CN108853017B - 一种雌三醇纳米口服制剂的组方与制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明阐述了一种雌三醇口服制剂的制备方法，其中，雌三醇以纳米结晶状态存在，粒径在20nm～1000nm之间，制备方法为湿法研磨或高压均质工艺，纳米结晶状态的雌三醇与相应的辅料相混合，制剂剂型包括口服片剂、胶囊、颗粒、冻干口崩、混悬口服液等，该雌三醇口服制剂便于携带和服用，生物利用度较高，临床上可用于预防和/或治疗辐射对机体可能造成的损伤。

Description

一种雌三醇纳米口服制剂的组方与制备工艺

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种雌三醇纳米晶混悬液及其口服制剂的制备工艺。

背景技术

核能和核技术的应用取得了极大的经济效益和社会效益，然而，核废料与核电站泄漏事故、工业探伤机与工业放射源机器故障、医源性辐射损伤、核武器、核脏弹等，使得核辐射事故的发生呈现增加趋势，急性放射病患者数量逐渐增加。核辐射事故的特点是机体在短时间受到大剂量射线照射，机体损伤广泛，临床表现复杂，病情发展有明显的阶段性，临床经过可分为初期、假愈期、极期和恢复期。随着世界对核安全的重视以及放射治疗的迅速发展，为了预防和减轻核辐射事故对人体健康的危害，很多国家进行了大量的研究，以寻求高效、低毒、易于个体化管理的辐射防护药物。

核辐射对机体的危害是由于电离辐射通过与生物分子、生物结构和生物媒介的直接作用(电离、激发和碰撞)和间接作用(自由基和类自由基活性分子)导致生物靶和非靶分子及物质结构损伤，损伤通过分子-细胞-组织-系统不同层次的传递，导致细胞功能紊乱或死亡，进而发生组织、器官的损伤和功能紊乱，直到出现可见的临床效应。目前，抗辐射防治药物的研究主要围绕抗氧化、消除自由基、促进造血、抗炎症、提高机体免疫力等方面展开，常见的抗辐射药物分为含硫类、激素类、天然动植物类、细胞因子类等。

激素类抗辐射药物对骨髓有核细胞、造血干细胞和祖细胞都有明显的辐射防护作用，并能促进它们的恢复，并且毒副作用很小，在照射前或照射后给药均可对机体产生保护效应。因此，激素类抗辐射药在临床上占据重要地位，现战储药箱装备的即是雌激素类药物“500”针剂和“523”片剂。但是由于针剂使用不便，而“523”片剂系为了增加溶解度并提高生物利用度而在甾体母核3位上增加环戊氧基、17位增加α乙炔基，虽然生物利用度得以提高，但是其显示出雌激素活性较高的副作用，随着给药剂量及给药次数的增加，可引起暂时性的乳房肿胀、硬结；女性可引起月经失调；男性引起睾丸萎缩，生精细胞抑制等，因此其临床应用受到了限制。而雌三醇作为性激素的作用微弱，缺点在于其溶解度非常低，因此口服生物利用度很低，但是如果利用药物制剂工艺方法提高其溶解度，进而改善其生物利用度，即可在发挥雌三醇治疗效果的同时相比其它激素类药物极大的降低不良反应的发生。本发明在此种背景下，利用湿法研磨的制剂技术将雌三醇原料研磨至纳米级，进而制备成各种口服制剂，方便携带和服用，同时提高了其溶出度和生物利用度，疗效确切，不良反应轻微，可以为临床使用提供一种更优的选择。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种含有雌三醇的纳米晶混悬液及其口服制剂的制备工艺，该药物制剂可用于辐射损伤的预防和治疗。

本发明所述的纳米晶混悬液，含有雌三醇，稳定剂，电荷保护剂和纯化水，上述组分经湿法研磨制备而成，各组分的重量百分含量如下：雌三醇0.5％～20.0％，稳定剂1.5％～10.0％，电荷保护剂0.5％～2.0％，其余为纯化水。

优选的，本发明所述的纳米晶混悬液，各组分的重量百分含量如下：雌三醇5.0％～15.0％，稳定剂3.0％～8.0％，电荷保护剂0.8％～1.5％，其余为纯化水。

其中，稳定剂为不同种类的高分子材料，优选为泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、HPMCE3、PVP K30，进一步优选为泊洛沙姆188、HPMC E3；

当稳定剂为泊洛沙姆188时，含量为3.0％～8.0％；

当稳定剂为泊洛沙姆407时，含量为1.5％～6.0％；

当稳定剂为HPMC E3时，含量为5.0％～10.0％；

当稳定剂为PVP K30时，含量为5.0％～10.0％；

其中，电荷保护剂为不同种类的表面活性剂，优选为十二烷基硫酸钠，多库酯钠；

当电荷保护剂为十二烷基硫酸钠时，含量为1.0％～2.0％；

电荷保护剂为多库酯钠时，含量为0.5％～1.5％；

电荷保护剂为十二烷基硫酸钠和多库酯钠组合时，十二烷基硫酸钠：多库酯钠1:2～2:1。

进一步优选的，本发明所述的纳米晶混悬液，各组分的重量百分含量如下：

雌三醇8.0％～12.0％，泊洛沙姆188 3％～8％，十二烷基硫酸钠0.5％-2％，其余为纯化水，

或者，各组分的重量百分含量如下：

雌三醇8.0％～12.0％，HPMC E3 5％～10％，电荷保护剂0.5％-2％，其余为纯化水，其中，电荷保护剂为十二烷基硫酸钠：多库酯钠的重量比＝1：1。

更优选的，本发明所述的纳米晶混悬液，由以下各组分加工制成：

方法：

将十二烷基硫酸钠1.5g和泊洛沙姆5.5g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药9.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬，利用行星式高能球磨机研磨，即得。

更优选的，本发明所述的纳米晶混悬液，由以下各组分加工制成：

方法：

将十二烷基硫酸钠和多库酯钠各50g溶解于10L纯化水中，搅拌状态下缓慢加入称好的HPMC E3 600g，待溶解完全后，加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药1000g使之混合均匀，再经均质机处理使充分混悬，利用循环式介质研磨机研磨，即得。

本发明的另一个目的在于提供纳米晶混悬液的制备方法。

本发明采用湿法研磨工艺降低其粒径，药物的初始粒径介于1μm～10μm；研磨后的粒径介于20nm～1000nm，更优选的粒径范围为100nm～300nm。

本发明采用两种湿法介质研磨机制备纳米级别的含药纳米晶混悬液。

第一种，采用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰公司)，其工艺如下：将雌三醇原料药和稳定剂、电荷保护剂加入纯化水中，搅拌均匀，10000r/min高速剪切5min后，倒入氧化锆球磨罐(50ml)中，原料药和锆珠的重量比约为1:5，锆珠直径0.1～0.3mm，盖上密封盖后，装入行星式球磨机，设置仪器运行参数，运行5min，停机5nim，转速1000r/min，运行方式为正反交替运行，20个循环后过100目筛，用少量纯化水润洗3次，得药物混悬液；第二种，采用循环式介质研磨机(0.6L)，其工艺如下：将500g的氧化锆研磨珠(粒径0.3mm～0.5mm)缓慢加入研磨机(奎特(上海)机电科技有限公司)，开启设备，加入含药、稳定剂、电荷保护剂的混悬液，设置机器频率2000～3000Hz，研磨时间约60min，研完之后用少量纯化水润洗研磨珠3次，得到含药混悬液。

本发明的另一个目的在于提供一种含有该纳米晶混悬液的药物制剂。

上述含药混悬液可通过添加适宜的辅料，制成口服混悬液或口腔膜剂；也可通过喷雾干燥或流化床上药工艺除去水分，得到含药颗粒或粉末。喷雾干燥的过程中为了防止药物晶体聚集，可选用适宜的辅料作为稀释剂，常用的小分子稀释剂有乳糖、蔗糖、甘露醇等。还可以选用高分子材料作为稀释剂，丙烯酸共聚物为肠溶性高分子材料，在弱酸条件下，丙烯酸共聚物与药物均以固态形式分散在水中，稳定性好，满足喷干工艺的要求，在模拟肠液条件(pH6.5～6.8)下高分子材料迅速溶解，形成胶束，从而对药物产生增溶作用，可进一步加速药物的溶出速率；聚维酮K30等水溶性高分子材料具有更好的增溶作用，但浓度过高时会降低体系的稳定性，使用量不应超过30％。当稀释剂选用小分子乳糖、蔗糖或甘露醇时，使用量占混悬液质量体积比的40％～80％；当稀释剂为丙烯酸共聚物时，使用量为35％～75％；稀释剂为聚维酮K30时，使用量为20％～30％。

将上述研磨后的药物混悬液，与含稀释剂的水分散体混合均匀后，得到含1％～2％的药物混悬液组合物。通过喷雾干燥工艺除去水分，得到含药的固态粉末。喷干工艺条件如下：入口温度分别为110℃(小分子稀释剂)、90℃(高分子稀释剂)，风量0.6m³/min，雾化压力0.2MPa，流速1.0ml/min；流化床底喷上药是将药物混悬液组合物包衣在固体载体上，得到含药微丸，常用的固体载体包括：颗粒乳糖、球形微晶纤维素、非球形微晶纤维素。其工艺如下：入口温度40～60℃，风频空气流量24～48Hz，雾化压力0.1MPa，流速3ml/min。

本发明利用介质研磨法有效降低雌三醇原料药粒径，得到粒径介于20nm～1000nm之间的药物晶体，可以直接添加适宜的辅料制备成口服混悬液或口腔膜剂，也可以通过喷雾干燥或流化床上药的方式除去水分，得到含药粉末或颗粒，进一步制成其它口服剂型。制备工艺中无需有机溶剂，对设备和人员要求也不算高，易于实现产业化生产。而制成的雌三醇纳米结晶口服制剂便于携带和使用，且溶出度和生物利用度得以显著提高，从而达到更好的预防和治疗效果，相较于常规抗辐射药物有很大的优势。

本发明的纳米晶混悬液通过添加适当的辅料制成口服混悬液，所述辅料的类型包括溶剂、增稠剂、pH调节剂、甜味剂、酸味剂、防腐剂、香精、金属螯合剂中的一种或多种；也可制成口腔膜剂，辅料类型包括成膜材料、增塑剂、矫味剂、着色剂、缓冲剂、稳定剂、崩解剂、润湿剂、表面活性剂和溶剂中的一种或多种；该混悬液也可以通过喷雾干燥或流化床上药工艺除去水分，得到含药粉末或颗粒，进一步制成其它类型的口服固体制剂。

其中，所述的喷雾干燥工艺，为防止喷干过程中药物晶体聚集，添加适宜的辅料作为稀释剂，可选用的稀释剂包括乳糖、蔗糖、甘露醇、丙烯酸共聚物、聚维酮K30等，更优选的是乳糖或丙烯酸共聚物。

选用乳糖时，其使用量占纳米晶混悬液总量的40％～80％，更优选的用量为45％～70％，进一步优选的用量为50％～55％；选用丙烯酸共聚物时，其使用量占纳米晶混悬液总量的35％～75％，更优选的用量为40％～70％，进一步优选的用量为45％～50％。

流化床上药工艺，固体载体选自非球形微晶纤维素、球形微晶纤维素、颗粒乳糖，更优选的是颗粒乳糖。

本发明的纳米晶混悬液，可制备成各种药学上可能的剂型，优选的剂型包括口服混悬液、口腔膜剂、普通片剂、舌下片、口崩片、缓释片、肠溶片、含片、普通胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、肠溶胶囊等，更优选的剂型包括口服混悬液、口腔膜剂、普通片剂和胶囊剂。

本发明的另一个目的在于提供纳米晶混悬液及含有纳米晶混悬液的药物制剂在制备预防和/或治疗辐射对人体可能造成的损伤的药物中的应用。

本发明利用湿法研磨的制剂技术将雌三醇原料研磨至纳米级，进而制备成各种口服制剂，方便携带和服用，同时提高了其溶出度和生物利用度，提高药物的疗效，大大降低不良反应。

电离辐射可对生物体造成严重伤害甚至造成死亡，而造血组织是放射线的高敏感组织，辐射对于造血系统的损伤主要是抑制或破坏造血干细胞，导致造血功能障碍，血细胞是血液系统的终末细胞，全血细胞的减少必然能反映辐射损伤的程度，照射剂量越大，外周血细胞减少的越明显。因此，外周血的红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板的含量能够客观地反映造血系统的损伤程度。脾脏是机体与造血、免疫功能条件相关的重要脏器，也是对辐射高度敏感的细胞群。

本发明提供的雌三醇口服制剂，是采用湿法研磨发将原料药粒径控制在纳米级别，再制成各种适宜的药物剂型，从而显著改善药物溶解性和溶出度，进而达到提高生物利用度的目的。经动物实验验证，该口服制剂表现出了不弱于注射液的治疗效果，且没有明显的不良反应，更因其便于携带和使用，可为临床使用提供一种更优的解决方案，非常值得临床推广。

附图说明

图1辐射损伤小鼠生存率的变化

图2辐射损伤小鼠7天体重的变化(

n＝10)

图3辐射损伤后1,3,5,7,14,21和28天小鼠血清中红细胞(A)、白细胞(B)、血红蛋白(C)和血小板(D)含量的变化(

n＝10)

具体实施方式

以下通过实施例进一步描述本发明，但本发明不局限于以下实施例；

实施例1以不同稳定剂制备雌三醇纳米晶混悬液

处方：

方法：

将十二烷基硫酸钠1.0g和稳定剂5.0g(四组分别选用泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、HPMC E3、PVP K30)依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药10.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间得混悬液，采用美国PSS粒径测试仪测得药物粒子分布结果如下：

表1不同稳定剂对研磨的影响考察

结果表明，以四种稳定剂研磨均能有效降低雌三醇原料粒径。但泊洛沙姆188和HPMC E3效果更好，在相同的设备参数和实验条件下，能更有效的降低药物粒子的平均粒径。

实施例2以不同电荷保护剂制备雌三醇纳米晶混悬液

处方：

方法：

将1.0g电荷保护剂(三组分别选用十二烷基硫酸钠、多库酯钠、十二烷基硫酸钠：多库酯钠＝1:1)和5.0g泊洛沙姆188依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药10.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间得混悬液，采用美国PSS粒径测试仪测得药物粒子分布结果如下：

表2不同电荷保护剂对研磨的影响考察

结果表明，以十二烷基硫酸钠和多库酯钠做电荷保护剂研磨均能有效降低雌三醇原料粒径，两者效果无显著差异，二者质量比1:1联用得到的粒径最低，显示出更好的效果。

实施例3不同浓度原料制备雌三醇纳米晶混悬液

处方：

方法：

将十二烷基硫酸钠1.0g和泊洛沙姆5.0g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药0.1g、0.5g、1g、3g、5g、8g、10g、12g、15g、20g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间得混悬液，采用美国PSS粒径测试仪测得药物粒子分布结果如下：

表3原料药浓度考察

结果表明，研磨后粒径与原料药浓度成U型分布趋势，原因可能在于浓度过低时粒子碰撞几率减小，药物颗粒未能充分研磨；而浓度过大时粒子间距过小，碰撞能量不足，也导致研磨效果略差；浓度介于8％～12％时，显示出比较好的研磨效果，粒径可控制在200nm左右。

实施例4不同浓度泊洛沙姆188对研磨后药物粒径的影响

处方：

方法：

将十二烷基硫酸钠1.0g和泊洛沙姆1g、2g、3g、5g、8g、10g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药10.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间得混悬液，采用美国PSS粒径测试仪测得药物粒子分布结果如下：

表4泊洛沙姆188浓度考察

结果表明，泊洛沙姆188的浓度过大或过小都会影响研磨效果，原因可能在于浓度过低时混悬液粘度不够，药物颗粒与研磨珠接触机会减少，而且后续的稳定性考察发现，稳定剂浓度太低时，混悬液稳定性表现不佳；而浓度过大时混悬液粘度过大，碰撞能量不足，也导致研磨效果较差；浓度介于3％～8％时，显示出比较好的研磨效果，粒径可控制在200nm左右。

实施例5不同浓度HPMC E3对研磨后药物粒径的影响

处方：

方法：

将十二烷基硫酸钠1.0g和HPMC 1g、3g、5g、8g、10g、13g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药10.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间得混悬液，采用美国PSS粒径测试仪测得药物粒子分布结果如下：

表5 HPMC E3浓度考察

结果表明，HPMC E3的浓度过大或过小都会影响研磨效果，原因可能在于浓度过低时粒子碰撞几率减小，药物颗粒未能充分研磨，而且后续的稳定性考察发现，稳定剂浓度太低时，混悬液稳定性表现不佳；而浓度过大时混悬液粘度过大，碰撞能量不足，也导致研磨效果较差；浓度介于5％～10％时，显示出比较好的研磨效果，粒径可控制在200nm左右。

实施例6不同浓度电荷保护剂对研磨后药物粒径的影响

处方：

方法：

将HPMC和电荷保护剂(十二烷基硫酸钠：多库酯钠＝1:1)0.1g、0.2g、0.5g、1.0g、1.5g、2.0g、3.0g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药10.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间得混悬液，采用美国PSS粒径测试仪测得药物粒子分布结果如下：

表6电荷保护剂浓度考察

结果表明，电荷保护剂的浓度大小对研磨效果的影响并不显著，粒径均可控制在200nm附近，只是在浓度小于0.5％时，研磨后的混悬液更易发生凝聚和沉淀，而在浓度超过2.0％后，混悬液搅拌时起泡过多，不利于操作。因此，电荷保护剂浓度介于0.5％～2.0％是较优选择。

实施例7雌三醇纳米晶混悬液的制备

处方：

方法：

将十二烷基硫酸钠1.5g和泊洛沙姆5.5g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药9.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬。利用行星式高能球磨机(P-7，德国飞驰)研磨适宜时间即得，经美国PSS粒径测试仪检测，结果平均粒径为215.3nm，持续观察2月，粒径无明显变化。

实施例8雌三醇纳米晶混悬液的制备

处方：

方法：

将十二烷基硫酸钠和多库酯钠各50g溶解于10L纯化水中，搅拌状态下缓慢加入称好的HPMC600g，待溶解完全后，加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药1000g使之混合均匀，再经均质机处理3遍使充分混悬。利用循环式介质研磨机(0.6L，奎特上海机电科技有限公司)研磨适宜时间即得，经美国PSS粒径测试仪检测，结果平均粒径为180.5nm，持续观察2月，粒径无明显变化。

实施例9口服纳米晶混悬液的制备

处方：

方法：

按处方量称取原辅料，取50ml蒸馏水，加入山梨酸钾，加热搅拌使全部溶解，煮沸10分钟，放冷，得溶液①；向溶液①中加入柠檬酸和柠檬酸钠，搅拌使全部溶解，得溶液②；向溶液②中加入蔗糖、阿斯巴甜和柠檬香精，充分搅拌，使其完全溶解，得溶液③；二氧化钛加入到溶液③中，搅拌均匀，得溶液④；将甘油和二甲基硅油加入到雌三醇混悬液中，搅拌均匀，得⑤；搅拌状态下将溶液④缓慢加入到⑤中，混合均匀后，加蒸馏水定容至100ml，即得雌三醇口服混悬液(18mg/ml)。

实施例10口腔膜的制备

处方：

方法：

按处方量称取原辅料，取约30ml蒸馏水，加入柠檬酸和阿斯巴甜，加热搅拌使全部溶解，放冷，得溶液①；向溶液①中加入甘油和PEG400，搅拌使全部溶解，得溶液②；向溶液②中缓慢加入HPMC和HPC，充分搅拌，使其完全溶解，得溶液③；搅拌状态下将溶液③缓慢加入到雌三醇混悬液中，混合均匀后，加入草莓香精和赤藓红，搅拌均匀得混悬液④；静置除去气泡后缓缓倒入涂布有液体石蜡的玻璃培养皿中，40℃减压干燥即得雌三醇口腔膜剂(40.0％)。

实施例11喷雾干燥法制备雌三醇的含药粉末

处方：

雌三醇纳米晶混悬液(实施例8) 2000ml

甲基丙烯酸共聚物 1000g

纯化水 10000ml

方法：

按处方准备所需物料，将甲基丙烯酸共聚物均匀分散到10000ml纯化水中，再与雌三醇混悬液混合搅拌均匀，所得药物混悬液组合物进行喷雾干燥即得含药粉末。工艺参数如下：入口温度90℃、风量0.6m³/min、雾化压力0.2MPa、流速1.0ml/min。

该含药粉末中雌三醇的理论含量应为14.925％，实测含量为14.501％，差异应该是由含水量变化引起的。喷雾干燥前检测实施例8雌三醇混悬液粒径为184.8nm，干燥后将含药粉末复溶于纯化水中检测粒径为197.2nm，说明喷干工艺对原料粒径没有造成明显的影响。

实施例12流化床上药法制备雌三醇的含药颗粒

处方：

雌三醇纳米晶混悬液(实施例8) 5000ml

颗粒乳糖 450g

方法：

按处方准备所需物料，利用流化床底喷上药将药物包裹在颗粒乳糖上，工艺参数如下：入口温度50℃、风频空气流量36Hz、雾化压力0.1MPa、流速3ml/min，得到含雌三醇的药物颗粒。该含药颗粒中雌三醇的理论含量应为38.462％，实测含量为38.656％，差异应该是由含水量变化引起的。流化床上药前检测实施例8雌三醇混悬液粒径为183.4nm，干燥后将含药粉末复溶于纯化水中检测粒径为188.5nm，说明流化床上药工艺不会对原料粒径造成明显的影响。

实施例13软胶囊的制备

药液处方：

化胶：按明胶：尼泊金乙酯：二氧化钛：甘油：巧克力棕：乙醇：纯化水(1000:1.4:4.8:400:2.6:7.8:1000)比例进行配料，现将甘油及纯化水加入化胶罐中，搅拌加热30min，加入二氧化钛浆液，搅拌过程中升温至75～80℃加入明胶，在继续搅拌下加入巧克力棕浆液、尼泊金乙酯醇液搅拌均匀。

配料：配液罐中加入大豆油和蜂蜡加热溶解后加入含药粉末，不断搅拌至均匀。

压丸定型干燥：按每粒0.3g装量压丸(相当于每粒含雌三醇10mg)，乙醇洗净，转笼干燥，即得。

实施例14片剂的制备

处方：

方法：

按处方量称取物料，先将含药颗粒与乳糖用等量递加法混合均匀，再与微晶纤维素混合均匀，加入硬脂酸镁，混合均匀，调整压片机装量使平均片重为0.150g(相当于每片含雌三醇10mg)，包衣，即得。

实施例15溶出度测定

采用《中国药典》2015版四部溶出度与释放度测定法，以经过脱气处理的纯化水900ml作为溶出介质，桨法，转速为50rpm，温度：37±0.5℃。待温度稳定后，分别向各溶出杯中投入样品，分别于0，5,15,30,60min取样5ml，用0.22μm滤膜过滤，同时补加5ml新介质，取续滤液作为供试品溶液。另取雌三醇对照品约10mg，精密称定，溶于25ml甲醇后，以溶出介质定量稀释至200ml，作为对照品溶液。供试品溶液和对照品溶液照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(68:32)为流动相，检测波长281nm，理论板数按雌三醇峰计算应不低于1500。计算各取样点的累积溶出量

表7溶出度测定和比较

注：比较例为未经研磨的雌三醇原料药。

结果表明，经研磨后的雌三醇口服制剂相比原料药的溶出度和溶出速度有大幅度提升，差异显著，说明研磨对雌三醇溶出的改善达到预期目的。其中实施例9的口服混悬液溶出更为迅速，而口服混悬液和片剂在60min附近均能达到接近100％的溶出。

实施例16雌三醇口服混悬液抗辐射疗效观察

1.材料

雄性BALB/c小鼠，6～8周龄，体重(22±2)g。雌三醇(E3)，购于武汉森威尔世纪化工有限公司。

2.方法

2.1采用⁶⁰Co放射源，剂量率为200cGy/min，一次性全身照射。小鼠随机分为4组，分别为空白组、对照组、注射组和口服组。

2.2空白组假照射前7天，生理盐水灌胃每天1次；对照组，照前7天，生理盐水灌胃每天1次；注射组，照前48,24,0h分别给小鼠腹腔注射2mg/kg雌三醇，共3次；口服组，照前7天给小鼠灌胃1mg/kg雌三醇口服混悬液(实施例9)，每天1次。

2.3雌三醇口服混悬液对辐射损伤小鼠生存率的影响实验按以上描述分组，每组100只小鼠，分别给予不同药物处理和8Gyγ射线照射，连续观察30d，记录小鼠的生存状态和死亡情况。

2.4雌三醇口服混悬液对辐射损伤小鼠体重和外周血象的影响实验按以上描述分组，每组10只小鼠，分别给予不同药物处理和4Gyγ射线照射，并在照前0天，照后1、3、5、7、14、21、28天称重后眼眶取血，全自动血细胞计数仪检测外周血象。

2.5雌三醇口服混悬液对辐射损伤小鼠脾脏组织结构的影响实验按以上描述分组，每组10只小鼠，分别给予不同药物处理和8Gyγ射线照射，照后第10天称重后颈椎脱臼处死，取脾脏称重，计算脾系数并使用Bouin氏固定液观察脾结节形成数。

2.6统计学处理实验数据以

表示，用SPSS11.0软件进行单因素方差分析。

3.结果

3.1雌三醇口服混悬液对各组小鼠生存率的影响观察发现，辐射后小鼠行动迟缓、精神萎靡、饮食减少、皮毛干枯无光泽，在8Gyγ照射后对照组第4d开始出现小鼠死亡，25d全部死亡。而注射组和口服组小鼠以上体征有所改善，且存活率和存活时间也有显著提高，注射组和口服组之间比较无显著差异。如图1所示。

3.2雌三醇对辐射损伤小鼠体重和外周血象的影响观察每天小鼠饮食情况和体重数据统计显示，照射前的药物处理并没有明显影响小鼠的食欲，图2显示雌三醇对受照射小鼠体重的影响；图3显示的是受照小鼠外周血红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板总数的变化情况，受照小鼠各项数据低于正常值，而雌三醇能逆转这种状况，口服组和注射组没有明显区别。

3.3雌三醇对辐射损伤小鼠脾脏的影响对照组脾系数和脾结节形成数均比空白组有显著下降，用药组的体重和脾重的减轻幅度都有明显降低，脾系数和脾结节比对照组有显著改善。结果见表

表8辐照损伤小鼠脾系数及脾结节形成率的变化

分组	体重/g	脾重/mg	脾系数	脾结节数
					空白组	23.10±0.97	78±6.1	0.40±0.06	3.5±0.7
对照组	20.58±1.52	39±5.4	0.22±0.06	1.1±0.3
					注射组	21.76±1.15	65±4.9	0.33±0.07	4.6±0.5
口服组	21.69±1.03	66±4.5	0.35±0.05	4.8±0.6

4.讨论

在本实验中，本发明提供的雌三醇口服混悬液表现出了不弱于雌三醇注射液的治疗效果。给与8Gyγ照射时，可显著延长辐射损伤小鼠的生存时间，提高其存活率；小鼠受到4GyγCo射线全身照射后外周血中红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板的含量均在不同时期下降，雌三醇处理的组别表现出下降缓慢、最低水平较高的有益作用；雌三醇给药组可防止射线导致的脾脏重量过度减轻、受照小鼠内源性脾结节交对照组明显增多，说明雌三醇可保护受照小鼠造血干细胞，促进残存的造血干细胞增值。

上述表中仅列举本发明部分化合物的体外活性，本发明其他化合物结构相似，也具有和上述化合物相同或者相近的体外活性效果，在此不一一列举。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (3)

1.一种雌三醇纳米晶混悬液，其特征在于，雌三醇纳米晶混悬液由雌三醇，稳定剂，电荷保护剂和纯化水组成，

其中，雌三醇的重量百分含量为8%~12.0%，雌三醇经气流粉碎至2μm，

其中，稳定剂为泊洛沙姆188或HPMC E3，稳定剂为泊洛沙姆188时，重量百分含量为3.0%~8.0%；稳定剂为HPMC E3时，重量百分含量为5.0%~10.0%，

其中，电荷保护剂为多库酯钠和/或十二烷基硫酸钠，当电荷保护剂为十二烷基硫酸钠时，重量百分含量为1.0%~2.0%；电荷保护剂为多库酯钠时，重量百分含量为0.5%~1.5%；两者亦可联用，十二烷基硫酸钠：多库酯钠1: 1，

其中雌三醇纳米晶的粒径范围为100nm~300nm，制备工艺采用湿法研磨。

2.一种雌三醇纳米晶混悬液，其特征在于，由以下各组分加工制成：

雌三醇 9.0g

十二烷基硫酸钠 1.5g

泊洛沙姆188 5.5g

纯化水 100ml，

方法：

将十二烷基硫酸钠1.5g和泊洛沙姆188 5.5g依次溶解于100ml纯化水中，在搅拌状态下加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药9.0g使之混合均匀，再经高速剪切分散均质机10000r/min剪切5min使充分混悬，利用行星式高能球磨机研磨，即得。

3.一种雌三醇纳米晶混悬液，其特征在于，由以下各组分加工制成：

雌三醇 1000g

十二烷基硫酸钠 50g

多库酯钠 50g

HPMC E3 600g

纯化水 10L，

方法：

将十二烷基硫酸钠和多库酯钠各50g溶解于10L纯化水中，搅拌状态下缓慢加入称好的HPMC E3 600g，待溶解完全后，加入事先已经气流粉碎至2μm的雌三醇原料药1000g使之混合均匀，再经均质机处理使充分混悬，利用循环式介质研磨机研磨，即得。

Images