CN106636446A - 对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 - Google Patents
对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106636446A CN106636446A CN201710122152.2A CN201710122152A CN106636446A CN 106636446 A CN106636446 A CN 106636446A CN 201710122152 A CN201710122152 A CN 201710122152A CN 106636446 A CN106636446 A CN 106636446A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pcr
- sample
- swab sample
- throat swab
- time quantitative
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/705—Specific hybridization probes for herpetoviridae, e.g. herpes simplex, varicella zoster
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法,包括以下步骤:(1)制备裂解液和PCR反应液;(2)将咽拭子样本或鼻咽拭子样本加入到含有步骤(1)中裂解液的PCR扩增管中,再加入磁珠到PCR扩增管中,振荡摇匀混合;(3)将步骤(2)中的PCR扩增管在80‑100℃高温处理10min后冷却到室温,然后在18‑28℃反应5‑10min;(4)将PCR扩增管瞬时离心后放入到磁力架中,待磁珠吸附到磁力架一侧后将上清吸出;(5)在PCR扩增管内加入配置好的PCR反应液,进行实时定量PCR反应;所述裂解液的成分为0‑2M的NaCl、0‑0.3%的Triton‑X和0‑0.2M的KCl,磁珠为市售的核酸提取使用的羟基磁珠,检测咽拭子样本不仅快速简便、高效实用,且不需核酸提取过程和离心机等设备,简化了操作过程,节约了时间和成本,能大量处理样本,操作检测时可防止污染。
Description
技术领域
本发明属于分子诊断生物学技术领域,具体涉及对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法。
背景技术
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应技术。该技术自从美国Cetus公司人类遗传室Kary Mullis及同事于1958年发明以来,相关的衍生技术就快速开发出来,并在微生物学,遗传病学和法医等领域中得到广泛应用。尤其在病原体检测方面,当知道某一病原体的一段基因时,根据该段基因设计特异性的引物然后进行PCR扩增,使其达到检测量,然后通过合适的检测手段,即可以确定样本中是否存在该病原体。
实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的,该技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团或荧光染料,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。与普通的PCR相比,荧光定量PCR技术检测具有特异性强,灵敏度高,重复性好,速度快,全封闭反应等优点,使其在医学、农学和临床检测学中得广泛使用。在进行荧光定量PCR检测时,首先要进行样本的核酸提取,目前核酸提取的方法主要有碱裂解法、层析柱法和磁珠法,前两种方法操作比较复杂且需要用离心机等大型设备;磁珠法操作简便,但存在多次洗脱操作导致核酸损失且存在污染风险,因此需要寻找不需要核酸提取直接PCR的方法对提高检测质量具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法,以克服现有检测技术的不足,为咽拭子样本或鼻咽拭子样本提供一种快速、简便、高效、实用的检测方法,不要核酸提取过程,简化了操作过程,节约了时间和成本,且能大量处理样本,操作检测时可防止污染。
为达到上述目标提供了对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的PCR的方法,包括以下步骤:
(1)制备裂解液和PCR反应液;
(2)将咽拭子样本或鼻咽拭子样本加入到含有步骤(1)中裂解液的PCR扩增管中,再加入磁珠到PCR扩增管中,振荡摇匀混合;
(3)将步骤(2)中的PCR扩增管在80-100℃高温处理10min后冷却到室温,然后在18-28℃反应5-10min;
(4)将PCR扩增管瞬时离心后放入到磁力架中,待磁珠吸附到磁力架一侧后将上清吸出;
(5)在PCR扩增管内加入配置好的PCR反应液,进行实时定量PCR反应;
所述步骤(1)中裂解液的成分为0-2M的NaCl、0-0.3%的Triton-X和0-0.2M的KCl。
所述步骤(2)样本与裂解液的体积比为1:3—1:10。
所述步骤(3)中的高温为100℃。
所述磁珠为市售的核酸提取使用的羟基磁珠,即超顺磁性核心及无机氧化硅的外壳,优选的,平均粒径为≤1000nm的单分散性羟基磁珠。
所有反应步骤都在同一个试管内进行,本发明所述方法可以手动操作以及机械自动化操作,且不要核酸提取过程,简化了操作过程,节约了时间以及成本。
本发明的有益效果是:为咽拭子样本或鼻咽拭子样本提供一种快速、简便、高效、实用的检测方法,不要核酸提取过程,简化了操作过程,节约了时间和成本,且能大量处理样本,操作检测时可防止污染。
附图说明
图1为实施例1的本发明方法应用于乙流临床样本的实时荧光定量PCR检测结果图,图中标号为1、2、3和4的四条曲线分别为1号样本、2号样本、3号样本和4号样本的实验结果;
图2为实施例2的本发明方法检测阴性的乙流咽拭子样本的敏感性结果图,图中标号为1、2、3和4的四条曲线分别为2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L的样本的实验结果;
图3为实施例3的本发明方法检测阴性的乙流咽拭子样本的重复性结果图,图中标号为1、2、3、4和5的五条曲线分别是5个孔内样本的实验结果;
图4为实施例5的本发明方法检测RSV的结果图,图中标号为1、2、3和4的四条曲线分别是2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L样本的检测结果;
图5为实施例5的广东华银医药科技有限公司的RSV核酸检测试剂盒(包含核酸提取试剂)检测RSV的结果图,图中标号为1、2、3和4的四条曲线分别是2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L样本的检测结果。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明,实施例提供的方案为优选方案,但不作为对本申请的限定,实施例中所用的PCR扩增仪器为Bio-RAD CFX96和ABI7500。
实施例1
本发明方法应用于乙流临床样本的实时荧光定量PCR检测
(1)配置成分为1MNaCl、0.01%Triton-X和0.01MKCl的裂解液100ml,按照磁珠和裂解液1:200的体积比加0.5ml磁珠到上述配好的裂解液中混匀,取4个相同的专用PCR管,每管分装80ul配置好的混有磁珠的裂解液;
(2)从绍兴疾控中心提供的2例乙流阳性和2例乙流阴性咽拭子四个样本中均取20ul分别加入到步骤(1)中的四个PCR管中分别作为1号样本、2号样本、3号样本和4号样本,盖好管盖;
(3)将步骤(2)中的四个PCR管放入在95℃中加热5min后室温(室温为18-28℃)放置10min;
(4)将步骤(3)中的四个PCR管放入到磁珠架上静置2min,然后用移液器在磁珠对侧吸弃液体,保留磁珠;
(5)在四个PCR管中均加入0.5ul(200U/ul)单位的逆转录酶和24.5ul的反应液(所述反应液包含浓度为30nmol/L的乙流的上下引物、30nmol/L乙流的探针、水和商业的一步法RT-QPCR试剂盒的buffer,推荐使用TAKARA和全式金公司的该试剂盒),封盖后涡旋振荡摇匀30s,确保磁珠和PCR反应混合均匀;
(6)将步骤(5)中的四个PCR管瞬时离心使PCR管中液体都在底部;
(7)将上述步骤(6)得到的四个PCR管放置在PCR扩增仪器(选用的为Bio-RADCFX96)中进行扩增,45℃,10min;95℃,10min;进行40-45循环的95℃,15S和60℃,45S,在60℃检测荧光信号。
实验结果如图1所示,1号、2号、3号和4号曲线分别为1号样本、2号样本、3号样本和4号样本的实验结果,结果表明,按照本实施例的方法进行操作,可以有效准确的检测出乙流的咽拭子样本。
实施例2
本发明方法的敏感性测试
用实施例1步骤(2)中的阴性的乙流咽拭子样本作为稀释液,将中国药品生物制品检定所的甲乙流国家标准中的乙流最低检测限参考品S2 2.0×106TCID50/L进行稀释,分别获得2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L的四个样本,利用与实施1相同的方法对以上四个稀释样本进行实时荧光PCR检测(选用ABI7500进行PCR扩增)。
实验结果如图2所示:图中标号为1、2、3和4的四条曲线分别为浓度为2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L的样本的实验结果,结果表明,本发明可检测出的乙流的最低浓度为2.0×102TCID50/L,符合国家参考品的要求最低检测2.0×103TCID50/L的浓度要求。
实施例3
本发明方法的荧光PCR检测的重复性测试
用实施例1中的阴性的乙流咽拭子样本作为稀释液,将中国药品生物制品检定所的甲乙流国家标准中的乙流最低检测限参考品S2 2.0×106TCID50/L进行稀释,获得2.0×103TCID50/L的样本。利用与实施1相同的方法对样本进行5孔复检实时荧光PCR检测(Bio-RAD CFX96进行扩增),图中标号为1、2、3、4和5的五条曲线分别是5个孔内样本的实验结果。
检测结果如图3和如下表:
结果表明,本发明方法的检测可重复。
实施例4
本发明方法检测乙流与上海之江核酸提取试剂盒以甲、乙型流感病毒联合测定试剂盒中检测乙流比较
取绍兴疾控中心给予的2例阳性的乙流咽拭子样本分别作为5号样本和6号样本,利用与实施例1相同的方法(Bio-RAD CFX96进行扩增)和上海之江核酸提取试剂(磁珠柱法)以及甲、乙型流感病毒联合测定试剂盒进行检测,
结果如下表:
结果表明,本方法检测的结果与上海之江试剂盒检测的结果无显著差异。
实施例5
本发明方法检测RSV与广东华银医药科技有限公司的RSV核酸检测试剂盒(包含核酸提取试剂)检测RSV的比较
用实施例1中的阴性的乙流的咽拭子样本(经广东华银医药科技有限公司的RSV核酸检测试剂盒检测RSV为阴性)作为稀释液,将绍兴疾控中心提供的RSV的2.0×105TCID50/L进行稀释,分别获得2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L的四个样本,利用与实施例1相同的方法(采用Bio-RAD CFX96进行扩增,其中引物和探针换成RSV的引物和探针)和广东华银医药科技有限公司的RSV核酸检测试剂盒(包含核酸提取试剂)对四个样本分别检测,结果如图4、图5和下表:
图4为本发明方法检测的结果,图4中的标号为1、2、3和4的四条曲线分别是2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L样本的检测结果。
图5为广东华银医药科技有限公司的RSV核酸检测试剂盒的检测结果,图5中的标号为1、2、3和4的四条曲线分别是2.0×104TCID50/L,2.0×103TCID50/L,2.0×102TCID50/L,2.0×101TCID50/L样本的检测结果。
Claims (4)
1.对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备裂解液和PCR反应液;
(2)将咽拭子样本或鼻咽拭子样本加入到含有步骤(1)中裂解液的PCR扩增管中,再加入磁珠到PCR扩增管中,振荡摇匀混合;
(3)将步骤(2)中的PCR扩增管在80-100℃高温处理10min后冷却到室温,然后在18-28℃反应5-10min;
(4)将PCR扩增管瞬时离心后放入到磁力架中,待磁珠吸附到磁力架一侧后将上清吸出;
(5)在PCR扩增管内加入配置好的PCR反应液,进行实时定量PCR反应;
所述步骤(1)中裂解液的成分为0-2M的NaCl、0-0.3%的Triton-X和0-0.2M的KCl。
2.根据权利要求1所述的对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法,其特征在于所述步骤(3)中的高温为100℃。
3.根据权利要求1所述的对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法,所述步骤(2)中咽拭子样本或鼻咽拭子样本与裂解液的体积比为1:3—1:10。
4.根据权利要求1所述的对咽拭子样本或鼻咽拭子样本直接实时定量的PCR的方法,所述磁珠为市售的核酸提取使用的且平均粒径为≤1000nm的单分散性羟基磁珠。
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710122152.2A CN106636446A (zh) | 2017-03-03 | 2017-03-03 | 对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 |
CN201810172491.6A CN108486259A (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法检测百日咳核酸的试剂盒及检测方法 |
PCT/CN2018/077797 WO2018157844A1 (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂 |
CN201810172845.7A CN108220484B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法同时检测ebv,cmv,hsv-6疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN201810172545.9A CN108315325A (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂 |
CN201810172541.0A CN108441580B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法同时检测hsv-1,hsv-2,vzv疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN201810172492.0A CN108411036B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种快速检测甲、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710122152.2A CN106636446A (zh) | 2017-03-03 | 2017-03-03 | 对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106636446A true CN106636446A (zh) | 2017-05-10 |
Family
ID=58846931
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710122152.2A Pending CN106636446A (zh) | 2017-03-03 | 2017-03-03 | 对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 |
CN201810172491.6A Pending CN108486259A (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法检测百日咳核酸的试剂盒及检测方法 |
CN201810172492.0A Active CN108411036B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种快速检测甲、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及方法 |
CN201810172541.0A Active CN108441580B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法同时检测hsv-1,hsv-2,vzv疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN201810172845.7A Active CN108220484B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法同时检测ebv,cmv,hsv-6疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN201810172545.9A Pending CN108315325A (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂 |
Family Applications After (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810172491.6A Pending CN108486259A (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法检测百日咳核酸的试剂盒及检测方法 |
CN201810172492.0A Active CN108411036B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种快速检测甲、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及方法 |
CN201810172541.0A Active CN108441580B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法同时检测hsv-1,hsv-2,vzv疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN201810172845.7A Active CN108220484B (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一步法同时检测ebv,cmv,hsv-6疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN201810172545.9A Pending CN108315325A (zh) | 2017-03-03 | 2018-03-01 | 一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (6) | CN106636446A (zh) |
WO (1) | WO2018157844A1 (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107619775A (zh) * | 2017-09-20 | 2018-01-23 | 宝瑞源生物技术(北京)有限公司 | 一种适用于pcr层析法的便携式核酸检测平台 |
CN108220484A (zh) * | 2017-03-03 | 2018-06-29 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 一步法同时检测ebv,cmv,hsv-6疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN108374059A (zh) * | 2018-03-01 | 2018-08-07 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒及其检测方法 |
CN108866049A (zh) * | 2018-09-05 | 2018-11-23 | 河南东格生物技术有限公司 | 一种从口腔样本中提取基因组dna的试剂盒及其方法 |
CN109055490A (zh) * | 2018-08-30 | 2018-12-21 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种具有核酸洗脱功能的反转录pcr反应液和核酸提取方法 |
CN111518872A (zh) * | 2020-04-28 | 2020-08-11 | 上海勇求实业发展有限公司 | 一种核酸即时检验的方法 |
CN113736914A (zh) * | 2020-05-29 | 2021-12-03 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 新型冠状病毒一步法磁珠核酸检测试剂盒及其使用方法 |
Families Citing this family (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109337898A (zh) * | 2018-10-10 | 2019-02-15 | 南通中科基因医学检验所有限公司 | 一种口腔黏膜细胞基因组dna快速提取方法 |
CN109487013B (zh) * | 2019-01-09 | 2022-08-19 | 中生方政生物技术股份有限公司 | 单纯疱疹病毒i型和ii型检测标志物、引物探针对、试剂盒及检测方法 |
CN111560444A (zh) * | 2019-02-13 | 2020-08-21 | 湖南宏雅基因技术有限公司 | 百日咳杆菌核酸检测试剂盒 |
CN110317902A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-10-11 | 上海伯杰医疗科技有限公司 | 人疱疹病毒ⅰ/ⅱ/ⅲ/ⅴ型核酸分型检测试剂盒及检测方法 |
CN112280838A (zh) * | 2019-07-22 | 2021-01-29 | 苏州态和生物科技有限公司 | 利用磁珠-核酸酶过滤层析柱去除pcr污染的方法 |
CN111334502A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-06-26 | 广州奕昕生物科技有限公司 | 一种快速提取b族链球菌核酸的方法 |
CN111662901A (zh) * | 2020-06-09 | 2020-09-15 | 佛山市博朋生物科技有限公司 | 一种从动物低核酸含量样品中提取病毒核酸的方法 |
CN112176109A (zh) * | 2020-10-29 | 2021-01-05 | 上海伯杰医疗科技有限公司 | 一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法 |
CN112430327B (zh) * | 2020-11-25 | 2022-09-09 | 南开大学 | 一种网状磁性分子印迹共价有机框架材料及其制备方法与应用 |
CN112501162A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-03-16 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种用纳米磁珠提取新冠病毒rna的试剂盒及提取方法 |
CN113151397B (zh) * | 2021-02-03 | 2023-06-23 | 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 | 一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒 |
CN113122534A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-07-16 | 济凡生物科技(北京)有限公司 | 一种磁珠法提取干血斑基因组dna的试剂盒及提取方法 |
CN112795623A (zh) * | 2021-03-22 | 2021-05-14 | 武汉纳磁生物科技有限公司 | 一种病毒核酸提取裂解液、试剂盒及方法 |
CN113234589B (zh) * | 2021-05-10 | 2024-03-26 | 宁波康程德诺生物医药有限公司 | 一种核酸快速提取四联管装置、试剂盒和提取方法 |
CN113270142A (zh) * | 2021-05-19 | 2021-08-17 | 东南大学 | 一种基于瞬态编码的空间转录组测序解码方法 |
CN113373267B (zh) * | 2021-07-16 | 2022-04-29 | 浙江大学 | 检测血源性感染性病毒的多重荧光定量rt-pcr试剂盒 |
CN113583803A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-11-02 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 应用于分子诊断的核酸提取与扩增poct耗材及方法 |
CN113913494A (zh) * | 2021-09-14 | 2022-01-11 | 苏州锐讯生物科技有限公司 | 快速便捷提取体液中病毒dna的试剂盒及提取方法 |
CN116218835A (zh) * | 2021-12-02 | 2023-06-06 | 圣湘生物科技股份有限公司 | 免洗涤提取核酸的组合物、试剂盒、方法及用途 |
CN114277026B (zh) * | 2021-12-21 | 2023-07-14 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 核酸提取用磁珠及其制备方法、用于磁珠法核酸提取的试剂盒 |
CN114250323B (zh) * | 2021-12-27 | 2023-09-29 | 武汉百泰基因工程有限公司 | 一种hsv1/hsv2/vzv病毒三联荧光pcr检测试剂盒及其使用方法 |
CN114371065A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-19 | 上海固容生物科技有限公司 | 一种生物样本液体活检样本的处理方法(磁珠分离法)及其应用 |
CN114438074A (zh) * | 2022-02-11 | 2022-05-06 | 欧蒙医学诊断(中国)有限公司 | 用于提高针对液体样本的核酸提取量的方法 |
CN114908080B (zh) * | 2022-03-17 | 2023-10-31 | 合肥中科易康达生物医学有限公司 | 一种用于核酸提取的功能化磁性粒子、制备方法及其应用 |
CN114591945B (zh) * | 2022-04-02 | 2022-12-06 | 予果生物科技(北京)有限公司 | Dna病毒核酸提取检测试剂、试剂盒及其方法和应用 |
CN115044712B (zh) * | 2022-04-22 | 2024-05-24 | 江苏先声医学诊断有限公司 | 一种适于ont测序平台的、用于感染样本中疱疹病毒检测的引物组及应用 |
CN115261183A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-11-01 | 李治国 | 一种即用型基因检测包 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030065139A1 (en) * | 1998-03-19 | 2003-04-03 | Craig A. Rosen | Secreted protein hmmbd35 |
CN101812444A (zh) * | 2010-04-23 | 2010-08-25 | 北京博迈世纪生物技术有限公司 | 血液基因组磁珠小提试剂盒及其提取方法 |
CN102634596B (zh) * | 2012-05-07 | 2016-08-03 | 江苏和创生物科技有限公司 | 百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌的特异性检测用引物探针组合和试剂盒 |
CN104032034A (zh) * | 2014-03-07 | 2014-09-10 | 王全意 | 一种同时检测甲型、乙型及丙型流感病毒的方法及试剂盒 |
CN104745689A (zh) * | 2015-01-30 | 2015-07-01 | 湖北永邦医疗科技有限公司 | 一种用于检测百日咳杆菌的引物、探针和试剂盒 |
CN105420403B (zh) * | 2016-01-14 | 2019-04-05 | 北京纳捷诊断试剂有限公司 | 一种在一管中进行磁珠提取核酸与扩增的实时荧光定量pcr方法 |
US20190017112A1 (en) * | 2016-02-11 | 2019-01-17 | Htg Molecular Diagnostics, Inc. | Method of direct target sequencing using nuclease protection |
CN106497915A (zh) * | 2016-09-23 | 2017-03-15 | 广东国盛医学科技股份有限公司 | 一种磁珠法提取唾液核酸的裂解液 |
CN106676098B (zh) * | 2016-11-25 | 2018-02-27 | 广州奇辉生物科技有限公司 | 一种提高核酸提取率的磁珠组合物及其应用 |
CN106676198A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-05-17 | 上海星耀医学科技发展有限公司 | 疱疹病毒4、5型高灵敏定量检测试剂盒 |
CN106755584B (zh) * | 2017-01-12 | 2019-07-09 | 艾吉泰康(嘉兴)生物科技有限公司 | 一种人类疱疹病毒4型检测试剂盒及检测方法 |
CN106591297A (zh) * | 2017-02-28 | 2017-04-26 | 解码(上海)生物医药科技有限公司 | 一种磁珠法核酸提取方法 |
CN106636446A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-05-10 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 |
-
2017
- 2017-03-03 CN CN201710122152.2A patent/CN106636446A/zh active Pending
-
2018
- 2018-03-01 CN CN201810172491.6A patent/CN108486259A/zh active Pending
- 2018-03-01 WO PCT/CN2018/077797 patent/WO2018157844A1/zh active Application Filing
- 2018-03-01 CN CN201810172492.0A patent/CN108411036B/zh active Active
- 2018-03-01 CN CN201810172541.0A patent/CN108441580B/zh active Active
- 2018-03-01 CN CN201810172845.7A patent/CN108220484B/zh active Active
- 2018-03-01 CN CN201810172545.9A patent/CN108315325A/zh active Pending
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108220484A (zh) * | 2017-03-03 | 2018-06-29 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 一步法同时检测ebv,cmv,hsv-6疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN108315325A (zh) * | 2017-03-03 | 2018-07-24 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂 |
CN108486259A (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-04 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 一步法检测百日咳核酸的试剂盒及检测方法 |
WO2018157844A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂 |
CN108220484B (zh) * | 2017-03-03 | 2020-10-16 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 一步法同时检测ebv,cmv,hsv-6疱疹病毒的试剂盒及检测方法 |
CN107619775A (zh) * | 2017-09-20 | 2018-01-23 | 宝瑞源生物技术(北京)有限公司 | 一种适用于pcr层析法的便携式核酸检测平台 |
CN107619775B (zh) * | 2017-09-20 | 2021-03-26 | 宝瑞源生物技术(北京)有限公司 | 一种适用于pcr层析法的便携式核酸检测平台 |
CN108374059A (zh) * | 2018-03-01 | 2018-08-07 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒及其检测方法 |
CN109055490A (zh) * | 2018-08-30 | 2018-12-21 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种具有核酸洗脱功能的反转录pcr反应液和核酸提取方法 |
CN108866049A (zh) * | 2018-09-05 | 2018-11-23 | 河南东格生物技术有限公司 | 一种从口腔样本中提取基因组dna的试剂盒及其方法 |
CN111518872A (zh) * | 2020-04-28 | 2020-08-11 | 上海勇求实业发展有限公司 | 一种核酸即时检验的方法 |
CN113736914A (zh) * | 2020-05-29 | 2021-12-03 | 绍兴迅敏康生物科技有限公司 | 新型冠状病毒一步法磁珠核酸检测试剂盒及其使用方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108315325A (zh) | 2018-07-24 |
CN108220484A (zh) | 2018-06-29 |
CN108441580B (zh) | 2021-09-28 |
CN108411036A (zh) | 2018-08-17 |
WO2018157844A1 (zh) | 2018-09-07 |
CN108441580A (zh) | 2018-08-24 |
CN108486259A (zh) | 2018-09-04 |
CN108411036B (zh) | 2021-09-28 |
CN108220484B (zh) | 2020-10-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106636446A (zh) | 对咽拭子样本或鼻咽拭子直接实时定量的pcr的方法 | |
El-Tholoth et al. | A single and two-stage, closed-tube, molecular test for the 2019 novel coronavirus (COVID-19) at home, clinic, and points of entry | |
Kojabad et al. | Droplet digital PCR of viral DNA/RNA, current progress, challenges, and future perspectives | |
CN105420403B (zh) | 一种在一管中进行磁珠提取核酸与扩增的实时荧光定量pcr方法 | |
Tang et al. | Clinical evaluation of the Luminex NxTAG respiratory pathogen panel | |
Kost et al. | Multicenter beta trial of the GeneXpert enterovirus assay | |
CN107893026A (zh) | 检测人类病毒核酸的微流控芯片、检测方法及检测系统 | |
EP2257802A2 (en) | Barriers for facilitating biological reactions | |
CN107099619A (zh) | 一种检测呼吸道病原体的lamp引物组合物及其试剂盒 | |
CN105441595B (zh) | 一种用于检测hbv-b/c的数字pcr绝对定量分型检测试剂盒 | |
Rodriguez-Mateos et al. | A lab-on-a-chip platform for integrated extraction and detection of SARS-CoV-2 RNA in resource-limited settings | |
CN105695631A (zh) | 人免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒快速联检试剂盒及其制备和应用 | |
CN111378783A (zh) | 新型冠状病毒2019-nCoV核酸试剂盒和病毒核酸采集方法 | |
CN109576397B (zh) | 一种人类免疫缺陷病毒1型核酸定量检测试剂盒 | |
CN102154510A (zh) | 丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒 | |
CN109457050A (zh) | 检测乙型肝炎病毒核酸的引物、探针、试剂盒及检测方法 | |
Hindiyeh et al. | Evaluation of Simplexa Flu A/B & RSV for direct detection of influenza viruses (A and B) and respiratory syncytial virus in patient clinical samples | |
CN105420416A (zh) | 一种分层包装带指示剂的直接实时定量荧光pcr方法 | |
CN110218819A (zh) | 一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片及检测方法 | |
Mu et al. | Microfluidic-based approaches for COVID-19 diagnosis | |
Dinh et al. | Dual-mode visual detection strategies of viable pathogens for point-of-care testing | |
Xie et al. | One-step reverse-transcription recombinase polymerase amplification using lateral flow strips for the detection of coxsackievirus A6 | |
CN105695624A (zh) | 粗品肝素钠不同种属来源的快速鉴别方法 | |
CN105063235A (zh) | 乙型肝炎病毒核酸(dna)快速定量检测试剂盒及其使用方法 | |
CN107513562A (zh) | 检测水中铜绿假单胞菌和ExoU的引物、试剂盒和方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20170510 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |