CN106999443A - 具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物 - Google Patents

具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物 Download PDF

Info

Publication number
CN106999443A
CN106999443A CN201580065730.2A CN201580065730A CN106999443A CN 106999443 A CN106999443 A CN 106999443A CN 201580065730 A CN201580065730 A CN 201580065730A CN 106999443 A CN106999443 A CN 106999443A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
peg
polyethylene glycol
mixture
microballoon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201580065730.2A
Other languages
English (en)
Inventor
玛丽·S·罗森代尔
桑卡兰·B·曼崔普拉咖达
埃利安娜·B·戈麦斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ruizer Lute Co., Ltd.
Original Assignee
Aintree Fabio Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aintree Fabio Co Ltd filed Critical Aintree Fabio Co Ltd
Publication of CN106999443A publication Critical patent/CN106999443A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1682—Processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/5031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

实施例可包括制备具有增加的疏水性的蛋白质‑PEG偶联物盐的方法。该方法可包括提供蛋白质水溶液。该蛋白质水溶液可包含蛋白质和pH缓冲剂。该方法还可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质‑PEG偶联物。该方法还可包括利用有机相中的疏水性有机酸使在蛋白质‑PEG偶联物上的氨基质子化。该质子化可形成具有可增加PEG偶联物盐的疏水性的疏水性阴离子的蛋白质‑PEG偶联物盐。

Description

具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物
相关申请的交叉引用
本申请要求下列专利申请的优先权：于2014年12月2日提交的美国临时专利申请第62/086,294号、于2015年11月30日提交的名称为“具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物”的美国专利申请第14/954,591号、和于2015年11月30日提交的名称为“具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物”的美国专利申请第14/954,701号。这些专利申请的内容以参考的方式并入本文中用于所有目的。
背景技术
将药物、激素、蛋白质、或其他医学活性剂传输进入患者体内面临着一些挑战。医学活性剂必须被传输进入患者体内。两个这种方法是口服和注射。就口服而言，药物在到达血流或用于治疗的靶向区域之前会必须通过患者的消化系统。注射可使医学活性剂能够快速地且直接地到达血流或用于治疗的靶向区域，但注射对于患者而言会是不方便的或疼痛的。一旦在身体内，作为时间函数的医学活性剂的浓度会基于医学活性剂的类型、不同官能团或分子在医学活性剂上的结合、医学活性剂的包封、或其他因素而变化。如果医学活性剂的浓度下降至低于阈值，则会需要对医学活性剂进行再次给药。许多医学活性剂必须频繁地给药，包括每天数次。更频繁的给药方案会增加患者的不方便、会降低患者的依从率，并且会导致不太理想的患者预后。如果医学活性剂是通过注射而给药，那么另一次注射增加疼痛的频率、感染的危险性、和在患者中产生免疫应答的可能性。因此，对于具有优越的在患者体内的浓度分布的医学活性剂存在着需求。本文中所描述的方法和组合物提供针对这些和其他需求的解决方案。
发明内容
医学活性剂可结合到脂肪链、聚乙二醇(PEG)、疏水性阴离子、或其他化合物。聚乙二醇的结合会增加医学活性剂的分子量并且会导致医学活性剂的半衰期的增加。此外，聚乙二醇(包括较小的PEG分子)或疏水性阴离子与医学活性剂的结合可增加医学活性剂的疏水性并且可使医学活性剂成为两亲性。利用可生物降解聚合物可使医学活性剂更容易地溶解于有机溶剂。该可生物降解聚合物可将医学活性剂包封在微球中。医学活性剂的包封可增加医学活性剂的半衰期。本文中所描述的制剂可在一个时间段内缓慢地且均匀地释放医学活性剂。该释放特性会导致在无需赋形剂的情况下在预定的治疗期内持续的几乎无峰值的蛋白质水平。医学活性剂在患者体内所形成的浓度分布可导致在患者中的更优的临床结果。本文中所描述的制剂可以以每月一次的频率向患者给药。制造这些制剂的工艺会是高效的、高产率的、或者不过分地高成本。
实施例可包括一种制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物盐的方法。该方法可包括提供蛋白质水溶液。此蛋白质水溶液可包含蛋白质和pH缓冲剂。该方法也可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物。该方法还可包括利用疏水性有机酸使在蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化。该质子化可在有机相中进行。该质子化可形成具有可增加PEG偶联物盐的疏水性的疏水性阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。
实施例可包括制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物的方法。该方法可包括提供可包含蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液。该方法还可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物。蛋白质-PEG偶联物可具有高于蛋白质的疏水性。
实施例可包括一种制备具有增加的疏水性的蛋白质盐的方法。该方法可包括提供含有蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液。该方法还可包括利用疏水性有机酸使在蛋白质上的至少一个氨基质子化。该质子化可形成具有可增加蛋白质盐的疏水性的疏水性阴离子的蛋白质盐。
在实施例中，制备含有蛋白质-PEG偶联物盐的控释微球的方法可包括提供蛋白质水溶液。该蛋白质水溶液可包含蛋白质和pH缓冲剂。该方法还可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物。另外，该方法可包括利用疏水性有机酸使在蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化。该质子化可形成具有疏水性阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。此外，该方法可包括将有机溶剂中的蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物加以混合。蛋白质-PEG偶联物盐的疏水性阴离子可增加该盐在有机溶剂中的溶解度。该方法还可包括在水溶液中使蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物的混合物乳化。此外，该方法可包括使蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物的乳化的混合物硬化成控释微球。
实施例可包括微球。该组合物可包含可生物降解聚合物。此外，微球可包含选自由蛋白质-聚乙二醇偶联物、蛋白质-聚乙二醇偶联物与有机酸的疏水性阴离子、蛋白质与有机酸的疏水性阴离子、及其组合所组成的组群的蛋白质混合物。
实施例也可包括一种可包含可生物降解聚合物、有机溶剂、和蛋白质混合物的组合物。该蛋白质混合物可包含蛋白质、蛋白质-聚乙二醇偶联物、有机酸的疏水性阴离子、或者其组合。该组合物可以是溶液或悬浮液。
在实施例中，所述方法可包括可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的制备。所述方法可包括提供蛋白质-PEG偶联物。该蛋白质-PEG偶联物中可以没有蛋白质-PEG偶联物盐。所述方法还可包括将可生物降解聚合物、蛋白质-PEG偶联物、疏水性有机酸、和有机溶剂在混合物中加以混合。所述方法可包括形成可包含蛋白质-PEG偶联物和疏水性有机酸阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。此外，所述方法可包括将该混合物加以搅拌而形成溶液或悬浮液。
一些实施例可包括制备可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法。所述方法可包括将可生物降解聚合物溶解于有机溶剂而形成混合物。所述方法也可包括将蛋白质-PEG偶联物和疏水性有机酸添加到该混合物中。所述方法还可包括利用疏水性有机酸使在蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化。该质子化可形成具有疏水性阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。此外，所述方法包括将该混合物加以搅拌而形成溶液或悬浮液。
本文中所描述的实施例可提供优越的浓度分布。在聚乙二醇修饰和包封之后蛋白质可保留其活性。蛋白质可具有低的体外、体内、和/或原位突释。该浓度释放可具有接近零级的动力学特征，并且该浓度释放随时间或留在微球中的医学活性剂浓度的变化很小。当向患者给药时，蛋白质可大体上完全地从微球中被释放出。
附图说明
下面结合附图来描述本发明：
图1示出了根据实施例的制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物盐的方法的方框图；
图2示出了根据实施例的制备蛋白质-PEG偶联物的方法的方框图；
图3示出了根据实施例的制备具有增加的疏水性的蛋白质盐的方法；
图4示出了根据实施例的制备含有蛋白质-PEG偶联物盐的控释微球的方法的方框图；
图5示出了根据实施例的制备可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法的方框图；
图6示出了根据实施例的制备可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法的方框图；
图7A和图7B示出了加载了医学活性剂的PLGA微球的光学显微镜图像；
图8示出了针对根据实施例的微球的持续释放研究的结果的曲线图；
图9示出了针对根据实施例的微球的持续释放研究的结果的曲线图；
图10示出了根据实施例的在微球给药之后在大鼠血浆样品中的GLP-1的药代动力学分析；
图11示出了根据实施例的在微球给药之后在大鼠血浆样品中的胰岛素的药代动力学分析。
具体实施方式
会需要向患者给药的医学活性剂包括药物、激素、和蛋白质。一个这种蛋白质是人生长激素。人生长激素(hGH)，191个氨基酸的肽，是一种增加细胞生长和再生的激素。hGH可用于治疗生长障碍和生长不足。例如，hGH可用于治疗儿童中的矮小症或者成人中的生长激素缺乏症。hGH的常规给药方法包括每日皮下注射。一项研究1已证明大部分患者只是偶尔地依从或不依从他们的hGH治疗。
可用作医学活性剂的另一个蛋白质是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)。GLP-1(31个氨基酸的肽)是肠降血糖素，它是一种可以降低血糖水平的激素。GLP-1可通过刺激胰岛素释放并抑制胰高血糖素释放而影响血糖。GLP-1也可通过减小胃排空而减慢营养素进入血流的吸收速率，并且可直接地减少摄食量。GLP-1影响血糖水平的能力已使GLP-1成为用于二型糖尿病和其他疾病的潜在治疗方法。在其未被改变状态中，由于蛋白酶解，GLP-1具有小于2分钟的体内半衰期。通过使副作用最小化、提高有效性、和延长作用的持续时间，可以改善GLP-1受体激动剂的治疗。
1Rosenfeld R.G.,Bakker B.2008.Compliance and persistence in pediatric andadult patients receiving growth hormone therapy.Endocr.Pract.14(2):143-154.
糖尿病和其他疾病的常规治疗会导致副作用。这种副作用可包括：低血糖、体重增加、免疫应答、胰的炎症、患甲状腺癌的风险增加、恶心、或与治疗剂注射有关的疼痛。另外，常规的治疗会不能实现糖尿病患者中的目标血糖。某些制剂会导致蛋白质向患者的不均匀给药，这可包括药物的初期突释。将蛋白质配制成可给药治疗剂的工艺也会导致变性或聚集。制造有效制剂的该工艺可具有高成本或低产率。
类似于hGH和GLP-1，恩夫韦肽(enfuvirtide，)是在向患者给药时会面临挑战的医学活性剂。恩夫韦肽可有助于治疗HIV和AIDS。然而，恩夫韦肽必须每日皮下注射二次。注射会导致皮肤过敏反应副作用，这会阻碍患者继续使用恩夫韦肽。会需要具有较低的给药频率或延长的持续时间的恩夫韦肽治疗，以提高患者依从性、降低成本，并且提高患有HIV和AIDS的患者的生活质量。
另一个医学活性剂是甲状旁腺激素(PTH)或PTH的片段。PTH是一种同化(骨形成)剂。PTH可由甲状旁腺分泌，是一种具有9,425Da分子量的含有84个氨基酸的多肽。前34个氨基酸可以是矿物质内环境稳定的生物活性部分。PTH的合成的、截短版本是由Lilly公司以特立帕肽(Teriparatide)的商品名而上市销售。PTH或PTH的片段可用于治疗骨质疏松症。特立帕肽会经常是在其他治疗剂之后使用，这是由于其他治疗剂的高成本和所要求的每日注射。如同其他医学活性剂，具有较低的给药频率或延长的持续时间的PTH治疗会是理想的。
未被改变的蛋白质可能不具有期望的浓度分布和其他有利特性。聚乙二醇修饰(使聚乙二醇结合到分子的过程)可以帮助肽类和蛋白质类的给药，这会导致药理特性的改善和有效性的提高。PEG是由乙二醇的亚单位所组成的线性聚合物，并且可溶解于水和许多有机溶剂。PEG是柔性的、生物相容性的、和无毒的。由于PEG的特性，因而聚乙二醇修饰可增加蛋白质或肽的半衰期和/或溶解度。PEG可结合到单甲氧基。该PEG可以是聚乙二醇乙醛，包括甲氧基聚乙二醇乙醛。
改变医学活性剂的浓度分布的另一种方法可以是将医学活性剂包封在可生物降解材料中。随着该材料在患者中逐渐地降解，可逐渐地释放出医学活性剂。将医学活性剂包封的工艺可包括有机溶剂。医学活性剂可以是亲水性的，并且不溶解于有机溶剂。可增加医学活性剂的疏水性从而便于包封。
为了增加医学活性剂的疏水性，可对医学活性剂进行聚乙二醇修饰(PEGylated，聚乙二醇化)。当被聚乙二醇修饰时，并非所有医学活性剂将增加其溶解度并保留它们的生物活性。例如，小PEG分子会不足以增加蛋白质的溶解度。加入较长链的PEG分子会最终增加蛋白质的疏水性和溶解度，但这些较长链相对于蛋白质会是过大的并且降低该蛋白质的生物活性。作为一个例子，发现了增加对hGH的聚乙二醇修饰会线性地降低hGH对于其受体的亲和力。2此外，基于聚乙二醇修饰的部位和PEG分子的大小，干扰素-α(IFN-α)的聚乙二醇修饰会导致较低的体外特异性活性。3此外，聚乙二醇修饰可能不增加溶解度。例如，PEG-胰岛素与2,000道尔顿的小PEG分子的偶联物会不能充分地溶解于有机溶剂。作为另一个例子，发现了粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的聚乙二醇修饰可增加G-CSF的聚集并且降低溶解度。4
可替代地，通过使疏水性离子结合到医学活性剂可增加疏水性。如同聚乙二醇修饰，使疏水性阴离子结合到医学活性剂未必增加所有医学活性剂的疏水性。蛋白质可以不具有或者可以不形成足够的与疏水性阴离子配对的带正电荷部位。然后，结合到蛋白质的阴离子的数量及疏水性的增加会受到限制。例如，酸性蛋白质(例如血清白蛋白)可含有比碱性氨基酸更多的酸性氨基酸。这种酸性蛋白质会不易被疏水性酸类质子化。
聚乙二醇修饰与使疏水性离子结合到医学活性剂的组合可产生协同的结果，其中与根据单独的聚乙二醇修饰与单独的疏水性离子结合所造成的疏水性增加的总和所预计的相比，利用该组合可更多地增加医学活性剂的疏水性。如果将蛋白质制备成蛋白质-PEG偶联物盐，那么蛋白质可实现优越的患者中的预后。
如图1中所示，本发明的实施例可包括制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物盐的方法100。该方法可包括提供蛋白质水溶液102。此蛋白质水溶液可包含蛋白质和pH缓冲剂。该pH缓冲剂可包括磷酸的无机盐。
2Clark R.et al.1996.Long-acting growth hormones produced by conjugationwith polyethylene glycol.J.Biol.Chem.217:21969-21977.
3Grace M.J.et al.2005.Site of pegylation and polyethylene glycol moleculesize attenuate interferon-alpha antiviral and antiproliferative activitiesthrough the JAK/STAT signaling pathway.J.Biol.Chem.280:6327-6336.
4Veronese F.M.et al.2007.Site-specific pegylation of G-CSF by reversibledenaturation.Bioconjug.Chem.18(6):1824-30.
根据各实施例，蛋白质可具有3,000道尔顿以上、在3,000道尔顿和10,000道尔顿之间、10,000道尔顿以上、在10,000道尔顿和15,000道尔顿之间、15,000道尔顿以上、在15,000道尔顿和20,000道尔顿之间、或者20,000道尔顿以上的分子量。在这些或其他实施例中，蛋白质可包括30以上的氨基酸单元、在30和100之间的氨基酸单元、100以上的氨基酸单元、在100和150之间的氨基酸单元、或者150以上的氨基酸单元。在各实施例中，蛋白质可包括：人生长激素、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰岛素、甲状旁腺激素、甲状旁腺激素的片段、恩夫韦肽或奥曲肽GLP-1可以是天然提取物或者是合成的。蛋白质可包括GLP-1的类似物或衍生物。在水溶液中可包含蛋白质的组合。例如，在水溶液中可包含GLP-1和胰岛素两者。
方法100可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物104。PEG与蛋白质的反应可在蛋白质的N-末端形成蛋白质-PEG偶联物。
聚乙二醇与蛋白质的反应形成其中PEG位于特定的半胱氨酸部位的蛋白质-PEG偶联物，或者该反应不形成任何，或基本上任何，其中PEG位于特定的半胱氨酸部位蛋白质-PEG偶联物。PEG与蛋白质的反应可包括在PEG与蛋白质之间形成胺键、酰胺键、酯键、或二硫键中的至少一种键。该反应可排除任何键或多种键的组的形成。可与在PEG聚合物端部的反应性基团形成这些键。
使聚乙二醇与蛋白质反应可包括使巯基反应性PEG结合到蛋白质的半胱氨酸残基。巯基反应性PEG可包括不同的反应性基团，这些反应性基团可包括马来酰亚胺和乙烯砜。巯基反应性PEG可具有2至40kDa的分子量。使用巯基反应性PEG的聚乙二醇修饰反应可在中性pH值下进行。在一些蛋白质中的半胱氨酸残基可参与二硫键的形成，并且可不用于衍生化。利用体外定点突变技术，可以在蛋白质上的任何特定部位导入额外的半胱氨酸残基。额外的半胱氨酸残基可用作PEG分子结合的部位。利用这些额外的半胱氨酸残基，可避免由于无规胺聚乙二醇修饰反应可能造成的产品异质性和活性损失。
在这些或其他实施例中，聚乙二醇可具有5,000道尔顿以下或者2,000道尔顿以下的分子量。较大的聚乙二醇可增加蛋白质的半衰期。较小的聚乙二醇可增加蛋白质-PEG偶联物的溶解度但没有长的半衰期。例如，具有2,000道尔顿分子量的聚乙二醇可具有小于1小时的半衰期。较小的聚乙二醇或PEG可用于增加蛋白质-PEG偶联物的溶解度，并且蛋白质的包封实现大部分的期望的半衰期增加。方法100可以不包括使聚乙二醇酯与蛋白质反应。聚乙二醇对于伯胺类会是选择性，同时聚乙二醇酯可与其他官能团和氨基酸发生反应。
方法100也可包括利用疏水性有机酸使在蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化106。氨基的质子化可在有机相中而不是在水相中进行。根据实施例，疏水性有机酸与蛋白质-PEG偶联物的摩尔比可在1:1至11:1、1:1至5:1、5:1至11:1、1:1至2:1、或者3:1至8:1的范围内。质子化可形成具有可增加PEG偶联物盐的疏水性的疏水性阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。蛋白质-PEG偶联物盐可包括单聚乙二醇修饰的盐。疏水性有机酸可包括双羟萘酸、多库酯氢、糠酸、或者其混合物。有机酸类可包括羧酸类、磺酸类、醇类、或者带巯基的有机化合物。疏水性有机酸可排除任何的所述酸或者任何所述酸的组。
疏水性阴离子可包括与疏水性有机酸类相关的阴离子。例如，疏水性阴离子可包括双羟萘酸盐阴离子、多库酯阴离子、或糠酸盐阴离子。在这些或其他实施例中，疏水性阴离子可以是脂肪酸阴离子、磷脂阴离子、聚苯乙烯磺酸盐阴离子、或者其混合物。磷脂阴离子中的磷脂可包括磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷酰胆碱、或者其混合物。疏水性阴离子也可排除任何所述的阴离子或者所述阴离子的任何组。疏水性阴离子可结合到在蛋白质上的特定侧链，或者它可结合到在蛋白质上的多个侧链。疏水性阴离子可具有大于1的logP。该logP是水/辛醇分配系数，并且可被定义为蛋白质盐在辛醇中的浓度与蛋白质盐在水中的浓度的比率的对数。大于1的logP可导致是比在水中浓度大10倍的在辛醇中浓度。水/辛醇分配系数可用于对不同分子的分配进入疏水相的能力进行比较，当这些分子自身会是两性分子时。所述方法也可包括添加阳离子型洗涤剂，例如十二烷胺盐酸盐或者十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，该阳离子型洗涤剂可抵消带负电荷肽的电荷并且可增加疏水性。
如图2中所示，实施例可包括制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物的方法200。方法200可包括提供可包含蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液202。该蛋白质可以是任何的前述蛋白质。蛋白质水溶液和pH缓冲剂可以是本文中所描述的任何蛋白质水溶液或pH缓冲剂。
方法200还可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物204。该聚乙二醇可具有本文中所描述的任何分子量。该蛋白质可以是本文中所描述的任何蛋白质。形成蛋白质-PEG偶联物的反应是以本文中所描述的任何方式而进行。方法200可排除利用疏水性有机酸使在蛋白质上的氨基质子化。方法200可以不形成蛋白质-PEG偶联物盐。
如图3中所示的实施例可包括制备具有增加的疏水性的蛋白质盐的方法300。方法300可包括提供含有蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液302。可从水中分离出该蛋白质。方法300还可包括利用疏水性有机酸304使在蛋白质上的氨基质子化。氨基的质子化可在没有水的有机相中进行。该质子化可形成具有可增加蛋白质盐疏水性的疏水性阴离子的蛋白质盐。方法300可以不包括将聚乙二醇导入蛋白质水溶液。方法300可以不形成蛋白质-PEG偶联物或者蛋白质-PEG偶联物盐。蛋白质水溶液、蛋白质、pH缓冲剂、疏水性有机酸、和疏水性阴离子可以是任何的前述化合物。
如在图4中所描绘的实施例中，制备含有蛋白质-PEG偶联物盐的控释微球的方法400可包括提供蛋白质水溶液402。该蛋白质水溶液可包含蛋白质和pH缓冲剂。该蛋白质可包括任何的前述蛋白质。方法400还可包括使聚乙二醇与蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物404。在形成蛋白质-PEG偶联物之后，可从水中分离出蛋白质-PEG偶联物。然后，可将蛋白质-PEG偶联物溶解于有机溶剂。
另外，方法400可包括利用疏水性有机酸使在蛋白质-PEG偶联物上的至少一个氨基质子化406。可将疏水性有机酸添加到有机相，并且可以不添加到水相。类似地，使氨基质子化可在没有水的有机相中进行。该质子化可形成具有疏水性阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。疏水性有机酸可包括本文中所描述的任何酸，蛋白质-PEG偶联物盐可以是本文中所描述的任何偶联物盐。
此外，方法400可包括将在有机溶剂中的蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物混合408。该有机溶剂可以不与水相混溶。该有机溶剂可包括：甲叉二氯、苯甲酸苄酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸异丙基酯(乙酸异丙酯)、乙酸仲丁酯、苯乙酮、乙酸正戊酯、苯胺、苯甲醛、苯、二苯甲酮、苯甲醇、苄胺、溴苯、三溴甲烷、乙酸正丁酯、丁酸甲酯、己酸、二硫化碳、四氯化碳、邻-氯苯胺、氯苯、1-氯丁烷、一氯甲烷、间-氯苯酚、间-甲酚、邻-甲酚、氰基乙烷、氰基丙烷、环己醇、环己酮、1,2-二溴甲烷、二溴甲烷、二丁基胺、间-二氯苯、邻-二氯苯、1,1-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷、二氯氟甲烷、碳酸二乙酯、丙二酸二乙酯、二乙基硫醚、二乙二醇二丁基醚、二异丁基酮、二异丙基硫醚、邻苯二甲酸二甲酯、硫酸二甲酯、二甲基硫醚、N,N-二甲基苯胺、庚酸、乙酰乙酸乙酯、苯甲酸乙酯、丙酸乙酯、乙基苯、乙二醇单丁基醚乙酸酯、乙酸乙酯、乙酸壬酯、乙酸癸酯、氟苯、呋喃、六甲基磷酰三胺、1-己醇、乙酸正己酯、异戊醇(3-甲基-1-丁醇)、乙酸异丁酯、甲氧基苯、甲基戊基酮、苯甲酸甲酯、甲酸甲酯、甲基异戊基酮、甲基已丁基酮、甲基异丁基通、甲基正丁基酮、甲基丙基酮、4-甲基-2-戊醇、N-甲基苯胺、硝基苯、硝基乙烷、1-硝基丙烷、2-硝基丙烷、1-丁醇、2-丁醇、1-戊醇、3-戊酮、2-苯基乙醇、乙酸正丙酯、喹啉、苯乙烯、1,1,2,2-四氯乙烷、1,1,2,2-四氯乙烯、甲苯、1,1-三氯乙烷、1,1,2-三氯乙烷、1,1,2-三氯乙烯、三氟甲烷、戊酸、间二甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、2,4-二甲酚、或者其混合物。该有机溶剂可排除任何溶剂或者溶剂的任何组。
所述方法可包括溶剂的混合物。溶剂的混合物可包含可混溶于水的溶剂，但溶剂的混合物可以不混溶于水。例如，可将水可混溶的溶剂，例如二甲基亚砜(DMSO)、甲醇、二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈、四氢呋喃、或其混合物添加到水不混溶的溶剂中。
可生物降解聚合物可包括聚乳酸、聚乙交酯、(d,l-乙交酯-丙交酯)共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酯与聚醚的共聚物、或者聚乳酸与聚乙二醇的共聚物。可生物降解聚合物可排除任何的这些聚合物或这些聚合物的组。可基于PEG的大小来调整可生物降解聚合物的分子量，以便提供期望的药代动力学特征。
在实施例中，(d,l-乙交酯-丙交酯)共聚物(PLGA)可具有5,000Da至7,000Da、7,000Da至17,000Da、17,000Da至20,000Da、20,000Da至24,000Da、24,000Da至38,000Da、38,000Da至40,000Da、或者40,000Da至50,000Da的分子量。PLGA可具有50:50或75:25的乙交酯与丙交酯比例。在一些实施例中，PLGA可具有在40:60至50:50、50:50至60:40、60:40至70:30、70:30至75:25、或者75:25至90:10范围内的乙交酯与丙交酯比例。乙交酯与丙交酯比例可以是小于或等于50:50、小于或等于60:40、或者小于或等于75:25，其中小于是指与丙交酯相比较小比例的乙交酯。有机酸的疏水性阴离子可改善一些PLGA但不改善其他PLGA的释放特性。
可接受的PLGA可包括PLGA 502、PLGA 503、PLGA 752、和PLGA 753。PLGA 502可以是具有50:50的乙交酯与丙交酯比例、0.16至0.24dL/g的特性粘度、和7,000至17,000Da分子量的聚合物。PLGA 503可以是具有50:50的乙交酯与丙交酯比例、0.32至0.44dL/g的特性粘度、和24,000至38,000Da分子量的聚合物。PLGA 752可以是具有75:25的乙交酯与丙交酯比例、0.14至0.22dL/g的特性粘度、和4,000至15,000Da分子量的聚合物。PLGA 753可以是具有75:25的乙交酯与丙交酯比例、0.32至0.44dL/g的特性粘度、和24,000至38,000Da分子量的聚合物。该PLGA聚合物也可是酸端封端或者酯端封端。
蛋白质-PEG偶联物盐的疏水性阴离子可增加该盐在有机溶剂中的溶解度。方法400也可包括在水溶液中使蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物的混合物乳化410。此外，方法400可包括硬化蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物的乳化混合物412成为控释微球。这些微球可包含有机酸的疏水性阴离子。如果将有机酸添加到水相而不是有机相中，那么有机酸和来自有机酸的任何阴离子不会被包含在微球中或者会以明显较低的浓度被包含在微球中。
制备控释微球的方法可包括蛋白质-PEG偶联物、或者代替蛋白质-PEG偶联物盐的蛋白质盐。蛋白质-PEG偶联物或者蛋白质盐可利用本文中所描述的任何方法而制备。
实施例可包括含有可生物降解聚合物的微球。微球可具有低于1mm的直径。例如，该微球可具有10至20μm、20至30μm、30至40μm、40至50μm、50至60μm、60至70μm、70至80μm、80至90μm、或90至100μm的直径。另外，多个微球可具有其中微球直径是在本文中所描述范围的一个范围内的粒径分布。该直径可用粒径分布的平均值、中值(D50)、10百分数(D10)、或90百分数(D90)来表征。过大的微球可能不可用注射器进行注射从而用于个体的治疗。此外，过大的微球也会延迟医学活性剂的释放。另一方面，如果直径过小，那么在加工、筛分、和/或筛选期间微球会丢失。
微球还可包含蛋白质-聚乙二醇偶联物、蛋白质和有机酸的疏水性阴离子、或者其混合物。微球也可排除蛋白质-聚乙二醇偶联物或者有机酸的疏水性阴离子。蛋白质可以是本文中所描述的任何蛋白质。其组合物可包含多种蛋白质的组合。例如，该组合物可包含GLP-1和胰岛素。GLP-1和胰岛素可作为蛋白质-PEG偶联物的一部分而存在于微球中。术语“预混物”可指代含有多种蛋白质或多种蛋白质-PEG偶联物的组合的微球。可替代地，实施例可包括后混物，其指代其中各微球可只含有一种医学活性剂但可将各医学活性剂的组合包含在多种微球的混合物中的微球的混合物。有机酸和有机酸的疏水性阴离子可以是任何的前述化合物。
组合物可包含可生物降解聚合物，并且可以以微球的形式而提供。可通过首先由水溶液和不可混溶溶液形成乳液，接着进行溶剂萃取和干燥而制备微球。可利用静态混合、动态混合、或填充床乳化机而形成乳液。
含有可生物降解聚合物的组合物可以是在有机溶剂中的溶液或悬浮液。这些溶液可被输送至人体，在输送期间该有机溶剂可溶解于体液并且可使包含可生物降解聚合物的组合物沉积。该有机溶剂可与水混溶并且可以是无毒的，因此可将该溶剂注射入患者体内。此外，为了形成溶液，聚乙二醇修饰蛋白质、有机酸、和可生物降解聚合物应当溶解于该有机溶剂。就悬浮液而言，聚乙二醇修饰蛋白质、有机酸、和可生物降解聚合物中的至少一个不应完全地溶解于该有机溶剂。有机溶剂的例子包括：N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、丙二醇、苯甲酸乙酯、苯甲酸苄酯、三乙酸甘油酯、PEG 400、及其混合物。该组合物可排除任何有机溶剂或有机溶剂的组。本发明的实施例可包括在含有有机溶剂的溶液中制备含有可生物降解聚合物的组合物的方法。
图5示出了制备可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法500。方法500可包括提供蛋白质-PEG偶联物502。方法500也可包括将可生物降解聚合物、蛋白质-PEG偶联物、疏水性有机酸、和有机溶剂在混合物中加以混合504。蛋白质-PEG偶联物中可以没有蛋白质-PEG偶联物盐。蛋白质-PEG偶联物可以是胰高血糖素样肽-1-PEG偶联物。混合可包括将第二蛋白质-PEG偶联物(可以是胰岛素-PEG偶联物)在该混合物中加以混合。
此外，方法500可包括形成蛋白质-PEG偶联物盐506。该蛋白质-PEG偶联物盐可包含蛋白质-PEG偶联物和疏水性有机酸的阴离子。此偶联物盐可与将各成分溶解于有机溶剂同时地形成，而不是提供已形成的盐再将该盐溶解于溶剂。此外，方法500可包括将混合物搅拌而形成溶液或悬浮液508。在搅拌后，溶液可以是澄清的溶液。蛋白质-PEG偶联物、可生物降解聚合物、疏水性有机酸、和有机溶剂可以是本文中所描述的任何有机溶剂。各成分和各步骤中可以没有水。
图6示出了制备可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法600。方法600可包括将可生物降解聚合物溶解于有机溶剂而形成混合物602。方法600可排除将蛋白质-PEG偶联物盐溶解于有机溶剂。方法600还可包括将蛋白质-PEG偶联物和疏水性有机酸添加到该混合物中604。此外，方法600也可利用疏水性有机酸使在蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化606。该质子化可形成具有疏水性阴离子的蛋白质-PEG偶联物盐。此外，方法600可包括将混合物加以搅拌而形成溶液或悬浮液608。在搅拌后，溶液可以是澄清溶液。蛋白质-PEG偶联物、可生物降解聚合物、疏水性有机酸、和有机溶剂可以是本文中所描述的任何有机溶剂。各成分和各步骤中可以没有水。
由方法500、方法600、或类似方法所制备的溶液可形成溶液。可将该溶液注射入个体中。当该溶液与水接触时，该溶液可形成固体贮库。该贮库可逐渐地释放出蛋白质或其他医学活性剂。
实施例1
GLP-1C-末端半胱氨酸突变蛋白(GLP-1[7-36]外加在位置37的附加的半胱氨酸)以融合的形式被克隆到较大的多肽，所述较大的多肽含有在GLP-1与其融合伴侣之间的自裂解自体蛋白水解序列。利用IPTG诱导系统，在T7聚合酶的控制下，将该融合蛋白质表达于大肠杆菌中。
实施例2
可在变性条件下从细胞裂解液中分离出GLP-1融合蛋白质，复性，酶切(自我蛋白酶解)，利用阳离子层析进一步纯化。用于确认肽特征的特征测定包括反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、和质谱法。将市场上了买到的GLP-1的合成半胱氨酸突变蛋白质用作这些测定的对照。
实施例3
通过以下工艺，用5kDa或10kDa半胱氨酸反应性马来酰亚胺-PEG对GLP-1半胱氨酸突变蛋白质(通过重组体或者合成化学工艺而制备)进行聚乙二醇修饰。首先，以1-5mg/mL的浓度将该肽溶解于20mM磷酸钠缓冲液，pH7.5，添加相等摩尔量的马来酰亚胺PEG试剂。使该反应继续一夜。利用阳离子交换层析(SP-HPSepharose)，用10mM(pH 3.5)乙酸钠的平衡缓冲液和0.02％碳酸氢铵的梯度洗脱缓冲液，对聚乙二醇修饰GLP-1肽进行纯化。将含有产品的部分汇集，用0.02％碳酸氢铵进行透析，冷冻干燥。利用紫外光谱法或者利用考马斯亮蓝法(Bradford蛋白测定法)测定经纯化聚乙二醇修饰肽的浓度。在聚乙二醇修饰之后所执行的另外的分析测定包括：高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC)分析、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、质谱分析、N-末端分析、和内毒素检测。另外，对20kDa的较大PEG进行了测试。也可对甚至更大的PEG(例如，40kDa支化的聚乙二醇)进行测试。
实施例4
通过以下工艺，制备N-末端PEG-GLP-1。首先，在pH 4.5下将30mg的GLP-1溶解于20mM乙酸钠，达到1至5mg/mL的GLP-1浓度。然后，添加55mg的5-kDa丙醛PEG，接着添加2mg的氰基硼氢化钠。使反应在室温下继续一夜。在16小时后，利用阳离子交换层析(SP-HP琼脂糖凝胶)将PEG-GLP-1纯化。
实施例5
在T7聚合酶的控制下，将hGH亚克隆于大肠杆菌IPTG诱导系统中。使细胞生长到OD600nm＝0.5，添加1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)以便诱导表达。将经诱导的培养物保温一夜达约16小时。通过离心使细胞成为球团并且在-20℃下存放。
将细胞团块解冻，悬浮于裂解液(1mM EDTA、150mM NaCl、50mM Tris、1％TritonX-100，pH 7.5)中，利用经过微射流机的三次通过而均质化。通过离心将不溶解的物质加以回收，悬浮于盐缓冲液(500mM NaCl、50mM Tris，pH 7.5)中，再次通过离心而收集。将不溶解的团块(包涵体)在-20℃下存放。
将一部分的不溶解团块(约15mg的hGH)解冻，溶解于10mL的8M尿素、10mM半胱氨酸、20mM BisTris(二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷)，在室温下搅拌60分钟，然后稀释入100mL的20mM Tris、15％甘油(pH 8.5)。将复性的混合物保持在4℃达1天，离心，装填到用20mM BisTris、pH 7.0(缓冲液A)平衡的5mL Q-琼脂糖凝胶XL柱上。利用pH/盐梯度(0-100％)，用缓冲液B(50mM NaCl、20mM BisTris，pH 5)，将结合的蛋白质加以洗脱。利用RP-HPLC分析对各柱洗脱部分进行分析，将含有复性hGH的层析部分汇集并且在-20℃下存放。
实施例6
通过以下工艺，对复性的、纯化的hGH进行N-末端聚乙二醇修饰。首先，将30mg的hGH溶解于20mM乙酸钠(pH4.5)，达到5mg/mL的hGH浓度。然后，添加40mg的10kDa丙醛PEG，接着添加8mg的氰基硼氢化钠。使反应在室温下继续一夜。在16小时后，利用5mL Q-琼脂糖凝胶HiTrap柱对PEG-hGH进行纯化。
实施例7
通过以下工艺，制备含有疏水性反荷离子的GLP-1-加载PLGA微球。首先，将30mg的5kDa PEG-GLP-1溶解于2mL的二氯甲烷。然后，添加50L的双羟萘酸溶液(50mg/mL，溶解于二甲基甲酰胺[DMF])。然后，将170mg的PLGA 502添加到肽溶液中，将该混合物涡旋混合直到澄清。然后，添加5mL的乳液稳定剂(1％聚乙烯醇[PVA])，立即用Genie涡旋混合器将该混合物以最大速度进行涡旋混合达7-8秒。在此时，将该乳液迅速地添加到100mL的0.3％PVA中，同时快速地搅拌。在10分钟后，添加150mL的2％异丙醇，将该悬浮液搅拌3-12小时从而允许溶剂蒸发和微球硬化。通过沉降将所形成的微球加以分离，用200mL纯化水清洗三次，再进行冷冻干燥。将不同的PLGA聚合物用于制备包含GLP-1和双羟萘酸的微球的每周制剂(例如，PLGA 502)或每月制剂(例如，PLGA 753)。
实施例8
药物的确认及微球的疏水性离子加载是通过首先将微球溶解于乙腈，接着通过用水稀释使聚合物沉淀而完成。利用RP-HPLC对所形成的上清夜进行分析。该分析表明含有双羟萘酸的PEG-GLP-1加载微球是利用用于PEG-GLP-1的在2％至18％范围内的药物加载及大约0.3％至0.5％的双羟萘酸而制备。RP-HPLC的结果确认双羟萘酸被并入微球中。
实施例9
利用贝克曼颗粒分析仪来测量粒径。这些颗粒具有在20和45μm之间的平均直径，这是可以用27号注射器方便地进行皮下给药的范围。利用光学显微镜检查的颗粒显示是具有极小表面伪像或夹杂的圆滑球体。这些颗粒也具有比含有医学活性剂的一些常规颗粒更少的表面伪像和夹杂。图7A示出了用含有双羟萘酸的PEG-GLP-1加载的PLGA 502微球的光学显微镜图像。图7A中的颗粒具有16μm的D10、33μm的D50、和50μm的D90。图7B示出了用PEG-胰岛素和PEG-GLP-1和双羟萘酸的预混物所加载的PLGA 502微球的光学显微镜图像。图7B中的颗粒具有18μm的D10、30μm的D50、和42μm的D90。所测量的粒径显示在注射器直径附近的紧密分布。
实施例10
就初期突释研究而言，用170mg的各种PLGA聚合物、30mg的PEG-GLP-1、和50L的双羟萘酸溶液(50mg/mL，溶解于二甲基甲酰胺[DMF])制备微球。另外，在有和没有50L DMF的情况下，用PLGA、PEG-GLP-1制备对照微球。在冷冻干燥后，将微球悬浮于0.4％PVA加0.05％叠氮化钠，在烤叉样混合下在37℃下进行保温。在24小时后，将悬浮液离心，利用RP-HPLC用基于标准曲线而定量的聚乙二醇修饰肽的释放量对上清夜进行分析。表1示出了最初存在于微球中的总聚乙二醇修饰肽的百分率。在治疗中，较低的初期突释百分率通常会是所期望的。基于表1中的数据，双羟萘酸使PEG-GLP-1从利用具有大约12-18kDa分子量范围的PLGA聚合物(PLGA 502和PLGA 752)所制备微球中的初期突释最小化。就含有PLGA 503的微球而言，双羟萘酸增加突释。表1也表明突释量的变化有可能是双羟萘酸而不是DMF溶剂所造成的结果。
表1.双羟萘酸对用不同
PLGA所制备微球的突释百分率的影响
PLGA 无添加剂 双羟萘酸+DMF DMF
502 24.5 1.2 15.4
503 0 8.5 0
752 24 4.6 18.2
753 0 0 0
实施例11
就持续释放研究而言，用170mg的各种PLGA聚合物、30mg的PEG-GLP-1、和50L的双羟萘酸溶液(50mg/mL，溶解于二甲基甲酰胺[DMF])制备微球。另外，在有和没有50L DMF的情况下，用PLGA、PEG-GLP-1制备对照的微球。在冷冻干燥后，将微球悬浮于0.4％PVA和0.05％叠氮化钠，在烤叉样混合下在37℃下保温。在特定的时间点后，将悬浮液离心，利用RP-HPLC用基于标准曲线而定量的聚乙二醇修饰肽释放量对上清夜进行分析。图8和图9示出了针对微球的这些持续释放研究的结果的图表。这两个附图中以最初存在于微球中的总聚乙二醇修饰肽的百分率的形式示出了释放值。图8和图9表明双羟萘酸使PEG-GLP-1的初期释放最小化，但对于最终释放特性具有较小的影响。相反，全部释放的定时主要是取决于PLGA聚合物的疏水性。PLGA 502具有50:50的乙交酯与丙交酯比例，PLGA 752具有75:25的乙交酯与丙交酯比例。较高的乙交酯与丙交酯比例形成更具有疏水性的PLGA聚合物。因此，与PLGA 502相比，PLGA 752用更长的时间释放PEG-GLP-1。
实施例12
执行了Biacore(GE Healthcare公司)研究来测量聚乙二醇修饰GLP-1化合物对于GLP-1受体的体外结合亲和力。利用共价键将GLP-1受体固定到生物传感器表面，将聚乙二醇修饰GLP-1化合物或GLP-1注射在该表面的上方。就5kDa的PEG-GLP-1(Cys类似物)而言，GLP-1受体结合的平衡解离常数(KD)为1.6M，就未修饰的GLP-1而言KD为1.0M。N-末端5kDaPEG-GLP-1的平衡常数可以不被确定，有可能是由于在受体与N-末端聚乙二醇修饰肽之间的极弱的相互作用所造成。使PEG聚合物结合到C-末端可以不显著地影响GLP-1的比活度，而使PEG聚合物结合到N-末端会阻碍受体结合。
实施例13
在基于细胞的GLP-1受体结合测定中使用CHO-K1/GLP1/Gα15测量聚乙二醇修饰GLP-1偶联物的体外生物活性，并且监测细胞内钙动员的GLP-1诱导的浓度依赖性刺激。在用GLP-1受体激动剂进行刺激之前，用Calcium-4加载细胞。利用多功能酶标仪(FlexStation)测量细胞内钙变化。用GLP-1的累积剂量(5倍稀释)的对数标绘相对荧光单位(RFU)。表2示出了EC50(达到50％的最高活性水平的浓度)。较低的EC50表明较高的活性。与实施例12的Biacore数据一致，C-末端聚乙二醇修饰的GLP-1与未修饰的GLP-1肽相比显示接近全部的活性。用于C-末端聚乙二醇修饰GLP-1的5kDa PEG似乎并不显著地影响活性。与C-末端聚乙二醇修饰GLP-1相比，N-末端聚乙二醇修饰GLP-1肽的比活度显著地降低。未观察到将2kDa PEG而不是5kDa PEG使用于N-末端聚乙二醇修饰GLP-1显著地影响活性。
表2.GLP-1受体结合数据
化合物 EC50(M)
GLP-1(7-36) 3.80×10-7
5kDa的PEG-Cys(37)-GLP-1 3.36×10-7
5kDa的PEG-N-末端-GLP-1 1.3×10-5
2kDa的PEG-N-末端-GLP-1 3.41×10-5
实施例14
利用油/水单乳液溶剂萃取/蒸发工艺，制备含有PEG-GLP-1、PEG-胰岛素、和双羟萘酸的双肽加载微球。油相是由溶解于2mL二氯甲烷的170mg的PLGA聚合物、10mg的PEG-胰岛素、20mg的PEG-GLP-1、和2.5mg的双羟萘酸(来自溶解于DMF的50mg/mL双羟萘酸储备溶液)所组成。通过与5mL的1％w/v PVA涡旋混合而使油相乳化，在300rpm搅拌下将初始乳液添加到100mL的0.3％PVA中。然后，在大约10分钟后添加150mL的2％异丙醇(IPA)，将悬浮液搅拌以促进溶剂蒸发。在3小时后，将硬化的微球用200mL纯化水清洗三次并且冷冻干燥。
实施例15
在20天的研究中，使用Sprague Dawley雄性大鼠执行药代动力学研究。给大鼠(每组6只)各自给予PEG-GLP-1加载微球(MS)或者双加载PEG-GLP-1和PEG-胰岛素微球(预混物)的皮下注射。PEG-GLP-1MS和预混物两者均含有双羟萘酸和PLGA 502。另一个对照包括安慰剂组，该安慰剂组只是稀释剂(羧甲基纤维素钠[1％]、D-甘露醇[5％]和聚山梨醇酯20[0.1％])。体内释放曲线是通过在预定的时间点收集血浆样品，接着对样品进行ELISA分析(EM Millipore Anti-GLP-1套件)而确定。图10和图11示出了在微球给药之后在大鼠血浆样品中的GLP-1或胰岛素的药代动力学分析。在这两种情况下，聚乙二醇修饰肽是以在大约第17天出现峰值浓度的方式而体内释放。未观察到GLP-1释放特性由于包含PEG-胰岛素而受到显著地影响。该预混合微球的胰岛素释放出现在与GLP-1几乎相同的时间。因此，观察到预混合微球在与非预混合微球几乎相同的时间释放医学活性剂。
实施例16
利用o/w单乳液溶剂萃取/蒸发工艺，制备含有恩夫韦肽和双羟萘酸的PLGA微球。恩夫韦肽未经聚乙二醇修饰。油相是由170mg的PLGA 502、30mg的恩夫韦肽、8mg的双羟萘酸和2mL的二氯甲烷所组成。利用涡旋混合用5mL的1％w/v PVA使油相乳化，在以300rpm搅拌下将该初始乳液添加到100mL的0.3％PVA中。然后，在大约10分钟后添加150mL的2％异丙醇，将该悬浮液搅拌以促进微球硬化。在3小时后，将硬化的微球过滤，用大体积的双蒸馏水清晰，冷冻干燥。在此实施例中，除了不把双羟萘酸添加到该混合物以外，其余以如上所述的方式制备第二批的微球。针对用所存在的双羟萘酸所制备的恩夫韦肽微球的粒径分析显示：相对于没有双羟萘酸的恩夫韦肽微球(平均粒径：32.75μm；S.D：34.07μm)，这些微球具有更大的均匀性(平均粒径：28μm；S.D：9.5μm)。
实施例17
制备含有PLGA、PEG-GLP-1、双羟萘酸、和N-甲基吡咯烷酮(NMP)的原位释放制剂。首先，将340mg的PLGA(PLGA 503、PLGA 752、或PLGA 753)溶解于1mL的N-甲基吡咯烷酮(NMP)。然后，添加30mg的PEG-GLP-1以及2.5mg的双羟萘酸(来自溶解于DMSO的200mg/mL的储备溶液)。使混合物温和地旋转直到澄清。就释放而言，将各溶液装载入透析盒(Slide-A-lyzer，截留分子量为3.5kDa)内并且悬浮于装有磷酸盐缓冲盐水和0.05％聚山梨醇酯的900mL烧杯中。在室温下将该透析缓冲液温和地搅拌一夜。在室温下在16小时后，已在盒内部形成贮库并且在顶部有一层液体。将液体与固体分离，利用RP-HPLC分析测定PEG-GLP-1含量。单独贮库的计算的突释是：PLGA 503聚合物为11％、PLGA 752聚合物为62％、PLGA753聚合物为40％。观察到突释受到PLGA聚合物的疏水性的影响。
实施例18
制备含有PLGA、PEG-GLP-1、双羟萘酸、和各FDA许可溶剂的混合物的原位释放制剂。首先，将340mg的PLGA 752溶解于1mL的50％N-甲基吡咯烷酮(NMP)与50％苯甲酸苄酯的混合物、或者50％DMSO与50％苯甲酸苄酯的混合物。然后，添加30mg的PEG-GLP-1以及2.5mg的双羟萘酸(来自溶解于DMSO的200mg/mL储备乳液)。使该混合物温和地旋转直到澄清。就释放而言，将各溶液装载入透析盒(Slide-A-lyzer，截留分子量为3.5kDa)内并且悬浮于装有磷酸盐缓冲盐水和0.05％聚山梨醇酯的900mL烧杯中。在室温下在16小时后，在盒的内部已形成贮库并且在顶部有一层液体。将液体与固体分离，通过RP-HPLC分析测定PEG-GLP-1含量。DMSO/苯甲酸苄酯混合物的计算的突释为2.6％，相对而言，基于NMP/苯甲酸苄酯的原位释放制剂的计算的突释为0.2％。DMSO的极性大于NMP。可基于PLGA的疏水性和浓度、溶剂的水混溶性、和/或双羟萘酸的添加来调整期望的释放速率(每周给药相对于每月给药)。
实施例19
使用人生长激素、胰岛素、恩夫韦肽、甲状旁腺激素、PTH的片段、奥曲肽、或者代替GLP-1、胰岛素和/或恩夫韦肽的其他医学活性剂，重复实施例1-实施例18。各实施例也可包括使用用于实施例1-实施例19中的任意组合物的有机溶剂来制备微球和组合物。与常规的组合物和方法相比，这些实施例显示优越的浓度分布和其他特性。
在本文的描述中，为了解释的目的，已陈述了许多细节从而提供对本发明各种实施例的理解。然而，对于本领域技术人员而言将显而易见的是，某些实施例可在没有部分的这些细节或者具有其他细节的情况下实施。
已描述了若干实施例，将被本领域技术人员认可的是，在不背离本发明的精神的前提下可采用各种修改、替代的结构、和等同物。此外，对于一些众所周知的工艺和元件并未加以描述，从容避免不必要地使本发明难以理解。此外，任何具体实施例的细节可以不一直存在于该实施例的变型，或者可添加到其他实施例中。
在提供一序列的值的情况下，应理解的是在，也具体地包括在该范围的上限与下限之间的各介于中间的值(到下限的十分之一的单位)，除非上下文中清楚地指出。包括在任何所述值或在所述范围内的介于中间的值与任何其他所述值或在所述范围内的介于中间的值之间的各较小范围。这些较小范围的上限和下限可独立地被包含在该范围内或被排除在该范围外，其中任一限值、两个限值均不或者两个限值均被包含在该较小范围内的各范围也被包含在本发明内，受制于在所述范围内的任何被具体排除的限值。在所述范围包括一个或两个限值的情况下，也包含排除任一个或两个的这些所包含限值的范围。
在本文中和所附权利要求中所使用的单数形式“一个”、“一种”、和“该”包括复数所指对象，除非上下文中清楚地指出。因此，例如，对“一种方法”的叙述包括多个的这种方法，并且对“该蛋白质”的叙述包括对于本领域技术人员而言为已知的一种或多种蛋白质及其等同物等等的叙述。为了清楚和理解的目的，现已详细描述了本发明。然而，应当理解的是，在所附权利要求的范围内可作出某些变更和修改。

Claims (40)

1.一种微球，包含：
可生物降解聚合物；和
蛋白质混合物，选自由蛋白质-聚乙二醇偶联物与有机酸的疏水性阴离子、蛋白质与所述有机酸的疏水性阴离子、及其组合所组成的组。
2.如权利要求1所述的微球，其中所述蛋白质或所述蛋白质-聚乙二醇偶联物中的蛋白质包括人生长激素。
3.如权利要求1所述的微球，其中所述蛋白质或者所述蛋白质-聚乙二醇偶联物中的蛋白质包括胰高血糖素样肽-1。
4.如权利要求3所述的微球，还包含胰岛素-聚乙二醇偶联物。
5.如权利要求1所述的微球，其中所述蛋白质或者所述蛋白质-聚乙二醇偶联物中的蛋白质选自由胰岛素、甲状旁腺激素、甲状旁腺激素的片段、恩夫韦肽、和奥曲肽所组成的组。
6.如权利要求1所述的微球，其中所述有机酸包括双羟萘酸、多库酯氢、糠酸、或者其混合物。
7.如权利要求1所述的微球，其中：
所述蛋白质混合物包含所述有机酸的疏水性阴离子，并且
所述有机酸的疏水性阴离子包括脂肪酸阴离子、磷脂阴离子、聚苯乙烯磺酸盐阴离子、或者其混合物。
8.如权利要求7所述的微球，其中所述疏水性阴离子包括所述磷脂阴离子，并且所述磷脂是磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷酰胆碱、或者其混合物。
9.如权利要求1所述的微球，其中：
所述蛋白质混合物包含所述蛋白质-聚乙二醇偶联物，并且
所述蛋白质-聚乙二醇偶联物中的聚乙二醇包括甲氧基聚乙二醇乙醛。
10.如权利要求1所述的微球，其中：
所述蛋白质混合物包含所述有机酸的疏水性阴离子，并且
所述有机酸包括双羟萘酸，并且所述疏水性阴离子包括双羟萘酸盐阴离子。
11.如权利要求1所述的微球，其中：
所述蛋白质混合物包含所述蛋白质-聚乙二醇偶联物和所述有机酸的疏水性阴离子，并且
所述有机酸的疏水性阴离子与所述蛋白质-聚乙二醇偶联物的摩尔比是在1:1至11:1的范围内。
12.如权利要求1所述的微球，其中：
所述蛋白质混合物包含所述蛋白质-聚乙二醇偶联物，并且
所述蛋白质-聚乙二醇偶联物包括单聚乙二醇修饰的偶联物。
13.如权利要求1所述的微球，其中所述可生物降解聚合物选自由聚乳酸、聚乙交酯、(d,l-乙交酯-丙交酯)共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酯与聚醚的共聚物、和聚乳酸与聚乙二醇的共聚物所组成的组。
14.如权利要求1所述的微球，其中所述可生物降解聚合物包括(d,l-乙交酯-丙交酯)共聚物。
15.如权利要求1所述的微球，其中所述可生物降解聚合物具有7,000Da至17,000Da的分子量。
16.一种制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物盐的方法，所述方法包括：
提供包含蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液；
使聚乙二醇与所述蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物；和
利用疏水性有机酸使所述蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化，其中所述质子化形成具有增加所述蛋白质-PEG偶联物盐的疏水性的疏水性阴离子的所述蛋白质-PEG偶联物盐。
17.如权利要求16所述的方法，其中使所述聚乙二醇与所述蛋白质反应包括：
在所述聚乙二醇与所述蛋白质之间形成胺键、酰胺键、酯键、或二硫键；或者
使巯基反应性聚乙二醇结合到所述蛋白质的半胱氨酸残基。
18.一种制备具有增加的疏水性的蛋白质-PEG偶联物的方法，所述方法包括：
提供包含蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液；和
使聚乙二醇与所述蛋白质反应而形成所述蛋白质-PEG偶联物，其中所述蛋白质-PEG偶联物具有高于所述蛋白质的疏水性。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述方法不包括利用疏水性有机酸使所述蛋白质上的氨基质子化。
20.一种制备含有蛋白质-PEG偶联物盐的控释微球的方法，所述方法包括：
提供包含蛋白质和pH缓冲剂的蛋白质水溶液；
使聚乙二醇与所述蛋白质反应而形成蛋白质-PEG偶联物；
在有机相中利用疏水性有机酸使所述蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化，其中所述质子化形成具有疏水性阴离子的所述蛋白质-PEG偶联物盐；
将在有机溶剂中的所述蛋白质-PEG偶联物盐与可生物降解聚合物加以混合而形成混合物，其中所述蛋白质-PEG偶联物盐的疏水性阴离子增加所述蛋白质-PEG偶联物盐在所述有机溶剂中的溶解度；
使所述蛋白质-PEG偶联物盐与所述可生物降解聚合物的混合物在水溶液中乳化，而形成乳化的混合物；和
使所述蛋白质-PEG偶联物盐与所述可生物降解聚合物的乳化的混合物硬化成所述控释微球。
21.一种组合物，包含：
可生物降解聚合物；
有机溶剂；和
蛋白质混合物，选自由蛋白质-聚乙二醇偶联物与有机酸的疏水性阴离子、蛋白质与所述有机酸的疏水性阴离子、及其组合所组成的组，其中所述组合物是以溶液或悬浮液的形式而提供。
22.如权利要求21所述的组合物，其中所述组合物是以溶液的形式而提供。
23.如权利要求21所述的组合物，其中所述组合物是以悬浮液的形式而提供。
24.如权利要求21所述的组合物，其中所述蛋白质或者所述蛋白质-聚乙二醇偶联物中的蛋白质选自由人生长激素、胰高血糖素样肽-1、胰岛素、甲状旁腺激素、甲状旁腺激素的片段、恩夫韦肽、和奥曲肽所组成的组。
25.如权利要求21所述的组合物，其中所述有机酸包括双羟萘酸、多库酯氢、糠酸、或者其混合物。
26.如权利要求21所述的组合物，其中：
所述蛋白质混合物包含蛋白质和有机酸的疏水性阴离子，并且
所述有机酸的疏水性阴离子包括脂肪酸阴离子、磷脂阴离子、聚苯乙烯磺酸盐阴离子、或者其混合物。
27.如权利要求21所述的组合物，其中所述有机溶剂包括N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、丙二醇、苯甲酸乙酯、苯甲酸苄酯、三乙酸甘油酯、PEG 400、或者其混合物。
28.如权利要求21所述的组合物，其中所述可生物降解聚合物选自由聚乳酸、聚乙交酯、(d,l-乙交酯-丙交酯)共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酯与聚醚的共聚物、和聚乳酸与聚乙二醇的共聚物所组成的组。
29.如权利要求21所述的组合物，其中所述可生物降解聚合物包括(d,l-乙交酯-丙交酯)共聚物。
30.如权利要求21所述的组合物，其中所述可生物降解聚合物具有24,000Da至38,000Da的分子量。
31.如权利要求21所述的组合物，其中所述可生物降解聚合物包含约50％以下的丙交酯和约50％以上的乙交酯。
32.一种制备含有可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法，所述方法包括：
提供蛋白质-PEG偶联物，其中所述蛋白质-PEG偶联物中没有所述蛋白质-PEG偶联物盐；
将所述可生物降解聚合物、所述蛋白质-PEG偶联物、疏水性有机酸、和有机溶剂在混合物中加以混合；
形成包含所述蛋白质-PEG偶联物和所述疏水性有机酸的阴离子的所述蛋白质-PEG偶联物盐；
将所述混合物加以搅拌而形成所述溶液或所述悬浮液。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述有机溶剂包括N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、丙二醇、苯甲酸乙酯、苯甲酸苄酯、三乙酸甘油酯、PEG 400、或者其混合物。
34.如权利要求32所述的方法，其中：
所述蛋白质-PEG偶联物是第一蛋白质-PEG偶联物，
所述蛋白质-PEG偶联物包括胰高血糖素样肽-1-PEG偶联物，
所述混合还包括将第二蛋白质-PEG偶联物与所述可生物降解聚合物、所述蛋白质-PEG偶联物、所述疏水性有机酸、和所述有机溶剂在混合物中加以混合，并且
所述第二蛋白质-PEG偶联物包括胰岛素-PEG偶联物。
35.一种制备含有可生物降解聚合物和蛋白质-PEG偶联物盐的溶液或悬浮液的方法，所述方法包括：
将所述可生物降解聚合物溶解于有机溶剂而形成混合物；
将蛋白质-PEG偶联物和疏水性有机酸添加到所述混合物中；
利用所述疏水性有机酸使在所述蛋白质-PEG偶联物上的氨基质子化，其中质子化形成具有疏水性阴离子的所述蛋白质-PEG偶联物盐；
将所述混合物加以搅拌而形成所述溶液或所述悬浮液。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述方法不包括将所述蛋白质-PEG偶联物盐溶解于所述有机溶剂。
37.如权利要求35所述的方法，其中所述蛋白质-PEG偶联物包含选自由人生长激素、胰高血糖素样肽-1、胰岛素、甲状旁腺激素、甲状旁腺激素的片段、恩夫韦肽、和奥曲肽所组成的组的蛋白质。
38.如权利要求35所述的方法，其中所述疏水性有机酸包括双羟萘酸、多库酯氢、糠酸、或者其混合物。
39.如权利要求35所述的方法，其中所述有机溶剂包括N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、丙二醇、苯甲酸乙酯、苯甲酸苄酯、三乙酸甘油酯、PEG 400、或者其混合物。
40.如权利要求35所述的方法，其中所述蛋白质-PEG偶联物包含：
在聚乙二醇与蛋白质之间的酰胺键、酯键、或二硫键；或者
结合到所述蛋白质的半胱氨酸残基的巯基反应性聚乙二醇。
CN201580065730.2A 2014-12-02 2015-12-01 具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物 Pending CN106999443A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462086294P 2014-12-02 2014-12-02
US62/086,294 2014-12-02
US14/954,591 2015-11-30
US14/954,701 US20160151511A1 (en) 2014-12-02 2015-11-30 Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity
US14/954,591 US10046058B2 (en) 2014-12-02 2015-11-30 Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates
US14/954,701 2015-11-30
PCT/US2015/063102 WO2016089818A1 (en) 2014-12-02 2015-12-01 Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106999443A true CN106999443A (zh) 2017-08-01

Family

ID=56078492

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580065730.2A Pending CN106999443A (zh) 2014-12-02 2015-12-01 具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物

Country Status (11)

Country Link
US (3) US10046058B2 (zh)
EP (2) EP3695831A1 (zh)
JP (1) JP2017536387A (zh)
KR (1) KR20170086049A (zh)
CN (1) CN106999443A (zh)
AU (1) AU2015355180A1 (zh)
BR (1) BR112017011531A2 (zh)
CA (1) CA2966207A1 (zh)
MX (1) MX2017006594A (zh)
RU (1) RU2712644C2 (zh)
WO (1) WO2016089818A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113905797A (zh) * 2019-06-14 2022-01-07 株式会社大赛璐 胺的基于液相色谱的分离方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9616109B2 (en) 2014-10-22 2017-04-11 Extend Biosciences, Inc. Insulin vitamin D conjugates
US9585934B2 (en) 2014-10-22 2017-03-07 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin D conjugates
US10046058B2 (en) 2014-12-02 2018-08-14 Rezolute, Inc. Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates
US20180271792A1 (en) * 2017-03-23 2018-09-27 Rezolute, Inc. Oral delivery of physiologically active substances
JP2021511785A (ja) 2018-01-19 2021-05-13 ペプジーン インコーポレーテッドＰｅｐｇｅｎｅ Ｉｎｃ． 組換えポリペプチド生産用ｎ末端融合パートナーおよびこれを用いた組換えポリペプチドの生産方法
CN108465104A (zh) * 2018-03-07 2018-08-31 佛山实瑞先导材料研究院（普通合伙） 一种生长激素控释包衣及其制备方法
CN109493923B (zh) * 2018-12-18 2021-07-30 赣南师范大学 计算化合物在水和任意溶剂中分配常数的方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1507357A (zh) * 2000-10-31 2004-06-23 PRҩƷ���޹�˾ 提高生物活性分子传递的方法和组合物
CN1777440A (zh) * 2003-04-11 2006-05-24 Pr药品有限公司 位点特异性蛋白质偶联物的制备方法
CN101511380A (zh) * 2006-07-11 2009-08-19 Qps有限公司 用于持续释放递送肽的药物组合物
CN101801360A (zh) * 2007-04-17 2010-08-11 巴克斯特国际公司 球形胰岛素微粒的肺部给药
US20120208258A1 (en) * 2009-10-29 2012-08-16 Korea Advanced Institute Of Science Conjugate of catechol-modified polyethylene glycol with protein or peptide and preparation method therof
CN102935069A (zh) * 2003-07-15 2013-02-20 Pr药品有限公司 控释组合物的制备方法
CN103596595A (zh) * 2011-06-02 2014-02-19 韩美科学株式会社 用于治疗糖尿病的包括长效胰岛素缀合物和长效促胰岛素肽缀合物的组合物

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US362777A (en) * 1887-05-10 Two-wheeled vehicle
US114835A (en) * 1871-05-16 Improvement in scroll-sawing machines
US895013A (en) * 1907-07-13 1908-08-04 Charles F Hanington Transom-operating mechanism.
US2189363A (en) * 1938-04-11 1940-02-06 Kalous Mieczyslaw Joseph Process and apparatus for working up nitrous gases to nitric acid
DE2433883C2 (de) * 1973-07-20 1986-03-27 Research Corp., New York, N.Y. Verwendung von physiologisch aktiven Polypeptiden
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
GB2209937B (en) * 1987-09-21 1991-07-03 Depiopharm S A Water insoluble polypeptides
CH683149A5 (fr) * 1991-07-22 1994-01-31 Debio Rech Pharma Sa Procédé pour la préparation de microsphères en matériau polymère biodégradable.
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US6191105B1 (en) 1993-05-10 2001-02-20 Protein Delivery, Inc. Hydrophilic and lipophilic balanced microemulsion formulations of free-form and/or conjugation-stabilized therapeutic agents such as insulin
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US6620413B1 (en) 1995-12-27 2003-09-16 Genentech, Inc. OB protein-polymer chimeras
US6753165B1 (en) 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
WO1999029336A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 Eli Lilly And Company Glp-1 formulations
US6362254B2 (en) 1998-03-12 2002-03-26 Shearwater Corporation Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
DE19932157A1 (de) * 1999-07-13 2001-01-18 Pharmasol Gmbh Verfahren zur schonenden Herstellung von hochfeinen Mikropartikeln und Nanopartikeln
US6323311B1 (en) 1999-09-22 2001-11-27 University Of Utah Research Foundation Synthesis of insulin derivatives
JP2005513081A (ja) 2000-12-13 2005-05-12 パーデュー・リサーチ・ファウンデイション 溶媒交換による薬剤のマイクロカプセル化
US7053150B2 (en) 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
TW593427B (en) 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
CA2481979A1 (en) 2002-04-11 2003-10-16 Yasushi Taguchi Peptides chemically modified with polyethylene glycol
WO2004013164A1 (en) 2002-07-24 2004-02-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Pegylated t20 polypeptide
JP2006501820A (ja) 2002-09-06 2006-01-19 バイエル・フアーマシユーチカルズ・コーポレーシヨン 修飾ｇｌｐ−１受容体アゴニストおよびそれらの薬理学的使用法
WO2004028568A1 (en) 2002-09-27 2004-04-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugates of insulin-like growth factor binding protein-4 and poly (ethylene glycol)
ATE485331T1 (de) 2003-01-06 2010-11-15 Nektar Therapeutics Thiolselektive wasserlösliche polymerderivate
PT1605897E (pt) * 2003-03-19 2012-09-10 Lilly Co Eli Compostos de glp-1 ligado a polietilenoglicol
PL1635875T3 (pl) 2003-06-26 2009-03-31 Psivida Inc System dostarczania leków poprzez żelowanie w warunkach in-situ
WO2005009357A2 (en) 2003-07-23 2005-02-03 Pr Pharmaceuticals, Inc. Controlled release compositions
KR101135244B1 (ko) 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20080026444A1 (en) 2003-12-24 2008-01-31 Shionogi & Co., Ltd. Process For Producing Protein-Polymer Complex
EP1699920A4 (en) 2003-12-31 2008-05-28 Centocor Inc NEW RECOMBINANT PROTEINS WITH FREE N-TERMINAL THIOL
WO2005067890A2 (en) * 2004-01-13 2005-07-28 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Controlled release cgrp delivery composition for cardiovascular and renal indications
KR20060029770A (ko) 2004-10-04 2006-04-07 주식회사 펙스피어 Ｇｌｐ－１의 선택적 ｐｅｇ 접합체 및 그 제조방법
DE602006017202D1 (de) 2005-05-13 2010-11-11 Lilly Co Eli Pegylierte glp-1-verbindungen
WO2006134173A2 (en) 2005-06-17 2006-12-21 Novo Nordisk Health Care Ag Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine
GB0513852D0 (en) 2005-07-06 2005-08-10 Celltech R&D Ltd Biological products
EP2570133B1 (en) 2005-11-07 2016-03-23 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability
JP5242415B2 (ja) 2006-01-18 2013-07-24 フォアシーエイサー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 高い安定性を持つ薬理組成物
RU2008133381A (ru) 2006-01-18 2010-02-27 Шеринг Корпорейшн (US) Модуляторы каннабиноидного рецептора
CN101495536B (zh) 2006-05-26 2012-03-07 益普生制药股份有限公司 位点特异性聚乙二醇化的方法
ES2542146T3 (es) 2006-07-31 2015-07-31 Novo Nordisk A/S Insulinas extendidas PEGiladas.
WO2008076933A2 (en) 2006-12-14 2008-06-26 Bolder Biotechnology, Inc. Long acting proteins and peptides and methods of making and using the same
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
CA2770149A1 (en) * 2009-08-05 2011-02-10 Pieris Ag Controlled release formulations of lipocalin muteins
WO2011037896A2 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Vybion, Inc. Polypeptide modification
GB0917072D0 (en) 2009-09-29 2009-11-11 Univ Ulster Peptide analogues of glucagon for diabetes therapy
WO2011163473A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility and stability in physiological ph buffers
JP2013543746A (ja) 2010-10-21 2013-12-09 ケーシーアイ ライセンシング インコーポレイテッド デブリドマンハンドツール
WO2012054861A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Nektar Therapeutics Glp-1 polymer conjugates having a releasable linkage
KR101746686B1 (ko) 2010-10-26 2017-06-15 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 글루카곤 유사 펩타이드―２（ｇｌｐ―２）약물 결합체
CN102786590A (zh) 2011-05-19 2012-11-21 江苏豪森药业股份有限公司 分枝型peg修饰的glp-1类似物及其可药用盐
US20120329127A1 (en) 2011-05-27 2012-12-27 Baxter Healthcare S.A. Therapeutic proteins with increased half-life and methods of preparing same
MX2013015168A (es) 2011-06-22 2014-03-31 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonista del receptor de glucagon/glp-1.
US8936784B2 (en) * 2011-10-17 2015-01-20 Poly-Med, Inc. Absorbable in situ gel-forming system, method of making and use thereof
AR094821A1 (es) 2012-07-25 2015-09-02 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada
AU2014318579A1 (en) 2013-09-13 2016-04-14 The California Institute For Biomedical Research Modified therapeutic agents and compositions thereof
EP4212180A1 (en) 2013-12-18 2023-07-19 The Scripps Research Institute Modified therapeutic agents, stapled peptide lipid conjugates, and compositions thereof
US10046058B2 (en) * 2014-12-02 2018-08-14 Rezolute, Inc. Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1507357A (zh) * 2000-10-31 2004-06-23 PRҩƷ���޹�˾ 提高生物活性分子传递的方法和组合物
CN1777440A (zh) * 2003-04-11 2006-05-24 Pr药品有限公司 位点特异性蛋白质偶联物的制备方法
CN102935069A (zh) * 2003-07-15 2013-02-20 Pr药品有限公司 控释组合物的制备方法
CN101511380A (zh) * 2006-07-11 2009-08-19 Qps有限公司 用于持续释放递送肽的药物组合物
CN101801360A (zh) * 2007-04-17 2010-08-11 巴克斯特国际公司 球形胰岛素微粒的肺部给药
US20120208258A1 (en) * 2009-10-29 2012-08-16 Korea Advanced Institute Of Science Conjugate of catechol-modified polyethylene glycol with protein or peptide and preparation method therof
CN103596595A (zh) * 2011-06-02 2014-02-19 韩美科学株式会社 用于治疗糖尿病的包括长效胰岛素缀合物和长效促胰岛素肽缀合物的组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张晟等: "蛋白质、多肽类药物控制释放体系的研究", 《高分子通报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113905797A (zh) * 2019-06-14 2022-01-07 株式会社大赛璐 胺的基于液相色谱的分离方法

Also Published As

Publication number Publication date
RU2017122609A3 (zh) 2019-07-17
MX2017006594A (es) 2017-09-01
US10046058B2 (en) 2018-08-14
EP3695831A1 (en) 2020-08-19
AU2015355180A1 (en) 2017-05-25
US10702611B2 (en) 2020-07-07
BR112017011531A2 (pt) 2018-02-27
EP3226844A1 (en) 2017-10-11
RU2017122609A (ru) 2019-01-09
US20160151510A1 (en) 2016-06-02
EP3226844A4 (en) 2018-06-20
JP2017536387A (ja) 2017-12-07
KR20170086049A (ko) 2017-07-25
CA2966207A1 (en) 2016-06-09
US20160151511A1 (en) 2016-06-02
WO2016089818A1 (en) 2016-06-09
RU2712644C2 (ru) 2020-01-30
US20180318429A1 (en) 2018-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106999443A (zh) 具有增加的疏水性的蛋白质及蛋白质偶联物
CN101573133B (zh) Peg化延长的胰岛素
US11208452B2 (en) Insulins with polar recombinant extensions
Hinds et al. PEGylated insulin in PLGA microparticles. In vivo and in vitro analysis
TWI686403B (zh) 新穎胰島素衍生物及其醫療用途
CN106139123A (zh) 脂质运载蛋白突变蛋白的控制释放制剂
JP2008533100A (ja) Ｐｅｇ化された単鎖インスリン
CN104168911A (zh) 谷氨酸-稳定的胰岛素类似物
US20220275029A1 (en) Compositions and particles for payload delivery
Kim et al. Pharmacokinetics, pharmacodynamics, and efficacy of a novel long-acting human growth hormone: Fc fusion protein
JP6995284B2 (ja) 新規インスリン類似体およびそれらの使用
CN105142660A (zh) N末端截短的胰岛素类似物
KR20180097517A (ko) 매우 안정된 인슐린 유사체의 중합체 용융물 내 캡슐화
US20220073563A1 (en) Carrier protein for improving properties of bioactive protein
US20160058878A1 (en) Process for preparing a composition of pegylated proteins
WO2009021956A2 (en) Rapid acting insulin analogues
Neuhofer Development of lipid based depot formulations using interferon-beta-1b as a model protein
Niloy et al. Injectable systems for long-lasting insulin therapy
Parashar et al. Preparation and Characterization of Polymeric Nanoparticles for Sustained Delivery of Insulin
CN115960246A (zh) 一种重组环状人生长激素-Fc融合蛋白及其应用
CN113527505A (zh) 一种多肽和包含该多肽的药物组合物以及它们的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190703

Address after: American California

Applicant after: Ruizer Lute Co., Ltd.

Address before: American Colorado

Applicant before: Aintree Fabio Co. Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170801

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication