CN105647812A - 一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于普洱茶生产领域，具体公开了一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用。本发明所提供的裂褶菌菌株为裂褶菌(Schizophyllum？commune)TMCC？70002，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC？No.8751。将本发明的裂褶菌菌株应用于普洱茶的渥堆过程中，不仅缩短了普洱茶的发酵周期，获得了红褐、清香、爽口的普洱茶茶汤，而且该菌株的菌丝体能够产生一些抑制多种杂菌生长的物质，对提高普洱茶产品的食品安全性也具有重要作用，非常适合应用于普洱茶的加工生产中。

Description

一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用
技术领域
本发明涉及普洱茶生产领域，具体涉及一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用。
背景技术
随着食品科学与技术的进步，以及微生物资源的挖掘与利用，微生物优良菌株的选育和应用研究越来越广泛。
裂褶菌真菌广泛分布于世界各地，特别是在热带、亚热带杂木林下常可找到它的踪迹。裂褶菌能够产生多种活性成分，能够从中分离出裂褶菌多糖(SPG)、苹果酸、裂褶菌制素等物质。该菌广泛应用于生产有机酸、促生素吲哚乙酸等食品工业中。
MacKenzieCR等报道，裂褶菌可以产生一种酯酶，催化基质中纤维素产生阿魏酸。同时，该菌含有较强活性的纤维素酶，在普洱茶发酵中能够促进物质产生变化，对普洱茶品质的形成具有很好的促进作用。此外，裂褶菌的菌丝体提取液对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、痢疾杆菌(Dysenterybacilli)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)以及乙型副伤寒沙门氏菌(SalmonellaparatyphiB)具有明显的抑制作用。
然而，在普洱茶发酵研究领域中，前期偏重于进行基础性研究，而缺乏在具体应用方面的深度跟踪。随着对普洱茶发酵技术的突破，从传统渥堆发酵样品中获得具有潜在应用价值的微生物菌株，并应用于普洱茶的发酵生产中已经成为普洱茶生产的必然趋势，具有重要的意义。
发明内容
为了解决以上问题，本发明从微生物资源挖掘和开发利用的角度出发，对普洱茶的生产，尤其是普洱茶的渥堆过程进行研究，提供了一株在普洱茶生产中能够提高品质的候选菌株，并将其应用于普洱茶的生产中，不仅缩短了普洱茶的发酵周期，而且对提高普洱茶产品的食品安全性具有重要作用。
因此，本发明一方面提供了一株裂褶菌菌株，该菌株为裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002，其已于2014年01月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，该菌株的保藏编号为CGMCCNo.8751。
本发明所述的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株分离自勐海茶业有限责任公司(勐海茶厂)的传统渥堆普洱茶发酵样品中，利用常规培养基，通过传统的初筛、复筛、纯化培养获得。
本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株划线接种在沙堡氏琼脂培养基(SDA)上，培养36小时后开始生长，7天后菌落直径约为60mm，形成白色致密基内菌丝和浓密厚重的白色或者灰白色气生分枝菌丝，培养基背面期初为白色，其后变为淡黄色。裂褶菌属中高温型菌类，菌丝生长适温为7～30℃，最适温度为22～25℃，子实体形成温度为14～20℃，孢子萌发最适温度为21～26℃。裂褶菌菌丝培养基最适含水量为60％～75％，菌丝生长阶段，适宜的空气相对湿度为70％～80％。
本发明另一方面提供了本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株在普洱茶生产中的应用。
其中，在一个优选的实施方案中，该菌株在已潮水的普洱毛茶中的接种量为5-10％(体积/重量)。
本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株从普洱茶渥堆样品中分离得到，将制备好的该菌株的种子液按特定比例应用于普洱茶发酵生产中，不仅缩短了普洱茶的发酵周期，获得了红褐、清香、爽口的普洱茶茶汤，而且该菌株的菌丝体能够产生一些抑制金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、痢疾杆菌(Dysenterybacilli)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)以及乙型副伤寒沙门氏菌(SalmonellaparatyphiB)的物质，对提高普洱茶产品的食品安全性也具有重要作用。
本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株的生物材料信息如下：
分类命名：裂褶菌(Schizophyllumcommune)；
菌株编号：TMCC70002；
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
保藏机构简称：CGMCC；
保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
保藏日期：2014年01月06日；
保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.8751。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株的筛选
从普洱茶渥堆中采集新鲜的发酵茶样，通过选择性分离培养基分离得到裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株。
纯化培养基为：马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾0.5g、蛋白胨3g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁0.5g、琼脂15g、水1000mL、pH自然，121℃灭菌30min。
具体分离纯化方法如下：
1、培养基准备：将配制好的培养基于121℃灭菌30min，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约20ml，冷却凝固后备用；
2、样品处理：取待分离的普洱茶样，研磨粉碎，取5g，在超净工作台中加入到装有45ml无菌水的三角烧瓶中，振荡制成菌悬液，浓度标记为10-1；
3、稀释：按十倍稀释法逐步稀释，稀释4次为止。十倍稀释法是指下一管的菌悬液浓度是上一管的十分之一；
4、接种：将标记有10-2、10-3、10-4、10-5浓度的菌悬液分别取400μl注入到已配制好的培养皿中，每个稀释度三个重复，并用涂布棒均匀涂布。完成后放置于10℃、20℃、30℃、40℃四个温度梯度下培养，每隔24小时观察一次；
5、纯化：培养4～8天，挑取单菌落转接到沙堡氏琼脂培养基(SDA)中培养，多次划线纯化直至得到纯化菌株；
6、种子液的制备：将纯化得到的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株接种于马铃薯—葡萄糖液体培养基中，然后放置于摇床(150rpm/min、30℃)上，培养4天后，用于接种发酵。
实施例2裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株的形态鉴定
将本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株划线接种在沙堡氏琼脂培养基(SDA)上，培养36小时后开始生长，7天后菌落直径约为60mm，形成白色致密基内菌丝和浓密厚重的白色或者灰白色气生分枝菌丝，培养基背面期初为白色，其后变为淡黄色。裂褶菌属中高温型菌类，菌丝生长适温为7～30℃，最适温度为22～25℃，子实体形成温度为14～20℃，孢子萌发最适温度为21～26℃。裂褶菌菌丝培养基最适含水量为60％～75％，菌丝生长阶段，适宜的空气相对湿度为70％～80％。
实施例3裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株的生产应用
将大叶种晒青毛茶加水至含水量达到20％—40％左右，121℃灭菌30min，随后在灭菌的毛茶中按照5％～10％的接种量接种本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株种子液，放置于40℃培养数周。以周为单位补水并翻堆，在第一周内该菌株开始大量繁殖，菌株数量呈几何倍数增加，其分泌的酶量也增加。由于大量生物活性物质和酶等的作用，促进了茶叶中内含物质进行氧化、分解作用，增加了普洱茶的香气、汤色等品质特征。具体的比较结果参见表1和表2中的数据。
表1采用裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002在不同条件下发酵普洱茶后，其内含物质与大益2012年7572普洱熟茶的比较表
表2采用裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002单菌发酵与传统渥堆发酵各酶酶活比较表
此外，本发明的裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002菌株的菌丝体能够产生一些抑制金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、痢疾杆菌(Dysenterybacilli)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)以及乙型副伤寒沙门氏菌(SalmonellaparatyphiB)的物质，对提高普洱茶产品的食品安全性具有重要的作用。

Claims (4)

1.一株裂褶菌菌株，其特征在于，该菌株为裂褶菌(Schizophyllumcommune)TMCC70002，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.8751。
2.根据权利要求1所述的裂褶菌菌株，其是从普洱茶渥堆样品中，利用常规培养基，通过传统的初筛、复筛、纯化培养获得的。
3.权利要求1或2所述的裂褶菌菌株在普洱茶生产中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其中该菌株在已潮水的普洱毛茶中的接种量为5-10％(体积/重量)。
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