CN107828664A - 裂褶菌xt‑1及其栽培方法与应用 - Google Patents

裂褶菌xt‑1及其栽培方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种裂褶菌(Schizophyllum commune)XT‑1,保藏编号为CGMCC No.12871。本发明还提供裂褶菌XT‑1的栽培方法,包括三级菌种制备,裂褶菌的栽培及出菇管理等。菌株XT‑1可作为母种栽培生产裂褶菌子实体,用于袋料栽培后其出菇整齐,出菇时间短,产量高,能实现规模化生产,应用价值高。

Description

裂褶菌XT-1及其栽培方法与应用
技术领域
[0001]本发明涉及食用菌栽培技术领域,具体地说,涉及一种裂褶菌XT-1及其栽培方法 与应用。
背景技术
[0002]裂褶菌(Schizophyllum ccranune)属于真菌门,担子菌纲,伞菌目,裂褶菌科,裂褶 菌属2名白参(云南)、树花(陕西)、白花、鸡毛菌(北方)。该菌含有较强活性的纤维素酶, 并能产生苹果酸,菌丝深层发酵时可产生大量有机酸,还可产生促生素吲哚乙酸。本菌在食 品工业、医药卫生、生物化学等方面应用广泛。
[0003]裂褶菌包括菌丝体和子实体两部分组成,成熟后产生孢子。裂褶菌子实体小型。菌 盖直径0.6-4.2cm,白色至灰白色,上有绒毛或粗毛,扇形或肾形,具多数裂瓣,菌肉薄,白 色,菌褶窄,从基部辐射而出,白色或灰白色,有时淡紫色,沿边缘纵裂而反卷,柄短或无。裂 褶菌广泛分布于世界各地。在我国分布于我国河北、山西、黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏、 内蒙古、安徽、浙江、江西、福建、台湾、河南、湖南、广东、广西、海南、甘肃、西藏、四川、贵州、 云南等地区。裂褶菌多在春至秋季节生长,属于木腐生菌,野生于阔叶树及针叶树的枯枝倒 木上,有的也发生在枯死的禾本科植物、竹类或野草上。
[0004]裂褶菌幼时质嫩味美,具有特殊的浓郁香味,在云南是有名的食用菌,同时又是我 国著名的药用菌。其性平、味甘,具有滋补强壮、扶正固本和镇静作用,可治疗神经衰弱、精 神不振、头昏耳鸣和出虚汗等症。国内外医药研究表明,裂褶菌子实体中含有丰富的有机酸 和具有抗肿瘤、抗炎作用的裂褶菌多糖。裂褶菌的液体发酵物含有活性较强的纤维素酶,并 能产生苹果酸,菌丝深层发酵时产生的大量有机酸和促生长素吲哚乙酸,均广泛应用于食 品工业、生物化学和医药卫生等领域。
[0005]目前裂褶菌人工栽培方法大量出菇较难,人工培育生长情况不好,产量低。优良的 菌种是决定裂褶菌产量与质量提高与稳定的关键,裂褶菌的获得主要是利用野生裂褶菌子 实体进行分离与纯化,然后直接用于裂褶菌菌种的培养与生产。
发明内容
[0006]本发明的目的是提供一种栽培相对简单,出菇相对高产,可进行大面积大棚栽培 的裂褶囷菌株XT-1及其栽培方法与应用。
[0007]本发明从湖南省永顺县响塘村野生松树裂褶菌组织分离获得,对其进行了形态 学、生理生化性质和ITS-RNA分析(SEQ ID N0:1),该菌株命名为裂褶菌(Schizophyllum commune) XT-1,属于裂褶菌科,裂褶菌属,现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心,地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编 100101,保藏编号CGMCC No. 12871,保藏日期2016年8月8曰。
[0008]本发明的裂褶菌XT-1的主要形态特征和生理生化性质为:该菌株菌落在9cm直径 的PDA平板培养基上25 °C培养6天即可长满平板,菌落呈白色绒毛状,蓬松,无色素产生,菌 丝无隔。
[0009]本发明裂褶菌XT-1的栽培方法,包括以下步骤:
[0010] S1、三级菌种的制备:一级种为PDA试管菌种(母种),二级种为马铃薯粒菌种(原 种),三级种为麦粒菌种(栽培种);
[0011] S2、裂褶菌的栽培及出菇管理。
[0012]其中,PDA试管菌种的制备方法为:将裂褶菌rr-1的菌丝体接入PDA斜面培养基上, 25°c培养进行配对融合,制成食用菌试管菌种。
[0013]所述PDA培养基的制作方法为:先将马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼,取200克切丝后 加水llOOmL左右煮沸15分钟,纱布过滤,取滤1000mL,添加琼脂20g煮溶后,再加入葡萄糖 2〇g,定容lOOOmL趁热分装于试管内,装量为试管长度的1/5,塞上棉塞,于0.105MPa灭菌30 分钟后趁热摆成斜面备用。
[0014]马铃薯粒菌种的制备方法为:
[0015]①马铃薯粒培养基的制作:将去泥沙、挖芽眼的马铃薯切成丨.5cm X丨.5cmx lcm大 小的方粒,晒至半干或晒干复水至半干后分装至500mL体积的玻璃瓶内,每瓶装50-100粒, 塞好棉塞于0. l〇5MPa灭菌1小时备用;
[0016]②接种培养:将PDA试管菌种接入马铃薯粒培养基内,常温培养至菌丝体长满每个 马铃薯粒,制成马铃薯粒菌种。
[0017]麦粒菌种的制备方法为:
[0018]①麦粒培养基的制作:先将干麦粒加水浸泡8-12小时,然后用沸水烫煮至无白心 时迅速捞出、晾干,添加0.5%的轻质碳酸钙拌匀后,分装至广口菌种瓶内,封口或塞上棉 塞,于0 • 105MPa灭菌1.5小时备用;
[0019]②接种培养:将马铃薯粒菌种接入麦粒培养基内,常温培养至菌丝体长满整个麦 粒,制得麦粒菌种。
[0020] 裂褶菌的栽培及出菇管理具体如下:
[0021] S21、装袋培养
[0022] 将配制好的食用菌固体培养料(碎木屑60%、玉米芯粉20%、麸皮10%、石灰1 %、 葡萄糖1%和水60%)进行灭菌(0.105MPa灭菌3小时)后,待料温降至45-50°C时,将栽培种 与培养料充分拌勾后,装入15cm X 50cm或17cm X 55cm规格的聚乙炼无菌袋内;菌棒恪口后 摆放于地面或层架上培养,低温季节采用井字型垒叠保温培养;高温季节采用单层间隔培 养,防止料温太高烧棒。培养室要求适温、干燥、透气、避强光。培养条件为:最适温度25-28 °C,最高温不超过32°C,空气相对湿度70 %以下。
[0023] S22、出菇管理
[0024]待裂褶菌菌丝体长满整个菌棒,控制温度在25-28°C,空气相对湿度在85%以上, 光照100-3001ux进行催蕾;在菇蕾尚未分化菌盖前,菌棒上要少喷水,避免划口处积水造成 菇蕾发育受阻,减少出菇污染杂菌,主要是向空中喷雾状水增湿,喷水要少量多次,次数视 天气及环境湿度而定;裂褶菌从播种到采收在15天左右;随着菇蕾逐渐长大,对菌棒的喷水 量也要相应增加;当子实体菌盖平展时即可采收;采收前4小时停止喷水,至菌盖中的菌丝 体回长出白色茸毛时采收;采收后停止2天向菌棒上喷水,生息养菌,随后的管理同前,催 蕾、促长、采收。
[0025] 本发明还提供利用上述栽培方法得到的裂褶菌子实体。
[0026] 本发明还提供所述裂褶菌XT-1及其子实体在制备裂褶菌粗多糖中的应用。
[0027]本发明的优点在于裂褶菌XT-1菌株可作为母种栽培生产裂褶菌子实体,用于袋料 栽培后头批菇出菇时间为15-20天,较其他裂褶菌出菇时间(20-25天)短,且出菇整齐,出菇 管理得当,可采收4-5潮菇,产量较高。每个菌包每批次出菇的毛利润为7元左右,规模化生 产后应用价值高。
附图说明
[0028]图1为本发明实施例1中裂褶菌)(T-1装袋培养示意图。
[0029]图2为本发明实施例1中裂褶菌XT-1长好的子实体示意图。
具体实施方式
[0030]以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例 均按照常规实验条件,如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW, Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001),或按照制造厂商说明书建议的条件。 [0031]本发明中涉及到的百分号“%”,若未特别说明,是指质量百分比;但溶液的百分 比,除另有规定外,是指100mL溶液中含有溶质的克数。
[0032]实施例1裂褶菌XT-1的分离及栽培方法 [0033] 1.菌株的分离与保藏
[0034]在野外将野生松树枯枝上的裂褶菌子实体组织采下后,在超净工作台内将组织接 种到PDA培养基平板上,于25°C培养箱中暗培养,每天观察记录,挑取无污染长势良好的菌 株进行转接,连续转接培养后挑取菌落进行保存。
[0035] 2.菌株XT-1的鉴定
[0036] 采用真菌基因组DNA抽屉试剂盒提取XT-1菌丝体DNA,以ITS4、ITS5为引物进行 ITS-PCR,对获得的PCR产物进行测序后,结果见SEQ ID N0:1。
[OO37] 经Genbank序列BLAST比对分析,与数据库中已发表的Schizophyllum commune DOI7和Schizophyllum commune WB033等裂裙菌菌株的序列相似性均高达99%,确定该分 尚的菌株为Schizophyllum commune,命名为裂糟菌(Schizophyllum commune) XT-1。
[0038] 3.菌种制作
[0039]用于XT-1食用菌生产繁殖的菌种可分为三级菌种,一级种为PDA试管菌种(母种), 二级种为马铃薯粒菌种(原种),三级种为麦粒菌种(栽培种)。
[0040] (1) PDA试管菌种的制作
[0041] ①培养基制作:先将马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼,取200克切丝后加水ii〇〇mL左右 煮沸15分钟,三层纱布过滤,取滤lOOOinL,添加琼脂20g煮溶后,再加葡萄糖20g,定容1000mL 趁热分装于试管内,装量约为试管长度的1/5,随后塞上棉塞,于0.105MPa灭菌30分钟后趁 热摆成斜面备用。
[0042]②接种培养:采用无菌操作将分离培养的多个食用菌单孢子菌丝体接入PDA空白 斜面上,25°C培养进行配对融合,制成食用菌试管菌种。
[0043] (2)马铃薯粒菌种的制作
[0044]①马铃薯粒培养基的制作:将去泥沙、挖芽眼的马铃薯切如_5cmX 1.5cmX lcm大 小的方粒,晒至半干或晒千复水至半干后分装至500mL体积的玻璃瓶内,每瓶装50-100粒, 塞好棉塞于0.105MPa灭菌1小时备用。
[0045]②接种培养:采用无菌操作将食用菌试管菌种接入马铃薯粒培养基内,常温培养 至菌丝体长满每个马铃薯粒,制成二级菌种。
[0046] (3)麦粒菌种的生产
[0047] ①麦粒培养基的制作:先将干麦粒加水浸泡8-12小时,然后用沸水烫煮至无白心 时迅速捞出、凉干,添加0.5%的轻质碳酸钙拌匀后,分装至广口菌种瓶内,封口或塞上棉 塞,于0.105MPa灭菌1.5小时备用。
[0048] ②接种培养:采用无菌操作将马铃薯粒菌种接入麦粒培养基内,常温培养至菌丝 体长满整个麦粒,制得食用菌三级种,即栽培种。
[0049] 4.装袋培养
[0050] 将配制好的食用菌固体培养料(碎木肩60%、玉米芯粉20%、麸皮10%、石灰1 %、 葡萄糖1%和水60%)进行灭菌后,待料温降至45-50°C时,将食用菌麦粒菌种与培养料充分 拌匀后,用装袋机将其装入25cmX 45cmX 10cm规格的全氧菌包无菌袋内,松紧适度。用封口 机将菌包封口后摆放于地面或层架上培养,菌包四周间隔2-8厘米,培养至菌丝体长满,一 般15-25天。培养室要求适温、干燥、透气、避强光。最适宜温度为25-28°C,最高温不超过32 °C,空气相对湿度70 %以下(图1)。
[0051] 5 •出菇管理
[0052]在最适宜的温度条件下,裂褶菌7-10天菌丝体可长满整个菌棒,控制温度在25-28 °C之间,空气相对湿度在85%以上、光照100-3001ux进行催蕾。在菇蕾尚未分化菌盖前,菌 棒上要少喷水,避免划口处积水造成菇蕾发育受阻,减少出菇污染杂菌,主要是向空中喷雾 状水增湿,喷水要少量多次,次数视天气及环境湿度而定。随着菇蕾逐渐长大,对菌棒的喷 水量也要相应增加。裂褶菌从播种到采收在15天左右。当子实体菌盖平展时即可采收,长好 的子实体如图2所示。采收前4小时停止喷水,至菌盖中的菌丝体回长出白色茸毛时采收。采 收后停止2天向菌棒上喷水,生息养菌,随后的管理同前,催蕾、促长、采收。出菇管理得当, 可采收3-4潮菇,生物转化率可达30-50%。采收的鲜菇要尽早鲜销,或及时干制,晒干或烘 干,鲜干比为4:1左右,干燥后要及时用食品袋密封包装,防止吸潮霉变。
[0053]实施例2裂褶菌XT-1子实体粗多糖含量测定
[0054]取裂褶菌XT-1子实体干样200g,在80°C的烘箱中烘至发脆后粉碎过20目筛,不能 通过筛子的部分研磨后再次过筛直至全部通过筛子为止。过筛后的样品装入清洁的广口瓶 中保存,备用。根据中华人民共和国农业行业标准(NY/Tl676-20〇8)食用菌中粗多糖的含量 测定方法进行XT-1子实体粗多糖含量测定,测得多糖含量为2.73%。
[0055]虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在 本发明基础上,可以对之做一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1. 裂褶菌(Schizophyllum commune) XT-1,其保藏编号为CGMCC No. 12871。
2. 权利要求1所述裂褶菌XT-1的栽培方法,其特征在于,包括以下步骤: 51、 三级菌种的制备:一级种为TOA试管菌种,二级种为马铃薯粒菌种,三级种为麦粒菌 种,即栽培种; 52、 裂褶菌的栽培及出菇管理。
3. 根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤S1中所述PDA试管菌种的制备方法为: 将裂褶菌)(T-1的菌丝体接入PDA斜面培养基上,25°C培养进行配对融合,制成食用菌试管菌 种; 所述PDA培养基的制作方法为:先将马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼,取200克切丝后加水 1100mL煮沸15分钟,纱布过滤,取滤lOOOmL,添加琼脂20g煮溶后,再加入葡萄糖20g,定容 1000mL趁热分装于试管内,装量为试管长度的1/5,塞上棉塞,于〇.l〇5MPa灭菌30分钟后趁 热摆成斜面备用。
4. 根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤S1中所述马铃薯粒菌种的制备方法 为: ① 马铃薯粒培养基的制作:将去泥沙、挖芽眼的马铃薯切成1.5CmX1.5cmXlcm大小的 方粒,晒至半干或晒干复水至半干后分装至500mL体积的玻璃瓶内,每瓶装50-100粒,塞好 棉塞于〇.l〇5MPa灭菌1小时备用; ② 接种培养:将PDA试管菌种接入马铃薯粒培养基内,常温培养至菌丝体长满每个马铃 薯粒,制成马铃薯粒菌种。
5. 根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤S1中所述麦粒菌种的制备方法为: ① 麦粒培养基的制作:先将干麦粒加水浸泡8-12小时,然后用沸水烫煮至无白心时迅 速捞出、晾干,添加0.5%的轻质碳酸钙拌匀后,分装至广口菌种瓶内,封口或塞上棉塞,于 0.105MPa灭菌1.5小时备用; ② 接种培养:将马铃薯粒菌种接入麦粒培养基内,常温培养至菌丝体长满整个麦粒,制 得麦粒菌种。
6. 根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤S2具体为: 521、 装袋培养 将配制好的食用菌固体培养料进行灭菌后,待料温降至45-5(TC时,将栽培种与培养料 充分拌匀后,装入15cmX 50cm或17cmX 55cm规格的聚乙烯无菌袋内;菌棒烙口后摆放于地 面或层架上培养,低温季节采用井字型垒叠保温培养;高温季节采用单层间隔培养,防止料 温太高烧棒;培养条件为:最适温度25-28°C,最高温不超过32°C,空气相对湿度70 %以下; 522、 出菇管理 待裂褶菌菌丝体长满整个菌棒,控制温度在25-28°C,空气相对湿度在85%以上,光照 100-3001UX进行催蕾;在菇蕾尚未分化菌盖前,菌棒上要少喷水,避免划口处积水造成菇蕾 发育受阻,减少出菇污染杂菌,主要是向空中喷雾状水增湿,喷水要少量多次,次数视天气 及环境湿度而定;随着菇蕾逐渐长大,对菌棒的喷水量也要相应增加;当子实体菌盖平展时 即可采收;采收前4小时停止喷水,至菌盖中的菌丝体回长出白色茸毛时采收;采收后停止2 天向菌棒上喷水,生息养菌,随后的管理同前,催蕾、促长、采收。
7. 根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤S21中所述食用菌固体培养料的制作 万法为:按如下质量百分比称取各原料:碎木屑60%、玉米芯粉20 %、麸皮10 %、石灰1 %、葡 萄糖1%和水60%,于0.105MPa灭菌3小时。
8. 根据权利要求2-7任一项所述栽培方法得到的裂褶菌子实体。
9. 权利要求1所述裂褶菌H-1或权利要求8所述子实体在制备裂褶菌粗多糖中的应用。
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