CN107828664B - 裂褶菌xt-1及其栽培方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种裂褶菌(Schizophyllum commune)XT‑1，保藏编号为CGMCC No.12871。本发明还提供裂褶菌XT‑1的栽培方法，包括三级菌种制备，裂褶菌的栽培及出菇管理等。菌株XT‑1可作为母种栽培生产裂褶菌子实体，用于袋料栽培后其出菇整齐，出菇时间短，产量高，能实现规模化生产，应用价值高。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌栽培技术领域，具体地说，涉及一种裂褶菌XT-1及其栽培方法与应用。
背景技术
裂褶菌(Schizophyllum commune)属于真菌门，担子菌纲，伞菌目，裂褶菌科，裂褶菌属。又名白参(云南)、树花(陕西)、白花、鸡毛菌(北方)。该菌含有较强活性的纤维素酶，并能产生苹果酸，菌丝深层发酵时可产生大量有机酸，还可产生促生素吲哚乙酸。本菌在食品工业、医药卫生、生物化学等方面应用广泛。
裂褶菌包括菌丝体和子实体两部分组成，成熟后产生孢子。裂褶菌子实体小型。菌盖直径0.6-4.2cm，白色至灰白色，上有绒毛或粗毛，扇形或肾形，具多数裂瓣，菌肉薄，白色，菌褶窄，从基部辐射而出，白色或灰白色，有时淡紫色，沿边缘纵裂而反卷，柄短或无。裂褶菌广泛分布于世界各地。在我国分布于我国河北、山西、黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏、内蒙古、安徽、浙江、江西、福建、台湾、河南、湖南、广东、广西、海南、甘肃、西藏、四川、贵州、云南等地区。裂褶菌多在春至秋季节生长，属于木腐生菌，野生于阔叶树及针叶树的枯枝倒木上，有的也发生在枯死的禾本科植物、竹类或野草上。
裂褶菌幼时质嫩味美，具有特殊的浓郁香味，在云南是有名的食用菌，同时又是我国著名的药用菌。其性平、味甘，具有滋补强壮、扶正固本和镇静作用，可治疗神经衰弱、精神不振、头昏耳鸣和出虚汗等症。国内外医药研究表明，裂褶菌子实体中含有丰富的有机酸和具有抗肿瘤、抗炎作用的裂褶菌多糖。裂褶菌的液体发酵物含有活性较强的纤维素酶，并能产生苹果酸，菌丝深层发酵时产生的大量有机酸和促生长素吲哚乙酸，均广泛应用于食品工业、生物化学和医药卫生等领域。
目前裂褶菌人工栽培方法大量出菇较难，人工培育生长情况不好，产量低。优良的菌种是决定裂褶菌产量与质量提高与稳定的关键，裂褶菌的获得主要是利用野生裂褶菌子实体进行分离与纯化，然后直接用于裂褶菌菌种的培养与生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种栽培相对简单，出菇相对高产，可进行大面积大棚栽培的裂褶菌菌株XT-1及其栽培方法与应用。
本发明从湖南省永顺县响塘村野生松树裂褶菌组织分离获得，对其进行了形态学、生理生化性质和ITS-RNA分析(SEQ ID NO:1)，该菌株命名为裂褶菌(Schizophyllumcommune)XT-1，属于裂褶菌科，裂褶菌属，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC No.12871，保藏日期2016年8月8日。
本发明的裂褶菌XT-1的主要形态特征和生理生化性质为：该菌株菌落在9cm直径的PDA平板培养基上25℃培养6天即可长满平板，菌落呈白色绒毛状，蓬松，无色素产生，菌丝无隔。
本发明裂褶菌XT-1的栽培方法，包括以下步骤：
S1、三级菌种的制备：一级种为PDA试管菌种(母种)，二级种为马铃薯粒菌种(原种)，三级种为麦粒菌种(栽培种)；
S2、裂褶菌的栽培及出菇管理。
其中，PDA试管菌种的制备方法为：将裂褶菌XT-1的菌丝体接入PDA斜面培养基上，25℃培养进行配对融合，制成食用菌试管菌种。
所述PDA培养基的制作方法为：先将马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼，取200克切丝后加水1100mL左右煮沸15分钟，纱布过滤，取滤1000mL，添加琼脂20g煮溶后，再加入葡萄糖20g，定容1000mL趁热分装于试管内，装量为试管长度的1/5，塞上棉塞，于0.105MPa灭菌30分钟后趁热摆成斜面备用。
马铃薯粒菌种的制备方法为：
①马铃薯粒培养基的制作：将去泥沙、挖芽眼的马铃薯切成1.5cm×1.5cm×1cm大小的方粒，晒至半干或晒干复水至半干后分装至500mL体积的玻璃瓶内，每瓶装50-100粒，塞好棉塞于0.105MPa灭菌1小时备用；
②接种培养：将PDA试管菌种接入马铃薯粒培养基内，常温培养至菌丝体长满每个马铃薯粒，制成马铃薯粒菌种。
麦粒菌种的制备方法为：
①麦粒培养基的制作：先将干麦粒加水浸泡8-12小时，然后用沸水烫煮至无白心时迅速捞出、晾干，添加0.5％的轻质碳酸钙拌匀后，分装至广口菌种瓶内，封口或塞上棉塞，于0.105MPa灭菌1.5小时备用；
②接种培养：将马铃薯粒菌种接入麦粒培养基内，常温培养至菌丝体长满整个麦粒，制得麦粒菌种。
裂褶菌的栽培及出菇管理具体如下：
S21、装袋培养
将配制好的食用菌固体培养料(碎木屑60％、玉米芯粉20％、麸皮10％、石灰1％、葡萄糖1％和水60％)进行灭菌(0.105MPa灭菌3小时)后，待料温降至45-50℃时，将栽培种与培养料充分拌匀后，装入15cm×50cm或17cm×55cm规格的聚乙烯无菌袋内；菌棒烙口后摆放于地面或层架上培养，低温季节采用井字型垒叠保温培养；高温季节采用单层间隔培养，防止料温太高烧棒。培养室要求适温、干燥、透气、避强光。培养条件为：最适温度25-28℃，最高温不超过32℃，空气相对湿度70％以下。
S22、出菇管理
待裂褶菌菌丝体长满整个菌棒，控制温度在25-28℃，空气相对湿度在85％以上，光照100-300lux进行催蕾；在菇蕾尚未分化菌盖前，菌棒上要少喷水，避免划口处积水造成菇蕾发育受阻，减少出菇污染杂菌，主要是向空中喷雾状水增湿，喷水要少量多次，次数视天气及环境湿度而定；裂褶菌从播种到采收在15天左右；随着菇蕾逐渐长大，对菌棒的喷水量也要相应增加；当子实体菌盖平展时即可采收；采收前4小时停止喷水，至菌盖中的菌丝体回长出白色茸毛时采收；采收后停止2天向菌棒上喷水，生息养菌，随后的管理同前，催蕾、促长、采收。
本发明还提供利用上述栽培方法得到的裂褶菌子实体。
本发明还提供所述裂褶菌XT-1及其子实体在制备裂褶菌粗多糖中的应用。
本发明的优点在于裂褶菌XT-1菌株可作为母种栽培生产裂褶菌子实体，用于袋料栽培后头批菇出菇时间为15-20天，较其他裂褶菌出菇时间(20-25天)短，且出菇整齐，出菇管理得当，可采收4-5潮菇，产量较高。每个菌包每批次岀菇的毛利润为7元左右，规模化生产后应用价值高。
附图说明
图1为本发明实施例1中裂褶菌XT-1装袋培养示意图。
图2为本发明实施例1中裂褶菌XT-1长好的子实体示意图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
本发明中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。
实施例1裂褶菌XT-1的分离及栽培方法
1.菌株的分离与保藏
在野外将野生松树枯枝上的裂褶菌子实体组织采下后，在超净工作台内将组织接种到PDA培养基平板上，于25℃培养箱中暗培养，每天观察记录，挑取无污染长势良好的菌株进行转接，连续转接培养后挑取菌落进行保存。
2.菌株XT-1的鉴定
采用真菌基因组DNA抽屉试剂盒提取XT-1菌丝体DNA，以ITS4、ITS5为引物进行ITS-PCR，对获得的PCR产物进行测序后，结果见SEQ ID NO:1。
经Genbank序列BLAST比对分析，与数据库中已发表的Schizophyllum communeDO17和Schizophyllum commune WB033等裂褶菌菌株的序列相似性均高达99％，确定该分离的菌株为Schizophyllum commune，命名为裂褶菌(Schizophyllum commune)XT-1。
3.菌种制作
用于XT-1食用菌生产繁殖的菌种可分为三级菌种，一级种为PDA试管菌种(母种)，二级种为马铃薯粒菌种(原种)，三级种为麦粒菌种(栽培种)。
(1)PDA试管菌种的制作
①培养基制作：先将马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼，取200克切丝后加水1100mL左右煮沸15分钟，三层纱布过滤，取滤1000mL，添加琼脂20g煮溶后，再加葡萄糖20g，定容1000mL趁热分装于试管内，装量约为试管长度的1/5，随后塞上棉塞，于0.105MPa灭菌30分钟后趁热摆成斜面备用。
②接种培养：采用无菌操作将分离培养的多个食用菌单孢子菌丝体接入PDA空白斜面上，25℃培养进行配对融合，制成食用菌试管菌种。
(2)马铃薯粒菌种的制作
①马铃薯粒培养基的制作：将去泥沙、挖芽眼的马铃薯切成1.5cm×1.5cm×1cm大小的方粒，晒至半干或晒干复水至半干后分装至500mL体积的玻璃瓶内，每瓶装50-100粒，塞好棉塞于0.105MPa灭菌1小时备用。
②接种培养：采用无菌操作将食用菌试管菌种接入马铃薯粒培养基内，常温培养至菌丝体长满每个马铃薯粒，制成二级菌种。
(3)麦粒菌种的生产
①麦粒培养基的制作：先将干麦粒加水浸泡8-12小时，然后用沸水烫煮至无白心时迅速捞出、凉干，添加0.5％的轻质碳酸钙拌匀后，分装至广口菌种瓶内，封口或塞上棉塞，于0.105MPa灭菌1.5小时备用。
②接种培养：采用无菌操作将马铃薯粒菌种接入麦粒培养基内，常温培养至菌丝体长满整个麦粒，制得食用菌三级种，即栽培种。
4.装袋培养
将配制好的食用菌固体培养料(碎木屑60％、玉米芯粉20％、麸皮10％、石灰1％、葡萄糖1％和水60％)进行灭菌后，待料温降至45-50℃时，将食用菌麦粒菌种与培养料充分拌匀后，用装袋机将其装入25cm×45cm×10cm规格的全氧菌包无菌袋内，松紧适度。用封口机将菌包封口后摆放于地面或层架上培养，菌包四周间隔2-8厘米，培养至菌丝体长满，一般15-25天。培养室要求适温、干燥、透气、避强光。最适宜温度为25-28℃，最高温不超过32℃，空气相对湿度70％以下(图1)。
5.出菇管理
在最适宜的温度条件下，裂褶菌7-10天菌丝体可长满整个菌棒，控制温度在25-28℃之间，空气相对湿度在85％以上、光照100-300lux进行催蕾。在菇蕾尚未分化菌盖前，菌棒上要少喷水，避免划口处积水造成菇蕾发育受阻，减少出菇污染杂菌，主要是向空中喷雾状水增湿，喷水要少量多次，次数视天气及环境湿度而定。随着菇蕾逐渐长大，对菌棒的喷水量也要相应增加。裂褶菌从播种到采收在15天左右。当子实体菌盖平展时即可采收，长好的子实体如图2所示。采收前4小时停止喷水，至菌盖中的菌丝体回长出白色茸毛时采收。采收后停止2天向菌棒上喷水，生息养菌，随后的管理同前，催蕾、促长、采收。出菇管理得当，可采收3-4潮菇，生物转化率可达30-50％。采收的鲜菇要尽早鲜销，或及时干制，晒干或烘干，鲜干比为4：1左右，干燥后要及时用食品袋密封包装，防止吸潮霉变。
实施例2裂褶菌XT-1子实体粗多糖含量测定
取裂褶菌XT-1子实体干样200g，在80℃的烘箱中烘至发脆后粉碎过20目筛，不能通过筛子的部分研磨后再次过筛直至全部通过筛子为止。过筛后的样品装入清洁的广口瓶中保存，备用。根据中华人民共和国农业行业标准(NY/T1676-2008)食用菌中粗多糖的含量测定方法进行XT-1子实体粗多糖含量测定，测得多糖含量为2.73％。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 湖南省农业生物技术研究中心
<120> 裂褶菌XT-1及其栽培方法与应用
<130> KHP171114748.4
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 629
<212> DNA
<213> 裂褶菌(Schizophyllum commune)
<400> 1
taggggactg cggacgacat taacgaatca aacaagtcca tcttgttctg atcctgtgca 60
ccttatgtag tcccaaagcc ttcacgggcg gcggttgact acgcctacct cacaccttaa 120
agtatgttaa cgaatgtaat catggtcttg acagacccta aaaagttaat acaactttcg 180
acaacggatc tcttggctct cgcatcgatg aagaacgcag cgaaatgcga taagtaatgt 240
gaattgcaga attcagtgaa tcatcgaatc tttgaacgca ccttgcgccc tttggtattc 300
cgaggggcat gcctgtttga gtgtcattaa ataccatcaa ccctcttttg acttcggtct 360
cgagagtggc ttggaagtgg aggtctgctg gagcctaacg gagccagctc ctcttaaatg 420
tattagcgga tttcccttgc gggatcgcgt ctccgatgtg ataatttcta cgtcgttgac 480
catctcgggg ctgacctagt cagtttcaat aggagtctgc ttctaaccgt ctcttgaccg 540
agactagcga cttgtgcgct aacttttgac ttgacctcaa atcaggtagg actacccgct 600
gaacttaagc atatcaataa agcggagga 629
Claims (2)
1.裂褶菌(Schizophyllum commune)XT-1的栽培方法，裂褶菌XT-1的保藏编号为CGMCCNo.12871，其特征在于，包括以下步骤：
S1、三级菌种的制备：一级种为PDA试管菌种，二级种为马铃薯粒菌种，三级种为麦粒菌种，即栽培种；
S2、裂褶菌的栽培及出菇管理；
步骤S1中所述马铃薯粒菌种的制备方法为：
①马铃薯粒培养基的制作：将去泥沙、挖芽眼的马铃薯切成1.5cm×1.5cm×1cm大小的方粒，晒至半干或晒干复水至半干后分装至500mL体积的玻璃瓶内，每瓶装50-100粒，塞好棉塞于0.105MPa灭菌1小时备用；
②接种培养：将PDA试管菌种接入马铃薯粒培养基内，常温培养至菌丝体长满每个马铃薯粒，制成马铃薯粒菌种；
步骤S1中所述麦粒菌种的制备方法为：
①麦粒培养基的制作：先将干麦粒加水浸泡8-12小时，然后用沸水烫煮至无白心时迅速捞出、晾干，添加0.5％的轻质碳酸钙拌匀后，分装至广口菌种瓶内，封口或塞上棉塞，于0.105MPa灭菌1.5小时备用；
②接种培养：将马铃薯粒菌种接入麦粒培养基内，常温培养至菌丝体长满整个麦粒，制得麦粒菌种；
步骤S2具体为：
S21、装袋培养
将配制好的食用菌固体培养料进行灭菌后，待料温降至45-50℃时，将栽培种与培养料充分拌匀后，装入15cm×50cm或17cm×55cm规格的聚乙烯无菌袋内；菌棒烙口后摆放于地面或层架上培养，低温季节采用井字型垒叠保温培养；高温季节采用单层间隔培养，防止料温太高烧棒；培养条件为：最适温度25-28℃，最高温不超过32℃，空气相对湿度70％以下；
S22、出菇管理
待裂褶菌菌丝体长满整个菌棒，控制温度在25-28℃，空气相对湿度在85％以上，光照100-300lux进行催蕾；在菇蕾尚未分化菌盖前，菌棒上要少喷水，避免划口处积水造成菇蕾发育受阻，减少出菇污染杂菌，主要是向空中喷雾状水增湿，喷水要少量多次，次数视天气及环境湿度而定；随着菇蕾逐渐长大，对菌棒的喷水量也要相应增加；当子实体菌盖平展时即可采收；采收前4小时停止喷水，至菌盖中的菌丝体回长出白色茸毛时采收；采收后停止2天向菌棒上喷水，生息养菌，随后的管理同前，催蕾、促长、采收；
步骤S21中所述食用菌固体培养料的制作方法为：按如下质量百分比称取各原料：碎木屑60％、玉米芯粉20％、麸皮10％、石灰1％、葡萄糖1％和水60％，于0.105MPa灭菌3小时。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述PDA试管菌种的制备方法为：将裂褶菌XT-1的菌丝体接入PDA斜面培养基上，25℃培养进行配对融合，制成食用菌试管菌种；
所述PDA培养基的制作方法为：先将马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼，取200克切丝后加水1100mL煮沸15分钟，纱布过滤，取滤1000mL，添加琼脂20g煮溶后，再加入葡萄糖20g，定容1000mL趁热分装于试管内，装量为试管长度的1/5，塞上棉塞，于0.105MPa灭菌30分钟后趁热摆成斜面备用。
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