CN107880091A - 疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用。本发明还提供了制备疏水性治疗剂、诸如氟替卡松或曲安西龙的纳米晶体的方法、其药物组合物(例如，局部或鼻内组合物)，及治疗和/或预防障碍、诸如睑缘炎、睑板腺功能不良或皮肤炎症或呼吸系统疾病(例如，哮喘)的征兆和/或症状的方法。

Description

疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用
本申请为2013年5月6日提交的、发明名称为“疏水性治疗剂的制剂、其制备方法及应用”的PCT申请PCT/US2013/039694的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2014年12月9日，申请号为201380030423.1。
相关申请
本申请要求2012年5月8日提交的美国临时申请61/644,105；2012年6月8日提交的美国临时申请61/657,239；2012年8月23提交的美国临时申请61/692,487、2013年2月12日提交的美国临时申请61/763,770；和2013年3月15日提交的美国临时申请61/788,519及2013年1月7日提交的美国非临时申请13/735,973的优先权和权益。由此将这些申请每一项的内容完整地引入作为参考。
发明领域
本发明提供了最优化以满足药物施用标准(例如，局部或鼻内施用)的疏水性治疗剂(诸如丙酸氟替卡松和曲安奈德)的无菌的纳米晶体的制备方法。
发明背景
丙酸氟替卡松[(6α,11β,16α,17α)-6,9,-二氟-11-羟基-16-甲基-3-氧代-17-(1-氧代丙氧基)雄甾-1,4-二烯-17-硫代甲酸,S-氟甲酯]，一种合成的氟化皮质类固醇。皮质类固醇是一类用作抗炎药和止痒剂的主要是合成的类固醇。丙酸氟替卡松(FP)已经作为皮质类固醇上市销售，用于治疗炎症相关疾病诸如变应性鼻炎、哮喘和特应性皮炎。通过在人中的长期应用，该分子的PK/PD性质已经非常确定。
在化学角度上丙酸氟替卡松是C25H31F3O5S。丙酸氟替卡松具有500.6的分子量。其是白色至类白色的粉末，且在水中不可溶。像其他的局部用皮质类固醇一样，丙酸氟替卡松具有抗炎、止痒和血管收缩性质。局部用类固醇的抗炎活性的机制总体而言不清楚。然而，皮质类固醇被认为通过诱导磷脂酶A2抑制蛋白质(统称为脂皮质蛋白)起作用。据推测这些蛋白质控制炎症的强效调节剂(例如前列腺素和白三烯)的生物合成，后者通过抑制其共同前体花生四烯酸的释放来实现。花生四烯酸是通过磷脂酶A2从膜磷脂释放。所述化合物具有强效的抗炎活性，且特别可用于治疗呼吸系统障碍、特别是哮喘。使用人肺细胞溶胶制备物的体外试验已经确定丙酸氟替卡松为人糖皮质激素受体激动剂，具有超过地塞米松18倍的亲和力及几乎两倍于倍氯米松-17-单丙酸酯(BMP)(布地奈德的活性代谢物)的亲和力。
丙酸氟替卡松的目前的市售形式的不良反应包括淋巴的征兆和症状；心血管心悸；过敏性反应、包括血管性水肿、皮疹、脸和舌的水肿、瘙痒、荨麻疹、支气管痉挛、喘鸣、呼吸困难和过敏性/过敏样反应；中耳炎；扁桃体炎；鼻漏/后鼻滴注/鼻涕；耳痛；咳嗽；喉炎；声嘶/发声困难；鼻出血；扁桃体炎；鼻的征兆和症状；未指定的口咽斑块(unspecifiedoropharyngeal plaques)；耳鼻和喉息肉；喷嚏；鼻窦疼痛；鼻炎；喉收缩；变应性耳、鼻和喉障碍；味觉和/或嗅觉改变或丧失；鼻中隔穿孔；鼻粘膜出血；鼻溃疡；声音变化；体液失调(fluid disturbances)；体重增加；甲状腺肿；尿酸代谢障碍；食欲紊乱；眼发炎；视力模糊；青光眼；眼内压增加和白内障；角膜炎和结膜炎；睑结膜炎；恶心和呕吐；腹痛；病毒性胃肠炎；胃肠炎/结肠炎；胃肠道感染；腹部不适；腹泻；便秘；阑尾炎；消化不良和胃障碍；异常肝功能；损伤；发热；龋齿；牙的问题；口腔发炎；口和舌障碍；胆囊炎；下呼吸道感染；肺炎；关节痛和风湿关节病；肌肉痛性痉挛和痉挛；骨折；伤口和撕裂伤；挫伤和血肿；烧伤；肌肉骨骼炎症；骨和软骨障碍；关节疼痛；扭伤/劳损(strain)；颈障碍/症状；肌肉酸痛/疼痛；疼和痛；四肢疼痛；头晕/眩晕；震颤；催眠作用；压缩神经综合征；睡眠障碍；颅神经麻痹；偏头痛；神经质；支气管炎；胸部阻塞(chest congestion)和/或症状；不适和疲劳；疼痛；水肿和肿胀；细菌感染；真菌感染；运动性障碍；囊肿、肿块和团块(masses)；心境障碍；急性鼻咽炎；呼吸困难；由于吸入导致的发炎；荨麻疹；疹/皮肤出疹(rash/skin eruption)；汗和皮脂障碍；出汗；日光性皮炎；皮炎和皮肤病；病毒性皮肤感染；湿疹；真菌性皮肤感染；瘙痒；痤疮和毛囊炎；烧伤；多毛症；红斑增加；荨麻疹；毛囊炎；色素减退；口周皮炎；皮肤萎缩；条纹；粟粒疹；脓疱性银屑病；尿路感染；细菌性生殖道感染；痛经；阴道念珠菌病；盆腔炎性疾病；阴道炎/外阴阴道炎；和不规则月经周期。
所有市售的和研究性产品的氟替卡松的作用机制均是相同的；穿透细胞质膜和之后该分子与胞质的糖皮质激素受体(通过由单个基因转录的两个分开的受体GR-α和GR-β表示)结合。在这两个受体中，GR-α与抗炎应答的产生相关。其他调节炎症的机制通过蛋白–蛋白螯合进行，后者经由与其他促炎转录因子、诸如激活蛋白(AP-1)结合进行，其导致炎症基因转录的抑制。GC-GR复合物也可以直接通过诱导抑制蛋白、例如抑制NF-κB活性的IκB来起作用。因此，抗炎作用还影响免疫通路，导致免疫抑制(使用所述药物观测到的副作用之一)。其它相关的副作用为眼部影响诸如眼内压的增加(青光眼)和白内障生长。然而，这些副作用与药物的浓度及施用途径有关。
存在适于眼部应用的氟替卡松的局部用制剂的需求。
发明概述
本发明基于制备疏水性药物的无菌的稳定的纳米晶体、诸如丙酸氟替卡松纳米晶体或曲安奈德纳米晶体的方法这一发现。本发明的方法能使疏水性药物(例如，丙酸氟替卡松和曲安奈德)纳米晶体的混悬剂成为0.0001％至10％的浓缩形式而保持尺寸、纯度、形状(棒或板)、pH和重量摩尔渗透压浓度(osmolality)。该方法使得可以在比之前已经实现用于治疗眼和皮肤炎症性障碍更高的可耐受浓度制备局部用制剂。该方法还能制备结晶程度更高的(more crystalline)疏水性药物和控制疏水性药物的纳米晶体的尺寸和粒度分布。尺寸和粒度分布的控制可通过选择该方法的具体条件来实现，诸如用于该方法的组分溶液的温度、pH和/或粘度，稳定剂的类型、分子量和/或粘度，退火/缓慢冷却持续时间(annealing duration)、声波处理输出能量、批量大小和流速。
在一个方面中，本发明提供了丙酸氟替卡松的形态(A形式)，其通过包含在约7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
本发明还提供了多种丙酸氟替卡松的纳米板，其具有约10-10000nm(例如，100-1000nm或300-600nm)的平均尺寸。
本发明还提供了纯化的丙酸氟替卡松的晶形，其通过不低于0.35g/cm3(例如，不低于0.40g/cm3、不低于0.45g/cm3、不低于0.50g/cm3或不低于0.55g/cm3)的振实密度表征。
本文描述的形态、晶形和/或纳米晶体可包括一种或多种以下特征。
所述形态进一步通过还包含在约9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
所述形态通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
所述形态具有以重量计大于80％的纯度(例如，>85％、>90％、>95％、>97％、>98％或>99％)。
所述形态通过不低于0.35g/cm3(例如，不低于0.40g/cm3、不低于0.45g/cm3、不低于0.50g/cm3或不低于0.55g/cm3)的振实密度进一步表征。
所述形态进一步通过以下表征：熔点为299.5℃，熔程为10℃。
所述形态进一步通过约1μg/g/天(在水中，在室温)的在水中的溶出度表征。
所述形态包括具有约10-10000nm(例如，100-1000nm、300-600nm、400-800nm或500-700nm)的平均尺寸的丙酸氟替卡松纳米板。
所述形态包括粒度分布范围窄的丙酸氟替卡松纳米板。换言之，纳米板尺寸基本均一。
所述形态包括具有50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm或5000-10000nm的粒度分布的丙酸氟替卡松纳米板。
所述纳米板各自具有5nm至500nm(例如，5-400nm、5-200nm、10-150nm或30-100nm)的厚度。
所述纳米板具有基本正交于限定所述纳米板厚度的表面的[001]晶轴。
所述大量的纳米板通过不低于0.35g/cm3(例如，不低于0.40g/cm3、不低于0.45g/cm3、不低于0.50g/cm3或不低于0.55g/cm3)的振实密度表征。
所述大量的纳米板通过以下表征：熔点为299.5℃，熔程为10℃。
所述大量的纳米板通过约1μg/g/天(在水中，在室温)的在水中的溶出度表征。
所述大量的纳米板通过包含在7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
所述大量的纳米板进一步通过还包含在约9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
所述大量的纳米板通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
所述大量的纳米板具有以重量计大于80％的纯度(例如，>85％、>90％、>95％、>97％、>98％或>99％)。
所述晶形进一步通过以下表征：熔点为299.5℃，熔程为10℃。
所述晶形进一步通过约1μg/g/天(在水中，在室温)的在水中的溶出度表征。
所述晶形进一步通过包含在7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
所述晶形进一步通过还包含在约9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
所述晶形通过基本类似于图31A中所示的X-射线粉末衍射图表征。
所述晶形具有以重量计大于80％的纯度(例如，>85％、>90％、>95％、>97％、>98％或>99％)。
在另一个方面，本发明提供了曲安奈德的新的形态、即B形式，其通过包含在约11.9、13.5、14.6、15.0、16.0、17.7和24.8度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
B形式进一步通过包含在约7.5、12.4、13.8、17.2、18.1、19.9、27.0和30.3度2θ的另外的峰的X-射线粉末衍射图表征。
B形式通过基本类似于图39中红色的谱线的X-射线粉末衍射图表征。
B形式基本不含杂质。
B形式具有大于85％、大于90％、大于92％、大于95％、大于96％、大于97％、大于98％或大于99％的纯度。
本发明还提供了制备上文所述的大量的纳米板的方法。所述方法包括:
提供相I溶液(例如，无菌的溶液)，其包含丙酸氟替卡松和用于丙酸氟替卡松的溶剂；
提供相II溶液(例如，无菌的溶液)，其包含至少一种表面稳定剂和用于丙酸氟替卡松的抗溶剂，其中所述至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂；
将相I溶液与相II溶液混合，得到相III混合液，其中当混合这两种溶液时使用声波处理，且该混合在不超过25℃的第一个温度进行；和
将相III混合液在高于第一个温度的第二个温度退火(annealing)一段时间(T1)，以致生成含大量丙酸氟替卡松的纳米板的相III混悬物。
在另一个方面，本发明提供了制备疏水性治疗剂的纯化的、稳定的、无菌的纳米晶体的方法。所述方法包括:
提供含疏水性治疗剂和用于该疏水性治疗剂的溶剂的相I溶液(例如，无菌的溶液)；
提供含至少一种表面稳定剂和用于该疏水性治疗剂的抗溶剂的相II溶液(例如，无菌的溶液)；
将相I溶液和相II溶液混合，得到相III混合液，其中所述混合在不超过25℃的第一个温度进行；和
将相III混合液在超过第一个温度的第二个温度退火一段时间(T1)，以致生成含大量该疏水性治疗剂的纳米晶体的相III混悬物。
本文所述的方法可包括一种或多种以下特征。
所述疏水性治疗剂是甾体药物、诸如皮质类固醇。
所述疏水性治疗剂是氟替卡松或其酯或曲安奈德。
所述疏水性治疗剂是丙酸氟替卡松。
当混合无菌的相I溶液和无菌的相II溶液时，使用声波处理(例如，功率10-75W或约50-70W)。
所述第一个温度为-10℃至30℃、-10℃至25℃(例如，22℃或不超过20℃)、或-5℃至10℃、或0℃至5℃、或0℃至2℃、或2℃至4℃、或2℃至8℃的温度。
所述第二个温度为4℃至60℃、或10℃至40℃、或15℃至25℃的温度。
T1为至少8小时。
相II溶液中的至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂。
所述纤维素表面稳定剂是分子量不超过100kDa的甲基纤维素。
所述甲基纤维素在相III混悬物中的浓度为约0.1％至0.5％。
用于相II溶液的纤维素表面稳定剂是水溶液。
纤维素表面稳定剂的水溶液具有不超过4000cP(例如，不超过2000cP、不超过1000cP、不超过500cP、不超过100cP、不超过50cP、不超过30cP或不超过15cP)的粘度。
纤维素表面稳定剂的水溶液具有约4cP至50cP的粘度，且所述纤维素表面稳定剂是甲基纤维素。
所述抗溶剂包括水(例如，蒸馏水)。
相II溶液中的至少一种表面稳定剂还包含苯扎氯铵。
相II溶液中的苯扎氯铵浓度为约0.005％至0.15％(例如，约0.01％-0.12％或0.02％-0.08％)。
相II溶液的pH值不超过6.5或不超过6.0或不超过5.5。
相I溶液的溶剂包括聚醚。
所述聚醚选自聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)及其混合物。
所述聚醚选自PEG400、PPG400及其混合物。
相I溶液中PEG 400的浓度为约20至35％。
相I溶液中PPG 400的浓度为约65％至75％。
相I溶液的溶剂包括一种或多种多元醇、诸如单体的多元醇(例如，甘油、丙二醇和乙二醇)和聚合的多元醇(例如，聚乙二醇)。
相I溶液还包含表面稳定剂。
相I溶液中的表面稳定剂是吐温80，例如以约7.0％至15％的浓度存在于相I溶液中的吐温80。
相I溶液与相II溶液的体积比例范围为1:10至10:1(例如，1:3至3:1，或1:2至2:1，或约1:1)。
纤维素表面稳定剂是分子量不超过100kDa的甲基纤维素，第一个温度是0℃至5℃的温度，第二个温度是10℃至40℃的温度，且T1为至少8小时。
所述方法还包括通过切向流过滤或通过连续流动离心纯化所述疏水性治疗剂的大量纳米晶体。所述方法可进一步包括通过例如过滤、真空干燥或离心来干燥所述疏水性治疗剂的大量纳米晶体。所述方法可进一步包括在通过例如离心纯化纳米晶体后，将纯化的纳米晶体与适合的水溶液混合，可以向所述水溶液中加入另外的赋形剂，从而形成符合FDA眼或皮肤施用标准的最终制剂。例如，所述混合在混合器(例如，Silverson Lab Mixer)中、在室温、以6000RPM进行约60分钟或更长时间。
通过将氟替卡松的无菌的相I溶液与含苯扎氯铵、甲基纤维素和蒸馏水的无菌的相II溶液混合，以便制备含氟替卡松纳米晶体的混悬物的相III混悬物，来制备氟替卡松的纯化的、稳定的、无菌的纳米晶体。纳米晶体为400-800nm。为了纯化，即为除去和/或减少相I溶液和相II溶液的结晶溶剂的浓度，将氟替卡松纳米晶体进行洗涤，并交换至适合的水溶液中。所述交换例如通过使用切向流过滤(TFF)或中空纤维过滤筒进行。在一些方面中，将纳米晶体交换至符合FDA眼或皮肤施用标准的制剂中。或者将纳米晶体交换至无菌的水溶液中，向所述水溶液中加入另外的赋形剂，以形成符合FDA眼或皮肤施用标准的最终制剂。在最终的含水缓冲溶液中的氟替卡松浓度为约0.0001％至10％(w/v)。在一些方面中，在缓冲液交换步骤之前进行退火步骤。退火步骤在约25-40℃进行并进行约30分钟至24小时的时间。
优选地，相I溶液的氟替卡松的浓度为约0.4％至1.0％w/v。更优选地，相I溶液的氟替卡松的浓度为约0.45％w/v。
在一些方面中，相I溶液还包含吐温80、聚乙二醇(PEG)400和聚丙二醇(PPG)400。吐温80的浓度为约7.0％至15％w/v。PEG 400的浓度为约20至35％(w/v)。PPG 400的浓度为约65％至75％(w/v)。在一个优选的实施方案中，相I溶液包含约0.45％w/v的浓度的氟替卡松、约7.44％的浓度吐温80、约23％(w/v)的浓度的PEG 400和约69.11％(w/v)的浓度的PPG400。
相I和相II的混合在不超过8℃的温度(例如，0-2℃、2-4℃或2-8℃)进行。相I与相II的体积比率为0.15至0.3或1:1至1:3。将相I溶液与相II溶液以0.5至1.4ml/分钟的流速混合，其中所述相II溶液是固定的。参见例如图3。在其他的实施方案中，在流动反应器中通过将相I溶液以0.5-900ml/分钟(例如，0.5-2.0ml/分钟、10-900ml/分钟、12-700ml/分钟、50-400ml/分钟、100-250ml/分钟或110-130ml/分钟)的流速与相II溶液以2.5-2100ml/分钟(例如，2.5-10ml/分钟、10-900ml/分钟、12-700ml/分钟、50-400ml/分钟、100-250ml/分钟或110-130ml/分钟)的流速组合形成相III。参见，例如图4。在一些实施方案中，相I溶液的流速和相II溶液的流速基本上是相同的。在其他的实施方案中，相I的流速低于相II的流速，例如，相I溶液与相II溶液的体积比率为约1:2或1:3。在一些实施方案中，流动反应器产生的相III混悬物的流速为约20-2800ml/分钟(例如，约100-800ml/分钟或200-400ml/分钟)。任选地，对相III混合液进行声波处理。
在一些实施方案中，最终的含水缓冲液包含甲基纤维素、渗透促进剂和润湿剂。甲基纤维素的浓度为例如约0.5％(w/v)。
本发明还包括本发明的方法产生的大量纳米晶体和含所述纳米晶体的组合物(例如，药物组合物)。所述组合物基本没有有机溶剂。纳米晶体具有400-800nm(例如，300-600nm、400-600nm或500-700nm)的范围的平均尺寸。纳米晶体不聚结，且经24小时的时间尺寸不增加。所述纳米晶体为纳米板，例如，丙酸氟替卡松纳米板具有基本正交于限定所述纳米板厚度的表面的[001]晶轴。所述纳米板可以具有约5nm至100nm的范围的厚度。任选地，纳米晶体被甲基纤维素涂覆。
本发明还提供了无菌的局部用纳米晶体氟替卡松制剂，其包含0.0001％-10％w/v的本发明的氟替卡松纳米晶体和药学上可接受的含水赋形剂的混悬物。在一些方面中，所述制剂在20℃具有10-20cP的粘度。所述制剂的重量摩尔渗透压浓度为约280-350mOsm/kg。所述制剂的pH为约6-7.5。
在另一个方面，本发明提供了通过向有需要的个体施用、例如向有需要的个体的睑缘、皮肤或眼表面局部施用有效量的本发明的制剂(例如，局部用制剂)来治疗或减轻眼障碍的症状(例如，睑缘炎、睑板腺功能不良、术后痛或术后眼部炎症、干眼、眼变态反应或眼色素层炎)的方法。所述制剂例如通过使用涂药器(例如，刷子或药签)施用。在一个实施方案中，通过例如涂药器(例如，刷子诸如刷或药签、诸如25-3317-U药签)，将治疗有效量的所述制剂施用于有需要的个体用于治疗睑缘炎。在一些实施方案中，所述制剂是含本发明的0.001％-5％FP纳米晶体(例如，0.01-1％或约0.25％、0.1％或0.05％)和药学上可接受的含水赋形剂的混悬物的无菌的局部用纳米晶体丙酸氟替卡松制剂。在一些实施方案中，所述制剂还包含约0.002-0.01％(例如50ppm±15％)的苯扎氯铵(BKC)。在一些实施方案中，所述制剂还包含一种或多种包衣分散剂(例如，泰洛沙泊、聚山梨酯80和PEG硬脂酸酯、诸如PEG40硬脂酸酯)、一种或多种组织润湿剂(例如，甘油)、一种或多种聚合的稳定剂(例如，甲基纤维素4000cP)、一种或多种缓冲剂(例如，磷酸氢二钠Na2HPO4和磷酸二氢钠NaH2PO4和/或一种或多种张度调节剂(tonicity adjusting agent)(例如，氯化钠)。在一些实施方案中，所述制剂在20℃具有40-50cP的粘度。在一些实施方案中，制剂的重量摩尔渗透压浓度为约280-350(例如，约285-305)mOsm/kg。在一些实施方案中，制剂的pH为约6.8-7.2。在一些实施方案中，所述制剂在20℃具有40-50cP的粘度。在一些实施方案中，制剂中的FP纳米晶体具有300-600nm的中位尺寸、500-700nm的平均尺寸、300-600nm的D50值和/或低于2μm(例如，低于1.5μm)的D90值。
在又一个方面，本发明提供了通过向有需要的个体施用有效量的本发明的药物组合物来治疗或减轻呼吸系统疾病(例如，哮喘或慢性阻塞性肺疾病(COPD))、鼻炎、皮炎或食管炎的方法。
还提供了药物组合物，其包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂以及通过本发明的方法制备的疏水性药物(例如，丙酸氟替卡松)的纳米晶体。所述组合物可以是干粉剂/吸入剂、眼用制剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、丸剂等形式。
在另一个方面本发明提供了半柔性的聚氨酯涂药器，其包含本发明的氟替卡松纳米晶体和药学上可接受的含水赋形剂。
在又一个方面中，本发明提供了外科手术装置或可植入装置(例如，支架、血管成形术气球、导管、分流器、入口设备(access instrument)、导线、移植物系统、血管内成像装置、血管闭合装置、内窥镜配件或本文公开的其他装置)，其涂覆有或浸透着本发明的丙酸氟替卡松晶体。在一些实施方案中，将丙酸氟替卡松晶体涂覆或包埋至外科手术或可植入装置中改变了该药物的释放时间。例如，将丙酸氟替卡松晶体涂覆或包埋至外科手术或可植入装置中延长了该药物的释放时间。
除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然与本文所述的那些相似或等同的方法和材料可用于实施本发明，但仍然在下文描述了适合的方法和材料。所有本文提及的出版物、专利申请、专利和其他参考文献的全部内容明确引入本文作为参考。如果有矛盾，以本说明书、包括定义为准。此外，本文描述的材料、方法和实施例仅仅是说明性的，而不是意欲进行限制。
本发明的方法的优势包括所述产物(例如，所述疏水性药物的纳米晶体)比该药物的原料(stock material)更纯(或至少不会更不纯)、结晶程度更高和/或更稳定原料。优势还包括所述产物的尺寸和粒度分布是可控的且产物的尺寸可以是基本上均匀的(其可导致在体内更高地控制药物释放)，以及本发明的方法很少或不引起药物分解。本发明的其他特征和优势通过以下详述和权利要求将是显而易见的。
附图简述
图1是丙酸氟替卡松物理和化学特征的概述。
图2是丙酸氟替卡松及其常见杂质的HPLC色谱图。
图3是本发明方法的一个实施方案的流程(称为“分批方法)。
图4本发明方法的另一个实施方案的流程(称为“流动方法”)。
图5是显示如下内容的图：通过改变相II溶液的具体组成，丙酸氟替卡松纳米晶体平均尺寸是可控的。
图6是显示如下内容的图：通过自顶向下技术，诸如微流化(microfluidization)、气流粉碎(jet-milling)、超声处理(湿磨)和匀化，制备的丙酸氟替卡松的粒度。
图7是显示相II溶液的pH对丙酸氟替卡松的粒度的影响的图。
图8是显示相II溶液中不同的稳定剂对丙酸氟替卡松的粒度的影响的图。
图9是显示相III混合物的pH对丙酸氟替卡松的粒度的影响的图。
图10是显示纯化的丙酸氟替卡松纳米晶体不随着时间推移而聚集的图。
图11是显示如下内容的图：当混合相I溶液和相II溶液时，温度对丙酸氟替卡松的粒度的影响。
图12是显示如下内容的图：退火温度对在相III混悬物中具有0.1％浓度的丙酸氟替卡松的粒度的影响。
图13是显示如下内容的图：退火温度对在相III混悬物中具有10％浓度的丙酸氟替卡松的粒度的影响。
图14是显示过滤器类型对药物晶体损失的影响的图。
图15是显示过滤器孔径对药物晶体损失的影响的图。
图16是显示作为批规模(从左至右：20g、100g、250g、1000g和2000g)的函数的制剂的分散性的图。
图17是显示作为丙酸氟替卡松浓度(从左至右：10％、5％、1％、0.1％、0.05％、0.01％和0.005％)的函数的制剂的分散性的图。
图18是显示作为时间的函数的制剂的均匀性的图。
图19是流动反应器的示意图。
图20是显示在所述流动方法中流速对丙酸氟替卡松的粒度的影响。
图21A-C是显示以下内容的图：由所述分批方法制得的丙酸氟替卡松纳米晶体的粒度分布、由匀化制得的丙酸氟替卡松颗粒和从制造商获得的丙酸氟替卡松原料。
图22是一组显示在25℃和40℃达至多75天的丙酸氟替卡松纳米混悬剂稳定性的图。
图23是显示以下内容的图：匀化的丙酸氟替卡松(1-5微米，由灰色正方形点表示)和由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体(400-600nm，由黑色菱形点表示)的溶出度。
图24A和24B分别是丙酸氟替卡松原料和由所述分批方法制备的纳米晶体的色谱图。
图25A和25B分别是由所述分批方法制备的干燥的丙酸氟替卡松晶体和丙酸氟替卡松原料的光学显微照片(型号:OMAX,1600X)原料。
图26A和26B是由所述分批方法制备的干燥的丙酸氟替卡松晶体的扫描电子显微照片。
图27A和27B分别是干燥的丙酸氟替卡松原料和由匀化制备的丙酸氟替卡松晶体的扫描电子显微照片。
图28A和28B分别是由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体和丙酸氟替卡松原料的组合DSC/TGA。
图29是由本发明的分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的傅里叶变换红外光谱扫描图(Fourier Transform Infrared Spectroscopic Scan)。
图30是丙酸氟替卡松原料的傅里叶变换红外光谱扫描图。
图31A是由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的XRPD图(黑色)。
图31B是由所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的XRPD图(黑色)，其与交盖的多晶型物1(红色)和多晶型物2(蓝色)的计算的XRPD图交盖。蓝色的箭头显示XRPD图中的一些区别。
图32是显示本发明的方法制备的曲安奈德晶体的粒度分布的图。
图33是曲安奈德原料的DSC扫描图。
图34是本发明的方法制备的曲安奈德晶体的DSC扫描图。
图35是曲安奈德原料的热重分析。
图36是本发明的方法制备的曲安奈德晶体的热重分析。
图37A-E是不同放大倍率的曲安奈德原料和本发明的方法制备的曲安奈德晶体的扫描电子显微照片：A和B–分别在100X和5000X放大倍率的曲安奈德原料；C、D和E–分别在100X、5000X和10,000X放大倍率的由本发明的方法制备的曲安奈德晶体。
图38是显示用于丙酸氟替卡松纳米晶体的制备和纯化的本发明的方法的实施方案的示意图。
图39是本发明的方法制备的曲安奈德纳米晶体的XRPD图(红色)，其与曲安奈德原料的XRPD图(蓝色)交盖。蓝色的箭头显示XRPD图中的一些区别。
发明详述
本发明描述了用以制备疏水性治疗剂(诸如丙酸氟替卡松)的无菌的纳米晶体(任选地纳米混悬剂)的方法和组合物，其被最优化以符合药物施用标准(例如，局部或鼻内施用)。通过所述方法制备的组合物理想地适用于炎性障碍的局部治疗，诸如眼部障碍和皮肤障碍。通过所述方法制备的组合物还理想地适用于所述组合物中的疏水性药物所应用的障碍的全身或非全身治疗，诸如炎性障碍、呼吸系统障碍、自身免疫性疾病和癌症。
当施用于有需要的个体时，通过本发明的方法制备的药物纳米晶体可以是适用于具体的施用途径的各种形式，例如滴眼剂、凝胶剂、软膏剂、干粉末、凝胶剂、气雾剂或胶态混悬剂(例如，液体混悬剂)的形式。例如，药物纳米晶体为混悬于另一种作为“连续”相的相中的“分散”相。纳米混悬剂可以定义为，通过适合的方法制备并通过适合的稳定剂或表面稳定剂稳定的纳米尺寸的药物颗粒的胶态分散体。除非另外说明，否则术语“稳定剂”、“表面稳定剂”和“空间稳定剂(steric stabilizer)”在本文中可以互换使用。在一个实施方案中，将药物递送或配制以用于经由全身或局部途径的递送。例如，将药物递送或配制以用于直接或经由涂药器(例如，刷子或药签)递送。例如，将药物递送或配制以用于经由局部途径递送至组织、诸如眼组织和/或附器(adnexa)。可以将药物递送或配制以用于经眼内、玻璃体内、视网膜下、囊内、脉络膜上、眼球筋膜囊下(subtenon)、结膜下、前房内、睑内、穹窿、眼球后或眼球周注射而递送。还可以将药物递送或配制以用于经由局部施用递送至组织、诸如眼组织和/或附器。还可以将药物递送或配制以用于经由可植入或外科手术(例如，药物递送)设备递送。
不溶性药物的纳米混悬剂、诸如纳米晶体混悬剂通过增强生物利用度可以显著降低其有效浓度。“生物可利用”意指是分子上可供细胞吸收的溶解的药物。
丙酸氟替卡松几乎不溶于水中，溶解度为0.14微克/ml。由于大多数眼用混悬剂是含水的，不溶性药物的粒度决定了其在任何给定时间成为溶解的药物(或生物可利用药物)的溶出度。提高生物利用度的一个方式是确保完全溶解的药物溶液。对于不溶性药物，提高不溶于水的药物的生物利用度的方式是通过利用微粉化或纳米级的剂型。在丙酸氟替卡松的情况中，通过降低粒度显著增加了溶出度。800-900nm尺寸的丙酸氟替卡松颗粒的释放速率是>10微米的颗粒的许多倍。因此，丙酸氟替卡松的纳米混悬剂具有产生强效药物的潜力，其在不引起不利副作用的浓度有效。浓度较高时，丙酸氟替卡松可以引起眼内压升高，导致青光眼和白内障。如果药物是纳米微粒或是更溶于水的形态，则可以预见更低浓度的有效的丙酸氟替卡松的制剂。对于丙酸氟替卡松，市售药品的有效浓度范围为0.005％(克廷肤)和0.5％(Flonase)。因此，使得药物在以前对于所述适应症不曾考虑的浓度“有效”，是一个令人惊讶和不可预期的结果。类似地，对于另一种疏水性药物曲安奈德(在28℃水溶解度为17.5μg/mL)，当药物为例如通过本发明的方法生成的纳米颗粒形式时，可获得在预料不到的更低的曲安奈德浓度的TA的有效的制剂，所述浓度对于具体适应症而言是以前不曾考虑过的。
因此，在需要立即缓解、然后持续缓解的局部用药的设计中，推测还具有生物粘附性的纳米晶体混悬剂将有助于增加药物的停留时间，同时增加生物利用度。在本发明描述的实例中，开发丙酸氟替卡松混悬剂用于治疗睑缘炎，其特征为眼睑的炎症和感染。然而，本文描述的丙酸氟替卡松组合物还可以用于预防或治疗其他眼部炎性病症。例如，本发明中描述的组合物可以用于外科手术后的术后护理。例如，本发明的组合物可以用于术后疼痛的控制、术后炎症的控制、氩激光小梁成形术和屈光性操作(photorefractiveprocedures)。此外，丙酸氟替卡松组合物可以用于治疗其他眼部障碍、诸如眼部变态反应、变应性结膜炎、囊样黄斑水肿、眼色素层炎或睑板腺功能不良。此外，丙酸氟替卡松组合物可以用于治疗皮肤障碍、诸如特应性皮炎、皮肤损害、湿疹、银屑病或疹。
疏水性药物的稳定的纳米晶体制造的挑战
纳米混悬剂的成功的制造具有两个主要挑战。第一个挑战是生成所需尺寸的颗粒。对大多数不溶于水的药物，所需的粒度是亚微米，范围为从低nm至高(10-990nm)。第二步是长期保持粒度。这两个步骤都具有挑战性。
通常通过“自顶向下”的技术制备药物混悬剂，通过该技术将分散体机械地破碎为更小的颗粒。技术诸如湿磨、声波处理、微流化和高压匀化为该技术的实例以创造微粉化和纳米化颗粒。在高压匀化中，由该方法得到的纳米晶体尺寸不仅取决于药物原料的硬度，还取决于匀化压力和循环次数。然而，其不取决于稳定剂的类型。因此，稳定剂的功效–是否能防止颗粒聚集–在加工后和存储期间显示。因此，理解所用特定方法中颗粒形成所涉及的现象是极其重要的。
在研磨或机械的粒度降低方法期间，在研磨容器中两个相反的过程相互影响:原料碎裂为更小的颗粒和通过颗粒间碰撞的导致的颗粒增长。这两个相反的现象的发生取决于工艺参数。通常在某个时间点后，粒度已经达到恒定水平，且继续研磨不进一步降低粒度。在一些情况中，研磨时间的增加甚至可导致粒度的逐渐增加和原料的多相性，而通过降低的研磨速度实现降低的粒度。研磨期间还可能发生物理形式的改变或无定形化。超过某临界压力值的机械压力增加晶格振动，其使晶格不稳定。缺陷的数量增加，且向无定形态的转化在临界缺陷浓度以上发生。在颗粒减小技术期间对药物晶体的高应力导致晶体结构的去稳定作用，结晶度的损失，且有时转变为较不稳定的多晶型物。晶体结构中无定形区的出现导致粒度的逐渐增加，因为混悬剂变回稳定的晶体形态。
纳米晶体制备的另一个挑战是颗粒尺寸的逐渐增加，也称为“奥斯特瓦尔德成熟(Ostwald Ripening)”。胶态混悬剂中的晶体生长通常被称为奥斯特瓦尔德成熟，且是粒度和粒度分布改变的原因。奥斯特瓦尔德成熟源自颗粒溶解性对它们尺寸的依赖性。根据Ostwald–Freundlich方程，小晶体具有比更大的晶体更高的饱和溶解度，在小和大的晶体之间造成药物浓度梯度。因此，分子从环绕小晶体的较高浓度扩散至具有较低药物浓度的较大晶体附近的区域。这产生大晶体周围的过饱和的溶液状态，导致药物结晶至大晶体上。该扩散过程得到环绕小晶体的不饱和溶液，引起药物分子从小晶体溶出至大量介质中。该扩散过程继续直至所有的小晶体溶解。奥斯特瓦尔德成熟实质上是较小晶体变为大颗粒晶体的过程。这随后导致胶态混悬剂的晶体大小和粒度分布变化至更高的范围。连续相中溶解的药物的分散体也总是导致粒度的不稳定性。
纳米晶体的另一个挑战是颗粒的成团或结块。稳定剂在分散体的稳定中起关键作用。稳定剂需要吸附在颗粒表面以实现适当的稳定。此外，吸附应当足够强以持续长时间。稳定剂的吸附可通过离子相互作用、氢键、范德华力或离子偶极相互作用或通过疏水作用发生。
在选择药物–稳定剂对之前始终需要考虑稳定剂的官能团和药物原料之间的可能的相互作用。许多药物具有含能相互作用的官能团如酚类、胺、羟基、醚类或羧酸基团的结构。强离子相互作用、氢键、偶极子-诱导的力和弱的范德华或伦敦(London)相互作用可增加或妨碍颗粒形成。稳定剂的浓度水平也重要。吸附/面积是通常不依赖于粒度的表面性质。由于吸附量与表面积相关，这意味着稳定剂的总量与晶体大小直接相关。当吸附导致的自由能的减少补偿所伴随的熵损失时，发生聚合物分子至晶体表面的吸附。由于空间稳定化基于吸附/解吸附过程，所以加工变量、诸如稳定剂的浓度、粒度、溶剂等对于稳定剂的功效是重要的因素。
稳定晶体大小的另一种方法为微粒混悬物在特定稳定剂的存在下的喷雾干燥，所述技术已经用于制备丙酸氟替卡松的喷雾的微粒。与自顶向下方法的组合还用于制备所需尺寸的颗粒。稳定粒度的又一种方法是冻干微粒混悬物。
通常用于制备纳米混悬剂的其他方法是抗溶剂沉淀方法，由此将药物溶液在抗溶剂中沉淀为纳米晶体。该途径被称为“自下而上”的结晶途径，由此原位制备纳米晶体。沉淀作为纳米晶体的药物通常伴随匀化或声波处理。如果在沉淀之前将药物溶于有机溶剂、诸如丙酮中，则在形成颗粒后必须除去有机溶剂。这通常通过蒸发溶剂进行。该蒸发步骤造成该颗粒形成方法的挑战，因为蒸发过程可以改变颗粒稳定化的动力学，常见为粒度的快速增加。此外，残留水平的有机溶剂常常保持结合至在制剂中使用的赋形剂。因此，通过研究，该方法具有其挑战性，且一般不优选。
通过本发明定义的方法制备疏水性药物的纳米晶体不使用需要除去的有毒的有机溶剂，且不显示以上章节中定义的颗粒不稳定性。
本发明的核心特征
本发明提供了可以制备药物(例如，疏水性药物)的纳米晶体或含纳米晶体的混悬剂的声波处理结晶(sonocrystallization)/纯化方法。所述方法:(a)在制备纳米晶体之前对所有的组分进行无菌的过滤，(b)制备期望尺寸的晶体，(c)通过使用特定的空间稳定组合物结合在特定温度退火，来稳定纳米晶体，(d)通过另一种连续相替换初始连续相，为配方设计师(formulator)提供了纯化所述颗粒的灵活性和(d)提供了在最终制剂介质中实现最终所需的药物浓度的灵活性。在步骤(d)中，纯化步骤的意义可能是本发明的主要和关键的方面，因为产生和稳定具有期望尺寸的颗粒的所述组合物是差别细微的(nuanced)并依赖于以下参数：离子强度、聚合物分子量和结构及pH。用于产生所述颗粒的所述组合物通常不是配方设计师设想的作为最终制剂的组合物或最终药物浓度。这通过喷雾干燥或冻干实现。通过该方法生成的纳米晶体的尺寸范围为100nm-500nm、500-900nm、400-800nm和900nm至10000nm。优选地纳米晶体的尺寸范围为400-800nm(例如，400-600nm)。本发明的纳米晶体的尺寸和粒度分布可以通过常规方法、诸如动态光散射(DLS)、扫描电子显微镜检术(SEM)、透射电子显微镜(TEM)和X射线粉末衍射(XRPD)测定。在本发明中，通过与最终的生物相容的、组织相容的缓冲液交换纯化纳米晶体。
两部分方法:该方法特征为制备纳米晶体的两部分方法，如步骤1和步骤2所定义。任选地，所述方法为单个步骤，由此最终制剂在单个步骤(仅步骤1)中制备。对于两步骤方法(步骤1，随后进行步骤2)，所述方法的第一个部分是所需尺寸的纳米晶体的制备(步骤1)。所述方法的第二个部分是纳米晶体纯化，从而得到用于最终制剂的以所需药物浓度混悬的高纯度的纳米晶体和最佳的赋形剂组合物(步骤2)。
药物浓度:在一个优选的实施方案中，初始纳米晶体浓度(步骤1后)是0.1％药物(例如，皮质类固醇、诸如FP)，但最终制剂可以高至10％(步骤2后)。混悬物的初始浓度可低于0.1％(步骤1中)，并在纯化方法(步骤2)期间浓缩至10％，其具有同样的介质组成或不同的介质组成。混悬物的初始浓度可以是0.1％或低于0.1％、优选0.06％。初始混悬物可以纯化至更低的浓度(步骤2中)，其具有同样的介质组成或不同的介质组成。在优选的组合物中，初始混悬物可以以0.06％的浓度形成(步骤1中)，并纯化至0.06％或更低(步骤2中)，其具有同样的初始介质组成或不同的介质组成。纳米混悬剂的初始浓度可以是1％、1％-0.5％、0.5％-0.1％、0.1％-0.05％、0.05％-0.01％、0.01％-0.005％、0.005％-0.001％、0.001％-0.0005％、0.0005％-0.0001％、0.0001％-0.00001％。
步骤1包括将药物在FDA-批准的赋形剂中溶解以得到相I。然后将该溶液(相I)经由0.22微米PVDF(聚偏二氟乙烯)过滤器无菌过滤。制备具有一定粘度、pH和离子强度的含特定的空间稳定剂的组合物的溶液。这是相II。在一个实施方案中，药物为甾体药物。在一个优选的实施方案中，药物是丙酸氟替卡松。在另一个优选的实施方案中，药物是糠酸氟替卡松。在另一个实施方案中，药物丙酸氟替卡松的任何盐形式。
在一个实施方案中，步骤1包括:
提供含疏水性治疗剂和用于所述疏水性治疗剂的溶剂的相I溶液(例如，无菌的溶液)；
提供含至少一种表面稳定剂和用于所述疏水性治疗剂的抗溶剂的相II溶液(例如，无菌的溶液)；
将相I溶液和相II溶液混合，得到相III混合液，其中所述混合在不超过25℃的第一个温度进行；
将相III混合液在超过第一个温度的第二个温度退火一段时间(T1)，以生成含疏水性治疗剂的大量纳米晶体的相III混悬物，和
任选地通过例如切向流过滤、中空纤维过滤筒或离心(例如，连续流动离心)纯化所述纳米晶体。
任选地，以约1.6L/min在约39,000xg进行离心。
任选地，步骤1包括在退火步骤之后和纯化步骤之前用溶液稀释的步骤。例如，稀释步骤包括将纳米晶体在溶液中的再分散。用于稀释的溶液可以包括约0.002-0.01％(例如50ppm±15％)苯扎氯铵、0.01-1％聚山梨酯80(例如，约0.2％)、0.01-1％PEG40硬脂酸酯(例如，约0.2％)、缓冲剂(例如，柠檬酸盐缓冲液、pH 6.25)和水。将纯化(例如，离心期间)期间形成的小球再分散至最终制剂中(参见，例如图38)。可将该小球加入适合的水溶液中以再分散在混合器(例如，Silverson Lab Mixer)中的纳米晶体。所述再分散可以在室温以6000RPM进行约45mins或更长时间(例如，约60mins或更长时间)，得到符合FDA眼或皮肤施用标准的最终制剂。所述制剂可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
例如，所述疏水性治疗剂是类固醇。
例如，所述疏水性治疗剂是丙酸氟替卡松或曲安奈德。
例如，所述至少一种表面稳定剂包含纤维素表面稳定剂、诸如甲基纤维素。
例如，所述甲基纤维素具有不超过100kDa的分子量。
例如，用于相II溶液的纤维素稳定剂(例如，甲基纤维素)具有4cP至50cP的粘度，例如，15-45cP。
例如，第一个温度例如不超过20℃、不超过8℃，例如<4℃或<2℃或0-4℃。
例如，第二个温度即退火温度为20℃至60℃。
例如，降低纳米晶体的粒度和/或硬化纳米晶体(例如，为增加纳米晶体的硬度)需要退火步骤。
例如，以约1.6L/min在约39,000x g进行连续流动离心。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有10nm至10000nm(例如，50-5000nm、80-3000nm、100-5000nm、100-2000nm、100-1000nm或100-800nm)的平均尺寸。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有适于通过显微针(即、27-41号)递送的粒度。例如，当在眼的脉络膜周隙中注射时，所述纳米晶体可以有效递送至眼的背面或将更缓慢地溶解以使得药物治疗靶组织而不浸析至眼前部的组织、诸如晶状体、睫状体、玻璃质等，由此最小化眼的副作用、诸如高眼内压(IOP)或白内障形成。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有窄的粒度分布范围。换言之，所述纳米晶体大小基本均匀。
例如，纳米晶体’D90和D10值的比例低于10，例如，低于5、低于4、低于3、低于2或低于1.5。例如，纳米晶体具有50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm或5000-10000nm的粒度分布。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有不超过5000nm(例如，不超过4000nm、不超过3000nm、不超过2000nm、不超过1000nm、不超过900nm、不超过800nm、不超过700nm、不超过700nm、不超过600nm、不超过500nm、不超过400nm、不超过300nm、不超过200nm、不超过100nm或不超过80nm)的D90值。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体涂覆有甲基纤维素。
例如，通过本文所述的方法制备的甲基纤维素-涂覆的纳米晶体是稳定的，例如，它们不聚集。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体为具有400-600nm的粒度分布的丙酸氟替卡松纳米晶体。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体为具有300-400nm的粒度分布的曲安奈德纳米晶体。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体为液体混悬剂或干粉剂形式。
例如，通过本文所述的方法制备的纳米晶体具有0.0001％至10％、至20％、至30％、至40％、至50％、至60％、至70％、至80％、至90％、至99％或至99.99％的浓度。
例如，当混合相I和II溶液时，应用声波处理。
例如，在相II溶液中甲基纤维素的浓度范围为0.1％至0.5％(例如，0.2-0.4％)。
例如，相II溶液还包含第二种稳定剂，例如，0.005％至0.1％(例如，0.01-0.02％)的浓度范围的苯扎氯铵。
例如，当疏水性药物是丙酸氟替卡松时，相II溶液具有5.5的pH。
例如，当疏水性药物是曲安奈德时，相II溶液具有约4的pH。
例如，相I溶液的溶剂包括聚醚。
例如，所述聚醚选自聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)及其混合物。
例如，所述聚醚选自PEG400、PPG400、PEG40-硬脂酸酯及其混合物。
例如，在相I溶液中PEG 400的浓度为约20至35％。
例如，在相I溶液中PPG 400的浓度为约65％至75％。
例如，相I溶液的溶剂包括一种或多种多元醇、诸如单体的多元醇(例如，甘油、丙二醇和乙二醇)和聚合的多元醇(例如，聚乙二醇)。
例如，相I溶液的溶剂包括一种或多种单体的多元醇。
例如，相I溶液还包含表面稳定剂。
例如，相I溶液中的表面稳定剂是吐温80，例如在相I溶液中浓度为约7.0％至15％的吐温80。
例如，相I溶液中的疏水性药物的浓度为约0.1-10％，例如，0.1至5.0％、0.2-2.5％或0.4至10％。
例如，当疏水性药物是FP时，FP在相I溶液中的浓度约0.1-10％，例如，0.4至1.0％。
例如，相I溶液与相II溶液的体积比率范围为1:10至10:1(例如，1:3至3:1，或1:2至2:1，或约1:1)。
例如，纤维素表面稳定剂是分子量不超过100kDa的甲基纤维素，第一个温度是0℃至5℃、第二个温度是10℃至40℃，且T1为至少8小时。
本发明的方法能制备从非常小的尺寸(例如，<75nm)至更大的尺寸(例如，5,000nm)的范围的紧密(tight)的粒度分布(PSD)的药物晶体，并得到可以单独使用特定尺寸的颗粒，或与通过本文所述的方法制备的相同的药物晶体的更小或更大的尺寸的颗粒组合，或与药物的不同形式(例如，原料或通过匀化得到的形式)或与其他赋形剂(诸如溶剂、缓和剂、粘膜粘着剂)组合，以控制所述药物的释放、分配、代谢(metabolization)或消除，或增强所述药物组织穿透力或组织停留时间。
在一个实施方案中，在静态的分批反应器中使用声波处理(例如，超声处理)或超匀化以将沉淀药物在抗溶剂中分散来制备药物混悬剂。在一个实施方案中，通过置于向全部的液体提供超声能量的超声处理浴中完成超声处理过程。在另一个实施方案中，使用探头超声焊极完成超声处理过程。在又一个实施方案中，药物在抗溶剂中沉淀期间的分散步骤是高压匀化。
在另一个实施方案中，在流通式反应器(flow-through reactor)中在超声处理或超匀化期间制备药物混悬剂。溶液的温度可以是0-4或2-8摄氏度。在另一个实施方案中，溶液的温度可以是22-30摄氏度。流通式反应器可以加保护层以控制温度。
通过注射泵将药物溶液(相I)定量加入反应器。在另一个实施方案中，将药物混悬剂定量加入反应器中通过其他自动泵设备。相I的流速范围可以是0.1ml/min至40ml/分钟。在流通式反应器(或流动反应器)中，相I的流速范围可以是0.1ml/分钟至40ml/分钟或0.5至900ml/分钟(例如，0.5-2.0ml/分钟、10-900ml/分钟、12-700ml/分钟、50-400ml/分钟、100-250ml/分钟或110-130ml/分钟)。在流通式反应器中，相II的流速范围可以是0.1ml/min至40ml/分钟或2.5-2100ml/分钟(例如，2.5-900ml/分钟、2.5-2.0ml/分钟、10-900ml/分钟、12-700ml/分钟、50-400ml/分钟、100-250ml/分钟或110-130ml/分钟)。
步骤1中相I和相II的组分:选择用于溶解药物以制备相I中的溶液的赋形剂，以致它们在相II中可溶混和可溶解。相II组分使得该相仅用作所述药物的抗溶剂。当在声波处理的存在下将相I加入相II中时，药物沉淀为纳米晶体中。将相II经由0.22微米PVDF过滤器无菌过滤至保持在0-4℃或2-8℃的保持容器中。将相II定量加入装备有超声焊极(sonotrode)或声波处理探头的池中。然后将相I溶液定量滴加至该池的相II中，同时进行声波处理。通过步骤1制备的纳米晶体可以在2-8℃或22-25℃或30-40℃保持在保持槽中。该“保持”过程称为退火，以稳定步骤1中制备的纳米晶体。步骤1中制备的纳米混悬剂的退火或物理老化能使药物分子“松弛”，并以其最稳定的热力学状态排列。退火温度的选择取决于药物的理化特征。退火的持续时间也很重要。在一个实施方案中，退火的持续时间为30分钟。在另一个实施方案中，退火的持续时间为30分钟至90分钟。在另一个实施方案中，退火的持续时间为90分钟至12小时。在另一个实施方案中，退火的持续时间为12小时至24小时。
相I和相II的组分具有低粘度，所以各相可以通过0.22微米过滤器无菌过滤。或者，无菌的过滤可以通过其他灭菌方式诸如高压灭菌法、γ辐照、环氧乙烷(ETO)辐照来完成。
制备用于初始纳米混悬剂的相I的溶剂可选自但不限于PEG400、PEG300、PEG100、PEG1000、PEG-硬脂酸酯、PEG40-硬脂酸酯、PEG-Laureate、卵磷脂、磷脂酰胆碱、PEG-油酸酯、PEG-甘油、吐温、司盘、聚丙二醇、DMSO、乙醇、异丙醇、NMP、DMF、丙酮、二氯甲烷、山梨醇。
用作用于初始纳米混悬剂的相II的空间稳定溶液可选自但不限于以下各项的水溶液：甲基纤维素、PVP、PVA、HPMC、纤维素、普流罗尼克F127、普流罗尼克F68、卡波姆、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、PEGs、卵磷脂、磷脂酰胆碱、polyquarternium-1、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚组氨酸、瓜尔胶、黄原胶、脱乙酰壳多糖、藻酸盐、透明质酸、硫酸软骨素、吐温20、吐温80、司盘类、山梨醇、氨基酸。在一个优选的实施方案中，空间稳定剂是粘度15cP的甲基纤维素。在另一个实施方案中，相II中的空间稳定剂是粘度4cP的甲基纤维素。在另一个实施方案中，空间稳定剂是粘度50cP的甲基纤维素。在另一个实施方案中，空间稳定剂是粘度4000cP的甲基纤维素。在另一个实施方案中，空间稳定剂是粘度100,000cP的甲基纤维素。甲基纤维素的浓度为0.10％-0.20％、0.20％-0.40％和0.40％-0.50％。在一个优选的实施方案中，相II中的甲基纤维素的浓度为0.20％。在另一个优选的实施方案中，相II中的甲基纤维素的浓度为0.39％。在一个实施方案中，相II中的空间稳定剂是浓度0.1-1％、1％-10％的卡波姆940。在另一个实施方案中，相II中的空间稳定剂是浓度0.1％-1％和1％-10％的羧甲基纤维素。在另一个实施方案中，相II中的空间稳定剂是与卡波姆940组合的羧甲基纤维素。在另一个实施方案中，相II中的空间稳定剂是浓度0.1％-1％和1-10％的PVA。在另一个实施方案中，相II中的空间稳定剂是浓度0.1％至10％的PVP。
空间稳定剂还可以是阳离子的。有用的阳离子表面稳定剂的实例包括但不限于聚合物、生物聚合物、多糖、纤维素制品、藻酸盐、磷脂类和非聚合化合物、诸如两性离子稳定剂、聚-n-甲基吡啶蒽基吡啶氯化物、阳离子磷脂类、脱乙酰壳多糖、聚赖氨酸、聚乙烯基咪唑、1,5-二甲基-1,5-二氯十一亚甲基聚甲溴化物、聚甲基丙烯酸甲酯三甲基溴化铵溴化物(PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三甲基溴化铵(HDMAB)、聚乙烯吡咯烷酮-2-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯二甲基硫酸酯、1,2二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)2000](钠盐)(也称为DPPE-PEG(2000)-胺Na)、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基三甲基溴化铵)、泊洛沙胺(poloxamines)、诸如Tetronic也称为Poloxamine 溶菌酶、长链聚合物、诸如藻酸和角叉菜胶。其他有用的阳离子稳定剂包括但不限于阳离子脂类、锍、鏻,和季铵化合物、诸如十八烷基三甲基氯化铵、苄基-二(2-氯乙基)乙基溴化铵、椰油基三甲基氯化铵或溴化铵、椰油基甲基二羟基乙基氯化铵或溴化铵、癸基三乙基氯化铵、癸基二甲基羟基乙基氯化铵或溴化铵、C12-15二甲基羟基乙基氯化铵或溴化铵、椰油基二甲基羟基乙基氯化铵或溴化铵、十四烷基三甲基甲基硫酸铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵或溴化铵、十二烷基二甲基(乙烯氧基)4氯化铵或溴化铵、N-烷基(C12-18)二甲基苄基氯化铵、N-烷基(C14-18)二甲基-苄基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、二甲基二癸基氯化铵、N-烷基和(C12-14)二甲基1-萘甲基氯化铵、三甲基卤化胺、烷基-三甲基铵盐和二烷基二甲基铵盐、十二烷基三甲基氯化铵、乙氧基化的烷酰氨基烷基二烷基铵盐和/或乙氧基化的三烷基铵盐、二烷基苯二烷基氯化铵、N-二癸基二甲基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、N-烷基(C12-14)二甲基1-萘基甲基氯化铵和十二烷基二甲基苄基氯化铵、二烷基苯烷基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、烷基苄基甲基氯化铵、烷基苄基二甲基溴化铵、C12、C15、C17三甲基溴化铵、十二烷基苄基三乙基氯化铵、聚-二烯丙基二甲基氯化铵(DADMAC)、二甲基氯化铵、烷基二甲基卤化铵、三鲸蜡基甲基氯化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三乙基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、甲基三辛基氯化铵(ALIQUAT 336TM)、POLYQUAT 10TM、四丁基溴化铵、苄基三甲基溴化铵、胆碱酯类(诸如脂肪酸的胆碱酯类)、苯扎氯铵、司拉氯铵(stearalkonium chloride)化合物(诸如十八烷基三甲基氯化铵和二-十八烷基二甲基氯化铵)、十六烷基吡啶溴化物或氯化物,季铵化的聚氧乙基烷基胺的卤盐、MIRAPOLTM和ALKAQUATTM、烷基吡啶盐；胺、诸如烷基胺、二烷基胺、烷醇胺、聚乙烯聚胺、N,N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯和乙烯基吡啶、胺盐、诸如十二烷基胺乙酸盐、十八烷基胺乙酸盐、烷基吡啶盐和烷基咪唑盐和氧化胺；imide azolinium盐；质子化的丙烯酰季铵；甲基化的季聚合物(quaternary polymer)、诸如聚[二烯丙基二甲基氯化铵]和聚-[N-甲基乙烯基吡啶氯化物]；和阳离子瓜尔胶。
步骤2的组分:选择步骤2的组分完成纯化之前步骤制备的纳米晶体的任务。所述纯化方法为切向流过滤(TFF)或常规垂直过滤(NFF)以实现超滤或透滤或微量过滤。在另一个实施方案中，步骤2通过离心完成。过滤器的选择取决于制备的纳米晶体的尺寸。过滤器的孔径可以是0.1μm或0.2μm或0.5μm或0.8μm或1μm或10μm或20μm。如果纳米微粒的粒度分布峰值为0.5μm，则PVDF过滤器的孔径将是0.1μm。优选纳米微粒的尺寸峰值为0.5μm。在该步骤中，将纳米晶体混悬剂纯化，这样初始的连续步骤完全被新的连续相替代。选择新的连续相使得药物在其中具有最小的溶解度。这最小化或消除奥斯特瓦尔德成熟。
纯化方法的组分可选自但不限于以下各项的水溶液：HPMC、MC、卡波姆、纤维素、PEGs、脱乙酰壳多糖、藻酸盐、PVP、F127、F68、透明质酸、聚丙烯酸。
步骤2的组分可具有组织粘合组分，其会增加纳米晶体在部位的停留时间以随后延长治疗的功效。组织粘合组分可以是阳离子或阴离子的。阳离子组织粘合分子为polyquad-1、聚乙烯亚胺、PAMAM树枝状聚合物、PEI树枝状聚合物、脱乙酰壳多糖、藻酸盐及其衍生物。
通过所限定的方法制备的药物纳米晶体(任选地纳米混悬剂)可以是治疗眼的炎性病症的免疫调节剂。免疫调节剂已证实在在多种对对类固醇耐药的炎性病症中有效，或当类固醇的长期应用与类固醇类有关时如此。目前可用的活性剂用作阻止淋巴细胞增生的细胞毒剂或用作阻止淋巴因子的合成的免疫调节剂。环孢素A是优选的能使用本发明定义的方法制备的免疫调节剂。
药物纳米混悬剂可以是使用相同的方法配制的两种药物的组合产品。因此，可以设想两种药物共溶于共用的赋形剂中，然后本发明中说明的技术沉淀。
疏水性治疗剂
用于本文的术语“疏水性治疗剂”或“疏水性药物”是指在水中难溶的治疗剂，例如，具有低于约10mg/mL(例如，低于1mg/mL、低于0.1mg/mL或低于0.01mg/mL)的水溶解度。
可以应用本发明的方法以制备疏水性药物的纳米晶体和/或新的形态。疏水性药物的实例包括但不限于ROCK抑制剂、SYK-特异性抑制剂、JAK-特异性抑制剂、SYK/JAK或多激酶抑制剂、MTORs、STAT3抑制剂、VEGFR/PDGFR抑制剂、c-Met抑制剂、ALK抑制剂、mTOR抑制剂、PI3Kδ抑制剂、PI3K/mTOR抑制剂、p38/MAPK抑制剂、NSAID、类固醇类、抗生素、抗病毒药、抗真菌剂、抗寄生虫药、降血压剂、癌症药物或抗肿瘤药、免疫调节药物(例如，免疫抑制剂)、精神病学药物、皮肤用药、降脂药物、抗抑郁药、抗糖尿病药、抗癫痫药、抗痛风剂、抗高血压剂、抗疟疾药、抗偏头痛药物、抗毒蕈碱剂、抗甲状腺药、抗焦虑药、镇静药、催眠药、精神安定药、β-阻滞剂、心脏正性肌力药(cardiac inotropic agent)、皮质类固醇、利尿剂、抗帕金森综合征剂、胃肠病用药、组胺H-受体拮抗剂、调血脂药、硝酸盐类和其他抗心绞痛药、营养剂、阿片样镇痛药、性激素和兴奋剂。
适用于本发明的方法的疏水性药物可以是类固醇。类固醇包括例如，氟替卡松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、替可的松匹伐酯、泼尼松龙、甲泼尼龙、泼尼松、曲安奈德、曲安西龙、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟轻松、氟轻松、氟西奈德、氟尼缩松、氟米龙、丙酸氯倍他索、氯替泼诺、甲羟松、利美索龙、二氟泼尼酯、哈西奈德、倍氯米松、倍他米松、倍他米松磷酸钠、环索奈德、地塞米松、地塞米松磷酸钠、醋酸地塞米松、氟可龙、氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-戊酸酯、双丙酸阿氯米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、泼尼卡酯、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、己酸氟考龙、特戊酸氟考龙、醋酸氟泼尼定、醋酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、氟米龙(fluoromethalone)、氟米龙醋酸酯、氯替泼诺依碳酸酯和倍他米松磷酸盐，包括它们的酯和药学上可接受的盐。
适用于本发明的方法的疏水性药物可以是非类固醇抗炎药物，例如溴芬酸、双氯芬酸钠、氟比洛芬、酮洛酸氨丁三醇、mapracorat、萘普生、奥沙普秦、布洛芬和奈帕芬胺，包括它们的酯和药学上可接受的盐。
适用于本发明的方法的其他疏水性药物包括贝西沙星、DE-110(Santen Inc.)、瑞巴派特、雄激素类(DHEA、睾酮、具有弱水溶解度的类似物、&衍生物)、雌激素类(为雌二醇、雌三醇和雌酮的衍生物的差水溶性化合物；例如，雌二醇、左炔孕酮(levonorgesterol)、其类似物、异构体或衍生物)、黄体酮和孕激素类(第一至第四代)，其具有弱水溶解度(例如，炔诺酮、其类似物和衍生物、甲羟孕酮或他那罗吉(tagaproget))和孕烯醇酮。各代孕激素类的实例包括:第一代(雌烷)诸如炔诺酮、异炔诺酮、醋酸炔诺酮和双醋炔诺醇；第二代(甾烷)诸如左炔诺孕酮、炔诺酮和炔诺孕酮；第三代(甾烷)诸如去氧孕烯、孕二烯酮、诺孕酯,和屈螺酮；和第四代诸如地诺孕素、屈螺酮、nestorone、醋酸诺美孕酮和曲美孕酮。
疏水性药物的其他实例包括例如，10-烷氧基-9-硝基喜树碱、17b-雌二醇、3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷棕榈酸酯、5-氨基乙酰丙酸、ABT-963、醋氯芬酸、阿克拉霉素A、阿苯达唑、紫朱草素/紫草素、全反式维甲酸(ATRA)、醋酸维生素E、AMG 517、安泼那韦、阿瑞吡坦、青蒿素、印楝素、黄芩黄素、苯并咪唑衍生物、苯并卟啉、苯并嘧啶衍生物、比卡鲁胺、BMS-232632、BMS-488043、溴西泮、溴匹立明、卡马西平、坎地沙坦西酯、卡马西平、卡苯达唑(Carbendazim)、卡维地洛、头孢托仑、头孢替安、头孢泊肟、头孢呋辛酯、塞来考昔、神经酰胺、西洛他唑、丙酸氯倍他索、克霉唑、辅酶Q10、姜黄、环胞素(Cyclcoporine)、达那唑、氨苯砜、右布洛芬、地西泮、双嘧达莫、多西他赛、多柔比星、多柔比星、益康唑、ER-34122、依美拉唑、艾托考昔、依曲韦林、依维莫司、依西美坦、非洛地平、非诺贝特、氟比洛芬、氟他胺、呋塞米、γ-谷维素、格列本脲、格列齐特、促性激素释放素、灰黄霉素、橙皮素、HO-221、吲哚美辛、胰岛素、异烟肼、异维甲酸、伊曲康唑、酮基布洛芬、LAB687、利马前列素、洛匹那韦(Liponavir)、洛哌丁胺、甲苯咪唑、甲地孕酮、美洛昔康、MFB-1041、米非司酮、MK-0869、MTP-PE、大麻隆、柚苷配基、尼古丁、尼伐地平、尼美舒利、尼莫地平、尼群地平、硝酸甘油、NNC-25-0926、川陈皮素(Nobiletin)、八氟丙烷、冬凌草甲素、奥沙西泮、奥卡西平、羟苯甲酮、紫杉醇、棕榈酸帕利哌酮、喷昔洛韦、PG301029、PGE2、苯妥英、吡罗昔康、鬼臼毒素、猪胰脂肪酶和共脂肪酶、普罗布考、吡嗪酰胺、五羟黄酮、雷洛昔芬、白藜芦醇、大黄酸、利福平、利托那韦、罗苏伐他汀、沙奎那韦、水飞蓟素、西罗莫司、螺内酯、司他夫定、磺胺异唑、他克莫司、他达拉非、丹参酮、茶多酚、茶碱、噻洛芬酸、替拉那韦、甲苯磺丁脲、酒石酸托特罗定、曲尼司特、维甲酸、曲安奈德、雷公藤内酯、曲格列酮、伐昔洛韦、维拉帕米、长春新碱、重酒石酸长春瑞滨、长春西汀、维生素-E、华法林,和XK469。更多的实例包括例如，两性霉素B、庆大霉素和其他氨基糖苷类抗生素、头孢曲松和其他头孢菌素类、四环素类、环孢菌素A、阿洛普令、金诺芬、阿扎丙宗、贝诺酯、二氟尼柳、二氟尼柳、芬布芬、非诺洛芬钙、甲氯芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、羟基保泰松、保泰松、舒林酸、苄硝唑、氯碘羟喹、地考喹酯、双碘喹啉、二氯尼特(diloxanide furoate)、二硝托胺、呋喃唑酮、甲硝唑、尼莫唑、呋喃西林、奥硝唑和替硝唑。
适合本发明的疏水性药物还可以是具有5或跟高的cLogP的FDA-批准的药物，诸如下表中列出的那些。
适合本发明的方法的疏水性药物还可以是具有5或更高的ALogP的FDA-批准的药物，诸如下表中所列的那些。
适合本发明的方法的其他药物包括长效支气管扩张药(例如，昔萘酸沙美特罗和福莫特罗)、抗炎药物(他汀类药物、诸如阿托伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀和罗苏伐他汀)、大环内酯抗生素(例如，阿奇霉素)、止恶心药、被首过代谢作用高度代谢的药物(例如，丙咪嗪、吗啡、丁丙诺啡、普萘洛尔、地西泮和咪达唑仑)、蛋白质疗法(例如，雷珠单抗、贝伐珠单抗、阿柏西普)、利纳西普和下表中所列的那些。
疏水性药物的另外的实例还可以在以下资料中找到：例如，生物药剂学分类系统(BCS)数据库(http://69.20.123.154/services/bcs/search.cfm)，Therapeutic systemsResearch Laboratory,Inc.,Ann Arbor,MI(www.tsrlinc.com)；M Linderberg等,"Classification of Orally Administered Drugs on the WHO Model List ofEssential Medicines According to the Biopharmaceutics Classification System,"Eur J Pharm&Biopharm,58:265-278(2004)；NA Kasim等,"Molecular properties of WHOEssential Drugs&Provisional Biopharmaceutical Classification,"Molec Pharm,1(1):85-96(2004)；A Dahan&GL Amidon,"Provisional BCS Classification of theLeading Oral Drugs on the Global Market,"in Burger's Medicinal Chemistry,DrugDiscovery&Development,2010；Elgart A等,Lipospheres and pro-nano lipospheresfor delivery of poorly water soluble compounds.Chem.Phys.Lipids.2012.5；165(4):438–53；Parhi R等,Preparation and characterization of solid lipidnanoparticles-a review.Curr Drug Discov Technol.2012.3；9(1):2–16；Linn M等,as an effective absorption enhancer of poorly soluble drugs invitro and in vivo.Eur J Pharm Sci.2012.2.14；45(3):336–43；Salústio PJ等,Advanced technologies for oral controlled release:cyclodextrins for oralcontrolled release.AAPS PharmSciTech.2011.12；12(4):1276–92.PMCID:PMC3225529；Kawabata Y等,Formulation design for poorly water-soluble drugs based onbiopharmaceutics classification system:basic approaches and practicalapplications.Int J Pharm.2011.11.25；420(1):1–10；van Hoogevest P等,Drugdelivery strategies for poorly water-soluble drugs:the industrialperspective.Expert Opin Drug Deliv.2011.11；8(11):1481–500；Bikiaris DN.Soliddispersions,part I:recent evolutions and future opportunities inmanufacturing methods for dissolution rate enhancement of poorly water-soluble drugs.Expert Opin Drug Deliv.2011.11；8(11):1501–19；Singh A等,Oralformulation strategies to improve solubility of poorly water-solubledrugs.Expert Opin Drug Deliv.2011.10；8(10):1361–78；Tran PH-L等,Controlledrelease systems containing solid dispersions:strategies and mechanisms.PharmRes.2011.10；28(10):2353–78；Srinarong P等,Improved dissolution behavior oflipophilic drugs by solid dispersions:the production process as startingpoint for formulation considerations.Expert Opin Drug Deliv.2011.9；8(9):1121–40；Chen H等,Nanonization strategies for poorly water-soluble drugs.DrugDiscov.Today.2011.4；16(7-8):354–60；Kleberg K等,Characterising the behaviourof poorly water soluble drugs in the intestine:application of biorelevantmedia for solubility,dissolution and transportstudies.J.Pharm.Pharmacol.2010.11；62(11):1656–68；and He C-X等,Microemulsionsas drug delivery systems to improve the solubility and the bioavailability ofpoorly water-soluble drugs.Expert Opin Drug Deliv.2010.4；7(4):445–6；将其各自内容完整地引入本文作为参考。
通过所述方法制备的疏水性药物的纳米晶体理想地适用于所述疏水性药物所应用的障碍的全身或非全身性治疗，诸如炎性障碍、呼吸系统障碍、自身免疫性疾病、心血管疾病和癌症。例如，本发明的纳米晶体可以用于治疗类风湿性关节炎、狼疮(包括例如，狼疮肾炎和全身性红斑狼疮)、变应性哮喘、淋巴瘤(包括例如，非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病)、免疫性血小板减少性紫癜、银屑病、银屑病关节炎、皮炎、强直性脊椎炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、痛风、特应性皮炎、多发性硬化、天疱疮(包括大疱性类天疱疮)、自身免疫性溶血性贫血、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、格-巴二氏综合征、韦格纳肉芽肿病和/或肾小球肾炎。本发明的纳米晶体还可以用于冠状动脉病患者中的主要的不利的心脏事件的一级预防。
新的形态
本发明的方法的一个意想不到的优势是通过所述方法制备的疏水性药物的纳米晶体具有不同于商购的原料或该疏水性药物的已知形态的新的形态。该新的形态可以更稳定(例如，热稳定)，具有更高的振实密度和/或结晶程度更高。
在一个方面中，本发明提供了丙酸氟替卡松的新的形态，即、A形式，其通过包含在7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
例如，A形式进一步通过包含在约9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1,和34.3度2θ的另外的峰的X-射线粉末衍射图表征。
例如，A形式通过包含下表中所列的峰的X-射线粉末衍射图表征。
表A
例如，A形式通过具有长板或片的形态的纳米晶体表征。
例如，A形式基本不含杂质。
例如，A形式具有超过90％、超过92％、超过95％、超过96％、超过97％、超过98％或超过99％的纯度。
例如，A形式具有0.5786g/cm3的振实密度。比较起来，丙酸氟替卡松原料的振实密度为0.3278g/cm3。
例如，A形式的熔化热显著更高(54.21J/g)，表明前者是结晶程度更高的物质、需要更多的能量以使分子间键诸如离子键和氢键破裂。
例如，A形式具有10℃的熔程，也证实了高度有序的微结构。比较起来，丙酸氟替卡松原料在略微更宽的范围(11.1℃)熔化。
例如，A形式比原料或匀化的材料溶解得更缓慢。在含水介质中温育6周后A形式达到饱和的溶解度，而原料或匀化的材料在含水介质中温育2周内达到饱和的溶解度。
例如，A形式通过约1μg/g/天(在水中，在室温)的在含水介质(例如，水或水溶液)中的溶出度表征。
例如，A形式的晶胞结构是单斜晶系,P21, β＝98.285,体积1222.6。
例如，A形式具有299.5℃的熔点，相对照的是原料(多晶型物1)为297.3℃。
例如，A形式的特征为具有约10-10000nm,(例如，100-1000nm或300-600nm)的平均尺寸的纳米板。
例如，A形式的特征为具有窄的粒度分布范围的丙酸氟替卡松纳米板。例如，A形式的特征为具有50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm或5000-10000nm的粒度分布的丙酸氟替卡松纳米板。
例如，纳米板各自具有5nm至200nm(例如，10-150nm或30-100nm)的厚度。
例如，纳米板具有基本正交于限定所述纳米板厚度的表面的[001]晶轴。
在另一个方面，本发明提供了曲安奈德的新的形态、即B形式，其通过包含在约11.9、13.5、14.6、15.0、16.0、17.7和24.8度2θ的峰的X-射线粉末衍射图表征。
例如，B形式进一步通过包含在约7.5、12.4、13.8、17.2、18.1、19.9、27.0和30.3度2θ的另外的峰的X-射线粉末衍射图表征。
例如，B形式通过包含下表B中所列的峰的X-射线粉末衍射图表征。
表B
例如，B形式通过基本类似于图39中红色的谱线的X-射线粉末衍射图表征。
例如，B形式基本不含杂质。
例如，B形式具有超过90％、超过92％、超过95％、超过96％、超过97％、超过98％或超过99％的纯度。
药物组合物
本发明特征还为含有效量的本文所述的疏水性药物纳米晶体和药学上可接受的载体的药物组合物，其可用于全身或非全身性治疗或减轻所述疏水性药物所应用的障碍，例如炎性障碍、诸如眼部障碍和皮肤障碍、呼吸系统障碍、诸如哮喘或COPD、或癌症、诸如淋巴瘤。
在一个实施方案中，本发明特征为包含有效量疏水性药物(例如，氟替卡松)的纳米晶体和药学上可接受的载体的新的局部用药物组合物，其可用于睑缘炎和/或睑板腺功能不良(MGD)的治疗或者征兆或症状的减轻以及预防。有效量的本发明的制剂可用于减少眼睑缘的炎症，由此治疗睑缘炎和/或MGD。
例如，本发明中描述的组合物可以用于外科手术后的术后护理。例如，本发明的组合物可以用于用于术后疼痛的控制、术后炎症的控制、氩激光小梁成形术和屈光性操作。此外，所述组合物可以用于治疗其他的眼部障碍、诸如眼部变态反应、变应性结膜炎、囊样黄斑水肿或睑板腺功能不良。
此外，本发明中所述的组合物可以用于皮肤障碍、诸如特应性皮炎、皮肤损害(dermatologic lesion)、湿疹、银屑病或疹的全身或非全身性治疗或者征兆或症状的减轻以及预防。
与睑缘炎有关的征兆和症状包括例如，眼睑发红、眼睑肿胀、眼睑不适、眼睑瘙痒、眼睑皮肤脱落和眼发红。
异常的睑板分泌物(abnormal meibomian secretions)的征兆和症状包括但不限于增加的睑板分泌物粘度、不透明度、颜色、以及腺分泌物间隔(不应期)的增加。与异常的睑板腺(例如MGD)分泌物有关的疾病的征兆和症状包括但不限于干眼、眼睛发红、眼睑缘的瘙痒和/或刺激及水肿、异物感和睫毛缠结。
所述活性剂组分改善、治疗、减轻、抑制、预防睑缘炎和/或MGD或者减少睑缘炎和/或MGD的征兆和症状。本发明的组合物应用于个体的眼、眼睑、眼睫毛或眼睑缘上是舒适的，且可用于缓解急性或慢性睑缘炎和/或MGD，且特别适用于周期性和长期使用。
而且，本发明中所述的组合物可以用于呼吸系统障碍(例如，哮喘或COPD)、自身免疫性疾病(例如，狼疮或银屑病)和癌症(例如，淋巴瘤)的全身或非全身性治疗、征兆或症状的缓解以及预防。
氟替卡松包括其酯和药学上可接受的盐。丙酸氟替卡松是优选的药学上可接受的盐。丙酸氟替卡松，也称为S-氟甲基-6-α-9-二氟-11-β-羟基-16-α-甲基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17-β-硫代甲酸,17-丙酸酯，是合成的三氟化的皮质类固醇，其具有化学式C25H31F3O5S。其是是白色至类白色的粉末，分子量500.6g/mol。丙酸氟替卡松实几乎不溶于水(0.14μg/ml)，易溶于二甲基亚砜和二甲基-甲酰胺，微溶于甲醇和95％乙醇中。
药用眼部制剂通常包含有效量的，例如，约0.0001％至约10％wt/体积、优选约0.001％至约5％、更优选约0.01％至约3％、甚至更优选约0.01％至约1％的适合短期或长期用于治疗或预防眼部和皮肤障碍的眼用药(例如，氟替卡松)。眼用药(例如，氟替卡松)的量将根据特定的制剂和指定用途变化。
优选地，制剂中存在的有效量的疏水性药物(例如，氟替卡松)的纳米晶体应该足以治疗或预防炎性障碍、呼吸系统障碍或癌症。
在某些实施方案中，本文描述的组合物是缓慢释放组合物。在其他的实施方案中，本文描述的组合物是快速释放组合物。不希望受到理论所束缚，本发明的组合物的药物释放速率可用通过选择特定的药物颗粒的形态或尺寸来控制。例如，所述组合物可以仅包含以A形式的形态存在的丙酸氟替卡松，或可以包含A形式和FP的多晶型物1和/或多晶型物2的混合物。另一个实例的组合物可以包括不同的尺寸和/或尺寸分散体(sizedispersions)的药物纳米晶体，例如，300-600nm的纳米晶体(即,D10-D90)和约800-900nm的纳米晶体(即，D10-D90)的组合。
所述本发明的药物组合物可以单独施用或与其他治疗法组合施用。例如，上文描述的本发明的药物组合物可另外的包含其他活性成分(任选地为通过本发明的方法制备的纳米晶体形式)，其包括但不限于血管收缩剂、抗变态反应药、麻醉剂、镇痛药、干眼症药物(dry eye agents)(例如促分泌物(secretagogues)、粘液模拟物(mucomimetics)、聚合物、脂类、抗氧化剂)等，或与含其他活性成分(包括但不限于血管收缩剂、抗变态反应药、麻醉剂、镇痛药、干眼症药物(例如促分泌物、粘液模拟物、聚合物、脂类、抗氧化剂)等)的药物组合物联合(同时或依次)施用。
制剂
本发明的药物组合物可以被配制为适用于全身或非全身性治疗或减轻所述疏水性药物所应用的障碍的各种剂型，例如，炎性障碍、诸如眼部障碍和皮肤障碍、呼吸系统障碍、诸如哮喘、或癌症、诸如淋巴瘤。本文描述的组合物可以被配制为适用于特定施用途径的形式，所述途径例如局部、口(包括例如经口吸入)、鼻内、肠内或胃肠外(注入循环系统)。
在某些实施方案中，本文描述的制剂为缓慢释放制剂。在其他的实施方案中，本文描述的制剂是快速释放制剂。
在某些实施方案中，本发明的局部用组合物被配制为溶液剂、混悬剂、软膏剂、乳剂、凝胶剂、滴眼剂和其他适用于局部的眼部和皮肤施用的剂型。在其他的实施方案中，本发明的组合物被配制为适合鼻内或口服施用的干粉剂、气雾剂、溶液剂、混悬剂、软膏剂、乳剂、凝胶剂和其他剂型。
优选地，制备局部眼用组合物以用于施用于眼睑、眼睫毛、眼睑缘、皮肤或眼表面。此外，修饰、诸如缓释、稳定和易吸收性质等可进一步应用于所述制剂。这些剂型是灭菌的，例如经微生物分离过滤器、热力灭菌法等过滤。
基于配制的容易程度、以及患者容易通过将制剂应用于眼睑、眼睫毛和眼睑缘而施用所述组合物的能力，一般优选含水溶液。可使用涂药器进行施用、诸如患者的手指、Wek-Cel、Q-tip、药棉拭子、聚氨酯药签、聚酯药签、25-3318-U药签、25-3318-H药签、25-3317-U药签、25-803 2PD药签、25-806 1-PAR药签、刷子(例如，brushes)或其他能将制剂递送至眼睑、眼睫毛或眼睑缘的设备。
然而，组合物还可以是混悬剂、稠的或半粘稠的凝胶剂或其他类型的固体或半固体组合物。在一个实施方案中，本发明的制剂(例如，氟替卡松制剂)是含水制剂。本发明的含水制剂以水重量计通常超过50％、优选超过75％且最优选超过90％。在另一个实施方案中，所述制剂是冻干制剂。
在一个特定的实施方案中，本发明的制剂被配制为混悬剂。所述制剂一般具有不超过800nm的粒度。另外本发明的混悬剂制剂可包括助悬剂和分散剂以预防颗粒成团。
在某些实施方案中，载体是非水性的。非水性载体包含油，例如，蓖麻油、橄榄油、花生油、夏威夷果油、胡桃油、杏仁油、南瓜子油、棉子油、芝麻油、玉米油、豆油、鳄梨油、棕榈油、椰子油、葵花油、红花油、亚麻子油、葡萄籽油、卡诺拉油(canola oil)、低粘度硅油、轻质矿物油或其任意组合。
在其中制剂是软膏剂的实施方案中，优选的用于制备本发明的眼用软膏剂的软膏剂基质可以是在常规眼用软膏剂中已使用的。特别地，所述基质可以是液体液体石蜡、白凡士林、纯羊毛脂、胶凝化烃(gelation hydrocarbon)、聚乙二醇、亲水性软膏剂基质、白软膏基质、吸水软膏基质、Macrogol(商品名)软膏基质、单软膏基质(simple ointment base)等。例如，非限制性地，本发明的软膏剂制剂包含丙酸氟替卡松、凡士林和矿物油。
在其中制剂是凝胶(gelement)的实施方案中，优选的用于制备本发明的眼用软膏剂的凝胶(gelement)基质可以是在常规眼用凝胶、诸如Genteal Gel中已使用的物质。
在其中制剂是乳膏剂的实施方案中，优选的用于制备本发明的眼用乳膏剂的乳膏剂基质可以是在常规眼用乳膏剂中已使用的。例如，非限制性地，本发明的乳膏剂制剂包含丙酸氟替卡松、PEG 400、油和表面活性剂。
局部用制剂可另外需要增溶剂的存在，特别是在如果活性成分或无活性成分趋向形成混悬物或乳液时。适用于上述组合物增溶剂选自例如泰洛沙泊、脂肪酸甘油聚乙二醇脂类、脂肪酸聚乙二醇酯类、聚乙二醇类、甘油醚类、环糊精(例如α-、β-或γ-环糊精、例如烷基化的、羟基烷基化的、羧基烷基化的或烷基氧羰基-烷基化的衍生物，或一-或二糖基-α-、β-或γ-环糊精、一-或二麦芽糖基-α-、β-或γ-环糊精或潘糖基-环糊精)、聚山梨酯20、聚山梨酯80或这些化合物的混合物。尤其优选的增溶剂的具体实例是蓖麻油和环氧乙烷的反应产物，例如商品Cremophor或Cremophor 已证实蓖麻油和环氧乙烷的反应产物是特别好的增溶剂，在眼中耐受极好。其他优选的增溶剂选自泰洛沙泊和环糊精。使用的浓度尤其取决于活性成分的浓度。添加的量通常足以溶解活性成分。例如，增溶剂的浓度为活性成分的浓度的0.1至5000倍。
还可以将其他化合物加入本发明的制剂中以调节(例如，增加)载体的粘度。粘度增强剂的实例包括但不限于:多糖、诸如透明质酸及其盐、硫酸软骨素及其盐、右旋糖酐类、各种纤维素家族的聚合物；乙烯基聚合物；和丙烯酸聚合物。
在另一个实施方案中，本发明的局部用制剂不包含防腐剂。所述制剂将可用于佩戴接触镜片的患者，或使用若干局部用滴眼剂的患者和/或其中可能更需要限制暴露于防腐剂的已经有受损眼表面(例如干眼)的患者。
大量载体中的任何载体可用于本发明的制剂。载体的粘度范围为约1cP至约4,000,000cP、约1cP至约3,000,000、约1cP至约2,000,000cP、约1cP至约1,000,000cP、约1cP至约500,000cP、约1cP至约400,000cP、约1cP至约300,000cP、约1cP至约200,000cP、约1cP至约100,000cP、约1cP至约50,000cP、约1cP至约40,000cP、约1cP至约30,000cP、约1cP至约20,000cP、约1cP至约10,000cP、约50cP至约10,000cP、约50cP至约5,000cP、约50cP至约2500cP、约50cP至约1,000cP、约50cP至约500cP、约50cP至约400cP、约50cP至约300cP、约50cP至约200cP、约50cP至约100cP、约10cP至约1000cP、约10cP至约900cP、约10cP至约800cP、约10cP至约700cP、约10cP至约600cP、约10cP至约500cP、约10cP至约400cP、约10cP至约300cP、约10cP至约200cP或约10cP至约100cP。
使用Brookfield锥板式粘度计VDV-III Ultra+型(其具有CP40或等效纺锤体，剪切速率约22.50+/-约10(1/秒))或Brookfield粘度计LVDV-E型(其具有SC4-18或等效纺锤体，剪切速率约26+/-约10(1/秒))可在20℃+/-1℃的温度测量粘度。或者，使用Brookfield锥板式粘度计VDV-III Ultra+型(其具有CP40或等效纺锤体，剪切速率约22.50+/-约10(1/秒))或Brookfield粘度计LVDV-E型(其具有SC4-18或等效纺锤体，剪切速率约26+/-约10(1/秒)))可在25℃+/-1℃测量本发明的眼用制剂的粘度。
还可将其他化合物加入本发明的制剂以调节(例如，增加)载体的粘度。粘度增强剂的实例包括但不限于:多糖、诸如透明质酸及其盐、硫酸软骨素及其盐、右旋糖酐类、各种纤维素家族的聚合物；乙烯基聚合物；和丙烯酸聚合物。
本发明的晶体(例如，丙酸氟替卡松晶体)可以涂覆或浸透至外科手术装置或可植入装置中。在一些实施方案中，将晶体(例如，丙酸氟替卡松晶体)涂覆或包埋至外科手术装置或可植入装置中延长药物的释放时间，同时提供高度定域的药物递送。该模式的一个优点是可实现更精确的浓度和更少的副作用。在一个实施方案中，可植入装置是用于药物递送的眼可植入装置。在其他的实施方案中，可植入装置是可通过外科手术方式植入的贮库植入物。在另一个实施方案中，可植入装置是可生物降解的，例如，可生物降解的微粒。在另外的实施方案中，可植入装置有硅制成，例如，纳米结构的多孔硅。示例性的手术设备包括但不限于支架(例如，自展式支架、球囊扩张线圈支架、球囊扩张管状支架和球囊扩张混合型支架)、血管成形术气球、导管(例如，微导管、支架输送导管)、分流器、入口设备、导线、移植物系统、血管内成像装置、血管闭合装置、内窥镜配件。例如，本发明的方法或组合物中使用的设备是iScience装置、iVeena装置、Clearside装置或Ocusert装置。可以使用本领域已知的标准方法、诸如US20070048433A1中引用的那些(将其内容引入本文作为参考)进行对外科手术装置上的涂覆。
赋形剂
在一些实施方案中，所述制剂本发明的包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。本文使用的术语赋形剂广义上是指用于与制剂的活性剂组合使用的无生物活性的物质。赋形剂可以用作例如增溶剂、稳定剂、表面活性剂、缓和剂(demulcent)、粘度剂(viscosityagent)、稀释剂、惰性载体、防腐剂、粘合剂、崩解剂、包衣材料、矫味剂或着色剂。优选地，选择至少一种赋形剂以为制剂提供一种或多种有益的物理性质、诸如活性剂的增加的稳定性和/或溶解度。“药学上可接受的”赋形剂是这样的赋形剂：其已经被州或联邦管理机构批准用于动物，且优选用于人，或者在美国药典、欧洲药典或其它普遍公认的药典中被列出用于动物，且优选用于人。
可以用于本发明的制剂中的载体的实例包括水，水和水可混溶的溶剂(诸如C1-至C7-烷醇)的混合物，包含0.5-5％无毒水溶性聚合物的植物油或矿物油，天然产物，诸如明胶、藻酸盐、果胶、黄蓍胶、刺梧桐树胶、黄原胶、角叉菜胶、琼脂和阿拉伯胶，淀粉衍生物，诸如乙酸淀粉和羟丙基淀粉，以及其它合成产物，诸如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基甲基醚、聚氧化乙烯，优选交联的聚丙烯酸，诸如中性Carbopol，或者那些聚合物的混合物。载体的浓度通常是活性成分浓度的1-100000倍。
赋形剂的其它实例包括某些惰性蛋白质诸如白蛋白；亲水聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如天冬氨酸(其可以备选地指天冬氨酸盐/酯)、谷氨酸(其可以备选地指谷氨酸盐/酯)、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸和组氨酸；脂肪酸和磷脂诸如磺酸烷基酯和辛酸烷基酯；表面活性剂诸如十二烷基硫酸钠和聚山梨酯；非离子表面活性剂诸如或标明为200、300、400或600的聚乙二醇(PEG)；标明为1000、1500、4000、6000和10000的Carbowax；碳水化合物诸如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、海藻糖和糊精，包括环糊精；多元醇诸如甘露醇和山梨醇；螯合剂诸如EDTA；和成盐抗衡离子诸如钠。
在一个具体实施方案中，所述载体是聚合的粘膜粘着介质。适合用于本发明的方法或制剂中的粘膜粘着介质的实例包括但不限于包含一种或多种聚合的助悬剂的聚合物含水混悬物，所述聚合的助悬剂包括但不限于右旋糖酐类、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖凝胶、纤维质聚合物和含羧基的聚合物系统。在一个具体实施方案中，所述聚合的助悬剂包含交联的含羧基的聚合物(例如，聚卡波非)。在另一个具体实施方案中，所述聚合的助悬剂包含聚乙二醇(PEG)。适合用于本发明的局部的稳定的眼用制剂中的交联的含羧基的聚合物系统的实例包括但不限于：NoveonAA-1、和/或(InSiteVision)。
在具体实施方案中，本发明的制剂包含一种或多种选自下述的赋形剂：眼泪替代物、张度增强剂、防腐剂、增溶剂、粘度增强剂、缓和剂、乳化剂、润湿剂、掩蔽剂和填充剂。添加的赋形剂的量和类型是根据所述制剂的具体要求，且通常是在约0.0001％至90％重量％的范围内。
眼泪替代物
根据一些实施方案，制剂可包含人工眼泪替代物。术语“眼泪替代物”或“润湿剂”是指分子或组合物，其润滑、“润湿”、模仿内源泪液的稠度，辅助天然泪液积累，或者在眼睛施用后以其它方式提供干眼征兆或症状和病症的暂时缓解。本领域已知多种眼泪替代物，且包括但不限于:单体的多元醇、诸如、甘油、丙二醇和乙二醇；聚合的多元醇、诸如聚乙二醇；纤维素酯类、诸如羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基纤维素；右旋糖酐类、诸如右旋糖酐70；水溶性蛋白质诸如明胶；乙烯基聚合物、诸如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮,和聚维酮；和卡波姆、诸如卡波姆934P、卡波姆941、卡波姆940和卡波姆974P。许多此类眼泪替代物是商购可得的，其包括但不限于纤维素酯、诸如Bion TeargenTearsTearsNaturalTears Naturale和和聚乙烯醇、诸如AkwaMoistureMurine和Visine眼泪替代物还可以由石蜡组成，诸如商购可得的Lacri-Lube@软膏剂。用作眼泪替代物的其它商购可得的软膏剂包括包括LubrifreshMoisture Eyes和Refresh
在本发明的一个优选实施方案中，所述眼泪替代物包含羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素或HPMC)。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0.1％至约2％w/v，或者在所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0.5％至约1.5％w/v，或者在所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0.1％至约1％w/v，或者在所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0.6％至约1％w/v，或者在所述范围内的任何特定值。在一个优选的实施方案中，HPMC的浓度范围为约0.1％至约1.0％w/v，或者在所述范围内的任何特定值(即，0.1-0.2％、0.2-0.3％、0.3-0.4％、0.4-0.5％、0.5-0.6％、0.6-0.7％、0.7-0.8％、0.8-0.9％、0.9-1.0％；约0.2％、约0.21％、约0.22％、约0.23％、约0.24％、约0.25％、约0.26％、约0.27％、约0.28％、约0.29％、约0.30％、约0.70％、约0.71％、约0.72％、约0.73％、约0.74％、约0.75％、约0.76％、约0.77％、约0.78％、约0.79％、约0.80％、约0.81％、约0.82％、约0.83％、约0.84％、约0.85％、约0.86％、约0.87％、约0.88％、约0.89％或约0.90％)。
例如，非限制性地，包含羟丙基甲基纤维素的眼泪替代物是润滑滴眼剂。(CibaVision-Novartis)是无菌的润滑滴眼剂，其包含3mg/g的羟基丙基甲基纤维素，并用过硼酸钠防腐。提供了基于HPMC的泪液的其它实例。
在另一个优选的实施方案中，眼泪替代物包含羧甲基纤维素钠。例如，非限制性地，包含羧甲基纤维素钠的眼泪替代物是泪。泪是与正常泪液类似的润滑制剂，其含有温和的、不致敏的防腐剂，即稳定化的氧氯复合物(oxychlorocomplex)(PuriteTM)，其在使用时最终变成天然泪液的组分。
在一些实施方案中，用适合的盐(例如，磷酸盐)将眼泪替代物或其一种或多种组分缓冲至pH 5.0至9.0、优选pH 5.5至7.5、更优选pH 6.0至7.0(或所述范围内的任何特定值)。在一些实施方案中，眼泪替代物还包含一种或多种成分，其非限制性地包含甘油、丙二醇(propyleneglycerol)、甘氨酸、硼酸钠、氯化镁和氯化锌。
盐、缓冲剂和防腐剂
本发明的制剂还可包含药学上可接受的盐、缓冲剂或防腐剂。此类盐的实例包括从下述酸制备的那些盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、硼酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。这样的盐还可以制成碱金属或碱土金属盐，诸如钠、钾或钙盐。缓冲剂的实例包括磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)。
本发明的制剂可包含缓冲系统。如本申请中所用的术语"缓冲剂"或"缓冲系统"是指通常与至少一种其他化合物组合、在溶液中提供了缓冲系统的化合物，其显示缓冲能力，即，在一定范围内中和酸或碱(alkali)的能力，使得最初pH变化相对小或无变化。根据一些实施方案，存在0.05％至2.5％(w/v)或0.1％至1.5％(w/v)的缓冲组分。
优选的缓冲剂包括硼酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、钙缓冲剂及其组合和混合物。硼酸盐缓冲剂包含例如，硼酸及其盐，例如，硼酸钠或硼酸钾。硼酸盐缓冲剂还包含化合物诸如四硼酸钾或偏硼酸钾，其在溶液中生成硼酸或其盐。
磷酸盐缓冲系统优选地包含一种或多种磷酸二氢盐(monobasic phosphates)、磷酸氢盐等。特别有用的磷酸盐缓冲剂选自碱和/或碱土金属的磷酸盐。适合的磷酸盐缓冲剂的实例包括一种或多种磷酸氢钠(Na2HPO4),磷酸二氢钠(NaH2PO4)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。磷酸盐缓冲组分经常以0.01％或至0.5％(w/v)的量使用(以磷酸根离子计算)。
优选的缓冲系统基于硼酸/硼酸盐,酸式磷酸盐和/或磷酸氢盐/磷酸或组合的硼酸/磷酸盐缓冲系统。例如可以从硼酸钠和磷酸的混合物和酸式磷酸盐的组合配制组合的硼酸/磷酸盐缓冲系统或硼酸钠。
在组合的硼酸/磷酸盐缓冲系统中，所述溶液包含约0.05至2.5％(w/v)的磷酸或其盐和0.1至5.0％(w/v)的硼酸或其盐。磷酸盐缓冲剂以0.004至0.2M(摩尔浓度)、优选0.04至0.1M的浓度使用(总计)。硼酸盐缓冲剂(总计)以0.02至0.8M、优选0.07至0.2M的浓度使用。
其他已知的缓冲剂化合物可以任选地加入镜片护理组合物中，例如，柠檬酸盐、碳酸氢钠、TRIS等。溶液中的同时具有其他功能的其他成分也可影响缓冲能力。例如，EDTA经常用作络合剂，对溶液的缓冲能力可以具有显著影响。
根据一些实施方案，含水眼用溶液的pH为生理pH或近似生理pH。优选地，含水眼用溶液的pH为约5.5至约8.0，或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，含水眼用溶液的pH为约6.5至7.5或所述范围内的任何特定值(例如，6.5.、6.6.、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5)。根据一些实施方案，含水眼用溶液的pH为约7。技术人员将认识到根据制剂中包含的活性成分的稳定性可将pH调节至更佳的pH。根据一些实施方案，用碱(例如，1N氢氧化钠)或酸(例如，1N盐酸)调节pH。
对于pH的调节(优选调节至生理pH)，缓冲剂尤其有用。本发明溶液的pH应当保持在5.5至8.0、更优选约6.0至7.5、更优选约6.5至7.0(or所述范围内的任何特定值)的范围内。可加入适合的缓冲剂、诸如硼酸、硼酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸、碳酸氢钠、TRIS和多种混合的磷酸盐缓冲剂(包括的Na2HPO4、NaH2PO4和KH2PO4的组合)及其混合物。优选硼酸盐缓冲剂。通常，缓冲剂以重量计将以约0.05至2.5％、优选地0.1至1.5％的范围的量使用。
根据优选的实施方案，本发明的制剂不包含防腐剂。在某些实施方案中，眼用制剂另外地包含防腐剂。防腐剂通常可选自季铵化合物、诸如苯扎氯铵、苯佐氯铵等。更好地将苯扎氯铵描述为:N-苄基-N—(C8-C18烷基)-N,N-二甲基氯化铵。防腐剂的进一步的实例包括抗氧化剂、诸如维生素A、维生素E、维生素C、棕榈酸视黄酯和硒；氨基酸半胱氨酸和甲硫氨酸；柠檬酸和枸橼酸钠；和合成防腐剂、诸如硫柳汞和烷基尼泊金酯类，包括例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。其他防腐剂包括八癸基二甲基苄基氯化铵、氯化六烃季铵、苄索氯铵、苯酚、八茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇、间甲酚、硝酸苯汞、醋酸苯汞或硼酸苯汞、高硼酸钠、亚氯酸钠、醇类、诸如三氯叔丁醇、丁基或苄醇或苯基乙醇、胍衍生物、诸如氯己定或聚六亚甲基双胍、高硼酸钠、II、山梨酸和稳定氧氯络合物(例如，)。优选的防腐剂为季铵化合物、特别是苯扎氯铵或其衍生物、诸如Polyquad(参见美国专利编号4,407,791)、烷基-汞盐、尼泊金酯类和稳定氧氯络合物(例如，)。适用时，将充足量的防腐剂加入眼用组合物以保证防止在使用期间遭受由细菌和真菌引起的继发性污染。
在特别的实施方案中，本发明的制剂包含选自以下的防腐剂:苯扎氯铵(0.001％至0.05％)；苄索氯铵(至多0.02％)；山梨酸(0.01％至0.5％)；聚六亚甲基双胍(0.1ppm至300ppm)；聚季铵-1(polyquaternium-1)(Omamer M)–0.1ppm至200ppm；次氯酸盐、高氯酸盐(perchlorite)或亚氯酸盐化合物、500ppm或更少、优选10至200ppm)；稳定的过氧化氢溶液，产生以重量％计0.0001至0.1％的过氧化氢以及适合的稳定剂的过氧化氢源；对羟基苯甲酸的烷基酯及其混合物、优选对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯(0.01％至0.5％)；氯己定(0.005％至0.01％)；三氯叔丁醇(至多0.5％)；和稳定的氧氯复合物(oxychlorocomplex)0.001％至0.5％。
在另一个实施方案中，本发明的眼用制剂不包含防腐剂。所述制剂将可用于戴接触镜片的患者或使用若干局部用滴眼剂的患者和/或其中可能更多需要限制对防腐剂的暴露的已经有受损眼表面(例如干眼)的患者。
粘度增强剂和缓和剂
在某些实施方案中，可将粘度增强剂加入本发明的制剂中。所述增强剂的实例包括多糖、诸如透明质酸及其盐、硫酸软骨素及其盐、右旋糖酐类、多种纤维素家族的聚合物、乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物。
本领域已知多种粘度增强剂且包括但不限于:多元醇、诸如、甘油、甘油、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚山梨酯80、丙二醇和乙二醇、聚乙烯醇、聚维酮和聚乙烯吡咯烷酮；纤维素衍生物、诸如羟丙基甲基纤维素(也称为羟丙甲纤维素和HPMC)、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和甲基纤维素；右旋糖酐类、诸如右旋糖酐70；水溶性蛋白质诸如明胶；卡波姆、诸如卡波姆934P、卡波姆941、卡波姆940和卡波姆974P；和树胶诸如HP-瓜尔胶或其组合。其他化合物也可加入本发明的制剂中以增加载体的粘度。粘度增强剂的实例包括但不限于:多糖、诸如透明质酸及其盐、硫酸软骨素及其盐、右旋糖酐类、多种纤维素家族的聚合物；乙烯基聚合物；和丙烯酸聚合物。上述物质的组合和混合物也是适合的。
根据一些实施方案，粘度增强剂或粘度增强剂的组合的粘度浓度范围为约0.5％至约2％w/v或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，粘度增强剂或粘度增强剂的组合的粘度浓度范围为约0.5％至约1.5％w/v或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，粘度增强剂或粘度增强剂的组合的粘度浓度范围为约0.5％至约1％w/v或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，粘度增强剂或粘度增强剂的组合的粘度浓度范围为约0.6％至约1％w/v或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，粘度增强剂或粘度增强剂的组合的粘度浓度范围为约0.7％至约0.9％w/v或所述范围内的任何特定值(即、约0.70％、约0.71％、约0.72％、约0.73％、约0.74％、约0.75％、约0.76％、约0.77％、约0.78％、约0.79％、约0.80％、约0.81％、约0.82％、约0.83％、约0.84％、约0.85％、约0.86％、约0.87％、约0.88％、约0.89％或约0.90％)。
在某些实施方案中，本发明的制剂包含眼用缓和剂和/或粘度增强聚合物，其选自一种或多种以下物质:纤维素衍生物，诸如羧甲基纤维素(0.01至5％)、羟基乙基纤维素(0.01％至5％)、羟基丙基甲基纤维素或羟丙甲纤维素(0.01％至5％)和甲基纤维素(0.02％至5％)；右旋糖酐40/70(0.01％至1％)；明胶(0.01％至0.1％)；多元醇，诸如甘油(0.01％至5％)、聚乙二醇300(0.02％至5％)、聚乙二醇400(0.02％至5％)、聚山梨酯80(0.02％至3％)、丙二醇(0.02％至3％)、聚乙烯醇(0.02％至5％)和聚维酮(0.02％至3％)；透明质酸(0.01％至2％)；和硫酸软骨素(0.01％至2％)。
在本发明的一个优选的实施方案中，粘度增强组分包含羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素或HPMC)。HPMC功能为提供所需粘度水平和提供缓和(demulcent)能力。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0％至约2％w/v或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0％至约1.5％w/v或所述范围内的任何特定值。根据一些实施方案，HPMC的浓度范围为约0％至约0.5％w/v或所述范围内的任何特定值。
在另一个优选的实施方案中，粘度增强组分包含羧甲基纤维素钠。
本发明的眼用制剂的粘度可根据本领域已知的标准方法测定，诸如使用粘度计或流变仪。本领域技术人员会认识到，诸如温度和剪切速率因素可能影响粘度测量。在一个特别的实施方案中，使用Brookfield锥板式粘度计型号VDV-III Ultra+(其具有CP40或等效纺锤体，剪切速率约22.50+/-约10(1/秒))或Brookfield粘度计型号LVDV-E(其具有SC4-18或等效纺锤体，剪切速率约26+/-约10(1/秒)))在25℃+/-1℃测量本发明的眼用制剂的粘度。
张度增强剂
如果需要的话，通常通过张度增强剂来调节张度。这样的试剂可以是例如离子型和/或非离子型。离子型张度增强剂的实例是碱金属或碱土金属卤化物，例如，CaCl2、KBr、KCl、LiCl、Nal、NaBr或NaCl、Na2SO4或硼酸。非离子型张度增强剂是，例如，脲、甘油、山梨醇、甘露醇、丙二醇或右旋糖。通常用张度剂调节本发明的水溶液以模仿正常泪液的渗透压，其相当于0.9％氯化钠溶液或2.5％甘油溶液。优选约200至1000mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度、更优选200至500mOsm/kg或所述范围内的任何特定值(例如，200mOsm/kg、210mOsm/kg、220mOsm/kg、230mOsm/kg、240mOsm/kg、250mOsm/kg、260mOsm/kg、270mOsm/kg、280mOsm/kg、290mOsm/kg、300mOsm/kg、310mOsm/kg、320mOsm/kg、330mOsm/kg、340mOsm/kg、350mOsm/kg、360mOsm/kg、370mOsm/kg、380mOsm/kg、390mOsm/kg或400mOsm/kg)。在一个特定的实施方案中，用张度剂将本发明的眼用制剂调节至约240至360mOsm/kg(例如，300mOsm/kg)的范围的重量摩尔渗透压浓度。
本发明的制剂还可包含张度剂或多个张度剂的组合。根据一些实施方案，本发明的制剂可包括有效量的张度调节组分。可以使用的适合的张度调节组分包括常规用于接触镜片护理产品中的那些、诸如各种无机盐。多元醇和多糖还可以用于调节张度。张度调节组分的量有效提供200mOsmol/kg至1000mOsmol/kg或所述范围内的任何特定值的重量摩尔渗透压浓度。
优选地，张度组分包含模拟眼泪的矿物组合物的生理平衡盐溶液。根据一些实施方案，可通过包含例如离子和/或非离子类型的物的张度增强剂调节张度。离子型张度增强剂的实例为碱金属或碱金属卤化物，例如，CaCl2、KBr、KCl、LiCl、NaI、NaBr或NaCl、Na2SO4或硼酸。非离子型张度增强剂为例如，脲、甘油、山梨醇、甘露醇、丙二醇或右旋糖。
根据一些实施方案，张度组分包含一定比例的两种或多种的NaCl、KCl、ZnCl2、CaCl2,和MgCl2，所述比例提供了上文所述范围的重量摩尔渗透压浓度。根据一些实施方案，本发明的制剂的重量摩尔渗透压浓度范围为约100至约1000mOsm/kg、优选约500至约1000mOsm/kg。根据一些实施方案，张度组分包含一定比例的三种或更多种的NaCl、KCl、ZnCl2、CaCl2和MgCl2，所述比例提供了约100至约1000mOsm/kg、优选约500至约1000mOsm/kg的范围的重量摩尔渗透压浓度。根据一些实施方案，张度组分包含一定比例的四种或多种的NaCl、KCl、ZnCl2、CaCl2和MgCl2，所述比例提供了提供了约100至约1000mOsm/kg、优选约500至约1000mOsm/kg的范围的重量摩尔渗透压浓度。根据一些实施方案，张度组分包含一定比例的NaCl、KCl、ZnCl2、CaCl2和MgCl2，所述比例提供了约100至约1000mOsm/kg、优选约500至约1000mOsm/kg的范围的重量摩尔渗透压浓度。
根据一些实施方案，NaCl范围为约0.1至约1％w/v、优选约0.2至约0.8％w/v、更优选约0.39％w/v。根据一些实施方案，KCl范围为约0.02至约0.5％w/v、优选约0.05至约0.3％w/v、更优选约0.14％w/v。根据一些实施方案，CaCl2范围为约0.0005至约0.1％w/v、优选约0.005至约0.08％w/v、更优选约0.06％w/v。根据一些实施方案，MgCl2范围为约0.0005至约0.1％w/v、优选约0.005至约0.08％w/v、更优选约0.06％W/V。根据一些实施方案，ZnCl2范围为约0.0005至约0.1％w/v、优选约0.005至约0.08％w/v、更优选约0.06％W/V。根据一些实施方案，可使用张度剂将本发明的眼用制剂调节至大约为正常泪液的渗透压，其等于0.9％氯化钠溶液或2.5％的甘油溶液。优选约225至400mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度、更优选280至320mOsm。
增溶剂
所述制剂可能额外需要增溶剂的存在，尤其是在一种或多种成分倾向于形成混悬液或乳状液时。适合的增溶剂包括例如，泰洛沙泊、脂肪酸甘油聚乙二醇酯类、脂肪酸聚乙二醇酯类、聚乙二醇类、甘油醚类、环糊精(例如α-、β-或γ-环糊精、例如烷基化的、羟基烷基化的、羧基烷基化的或烷氧基羰基-烷基化的衍生物或一-或二糖基-α-、β-或γ-环糊精、一-或二麦芽糖基-α-、β-或γ-环糊精或潘糖基-环糊精)、聚山梨酯20、聚山梨酯80或这些化合物的混合物。在一个优选的实施方案中，增溶剂是蓖麻油和环氧乙烷反应产物，例如商品Cremophor或Cremophor已证实蓖麻油和环氧乙烷的反应产物是特别好的增溶剂，在眼中耐受极好。在另一个实施方案中，增溶剂是泰洛沙泊或环糊精。使用的浓度尤其取决于活性成分的浓度。添加的量通常足以溶解活性成分。例如，增溶剂的浓度为活性成分的浓度的0.1至5000倍。
缓和剂
本发明中使用的缓和剂以提供缓和作用的有效量(即"缓和量")使用，即足以润滑粘膜表面并缓解干燥和刺激。适合的缓和剂的实例可包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇，且其他组分、诸如聚环氧乙烷和聚丙烯酸被明确排除。在其他实施方案中，可使用其他或另外的缓和剂与甘油和丙二醇组合。例如，还可使用聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇。
本发明中使用的具体量将根据应用而变化；然而，提供若干缓和剂的通常的范围:甘油:约0.2至约1.5％，但优选约1％(w/w)；丙二醇:约0.2至约1.5％，但优选约1％(w/w)；纤维素衍生物:约0.2至约3％，但优选约0.5％(w/w)。如果使用另外的缓和剂，则它们通常以在上文引用的非处方药专著中给出的量使用。优选的纤维素衍生物是药物级羟丙基甲基纤维素(HPMC)。
稳定性
本发明的制剂为配制的疏水性药物(例如，类固醇)和制剂的其他任选的活性剂提供了化学稳定性。在这种情况"稳定性"和"稳定的"是指疏水性药物(例如，类固醇)和其他任选的活性剂在给定的制造、制备、运输和存储的条件下对化学降解和物理变化、诸如沉降或沉淀的抗性。本发明的"稳定的"制剂在给定的制造、制备、运输和/或存储的条件下还优选保留至少90％、95％、98％、99％或99.5％的初始量或参考量。疏水性药物(例如，类固醇)和其他任选的活性剂的量可以使用任何本领域认可的方法、例如UV-Vis分光光度法和高压液相色谱法(HPLC)来确定。
在某些实施方案中，制剂在约20至30℃的温度范围稳定至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周或至少7周。在其他的实施方案中，所述制剂在约20至30℃的温度范围稳定至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月或至少12个月。在一个实施方案中，所述制剂在20-25℃稳定至少3个月。
在其他的实施方案中，所述制剂在约2至8℃的温度范围稳定至少1个月、至少2个月、至少4个月、至少6个月、至少8个月、至少10个月、至少12个月、至少14个月、至少16个月、至少18个月、至少20个月、至少22个月或至少24个月。在一个实施方案中，所述制剂在2至8℃稳定至少2个月。
在其他的实施方案中，所述制剂在约-20℃的温度稳定至少1个月、至少2个月、至少4个月、至少6个月、至少8个月、至少10个月、至少12个月、至少14个月、至少16个月、至少18个月、至少20个月、至少22个月或至少24个月。在一个实施方案中，所述制剂在-20℃至少稳定6-12个月。
在一个特定的实施方案中，本发明的疏水性药物制剂在约20-30℃温度以至多0.10％的浓度稳定至少3个月。在另一个实施方案中，制剂在约2-8℃以至多0.10％的浓度稳定至少6个月。
在一些实施方案中，所述制剂是无菌的局部用纳米晶体丙酸氟替卡松制剂，其包含0.001％-5％本发明的FP纳米晶体(例如，0.01-1％或约0.25％、0.1％或0.05％)和药学上可接受的含水赋形剂的混悬物。
在一些实施方案中，所述制剂还包含约0.002-0.01％(例如50ppm±15％)苯扎氯铵(BKC)。
在一些实施方案中，所述制剂还包含一种或多种包衣分散剂(例如，泰洛沙泊、聚山梨酯80和PEG硬脂酸酯、诸如PEG40硬脂酸酯)、一种或多种组织润湿剂(例如，甘油)、一种或多种聚合的稳定剂(例如，甲基纤维素4000cP)、一种或多种缓冲剂(例如，磷酸氢二钠Na2HPO4和磷酸二氢钠NaH2PO4和/或一种或多种张度调节剂(例如，氯化钠)。
在一个实施方案中，所述制剂包括0.01％-1％本发明的FP纳米晶体(例如，约0.25％、0.1％或0.05％)、苯扎氯铵(例如，0.002-0.01％或约0.005％)、聚山梨酯80(例如，0.01-1％或约0.2％)、PEG40硬脂酸酯(例如，0.01-1％或约0.2％)、甘油(例如，0.1-10％或约1％)、甲基纤维素4000cP(例如，0.05-5％或0.5％)、氯化钠(例如，0.05-5％或0.5％)、磷酸氢二钠Na2HPO4和磷酸二氢钠NaH2PO4和水，且所述制剂具有约6.8-7.2的pH。在另一个实施方案中，所述制剂包含0.01％-1％本发明的FP纳米晶体(例如，约0.25％、0.1％或0.05％)、苯扎氯铵(例如，0.002-0.01％或约0.005％)、泰洛沙泊(例如，0.01-1％或约0.2％)、甘油(例如，0.1-10％或约1％)、甲基纤维素4000cP(例如，0.05-5％或0.5％)、氯化钠(例如，0.05-5％或0.5％)、磷酸氢二钠Na2HPO4和磷酸二氢钠NaH2PO4和水，且所述制剂具有约6.8-7.2的pH。
在一些实施方案中，所述制剂在20℃具有40-50cP的粘度。在一些实施方案中，制剂的重量摩尔渗透压浓度为约280-350(例如，约285-305)mOsm/kg。在一些实施方案中，制剂的pH为约6.8-7.2。在一些实施方案中，所述制剂在20℃具有40-50cP的粘度。
在一些实施方案中，制剂中的FP纳米晶体具有300-600nm的中位数尺寸、500-700nm的平均尺寸、300-600nm的D50值和/或低于2μm的D90值。
在一些实施方案中，通过例如涂药器(例如，刷子诸如brush或药签诸如25-3317-U药签)以治疗有效量施用所述制剂以治疗睑缘炎。在一个实施方案中，将两滴(约40μL滴大小)制剂载于涂药器(例如，刷子或药签)，然后通过例如对着下睑触碰涂药器(一次或两次)，然后对着上睑触碰涂药器(一次或两次)，将其递送至有需要的个体，且如需要，使用新的涂药器对其他眼重复以上步骤。
使用方法
本发明还提供了本文描述的制剂在所述疏水性药物所应用的障碍、例如炎性障碍、呼吸系统障碍、自身免疫性疾病或癌症的全身或非全身性治疗、预防或减轻症状中的应用。
在实施方案中，根据施用模式，丙酸氟替卡松可以用于治疗例如可用局部用皮质类固醇治疗的呼吸系统相关疾病、诸如哮喘、肺气肿、呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性支气管炎、囊性纤维化、获得性免疫缺陷综合征、包括AIDS相关肺炎、季节性鼻炎或常年性鼻炎、季节性或常年性变应性鼻炎和非变应性鼻炎(血管运动性鼻炎)或皮肤病症。如同其他局部用皮质类固醇一样，丙酸氟替卡松具有抗炎、止痒和血管收缩性质。
当以气雾剂施用时，丙酸氟替卡松在肺中起局部作用；因此，血浆水平不能预测疗效。使用标记和未标记的常规丙酸氟替卡松的口服给药的研究已经证实丙酸氟替卡松的口服全身生物利用度可忽略不计(<1％)，主要是由于不完全的吸收和在肠和肝中的系统前代谢。
局部用皮质类固醇经皮吸收的程度由多个因素来决定，包括介质和表皮屏障的完整性。封闭敷料(occlusive dressing)增加渗透性。局部用皮质类固醇可以被正常的完整的皮肤吸收。皮肤中的炎症和/或其他疾病进程增加经皮吸收。
递送途径
在某些实施方案中，本发明中公开的治疗方法包括所有局部(非全身)递送至眼组织和附器的途径。其包括但不限于局部用制剂、诸如滴眼剂、凝胶剂或软膏剂和任何眼内、玻璃体内、视网膜下、囊内、脉络膜上、眼球筋膜囊下、结膜下、前房内、睑内、穹窿、眼球后和眼球周注射或可植入的或手术装置。
已经通过将粗产物(例如如英国专利编号2088877中所述得到)溶于乙酸乙酯中、然后重结晶得到命名为形式1的晶形的丙酸氟替卡松。还已经显示标准喷雾干燥技术仅得到已知的丙酸氟替卡松的形式1。参见Cooper等的美国专利编号6,406,718。Cooper等描述了使用超临界流体技术制备的丙酸氟替卡松的第二种多晶型物。
Cooper等描述了形成微粒丙酸氟替卡松产物的方法，其包括将超临界流体和在溶液或混悬物中至少含丙酸氟替卡松的介质一起引入形成颗粒的容器，其温度和压力受控，使得介质的分散和提取通过超临界流体的作用基本同时进行。所述用作超临界流体的化学物质包括二氧化碳、一氧化二氮、六氟化硫、氙、乙烯、三氟氯甲烷、乙烷和三氟甲烷。超临界流体可任选地包含一种或多种改性剂、诸如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈或其任何混合物。超临界流体改性剂(或共-溶剂)是在加入到超临界流体时改变在临界点或临界点附近的超临界流体的内在性质的化学物质。根据Cooper等描述，使用超临界流体制备的丙酸氟替卡松颗粒具有1至10微米、优选1至5微米的范围的粒度。
Cooper等的氟替卡松组合物伴有若干缺点。首先，小于1微米的粒度是合乎需要的，因为更小的粒度能与施用后更快速的溶出相关，所以起效更快，且生物利用度更高。此外，期望非常小的氟替卡松颗粒，即直径小于约150nm，因为该类组合物可以进行无菌过滤。此外，Cooper等的氟替卡松颗粒可包含超临界流体残留，超临界流体是不期望的，因为它们没有药物性质，且能潜在地引起不良反应。
丙酸氟替卡松在市场上有若干不同的形式。ADVAIR(GlaxoSmithKline,Research Triangle Park,N.C.)是微细(microfine)丙酸氟替卡松和昔萘酸沙美特罗(salmeterol xinofoate)(为高选择性的β2-肾上腺素能支气管扩张药)的组合的吸入粉末剂。市售剂型有三种剂量的丙酸氟替卡松:100mcg、250mcg和500mcg。将施用至健康个体后，在1至2小时内达到丙酸氟替卡松的血浆浓度峰值。参见Physicians'Desk Reference,第57版,第1433页(Thompson PDR,N.J.2003)。在施用500/50(含500mcg丙酸氟替卡松和50mcg昔萘酸沙美特罗)、同时施用丙酸氟替卡松粉末500mcg和沙美特罗50mcg后，或单独施用丙酸氟替卡松粉末500mcg后，丙酸氟替卡松的平均稳态血浆浓度峰值平均分别为57、73和70pg/mL(Id)。在使用装置每日两次施用500-mcg丙酸氟替卡松吸入粉末剂后，在健康患者(n＝11)中稳态丙酸氟替卡松血浆浓度峰值范围为不可检测至266pg/mL。平均的丙酸氟替卡松血浆浓度为110pg/mL。使用装置在健康志愿者中测定的丙酸氟替卡松吸入粉末剂的全身生物利用度平均为18％。ADVAIR标示用于哮喘的长期、每日两次的维持治疗。
(GlaxoSmithKline)是在乳糖中的微细丙酸氟替卡松(50mcg、100mcg和250mcg)的口腔吸入粉末剂。在标准体外测试条件下，从50mcg、100mcg和250mcg规格分别递送47、94或235mcg丙酸氟替卡松。在健康成人志愿者中来自从装置的丙酸氟替卡松的全身生物利用度平均为约18％。标示用于作为预防性治疗法的哮喘的维持治疗，并用于需要口服皮质类固醇治疗哮喘的患者。
(GlaxoSmithKline)是与乳糖共混的微细丙酸氟替卡松的口腔吸入粉末剂(50mcg、100mcg和250mcg)。在标准体外测试条件下，从 50mcg、100mcg或250mcg规格分别递送44、88或220mcg丙酸氟替卡松(Id)。在健康成人志愿者中来自装置的丙酸氟替卡松的全身生物利用度平均为约13.5％(Id)。 标示用于作为预防性治疗法的哮喘的维持治疗，并用于需要口服皮质类固醇治疗哮喘的患者。
(GlaxoSmithKline)是丙酸氟替卡松在两种含氯氟烃抛射剂(三氯氟甲烷和二氯二氟甲烷)与卵磷脂的混合物中的微晶混悬物(44mcg、110mcg或220mcg)的口腔吸入气雾剂。44、110或220mcg规格的丙酸氟替卡松制剂的吸入器的促动器(actuator)的每次活动从阀门分别递送50、125或250mcg的丙酸氟替卡松。在健康志愿者中丙酸氟替卡松吸入气雾剂的全身生物利用度平均为约30％的从促动器递送的剂量。在880-mcg吸入给药后血浆浓度峰值范围为0.1至1.0ng/ml(Id)。标示用于作为预防性治疗法的哮喘的维持治疗。
(GlaxoSmithKline)是微细丙酸氟替卡松的含水混悬物(50mcg/剂量)的鼻腔喷雾，通过计量的雾化喷雾泵施用。所述剂型还包含微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、右旋糖、0.02％w/w苯扎氯铵、聚山梨酯80和0.25％w/w苯乙基醇。间接计算表明通过鼻内途径递送的丙酸氟替卡松具有平均小于2％的绝对生物利用度。在变应性鼻炎患者鼻内治疗3周后，仅当超过推荐剂量时，丙酸氟替卡松血浆浓度超过检测水平(50pg/mL)，然后仅在偶然的样品中为低血浆水平。由于鼻内途径的低生物利用度，大多数药物动力学数据通过其他施用途径获得。使用放射标记药物的口服施用的研究已经证实丙酸氟替卡松被从血浆中高度提取且吸收低。口服生物利用度可忽略不计，且大多数的循环放射性是来自无活性的代谢物。比较口服和经鼻施用的作用的研究证实的疗效可以归因于应用于鼻粘膜的丙酸氟替卡松的外用效果。鼻腔喷雾标示用于鼻症状的治疗季节性和常年性变形性鼻炎和非变应性鼻炎。
(GlaxoSmithKline)是局部用皮肤用丙酸氟替卡松乳膏剂或软膏剂(0.05％和0.005％浓度)。乳膏剂和软膏剂为中等效力的皮质类固醇，标示用于皮质类固醇-敏感的皮肤病的炎症和瘙痒现象的缓解。在人体研究中(12个健康男性每日两次接受12.5g的0.05％丙酸氟替卡松乳膏剂达3周)，血浆水平一般低于量化水平(0.05ng/ml)。在其他研究中(6个在封闭条件下施用25g的0.05％丙酸氟替卡松乳膏剂达5天的健康男性)，氟替卡松的血浆水平范围为0.07至0.39ng/ml。在6个在封闭条件下每日两次将26g丙酸氟替卡松软膏剂0.005％涂覆至躯干和腿达至多5天的健康志愿者进行的研究中，氟替卡松的血浆水平范围为0.08至0.22ng/mL。
本发明的特征有个体中的眼部障碍、诸如睑缘炎和/或MGD的治疗、预防或症状缓解的方法，其包括使用上文所述的新的制剂。例如，治疗或预防眼部障碍(例如，睑缘炎或MGD)的方法可包括向有需要的个体的眼、眼睑、眼睫毛或眼睑缘施用含上文所述的新的制剂。
本发明的特征还有在个体中治疗皮肤障碍的方法，其包括使用本文所述的新的制剂。
本发明的特征还有通过向有需要的个体施用本文所述的制剂来治疗呼吸系统疾病(例如，哮喘或COPD)、鼻炎、皮炎或食管炎的方法。
本发明的特征还有通过向有需要的个体施用本文所述的制剂治疗癌症(例如，淋巴瘤)的方法。
本发明的特征还有通过向有需要的个体施用本文所述的制剂治疗自身免疫性疾病(例如，狼疮或银屑病)的方法。
在给定制剂中包含的活性剂的有效量和制剂用于目标障碍例如睑缘炎和/或MGD的治疗、预防或症状缓解的功效可通过以下的一项或多项评价:裂隙灯评价、荧光素染色法、泪膜破裂时间和评价睑板腺分泌物质量(通过评价以下的一种或多种：分泌物粘度、分泌物颜色、腺排列(gland alignment)、血管供应模式(vascularity pattern)、血管发红、角化过度、后眼睑边缘、睫毛、粘膜皮肤连接、腺周围发红、腺几何形状和腺高度)。
制剂中活性剂的有效量将取决于药物的吸收、灭活和排泄速率以及活性剂从所述制剂的递送速率。应当指出，剂量值也可以随待减轻的病症的严重程度而变化。进一步应当理解，对于任何特定受试者，应当根据个体需要和施用所述组合物或者监督所述组合物施用的人员的专业判断随时间调整具体剂量方案。通常，使用本领域技术人员已知的技术确定给药。
本发明的任何化合物的剂量将随下述因素而变化：患者的症状、年龄和其它身体特征，要治疗或预防的病症的性质和严重程度，期望的舒适程度，给药路径，以及补充剂的形式。任何本发明制剂可以以单次剂量的形式或者以分份剂量的形式进行施用。通过本领域技术人员已知的或者本文教导的技术，可以容易地确定本发明的制剂的剂量。在用于治疗睑缘炎的实施方案中，将约1-100μg(例如，10-100μg)FP纳米微粒施用于每个眼睑。在一个实施方案中，两滴(总体积约约80μL)含FP纳米晶体(例如，0.01-1％或约0.25％、0.1％或约0.05％)的制剂应用于每只眼睛。例如，将两滴制剂先载于涂药器(例如，刷子或药签)，然后通过例如对着下睑触碰涂药器(一次或两次)，然后对着上睑触碰涂药器(一次或两次)，将其递送至有需要的个体，且如需要，使用新的涂药器对其他眼重复以上步骤。
对于本发明的任何特定制剂而言，可能需要确定有效剂量或量以及所述制剂的给药时间安排的任何可能影响。这可以通过本文所述的常规实验来完成。通过施用所述制剂并如下评估施用的效应，可以评估任意制剂以及治疗方法或预防方法的有效性：测量一个或者多个如本文所述的与所述组合物的效力有关和与患者的舒适程度有关的指标，并将这些指标的治疗后值与相同指标在治疗之前的值进行对比，或者将这些指标的治疗后值与使用不同制剂时相同指标的值进行对比。
对于给定的患者而言，产生最有效治疗的任何特定制剂的精确给药时间和量将取决于具体化合物的活性、药代动力学和生物利用度、患者的生理学状况(包括年龄、性别、疾病类型以及阶段，总体身体状况，对给定剂量和药物治疗类型的应答性)、给药途径等。本文提供的指引可以用来优化治疗，例如，确定最佳的给药时间和/或量，这将最多需要由监测受试者和调整剂量和/或时间安排构成的例行实验。
配制进本发明的组合物中的若干活性剂的组合使用能减少任何单独组分的需求剂量，因为不同组分的功效的生效和持续时间可能是互补的。在这样的组合治疗中，不同的活性剂可以一起或者分开地，且同时地或者在一天内的不同时间递送。
包装
可以将本发明的制剂包装为单次剂量产品或多次剂量产品。所述单次剂量产品在打开包装之前是无菌的，并且在所述包装中的所有组合物旨在在单次应用中施用给患者的一只眼或双眼。通常不必要使用抗微生物防腐剂以在包装打开以后维持组合物的无菌度。如果是软膏剂制剂的话，可以将所述制剂以适用于软膏剂的方式包装，这是本领域技术人员已知的。
多次剂量产品在打开包装之前也是无菌的。但是，因为所述组合物的容器可能被开启许多次才能将容器内的所有组合物耗尽，所以多次剂量产品必须具有足够的抗微生物活性，以确保组合物不会因为对容器的重复打开和操作而受到微生物污染。该目的所需的抗微生物活性水平是本领域技术人员众所周知的，并且在官方出版物中有具体规定，诸如美国药典(“USP”)和食品和药品管理局的其它出版物，以及其它国家的相应出版物。在那些出版物中提供了眼用药物产品抗微生物污染的防腐规定的详细描述，以及用于评价具体制剂的防腐效力的操作的详细描述。在美国，防腐效力标准通常被称为“USP PET”要求(首字母简略词“PET”代表“防腐效力试验”)。
单次剂量包装设计的使用消除了对组合物中的抗微生物防腐剂的需求，从医学观点看，这是一项显著的优点，因为用于使眼用组合物防腐的常规抗微生物剂(例如，苯扎氯铵)可能引起眼睛刺激，特别是对于患有干眼病症或者预先存在眼睛刺激的患者。但是，目前可得到的单次剂量包装设计，例如通过被称为“成型、灌装和密封”的方法制备的小容量塑料瓶，对于生产商和消费者而言具有几个缺点。单次剂量包装系统的主要缺点是，需要远远更大量的包装材料，这既浪费又增加成本，并且给消费者带来不便。并且，存在这样的风险：消费者不会按照被教导的那样，在将一滴或两滴施用给眼之后抛弃单次剂量容器，而是相反，他们保留已开封的容器以及其中剩余的任何组合物用于以后使用。单次剂量产品的这种不适当使用，会造成单次剂量产品的微生物污染风险，并且当被污染的组合物施用于眼睛时，会造成眼睛感染的相关风险。
尽管本发明的制剂优选地配制成“即用型”水溶液，在本发明的范围内考虑了备选的制剂。因而，例如，可以将眼用溶液的活性成分、表面活性剂、盐、螯合剂或其它组分、或者它们的混合物冻干，或者以其它方式作为准备在水中(例如，在去离子水或蒸馏水中)溶解的干粉或片剂来提供。由于所述溶液的自防腐特性，不需要无菌水。
可如下制备眼用软膏剂:如需要，将防腐剂、表面活性剂、稳定剂、醇类、酯类或油类与置于研钵或用于软膏剂的混合机中的软膏基质、诸如液体石蜡或白凡士林共混，形成混合物。将由此制备的软膏剂装入用于软膏剂的瓶或管中。
药盒
在又一个实施方案中，本发明提供了用于包装和/或贮存和/或使用本文所述的制剂的药盒，以及用于实施本文所述的方法的药盒。因而，例如，药盒可以包括一个或多个容器，所述容器含有一种或多种本发明的眼用溶液、软膏剂、混悬剂或制剂、片剂或胶囊剂。可以将所述药盒进行设计以便利于运输、使用和贮存中的一个或多个方面。
所述药盒还可任选地包括局部用涂药器以方便本文提供的制剂的施用。在一些方面中，将所述制剂预装载至局部用涂药器。局部用涂药器包括例如药签或棒。
所述药盒可以任选地包括指导材料，其含有公开了使用在其中提供的制剂的方法的指示(即，方案)。所述药盒还可任选地包括局部用涂药器以方便本文提供的制剂的施用。尽管所述指导材料通常包括书面材料或打印材料，但并不局限于此。本发明涉及到能够存储这种指导并且将其传送给末端用户的任何介质。这样的介质包括但不限于：电子存储介质(例如，磁盘、磁带、卡盘、芯片)，光学介质(例如CDROM)等。这类介质可以包括提供这样的指导材料的互联网地址。
将所有本文提及的出版物和专利的全部内容引入本文作为参考，就如酮，每个单独出版物或专利具体地和单独地指明引入本文作为参考。如果有矛盾，以本申请、包括本文的定义为准。除非另外指出，否则本文使用的所有百分比和比例均以重量计。除非另外指出，否则本文使用的所有平均数为数均值。例如，本文所述的纳米晶体的平均尺寸为数均尺寸。此外，除非另外指出，否则本文所述的聚合物的分子量为所述聚合物的数均摩尔质量。用于本文的纳米微粒的粒度或厚度的范围/分布，除纳米微粒的平均尺寸的范围外，均是由D10和D90值定义的范围。
定义
术语“D10”或“D10值”是指如下的值，其中总体的10％在该值以下。类似地，“D90”或“D90值”是指如下的值，其中总体的90％在D90以下，且“D50”或“D50值”是指如下的值，其中总体的50％在D50以下。
术语“统计众数(statistical mode)”或“众数(mode)”是指最常出现在一组数据中的值。数据集具有多于一个众数并不少见。具有二个众数的分布称为双众数(bimodal)。具有三个众数的分布称为三众数(trimodal)。具有连续随机变量的分布的众数是函数的最大值。离散分布可能有超过一个众数。
术语“中位值”或“统计中位值”是将数据样本、总体或概率分布的较高一半与较低的一半分开的数值。
术语“异常的睑板腺分泌物”是指睑板腺分泌物，其粘度、不透明度、颜色增加和/或腺分泌物间隔时间(不应期)增加。
术语“含水的”通常表示含水组合物，其中以水的重量计算，载体的含量>50％，更优选地>75％和特别是90％。
术语“睑缘炎”是指包括眼睑的炎症的障碍，其中所述炎症导致眼睑发红、眼睑肿胀、眼睑不适、眼睑瘙痒、眼睑皮肤剥脱和眼发红。异常的睑板腺分泌物起作用，且观察到眼睑角化、睑缘变圆、灰线模糊、增加的睑缘透明度和增加的血管供应。尽管大多数研究人员通常将术语睑板腺功能不良(MGD)和睑板腺炎称为睑缘炎，但注意到这两个疾病是与异常的睑脂(meibum)(即，睑板腺分泌物)相关的不同的疾病是很重要的，且这两个术语是不可互换的。睑缘炎可引起慢性睑板腺功能不良。由于如果作为泪膜最外层和延缓眼泪蒸发的睑脂的质量差，MGD又会引起干眼症状。
本文中使用的术语“舒适的”表示，与疼痛、灼热、刺感、瘙痒、刺激或与身体不适有关的其它症状的身体感觉相反的，身体良好或缓解的感觉。
本文中使用的术语“舒适的眼用制剂”表示如下的眼用制剂，它使身体从与睑缘炎症和/或眼睛不适有关的征兆或症状缓解，并且在逐渐加入眼睛中时仅仅引起可接受的水平的疼痛、灼热、刺感、瘙痒、刺激、或与眼睛不适有关的其它症状。
短语“有效量”是本领域公知的术语，表示如下的活性剂的量：当掺入本发明的药物组合物中时，其以适用于任何医学治疗的合理收益/风险比产生某些所需效果。在某些实施方案中，该术语表示消除、减少或维持(例如，预防其蔓延)眼睑缘刺激的症状、或者预防或治疗眼睑缘炎症所必需的或足够的量。所述有效量可以随诸如下述因素而变化：待治疗的疾病或病症、施用的具体组合物、或疾病或病症的严重程度。本领域技术人员可以根据经验确定具体活性剂的有效量，而不需要过多的实验。
短语“药学上可接受的”是本领域公知的，并且表示如下的组合物、聚合物和其它材料和/或其盐和/或剂型：在合理的医学判断范围内，其适用于接触人类和动物的组织，而没有过度的毒性、刺激、变应性应答或其它问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。
短语“药学上可接受的载体”是本领域公知的，并且表示，例如，药学上可接受的材料、组合物或介质，诸如液体(含水或非水性)或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料，其参与将任何补充剂或组合物或其组分从一个器官或身体部位携带或运输至另一个器官或身体部位，或者将活性剂递送至眼睛的表面。每种载体必须是“可接受的”，其含义是，与所述组合物的其它成分相容，且对患者无害。在某些实施方案中，药学上可接受的载体是无热原的。可以充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和它的衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)黄蓍胶粉末；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油类、诸如蓖麻油、橄榄油、花生油、夏威夷果油、胡桃油、杏仁油、南瓜子油、棉子油、芝麻油、玉米油、豆油、鳄梨油、棕榈油、椰子油、葵花油、红花油、亚麻子油、葡萄籽油、卡诺拉油、低粘度硅油、轻质矿物油或其任意组合；(10)二醇类诸如丙二醇；(11)多元醇诸如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；(21)树胶诸如HP-瓜尔胶；(22)聚合物；和(23)应用于药物制剂中的其它无毒的相容物质。
术语“药学上可接受的盐”是本领域公知的，并且表示本发明的组合物或其任意组分(包括但不限于，治疗剂、赋形剂、其它材料等)的相对无毒的无机和有机酸加成盐。药学上可接受的盐的实例包括：衍生自矿物酸、如盐酸和硫酸的那些，以及衍生自有机酸如乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等的那些。药学上可接受的盐包括从例如无机或有机酸形成的本发明的化合物的常规的无毒盐或季铵盐。例如，所述常规的无毒的盐包括衍生自无机酸、诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些；和从有机酸制备的盐、诸如醋酸、糠酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、双羟萘酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸和羟乙磺酸。
术语“局部用”或“局部”是指施用途径，即将药物施用于有需要的个体的身体表面、诸如皮肤、组织或粘膜。例如，局部用药物可施用于眼睑,眼睫毛,眼睑缘,皮肤上或眼(例如，眼表面，诸如滴眼剂施用于结膜)里。局部用药物还可以是吸入的，诸如哮喘药物或施用于牙齿表面的药物。
本文使用的术语“眼内”是指眼球中的任何位置。
本文使用的术语“玻璃体内”是指眼背面中的凝胶内。例如，Lucentis注射剂经玻璃体内施用。
本文使用的术语“视网膜下”是指视网膜和脉络膜之间的区域。例如，iScience装置经视网膜下施用。
本文使用的术语“囊内”是指在晶状体囊内。例如，iVeena装置经囊内施用。
本文使用的术语“脉络膜上”是指脉络膜和巩膜之间的区域。例如，Clearside装置经脉络膜上施用。
本文使用的术语“眼球筋膜囊下(subtenon)”是指眶隔后、巩膜外、眼球筋膜下的区域。例如，将曲安西龙注射剂施用至眼球筋膜囊下。
本文使用的术语“结膜下”是指结膜和巩膜之间的区域。例如，将Macusight雷帕霉素注射剂施用至结膜下区域。
本文使用的术语“前房内”是指进入眼的“房”中，例如，进入眼前房或眼后房内。例如，白内障手术期间的任何注射剂均施用至前房内。
本文使用的术语“睑内”是指进入眼睑中。例如，Botox注射剂经睑内施用。
本文使用的术语“穹窿”是指眼睑和眼球之间的空间。例如，将Ocusert装置施用至穹窿。
本文使用的术语“眼球后”是指眼眶后。本文使用的术语“眼球周”是指眼眶内或邻近眼。例如，眼外科手术前将麻醉阻断剂施用至眼球后或眼球周围空间。
本文使用的“有需要的个体”是具有本文所述的疏水性药物预期用于治疗的障碍、例如炎性障碍、呼吸系统障碍、自身免疫性疾病或癌症的个体。“个体”包括哺乳动物。所述哺乳动物可以是例如人或适合的非人类动物、诸如灵长类、小鼠、大鼠、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。个体还可以是鸟或家禽。在一个实施方案中，哺乳动物是人。
当在用于病症、诸如睑缘炎时，术语“预防”是本领域认可的，且是指相对于不接受所述组合物的个体，组合物的施用在个体中降低了医学病症的征兆和/或症状的频率或延缓发作。
术语“治疗”是本领域认可的术语，其是指治愈以及改善任何病症或疾病的至少一种症状。
实施例
实施例1:0.1％丙酸氟替卡松纳米微粒的制备
方法:已开发了测定丙酸氟替卡松浓度的HPLC方法，详细描述在A中提供。
相I的具体组成取决于该相中药物的溶解度。丙酸氟替卡松在FDA-批准的溶剂和赋形剂中的溶解度通过将10mg药物溶于各溶剂中、剧烈涡旋并在25摄氏度平衡过夜来测定。将该混悬物以10,000rpm离心，并通过RP-HPLC在239nm分析上清液。评价丙酸氟替卡松在每种溶剂中的溶解度和相容性。
A.HPLC方法开发
分析丙酸氟替卡松(乳膏剂、软膏剂)的USP方法均在使用流动相洗脱之前采用使用己烷的提取方法，最可能是由于存在能降解或阻断柱、降低峰分离的分辨率和造成峰高损失的赋形剂。提取方法造成降解产物损失、尤其是之前已经表征过的那些。据认为需要开发能对API以及由于潜在的与赋形剂的不相容性而可能出现的降解产物定量的方法。
样品制备方法
1.将400μl样品(1mg/ml药物混悬剂)与1.6ml流动相合并，并涡旋混合。(样品现在为0.2mg/ml)
2.在5ml注射器中回收2ml样品，然后通过手压经注射器Millex GV过滤器(Millipore，33mm直径，0.22um，Durapore(PVDF)，cat#:SLGV033RB，黄色)过滤。作用力需要中等量的手压。
3.将过滤的样品直接注入使用等浓度方法的HPLC。
柱洗涤:
在若干次注入包含使用新的稀释/过滤方法处理过的制剂的样品后，柱压从222巴略微增加至230巴。已发现使用流动相或者甲醇和0.1M醋酸铵溶液的组合(pH＝7)洗涤柱可用于将柱压降至约222巴的初始压力。当前的1.5ml每分钟的柱流速和长250mm柱压，预期高于具有较低的流速和更短的柱长度的相似的方法。HPLC具有400巴的截断压力。监测柱压对于确定何时需要洗涤柱将是必不可少的，所以HPLC方法现在随着扫描记录压力。还将更频繁地加入另外的不含所述制剂的稀释进样，以洗涤柱并防止加压、峰形差和高度损失。
样品设置
运行所述制剂的多个样品的序列应当包括空白进样，以防止柱压增加。当准确度样品在HPLC运行时，注入12针介质，此时压力从221巴增至230巴。这些进样之后进行其中不含任何介质的8个样品的进样，压力降至228巴。在所述序列后再进行洗涤，以将压力降低至更低的水平。基于这些结果，总计进样6至8个如所述制备的所述制剂后应当进行2至4个流动相进样。如果需要，在进行另外的制剂序列前应当考虑洗涤柱。
色谱条件:
设备:具有自动进样器和DAD检测器的Agilent 1200HPLC。
流动相(MP):等浓度,50％甲醇,35％0.01M磷酸铵pH＝3.5,15％乙腈。
流速:1.5ml/分钟
运行时间:20分钟
柱:Phenomenex Luna C18 5微米100A 250-4.6mm P/N 00G-4041-EO
柱温:
样品盘:室温
进样体积:50微升
DAD检测:239nm
样品设置:在序列中在实验组间运行空白样品，以保证没有样品遗留。
标准品制备:通过称量固体、并将其溶于100％乙腈中来制备5mg/ml氟替卡松的标准储备溶液。在样品稀释液(50％乙腈/水)中进行用于校正曲线样品的该储备溶液的稀释。
样品稀释液:50％乙腈/水。
方法开发的各方面
特异性
FP及其杂质的峰形和峰高和保留时间应当与包含介质或作为稀释液的流动相的样品相似。下表1显示含介质或仅含流动相的HPLC样品的峰面积和峰高的比较，如图2中所示。
表1–FP峰面积和峰高分析。
在有和没有制剂介质的样品之间有非常好的匹配。表2显示这些样品的峰面积和峰高。
表2–使用50％ACN/水的峰高和峰面积
B、C和D杂质:
还将来自含介质进样的杂质B、C和D与来自不包含所述介质的样品的相同的杂质进行比较。下表3显示两种样品之间相当。稀释液是流动相。
表3–杂质B、C和D
保留时间
丙酸氟替卡松和杂质B、C和D的保留时间如下:
表4–各样品制备物的保留时间
线性
通过在空白介质的样品中掺加已知量的丙酸氟替卡松(溶于乙腈)，评价新的样品制备的线性。将300、400和500μl的5.11mg/ml丙酸氟替卡松掺加物溶于2克介质中，并用流动相(MP)稀释至10ml。流动相为:50％甲醇、35％0.01M磷酸铵(pH＝3.5)和15％乙腈。结果在下表5中显示。x-轴的单位是mg/ml的FP。如果相关系数或R2值为0.999或更高，则所述方法被认为是线性的。
表5–在制剂介质中的丙酸氟替卡松的线性
相同的掺加还使用100％流动相进行。这些样品的线性在下表6中显示。在该情况中x-轴是mg/ml的丙酸氟替卡松。
表6–使用流动相作为洗脱剂的线性
来自相同浓度的介质和稀释液样品的上述样品的色谱图交盖(overlaid)并显示对于丙酸氟替卡松而言和对于杂质B、C和D而言有相同的峰形和高度。
精密度
通过将由混悬剂样品制备的0.2mg/ml样品进样10次，评价精密度。结果在下表7中提供。
表7-精密度
文件 保留时间 面积 高度
Feb15B01 14.626 14017.6 650.2
Feb15B02 14.631 14004.5 654.5
Feb15C00 14.604 13975.8 655.5
Feb15C01 14.588 13971.5 656.93
Feb15C02 14.59 13962.4 658.2
Feb15C03 14.579 13955 658.4
Feb15C04 14.569 13941.7 660.3
Feb15C05 14.566 13931.7 662
Feb15C06 14.568 13935.4 665.4
Feb15C07 14.559 13935.4 664.6
平均 14.6 13963.1 658.6
标准偏差 0.0 29.7 4.7
RSD 0.2 0.2 0.7
对于精密度评价而言目标相对标准偏差(RSD)是≤1.0％。所有数据均完全在此范围内。
准确度
通过将已知量的丙酸氟替卡松加入约2克介质中并比较计算值和实测结果，在3个水平用所述新样品制备评价所述方法的精确度。下表8显示回收情况，使用表5所示的校正曲线。
表8–掺加的样品
样品 面积 平均面积 计算值 实际值 一致性：
360 12618.4 12617.2 0.181 0.184 98.5
12616
420 14803.7 14803.6 0.212 0.215 98.9
14803.5
480 17063 17059.8 0.244 0.245 99.7
17056.6
该情况的接受标准是99至101％的加标回收率。在该情况中计算值和实测值相关良好。
LOD和LLOQ
来自该方法的空白试验的噪音是约0.1吸收单位，其在该报告的A部分对于LOD和LLOQ计算是相同的。LLOQ和LOD应当分别是10X和3X该高度。因为在有和没有所述介质存在着时峰高非常相似，将LOD和LLOQ制备为相同的浓度范围，作为该报告的A部分，但是在该情况下，所述掺加浓度是在流动相中制备的，掺加至2克介质中并用流动相稀释至10ml，得到所述LOD和LLOQ浓度。将所述样品进样2X，平均值如下所示。511ng/ml样品给出可重现的面积/高度：31.4/1.7(LLOQ)。对于LOD，153.3ng/ml的样品给出8.1/0.44的面积/高度。LLOQ和LOD的高度均大约是基于所测定噪音计算的值。
B.丙酸氟替卡松的溶解度测定
丙酸氟替卡松的溶解度在表9中给出。相I的具体组成取决于该相中药物的溶解度。丙酸氟替卡松在FDA-批准的溶剂和赋形剂中的溶解度通过将10mg药物溶于各溶剂中、剧烈涡旋并在25摄氏度平衡过夜来测定。将该混悬物以10,000rpm离心，并通过RP-HPLC在239nm分析上清液。评价丙酸氟替卡松在每种溶剂中的溶解度和相容性。
表9:丙酸氟替卡松的溶解度
C.在声波处理期间通过抗溶剂结晶的纳米晶体制备(1步骤方法(1stepprocess))
所述方法如图3中所述，无纯化步骤。在丙酸氟替卡松的情况中，药物溶于以下组合物中:丙酸氟替卡松(0.45％)、吐温80(7.44％)、PEG 400(23％)、聚丙二醇400(69.11％)。该组合物为相I。丙酸氟替卡松的溶解度在这些溶剂中的每种溶剂中最大化。采用表9来获得相I的组合物。最终组合物(相I加入相II后)包含0.1％w/w的药物和批准用于眼用药物的浓度的赋形剂。
在混合前将相I和相II均经0.22微米PVDF过滤器进行无菌过滤。在研究相I中丙酸氟替卡松与过滤器的药物结合动力学的试验中，已发现FP与PVDF过滤器结合很少或无结合。
将无菌的相I滴加至无菌的连续相(相II溶液)中，同时进行声波处理。将4.3g相I滴加至15.76g相II中。用Sonic Rupture 400(Omni International,Inc.)进行声波处理。声波处理条件如下:(a)端部(Tip)尺寸(12.7mm)，温度2-4℃，持续时间10W，持续时间:1.5分钟，批量大小为20ml。使用50ml烧杯完成该过程。相I加入相II中的速度决定形成的晶体的粒度。对于该20ml批次，相I加入相II中的速度为2.15ml/分钟。
相II的具体组成差异极其细微，因为该相的组分用作纳米晶体形成时的小滴的稳定相。所述稳定剂的功效取决于所述稳定聚合物的分子量和化学结构、其与药物表面的粘着及其降低纳米晶体的表面能的能力。此外，连续相中聚合物的浓度显示影响混悬物的粒度。所述稳定相的功能还有在纳米微粒形成之前预防小滴的聚结。对于0.1％丙酸氟替卡松的制备，相II的最终组成为0.013％苯扎氯铵、0.25％甲基纤维素和99.7％水。对于丙酸氟替卡松，步骤1的末段得到的混悬剂包含在FDA批准的眼用药物中允许的调节量的赋形剂。0.1％丙酸氟替卡松纳米微粒混悬剂包含0.1％药物、3.23％吐温80、4.97％PEG400、14.95％PPG 400、0.010％苯扎氯铵、0.38％甲基纤维素和适量纯化水。该步骤粒度范围为400-800nm。pH为5.8，且重量摩尔渗透压浓度为546mOsm/Kg。
对于治疗睑缘炎而言，可耐受高渗性溶液，尽管总是需要等渗混悬剂，原因是本应用是在眼睑和眼表面的交界处。
在0.06％的药物浓度，介质组合物是等渗的(316mOsm/kg)。在该药物浓度，连续相中的赋形剂的各自的浓度为2.57％吐温80、2.99％PEG400、8.97％PPG 400、0.010％苯扎氯铵和纯化水(适量)。该溶液的pH为6.5。可加入NaOH以将pH调节至中性pH。然后可以将其稀释为更低浓度的混悬于介质中的丙酸氟替卡松纳米晶体。表10显示以0.06％-0.001％的浓度制备的丙酸氟替卡松的制剂。
表10:0-0.06％浓度的丙酸氟替卡松
该溶液满足pH、赋形剂组成和重量摩尔渗透压浓度的眼用标准。浓度超过0.06％的制剂具有>350mOsm/kg的重量摩尔渗透压浓度值。该制剂的问题之一是“奥斯特瓦尔德成熟”或粒度增长。当有溶解的丙酸氟替卡松时，观测到粒度增长。制剂中存在的赋形剂溶解连续相中的一些药物。这导致长期存储后颗粒的不稳定。
a.相II聚合物组成对初始粒度的影响
相II的组成是关键性的，且是本领域技术人员不能预测的。形成颗粒的步骤是沉淀之前的小滴的分散和聚结之间的共同作用的现象。此外，需要将药物的性质与颗粒稳定聚合物的性质进行匹配。
如图5中所示，使用HPMC、PVA、PVP、普流罗尼克类及其混合物制备了平均直径超过1微米的颗粒。2％吐温20和0.5％CMC在水中的组合(作为相II溶剂)显示产生更小的颗粒(0.4-0.6微米)。然而，这些颗粒随时间生长为1.2微米的尺寸。使用高粘度聚合物、诸如0.5％的黄原胶制备非常大的颗粒(>20微米)。
相III(相I+相II的组合):在相II中0.12％苯扎氯铵/0.25％甲基纤维素(15cP)/水的组合看起来是可重现性制备最小颗粒(400-600nm，15个批次)的组成。相I和相II的组合是相III，其中形成纳米晶体，同时进行声波处理。
该相III组合物还在40摄氏度化学稳定超过4周。该聚合物的组合还保持其初始尺寸粒度达5-14天。
b.通过自上而下技术得到的批次的粒度
对通过自上而下的技术、诸如微流化、气流粉碎、超声处理(湿磨)和匀化制备的颗粒进行比较。如图6中所示，通过这些技术制备的批次生成均超过2微米的颗粒。颗粒中的一些尺寸为8微米。所示颗粒在显微镜下呈现破裂和碎屑-样。
c.相II的pH对初始粒度的影响
PH显示在初始粒度中起关键作用，如图7中所示。当用0.1％w/w的磷酸盐缓冲剂将相IIpH平衡至pH 7-7.2时，初始粒度始终较高(1.0-1.3微米)。当pH不平衡时，粒度始终在500-800nm。图7显示pH平衡的所制备的各批次的平均粒度和pH不平衡的各批次的平均粒度。pH-不平衡的批次(n＝3)对于0.1％丙酸氟替卡松为5.5，且对于0.06％丙酸氟替卡松(n＝3)为6.5。pH对粒度的该影响是本领域技术人员没有预期和不可预测的。
d.相II中空间稳定聚合物的分子量对粒度的影响
相II中空间稳定聚合物的分子量在纳米晶体的粒度中起显著作用，如图8所示。例如，使用4000厘泊的羟丙基甲基纤维素(HPMC)始终生产比当使用45厘泊的HPMC时制备的颗粒更大的颗粒。
e.pH粒度对稳定性的影响
纳米晶体的稳定性由相I和相II的组合形成的相III的pH控制。在pH 5.5制备20克批次的纳米晶体，并在25摄氏度进行稳定性测试。在pH7.5制备另一批20克批次，并在25摄氏度测试稳定性达30天。出乎意料地，在7.5的颗粒快速成长至超过1微米的平均粒度。参见图9。用50克规格的多个批次验证该现象。
f.相III产物(相I+相II)的最终组成
相III的组合物为0.1％丙酸氟替卡松、1.63％吐温80、5％PEG400、15％PPG400、0.01％苯扎氯铵、0.2％甲基纤维素和77.95％水。该相的pH为5.5。
g.丙酸氟替卡松的纳米晶体的纯化
经连续相交换(通过切向流过滤或中空纤维过滤筒)纯化丙酸氟替卡松的纳米晶体。将高流量膜用于该过滤。孔径0.22微米或更低的过滤器、诸如PVDF、PES适用于该目的。来自Millipore(Pellicon XL 50系统)的切向流设备可以用于该目的。
对于250g的批量大小，在3的泵速下将纳米晶体混悬剂(相III)倾入500ml容器中，期间压力从不超过30psi。当将该纳米混悬剂洗涤降至10ml时，加入洗涤液。洗涤液为0.1％吐温80，在30℃注入所述容器中。将洗涤液交换两次以确保缓冲液完全交换。然后测定浓缩物的药物浓度。基于测定结果，调节重构的体积以达到所需浓度。另外，加入甲基纤维素、氯化钠和硫酸钠以获得重量摩尔渗透压浓度的(osmolal)组合物。
如图10中所示，纯化的丙酸氟替卡松纳米晶体随时间推移不显示任何成团。
实施例2:示例性的纳米晶体制备方法
尺寸范围400-600nm的纯化的、稳定的、无菌的丙酸氟替卡松的纳米晶体的制备方法包括:
原位结晶步骤，由此将丙酸氟替卡松在PEG400、PPG400和Tween80中的无菌的相I溶液在声波处理下以1-1.4ml/分钟的流速与无菌的相II溶液(含15cP-45cP的甲基纤维素、0.2-1的比例的苯扎氯铵和纯化水，pH 5-6)混合，得到无菌的相III混悬物；和
退火步骤，由此将相III中的丙酸氟替卡松纳米晶体在保持槽中在25-40摄氏度的温度范围保持30分钟至24小时；和
纯化步骤，由此通过无菌的含0.1-0.5％吐温80的水溶液通过经孔径0.1-0.22微米的膜交换过滤，洗涤丙酸氟替卡松纳米晶体；和
浓缩步骤，由此将丙酸氟替卡松纳米晶体浓缩至0.0001％-10％的范围；和
最终配制步骤，由此将另外的赋形剂加入无菌形式中以满足FDA和被认为适用于该特定产品和临床适应症的重量摩尔渗透压浓度、pH、粘度、生物相容性和渗透性的药品标准。
实施例3:纳米晶体制备方法-分批方法
应用该实施例中所示的方法制备400-600nm的尺寸范围的FP晶体。使用该方法的粒度优化是相I和相II组成、声波处理输出能量、相I的流速、相I和相II的温度的函数。对于所有批次(20-2000g)相I的流速均为1.43ml/分钟。
相I的组成:FP:0.45％w/w；吐温80:7.67％w/w；PEG 400:23.18％w/w,PPG400(PPG＝聚丙二醇):68.70％w/w。相II的组成:苯扎氯铵:0.020％w/w,甲基纤维素15cp 0.40％w/w,水(适量至100％)。相III分散体的组成:FP:0.225％w/w,吐温80:3.796％w/w,PEG400:11.577％w/w,PPG400:34.41％w/w,苯扎氯铵0.01％,甲基纤维素(MC 15cP):0.2％w/w,水适量至100％。对于该分批方法相I与相II的体积比率是1:1。
相I和相II的温度各自为0-1℃(冰水浆液)。声波处理输出能量为25％，使用a3/4”探头和Omni Cellruptor超声仪。相II的pH为5.5。更高的pH得到更大的颗粒。还观测到在pH<5时，粒度为150-220nm，但药物在更低的pH时开始降解。
与实施例1类似，已发现通过选择适当的稳定剂和相II溶液的pH值控制了FP晶体的尺寸。参见，例如图7和8。
使用更低的温度达到400-600nm的粒度范围(图11)。在室温制备的颗粒大且聚集，表明软的无定形区域。
在通过声波处理结晶(sonocrystallization)制备丙酸氟替卡松晶体后，在25℃将分散体(相III)退火。在至少8小时的退火时间后颗粒平衡至稳定的粒度(图12和13)。该退火步骤出乎意料地降低了粒度。如图12和13所示，平衡的粒度在8h达稳定水平，且不同的退火温度即4、25和40℃之间没有统计学差异。此外，退火对于0.1％和10％的浓度的FP的影响是一样的。
将通过以上方法制备的晶体通过切向流过滤或通过连续离心纯化。使用实验室规模的Pellicon XL50过滤装置开发过滤条件。该步骤的目的是纯化之前步骤中制备的晶体。图14和15显示使用0.1微米孔径的PVDF过滤器的药物损失是最低的。通过将所述液体与0.1％w/w的溶液交换完成离心纯化。
丙酸氟替卡松的最终组合物为0.0001-10％w/w、甲基纤维素0.2％w/w(4000cP)、苯扎氯铵0.01％和水(适量)。最终制剂是灵活性的，根据适应症可以将另外的赋形剂加入其中。
实施例4:分批方法的纳米晶体的分散性
观测到实施例3中制备的FP的最终组合物或制剂保持分散超过至少8小时。具体而言，将5ml的纳米混悬剂置于10ml玻璃螺帽小瓶中，其均包含在最终组合物中的0.1％FP纳米混悬剂。将各小瓶上下振荡10次以充分分散样品。振荡后，将各小瓶在25℃存储，并随时间推移取样，至24小时。
24小时后将各样品再分散，并再取样(通过图16和17中的蓝色箭头显示)。通过从制剂中间取0.5ml样品进行取样。通过HPLC测定分析样品。如图16和17中所示，所述最终制剂保持分散达至少8小时，且在振荡后再分散良好。而且，浓度0.005％-10％的FP均再分散良好，且再分散性在各批规格间(20g-2000g)具有重现性。在24小时在室温所有的浓度的制剂均超过80％被分散。用振荡小瓶方法再分散了所有浓度的制剂，表明为耐絮凝(flocculated robust)混悬剂。结论是更高的浓度不导致更快的沉降速度。
实施例5:分批方法的纳米晶体的稳定性
还观测到FP的最终组合物或制剂在所有的测试浓度(即0.005％、0.01％、0.1％和10％)均是稳定的。将样品置于4℃、25℃、40℃的稳定性试验箱中。稳定性时间点:T＝0天、T＝1周、T＝2周、T＝4周。
HPLC测定显示:对于4℃,25℃是99-101％，对于40℃是106％。与T＝0天相比，测试样品中的杂质B、C和D没有变化。与T＝0天相比测试制剂的pH(6.5-6.8)没有变化。此外，从T＝0d FP粒度(505-620nm)也没有变化。
实施例6:纳米晶体组合物的均匀度:
通过在混悬剂溶液的顶部、中间和底部取样，测试含氯化钠、磷酸盐、甲基纤维素、吐温80、苯扎氯铵和水的丙酸氟替卡松(FP)的新的混悬剂制剂的内含物随时间推移的均匀度。目的是测定混悬剂颗粒在震荡后在溶液中保持均匀分布的时间长度。
将约20ml 0.07％FP混悬剂置于小瓶中，并上下振荡10次以混悬FP颗粒。在0、0.5、1、3、6.5和23小时从顶部、中间和底部取200μl样品。通过HPLC使用校正曲线分析所有样品。将样品直接加入HPLC小瓶中，并用800μl稀释液(75/25乙腈/水)稀释。记录200μl样品和800μl稀释液的重量，并用于各样品中FP量的最终计算中。
结果显示在前6.5小时顶部、中间和底部样品之间有很小或没有差别。然而，23小时样品已经可看得到沉降，这通过HPLC结果得到证实。
基于上文所述的稀释从0.056至0.45mg/ml选择三点校准范围。参见下表11。从0.5787mg/ml储备标准品制备三种FP的标准溶液。
表11:标准溶液的制备
使用上文所述的三种已知浓度的储备溶液和200ul空白介质制作校正曲线以校正介质对标准品可产生的任何基质影响。
浓度计算基于以下公式:
(储备品的重量)x(储备标准品)/(样品的总重量)
校正曲线在下表12中显示。所有标准品以mg FP/克溶液计。
表12:丙酸氟替卡松校正曲线数据
数据拟合(Datafit):R2＝1
使用表12中的校正曲线，使用斜率和截距分析时间点样品。下表13显示从时间点样品分析得到的数据。
表13–时间点分析
还将数据对全部的时间点范围作图，且在图18中显示。
实施例7:纳米晶体制备方法-流动方法
还使用流动方法流程制备了400-600nm的粒度范围的丙酸氟替卡松的纳米混悬剂。
使用图19中的流动反应器制备丙酸氟替卡松纳米混悬剂。如图4中的流程示意图中所示，将相I和相II按计量加入流动反应器。
使用Malvern Zetasizer S90测量这些纳米混悬剂的粒度。将用于制备纳米混悬剂的相I和相II溶液二者连续地泵入超声波仪(sonicator)流动系统中。在多种条件下制备了25个批次的样品。分析了所述两个相的流速、相III的退火的温度和超声波仪的振幅对粒度的影响。在实施例1和3中所述的“分批方法变量”的大部分方面仍然适用，例如混合两相的温度、相I中纤维素稳定剂的类型和粘度/分子量、相II的pH以及退火温度和时间。
材料和设备:
(A)下表14中列出的原材料
(B)Malvern Nanosizer S90
(C)流动反应器
(D)超声波仪探头，尺寸25mm。1”具有延伸探头
(E)泵I(NE-9000,New Era Pump Systems Inc.)
(F)泵II(Console Drive,Cole-Palmer)
表14
赋形剂/药物 制造商
氟替卡松 Hovione
甲基纤维素(15cP) ShinEtsu
苯扎氯铵(BKC) Sigma-Aldrich
聚丙二醇400 Alfa Aesar
聚乙二醇400 Spectrum Chemical
吐温80 Spectrum Chemical
提前制备了相I和相II溶液，然后将它们泵入流动系统，比例为1:1。制备细节和这两相的组成在下文描述，以500g的批次为例。
相I的制备(500g批次)
将2.28g丙酸氟替卡松逐步加入38.34g吐温80、116g PEG 400和344g PPG 400的溶液中。将所有组分的溶液涡旋，并使用标准的超声水浴进行超声处理，直至所有的固体进入溶液中。
(克) (％)
丙酸氟替卡松 2.282 0.46
吐温80 38.337 7.66
PEG 400 115.994 23.17
PPG 400 343.987 68.71
相II的制备(500g批次)
将1g 10％苯扎氯铵溶液加入299g水和200g 1％甲基纤维素(15cP)混合物中。将该混合物涡旋。相II的组成如下：苯扎氯铵0.020％、甲基纤维素15cp 0.4％、水99.58％。
相I和相II的混合条件(每个相为500g；相III总计1000g)
混合步骤的条件如下所列：
混合相I和相II的温度:0～5℃
超声发生器的尖端尺寸:直径25mm
超声发生器的振幅:25～75％(取决于具体的实验)
相I的流速:12～700ml/分钟(取决于具体的实验)
相II的流速:12～700ml/分钟。
冷却器的温度:0～-10℃
冷却气:5psi
实验持续时间:2～8分钟。
混合操作(每个相500g批量)
将250g相II加载至超声波仪中。然后打开冷却器(0～-10℃)和冷却气(5psi)。将500g相I加入1000ml烧杯中，后者位于冰/水混合浴中。将剩余的250g相II加入位于冰/水混合浴中的另一个1000ml烧杯中。使每个相的温度稳定至少30分钟。将这两个相的泵流速均设为12～700ml/分钟。然后打开超声发生器，并调节振幅。打开泵。一旦两个相均泵入，停止超声处理、泵和气体发生器。
在多个条件下制备了25批样品。大部分批次具有1微米以下的峰值平均粒度，除了在较高流速制备的三批以外(例如，对于每个相而言700ml/分钟和对于每个相而言250ml/分钟)。
这两个相的流速对粒度的影响
在相同的实际流速泵送这两个相(相I:II的比为1)。在图20中将粒度(在图20中用方点表示)相对于相III的最终流速(在图20中用竖棒表示)作图。用200ml/分钟制备的三个样品具有约400-600nm最小粒度。
这些实验证明丙酸氟替卡松纳米晶体可以使用图4中所示的流动方法示意图制备。显微检查证明了该晶体的板样的形态。使用所述流动方法制备的制剂的初步所稳定性研究(在25和40C的4周稳定性)证明了粒度的稳定性和化学完整性。
总之，对于控制粒度的所述方法的变量而言，注意到一些趋势。控制相I和相II的温度至<2℃导致大小均匀的颗粒的一贯的和良好的(robust)制备。其他变量是声波处理的输出能量和相I和相II的流速。流速显示是产生均匀范围的粒度的控制性变量。使用目前的超声波仪探头设计，获得400-600nm粒度范围的最高的流速是～200ml/分钟/泵，或对于相III而言400ml/分钟。
实施例8:由分批方法制备的纳米晶体的另外的表征
类似于实施例1或3所述，使用1000g分批方法制备了FP纳米晶体。该混悬剂通过离心收集为固体，并在真空烘箱中干燥12小时。使用同样的方法制备了另外两个批次(即b和c)。
使用Polytron(Kinematica)制备匀化的FP颗粒，在含水分散体中速度设为4。所述样品使用离心方法洗涤并在真空烘箱中干燥。
所用的丙酸氟替卡松原料是从制造商收到的。
粒度评价
通过所述分批方法制备的FP纳米晶体的粒度通过Malvern ZetaSizer S90测定。(b)和(c)批次的粒度通过Malvern MasterSizer S测定。如图21所示,通过所述分批方法制备的纳米晶体显示分布窄的晶体，其中尺寸范围为400-600nm，而FP原料和匀化的FP材料具有宽的粒度分布(分别为图21B和21C)。
丙酸氟替卡松晶体混悬剂是高度稳定的
测试了通过所述分批方法制备的纳米晶体的稳定性，以评价粒度分布是否保持在400-600nm的窄的范围。将所述纳米微粒配制到最终介质中，其由0.1％w/v FP、0.90％w/v氯化钠、0.51％w/v甲基纤维素(MC 4000cP)、0.10％w/v磷酸钠、0.20％w/v吐温80、0.01％w/v苯扎氯铵和98.18％w/v水组成。将所述制剂置于在25℃和40℃的稳定性温育箱中。
测定样品的粒度、pH、重量摩尔渗透压浓度和含量测定。所有样品在25℃和40℃经75天保持pH、重量摩尔渗透压浓度、粒度和含量测定[FP]。图22显示经75天的粒度稳定性，甚至在40℃如此。
该数据显示由本发明的方法制备的丙酸氟替卡松由高结晶程度的晶体构成，并具有稳定的形态学微结构，这被经时间推移没有晶体生长(奥斯特瓦尔德成熟)所证明。
饱和溶解度和溶出度
对于通过本发明的分批方法制备的纳米晶体、匀化的FP和丙酸氟替卡松原料，FP的饱和溶解度通过HPLC测定。所有三种材料的饱和溶解度为40-45μg/ml。在另一个研究中，将所述纳米晶体(尺寸范围400-600nm)的溶出度与包含混悬的和微粉化的尺寸范围1-5微米的丙酸氟替卡松进行比较。相比的溶出度的如图23所示。
评价了丙酸氟替卡松纳米晶体的纯度，并与由制造商获得的丙酸氟替卡松原料的纯度相比。在图24A中显示的是丙酸氟替卡松药物物质(保留时间:13.388分钟)和其已知杂质(在保留时间6.457分钟和9.720分钟显示)的色谱图。在图24B显示的是通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的色谱图。与原料药物物质相比，通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体具有更高的纯度，显著缺乏在6.457和9.720分钟的杂质。值得注意的是通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体的HPLC色谱图的标度是0-500mAU，与之相比所述原料为0-1200mAU。因此，得到的结论是本发明的纳米结晶和纯化方法产生了更纯的丙酸氟替卡松纳米晶体。
FP纳米晶体的形态学
在图25A和B所示的是与FP原料相比的通过所述分批方法制备的干燥丙酸氟替卡松晶体的光学显微照片(型号:OMAX,1600X)。通过所述纳米结晶方法制备的FP晶体的外观显著区别于丙酸氟替卡松药物物质(原料)。如图25A所见，丙酸氟替卡松纳米晶体是棒形的，具有明确定向的几何结构。相反，丙酸氟替卡松原料不显示偏好任何特定的形状或几何学。
将通过所述分批方法制备的PF晶体的外形和形态学与FP原料进行比较。使用Hitachi SEM设备在10,000X放大倍率收集了扫描电子显微照片。该实验在Microvision,Inc.,Chelmsford,MA进行。
可见的是，通过所述分批方法制备的晶体和所述其他样品的区别是惊人的。通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体片样的板或棒，具有明确定向的几何结构(图26A和26B)。相反，丙酸氟替卡松原料晶体的形态似乎是圆形的、并非像通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体那样的板样或具有成角度的边缘(图27A)。
图27B是FP匀化的颗粒(自上而下的方法)的扫描电子显微照片。可见的是，这些颗粒显示与原料相似。
热特性(Thermal Characteristics)
为了测定每个丙酸氟替卡松样品的热性质，从各样品收集了约10mg，并将其置于洁净的氧化铝坩埚中。下表总结了同步热分析测试的测试条件和参数。所述样品是(a)丙酸氟替卡松纳米晶体和(b)丙酸氟替卡松原料。在10℃/分钟的加热速率从在30℃开始直至达到最终的温度350℃来测试各样品。对每个样品重复该方法。该实验在EBATCO,LLC,EdenPrairie,MN进行。
表15--同步热分析测试的测试条件和参数
对每个样品的热分析测试结果如下表16所示。就物质的软化温度(也称为玻璃转化温度)而言，丙酸氟替卡松原料(57.6℃)比与通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体显著更低。另外，通过所述新方法制备的丙酸氟替卡松晶体熔化热(54.21J/g)比丙酸氟替卡松原料(48.44J/g)显著更高，表明前者是结晶程度更高的的材料，需要更多的能量来破坏分子间键，诸如离子和氢键。
表16
图28A显示通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体的组合的DSC/TGA。与丙酸氟替卡松原料的热特性(图28B)相比，FP纳米晶体的熔化起始温度(onset)高于丙酸氟替卡松原料的熔化起始温度:起始熔化(分批方法的FP纳米晶体)299.5℃>起始熔化(FP，原料)297.3℃。此外，如通过热重分析(TGA)证实，起始温度重量损失(分批方法的FP纳米晶体)299℃高于起始温度重量损失(FP,照原样)250℃。所述数据提示通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体具有这样的热行为，其表明比丙酸氟替卡松原料物质结晶程度更高和更有序。
通过分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体不是溶剂化物或水合物
理论上，当溶剂被包埋在晶体结构中时，它们称为“溶剂化物”。当具体溶剂为水时，晶体称为“水合物”。具体晶形的溶剂化物和水合物显示不同的性质、诸如溶出度、密度等。示差扫描量热法(DSC)可以用于检测包埋的溶剂的存在，当加热时可以导致所述包埋的溶剂逃脱晶格。对于采用所述分批方法制备的晶体，没有另外的多个熔化转变(DSC)或多相质量损失(TGA)(图28A)，表明晶体为纯晶体，不是溶剂化物或水合物。丙酸氟替卡松原料也不是溶剂化物或水合物，但具有晶体结构，如所预期的那样(图28B)。
通过分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体具有比丙酸氟替卡松原料更高的堆积振 实密度
通过所述分批方法制备的干燥的丙酸氟替卡松晶体的振实密度为0.5786g/cm3。比较起来，丙酸氟替卡松原料的振实密度为0.3278g/cm3。所述数据显示通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体具有比原料丙酸氟替卡松更高的填积作用(packing)。
通过分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体不是无定形的或部分无定形的
应注意：通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体在熔化前不显示“冷结晶”或结晶或无定形相。在299.5℃存在的单个、尖锐的熔化转变表明在所述材料中没有非晶形或无定形相。熔化转变的尖锐(熔程10℃)还指示高度有序的微结构。比较起来，丙酸氟替卡松原料在略微更宽的范围(11.1℃)熔化。
使用Nicolet傅里叶变换红外分光光度计，将通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体和丙酸氟替卡松原料的红外振动频率(FTIR)进行相互比较。FTIR被用于证实/检验已知有机物质的身份，原因是特定的键和官能团在已知的频率振动。当与丙酸氟替卡松的已知的FTIR谱(图30)进行比较时，通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体的FTIR谱显示不存在任何另外的振动频率(图29)。
通过本发明的方法制备的丙酸氟替卡松的晶体结构与丙酸氟替卡松的两种已知 形式的对比
多晶型物1和多晶型物2是以前公开的两种丙酸氟替卡松的晶形。参见，例如，美国专利6,406,718B1和J.Cejka,B.Kratochvil和A.Jegorov.2005.“Crystal Structure ofFluticasone Propionate”,Z.Kristallogr.NCS220(2005)143-144。从公开的文献可见，多晶型物1是丙酸氟替卡松的最稳定的形式，因为其是最大量的。多晶型物1通过从中等极性的溶剂(丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷)自由结晶形成。多晶型物2从超临界流体结晶，并仅描述在美国专利6,406,718B1中，而没有其他的公开号。
多晶型物1的晶体结构在Cejka等中提供，具有以下晶胞特征：C25H31F3O5S,单斜晶系,P1211(4号),
多晶型物2的晶体结构在美国专利6406718B1和Kariuki等1999.Chem.Commun.,1677-1678中提供。晶胞参数是 和该晶胞被描述为正交晶系。如Kariuki等中所注明，这两种晶体结构有惊人的相似性。为参考起见，多晶型物1(红色)和多晶型物2(蓝色)的计算的XRPD粉末图如图31B所示。
在与丙酸氟替卡松原料的晶体结构相比的用来确定通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的晶体结构的第一套研究中，通过X-射线衍射仪(Shimadzu XRD 6000衍射仪，在40KV和30mA操作)收集了这两种材料的X-射线粉末衍射(XRPD)图。将所述样品分开并粉末化来用于分析。将所述样品在10至65度2θ、0.02°步、每步2秒进行扫描。使用0.05°接收狭缝校准衍射的x射线，并用固态闪烁检测器进行检测。使用固体石英标准640d校验峰强度和分辨校正。这些研究在XRD Laboratories,IL进行。
将通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体和丙酸氟替卡松原料二者的XRPD图与公开的多晶型物1和2的晶体结构的计算的XRPD图进行比较。丙酸氟替卡松原料与丙酸氟替卡松多晶型物1的XRPD图交盖表明所述丙酸氟替卡松原料以多晶型物1(最大量和稳定的多晶型物)存在。
通过匀化(“自顶向下”方法的实例)得到的FP晶体与所述丙酸氟替卡松原料的XRPD图的交盖显示了图中的极好的“峰至峰”一致，甚至强度也如此。得到的结论是丙酸氟替卡松匀化的样品与丙酸氟替卡松原料(多晶型物1)是同样的多晶型物。相反，将丙酸氟替卡松晶体(分批方法)的XRPD图(黑色)与公开的多晶型物1(红色)和多晶型物2(蓝色)交盖，在衍射图上有明显的区别，如图31B所示。另外的实验在Triclinic Labs,Inc.进行，确定了通过所述分批方法制备的所述晶体的晶胞结构以及与标准的多晶型物1的微结构区别。所述数据表明，与标准的多晶型物1相比，通过所述新方法制备的丙酸氟替卡松晶体具有新颖的和区别性的微结构。
通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松纳米晶体的晶胞结构
通过用粉末填充样品保持腔并轻压样品以获得平的参照面，来准备所有样品。移去任何多于的材料，并装回原始的容器中。将所有测量的数据集进行前处理以除去背景，并将标度设为100000计数的共用区域，其遍及了常用的测定范围。标引是使用测定的衍射峰位置确定晶体的晶胞。提供的XRPD数据文件的峰位置通过使用Winplot R被最初确定。
为模型化XRPD数据集(FP，分批方法和多晶型物1)峰强度的区别，将结晶harmonic择优取向函数加入晶体结构描述中，来测试FP(分批方法)是新颖的晶癖的假说。允许的harmonic对称(symmetries)是2/m和‘纤维(fiber)’，在延伸中使用8个harmonic项。由于加入标准的多晶型物1的晶体结构描述的述择优取向函数，可以将标准的多晶型物1和通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体的XRPD图进行匹配。这证明了FP(分批方法)是多晶型物1的新的晶癖(crystalline habit)。
根据定义，已知多晶型物的晶癖具有不同的微结构，诸如定向平面等(米勒指数(Miller Indices))，其能够导致不同的形状和外观，而具有相同的晶胞结构和类型。就通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松而言，晶体具有与原料(图27)相比不同的外观(通过图26中的SEM证明)。
对微粉化和专有的批次的FP晶体收集的XRPD数据的差别实质上是衍射峰强度的差别。对于所述专有的材料，观察到具有非零‘l’米勒指数的峰在强度上显著增加。所述专有的材料的Rietveld模型化确证了，在反射粉末样品中，来自分批方法的FP纳米晶体强烈地顺着正交于所述样品表面的[001](c-轴)晶向排列。这表明，通过所述专有的制备方法产生了界限清晰的晶癖，且该习性最有可能在本质上是板或片样。所述专有的材料在XRPD样品保持器中不同地填充，由于其一致的习性，导致所观察到的择优取向(PO)。另一方面，所述原料不显示任何明显的择优取向(PO)。
得自所述专有的材料的有效晶体结构进一步表明片或板样习性，具有位于几乎平行于最大暴露面的结晶a-b面。所述有效的晶体结构可用于研究由片习性(blade habit)的最大结晶面暴露的所述活性药物成分(API)的官能团。
通过所述分批方法制备的丙酸氟替卡松晶体的晶胞结构是单斜晶系,P21,β＝98.285,体积1222.6。相比之下Cejka等多晶型物1晶体结构具有如下晶胞特征：C25H31F3O5S,单斜晶系,P1211(4号),
因此，能够说明的是：所述丙酸氟替卡松(由分批方法获得)是新颖的晶癖，其具有与多晶型物1(其为迄今所公开的最稳定和最大量的结晶状态)类似的晶胞类型。由于最稳定的多晶型物理论上具有最高的熔点，可以推论的是所述新颖的晶癖(由本发明的方法获得的丙酸氟替卡松)可能是迄今发现的该药物物质的最稳定的晶体结构。如上文所述，该新颖的晶体的熔点是299.5℃，不同于所述原料(多晶型物1)的297.3℃，如图28A和28B所示。而且，通过本发明的方法制备的该FP纳米晶体中的新颖的晶癖的存在是具有重现性的。
基于在Rietveld模型化期间得到的择优取向参数，MAUD能够产生特定晶向的“极图(pole-figures)”。对于所选自的每个晶轴，该极图说明了关于该反射样品保持器的表面的该晶轴的角分布。对于理想的粉末，所有的晶轴将是随机定向的，给出颜色均匀的极图。对于单晶样品，每个晶轴将是以单个方向定向。如果该定向正交于样品表面，那么极图将在该图的中央显示单个高强度的点。从对通过分批方法制备的FP纳米晶体收集的XRPD数据获得的极图对于[001]晶轴显示单个高强度的中央点。这指示了随着正交于所述粉末样品表面的c-晶轴的强的择优定向。如果该晶癖是板样或片样，则出现对该强的择优定向的一种可能的驱动力。当被堆积至反射保持器中并被压平时，该晶体的平的表面趋向于随所述样品表面平行排列(像许多纸片那样)。这表明了，对于从所述分批方法获得的FP纳米晶体而言，c-晶轴接近正交通过最大的平晶面。相反丙酸氟替卡松原料的计算极图显示更典型的接近于随机定向样品的结晶定向的整体分布。
实施例9:曲安奈德(TA)晶体制备方法-分批方法
曲安奈德是合成的皮质类固醇，用于治疗多种皮肤状况、减轻口腔溃疡不适，且其鼻腔喷雾形式用作变应性鼻炎和常年性变应性鼻炎的非处方缓解剂。其是曲安西龙更强效的衍生物，功效约为泼尼松的8倍。其IUPAC名称为(4aS,4bR,5S,6aS,6bS,9aR,10aS,10bS)-4b-氟-6b-乙醇酰-5-羟基-4a,6a,8,8-四甲基-4a,4b,5,6,6a,6b,9a,10,10a,10b,11,12-十二氢-2H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧杂环戊二烯-2-酮，分子式为C24H31FO6，且分子量为434.5g mol-1。
曲安奈德溶解度
曲安奈德(TA)原料以从生产厂商接收到的形式使用。测定曲安奈德(TA)在丙二醇、聚丙二醇、吐温20、吐温80、PEG 400中的溶解度。
最初，将5mg TA加入10g溶剂中；将该混合物涡旋5min，并在水浴中声波处理10min。当初始量完全溶于溶剂中时–TA在溶剂中的澄清的溶液，加入1-5mg TA。继续该过程直至达到饱和溶解度。选择提供最高溶解度的溶剂作为I相用于进一步研制。
在多种纯的非水系统中评价TA的溶解度以制备I相。TA几乎不溶于水中。评价TA在丙二醇、聚丙二醇、PEG 400、吐温20和吐温80中的溶解度。最初，将5mg TA加入这些溶剂中，并将混悬液涡旋，并在水浴中在37℃声波处理15min。当API(即TA)溶解时，将1mg药物加入所述小瓶中。继续该过程直至完成药物在所有溶剂中的初步评价。TA在丙二醇、聚丙二醇、PEG 400、吐温20和吐温80中的溶解度分别为14、8、7、5.5和4mg/mL。
TA纳米晶体的制备
相I
这是药物在其中溶解的相。使用在所选择的溶剂中具有最高浓度API制备相I。由于丙二醇显示为更好的溶剂，选择其用于进一步研发。相I的最终组成:TA:1.4％w/w、PG(PG＝丙二醇)。批量大小为50克。
相II
相II的组成:苯扎氯铵:0.0125％w/w、甲基纤维素15cp 0.257％w/w、水(适量至100％)。由于TA在更高的pH降解(参见，例如，Ungphaiboon S等.Am J Health SystPharm.2005.3.1；62(5):485-91)，所以加入0.1％柠檬酸以降低溶剂的pH。相II的最终pH为3.91。批量大小为100克。将相II在冰–水浆中冷却至0℃。
相III的制备和退火
该过程得到150克的相III。相I和相II的组合产生分散于介质中的API的纳米晶体。该分散体为相III。
按计量将50g相I加入100g相II中来制备相III。
将50克的相I填充至配有6英寸长和18号的针头的60ml注射器中。将该100g相II倾入250ml烧杯中，并使用冰水浆液冷却至0℃。使用设定20％强度的、使用直径3/4英寸的钛探头的Sonic RuptorTM超声均质器(Omni International)进行声波处理。将相I的流速保持在1.43ml/分钟。在250ml派热克斯(pyrex)烧杯中收集相III。得到的相III为乳白色分散体。将该分散体在该250ml烧杯中在25℃退火4小时，其覆盖有parafilm封口膜。相III分散体的组成:TA:0.41％w/w、PG:32.86％w/w、苯扎氯铵0.01％、甲基纤维素(MC 15cP):0.2％w/w、水66.93％w/w。
纯化
随后将该浆液在10,000rpm和4℃进行离心(3X)。进行以下步骤:
将该浆液分装于6个50ml聚丙烯离心管中，每管中25ml。向各管中加入25ml“洗涤”溶液。所述洗涤溶液由在蒸馏水中的0.01w/w％苯扎氯铵和0.2％w/w吐温80组成。因此，稀释度为1:1。
使用Thermo-Scientific IEC CL31R Multi-Speed将该稀释的浆液在10,000rpm和4℃离心90分钟。
在成为小球后，将小球用洗涤溶液再分散，填充至50ml的标志处。将该分散体如上文所述离心。
在两次洗涤后，将所述小球合并至两个1.5ml离心管中，并用～1ml洗涤溶液再分散。使用Eppendorf Centrifuge 5415D在12,000RPM将该分散体再次离心12分钟。
收集小球，合并至50ml离心管中，将其再分散在40ml洗涤溶液中。通过涡旋实现分散，然后将其在水浴中在室温声波处理15分钟。将该分散体以10,000RPM离心10分钟。
将上清液倾出，并使用真空烘箱(VWR International,俄勒冈,美国)将小球在室温干燥72小时。
实施例10:通过流动方法的方法制备的TA晶体的表征
在退火后，对以上实施例9中制备的相III分散体进行粒度测定。将马尔文动态光散射设备(型号S90)用于测定纳米晶体大小和粒度分布。为测定粒度，将40微升混悬剂移液至2960微升0.1％苯扎氯铵(BKC)中。达到强度5×104-1×106计数/s。一式三份地测定制剂的颗粒粒度分布。实施例9的TA颗粒的平均尺寸为300-400nm的尺寸范围(n＝3)。参见图32。
TA纳米晶体与TA原料的热特性对比
使用Shimadzu DSC-60和TGA-50研究实施例9的TA颗粒的热性质。
将约10mg样品在开放的铝锅中分析，并以10℃·min-1扫描速率从室温加热至320℃。图33显示TA API的示差扫描量热法。熔化热的峰位于289.42℃，ΔHm＝83.50J/g。相比而言，通过实施例9中所述的方法制备的纳米晶体的熔化热的峰位于275.78℃，ΔHm＝108.45J/g(图34)。数据表明TA纳米晶体结晶程度明显更高(通过更高的熔化热证明)。此外，纳米晶体熔点的差别大(与API相比)表明内部晶体结构的差异。
图35和36分别是是TA原料和TA纳米晶体的TGA扫描。比较而言，当加热时这两种材料明显均具有非常相似的总量损失特性，表明当加热所述物质时相同的分子键断裂。然而，由于在DSC图中，所述材料之间重量损失的每个相的起始值有显著的不同，表明了晶体结构和形态的差异。
TA纳米晶体与TA原料的形态学对比
用扫描电子显微镜检术(SEM)(Amray 1000A，用PGT(PrincetonΓTech升级)Spirit EDS/成像系统研究实施例9中制备的TA纳米晶体的形态。用金将样品进行氩喷镀包衣(Hummer V from Anatech)。将样品用双面胶固定。图37A和37B为TA原料的两个不同放大倍率的SEM图像。图37C-E为TA纳米晶体的SEM图像。如在SEM图像中所见，通过本发明的方法制备的纳米晶体的形态与来自生产厂商的原料显著不同。
通过本发明的方法制备的TA纳米晶体保持它们的纯度和完整性
曲安奈德的测量根据Matysová等(2003),“Determination of methylparaben,propylparaben,triamcinolone”修改得到，且做出的唯一修改是增加运行时间以补偿我们使用的用于该试验的更长的柱。将样品以低浓度运行以努力放大任何相对于TA峰的污染物峰(氟替卡松分析中所见到的影响)。得到色谱图非常干净，TA峰洗脱见于28.9分钟。条件为:
HPLC系统:Agilent 1100，使用Chemstation软件
柱:Phenomenex Luna；C18,5μm孔径,尺寸:250x 4.60mm
流动相:40/60v/v乙腈和HPLC级水。
进样体积:20μL
分析时间:30分钟
检测波长:240nm
对于TA纳米晶体与TA原料的HPLC图的比较表明通过本发明的方法制备的纳米晶体不因本发明的方法而降解。
通过本发明的方法制备的曲安奈德的晶体结构与曲安奈德原料对比
通过本发明的方法制备的曲安奈德晶体(即，B形式)具有与原料不同的晶癖，如图39中的不同的XRPD图所证明。换言之，晶胞内的曲安西龙分子堆积方式与原料不同。类似于氟替卡松纳米晶体(A形式)，曲安西龙的该新形态能够具有与与曲安西龙原料不同的生理学性质。
实施例11:纳米晶体制备方法-改进的流动和纯化方法
设计试验以得到以下工艺条件:(a)可重现地生成的纳米晶体，累积量平均尺寸(cumulants mean size)为约500nm(±200nm),(b)可重现地生成稳定的晶体，具有通过化学和物理稳定性确定的稳定性，和(c)在高离心力纯化后可重现地保持晶体大小。
对实施例7中所述的流动方法做出若干改进。特别是，在晶体形成和退火之间加入混合步骤。加入的其他步骤包括:(a)在退火和离心步骤之间用“洗涤溶液”稀释,(b)将小球在洗涤溶液中再分散用于进一步纯化,(c)收集小球，并将其再分散至最终制剂组合物中。使用该改进的流动方法，以3500g/min制备0.09％药物的纳米混悬剂，可以制备纳米混悬剂的商业上相关的体积。流动反应器装备有设计用于高压灭菌的卫生的设备配件。图38中定义的步骤导致最终生成高纯度的药物晶体，累积量平均尺寸500nm(±200nm)。
探头设计的作用
进行目的为提高效率的放大试验，使用以下二者：标准的1”声波处理探头(在该探头的底部具有单个活动端)和a“凹凸棒(bump-stick)”探头(在棒上具有多个声波处理端)。
标准探头试验:
测试了丙酸氟替卡松百分比、流速、温度和声波处理振幅的多种组合，来确定它们对晶体平均尺寸的影响。丙酸氟替卡松的百分比范围从0.224％至0.229％。相I的流速范围从0至825mL/min。相II的流速范围从10至900mL/min。相III的流速的流速范围从25至1400mL/min。相II/相I流速比为1。温度对于相I是0-22℃，对于相II是0-22℃，对于相III是10-40℃。平均的相III温度范围从12.5至40℃。声波处理振幅范围从25％至75％输出。得到晶体的平均尺寸(例如，d50或质量中位数直径)范围从0.413μm至7μm。
在所有的输出能量(25％输出，75％输出)，产生粒度d50～500nm的相I和相II的最高的流速是250ml/分钟。对于相I和相II在700ml/分钟的更高流速(相II/相I比率＝1)导致大粒度>7μm。
用凹凸棒的实验证明可以实现相I和相II的更高的流速，所以提高所述流动方法的效率许多倍。当与其他参数变量、例如缓冲剂的选择、相II的pH或声波处理的输出能量协同使用时，可以实现d50≤500nm的粒度。在本实施例中描述的所有其他实验使用凹凸棒探头进行。
相II中缓冲液和pH的作用
相II的pH影响粒度。相II的pH为～8，导致相I和相II混合后pH为～7。作为用于相II的缓冲剂研究了抗坏血酸和柠檬酸盐缓冲液(pH 4和pH 5)。使用Malvern S90测量粒度。Malvern S90TM通过动态光散射(DLS)测量粒度。对于通过该方法制备的为专属的丙酸氟替卡松晶体的针状晶体，通过DLS测量的粒度的最相关的值是峰平均值或累积量平均值。因此，所有的粒度值报道为累积量平均值。实例在表17中显示。
表17:作为抗坏血酸缓冲液(pH 5)的函数的粒度(累积量峰平均值)
25℃退火
时间 粒度(nm)1 粒度(nm)2 粒度(nm)3
t0(滴定(tiration)后) 748.90 768.10 678.60
t1(+98小时) 596 510.8 509.2
40℃退火
时间 粒度(nm)1 粒度(nm)2 粒度(nm)3
t0(滴定(tiration)后) 748.90 768.10 678.60
t1(+98小时) 596.9 441.8 766.3
25℃和40℃作为退火温度均是适合的。另外的温度也可适用于退火。用于相II的抗坏血酸盐缓冲液(pH 5)生成500-800nm(d50)的颗粒。研究柠檬酸盐缓冲液(pH 4和pH 5)作为多重流动反应器批次的相II中的缓冲剂。代表性的实施例如表18-19中所示。
表18:作为柠檬酸盐缓冲液(pH 4)的函数的粒度(累积量峰平均值)
表19:作为柠檬酸盐缓冲液(pH 5)的函数的粒度(d50)
总之，柠檬酸盐和抗坏血酸盐缓冲液均是适合的，且在统计学上，没有观察到差异。选择柠檬酸盐缓冲液作为缓冲液的选择，是由于其存在于多种药物制剂中。选择pH 5作为相II的pH的选择，是由于在pH 4制备且并在25℃退火的纳米混悬剂中显示杂质略微增加。在pH 5柠檬酸盐缓冲液的相II中制备的纳米混悬剂显示在退火期间杂质没有增加。
声波处理输出能量的作用
将声波处理输出能量作为具有累积量平均值500nm(±200nm)的粒度的纳米晶体的制备中的变量进行研究。为获得粒度的详细的有统计学意义的数据，使用Horiba LA-950激光衍射粒度分析仪，其提供了各分析的批次的统计的平均数、中位数和众数(mode)。
表21是在40％输出能量制备的批次的实例，相I:相II比例为1:4。相II的组成为在柠檬酸盐缓冲液(pH 5)和蒸馏水中的0.4％15厘泊的甲基纤维素(MC)、0.005％苯扎氯铵、0.1％PEG40硬脂酸酯。表22-24中显示的数据是在50％、60％和70％输出能量制备的批次的代表，所有其他参数相同或尽可能相似。因此，相I、相II和相III组成是相同的，每一个批次中各相的温度以及退火温度是相似的。温育箱的退火温度范围的25-28℃，相对湿度为65％-75％。各批次相III的流速为3250g/min(±200g/min)。在制备纳米晶体后，使用Scilogix混合器在室温将各批次以250RPM混合。批量大小为约3500克。各批次的相III组成在表20中列表。
表20:具有1:4的相I:相II比例的相III组成
组分 克 ％
丙酸氟替卡松 3.15 0.09
吐温80 53.13 1.52
聚丙二醇400 481.67 13.762
聚乙二醇400 162.05 4.63
甲基纤维素15cP 11.2 0.32
PEG40硬脂酸酯 2.8 0.08
苯扎氯铵 0.14 0.004
柠檬酸盐缓冲液(0.1M),pH 5 44.8 1.28
水 2714.06 78.32
提供平均数、中位数和众数方面的粒度数据。根据定义，众数粒度表示具有该尺寸的最高数量的颗粒，中位数粒度表示在分布的“中间的”颗粒数，平均粒度是整个分布的所有尺寸的平均值。对于完美的单模高斯分布，平均数、中位数和众数均是相似的。在不对称的分布中这些值相差很远。在退火至少24小时后，平均数、中位数和众数值均在250nm范围内。
表21:以40％输出能量制备的代表性的批次
表22:以50％输出能量制备的代表性的批次
表23:以60％输出能量制备的代表性的批次
表24:以70％输出能量制备的代表性的批次
表25:以80％输出能量制备的代表性的批次
因此，通过在声波处理的存在下结晶产生的初始粒度(T＝0值)几乎直接与输出能量相关，即输出能量越高，统计众数(最多出现的尺寸)越小。
通过退火，颗粒可以下降至更低能态。随着输出能量增加，颗粒具有高表面能，引起颗粒成团。这在描述以70％输出能量制备的批次的粒度动力学的表24中得到证明。在T＝0，批次具有2.93微米的平均粒度和0.3631微米的众数值(“最常出现”值)，表明即使大多数颗粒<500nm，但在分布中有一些大的颗粒使平均数偏移。在退火(在25℃)的T＝96小时，平均数、中位数和众数在彼此的250nm内，证明使平均数偏移的较大颗粒为聚集物(agglomerate)。批次的退火将表面能降至平衡的基态，因此使颗粒解聚集。
使用退火降低粒度
已显示退火是分批方法的关键部分，如前述数据所示。还证实通过连续流动方法制备的晶体的退火为所述方法的重要部分，如之前部分中所讨论。
上文还证实退火的动力学是重要的。在多个实验中，在粒度方面，确实看起来在25℃、40℃和60℃退火的各批次的粒度彼此没有显著不同。然而，退火具有其他目的。通过退火结晶可以“完成”，由此“硬化”晶体。从该角度出发，不发生降解的退火温度越高，颗粒的结晶程度将越高。
表26显示使用抗坏血酸盐缓冲的相II(pH 5)制备的、在两个不同的温度退火的批次。这些批次用以下条件制备：抗坏血酸缓冲液(pH 5)，相I:相II:1:3，60％输出能量。通过Malvern S90测量粒度。在两个不同的温度退火的相同的批次的颗粒显示不同的平均峰值大小，如通过设备所测量。然而，两组均显示使用退火粒度降低。
表26:在25℃退火的代表性的批次
25℃退火
时间 粒度d50,(nm)1 粒度d50,(nm)2 粒度d50,(nm)3
t0(滴定后) 748.90 768.10 678.60
t1(+98小时) 596 510.8 509.2
表27:在40℃退火的代表性的批次
40℃退火
时间 粒度(nm)1 粒度(nm)2 粒度(nm)3
t0(滴定后) 748.90 768.10 678.60
t1(+98小时) 296.9 441.8 766.3
混合头设计的作用
混合头的设计对于在流动反应器中刚结晶后的混合纳米混悬剂的混合很重要。在多个实验中测试混合头。评价了SilversonTM混合头。中和低剪切混合头(同轴和桨式)提供了最佳的粒度。选择桨式混合器作为用于所有批次混合头的选择。
苯扎氯铵的作用
需要苯扎氯铵来制备具有～500nm的统计众数值的颗粒。
表28是相II中不使用苯扎氯铵制备的代表性的批次。平均数、中位数和众数值差异在250nm内。众数为1.07微米。由于不使用苯扎氯铵制备的所有批次均得到～1微米或更大的粒度，所以认为相II有必要存在苯扎氯铵，从而制备具有统计众数～500nm的尺寸的颗粒。使用Horiba LA-950激光衍射粒度分析仪分析表28、29、30A和30B中描述的批次。
表28
表29是在相II中使用20ppm(0.002％)苯扎氯铵制备的代表性的批次。相II还用柠檬酸盐缓冲，pH 5。相III的流速为3250±200nm。所述批次为1:4比例批次。因此，相III中的BAK浓度为16ppm。所述批次满足了<500nm(±200nm)的统计众数的T＝0粒度规格。
表29
表30A和30B是在相II中使用50ppm(0.005％)苯扎氯铵制备的代表性的批次。相II还用柠檬酸盐缓冲，pH 5。相III的流速为3250±200nm。所述批次为1:4比例批次。因此，相III中的BAK浓度为40ppm。所述批次满足<500nm(±200nm)的统计众数的T＝0粒度规格。这些批次还包含作为稳定化分子的PEG40-硬脂酸酯。
表30A
表30B
PEG 40-硬脂酸酯的作用
在柠檬酸盐-缓冲的相II中使用0.01％PEG40-硬脂酸酯作为唯一的稳定剂，1:3的相I/相II比例，60％振幅。通过Malvern S90分析该数据。显示的粒度为累积量平均值。如表31中所示，满足500nm的累积量平均值的粒度规格被满足。PEG40-硬脂酸酯的水平将取决于是否制备无苯扎氯铵的批次。
表31
通过连续流动离心纯化的丙酸氟替卡松纳米晶体
连续流动离心被证实为纯化所述晶体的优选的方法。通过纯化，将相III的连续相离心出来。将小球作为浓缩物再分散在洗涤溶液中，并将该分散体再离心。通过SorvallContifuge进行连续离心，或者可以使用具有JCF-Z Rotor的Beckman Coulter JI-30。
通常，在纳米混悬剂退火过夜后，然后将所述批次用0.1％PEG40-硬脂酸酯、0.1％吐温80和50ppm苯扎氯铵进行1:1的稀释。纳米混悬物的稀释降低相III的粘度，使得能够容易离心。
将Beckman离心机冷却至4℃，并将该混悬液以1.6L/min、39,000G离心。上清液呈现澄清，且没有颗粒。颗粒粒度分布在表32中显示。该批次制备没有使用苯扎氯铵。因此，粒度大于通常的500nm的统计众数。令人惊讶地，在纯化后，众数变得<500nm。这显示离心破坏聚集的颗粒。这是消除大颗粒的一个方式。
表32
在粒度中起作用的流动方法变量是相I和相II的温度、相II的pH、相II的组成、输出能量、探针设计、流速、相II与相I的比例、退火温度、颗粒制备后的混合条件和纯化前洗涤溶液的组成。这些结果第一次证实了制备流动方法产生商业体积的丙酸氟替卡松纳米混悬剂晶体以及可以使用高流量连续离心纯化所述晶体。
实施例12:FP纳米晶体的制剂和评价
制备并评价包含具有不同FP含量(例如，0.25％±0.0375％(0.21-0.29％)、0.1％±0.015％(0.085-0.115％)和0.05％±0.0075％(0.043-0.058％))的丙酸氟替卡松纳米晶体的制剂。评价各制剂的以下参数:制剂在皮肤上的涂布(优选最小接触角)、(其他成分)与FP的化学相容性,剂量均匀度和再分散性,颗粒的稳定性(例如，优选为颗粒的未改变的尺寸)和小滴尺寸(粘度和分子间表面张力的函数，优选最大化小滴尺寸)。
下表33和34列出了所制备的用于治疗例如睑缘炎的两种不同的药物制剂(各含0.25％FP)的组分。
表33制剂I
成分 组成(％) 预期功能
丙酸氟替卡松 0.250 活性剂
苯扎氯铵 0.005 防腐剂
聚山梨酯80 0.200 包衣分散剂
甘油 1.000 组织湿润剂
PEG硬脂酸酯 0.200 包衣分散剂
甲基纤维素4000cP 0.500 聚合的稳定剂
氯化钠 0.500 张度调节剂
磷酸氢二钠 0.022 缓冲剂
磷酸二氢钠 0.040 缓冲剂
水 97.340
表34制剂II
评价制剂I，其成分在上表33中列出，其具有以下性质:粘度＝45±4.1cP；pH＝6.8-7.2；重量摩尔渗透压浓度＝290-305mOsm/kg；粒度:统计众数:400nm,中位数:514nm,平均数:700nm,d50:400nm,d90:1.4μm；和小滴尺寸＝40±2μL。此外，制剂I在震荡后可再分散，在震荡后至少一小时显示一致的剂量；且粒度在25℃至40℃稳定长达至少21天。
评价制剂II，其成分在上表34中列出，其具有以下性质:粘度＝46±3.2cP；pH＝6.8-7.2；重量摩尔渗透压浓度＝290-305mOsm/kg；粒度:统计众数:410nm,中位数:520nm,平均数:700nm,d50:520nm,d90:1.4μm；和小滴尺寸＝40±2.3μL。此外，制剂II在震荡后可再分散，在震荡后至少一小时显示一致的剂量；且粒度在25℃至40℃稳定长达至少18天。
测试具有不同FP含量(即，约0.25％、0.1％、0.05％和0％)的其他制剂的平均小滴尺寸，并在下表35中概述。使用具有5mL填充物和具有垂直向下的滴头的7mL滴头滴眼剂瓶和进行该测试。通过HPLC测定每小滴的FP的量。
表35
如上表35所示，所有测试的制剂小滴尺寸均一致。
为测试不同涂药器的药物递送功效，将上文提及的0.25FP％制剂I装载至多种涂药器、诸如药签和刷子(例如Foamec-1药签、聚氨酯药签、聚酯药签、25-3318-U药签、25-3318-H药签、25-3317-U药签、25-803 2PD药签、25-806 1-PAR药签、药棉拭子和刷)，然后将各装载FP的涂药器对着聚丙烯膜碰擦以测定多少FP转移至膜上。
更具体地，对于各涂药器，将两滴制剂I装载至涂药器上，随后将涂药器在聚丙烯膜上碰擦两次。然后使用用于HPLC分析的流动相萃取转移至膜上的FP，以测定转移至膜的FP的量。对于各种类型的涂药器，相同的测定重复3-8次。据观察刷显示比其他涂药器更好地将药物递送(即，平均转移约56％FP)至聚丙烯膜。排名第二的是25-3317-U药签(即，平均转移约34％FP)。每个测试的其他涂药器递送至聚丙烯膜的FP的评价百分比在下表36中列出。
表36
Foamec-1 聚氨酯 聚酯 25-3318-U 25-3318-H 25-803 2PD 25-806 1-PAR 药棉拭子
6.9-22.17 1.06 0.41 13.92 18.71 14.39 1.03 0.94
还观察到聚酯药签和药棉拭子快速吸收制剂液滴；且当在膜上碰擦时，FP几乎不转移。另一方面，聚氨酯药签使液滴“成珠”——液滴跌落。刷吸收第一滴用时2秒，且25-3317-U药签吸收第一滴用时1.3秒。在易用性上，与测试的其他涂药器相比刷更易于使用。
同等
本领域技术人员最多使用常规实验法，将会认识到或者能够确认本文所述本发明的具体实施方案的许多同等物。虽然本文已经讨论了本发明的具体实施方案，但是以上说明书是说明性的而非限制性的。在回顾本说明书后，本发明的许多其它变化对于本领域技术人员将变得显而易见。本发明的全部范围应该参照权利要求连同它们的同等物全部范围、说明书以及所述变化来确定。所述同等物预期包含在下列的权利要求书中。

Claims (23)

1.丙酸氟替卡松多晶型物1的纳米晶体(A形式)，其具有特征如下的晶癖：[001]晶轴基本正交于限定纳米晶体厚度的表面，其中纳米晶体具有约100-1000nm的尺寸分布和特征峰在约7.8、15.7、20.8、23.7、24.5和32.5度2θ和另外的峰在约9.9、13.0、14.6、16.0、16.9、18.1和34.3度2θ的X-射线粉末衍射图。
2.权利要求1的纳米晶体，其特征在于它们是单斜晶体，空间群P21具有以下晶胞参数：
β＝98.285度，和
3.权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有范围为约5nm至500nm的厚度。
4.权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其通过以下表征：熔点为299.5℃，熔程为10℃。
5.权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有以重量计超过99％的纯度。
6.权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有在水中在室温时的约1μg/g/天的在水中的溶出度。
7.权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有约400-800nm的尺寸分布。
8.权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有约400-600nm的尺寸分布。
9.权利要求8的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有0.5786g/cm3的振实密度。
10.权利要求9的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其通过以下表征：熔点为299.5℃，熔程为10℃。
11.权利要求10的丙酸氟替卡松的纳米晶体，其具有在水中在室温时的约1μg/g/天的在水中的溶出度。
12.药物组合物，其包含权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体和药学上可接受的载体。
13.权利要求12的药物组合物，其是局部用制剂形式，包含浓度为0.0001％至10％的丙酸氟替卡松的纳米晶体的混悬物。
14.权利要求13的药物组合物，其中丙酸氟替卡松的纳米晶体的浓度为0.001％至5％。
15.权利要求14的药物组合物，其还包含约0.002-0.01％的苯扎氯铵、一种或多种包衣分散剂、一种或多种组织润湿剂、一种或多种聚合的稳定剂、一种或多种缓冲剂以及一种或多种张度调节剂。
16.局部用制剂，其包含权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体的混悬物，其中丙酸氟替卡松的纳米晶体的浓度为0.01％-1％；苯扎氯铵为0.002-0.01％；聚山梨酯80为0.01-1％；PEG40硬脂酸酯为0.01-1％；甘油为0.1-10％；甲基纤维素4000cP为0.05-5％；氯化钠为0.05-5％；磷酸氢二钠和磷酸二氢钠；水，并且该制剂具有约6.8-7.2的pH。
17.权利要求14的药物组合物，其用于治疗或减轻睑缘炎的征兆或症状以及预防睑缘炎。
18.权利要求15的药物组合物，其用于治疗或减轻睑缘炎的征兆或症状以及预防睑缘炎。
19.权利要求13的药物组合物，其用于治疗或减轻睑板腺功能不良的征兆或症状以及预防睑板腺功能不良。
20.权利要求13的药物组合物，其用于治疗术后眼部炎症和术后眼部疼痛。
21.制备权利要求1的丙酸氟替卡松的纳米晶体的方法，其包括：
1)提供无菌的相I溶液，其包含：浓度为0.4％至1.0％的丙酸氟替卡松；浓度为约20至35％w/v的聚乙二醇(PEG)400；浓度为约65％至75％的聚丙二醇(PPG)400；和浓度为7.0％至15％w/v的聚山梨酯80(吐温80)；
2)提供无菌的相II溶液，其包含：水；具有约4至50cP的粘度、浓度为约0.1％至0.5％的甲基纤维素；浓度为0.005％至0.15％w/v的苯扎氯铵；并且相II溶液的pH为5.5；
3)将相I溶液和相II溶液混合，得到相III混合液，其中：
将相I溶液以0.5至1.4ml/分钟的流速与相II溶液混合，并且相II溶液是固定的；
相I溶液与相II溶液的体积比率为1:1至1:3；
当混合无菌的相I和无菌的相II时使用超声处理；和
混合在不超过8℃的第一个温度进行；
4)将相III混合液在10℃至40℃的温度退火一定时间，以生成包含大量丙酸氟替卡松的纳米晶体的相III混悬物；
5)任选地通过切向流过滤或连续离心纯化纳米晶体。
22.权利要求21的方法，其中：
相I的组成是：丙酸氟替卡松为0.45％；聚乙二醇(PEG)400为23.18％w/w；聚丙二醇(PPG)400为68.70％；和聚山梨酯80(吐温80)为7.67％w/w；
相II的组成是：苯扎氯铵为0.020％w/w；甲基纤维素15cP为0.40％w/w；水(适量至100％)；并且pH为5.5；
相I溶液在超声处理下以1.43ml/分钟的流速与相II混合；
相I与相II的体积比率为1:1；
相I和相II各自的温度为0-1℃；
将相III分散液在25℃退火至少8小时；
将产生的晶体通过切向流过滤或连续离心纯化。
23.权利要求21或22的方法，其中使用具有约10-75瓦的输出功率的超声处理。
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