発明をより理解するために、以下の例を説明として挙げる。

例　１：シスー１−（２−ヒドロキシメチル）−１ｊ−オキサチオラメチル−５ −（Ｎ４−アセチル−シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオランを、ヨー ロッパ特許（Ｅ　Ｐ）明細書０３８２５２６Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１５ｄ　Ｃｈ ｅｍｉｓｔｒｙ、ｐａｒｔ　２．　８９５−９００．　１９７８に従って、−７ ８℃で、フルオロトリクロロメタン（ＣＣ１３Ｆ）およびクロロホルム中におい て、トリフルオロメチルヒポフルオライドを用いてフッ素化する。エタノール中 において、ジメチルアミンを用いて、Ｎ４−アセチルおよび２−ベンゾイル基を 除去し、その生成物である　（±）−シス−１−（２−（ヒドロキシメチル）− １，３−オキサチオラン−５−イル）−５−フルオロシトシンを単離する。

方法Ｂ：　（±）−シスおよび（±）−トランス　２−ベンゾイルオキシメチル づ−　（ウラシル−１−イル）−１，３−オキサチオランを、ＥＰ　０３８２５ ２６に記載されたように調製する。メタノール性飽和アンモニアで２−水酸基を 脱保護箔化した後、これらの異性体を、溶出液として酢酸エチル／メタノールを 用い、シリカゲルで分離する（Ｅ　Ｐ　０３８２５２６）。この　（±）−シス 異性体を、ピリジン中において無水酢酸と室温で反応させ、２−アセテートを得 る。３０℃未満にて、減圧下で溶媒を除去する。次いで、２−アセテートをＣＨ ２Ｒ３に溶解し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。分離した有機層を乾燥さ せ、減圧下でＣＨＣｌ３を留去する。　（±）−乞Ｘ−２−アセチルオキシメチ ル−５−（ウラシル−１−イル）−１，３−オキサチオランを、上記（方法Ａ） のように、Ｒｏｂｉｎｓらの方法によりフッ素化する。５−Ｆ−ウラシル塩基の ５−Ｆ−シトシン塩基への転換は、大気温度で、乾燥ピリジン中において、ｌ、 ２．４−）−リアゾールおよび２当量の４−クロロフェニルジクロロリン酸を用 いて４−（１，２，４−トリアシイルー１−イル）誘導体を調製することにより 行なわれる。この方法は、Ｃ，Ｂ、Ｒｅｅｓｅ、Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、Ｐｅ ｒｋｉｎｓ　Ｉ、１１７１　（１９８４）とＷ、Ｌ、Ｓｕｎｇ、Ｎｕｃｌ！ｉｃ 　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ。

９：６１３９．　（１９８１）による。この転換に続き、０℃で、予めアンモニ アで飽和されたメタノールと反応させ、２−アセテートを一オキサチオランー５ −イル）−５−フルオロシトシンを得る。

ドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）づ−フルオロシトシン である。

以下の製剤ＡＳＢおよびＣは、顆粒状成分をポビドン溶液で湿らせ、次いでステ アリン酸マグネシウムを添加して圧縮することにより調製する。

（ａ）活性成分　２５０　２５０ （ｂ）　−ｙ　’）　ドースＢ、　Ｐ、　２１０　２６（Ｃ）ポビドンＢ、Ｐ　 １５　９ （ｄ）デンプンナトリウム （ａ）活性成分　２５０　２５０ （ｂ）ラクトース　１５０ （ｃ）　アビセルＰＨ１０１６０２６ （ｄ）ポビドンＢ、Ｐ、　１５　９ （ｅ）デンプンナトリウム 活性成分　１００ ラクトース　２００ 以下の製剤りおよびＤは、混合した成分の直打により調製する。製剤Ｅのラクト ースは、直打型のものである（ＤａｉｒｙＣｒｅｓｔ　−ｒゼバロックス［Ｘｅ ｐａｒｏｘ　］　Ｊ　）　。

活性成分　２５０ 活性成分　２５０ この製剤は、顆粒状成分（下記）をポビドン溶液で湿らせ、次いでステアリン酸 マグネシウムを添加して圧縮することにより調製する。

ｍｇ／錠剤 （１１）活性成分　５００ （ｂ）　ヒドロキシプロピルメチルセルロース　１１２（メトセルに４Ｍプレミ アム ［Ｍｅｊｈｏｃｅｌ　Ｋ４Ｍ　ｐｒｅｍｉｕｍ］　）（ｃ）ラクトースＢ、　Ｐ 、５３ （ｄ）ポビドンＢ、　Ｐ、　２８ （ｅ）ステアリン酸マグネシウム　７ 薬剤の放出は、約６−８時間にわたって起こり、１２時間後に完了する。

カプセル製剤は、上記例２における製剤りの成分を混合し、２分割硬ゼラチンカ プセルに充填することにより調製する。

製剤Ｂ（下記）は、同様の方法で調製する。

（ａ）活性成分　２５０ （ｂ）ラクトースＢ、　Ｐ、　１４３ （Ｃ）　デンプンナトリウムグリコラート　２５（ａ）活性成分　２５０ 活性成分　２５０ レシチン　１００ 落花生油　１００ 製剤りのカプセルは、レシチンおよび落花生油に活性成分を分散させ、この分散 物を、軟らかい、弾性ゼラチンカプセル内に充填することにより調製する。

製剤Ｅ（放出が制御されたカプセル） 以下の徐放性カプセル製剤は、押出成形機を用いて成分ａ、ｂおよびＣ成分を押 出し、次いでこの押出物を急性化［ｓ　ｐ　ｂ　ｅｒｏｎｉｘａｔｉｏｎ］　し て乾燥することにより調製する。その後、この乾燥ペレットを、放出制御膜（ｄ ）で被覆し、２分割硬ゼラチンカプセルに充填する。

ｍｇ／カプセル （ａ）活性成分　２５０ （ｂ）微結晶セルロース　１２５ （ｃ）ラクトースＢ、Ｐ、　１２５ 活性成分　０・２００ｇ ｐＨ４，０−７，０とするに十分な量の塩酸溶液、０．１Ｍまたは水酸化ナトリ ウム溶液、０，１Ｍ滅菌水　１０ｍ　ｌとするに十分な量 活性成分を大部分の水（３５℃ないし４０℃）に溶解し、塩酸もしくは水酸化ナ トリウムで適当に、４．０ないし７．０にｐＨを調製する。次いで、このバッチ を水でボリュームアップし、滅菌済みの微孔性フィルターを通して滅菌済みの琥 珀色の１０ｍ１容ガラスバイアル（タイプ１）に入れ、滅菌済みのクロージー？ −［ｃｌｏｓｕｒｅｓ］およびオーバーシール［ｏｖｅｒｓｅａｌｇ　］で密閉 する。

製剤Ｂ 活性成分　０．１２５ 滅菌したパイロジエンフリーの ｐＨ７リン酸緩衝液　２５ｍ１とするに十分な量活性成分　０．２０ｇ ベンジルアルコール　０．１０ｇ グリコフロール７５　［Ｇｌｙｃｏｆｕｒｏｉ　７５　］　１１．４５ｇベンジ ルアルコール　３．００ｍ　ｌとするに十分な量活性成分をグリコフロールに溶 解する。次いで、ベンジルアルコールを添加して溶解し、３ｍｌまで水を加える 。その後、この混合物を滅菌済みの微孔性フィルターに通し、滅菌済みの３ｍｌ 容の琥珀色のガラスバイアル（タイプ１）内に密閉する。

活性成分　０．２５ｇ ソルビトール溶液　１．５０ｇ グリセロール　２．ＯＯｇ 安息香酸ナトリウム　０．００５ｇ フレーバー、ピーチ　１７．４２．３１６９　０．０１２５ｍ　ｌ精製水　５． ００ｍ　ｌとするに十分な量活性成分をグルセロールおよび大部分の水の混合物 に溶解する。その後、この溶液に安息香酸ナトリウム水溶液を添加し、次いでソ ルビトール溶液を添加して、最後にフレーバーを加える。精製水を加え体積を合 わせ、よく混ぜ合わせる。

活性成分　２５０ 硬脂、Ｂ、Ｐ（ワイテプソールＨ１５ ［Ｗｉｔｅｐｓｏｌ旧５］　−Ｄ７ｎａｍｉｊ　Ｎｏｂｅｌ）　１７７０ワイテ ブソールＨ１５の５分の１を、最高４５℃で、蒸気ジャケットパンにおいて溶解 する。活性成分を２００Ｍのふるいに通し、カッティングヘッドを備えたシルバ ーラン［５ｉｌｖｅｒｓ。

ｎ］を用いて滑らかに分散されるまで、撹拌しつつ溶融基材に加える。混合物を ４５℃に維持し、残ったワイテプソールＨ１５をこの懸濁液に加えて均一な混合 が確かなものとなるよう撹拌する。この懸濁液の全てを２５０Ｍステンレス鋼ス クリーンに通し、連続的に撹拌しながら４０℃になるまで冷す。３８℃ないし４ ０℃の温度で、この混合物２．０２ｇを適切な２ｍｌ容のプラスチック型に充填 する。生薬を室温まで冷却する。

ｍｇ／ペッサリー 活性成分　２５０ デキストロース無水物　３８０ ジヤガイモデンプン　３６３ 上記成分を直接混合し、生じた混合物を直接圧縮することによりペッサリーを調 製する。

オラン−５−イル）−５−フルオロシスティンを、以下の通りに試験した。

５ｅｌｌｓ　ら、ＰＮＡＳ　８４：１００５．　１９８７およびＪ、　Ｖｉｒｏ ｌ、６２：２８３６゜１９８８に記載され、かつこれらにより特徴付けられるヒ トＨＢＶ産生細胞株であるＨ　ｅ　ｐ　Ｇ　２．２．２．１５は、持続性ＨＢＶ に感染した肝細胞の多くの特徴を共有することが示されている。チンパンジーに 疾病を引き起こす能力により示されるように、それは感染性である。この細胞株 は、抗ＨＢＶ活性をもつ化合物を同定するために試験管内で用いられた。

抗ウィルス活性について化合物を試験するために、単層培養物をｌＯ日間５０− ２００ＭＭの化合物で処理した。菌体外ピリオンＤＮＡ　（ゾーン粒子）を含む 培地上清を、３．６．１０日口の回収し、プロパツ−ルＫ　（１ｍｇ／ｍｌ）と ドデシル硫酸ナトリウム（１％）とで処理して５０℃で１時間インキュベートし た。ＤＮＡを、等量のフェノール、次いでクロロフォルムで抽出し、その後、酢 酸アンモニウムおよびプロパツールで沈澱させた。ＤＮＡ沈殿物を溶解し、５ｃ ｈｌｅｉｃｈｅｒおよび５ｃｈｉｕ！１ｌ（Ｓ　＆　Ｓ、１００ｐｔｉｃａｌ　 Ａｗｅ、、　Ｋｅｅｎｅ、　ＮＨ０３４３１゜公開番号７００．１９８７）の手 順を用いてニトロセルロース上に回収して、５ｏｕｔｈｅｒｎ、　Ｊ、Ｍｏｌ、 Ｂｉｏｌ、　９８：５０３，１９７５によって開示された通りに処理した。細胞 を回収し、グアジンイソチオシネートで溶菌させた後、菌体内ＤＮＡを得た。菌 体内ＤＮＡを菌体外ＤＮＡと同様に扱った。酢酸アンモニウムおよびプロパツー ルで沈澱させた後、菌体内ＤＮＡ沈殿物を溶解し、制限エンドヌクレアーゼ、ｌ １ｌｉｎｄｌｌｌで消化した。そしてアガロースゲルに流した後、５ｏｕｔｈｅ ｒｎによって開示された通りに処理し、複製中間型の量を決定した。培養液中に 蓄積したゾーン粒子の量が少なくとも１００倍減少し、菌体内複製中間体が同様 に減少することを測定することにより、化合物の抗ウイルス効果を決定した。

以下に結果を示す。

２、２．１５細胞培養における）（ＢＶ産生に対するシス−１−（２−（ヒドロ キシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５−フルオロシトシンの 効果菌体内ＨＢＶ　ＤＮＡ” 培養液中（７）ＩＢＶ　ＤＮＡ （ｐｔ／＋＋）　＋＋ 処理化合物　複製　日　日　日　日 （μＩ）　総量　モノマー　中間体　０　３　６　１０Ａ、非処理　１．１　２ ．０　８１　５８　６７　９３　７７細胞　０．９　２ｊ　７７　８９　１１０ 　１００　８８１００　１．９　０．８　２　６４１１　３　０１．５　１．９ 　１　３４１９　２　０Ｂ、非処理　１．５　１．９　１１０　６５　４４　８ ６　７１細胞　１．０　２ｊ　６フ　９０　１２０　８０　ｇ２１００　１．６ 　０．８　１　９０１６　０　０１．０　０．７　１　７４１０　０　０＊　菌 体内ＨＢＶ　ＤＮＡ（ゾーン粒子）の解析は、処理の１０日口の後の２４時間で 行なわれた ＋＋「ゼロ」は、ＨＢＶ　ＤＮＡの検出限界以下であることを示している。

限界感度は、０．１ｐｇ／ｍ＋である。

国際調査報告 国際調査報告 ＧＢ　９２００３８８ ＳＡ　５７３０３ フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＳＥ）、　ＡＵ、 　ＣＡ、　Ｃ３，ＨＵ、ＪＰ、　ＫＲ，ＲＵ、　ＵＳ （７２）発明者　ファーマン、フィリップ・アレンアメリカ合衆国、ノース・カ ロライナ州２７７１３、ドウルハム、ブルーストーン・ロード　９０１

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．Ｂ型肝炎ウィルスの感染の治療もしくは予防のための医薬の製造における、 下記式の化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ すなわち、１−（２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イ ル）−５−フルオロシトシンもしくはそれらの生理学的機能性誘導体の使用。
2. ２．式（Ｉ）の化合物がシス異性体の形態にある請求の範囲第１項記載の使用。
3. ３．生理学的機能性誘導体が、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容しうる塩もしくは エステルである請求の範囲第１項記載の使用。
4. ４．前記医薬が単位投与剤形をとる先の請求の範囲に記載の使用。
5. ５．前記投与単位が、式（Ｉ）の化合物もしくはそれらの生理学的機能性誘導体 を１０ないし１５００ｍｇ含む請求の範囲第４項記載の使用。
6. ６．前記投与単位が錠剤もしくはカプセルである請求の範囲第４項または第５項 記載の使用。
7. ７．Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療または予防に用いられる、請求の範囲第１項に 記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的機能性誘導体。
8. ８．Ｂ型肝炎ウィルス感染の治療または予防に用いられる、シス−１−（２−（ ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）−５−フルオロシト シン。
9. ９．Ｂ型肝炎ウイルスに感染したヒトの治療方法であって、該ヒトに、請求の範 囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物もしくはそれらの生理学的機能性誘導体の有 効抗Ｂ型肝炎治療量を投与することを具備する治療方法。
10. １０．前記式（Ｉ）の化合物が、シス−１−（２−（ヒドロキシメチル）−１， ３−オキサチオラン−５−イル）−５−フルオロシトシンである請求の範囲第１ １項記載の方法。