CN113583803A - 应用于分子诊断的核酸提取与扩增poct耗材及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材及方法，包括筒体和软性组合袋，通过特殊的贯穿筒体结构和软性组合袋储液结构的连接实现核酸提取的裂解、结合、磁珠转移、磁珠分散、洗涤、洗脱等物理过程，实现完整的核酸提取，并同步实现提取和扩增的衔接，达到完整的检测需求，使用两个硅胶塞在筒体内进行机械运动实现液体的分散和磁珠的转移，耗材整体结构简单，加工便捷，生产简化，成本易控；通过软性组合袋结构进行裂解和扩增，加热模块容易与之相贴合，导热效果极好，能够有效提高裂解和扩增的效率，缩短检测总时长。
Description
技术领域
本发明涉及分子诊断设备耗材及耗材使用方法技术领域，尤其涉及一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材及方法。
背景技术
传染性疾病的诊断方法有培养法、免疫诊断、分子诊断、质谱检验等，综合效率、成本、准确率、使用难度等各方面因素考量，免疫诊断和分子诊断是当前最主要的两种诊断方法，其中免疫诊断更为快速，而分子诊断更为灵敏。
大部分传染病在发病初期的传染性最强，免疫诊断因为有窗口期，在此阶段难以确诊，容易错失防疫的重要时机。相比而言，分子诊断虽然成本高、操作要求高，但窗口期要求远远低于免疫诊断，在面临重大传染性疾病时，及时性和准确性是最重要的考虑因素，是病原体诊断的“金标准”。如在此次新冠疫情面前，常见检测手段的局限性暴露无遗，而分子诊断对试剂、设备、场地、操作人员要求都很高，检测集中在三级以上医院及各大三方检测中心，资源非常有限，检测能力不足以快速识别所有患者，导致初期疫情发展迅速，数量众多的绝大部分基层医疗机构包括社区服务中心、乡镇卫生院、村卫生所和一些医务室均没能起到很好的作用。
因此，当前分子诊断方法不仅在提高准确度、通量等方向进步，也在努力朝着小型化、自动化、高速化、简易化等方向发展，推动分子诊断实现去中心化的目的，普惠基层医疗。
核酸提取和下游扩增是目前DNA/RNA基因检测分子诊断的常规流程。一般而言，核酸提取和下游扩增分步在不同仪器设备中进行。临床上，核酸提取通常使用磁珠法进行，其步骤较繁琐，目前国内外普遍使用半自动化核酸提取仪进行；下游扩增通常有PCR扩增和等温扩增两种方式，需要在热循环仪上进行，试剂一般置于PCR管或八连管中，该过程用时较长。核酸提取和下游扩增一般都是分别进行的，整体流程较为复杂，对人员的专业素质要求较高，耗时耗力。
将核酸提取和下游扩增两个过程结合起来，完成一管式分子诊断，实现“样本进，结果出”的POCT(point-of-care testing)快检，能够大幅简化分子诊断操作流程，减少对人员专业素质要求，特别适合在普惠基层医疗推广使用。因此，国内外已有众多针对分子诊断POCT的研究，但是现有技术仍存在以下问题：
1)部分技术是基于不完整的核酸提取+扩增完成，即免提取或一步法核酸提取。该路线适用范围较狭窄，并且无核酸浓缩过程，可能存在灵敏度不足的问题，对复杂的临床样本抗干扰能力不足。
2)所使用的耗材涉及模块过多且过于复杂。磁珠法核酸提取一般会涉及裂解、结合、洗涤、洗脱等流程，每个步骤位于不同的腔体内，涵盖磁珠转移、液体混合、加热、移液等步骤，为完成全部标准流程，难免会将耗材设计的过于复杂。伴随之的则是复杂的生产工艺、高昂的开发费用和生产成本。
3)基于完整流程的提取+检测总时间较长。源于常规塑料硬耗材的导热效果通常较差，因此为满足裂解和扩增的过程充分有效的进行，必须保证充分的加热时间，很难将操作时长进一步缩短，动辄数小时的检测总时长很难达到POCT快检的要求，不能真正实现分子诊断POCT化。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明提出一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材及方法，通过特殊的贯穿筒体结构和软性组合袋结构的连接实现核酸提取的裂解、结合、磁珠转移、磁珠分散、洗涤、洗脱等物理过程，实现完整的核酸提取，并同步实现提取和扩增的衔接，达到完整的检测需求，使用两个硅胶塞在筒体内进行机械运动实现液体的分散和磁珠的转移，耗材整体结构简单，加工便捷，生产简化，成本易控；通过软性组合袋结构进行裂解和扩增，加热模块容易与之相贴合，导热效果极好，能够有效提高裂解和扩增的效率，缩短检测总时长。
为实现以上目的，本发明所采用的技术方案包括：
一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材，其特征在于，包括相互连接设置的筒体和软性组合袋；
所述筒体的两端开口形成中空贯通的操作通道，所述操作通道内设置有第一密封塞和第二密封塞，所述第一密封塞和第二密封塞在操作通道内同步或异步滑动形成体积和位置可变的操作腔，所述筒体一侧设置有若干用于连通软性组合袋的连接孔，所述筒体区别于连接孔的另一侧设置有一个加样孔；
所述软性组合袋包括连接部和与所述连接部嵌合的软性材质的试剂部，所述试剂部分隔为至少两个相互独立的试剂腔体，所述连接部固定密封连接于所述筒体设置有连接孔的一侧，所述试剂腔体经所述连接部和连接孔建立与所述操作腔连通的试剂进出路径。
进一步地，所述软性组合袋包括相互独立依次排列的第一试剂腔体、第二试剂腔体、第三试剂腔体、第四试剂腔体、第五试剂腔体和第六试剂腔体，所述筒体一侧设置有分别对应第一试剂腔体、第二试剂腔体、第三试剂腔体、第四试剂腔体、第五试剂腔体和第六试剂腔体的第一连接孔、第二连接孔、第三连接孔、第四连接孔、第五连接孔和第六连接孔。
进一步地，所述第一试剂腔体盛装裂解液，所述第二试剂腔体盛装包含有磁珠的结合液，所述第三试剂腔体盛装第一洗涤液，所述第四试剂腔体盛装第二洗涤液，所述第五试剂腔体盛装洗脱液，所述第六试剂腔体盛装扩增试剂；所述加样孔在筒体上的位置对应第一连接孔，使所述加样孔和第一连接孔能够同时处于操作腔内。
进一步地，所述加样孔还覆盖设置有支持打开/密闭的胶条。
进一步地，所述第一试剂腔体、第二试剂腔体、第三试剂腔体、第四试剂腔体、第五试剂腔体和第六试剂腔体的容积相同或不同。
进一步地，所述软性组合袋还包括可拆卸安装在连接部的密封夹，所述密封夹夹紧闭合所述连接部切断试剂进出路径。
进一步地，所述第一密封塞和第二密封塞内部设置有硬性支撑结构，所述硬性支撑结构朝向筒体的两端开口一面设置有操作杆连接位；
所述第一密封塞和第二密封塞通过操作杆连接位分别固定连接第一操作杆和第二操作杆，并通过推/拉第一操作杆和第二操作杆分别控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内同步或异步滑动。
本发明还涉及一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增方法，其特征在于，使用上述的POCT耗材进行核酸提取与扩增。
进一步地，所述方法包括如下步骤：
S1、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔移动至对应加样孔和第一连接孔位置；从加样孔注入样本和蛋白酶K，打开密封夹，操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第一试剂腔体内的裂解液与样本混合形成第一混合液，同时使用外部加热装置对第一试剂腔体进行加热，完成加热裂解；
S2、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积膨胀至第一混合液完全吸入操作腔，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同第一混合液移动至对应第二连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第二试剂腔体内包含有磁珠的结合液与第一混合液混合形成第二混合液，同时使用外部加热装置对第二试剂腔体进行加热、保温，完成结合；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第二混合液完全进入第二试剂腔体；
S3、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同磁珠移动至对应第三连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第三试剂腔体内第一洗涤液与磁珠混合形成第三混合液，完成第一次洗涤；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第三混合液完全进入第三试剂腔体；
S4、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同磁珠移动至对应第四连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第四试剂腔体内第二洗涤液与磁珠混合形成第四混合液，完成第二次洗涤；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第四混合液完全进入第四试剂腔体；
S5、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同磁珠移动至对应第五连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第五试剂腔体内洗脱液与磁珠混合形成第五混合液，同时使用外部加热装置对第五试剂腔体进行加热，完成洗脱；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积膨胀至第五混合液完全吸入操作腔；
S6、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同第五混合液移动至对应第六连接孔位置；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第五混合液完全进入第六试剂腔体，并与第六试剂腔体内的扩增试剂混合形成第六混合液；
S7、使用外部加热装置对第六试剂腔体进行温度循环控制，完成扩增。
进一步地，所述外部加热装置包括夹紧覆盖试剂腔体正、反面的两片可控温金属块。
本发明的有益效果为：
采用本发明所述应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材及方法，通过筒体内两个密封塞协同运动实现在单根筒体内支持液体的转移和混合以及磁珠的转移操作，不仅容易完成磁珠的转移，也容易完成液体的转移，解决了磁珠法核酸提取中途不能额外加液的问题，操作过程快速顺畅，损失较低；使用软性组合袋盛放液体更有利于对液体的温度控制，提高液体的实际加热和降温效率，能够极大地缩短核酸提取和扩增的总时长，有助于真正实现分子诊断POCT，同时，使用软性组合袋进行各试剂组分的储存，容易通过封口机进行腔室的分隔，灌液后容易在两端对试剂组合进行整体密封；软性组合袋与筒体容易连接，成本极低，操作十分便捷。
附图说明
图1为本发明应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材优选实施例示意图。
图2为本发明优选实施例密封塞示意图。
附图编号说明：1-筒体、11-第一密封塞、12-第二密封塞、121-硬性支撑结构、1211-操作杆连接位、13-操作腔、141-第一连接孔、142-第二连接孔、143-第三连接孔、144-第四连接孔、145-第五连接孔、146-第六连接孔、15-加样孔、21-连接部、22-试剂部、221-第一试剂腔体、222-第二试剂腔体、223-第三试剂腔体、224-第四试剂腔体、225-第五试剂腔体、226-第六试剂腔体、23-密封夹
具体实施方式
为了更清楚的理解本发明的内容，将结合附图和实施例详细说明。
如图1所示为本发明应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材的一种优选实施例示意图，主要结构包括相互连接设置的筒体1和软性组合袋，由软性组合袋负责盛装核酸提取与扩增过程所需各种液体试剂，筒体1提供核酸提取与扩增操作空间。
其中，筒体1设置为两端开口，形成中空贯通的操作通道，同时在操作通道内设置有可滑动的第一密封塞11和第二密封塞12，使第一密封塞11和第二密封塞12之间的筒体1空间形成一相较外界隔离的操作腔13。在使用过程中，第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内各自完全独立的执行滑动操作，根据操作需要，第一密封塞11和第二密封塞12既可以执行同步滑动，也可以执行异步滑动。所述的同步滑动是指第一密封塞11和第二密封塞12同时且同方向在操作通道内滑动，使操作腔13在保持体积(容积)不变的情况下改变其在筒体1内的位置；所述的异步滑动是指除同步滑动以外的第一密封塞11和第二密封塞12的任意滑动，例如第一密封塞11和第二密封塞12同时相向/相反运动使操作腔13体积(容积)变小/变大同时基本不改变操作腔13在筒体1内的位置，或第一密封塞11和第二密封塞12不同时滑动使操作腔13的体积(容积)以及其在筒体1内的位置同时发生改变。优选的，第一密封塞11和第二密封塞12的滑动通过操作杆控制，在第一密封塞11和第二密封塞12内各自设置有一硬性支撑结构121，该硬性支撑结构121如图2所示(以第二密封塞12为例，第一密封塞11结构相同)，硬性支撑结构121设置在密封塞内，并裸露朝向筒体1端部开口一侧，中心位置设置有操作杆连接位1211，例如螺纹连接位，用于固定连接操作杆。使用时，操作杆长度足以伸出筒体1，使操作人员能够通过推拉操作杆控制第一密封塞11、第二密封塞12在筒体1内的滑动。
软性组合袋包括连接部21和与所述连接部21嵌合的软性材质的试剂部22，试剂部22为一整体结构，但其中分隔为若干相互独立的试剂腔体，例如图1所示优选实施例中分隔为6个试剂腔体，可以分别盛装不同实验步骤所需的试剂，试剂腔体通过连接部21与筒体1之间形成试剂进出路径，使试剂腔体内的试剂能够进入筒体1。优选的，连接部21位置可拆卸安装有一密封夹23，可以保证试剂在运输途中等不会意外泄露；当需要进行实验时，只需去除密封夹23，即可打通试剂进出路径。使用软性材质的试剂部22更加便于进行温度控制，无需考虑容器(试剂腔体)的具体形状，可以直接使用平板式的控温金属块夹紧试剂腔体，实现较高效率的温度控制。
为了实现与试剂腔体之间的试剂进出路径，筒体1一侧设置有若干用于连通软性组合袋的连接孔，各连接孔与各试剂腔体之间一一对应。在实际使用中，第一密封塞11和第二密封塞12的滑动移动以连接孔为目标点，保证操作腔13在任何时刻下均只对应一个连接孔，即不允许在操作过程中将两个连接孔同时置于操作腔13范围内。在此基础上，第一密封塞11和第二密封塞12的滑动移动所形成的可变操作腔13实际替代了现有技术所必须的多个独立操作孔位，大幅简化了系统结构。
在图1所示优选实施例中，试剂部22由6个相互独立的试剂腔体组成，包括盛装裂解液的第一试剂腔体221，盛装包含有磁珠的结合液的第二试剂腔体222，盛装第一洗涤液的第三试剂腔体223，盛装第二洗涤液的第四试剂腔体224，盛装洗脱液的第五试剂腔体225，盛装扩增试剂的第六试剂腔体226，可以用于执行核酸提取和扩增的一种典型实验步骤。进一步地，为了匹配不同试剂用量上的差异，第六试剂腔体226设置为容量较小的一个独立腔体。筒体1上设置有第一连接孔141、第二连接孔142、第三连接孔143、第四连接孔144、第五连接孔145和第六连接孔146，分别对应第一试剂腔体221、第二试剂腔体222、第三试剂腔体223、第四试剂腔体224、第五试剂腔体225和第六试剂腔体226，形成各自的试剂进出路径。优选的，筒体1上还设置有一加样孔15，加样孔15与第一连接孔141同时处于同一操作腔13内，例如可将加样孔15与第一连接孔141设置在相同的筒体1轴向位置上；加样孔15覆盖设置有支持打开/密闭的胶条，可以在不进行加样操作时关闭密封加样孔15。当然，本发明并不局限于优选实施例所示结构，根据实验需要可以灵活采用不同的试剂腔体数量、组合，以完成不同的实验目的。
在实验过程中，通过第一密封塞11和第二密封塞12相反方向滑动扩大操作腔13的体积可以将试剂从试剂腔体中自连接孔吸入操作腔13；同理，当第一密封塞11和第二密封塞12相向滑动减小操作腔13的体积时，可以将操作腔13内的试剂(混合液体)挤入试剂腔体；当第一密封塞11和第二密封塞12同步滑动时，可带动操作腔13内的试剂、磁珠等一并平行移动至对应下一连接孔(试剂腔体)的位置。通过有序操作第一密封塞11和第二密封塞12，即可完成既定的试剂混匀、分离等操作。
本发明第二方面涉及一种使用上述耗材实施的核酸提取与扩增方法，特别是使用包括有6个试剂腔体的软性组合袋进行实验，具体包括如下步骤：
S1、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13移动至对应加样孔15和第一连接孔141位置；从加样孔15注入样本和蛋白酶K，打开密封夹23，操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积往复膨胀、缩小，将第一试剂腔体221内的裂解液与样本混合形成第一混合液，同时使用外部加热装置，例如夹紧覆盖试剂腔体正、反面的两片可控温金属块，对第一试剂腔体221进行加热，完成加热裂解；
S2、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积膨胀至第一混合液完全吸入操作腔13，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13连同第一混合液移动至对应第二连接孔142位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积往复膨胀、缩小，将第二试剂腔体222内包含有磁珠的结合液与第一混合液混合形成第二混合液，同时使用外部加热装置对第二试剂腔体222进行加热、保温，完成结合；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔13内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积缩小至除磁珠外的第二混合液完全进入第二试剂腔体222；
S3、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13连同磁珠移动至对应第三连接孔143位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积往复膨胀、缩小，将第三试剂腔体223内第一洗涤液与磁珠混合形成第三混合液，完成第一次洗涤；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔13内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积缩小至除磁珠外的第三混合液完全进入第三试剂腔体223；
S4、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13连同磁珠移动至对应第四连接孔144位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积往复膨胀、缩小，将第四试剂腔体224内第二洗涤液与磁珠混合形成第四混合液，完成第二次洗涤；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔13内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积缩小至除磁珠外的第四混合液完全进入第四试剂腔体224；
S5、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13连同磁珠移动至对应第五连接孔145位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积往复膨胀、缩小，将第五试剂腔体225内洗脱液与磁珠混合形成第五混合液，同时使用外部加热装置对第五试剂腔体225进行加热，完成洗脱；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积膨胀至第五混合液完全吸入操作腔13；
S6、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13连同第五混合液移动至对应第六连接孔146位置；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔13内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞11和第二密封塞12在操作通道内滑动，使操作腔13的容积缩小至除磁珠外的第五混合液完全进入第六试剂腔体226，并与第六试剂腔体226内的扩增试剂混合形成第六混合液；
S7、使用外部加热装置对第六试剂腔体226进行温度循环控制，完成扩增。
以上所述仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换等都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增POCT耗材，其特征在于，包括相互连接设置的筒体和软性组合袋；
所述筒体的两端开口形成中空贯通的操作通道，所述操作通道内设置有第一密封塞和第二密封塞，所述第一密封塞和第二密封塞在操作通道内同步或异步滑动形成体积和位置可变的操作腔，所述筒体一侧设置有若干用于连通软性组合袋的连接孔，所述筒体区别于连接孔的另一侧设置有一个加样孔；
所述软性组合袋包括连接部和与所述连接部嵌合的软性材质的试剂部，所述试剂部分隔为至少两个相互独立的试剂腔体，所述连接部固定密封连接于所述筒体设置有连接孔的一侧，所述试剂腔体经所述连接部和连接孔建立与所述操作腔连通的试剂进出路径。
2.如权利要求1所述的POCT耗材，其特征在于，所述软性组合袋包括相互独立依次排列的第一试剂腔体、第二试剂腔体、第三试剂腔体、第四试剂腔体、第五试剂腔体和第六试剂腔体，所述筒体一侧设置有分别对应第一试剂腔体、第二试剂腔体、第三试剂腔体、第四试剂腔体、第五试剂腔体和第六试剂腔体的第一连接孔、第二连接孔、第三连接孔、第四连接孔、第五连接孔和第六连接孔。
3.如权利要求2所述的POCT耗材，其特征在于，所述第一试剂腔体盛装裂解液，所述第二试剂腔体盛装包含有磁珠的结合液，所述第三试剂腔体盛装第一洗涤液，所述第四试剂腔体盛装第二洗涤液，所述第五试剂腔体盛装洗脱液，所述第六试剂腔体盛装扩增试剂；所述加样孔在筒体上的位置对应第一连接孔，使所述加样孔和第一连接孔能够同时处于操作腔内。
4.如权利要求3所述的POCT耗材，其特征在于，所述加样孔还覆盖设置有支持打开/密闭的胶条。
5.如权利要求3所述的POCT耗材，其特征在于，所述第一试剂腔体、第二试剂腔体、第三试剂腔体、第四试剂腔体、第五试剂腔体和第六试剂腔体的容积相同或不同。
6.如权利要求3所述的POCT耗材，其特征在于，所述软性组合袋还包括可拆卸安装在连接部的密封夹，所述密封夹夹紧闭合所述连接部切断试剂进出路径。
7.如权利要求1所述的POCT耗材，其特征在于，所述第一密封塞和第二密封塞内部设置有硬性支撑结构，所述硬性支撑结构朝向筒体的两端开口一面设置有操作杆连接位；
所述第一密封塞和第二密封塞通过操作杆连接位分别固定连接第一操作杆和第二操作杆，并通过推/拉第一操作杆和第二操作杆分别控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内同步或异步滑动。
8.一种应用于分子诊断的核酸提取与扩增方法，其特征在于，使用权利要求1至7任一项所述的POCT耗材进行核酸提取与扩增。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S1、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔移动至对应加样孔和第一连接孔位置；从加样孔注入样本和蛋白酶K，打开密封夹，操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第一试剂腔体内的裂解液与样本混合形成第一混合液，同时使用外部加热装置对第一试剂腔体进行加热，完成加热裂解；
S2、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积膨胀至第一混合液完全吸入操作腔，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同第一混合液移动至对应第二连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第二试剂腔体内包含有磁珠的结合液与第一混合液混合形成第二混合液，同时使用外部加热装置对第二试剂腔体进行加热、保温，完成结合；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第二混合液完全进入第二试剂腔体；
S3、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同磁珠移动至对应第三连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第三试剂腔体内第一洗涤液与磁珠混合形成第三混合液，完成第一次洗涤；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第三混合液完全进入第三试剂腔体；
S4、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同磁珠移动至对应第四连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第四试剂腔体内第二洗涤液与磁珠混合形成第四混合液，完成第二次洗涤；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第四混合液完全进入第四试剂腔体；
S5、移除外部磁铁，继续操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同磁珠移动至对应第五连接孔位置；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积往复膨胀、缩小，将第五试剂腔体内洗脱液与磁珠混合形成第五混合液，同时使用外部加热装置对第五试剂腔体进行加热，完成洗脱；操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积膨胀至第五混合液完全吸入操作腔；
S6、操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔连同第五混合液移动至对应第六连接孔位置；使用外部磁铁吸引磁珠聚集在操作腔内壁，同时操作第一操作杆和第二操作杆控制第一密封塞和第二密封塞在操作通道内滑动，使操作腔的容积缩小至除磁珠外的第五混合液完全进入第六试剂腔体，并与第六试剂腔体内的扩增试剂混合形成第六混合液；
S7、使用外部加热装置对第六试剂腔体进行温度循环控制，完成扩增。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述外部加热装置包括夹紧覆盖试剂腔体正、反面的两片可控温金属块。
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