RU2712644C2 - Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью - Google Patents
Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2712644C2 RU2712644C2 RU2017122609A RU2017122609A RU2712644C2 RU 2712644 C2 RU2712644 C2 RU 2712644C2 RU 2017122609 A RU2017122609 A RU 2017122609A RU 2017122609 A RU2017122609 A RU 2017122609A RU 2712644 C2 RU2712644 C2 RU 2712644C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- polyethylene glycol
- conjugate
- mixture
- acid
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 152
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 152
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 239
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 236
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 112
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 98
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 98
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 85
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 75
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 68
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 55
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims abstract description 49
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims abstract description 49
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 47
- WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N pamoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC=3C4=CC=CC=C4C=C(C=3O)C(=O)O)=C(O)C(C(O)=O)=CC2=C1 WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 230000005588 protonation Effects 0.000 claims abstract description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 20
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims abstract description 9
- CTTJWXVQRJUJQW-UHFFFAOYSA-N 2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioic acid Chemical compound CCCCCCCCC(C(O)=O)(C(C(O)=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC CTTJWXVQRJUJQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Polymers OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000002745 poly(ortho ester) Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims abstract 5
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 claims abstract 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 143
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 claims description 53
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 claims description 50
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 claims description 50
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 42
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- -1 organic acid anion Chemical class 0.000 claims description 27
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 26
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 21
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 19
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 19
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 claims description 19
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 18
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 17
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 17
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 claims description 16
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 16
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 16
- PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N enfuvirtide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(C)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N 0.000 claims description 16
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims description 15
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 claims description 15
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 claims description 15
- 229960002062 enfuvirtide Drugs 0.000 claims description 14
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical group CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=CC=C1 MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 claims description 9
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N triacetin Chemical compound CC(=O)OCC(OC(C)=O)COC(C)=O URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 7
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 7
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 claims description 6
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960000878 docusate sodium Drugs 0.000 claims description 5
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 claims description 5
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N Glycolaldehyde Chemical compound OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940018602 docusate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000001087 glyceryl triacetate Substances 0.000 claims description 4
- 235000013773 glyceryl triacetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 4
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002622 triacetin Drugs 0.000 claims description 4
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 3
- HGASFNYMVGEKTF-UHFFFAOYSA-N octan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCCCCCCO HGASFNYMVGEKTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 2
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 claims 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 claims 2
- 229960002796 polystyrene sulfonate Drugs 0.000 claims 2
- 239000011970 polystyrene sulfonate Substances 0.000 claims 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 56
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 27
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 21
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 14
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 12
- VUZPGEIXNYGDJN-UHFFFAOYSA-N 1-nitroethanol Chemical compound CC(O)[N+]([O-])=O VUZPGEIXNYGDJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 7
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 5
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 108700002854 polyethylene glycol(B1)- insulin Proteins 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical compound C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 3
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- QPFMBZIOSGYJDE-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2-tetrachloroethane Chemical compound ClC(Cl)C(Cl)Cl QPFMBZIOSGYJDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UBOXGVDOUJQMTN-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-trichloroethane Chemical compound ClCC(Cl)Cl UBOXGVDOUJQMTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFFLAFLAYFXFSW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1Cl RFFLAFLAYFXFSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 2-Oxohexane Chemical compound CCCCC(C)=O QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFWSICBKRCICMR-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-hexanone Chemical compound CC(C)CCC(C)=O FFWSICBKRCICMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWOLFJPFCHCOCG-UHFFFAOYSA-N Acetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC=C1 KWOLFJPFCHCOCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000701867 Enterobacteria phage T7 Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N Ethylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1 YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XPDWGBQVDMORPB-UHFFFAOYSA-N Fluoroform Chemical compound FC(F)F XPDWGBQVDMORPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 2
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N N-methylaniline Chemical compound CNC1=CC=CC=C1 AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical group CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N Para-Xylene Chemical group CC1=CC=C(C)C=C1 URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QARVLSVVCXYDNA-UHFFFAOYSA-N bromobenzene Chemical compound BrC1=CC=CC=C1 QARVLSVVCXYDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N bromoform Chemical compound BrC(Br)Br DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- LJSQFQKUNVCTIA-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfide Chemical compound CCSCC LJSQFQKUNVCTIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- FKRCODPIKNYEAC-UHFFFAOYSA-N ethyl propionate Chemical compound CCOC(=O)CC FKRCODPIKNYEAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 229940099052 fuzeon Drugs 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N m-xylene Chemical group CC1=CC=CC(C)=C1 IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZIHFWKZFHZASV-UHFFFAOYSA-N methyl formate Chemical compound COC=O TZIHFWKZFHZASV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1 LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MCSAJNNLRCFZED-UHFFFAOYSA-N nitroethane Chemical compound CC[N+]([O-])=O MCSAJNNLRCFZED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- XNLICIUVMPYHGG-UHFFFAOYSA-N pentan-2-one Chemical compound CCCC(C)=O XNLICIUVMPYHGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N pentan-3-one Chemical compound CCC(=O)CC FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N pentyl acetate Chemical compound CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- YKYONYBAUNKHLG-UHFFFAOYSA-N propyl acetate Chemical compound CCCOC(C)=O YKYONYBAUNKHLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- NGJOFQZEYQGZMB-KTKZVXAJSA-N (4S)-5-[[2-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[2-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 NGJOFQZEYQGZMB-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 1
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IYJYRKYSUOTLAE-UHFFFAOYSA-N 1,2-dibromoethanol Chemical compound OC(Br)CBr IYJYRKYSUOTLAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPQOPVIELGIULI-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1 ZPQOPVIELGIULI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VFWCMGCRMGJXDK-UHFFFAOYSA-N 1-chlorobutane Chemical compound CCCCCl VFWCMGCRMGJXDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHUZCPVKBAPSSA-UHFFFAOYSA-N 1-nitrooctan-2-ol Chemical compound CCCCCCC(O)C[N+]([O-])=O UHUZCPVKBAPSSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LTMRRSWNXVJMBA-UHFFFAOYSA-L 2,2-diethylpropanedioate Chemical compound CCC(CC)(C([O-])=O)C([O-])=O LTMRRSWNXVJMBA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FWQHMPRDPBLXJU-UHFFFAOYSA-N 2,3,3-trimethylpentan-2-yloxybenzene Chemical compound CCC(C)(C)C(C)(C)OC1=CC=CC=C1 FWQHMPRDPBLXJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KUFFULVDNCHOFZ-UHFFFAOYSA-N 2,4-xylenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C(C)=C1 KUFFULVDNCHOFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 2-Ethylhexanoic acid Chemical compound CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTTPXKJBFFKCEK-UHFFFAOYSA-N 2-Methyl-4-heptanone Chemical compound CC(C)CC(=O)CC(C)C PTTPXKJBFFKCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZBZQUREHISXFJ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-chloro-5-methyl-3-(trifluoromethyl)pyrazol-1-yl]acetic acid Chemical compound CC1=C(Cl)C(C(F)(F)F)=NN1CC(O)=O IZBZQUREHISXFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQBXSWAWVZHKBZ-UHFFFAOYSA-N 2-butoxyethyl acetate Chemical compound CCCCOCCOC(C)=O NQBXSWAWVZHKBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMNDYUVBFMFKNZ-UHFFFAOYSA-N 2-furoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CO1 SMNDYUVBFMFKNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CRWNQZTZTZWPOF-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-4-phenylpyridine Chemical compound C1=NC(C)=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1 CRWNQZTZTZWPOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HORNXRXVQWOLPJ-UHFFFAOYSA-N 3-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=CC(Cl)=C1 HORNXRXVQWOLPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHOJXDKTYKFBRD-UHFFFAOYSA-N 4-Methyl-3-penten-2-one, 9CI Chemical compound CC(C)=CC(C)=O SHOJXDKTYKFBRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2-pentanol Chemical compound CC(C)CC(C)O WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800003158 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N Diethyl carbonate Chemical compound CCOC(=O)OCC OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 1
- 101800004295 Glucagon-like peptide 1(7-36) Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000617830 Homo sapiens Sterol O-acyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N Perchloroethylene Chemical group ClC(Cl)=C(Cl)Cl CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000020221 Short stature Diseases 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100021993 Sterol O-acyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000697584 Streptomyces lavendulae Streptothricin acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBMVJLKEKKMJG-UHFFFAOYSA-N acetic acid;3-methylbutanoic acid Chemical compound CC(O)=O.CC(C)CC(O)=O UFBMVJLKEKKMJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N benzophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)C1=CC=CC=C1 RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012965 benzophenone Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229950005228 bromoform Drugs 0.000 description 1
- KVNRLNFWIYMESJ-UHFFFAOYSA-N butyronitrile Chemical compound CCCC#N KVNRLNFWIYMESJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- QGJOPFRUJISHPQ-NJFSPNSNSA-N carbon disulfide-14c Chemical compound S=[14C]=S QGJOPFRUJISHPQ-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- FJBFPHVGVWTDIP-UHFFFAOYSA-N dibromomethane Chemical compound BrCBr FJBFPHVGVWTDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMNKXPULIDJLSU-UHFFFAOYSA-N dichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)Cl UMNKXPULIDJLSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940099364 dichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical group C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 1
- XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetoacetate Chemical compound CCOC(=O)CC(C)=O XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 229940053641 forteo Drugs 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 239000003877 glucagon like peptide 1 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009578 growth hormone therapy Methods 0.000 description 1
- CATSNJVOTSVZJV-UHFFFAOYSA-N heptan-2-one Chemical compound CCCCCC(C)=O CATSNJVOTSVZJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000859 incretin Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000012482 interaction analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- GJRQTCIYDGXPES-UHFFFAOYSA-N iso-butyl acetate Natural products CC(C)COC(C)=O GJRQTCIYDGXPES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQAGVSWESNCJJT-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid methyl ester Natural products COC(=O)CC(C)C OQAGVSWESNCJJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012907 medicinal substance Substances 0.000 description 1
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004079 mineral homeostasis Effects 0.000 description 1
- PYLWMHQQBFSUBP-UHFFFAOYSA-N monofluorobenzene Chemical compound FC1=CC=CC=C1 PYLWMHQQBFSUBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- UNJJBGNPUUVVFQ-ZJUUUORDSA-N phosphatidylserine Chemical compound CCCC(=O)O[C@H](COC(=O)CC)COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O UNJJBGNPUUVVFQ-ZJUUUORDSA-N 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229920000172 poly(styrenesulfonic acid) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940005642 polystyrene sulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N propionitrile Chemical compound CCC#N FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000027425 release of sequestered calcium ion into cytosol Effects 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229940072272 sandostatin Drugs 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/26—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
- A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1682—Processes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
- A61K9/5031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poly(lactide-co-glycolide)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области фармации, в частности к микросферам для контролируемого высвобождения белка и способам их получения. Микросфера содержит биоразлагаемый полимер, выбранный из группы, состоящей из полилактида; полигликолида; поли(d,1-лактид-со-гликолида); поликапролактона; полиортоэфира; сополимер полиэфира и простого полиэфира; и сополимер полилактида и полиэтиленгликоля; и белковую смесь, выбираемую из группы, состоящей из: конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты; белок и гидрофобный анион органической кислоты; их комбинации, где органическая кислота включает памовую кислоту, диоктилсульфоянтарную кислоту, фуроевую кислоту или их смеси; и где микросфера формируется способом, включающим: добавление органической кислоты к конъюгату белок-полиэтиленгликоль или белку в несмешивающемся с водой растворителе в органической фазе с образованием несмешивающегося с водой раствора, причем добавление происходит без присутствия воды. Также раскрыты способ получения соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью и способ получения микросферы, обеспечивающей контролируемое высвобождение активного агента, которая содержит соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Этот способ включает получение водного белкового раствора. Водный белковый раствор включает белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН. Способ также включает взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате чего образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль. Способ также включает протонирование аминогруппы в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической кислоты в органической фазе. В результате указанного протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион, в результате чего повышается гидрофобность соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Группа изобретений обеспечивает получение лекарственных препаратов с постоянным профилем высвобождения белка. 6 н. и 34 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 14 пр.
Description
Отсылки к родственным заявкам
Данная заявка претендует на преимущество приоритета в отношении следующих заявок: предварительной заявки на патент США № 62/086 294, представленной 2 декабря 2014 г.; заявки на патент США № 14/954 591, озаглавленной “Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью», представленной 30 ноября 2015 г. и заявки на патент США № 14/954 701, озаглавленной “Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью», представленной 30 ноября 2015 г. Содержание этих заявок во всех отношениях включено в настоящий документ путем отсылки.
Уровень техники
Обеспечение попадания лекарственного вещества, гормона, белка или иного активного в медицинском смысле агента в организм пациента сталкивается с рядом проблем. Медицинский активный агент должен попасть в организм пациента. Для этого существуют два пути: пероральный (проглатывание) и парентеральный (введение путем инъекции). В первом случае лекарственное вещество прежде чем оказаться в кровотоке или в подлежащем воздействию участке организма пациента должно пройти через его пищеварительный тракт. Введение медицинского активного агента путем инъекции позволяет ему попасть в кровоток или нужный участок организма быстро или напрямую, однако инъекции сами по себе могут оказаться неприемлемыми или чересчур болезненными для данного больного. Когда медицинский активный агент оказывается в организме пациента, его концентрация с течением времени может изменяться в зависимости от природы данного агента, присоединения к нему различных других веществ или функциональных групп, инкапсулирования внутри каких-либо структур или иных факторов. Если концентрация медицинского активного агента падает ниже некоторого порогового значения, его нужно вводить в организм снова. Многие медицинские активные агенты приходится вводить пациенту часто, например, несколько раз в сутки. При режиме введения, предполагающем частые инъекции, возрастает дискомфортность процедуры для пациента, снижается степень выполнения больным предписаний врача, так что в итоге эффект лечения становится меньше оптимального. Когда медицинский активный агент вводится путем инъекций, каждый последующий укол увеличивает степень болезненных ощущений пациента, повышает риск занесения инфекции и вероятность иммунного ответа в организме больного. Таким образом, существует настоятельная потребность в медицинских активных агентах, отличающихся концентрационным профилем, адекватным их назначению. Описанные в настоящем документе способы и композиции дают решение указанным проблемам.
Краткое изложение сущности изобретения
Медицинский активный агент может быть присоединен к алифатической цепи, к полиэтиленгликолю (PEG), к гидрофобному аниону или к иной структуре. В случае присоединения полиэтиленгликоля увеличивается молекулярная масса медицинского агента или же увеличивается его время полужизни. Также в случае присоединения полиэтиленгликоля, включая низкомолекулярные его варианты, или к гидрофобному аниону может увеличиться гидрофобность медицинского активного агента и он может стать амфифильным. Возможно, что медицинский активный агент будет лучше растворяться в органических растворителях с биоразлагаемыми полимерами. В присутствии таких полимеров медицинский активный агент может быть заключен в полимерную микросферу (инкапсулирован). Инкапсулирование медицинского активного агента продлевает его время полужизни. В описанных в настоящем документе композициях медицинский активный агент может высвобождаться медленно и равномерно на протяжении некоторого промежутка времени. Профиль высвобождения активного агента может быть таким, что на протяжении предполагаемого периода лечения обеспечивается постоянный, без всплесков уровень белка даже без необходимости в каких-либо вспомогательных компонентах. В результате концентрационный профиль медицинского активного агента в организме пациента может обеспечить более оптимальный клинический результат. Препараты, описанные в настоящем документе, можно вводить пациенту нечасто, например один раз в месяц. Процесс изготовления таких препаратов может быть эффективным, с высоким выходом и относительно недорогим.
Примеры по данному изобретению включают способ получения конъюгатов белков с полиэтиленгликолем в форме соли, обладающих повышенной гидрофобностью. Этот способ может включать создание водного белкового раствора, который включает собственно белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН среды. Этот способ может также включать взаимодействие полиэтиленгликоля c белком, в результате чего образуется конъюгат белка и полиэтиленгликоля. Этот способ может также включать протонирование аминогрупп в конъюгате белка и полиэтиленгликоля за счет гидрофобной органической кислоты. Такое протонирование может происходить в органической фазе. В результате протонирования может образовываться соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, в которой имеется гидрофобный анион, так что гидрофобность конъюгата белок-политиленгликоль увеличивается.
Примеры по данному изобретению включают способ получения конъюгатов белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью. Этот способ включает получение водного белкового раствор, в состав которого входят белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН. Этот способ также включает взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате чего образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль. Конъюгат белок-полиэтиленгликоль может обладать более высокой гидрофобностью, чем данный белок в отдельности.
Примеры по данному изобретению включают способ получения соли белка с повышенной гидрофобностью. Этот способ включает получение водного белкового раствор, в состав которого входят белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН. Этот способ также включает протонирование по меньшей мере одной аминогруппы в белке за счет гидрофобной органической кислоты. В результате такого протонирования образуется соль белка, в которой имеется гидрофобный анион, так что гидрофобность соли белка увеличивается.
В примерах по данному изобретению способ получения микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение активного агента и содержащих соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, включает получение водного белкового раствора. Этот водный белковый раствор включает белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН среды. Этот способ также включает взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате чего образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль. Кроме того, этот способ включает протонирование аминогрупп в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической кислоты. В результате такого протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, в которой имеется гидрофобный анион. Также этот способ включает смешивание соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе с биоразлагаемым полимером. Благодаря гидрофобному аниону в составе соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль может увеличиваться растворимость этой соли в органическом растворителе. Этот способ также включает эмульгирование смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль с биоразлагаемым полимером в водном растворе. Кроме того, этот метод также включает отверждение эмульгированной смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера, с образованием микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение нужного агента.
Примеры по данному изобретению включают микросферы. Композиция по данному изобретению включает биоразлагаемый полимер. Также микросферы по данному изобретению включают белковую смесь, выбираемую из группы, состоящей из: конъюгата белок-полиэтиленгликоль; конъюгата белок-полиэтиленгликоль и гидрофобного аниона органической кислоты; белка и гидрофобного аниона органической кислоты; их комбинаций.
Примеры по данному изобретению также включают композицию, содержащую биоразлагаемый полимер, органический растворитель и белковую смесь. Эта белковая смесь может включать белок, конъюгат белок-полиэтиленгликоль, гидрофобный анион органической кислоты или их комбинации. Указанная композиция может быть в виде раствора или суспензии.
В пример по данному изобретению предлагаемые способы могут включать получение раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Эти способы могут включать получение конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Конъюгат белок-полиэтиленгликоль по данному изобретению может не содержать соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Способы по данному изобретению могут также включать смешивание биоразлагаемого полимера, конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Эти способы могут включать получение конъюгата белок-полиэтиленгликоль, гидрофобной органической кислоты и органического растворителя. Способы по данному изобретению могут включать образование соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, в состав которой входят конъюгат белок-полиэтиленгликоль и анион гидрофобной органической кислоты. Кроме того, способы по данному изобретению могут включать перемешивание указанной смеси для образования раствора или суспензии.
Некоторые примеры по данному изобретению включают способы получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль могут включать растворение биоразлагаемого полимера в органическом растворителе для образования смеси. Эти способы также могут включать прибавление к образовавшейся смеси конъюгата белок-полиэтиленгликоль и гидрофобной органической кислоты. Эти способы могут включать еще протонирование аминогрупп в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической кислоты. В результате такого протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, в состав которой входит гидрофобный анион. Также эти способы могут включать перемешивание указанной смеси для образования раствора или суспензии.
Примеры, описанные в настоящем документе, обеспечивают превосходный концентрационный профиль. После присоединения полиэтиленгликоля и инкапсулирования белок может сохранять свою активность. Высвобождение белка in vitro, in vivo и/или in situ может происходить с небольшим первоначальным «залпом». Изменение концентрации активного агента при его высвобождении может характеризоваться кинетикой реакции почти нулевого порядка, то есть концентрация высвобождаемого медицинского активного агента очень мало изменяется с течением времени или в зависимости от его концентрации в микросферах. Будучи введен пациенту, белок по данному изобретению может практически полностью высвобождаться из микросфер.
Краткое описание чертежей
В настоящем документе технология по данному изобретению описывается в сочетании с прилагаемыми иллюстрациями.
Фиг. 1 представляет блок-схему способа получения соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью по примерам данного изобретения.
Фиг. 2 представляет блок-схему способа получения конъюгата белок-полиэтиленгликоль по примерам данного изобретения.
Фиг. 3 представляет блок-схему способа получения соли белка с повышенной гидрофобностью по примерам данного изобретения.
Фиг. 4 представляет блок-схему способа получения микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение активного агента, содержащих соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, по примерам данного изобретения.
Фиг. 5 представляет блок-схему способа получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль по примерам данного изобретения.
Фиг. 6 представляет блок-схему способа получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль по примерам данного изобретения.
Фиг. 7A и 7B представляют микрофотографии, полученные с помощью светового микроскопа, микросфер из PLGA, содержащих медицинские активные агенты.
Фиг. 8 представляет график, иллюстрирующий результаты изучения контролируемого высвобождения активного агента из микросфер по примерам данного изобретения.
Фиг. 9 представляет график, иллюстрирующий результаты изучения контролируемого высвобождения активного агента из микросфер по примерам данного изобретения.
Фиг. 10 представляет результаты фармакокинетического анализа GLP-1 в образцах плазмы крови крыс после введения микросфер по примерам данного изобретения.
Фиг. 11 представляет результаты фармакокинетического анализа инсулина в образцах плазмы крови крыс после введения микросфер по примерам данного изобретения.
Осуществление изобретения
Медицинские активные агенты, во введении которых может нуждаться пациент, включают лекарства, гормоны и белки. Одним из таких белков является человеческий гормон роста (hGH), которые представляет собой полипептид из 191 аминокислотного остатка, усиливающий клеточный рост и регенерацию. Человеческий гормон роста можно использовать для лечения расстройств и состояний недостаточности, связанных с ростом. Например, этот гормон можно использовать для лечения малого роста у детей и состояний недостаточности hGH у взрослых. Обычно человеческий гормон роста вводят нуждающемуся в том пациенту путем ежедневных подкожных инъекций. В одном исследовании (Rosenfeld R.G., Bakker B. 2008. Compliance and persistence in pediatric and adult patients receiving growth hormone therapy. Endocr. Pract. 14(2):143-154) было показано, что отношение больных к лечению гормоном роста (соблюдают ли они назначенный врачами режим лечения или нет) в большинстве случаев лишь случайно.
В качестве медицинского активного агента может также служить другой белок – глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1). Этот пептид, состоящий из 31 аминокислотного остатка, является одним из инкретинов: он снижает уровень глюкозы в крови. Влияние GLP-1на уровень глюкозы в крови осуществляется путем стимулирования высвобождения инсулина и подавления высвобождения глюкагона. Также этот пептид может снижать скорость всасывания питательных веществ в кровоток, замедляя опорожнение желудка, и сокращать потребление пищи. Благодаря своей способности влиять на уровень глюкозы в крови GLP-1 в принципе может служить для лечения диабета типа 2 и некоторых других расстройств. Интактный глюкагоноподобный пептид 1 обладает временем полужизни in vivo менее двух минут вследствие протеолиза. Лечение с использованием агонистов рецептора GLP-1 можно усовершенствовать, если свести к минимуму побочные явления, добиться большей действенности и увеличить продолжительность желаемого эффекта.
Обычное лечение диабета и других состояний может приводить к побочным эффектам. Эти побочные эффекты включают гипогликемию, увеличение массы тела, иммунологические реакции, воспаление поджелудочной железы, повышение вероятности рака щитовидной железы, тошноту или боли, связанные с инъекциями, совершаемыми в ходе лечения. Кроме того, обычное лечение указанных расстройств может не достигать желаемого уровня гликемии у больных диабетом. При использовании некоторых препаратов возможно неравномерное введение нужного белка в организм пациента, включая первоначальный всплеск концентрации лекарственного вещества. При получении пригодного для введения в человеческий организм препарата возможна денатурация или агрегация белка. Процесс изготовления эффективных препаратов может оказаться дорогостоящим или иметь низкий выход продукта.
Подобно гормону роста и глюкагоноподобному пептиду 1 препарат энфувиртид (Fuzeon®) является медицинским активным агентом, с введением которого больным связаны определенные проблемы. Энфувиртид может способствовать лечению инфекции вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ, или HIV) и синдрома приобретенного иммунного дефицита (СПИДа, или AIDS). Это препарат нужно вводить два раза в сутки путем подкожной инъекции. Эти инъекции могут вызывать в коже побочные эффекты, связанные с реакцией чувствительности, из-за которых пациент может не желать продолжения применения данного препарата. Для того чтобы пациент соблюдал режим лечения, стоимость лечения снизилась и качество жизни больного повысилось (в случае ВИЧ-инфекции и СПИДа), может понадобиться проведение лечения энфувиртидом по схемам с менее частыми введениями иди более продолжительным курсом.
Еще один медицинский активный агент - гормон околощитовидной железы (PTH) или его фрагмент. Гормон околощитовидной железы является анаболическим (способствует образованию костной ткани). Он секретируется околощитовидными железами в виде полипептида, состоящего из 84 аминокислотных остатков, с молекулярной массой 9425 дальтон. Первые 34 аминокислотных остатка являются биологически активным элементом в отношении минерального гомеостаза. Препарат под названием терипаратид (Forteo®, производство Lilly) представляет собой синтетический укороченный вариант PTH. Гормон околощитовидной железы или его фрагмент можно использовать для лечения остеопороза. Нередко терипаратид, который стоит дорого и вводится путем ежедневных инъекций, назначают лишь после других лечебных средств. Как и в случае других медицинских активных агентов может оказаться желательной такая схема лечения гормоном околощитовидной железы, которая предполагает менее частое введение и более продолжительный курс.
Не измененные белки зачастую не обладают желаемым концентрационным профилем или иными нужными свойствами. Введению в организм пептидов и белков может способствовать их ПЭГилирование, как называют присоединение полиэтиленгликоля к белковой/пептидной молекуле, в результате чего могут улучшиться фармакологические свойства белка/пептида и увеличиться эффективность лечебного воздействия. Полиэтиленгликоль – это линейный полимер, состоящий из этиленгликолевых субъединиц; он растворим как в воде, так и во многих органических растворителях. Полиэтиленгликоль представляет собой гибкое вещество, способное к биологической деградации и не токсичное. В силу свойств полиэтиленгликоля ПЭГилирование может продлевать время полужизни и/или повышать растворимость белка или пептида. Полиэтиленгликоль может быть присоединен к метокси-группе. Полиэтиленгликоль может быть представлен альдегидом, в том числе метоксиполиэтиленгликольальдегидом.
На концентрационный профиль медицинского активного агента можно повлиять также иначе – путем инкапсулирования его в биоразлагаемый материал. По мере распада такого материала медицинский активный агент будет постепенно высвобождаться. При инкапсулировании медицинского активного агента может потребоваться использование органического растворителя. Медицинский активный агент может быть гидрофильным и не растворимым в органических растворителях. Чтобы облегчить инкапсулирование, можно увеличить гидрофобность медицинского активного агента.
Чтобы увеличить гидрофобность медицинского активного агента, его можно ПЭГилировать. Однако в результате ПЭГилирования не у всех медицинских активных агентов возрастает растворимость и сохраняется изначальная биологическая активность. Например, для увеличения растворимости белка присоединения небольших молекул полиэтиленгликоля может оказаться недостаточно. Присоединение более длинных молекул полиэтиленгликоля может в итоге привести к увеличению гидрофобности и растворимости данного белка, но эти более длинные цепи могут оказаться чересчур большими относительно размеров белковой молекулы и ухудшить биологическую активность белка. Например, чем больше ПЭГилирован человеческий гормон роста, тем меньше его сродство к соответствующему рецептору (см. Clark R. et al. 1996. Long-acting growth hormones produced by conjugation with polyethylene glycol. J. Biol. Chem. 217: 21969-21977). А ПЭГилирование альфа-интерферона (IFN-α) может приводить к снижению удельной активности белка in vitro в зависимости от места присоединения полиэтиленгликоля к белковой молекуле и от размеров молекулы полиэтиленгликоля (см. Grace M.J. et al. 2005. Site of pegylation and polyethylene glycol molecule size attenuate interferon-alpha antiviral and antiproliferative activities through the JAK/STAT signaling pathway. J. Biol. Chem. 280: 6327-6336). Кроме того, в результате ПЭГилирования не обязательно возрастает растворимость белка. Например, конъюгат инсулина с небольшими молекулами полиэтиленгликоля (молекулярной массой 2000 дальтон) не растворяется желаемым образом в органических растворителях. Другой пример: обнаружено, что из-за ПЭГилирования колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF) усиливается агрегация G-CSF и снижается его растворимость (см. Veronese F. M. et al. 2007. Site-specific pegylation of G-CSF by reversible denaturation. Bioconjug. Chem. 18(6): 1824-30).
Гидрофобность медицинского активного агента можно увеличить путем присоединения гидрофобного иона к молекуле этого вещества. Как и в случае ПЭГилирования, в результате присоединения гидрофобного аниона возрастет гидрофобность не всякого медицинского активного агента. Так, в белке может не иметься или иметься недостаточно положительно заряженных мест для связывания гидрофобного аниона. Тогда количество анионов, присоединяющихся к белковой молекуле, и возрастание ее гидрофобности буде ограничено. Например, в «кислых» белках – скажем, в сывороточном альбумине - содержание кислотных аминокислотных остатков превышает содержание основных аминокислотных остатков. Такие белки затруднительно протонировать при помощи гидрофобных кислот.
Сочетание ПЭГилирования с присоединением гидрофобного иона к медицинскому активному агенту может давать синергический эффект, то есть гидрофобность данного агента увеличится больше при этой комбинации, нежели можно ожидать от просто суммарного – в результате ПЭГилирования самого по себе и в результате присоединения гидрофобного иона самого по себе - возрастания гидрофобности. Эффект от применения белка у больного может быть превосходным, если этот белок превращен в соль конъюгата данного белка и полиэтиленгликоля.
Как показано на фиг. 1, примеры технологии по данному изобретению включают способ 100 получения соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью. Этот способ включает получение водного белкового раствора 102. Этот водный белковый раствор содержит нужный белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН среды. В состав этого буферного раствора может входить неорганическая соль фосфорной кислоты.
Белок, используемый по данному изобретению, имеет молекулярную массу 3000 дальтон (Да) или больше, в диапазоне 3000-10 000 Да; 10 000 Да или больше, в диапазоне 10 000-15 000 Да; 15 000 Да или больше, в диапазоне 15 000-20 000 Да либо 20 000 Да или больше в зависимости от конкретного примера. В этих и других примерах взятый белок содержит 30 аминокислотных остатков или больше, в диапазоне 30-100 аминокислотных остатков; 100 аминокислотных остатков или больше, в диапазоне 100-150 аминокислотных остатков либо 150 аминокислотных остатков или больше. Белки, которые можно использовать в примерах по данному изобретению, включают человеческий гормон роста, глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1), инсулин, гормон околощитовидной железы, фрагмент гормона околощитовидной железы, энфувиртид (Fuzeon®) или октреотид (Sandostatin®). В случае GLP-1 может использоваться пептид, выделенный из природного источника, или же синтетический. Возможно использование аналогов или производных GLP-1. Комбинация белков может входить в состав водного раствора. Например, в водном растворе могут содержаться как GLP-1, так и инсулин.
Способ 100 включает взаимодействие полиэтиленгликоля и белка с образованием конъюгата белок-полиэтиленгликоль 104. В результате взаимодействия полиэтиленгликоля и белка может образоваться конъюгат белок-полиэтиленгликоль, в котором полиэтиленгликоль присоединен к N-концу белковой молекулы.
В результате взаимодействия полиэтиленгликоля и белка может образоваться конъюгат белок-полиэтиленгликоль, в котором молекулы полиэтиленгликоля присоединены в определенных местах белковой молекулы, а именно к определенным остаткам цистеина, или же указанное взаимодействие не приводит к образованию конъюгата белок-полиэтиленгликоль, в котором молекулы полиэтиленгликоля присоединены в определенных местах белковой молекулы, а именно к определенным остаткам цистеина, или таких конъюгатов образуется ничтожно мало. Взаимодействие белок-полиэтиленгликоль может включать образование по меньшей мере одной связи с участием аминогруппы, амидной связи, эфирной связи или дисульфидного мостика между молекулами полиэтиленгликоля и белка. Взаимодействие полиэтиленгликоля и белка может не включать образование каких бы то ни было связей или групп связей. Связи с белковой молекулой могут образовываться с участием реакционноспособных групп на конце полимерной цепи полиэтиленгликоля.
Взаимодействие полиэтиленгликоля с белком может включать присоединение молекулы полиэтиленгликоля, способной реагировать с тиоловой группой, к остатку цистеина белка. Полиэтиленгликоли, способные реагировать с тиоловой группой, включают различные реакционноспособные группы, в том числе малеимидную и винилсульфоновую группы. Полиэтиленгликоли, способные к взаимодействию с тиоловой группой, обладают молекулярной массой от 2 до 4 кДа. Реакции ПЭГилирования с участием полиэтиленгликолей, способных взаимодействовать с тиоловой группой, могут протекать при нейтральном рН. В некоторых белках остатки цистеина могут образовывать дисульфидные мостики, и тогда они не доступны для получения производных соединений. Применяя метод сайт-направленного мутагенеза in vitro, можно ввести дополнительные остатки цистеина в определенные места белковой молекулы. Эти дополнительные остатки цистеина могут служить местами присоединения молекул полиэтиленгликоля. Использование дополнительных остатков цистеина позволяет избежать гетерогенности продукта и потери активности, которые могут быть следствием случайного взаимодействия аминогрупп при ПЭГилировании.
В этих и других примерах используемый по данному изобретению полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу 5000 дальтон или меньше, либо 2000 дальтон или меньше. При использовании более крупных молекул полиэтиленгликоля может увеличиться время полужизни белка. При использовании более мелких молекул полиэтиленгликоля может увеличиться растворимость конъюгата белок-полиэтиленгликоль, но время полужизни не будет продолжительным. Например, у полиэтиленгликоля с молекулярной массой 2000 дальтон время полужизни может составлять менее часа. Более мелкие молекулы полиэтиленгликоля можно использовать для увеличения растворимости конъюгата белок-полиэтиленгликоль и, кроме того, для инкапсулирования белка, что позволяет достигнуть большей части желаемого продления времени полужизни. Способ 100 может и не включать взаимодействие эфира полиэтиленгликоля с белком. Полиэтиленгликоль может быть избирателен в отношении первичных аминов, тогда как эфир полиэтиленгликоля может взаимодействовать с другими функциональными группами и аминокислотными остатками.
Способ 100 также включает протонирование аминогрупп в конъюгате белок-полиэтиленгликоль (106) за счет гидрофобной органической кислоты. Протонирование аминогруппы может осуществляться не в водной, а органической фазе. Молярное соотношение между гидрофобной органической кислотой и конъюгатом белок-полиэтиленгликоль может составлять от 1:1 до 11:1, от 1:1 до 5:1, от 5:1 до 11:1, от 1:1 до 2:1 или от 3:1 до 8:1 в зависимости от конкретного примера. В результате протонирования может образоваться соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион, что увеличивает гидрофобность конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль по данному изобретению может включать моноПЭГилированную соль. Используемые по данному изобретению гидрофобные органические кислоты включают памоевую (эмбоновую, то есть 4,4'-метилен-бис-(3-окси-2-нафталиновую) кислоту, докузат (диоктилсульфоянтарную кислоту), пирослизевую (2-фуранкарбоновую) кислоту или их смеси. Используемые по данному изобретению органические кислоты также включают карбоновые кислоты, сульфоновые кислоты, спирты или соединения с тиоловыми группами. Используемые по данному изобретению гидрофобные органические кислоты могут и не включать какие-либо из описанных здесь кислот или какие-либо из описанных здесь групп.
Используемые по данному изобретению гидрофобные анионы включают анионы, гидрофобных органических кислот. Например, гидрофобный анион по данному изобретению может быть анионом памоевой кислоты, докузат-ионом или анионом пирослизевой кислоты. В этих и других примерах гидрофобным анионом может служить анион жирной кислоты, фосфолипидный анион, анион полистиролсульфоновой кислоты или их смеси. Фосфолипид фосфолипидного аниона может быть фосфатидилхолином, фосфатидилглицерином, фосфатидилсерином, фосфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламином, фосфохолином или их смесью. Используемые по данному изобретению гидрофобные анионы могут и не включать какие-либо из описанных здесь анионов или групп анионов. Гидрофобный анион может быть присоединен к определенной боковой группе в белковой молекуле или же он может быть присоединен к множеству боковых групп белка. Гидрофобный анион по данному изобретению характеризуется коэффициентом липофильности logP больше 1. Коэффициент logP – это коэффициент распределения вещества в смеси вода-октанол; он представляет собой логарифм отношения концентрации соли белка в октаноле к концентрации соли белка в воде. Если коэффициент logP больше 1, это значит, что концентрация вещества в октаноле в 10 раз больше, чем в воде Коэффициент распределения вещества между октанолом и водой используется для сравнения различных веществ по их способности включаться в гидрофобную фазу, хотя молекулы данного вещества могут быть и амфипатическими. Способы по данному изобретению также включают прибавление катионных детергентов, например додециламина гидрохлорида или цетилтриметиламмония бромида (CTAB), которые могут компенсировать электрический заряд отрицательно заряженных пептидов и тем самым увеличить их гидрофобность.
Как показано на фиг.2, примеры по данному изобретению включают способ 200 получения конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью. Способ 200 включает получение водного белкового раствора 202, в состав которого могут входить белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН. Указанный здесь белок может быть любым из белков, описанных выше в настоящем документе. Указанные здесь водный белковый и буферный растворы могут быть любыми из описанных в настоящем документе водных белковых и буферных растворов.
Способ 200 также включает взаимодействие белка и полиэтиленгликоля с образованием конъюгата белок-полиэтиленгликоль (204). В составе этого конъюгата могут быть молекулы полиэтиленгликоля с молекулярной массой любого из приведенных в настоящем документе значений. Белок в конъюгате может быть любым из описанных в настоящем документе белков. Реакция образования конъюгата белок-полиэтиленгликоль может происходить любым из описанных в настоящем документе путей. Способ 200 может не включать протонирование аминогрупп в белке за счет гидрофобной органической кислоты. Способ 200 может не приводить к образованию соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль.
Как показано на фиг. 3., примеры по данному изобретению включают способ 300 получения соли белка с повышенной гидрофобностью. Способ 300 включает получение водного белкового раствора 302, в состав которого входят белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН. Указанный здесь белок может быть отделен от воды. Способ 300 также включает протонирование аминогрупп в белке за счет гидрофобной органической кислоты 304. Протонирование аминогрупп может осуществляться в органической фазе и без присутствия воды. В результате протонирования аминогрупп может образоваться соль белка, содержащая гидрофобный анион, что увеличивает гидрофобность этой соли белка. Способ 300 не включает введение полиэтиленгликоля в водный белковый раствор. При осуществлении способа 300 не образуются конъюгат белок-полиэтиленгликоль или соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль. В качестве указанных здесь водного белкового раствора, белка, буферного раствора, гидрофобной органической кислоты и гидрофобного аниона могут служить любые из соединений, описанных выше в настоящем документе.
Как показано на фиг. 4, способ 400 получения микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение активного агента, которые содержат соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, включает получение водного белкового раствора 402. Указанный водный белковый раствор включает белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН. Указанный белок может быть любым из белков, описанных выше в настоящем документе. Способ 400 также включает взаимодействие белка и полиэтиленгликоля с образованием конъюгата белок-полиэтиленгликоль (404). Образовавшийся конъюгат белок-полиэтиленгликоль может быть отделен от воды. В таком случае конъюгат белок-полиэтиленгликоль затем растворяют в органическом растворителе.
Кроме того, способ 400 включает протонирование по меньшей мере одной аминогруппы в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической кислот 406. Гидрофобную органическую кислоту можно добавлять к органической фазе и не добавлять к водной фазе. Сходным образом, протонирование аминогрупп может происходить в органической фазе и без присутствия воды. В результате этого протонирования может образоваться соль конъюгата белко-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион. В качестве гидрофобной органической кислоты может служить любая из описанных в настоящем документе кислот, а соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль может быть любой из описанных в настоящем документе солей конъюгатов.
Также способ 400 включает смешивание соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе с биоразлагаемым полимером 408. Указанный органический растворитель не смешивается с водной фазой. Органические растворители, используемые по данному изобретению, включают метиленхлорид, бензилбензоат, дихлорметан. хлороформ, этиловый эфир, этилацетат, изопропиловый эфир уксусной кислоты (изопропилацетат), втор-бутиловый эфир уксусной кислоты, ацетофенон, н-амилацетат, анилин, бензальдегид, бензол, бензофенон, бензиловый спирт, бензиламин, бромбензол, бромоформ, н-бутилацетат, метиловый эфир масляной кислоты, капроновую кислоту, дисульфид углерода, четыреххлористый углерод, орто-хлоранилин, хлорбензол, 1-хлорбутан, хлорметан, мета-хлорфенол, мета-крезол, орто-крезол, цианоэтан, цианопропан, циклогексанол, циклогексанон, 1,2-дибромэтан, дибромметан, дибутиламин, мета-дихлорбензол, орто-дихлорбензол, 1,1-дихлорэтан, 1,2-дихлорэтан, дихлорфторметан, диэтилкарбонат, диэтилмалонат, диэтилсульфид, дибутиловый эфир диэтиленгликоля, диизобутилкетон, диизопропилсульфид, диметилфталат, диметилсульфат, диметилсульфид, N,N-диметилаланин, энантовую кислоту, этилацетоацетат, этилбензоат, этилпропионат, этилбензол, монобутилового эфира этиленгликоля ацетат, оксоацетаты Exxate 600, 800 и 900, фторбензол, фуран, гексаметилфосфорамид, 1-гексанол, н-гексилацетат, изоамилолвый спирт (3-метил-1-бутанол), изобутилацетат, метоксибензол, метиламилкетон, метилбензоат, метилформиат, метилизоамилкетон, метилизобутенилкетон, метилизобутилкетон, метил-н-бутилкетон, метилпропилкетон, 4-метил-2-пентанол, N-метиланилин, нитробензол, нитроэтан, 1-нитропропан, 2-нитропропан, 1-октанол, 2-октанол, 1-пентанол, 3-пентанон, 2-фенилэтанол, н-пропилацетат, хинолин, стирол, 1,1,2,2-тетрахлорэтан, 1,1,2,2-тетрахлорэтилен, толуол, 1,1,1-трихлорэтан, 1,1,2-трихлорэтилен, 1,1,2-трихлорэтан, трифторметан, валериановую кислоту, мета-ксилол, орто-ксилол, пара-ксилол, 2,4-ксиленол или их смеси. Используемые по данному изобретению органические растворители могут не включать любой растворитель или группу растворителей.
В способах по данному изобретению может использоваться смесь растворителей. Смесь растворителей может включать растворитель, смешивающийся с водой, но сама смесь может не смешиваться с водой. Например, к не смешивающемуся с водой растворителю может быть добавлен такой смешивающийся с водой растворитель, как диметилсульфоксид (DMSO), метиловый спирт, диметилфорамид (DMF), ацетонитрил, тетрагидрофуран или их смесь.
Используемые по данному изобретению биоразлагаемые полимеры включают полиактид, полигликолид, поли(d,1-лактид-ко-гликолид), поликапролактон, поли(ортоэфир), сополимер простого полиэфира и сложного полиэфира или сополимер полилактида и полиэтиленгликоля. Используемые по данному изобретению биоразлагаемые полимеры могут не включать какие-либо из указанных здесь полимеров или групп этих полимеров. Молекулярную массу биоразлагаемого полимера по данному изобретению подбирают в зависимости от размеров молекул полиэтиленгликоля для обеспечения желаемого фармакокинетического профиля.
Поли(d,1-лактид-ко-гликолил) (PLGA), используемый в примерах по данному изобретению, имеет молекулярную массу от 5000 Да до 7000 Да, от 7000 Да до 17 000 Да, от 17 000 Да до 20 000 Да, от 20 000 Да до 24 000 Да, от 24 000 Да до 38 000 Да, от 38 000 Да до 40 000 Да или от 40 000 Да до 50 000 Да. Соотношение лактида и гликолида в PLGA может составлять 50:50 или 75:25. В некоторых примерах по данному изобретению это соотношение в PLGA составляет от 40:60 до50:50, от 50:50 до 60:40, от 60:40 до 70:30, от 70:30 до 75:25 или от 75:25 до 90:10. Соотношение лактида и гликолида в PLGA может быть меньше или равно 50:50, меньше или равно 60:40 либо меньше или равно 75:25, причем здесь слово «меньше» относится к меньшей доле лактида по сравнению с гликолидом. Наличие гидрофобного аниона органической кислоты может улучшить показатели высвобождения в случае некоторых PLGA, но в случае других таких соединений этого не наблюдается.
Используемые по данному изобретению PLGA включают PLGA 502, PLGA 503, PLGA 752 и PLGA 753. В полимере PLGA 502 соотношение лактида и гликолида составляет 50:50, его характеристическая вязкость составляет от 0,16 дo 0,24 дл/г, а молекулярная масса – от 7000 Да до 17 000 Дa. В полимере PLGA 503 соотношение лактида и гликолида составляет 50:50, его характеристическая вязкость составляет от 0,32 дo 0,44 дл/г, а молекулярная масса – от 24 000 Да до 38 000 Дa. В полимере PLGA 752 соотношение лактида и гликолида составляет 75:25, его характеристическая вязкость составляет от 0,14 дo 0,22 дл/г, а молекулярная масса – от 4000 Да до 15 000 Дa. В полимере PLGA 753 соотношение лактида и гликолида составляет 75:25, его характеристическая вязкость составляет от 0,32 дo 0,44 дл/г, а молекулярная масса – от 24 000 Да до 38 000 Дa. Также молекула полимера PLGA может иметь кислотную либо сложноэфирную концевую группу.
Наличие гидрофобного аниона в соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль может повышать ее растворимость в органических растворителях. Способ 400 включает также эмульгирование смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера 410 в водном растворе. Кроме того способ 400 включает отверждение эмульгированной смеси 412 соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера с образованием микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение активного агента. В состав этих микросфер может входить гидрофобный анион органической кислоты. Если органическую кислоту добавляют не в органическую фазу, а в водную, то органическая кислота и какие-либо анионы из нее могут не входить в состав микросфер или могут содержаться в них в гораздо меньшей концентрации.
В способе получения микросфер, обеспечивающих контролируемое высвобождение активного агента, может использоваться не соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, а конъюгат белок-полиэтиленгликоль или соль белка. Конъюгат белок-полиэтиленгликоль или соль белка могут быть получены любым из описанных в настоящем документе способов.
В примерах по данному изобретению могут использоваться микросферы с биоразлагаемым полимером. Диаметр этих микросфер составляет менее 1 мм. Например, диаметр этих микросфер может составлять от 10 мкм до 20 мкм, от 20 мкм до 30 мкм, от 30 мкм до 40 мкм, от 40 мкм до 50 мкм, от 50 мкм до 60 мкм, от 60 мкм до 70 мкм, от 70 мкм до 80 мкм, от 80 мкм до 90 мкм или от 90 мкм до 100 мкм. Кроме того, множество микросфер может характеризоваться распределением по диаметру, значения которого находятся в пределах указанных здесь диапазонов. Величина диаметра характеризуется средним значением, медианой (D50), 10-м процентилем (D10) или 90-м процентилем (D90) распределения. Если микросферы слишком крупные, может оказаться невозможным ввести их индивиду, подлежащему лечению по данному изобретению, путем инъекции с помощью шприца. Также при чересчур больших размерах микросфер может задерживаться высвобождение медицинского активного агента. Однако если диаметр микросфер слишком мал, то они могут теряться в процессе обработки, просеивания и/или отбора.
Микросферы по данному изобретению могут содержать конъюгат белок-полиэтиленгликоль, сам белок и гидрофобный анион органической кислоты или их смеси. Микросферы по данному изобретению могут не содержать конъюгат белок-полиэтиленгликоль или гидрофобный анион органической кислоты. Белком в составе микросфер может быть любой из описанных в настоящем документе белков. Композиция по данному изобретению может содержать комбинацию белков. Например, в состав композиции по данному изобретению могут входить глюкагоноподобный пептид 1 и инсулин. GLP-1 и инсулин могут присутствовать в микросферах как часть конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Термин «премикс» в настоящем документе относится к микросферам с комбинацией белков или конъюгатов белок-полиэтиленгликоль. Или же в примерах по данному изобретению используется постмикс. Термин «постмикс» в настоящем документе относится к смеси микросфер, в которой каждая микросфера содержит только один медицинский активный агент, но в смеси микросфер содержится комбинация медицинских активных агентов. Органическая кислота и гидрофобный анион органической кислоты в составе микросфер могут быть любыми из соединений, описанных выше в настоящем документе.
Композиция по данному изобретению может содержать биоразлагаемый полимер и быть представлена микросферами. Для получения этих микросфер вначале получают эмульсию из водного раствора и раствора, не смешивающегося с водой, и затем ее экстрагируют растворителем и высушивают. Для эмульгирования используют статические либо динамические смесители или же эмульгаторные установки с диспергирующей насадкой.
Композиции по данному изобретению, содержащие биоразлагаемый полимер, могут быть в виде раствора или суспензии в органическом растворителе. Эти растворы можно вводить в организм человека, причем введенный органический растворитель растворяется в жидкости тела, оставляя композицию по данному изобретению, включающую биоразлагемый полимер. При этом используется такой органический растворитель, который смешивается с водой и не токсичен, чтобы его можно было вводить человеку. Для получения раствора ПЭГилированный белок, органическую кислоту и биоразлагаемый полимер нужно растворить в указанном органическом растворителе. Для получения суспензии по меньшей мере один из компонентов (ПЭГилированного белка, органической кислоты и биоразлагаемого полимера) не должен полностью растворяться во взятом органическом растворителе. Органические растворители, используемые в примерах по данному изобретению, включают N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль 400 и их смеси. Композиция по данному изобретению может не включать какие-либо из указанных здесь органических растворителей или групп органических растворителей. В примерах по данному изобретению могут применяться способы получения композиций с биоразлагаемым полимером, растворенным в органическом растворителе.
На фиг. 5 показан способ 500 получения раствора или суспензии, содержащих биоразлагаемый полимер и соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Способ 500 включает получение конъюгата белок-полиэтиленгликоль 502. Способ 500 также включает смешивание биоразлагаемого полимера, конъюгата белок-полиэтиленгликоль, гидрофобной органической кислоты и органического растворителя с образованием смеси 504. В этом способе конъюгат белок-полиэтиленгликоль может не содержать соли этого конъюгата. Используемый в этом способе конъюгат белок-полиэтиленгликоль может быть представлен конъюгатом глюкагоноподобного пептида 1 с полиэтиленгликолем. При смешивании может использоваться также второй конъюгат белок-полиэтиленгликоль, который может быть представлен конъюгатом инсулин-полиэтиленгликоль.
Способ 500 также выключает образование соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль 506. Соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль включает конъюгат белок-полиэтиленгликоль и анион гидрофобной органической кислоты. Образование соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль можно осуществлять одновременно с растворением компонентов в органическом растворителе, а не растворять в нем уже полученную соль. Способ 500 включает также перемешивание указанной смеси для образования раствора или суспензии 508. После перемешивания может получиться прозрачный раствор. При этом используются любые конъюгат белок-полиэтиленгликоль, биоразлагаемый полимер, гидрофобная органическая кислота и органический растворитель из числа описанных в настоящем документе соответствующих соединений. Каждый из указанных компонентов и этапов может быть безводным.
На фиг. 6 показан способ 600 получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль. Способ 600 включает растворение биоразлагаемого полимера в органическом растворителе для образования смеси 602. В способ 600 может не входить растворение соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе. Способ 600 также включает прибавление конъюгата белок-полиэтиленгликоль и гидрофобной органической кислоты к смеси (604). Также способ 600 включает протонирование аминогрупп в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет гидрофобной органической кислоты (606). В результате этого протонирования может образоваться соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион. Кроме того, способ 600 включает перемешивание полученной смеси для образования раствора или суспензии (608). После перемешивания моет получиться прозрачный раствор. В способе 600 используются любые конъюгат белок-полиэтиленгликоль, биоразлагаемый полимер, гидрофобная органическая кислота и органический растворитель из числа описанных в настоящем документе соответствующих соединений. Каждый из указанных компонентов и этапов может быть безводным.
В результате применения способов 500 и 600 или сходных способов получается раствор. Этот раствор может быть введен путем инъекции нуждающемуся в том индивиду. При контакте этого раствора с водой может образоваться твердофазное депо. Затем из этого депо постепенно высвобождается нужный белок или иной медицинский активный агент.
Пример 1
Мутантный белок, представляющий собой глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1 [7-36] с добавленным на С-конце полипептидной цепи цистеином в положении 37, клонировали в виде слитого белка (слитый с более крупным полипептидом), содержащим самоотщепляющуюся путем аутопротеолиза последовательность между GLP-1 и этим другим полипептидом. Слитый белок экспрессировался в клетках Escherichia coli, для чего использовали индукцию транскрипции изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозидом (IPTG) и полимеразу фага T7.
Пример 2
Слитый белок, содержащий GLP-1, выделяли из клеточных лизатов в денатурирующих условиях, проводили его ренатурацию, расщепление (аутопротеолиз) и затем очистку путем катионной хроматографии. Для подтверждения идентичности пептидов проводили анализ свойств, включавший высокоэффективную жидкостную хроматографию с обращенной фазой (RP-HPLC), электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и масс-спектрометрию. В качестве контроля при этом использовали имеющийся в продаже синтетический мутантный GLP-1 с цистеином.
Пример 3
К мутантному GLP-1 с цистеином (полученному рекомбинантным путем или путем химического синтеза) присоединяли через малеимид, который взаимодействует с цистеином, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 5 кДа или 10 кДа. Для этого поступали следующим образом. Вначале пептид растворяли в буферном растворе (фосфат натрия 20 мМ; pH 7,5) в концентрации 1-5мг/мл и прибавляли эквивалентное молярное количество полиэтиленгликоля, содержащего малеимид. Оставляли эту реакционную смесь на ночь. Затем очищали ПЭГилированный GLP-1 путем катионной ионообменной хроматографии, используя SP-сефарозу HP, в качестве уравновешивающего буферного раствора ацетат натрия 10 мМ (рН 3,5) и для элюирования в ступенчатом градиенте 0,02%-ный раствор бикарбоната аммония. Фракции, содержащие искомый продукт, объединяли, диализовали против 0,02%-ного раствора бикарбоната аммония и лиофилизировали. Определяли концентрацию очищенного ПЭГилированного пептида путем ультрафиолетовой спектроскопии или определяли белок методом Бредфорда. После ПЭГилирования проводили дополнительный анализ, включавший эксклюзионную высокоэффективную жидкостную хроматографию (SEC-HPLC), электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE), масс-спектрометрию, определение N-концевой аминокислотной последовательности и определение эндотоксина. Использовали также более крупные молекулы полиэтиленгликоля, а именно с молекулярной массой 20 кДа. Могут быть использованы еще более крупные молекулы полиэтиленгликоля (например, с молекулярной массой 40 кДа).
Пример 4
GLP-1 с присоединенным к его N-концу полиэтиленгликолем получали следующим образом. Вначале 30 мг GLP-1 растворяли в буферном растворе (ацетат натрия 20 мМ; pH 4,5) до концентрации GLP-1 1-5 мг/мл. Затем прибавляли 55 мг ПЭГ-пропионового альдегида с молекулярной массой 5 кДа и после этого 2 мг цианборгидрида натрия. Полученную реакционную смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. Спустя 16 часов PEG-GLP-1 очищали путем катионной ионообменной хроматографии, используя SP-сефарозу HP.
Пример 5
Человеческий гормон роста (hGH) субклонировали в клетках Escherichia coli, для чего использовали индукцию транскрипции изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозидом (IPTG) и полимеразу фага T7. Клетки культивировали до оптической плотности при 600 нм OD600=0,5 и прибавляли IPTG (1 мМ) для индукции экспрессии. Индуцированную культуру инкубировали в течение ночи (16 часов). Клетки осаждали путем центрифугирования, клеточный осадок хранили при температуре -20°C.
Клеточный осадок оттаивали, суспендировали в буферном растворе для лизиса (1 мM этилендиаминтетраацетат (EDTA), 150 мM хлорид натрия, 50 мM трис(гидроксиметил)аминометан (Tris), 1% полиэтиленгликоля моно(тетраметилбутанол)фениловый эфир (Triton X-100); pH 7,5) и гомогенизировали три раза в микрофлюидизаторе. Нерастворимый материал собирали путем центрифугирования, суспендировали в солевом буферном растворе (50 мМ хлорид натрия, 50 мМ Тris; рН 7,5) и еще раз собирали путем центрифугирования. Нерастворимый осадок (тельца включения) хранили при температуре -20°C.
Часть полученного нерастворимого осадка (~ 15 мг hGH) оттаивали, растворяли в 10 мл раствора, содержащего мочевину (8 М), цистеин (10 мM) и BisTris (20 мМ), перемешивали 60 минут при комнатной температуре, после чего разводили в 100 мл раствора, содержащего Tris (20 мМ) и глицерин (15%); pH 8,5. Для ренатурации эту смесь держали при температуре 4°C в течение суток, затем центрифугировали и наносили на колонку объемом 5 мл с Q-сефарозой XL, уравновешенную буферным раствором А, содержащим BisTris (20 мМ); pH 7,0. Связавшиеся белки элюировали в солевом/рН градиенте (0-100%) буферным раствором B, содержащим хлорид натрия (50 мM), BisTris (20 мМ); pH 5. Полученные с колонки фракции анализировали путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RP-HPLC); фракции, содержавшие ренатурированный hGH, объединяли и хранили при температуре -20°C.
Пример 6
К N-концу ренатурированного очищенного человеческого гормона роста (hGH) присоединяли полиэтиленгликоль по следующему протоколу. Вначале 30 мг hGH растворяли в растворе ацетата натрия (20 мМ; pH 4,5) до концентрации 5 мг/мл. Прибавляли 40 мг полиэтиленгликоля-пропионового альдегида с молекулярной массой 10 кДа и затем 8 мг цианборгидрида натрия. Реакционную смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. Через 16 часов проводили очистку полученного ПЭГилированного человеческого гормона роста, используя колонку HiTrap объемом 5 мл с Q-сефарозой.
Пример 7
Микросферы из поли(лактид-ко-гликолид)а (PLGA), нагруженные глюкагоноподобным пептидом 1 (GLP-1), с гидрофобным противоионом получали следующим образом. Вначале 30 мг конъюгата полиэтиленгликоля с молекулярной массой 5 кДа и глюкагоноподобного пептида 1 (PEG-GLP-1) растворяли в 2 мл дихлорметана. Затем прибавляли 50 мкл раствора памоевой кислоты (50 мг/мл в диметилформамиде [DMF]). После этого к раствору пептида прибавляли 170 мг PLGA 502 и с помощью мешалки типа «Vortex» перемешивали до тех пор, пока смесь не становилась прозрачной. Прибавляли 5 мл агента, стабилизирующего эмульсию (1%-ный поливиниловый спирт), и полученную смесь тут же перемешивали на максимальной скорости с помощью миксера Vortex-Genie в течение 7-8 секунд. Образовавшуюся эмульсию сразу соединяли, быстро перемешивая, с 100 мл 0,3%-ного винилового спирта и через 10 минут прибавляли 150 мл 2%-ного изопропанола. Полученную суспензию перемешивали в течение 3-12 часов, чтобы растворитель испарился и произошло отверждение микросфер. Полученные микросферы отделяли путем отстаивания, промывали очищенной водой (три раза по 200 мл) и лиофилизировали. Для получения микросфер с GLP-1 и памоевой кислотой использовали различные полимеры PLGA (например, PLGA 502 для получения препарат, вводимого раз в неделю, или PLGA 753 для получения препарата, вводимого раз в месяц).
Пример 8
Чтобы проверить включение медицинского активного агента и гидрофобного иона в микросферы, нагруженные микросферы вначале растворяли в ацетонитриле, затем осаждали полимер путем разведения полученного раствора в воде. Отделяли супернатант и анализировали его путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RP-HPLC). Этот анализ показал, что микросферы, нагруженные PEG-GLP-1 и включающие памоевую кислоту, содержали от 2% до 18% медицинского активного агента (PEG-GLP-1) и около 0,3-0,5% памоевой кислоты. Таким образом, результаты анализа RP-HPLC подтверждали включение памоевой кислоты в микросферы.
Пример 9
Определяли размер микросфер с помощью анализатора размеров частиц Beckman. Средний диаметр полученных частиц составлял от 20 до 45 мкм; частицы такого размера вполне можно вводить подкожно с помощью шприца с иглой калибра 27. При изучении частиц с помощью светового микроскопа было обнаружено, что они имеют ровную сферическую форму с минимальными изменениями или включениями на поверхности. У частиц по данному изобретению было меньше поверхностных изменений и включений, нежели у обычных частиц, содержащих медицинские активные агенты. На фиг. 7A представлена микрофотография, полученная с помощью светового микроскопа, микросфер из PLGA 502, нагруженных PEG-GLP-1 с памоевой кислотой. Размеры частиц, которые можно видеть на фиг. 7A, характеризуются D10 = 16 мкм, D50 = 33 мкм, D90 = 50 мкм. На фиг. 7В представлена микрофотография, полученная с помощью светового микроскопа, микросфер из PLGA 502, нагруженных конъюгатами полиэтиленгликоль-инсулин и полиэтиленгликоль-глюкагоноподобный пептид 1 с памоевой кислотой (премикс). Размеры частиц, которые можно видеть на фиг. 7В, характеризуются D10 = 18 мкм, D50 = 30 мкм, D90 = 42 мкм. Полученные значения размеров частиц группируются преимущественно вблизи диаметра, позволяющего вводить их с помощью шприца.
Пример 10
Чтобы изучить первоначальный всплеск концентрации активного агента при его высвобождении, для получения микросфер брали по 170 мг различных полимеров PLGA, 30 мг конъюгата глюкагоноподобного пептида 1 с полиэтиленгликолем (PEG-GLP-1) и 50 мкл раствора памоевой кислоты (50 мг/мл в диметилформамиде [DMF]). Для контроля микросферы получали, взяв также PLGA и PEG-GLP-1 и либо в присутствии 50 мкл DMF, либо без него. Микросферы после лиофилизации суспендировали в 0,4%-ном поливиниловом спирте, содержащем 0,05% азида натрия, и инкубировали при температуре 37°C при роторном перемешивании в горизонтальной плоскости. Через 24 часа полученную суспензию центрифугировали и супернатант анализировали путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RP-HPLC); при этом количество высвобождающегося ПЭГилированного пептида определяли с помощью стандартных кривых. В таблице 1 представлены данные о количестве высвободившегося ПЭГилированного пептида, в процентах относительно суммарного его количества, исходно присутствовавшего в микросферах. При лечении больных, как правило, желательно, чтобы первоначальный всплеск концентрации активного агента был как можно меньше. Судя по данным, представленным в таблице 1, памоевая кислота сводит к минимуму первоначальный всплеск концентрации активного агента при высвобождении PEG-GLP-1 из микросфер, полученных с использованием полимеров PLGA с молекулярной массой около 12-18 кДа (PLGA 502 и PLGA 752). В случае микросфер из PLGA 503 памоевая кислота усиливала первоначальный всплеск концентрации активного агента при его высвобождении из этих микросфер. Из таблицы 1 также следует, что изменение в первоначально высвобождающемся количестве активного агента определяется не растворителем (диметилформамидом), а памоевой кислотой.
Таблица 1. Влияние памоевой кислоты на относительное количество активного агента, первоначально высвобождающегося из микросфер, полученных с использованием различных полимеров PLGA
PLGA | Без добавок | Памоевая кислота + DMF |
DMF |
502 | 24,5 | 1,2 | 15,4 |
503 | 0 | 8,5 | 0 |
752 | 24 | 4,6 | 18,2 |
753 | 0 | 0 | 0 |
Пример 11
Чтобы изучить контролируемое высвобождение активного агента, для получения микросфер брали по 170 мг различных полимеров PLGA, 30 мг конъюгата глюкагоноподобного пептида 1 с полиэтиленгликолем (PEG-GLP-1) и 50 мкл раствора памоевой кислоты (50 мг/мл в диметилформамиде [DMF]). Для контроля микросферы получали, взяв также PLGA и PEG-GLP-1 и либо в присутствии 50 мкл DMF, либо без него. Микросферы после лиофилизации суспендировали в 0,4%-ном поливиниловом спирте, содержащем 0,05% азида натрия, и инкубировали при температуре 37°C при роторном перемешивании в горизонтальной плоскости. Через определенные промежутки времени суспензию центрифугировали и супернатант анализировали путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RP-HPLC); при этом количество высвобождающегося ПЭГилированного пептида определяли с помощью стандартных кривых. На фиг. 8 и 9 изображены графики, представляющие результаты изучения контролируемого высвобождения активного агента из микросфер. Для построения этих графиков брали значения количества (в процентах) высвободившегося ПЭГилированного пептида относительно суммарного его количества, исходно присутствовавшего в микросферах. На фиг. 8 и 9 видно, что памоевая кислота сводит к минимуму первоначальный всплеск концентрации высвобождающегося PEG-GLP-1, но мало влияет на окончательный профиль высвобождения. Время полного высвобождения активного агента из микросфер зависело главным образом от гидрофобности полимера PLGA. В PLGA 502 соотношение лактида и гликолида составляет 50:50, а в PLGA 752 это соотношение 75:25 (лактид/гликолид). Чем это отношение больше, тем гидрофобнее полимер PLGA. Соответственно, в случае PLGA 752 для высвобождения PEG-GLP-1 требуется больше времени, чем в случае PLGA 502.
Пример 12
Для определения сродства связывания ПЭГилированного глюкагоноподобного пептида 1 (PEG-GLP-1) с рецептором GLP-1 in vitro использовали биосенсорную систему анализа межмолекулярных взаимодействий Biacore (GE Healthcare). Рецептор, связывающий GLP-1, ковалентно иммобилизовали на поверхности биосенсора, на которую затем наносили ПЭГилированный GLP-1 либо GLP-1 сам по себе. Константа диссоциации (KD) при связывании с рецептором GLP-1 для PEG(5 кДа)-GLP-1(вариант с цистеином) получилась 1,6 мкМ, а для интактного GLP-1 она составила 1,0 мкМ. Константа равновесия для PEG(5 кДа)-GLP-1(присоединение к N-концу) не определялась – вероятно, из-за того, что взаимодействие между рецептором и пептидом, несущим на N-конце молекулу полиэтиленгликоля, слишком слабое. Присоединение полиэтиленгликоля к С-концу GLP-1 не влияло существенно на удельную активность этого пептида, тогда как присоединение полиэтиленгликоля к N-концу, по всей видимости, мешает связыванию с рецептором.
Пример 13
Определяли биологическую активность конъюгатов глюкагоноподобного пептида 1 и полиэтиленгликоля in vitrо, используя клетки линии CHO-K1/Gα15 и отслеживая связывание GLP-1 с его рецептором по индуцируемой GLP-1 зависимой от концентрации стимуляции внутриклеточной мобилизации кальция. Перед стимуляцией агонистом рецептора GLP-1 клетки нагружали реагентами аналитического набора «Calcium-4». Изменения внутриклеточной концентрации кальция измеряли с помощью спектрофотометра FlexStation. Строили график зависимости значений флуоресценции в относительных единицах (RFU) от логарифма суммарной дозы (5-кратное разведение) GLP-1. В таблице 2 приведены значения полумаксимальной эффективной концентрации (EC50) – концентрации, при которой достигается 50% наибольшей активности. Чем меньше величина EC50, тем больше активность. Оказалось, что GLP-1, несущий молекулу полиэтиленгликоля на С-конце, обладал почти такой же активностью, что и не модифицированный пептид GLP-1, что согласовалось с результатами, полученными с помощью биосенсорной системы Biacore в Примере 12. Наличие молекулы полиэтиленгликоля с молекулярной массой 5 кДа на С-конце GLP-1 не влияло существенно на активность пептида. У пептидов, несущих полиэтиленгликоль на N-конце, удельная активность была значительно ниже, чем у GLP-1 с полиэтиленгликолем на С-конце. Замена N-концевого полиэтиленгликоля на менее крупный (2 кДа вместо 5 кДа) не влияла существенно на активность GLP-1.
Таблица 2. Связывание GLP-1 с его рецептором
Соединение | EC50(M) |
GLP-1 (7-36) | 3,80 x 10-7 |
PEG(5 кДa) -Cys(37)-GLP-1 | 3,36 x 10-7 |
N-концевой PEG(5 кДa)-GLP-1 | 1,3 x 10-5 |
N-концевой PEG (2 кДa) -GLP-1 | 3,41 x 10-5 |
Пример 14
Были получены микросферы, несущие двойной «груз»: конъюгат глюкагоноподобногопептида 1 с полиэтиленгликолем (PEG-GLP-1) и конъюгат инсулина с полиэтиленгликолем (PEG-I); эти микросферы содержали также памоевую кислоту. Для их получения использовали экстракцию растворителем стабилизированной эмульсии масло/вода и испарение растворителя. Масляная фаза состояла из 170 мг полимера PLGA, 10 мг PEG-I, 20 мг PEG-GLP-1 и 2,5 мг памоевой кислоты (из исходного раствора памоевой кислоты 50 мг/мл в DMF), растворенных в 2 мл дихлорметана. Масляную фазу эмульгировали путем встряхивания с 5 мл 1%-ного (масса/объем) поливинилового спирта; в эту первичную эмульсию прибавляли 100 мл 0,3%-ного поливинилового спирта при перемешивании со скоростью 300 об/мин. Приблизительно через 10 минут прибавляли 150 мл 2%-ного изопропилового спирта (IPA) и полученную суспензию перемешивали, чтобы способствовать испарению растворителя. Через 3 часа отвержденные микросферы промывали очищенной водой (три раза по 200 мл) и лиофилизировали.
Пример 15
Для фармакокинетического исследования продолжительностью 20 суток использовали самцов крыс линии Sprague Dawley. Животным (по 6 особей в группе) вводили путем подкожных инъекций микросферы, содержащие либо ПЭГилированный глюкагоноподобный пептид (PEG-GLP-1), либо PEG-GLP-1 и ПЭГилированный инсулин (PEG-I), которые смешивали предварительно (премикс). И те, и другие микросферы содержали также памоевую кислоту и PLGA 502. Дополнительный контроль включал группу крыс, получавших плацебо, которым служил только разбавляющий раствор (1% карбоксиметилцеллюлоза натрия, 5% D-маннит и 1% полисорбат-20). Определяли профиль высвобождения указанных активных агентов in vivo, для чего у подопытных животных в определенные моменты времени брали образцы плазмы крови и анализировали их путем твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), используя набор для определения GLP-1 производства EM Millipore. На фиг. 10 и 11 изображены результаты фармакокинетического анализа глюкагоноподобного пептида 1 и инсулина в плазме крови крыс после введения им микросфер по данному изобретению. В обоих случаях высвобождение ПЭГилированного пептида (GLP-1 либо инсулина) in vivo характеризовалось наличием максимума концентрации приблизительно на 17-е сутки. Добавление PEG-I к GLP-1 в составе микросфер не влияло существенно на профиль высвобождения GLP-1. Из микросфер, содержавших смесь (премикс) этих двух агентов, инсулин высвобождался примерно в то же время, что и GLP-1. Таким образом, как микросферы, содержавшие один активный агент, так и микросферы, содержавшие два активных агента, характеризовались примерно одинаковым временем их высвобождения.
Пример 16
Получали также микросферы из PLGA, содержащие энфувиртид и памоевую кислоту, используя экстракцию растворителем стабилизированной эмульсии масло/вода и испарение растворителя. Энфувиртид не ПЭГилировали. Масляная фаза состояла из 170 мг PLGA 502, 30 мг энфувиртида, 8 мг памоевой кислоты и 2 мл дихлорметана. Масляную фазу эмульгировали путем встряхивания с 5 мл 1%-ного (масса/объем) поливинилового спирта; в эту первичную эмульсию прибавляли 100 мл 0,3%-ного поливинилового спирта при перемешивании со скоростью 300 об/мин. Приблизительно через 10 минут прибавляли 150 мл 2%-ного изопропилового спирта (IPA) и полученную суспензию перемешивали, чтобы способствовать отверждению микросфер. Через 3 часа отвержденные микросферы отфильтровывали, промывали большим объемом дважды дистиллированной воды и лиофилизировали. Вторую партию микросфер получали так, как описано выше, за тем исключением, что в смесь не добавляли памоевую кислоту. Анализ распределения частиц по размерам показал, что микросферы с энфувиртидом, полученные с памоевой кислотой, отличались большей гомогенностью (средний размер 28 мкм; S.D. 9,5 мкм), нежели микросферы с энфувиртидом, полученные без памоевой кислоты (средний размер 32,75 мкм; S.D. 34, 07 мкм).
Пример 17
Были получены препараты in situ, содержащие PLGA, PEG-GLP-1, памоевую кислоту и N-метилпирролидон (NMP). Для этого вначале 340 мг PLGA (PLGA 503, PLGA 752 или же PLGA 753) растворяли в 1 мл N-метилпирролидона. Затем прибавляли 30 мг PEG-GLP-1 вместе с 2,5 мг памоевой кислоты (из исходного раствора 200 мг/мл в диметилсульфоксиде (DMSO)). Смесь перемешивали путем вращения сосуда до тех пор, пока она не становилась прозрачной. Для высвобождения активного агента каждый раствор помещали в кассету для диализа Slide-A-lyzer (порог отсечения по молекулярной массе 3,5 кДа) и суспендировали в химическом стакане в 900 мл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS), содержащего 0,05% полисорбата. Диализный буферный раствор осторожно перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Через 16 часов при комнатной температуре в кассетах образовывался осадок и поверх него слой жидкости. Жидкость и твердую фазу разделяли и определяли содержание PEG-GLP-1 путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RP-HPLC). По расчетам, высвобождение составило 11% в случае использования PLGA 503, 62% в случае PLGA 752 и 40% в случае PLGA 753. Очевидно, на высвобождение активного агента влияла гидрофобность полимера PLGA.
Пример 18
Были получены препараты in situ, содержащие PLGA, PEG-GLP-1, памоевую кислоту и смесь растворителей, одобренных Управлением по контролю качества пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств США (FDA). Для этого вначале 340 мг PLGA 752 растворяли в 1 мл смеси, содержавшей 50% N-метилпирролидона и 50% бензилбензоата, или же смеси, содержавшей 50% диметилсульфоксида (DMSO) и 50% бензилбензоата. Затем прибавляли 30 мг PEG-GLP-1 вместе с 2,5 мг памоевой кислоты (из исходного раствора в диметилсульфоксиде 200 мг/мл). Смесь перемешивали путем вращения сосуда до тех пор, пока она не становилась прозрачной. Для высвобождения активного агента каждый раствор помещали в кассету для диализа Slide-A-lyzer (порог отсечения по молекулярной массе 3,5 кДа) и суспендировали в химическом стакане в 900 мл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS), содержащего 0,05% полисорбата. Через 16 часов при комнатной температуре в кассетах образовывался осадок и поверх него слой жидкости. Жидкость и твердую фазу разделяли и определяли содержание PEG-GLP-1 путем высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RP-HPLC). По расчетам, высвобождение составило в случае смеси диметилсульфоксида с бензилбензоатом 2,6%, а в случаем смеси N-метилпирролидона с бензилбензоатом 0,2%. Диметилсульфоксид - более полярное соединение, чем N-метилпирролидон. Желаемую скорость высвобождения в зависимости от режима введения – раз в неделю или раз в месяц - можно подбирать на основе гидрофобности и концентрации PLGA, смешиваемости растворителей с водой и/или добавления памоевой кислоты.
Пример 19
Примеры 1-18 осуществили также, используя в качестве активного агента вместо GLP-1, инсулина и/или энфувиртида человеческий гормон роста, инсулин, энфувиртид, гормон околощитовидной железы, фрагмент гормона околощитовидной железы, октреотид или другие медицинские активные агенты. Примеры по данному изобретению также включали получение микросфер и композиций с органическими растворителями для любой из композиций из примеров 1-19. В этих примерах был продемонстрирован отличный концентрационный профиль и другие свойства, по которым композиции и способы по данному изобретению превосходят обычные способы и композиции.
В настоящем описании с целью пояснения приведены многие детали, чтобы обеспечить понимание различных примеров предлагаемой технологии. Специалистам в данной области техники должно быть ясно, однако, что определенные примеры можно осуществить на практике и без некоторых из этих деталей или же с дополнительными деталями.
Специалисту в данной области техники по прочтении описания нескольких примеров будет понятно, что можно использовать различные модификации, альтернативные и эквивалентные конструкции без отступления от сущности данного изобретения. Ряд хорошо известных в данной области техники процессов и элементов не описаны в настоящем документе во избежание затруднения понимания данного изобретения. Также подробности какого-либо конкретного примера не обязательно имеются в вариантах данного примера или они могут быть включены в другие примеры.
Там, где в настоящем документе приводятся диапазоны значений, подразумевается, что, если из контекста не следует иного, данное описание включает также каждое из промежуточных значений между верхней и нижней границами указанного диапазона до десятой доли его нижней границы. Настоящим описанием охватываются также каждый из более узких диапазонов между любым из указанных значений и промежуточных значения данного диапазона. Верхняя и нижняя границы этих более узких диапазонов могут независимо включаться или не включаться в данный диапазон, и всякий диапазон, одна, обе или ни одна из границ которого входит в более узкий диапазон, тоже входит в объем данного изобретения с учетом исключения из данного диапазона любой конкретно указанной его границы. Также в тех случаях, когда приведенный диапазон включает одну или обе границы, в объем данного изобретения входят диапазоны, не включающие одну или обе из этих включенных границ.
В настоящем документе и в прилагаемой формуле изобретения единственное число определенного и неопределенного артиклей “a”, “an” и “the” включают значение множественного числа, если из контекста не явствует иное. Так, например, когда речь идет о «способе», подразумевается множество таких способов и когда речь идет о «белке», подразумевается один или более белков и их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники и т.п. Данное изобретение описано в настоящем документе в деталях с целью ясности изложения и его понимания. Однако следует иметь в виду, что в пределах объема прилагаемой формулы изобретения возможно осуществлять определенные изменения и модификации.
Claims (75)
1. Микросфера для контролируемого высвобождения белка, которая содержит:
биоразлагаемый полимер, выбранный из группы, состоящей из полилактида; полигликолида; поли(d,1-лактид-со-гликолида); поликапролактона; полиортоэфира; сополимер полиэфира и простого полиэфира; и сополимер полилактида и полиэтиленгликоля; и
белковую смесь, выбираемую из группы, состоящей из: конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты; белок и гидрофобный анион органической кислоты; их комбинации, где органическая кислота включает памовую кислоту, диоктилсульфоянтарную кислоту, фуроевую кислоту или их смеси;
и где микросфера формируется способом, включающим:
добавление органической кислоты к конъюгату белок-полиэтиленгликоль или белку в несмешивающемся с водой растворителе в органической фазе с образованием несмешивающегося с водой раствора, причем добавление происходит без присутствия воды.
2. Микросфера по п. 1, в которой белок в конъюгате белок-полиэтиленгликоль или белок сам по себе представляет собой человеческий гормон роста.
3. Микросфера по п. 1, в которой белок в конъюгате белок-полиэтиленгликоль или белок сам по себе является глюкагоноподобным пептидом 1.
4. Микросфера по п. 3, которая дополнительно содержит конъюгат инсулин-полиэтиленгликоль.
5. Микросфера по п. 1, в которой белок в конъюгате белок-полиэтиленгликоль или белок сам по себе выбирают из группы, состоящей из инсулина, гормона околощитовидной железы, фрагмента гормона околощитовидной железы, энфувиртида и октреотида.
6. Микросфера по п. 1, в которой белковая смесь содержит гидрофобный анион органической кислоты и этот гидрофобный анион органической кислоты представляет собой анион жирной кислоты, фосфолипидный анион, полистиролсульфонат-ион или их смеси.
7. Микросфера по п. 6, в которой гидрофобный анион представляет собой фосфолипидный анион, причем фосфолипид является фосфатидилхолином, фосфатидилсерином, фосфатидилинозитом, фосфатидилэтаноламином, фосфохолином или их смесями.
8. Микросфера по п. 1, в которой белковая смесь содержит конъюгат белок-полиэтиленгликоль и полиэтиленгликоль в конъюгате белок-полиэтиленгликоль представляет собой метоксиполиэтиленгликольальдегид.
9. Микросфера по п. 1, в которой белковая смесь содержит гидрофобный анион органической кислоты и органическая кислота является памоевой кислотой, а гидрофобный анион является памоат-ионом.
10. Микросфера по п. 1, в которой белковая смесь содержит конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты, причем молярное отношение гидрофобный анион органической кислоты:конъюгат белок-полиэтиленгликоль составляет от 1:1 до 11:1.
11. Микросфера по п. 1, в которой белковая смесь содержит конъюгат белок-полиэтиленгликоль и конъюгат белок-полиэтиленгликоль является моноПЭГилированным.
12. Микросфера по п. 1, в которой биоразлагаемый полимер является поли(d,1-лактид-ко-гликолидом).
13. Микросфера по п. 1, в которой биоразлагаемый полимер имеет молекулярную массу от 7000 Да до 17 000 Да.
14. Способ получения соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль с повышенной гидрофобностью, включающий:
- получение водного белкового раствора, содержащего белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН;
- взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате которого образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль; и
- протонирование аминогруппы в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет органической аминокислоты в органической фазе, а не в водной фазе, причем в результате этого протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион, из-за чего увеличивается гидрофобность соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль.
15. Способ по п. 14, в котором взаимодействие полиэтиленгликоля с белком представляет собой образование связи с участием аминогруппы, амидной связи, эфирной связи или дисульфидной связи между молекулой белка и молекулой полиэтиленгликоля или присоединение полиэтиленгликоля, способного к взаимодействию с тиоловой группой, к остатку цистеина в белке.
16. Способ получения микросферы, обеспечивающей контролируемое высвобождение активного агента, которая содержит соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, который включает:
- получение водного белкового раствора, содержащего белок и буферный раствор, обеспечивающий определенный рН;
- взаимодействие полиэтиленгликоля с белком, в результате которого образуется конъюгат белок-полиэтиленгликоль;
- протонирование аминогруппы в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет органической аминокислоты в несмешивающемся с водой растворителе без присутствия воды для образования несмешивающегося с водой раствора, причем в результате этого протонирования образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион;
- смешивание соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе с биоразлагаемым полимером, в результате чего образуется смесь, в которой:
благодаря наличию гидрофобного аниона органической кислоты в составе соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль увеличивается растворимость этой соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе;
биоразлагаемый полимер выбран из группы, состоящей из полилактида; полигликолида; поли(d,1-лактид-со-гликолида); поликапролактона; полиортоэфира; сополимер полиэфира и простого полиэфира; и сополимер полилактида и полиэтиленгликоля; и
органическая кислота включает памовую кислоту, диоктилсульфоянтарную кислоту, фуроевую кислоту или их смеси;
- эмульгирование смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера в водном растворе, в результате чего образуется эмульгированная смесь; и
- отверждение эмульгированной смеси соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль и биоразлагаемого полимера, в результате чего образуются микросферы, обеспечивающие контролируемое высвобождение активного агента.
17. Композиция для контролируемого высвобождения белка, содержащая:
биоразлагаемый полимер;
органический растворитель; и
белковую смесь, выбираемую из группы, состоящей из: конъюгат белок-полиэтиленгликоль и гидрофобный анион органической кислоты; белок и гидрофобный анион органической кислоты; их комбинации, причем указанная композиция представлена раствором или суспензией, где композиция не содержит воды.
18. Композиция по п. 17, которая представляет собой раствор.
19. Композиция по п. 17, которая представляет собой суспензию.
20. Композиция по п. 17, в которой белок, входящий в состав конъюгата белок-полиэтиленгликоль, или белок сам по себе выбирают из группы, состоящей из человеческого гормона роста, глюкагоноподобного пептида 1, инсулина, гормона околощитовидной железы, фрагмента гормона околощитовидной железы, энфувиртида и октреотида.
21. Композиция по п. 17, в которой органическая кислота является памоевой кислотой, диоктилсульфоянтарной кислотой (докузатом), пирослизевой кислотой или их смесью.
22. Композиция по п. 17, в которой белковая смесь содержит белок и гидрофобный анион органической кислоты, который представляет собой анион жирной кислоты, фосфолипидный анион, полистиролсульфонат-ион или их смесь.
23. Композиция по п. 17, в которой органический растворитель представляет собой N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль-400 или их смесь.
24. Композиция по п. 17, в которой биоразлагаемый полимер выбирают из группы, состоящей из полилактида, полигликолида, поли(d,1-лактид-ко-гликолида); поликапролактона, полиортоэфира, сополимера сложного и простого полиэфиров; сополимера полилактида и полиэтиленгликоля.
25. Композиция по п. 17, в которой биоразлагаемый полимер представляет собой поли(d,1-лактид-ко-гликолид).
26. Композиция по п. 17, в которой биоразлагаемый полимер имеет молекулярную массу от 24 000 Да до 38 000 Да.
27. Композиция по п. 17, в которой биоразлагаемый полимер содержит 50% или меньше лактида и 50% или больше гликолида.
28. Способ получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, включающий:
- получение конъюгата белок-полиэтиленгликоль, не содержащего соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль;
- смешивание биоразлагаемого полимера, конъюгата белок-полиэтиленгликоль, органической кислоты и органического растворителя в смесь, где смесь не содержит воды;
- образование соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащей конъюгат белок-полиэтиленгликоль и анион органической кислоты, где анион имеет коэффициент распределения logP вода-октанол больше 1; и
- перемешивание полученной смеси, в результате чего образуется раствор или суспензия.
29. Способ по п. 28, в котором органический растворитель представляет собой N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль-400 или их смесь.
30. Способ по п. 28, в котором:
- конъюгат белок-полиэтиленгликоль – это первый конъюгат белок-полиэтиленгликоль;
- конъюгат белок-полиэтиленгликоль является конъюгатом глюкагоноподобного пептида 1 и полиэтиленгликоля;
- смешивание также включает смешивание второго конъюгата белок-полиэтиленгликоль с биоразлагаемым полимером, конъюгатом белок-полиэтиленгликоль, органической кислотой и органическим растворителем; и
- второй конъюгат белок-полиэтиленгликоль является конъюгатом инсулин-полиэтиленгликоль.
31. Способ по п. 28, в котором при перемешивании смеси образуется раствор.
32. Способ по п. 28, в котором при перемешивании смеси образуется суспензия.
33. Способ получения раствора или суспензии биоразлагаемого полимера и соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль, включающий:
- растворение биоразлагаемого полимера в органическом растворителе с образованием смеси;
- прибавление конъюгата белок-полиэтиленгликоль и органической кислоты к полученной смеси, где смесь не содержит воду;
- протонирование аминогрупп в конъюгате белок-полиэтиленгликоль за счет органической кислоты, в результате чего образуется соль конъюгата белок-полиэтиленгликоль, содержащая гидрофобный анион, где:
гидрофобный анион связан с органической кислотой, и
гидрофобный анион имеет коэффициент распределения logP вода-октанол больше 1; и
- перемешивание полученной смеси с образованием раствора или суспензии.
34. Способ по п. 33, который не включает растворение соли конъюгата белок-полиэтиленгликоль в органическом растворителе.
35. Способ по п. 33, в котором конъюгат белок-полиэтиленгликоль содержит белок, выбираемый из группы, состоящей из человеческого гормона роста, глюкагоноподобного пептида 1, инсулина, гормона околощитовидной железы, фрагмента гормона околощитовидной железы, энфувиртида и октреотида.
36. Способ по п. 33, в котором органическая кислота представляет собой памоевую кислоту, диоктилсульфоянтарную кислоту (докузат), пирослизевую кислоту или их смеси.
37. Способ по п. 33, в котором органический растворитель представляет собой N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, пропиленгликоль, этилбензоат, бензилбензоат, триацетин, полиэтиленгликоль-400 или их смесь.
38. Способ по п. 33, в котором конъюгат белок-полиэтиленгликоль содержит:
- амидную связь, эфирную связь или дисульфидную связь между полиэтиленгликолем и белком или
- полиэтиленгликоль, способный к взаимодействию с тиоловой группой, присоединен к остатку цистеина в белке.
39. Способ по п. 33, в котором при перемешивании смеси образуется раствор.
40. Способ по п. 33, в котором при перемешивании смеси образуется суспензия.
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462086294P | 2014-12-02 | 2014-12-02 | |
US62/086,294 | 2014-12-02 | ||
US14/954,701 | 2015-11-30 | ||
US14/954,591 | 2015-11-30 | ||
US14/954,591 US10046058B2 (en) | 2014-12-02 | 2015-11-30 | Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates |
US14/954,701 US20160151511A1 (en) | 2014-12-02 | 2015-11-30 | Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity |
PCT/US2015/063102 WO2016089818A1 (en) | 2014-12-02 | 2015-12-01 | Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017122609A RU2017122609A (ru) | 2019-01-09 |
RU2017122609A3 RU2017122609A3 (ru) | 2019-07-17 |
RU2712644C2 true RU2712644C2 (ru) | 2020-01-30 |
Family
ID=56078492
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017122609A RU2712644C2 (ru) | 2014-12-02 | 2015-12-01 | Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20160151511A1 (ru) |
EP (2) | EP3226844A4 (ru) |
JP (1) | JP2017536387A (ru) |
KR (1) | KR20170086049A (ru) |
CN (1) | CN106999443A (ru) |
AU (1) | AU2015355180A1 (ru) |
BR (1) | BR112017011531A2 (ru) |
CA (1) | CA2966207A1 (ru) |
MX (1) | MX2017006594A (ru) |
RU (1) | RU2712644C2 (ru) |
WO (1) | WO2016089818A1 (ru) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2964463C (en) | 2014-10-22 | 2024-02-13 | Extend Biosciences, Inc. | Therapeutic vitamin d conjugates |
US9616109B2 (en) | 2014-10-22 | 2017-04-11 | Extend Biosciences, Inc. | Insulin vitamin D conjugates |
US20160151511A1 (en) * | 2014-12-02 | 2016-06-02 | Antriabio, Inc. | Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity |
US20180271792A1 (en) * | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Rezolute, Inc. | Oral delivery of physiologically active substances |
JP2021511785A (ja) | 2018-01-19 | 2021-05-13 | ペプジーン インコーポレーテッドPepgene Inc. | 組換えポリペプチド生産用n末端融合パートナーおよびこれを用いた組換えポリペプチドの生産方法 |
CN108465104A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-08-31 | 佛山实瑞先导材料研究院(普通合伙) | 一种生长激素控释包衣及其制备方法 |
CN109493923B (zh) * | 2018-12-18 | 2021-07-30 | 赣南师范大学 | 计算化合物在水和任意溶剂中分配常数的方法 |
JPWO2020251003A1 (ru) * | 2019-06-14 | 2020-12-17 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060228414A1 (en) * | 2003-07-15 | 2006-10-12 | Pr Phamaceuticals, Inc | Method for the preparation of controlled release formulations |
WO2008008363A1 (en) * | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Qps, Llc | Pharmaceutical compositions for sustained release delivery of peptides |
RU2436589C2 (ru) * | 2007-01-05 | 2011-12-20 | Ханми Холдингс Ко.,Лтд. | Инсулинотропный комплекс, в котором использован фрагмент иммуноглобулина |
US20120201873A1 (en) * | 2009-08-05 | 2012-08-09 | Pieris Ag | Controlled release formulations of lipocalin muteins |
Family Cites Families (61)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US362777A (en) * | 1887-05-10 | Two-wheeled vehicle | ||
US114835A (en) * | 1871-05-16 | Improvement in scroll-sawing machines | ||
US895013A (en) * | 1907-07-13 | 1908-08-04 | Charles F Hanington | Transom-operating mechanism. |
US2189363A (en) * | 1938-04-11 | 1940-02-06 | Kalous Mieczyslaw Joseph | Process and apparatus for working up nitrous gases to nitric acid |
US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
DE2433883C2 (de) * | 1973-07-20 | 1986-03-27 | Research Corp., New York, N.Y. | Verwendung von physiologisch aktiven Polypeptiden |
GB2209937B (en) * | 1987-09-21 | 1991-07-03 | Depiopharm S A | Water insoluble polypeptides |
CH683149A5 (fr) * | 1991-07-22 | 1994-01-31 | Debio Rech Pharma Sa | Procédé pour la préparation de microsphères en matériau polymère biodégradable. |
US5359030A (en) | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
US6191105B1 (en) | 1993-05-10 | 2001-02-20 | Protein Delivery, Inc. | Hydrophilic and lipophilic balanced microemulsion formulations of free-form and/or conjugation-stabilized therapeutic agents such as insulin |
US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
US6620413B1 (en) | 1995-12-27 | 2003-09-16 | Genentech, Inc. | OB protein-polymer chimeras |
US6753165B1 (en) | 1999-01-14 | 2004-06-22 | Bolder Biotechnology, Inc. | Methods for making proteins containing free cysteine residues |
AU1617399A (en) | 1997-12-05 | 1999-06-28 | Eli Lilly And Company | Glp-1 formulations |
PT1411075E (pt) | 1998-03-12 | 2008-08-05 | Nektar Therapeutics Al Corp | Método para a preparação de conjugados de polímeros |
DE19932157A1 (de) * | 1999-07-13 | 2001-01-18 | Pharmasol Gmbh | Verfahren zur schonenden Herstellung von hochfeinen Mikropartikeln und Nanopartikeln |
US6323311B1 (en) | 1999-09-22 | 2001-11-27 | University Of Utah Research Foundation | Synthesis of insulin derivatives |
EP1353701B1 (en) * | 2000-10-31 | 2011-12-21 | PR Pharmaceuticals, Inc. | Methods for producing compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
EP1404516A2 (en) | 2000-12-13 | 2004-04-07 | Purdue Research Foundation | Microencapsulation of drugs by solvent exchange |
US7053150B2 (en) | 2000-12-18 | 2006-05-30 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Segmented polymers and their conjugates |
TW593427B (en) | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
US20080026068A1 (en) * | 2001-08-16 | 2008-01-31 | Baxter Healthcare S.A. | Pulmonary delivery of spherical insulin microparticles |
EP1493748A1 (en) | 2002-04-11 | 2005-01-05 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptide chemically modified with polyethylene glycol |
ES2354609T3 (es) | 2002-07-24 | 2011-03-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polipéptido t20 pegilado. |
JP2006501820A (ja) | 2002-09-06 | 2006-01-19 | バイエル・フアーマシユーチカルズ・コーポレーシヨン | 修飾glp−1受容体アゴニストおよびそれらの薬理学的使用法 |
ATE361761T1 (de) | 2002-09-27 | 2007-06-15 | Hoffmann La Roche | Poly(ethylen glykol)-konjugate von insulinähnlichem wachstumfaktor bindenden protein-4 |
KR101177340B1 (ko) | 2003-01-06 | 2012-08-30 | 넥타르 테라퓨틱스 | 티올-선택성 수용성 중합체 유도체 |
AU2004231461B2 (en) | 2003-03-19 | 2009-11-12 | Eli Lilly And Company | Polyethelene glycol linked GLP-1 compounds |
BR122016021907B8 (pt) * | 2003-04-11 | 2021-07-27 | Antriabio Inc | conjugado de insulina-peg, microesfera de poli(lactídioco-glicolídio), formulação de liberação de droga, e uso |
CA2530136C (en) | 2003-06-26 | 2012-10-16 | Control Delivery Systems, Inc. | In-situ gelling drug delivery system |
EP1656115A4 (en) * | 2003-07-23 | 2009-07-08 | Pr Pharmaceuticals | COMPOSITIONS WITH CONTROLLED RELEASE |
KR101135244B1 (ko) | 2007-11-29 | 2012-04-24 | 한미사이언스 주식회사 | 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물 |
US20080026444A1 (en) | 2003-12-24 | 2008-01-31 | Shionogi & Co., Ltd. | Process For Producing Protein-Polymer Complex |
JP2008500275A (ja) | 2003-12-31 | 2008-01-10 | セントカー・インコーポレーテツド | N末端の遊離チオールを有する新規な組み換えタンパク質 |
JP2007517912A (ja) * | 2004-01-13 | 2007-07-05 | バソジェニックス ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 心脈管および腎臓の適応症のための制御放出cgrp送達組成物 |
KR20060029770A (ko) | 2004-10-04 | 2006-04-07 | 주식회사 펙스피어 | Glp-1의 선택적 peg 접합체 및 그 제조방법 |
ATE482724T1 (de) | 2005-05-13 | 2010-10-15 | Lilly Co Eli | Pegylierte glp-1-verbindungen |
EP2360170A3 (en) | 2005-06-17 | 2012-03-28 | Novo Nordisk Health Care AG | Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprinsing at least one non-native cysteine |
GB0513852D0 (en) | 2005-07-06 | 2005-08-10 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
CA2628241C (en) | 2005-11-07 | 2016-02-02 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability |
DK1984009T3 (da) | 2006-01-18 | 2013-01-28 | Qps Llc | Farmaceutiske sammensætninger med forbedret stabilitet |
CA2637565A1 (en) | 2006-01-18 | 2007-07-26 | Schering Corporation | Cannibinoid receptor modulators |
AU2007267798A1 (en) | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Ipsen Pharma S.A.S. | Methods for site-specific pegylation |
CN101573133B (zh) | 2006-07-31 | 2014-08-27 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | Peg化延长的胰岛素 |
EP2102355B1 (en) | 2006-12-14 | 2016-03-02 | Bolder Biotechnology, Inc. | Long acting proteins and peptides and methods of making and using the same |
US20120178914A1 (en) | 2009-09-25 | 2012-07-12 | Vybion, Inc. | Polypeptide modification |
GB0917072D0 (en) | 2009-09-29 | 2009-11-11 | Univ Ulster | Peptide analogues of glucagon for diabetes therapy |
US8604127B2 (en) | 2009-10-29 | 2013-12-10 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Conjugate of catechol-modified polyethylene glycol with protein or peptide and preparation method thereof |
WO2011163473A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility and stability in physiological ph buffers |
WO2012054882A1 (en) | 2010-10-21 | 2012-04-26 | Kci Licensing, Inc. | Debridement hand tool |
WO2012054861A1 (en) | 2010-10-22 | 2012-04-26 | Nektar Therapeutics | Glp-1 polymer conjugates having a releasable linkage |
KR101746686B1 (ko) | 2010-10-26 | 2017-06-15 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 글루카곤 유사 펩타이드―2(glp―2)약물 결합체 |
CN102786590A (zh) | 2011-05-19 | 2012-11-21 | 江苏豪森药业股份有限公司 | 分枝型peg修饰的glp-1类似物及其可药用盐 |
EP3412314A1 (en) | 2011-05-27 | 2018-12-12 | Baxalta GmbH | Therapeutic proteins conjugated to polysialic acid and methods of preparing same |
UA113626C2 (xx) * | 2011-06-02 | 2017-02-27 | Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії | |
US9309301B2 (en) | 2011-06-22 | 2016-04-12 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists |
US8936784B2 (en) * | 2011-10-17 | 2015-01-20 | Poly-Med, Inc. | Absorbable in situ gel-forming system, method of making and use thereof |
AR094821A1 (es) | 2012-07-25 | 2015-09-02 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada |
EP3043824B1 (en) | 2013-09-13 | 2022-07-06 | The Scripps Research Institute | Modified therapeutic agents and compositions thereof |
KR102455171B1 (ko) | 2013-12-18 | 2022-10-14 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 변형된 치료제, 스테이플드 펩티드 지질 접합체, 및 이의 조성물 |
US20160151511A1 (en) * | 2014-12-02 | 2016-06-02 | Antriabio, Inc. | Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity |
-
2015
- 2015-11-30 US US14/954,701 patent/US20160151511A1/en not_active Abandoned
- 2015-11-30 US US14/954,591 patent/US10046058B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2015-12-01 WO PCT/US2015/063102 patent/WO2016089818A1/en active Application Filing
- 2015-12-01 KR KR1020177014177A patent/KR20170086049A/ko unknown
- 2015-12-01 MX MX2017006594A patent/MX2017006594A/es unknown
- 2015-12-01 RU RU2017122609A patent/RU2712644C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-12-01 CA CA2966207A patent/CA2966207A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-01 JP JP2017528931A patent/JP2017536387A/ja not_active Ceased
- 2015-12-01 AU AU2015355180A patent/AU2015355180A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-01 CN CN201580065730.2A patent/CN106999443A/zh active Pending
- 2015-12-01 EP EP15864955.8A patent/EP3226844A4/en not_active Withdrawn
- 2015-12-01 BR BR112017011531A patent/BR112017011531A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2015-12-01 EP EP20166087.5A patent/EP3695831A1/en not_active Withdrawn
-
2018
- 2018-07-11 US US16/032,952 patent/US10702611B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060228414A1 (en) * | 2003-07-15 | 2006-10-12 | Pr Phamaceuticals, Inc | Method for the preparation of controlled release formulations |
WO2008008363A1 (en) * | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Qps, Llc | Pharmaceutical compositions for sustained release delivery of peptides |
RU2436589C2 (ru) * | 2007-01-05 | 2011-12-20 | Ханми Холдингс Ко.,Лтд. | Инсулинотропный комплекс, в котором использован фрагмент иммуноглобулина |
US20120201873A1 (en) * | 2009-08-05 | 2012-08-09 | Pieris Ag | Controlled release formulations of lipocalin muteins |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2017536387A (ja) | 2017-12-07 |
BR112017011531A2 (pt) | 2018-02-27 |
RU2017122609A (ru) | 2019-01-09 |
US10046058B2 (en) | 2018-08-14 |
US20160151511A1 (en) | 2016-06-02 |
EP3226844A1 (en) | 2017-10-11 |
CA2966207A1 (en) | 2016-06-09 |
WO2016089818A1 (en) | 2016-06-09 |
US10702611B2 (en) | 2020-07-07 |
EP3695831A1 (en) | 2020-08-19 |
RU2017122609A3 (ru) | 2019-07-17 |
CN106999443A (zh) | 2017-08-01 |
US20180318429A1 (en) | 2018-11-08 |
MX2017006594A (es) | 2017-09-01 |
US20160151510A1 (en) | 2016-06-02 |
EP3226844A4 (en) | 2018-06-20 |
KR20170086049A (ko) | 2017-07-25 |
AU2015355180A1 (en) | 2017-05-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2712644C2 (ru) | Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью | |
Cai et al. | Long-acting preparations of exenatide | |
KR101588066B1 (ko) | 단백질 및 펩티드 치료제의 경구 투여 방법 및 조성물 | |
US8642532B2 (en) | Excipients for protein stabilization | |
CN101903014B (zh) | 固体内核中包含生长激素的固体脂质微囊 | |
KR20070046791A (ko) | 안정성이 증가된 생체분자-함유 제형 | |
WO2017186073A1 (zh) | 缓释微粒的制备方法、制得的缓释微粒及其应用 | |
EP3434263B1 (en) | Method for preparing sustained release microparticle | |
KR20140109509A (ko) | 펩타이드의 지속 방출 전달을 위한 의약 조성물 | |
JP2013531034A (ja) | 持続型ヒト成長ホルモン結合体液状製剤 | |
EP3434262B1 (en) | Method for preparing sustained-release microgranules | |
JP6305555B2 (ja) | 血糖降下作用の有効成分を有する持続徐放性リポソームゲル組成物及びその製造方法 | |
Hristov et al. | Silica-coated nanoparticles with a core of zinc, L-arginine, and a peptide designed for oral delivery | |
EP0975334B1 (en) | Biodegradable microparticles for the sustained delivery of therapeutic drugs | |
CN115190802A (zh) | 包含至少胰岛淀粉素受体激动剂和glp-1受体激动剂的组合物 | |
KR20220020821A (ko) | 이중 glp1/2 아고니스트의 약학적 비경구 조성물 | |
CN102657871A (zh) | 一种口服缓释制剂、包载材料及制备方法 | |
KR20180097517A (ko) | 매우 안정된 인슐린 유사체의 중합체 용융물 내 캡슐화 | |
CN111329996A (zh) | 重组人生长激素的组合物和其制备方法 | |
US20160058878A1 (en) | Process for preparing a composition of pegylated proteins | |
RU2730848C2 (ru) | Способы пэгилирования по аминогруппе для получения сайт-специфичных конъюгатов белков | |
Neuhofer | Development of lipid based depot formulations using interferon-beta-1b as a model protein | |
Niloy et al. | Injectable systems for long-lasting insulin therapy | |
CN110063932A (zh) | 一种多肽蛋白类药物的缓释组合物制剂及其制备方法 | |
Parashar et al. | Preparation and Characterization of Polymeric Nanoparticles for Sustained Delivery of Insulin |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201202 |