CN106574245A - 用于细胞免疫治疗的培养基 - Google Patents

用于细胞免疫治疗的培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN106574245A
CN106574245A CN201580042926.XA CN201580042926A CN106574245A CN 106574245 A CN106574245 A CN 106574245A CN 201580042926 A CN201580042926 A CN 201580042926A CN 106574245 A CN106574245 A CN 106574245A
Authority
CN
China
Prior art keywords
concentration
cell culture
quality factor
culture medium
blood products
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201580042926.XA
Other languages
English (en)
Inventor
雅克布·盖尔
马库斯·莫伊雷尔
厄内斯特·多杜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Oswald Bote Co Ltd Than Poly
Polybiocept AB
Original Assignee
Oswald Bote Co Ltd Than Poly
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Oswald Bote Co Ltd Than Poly filed Critical Oswald Bote Co Ltd Than Poly
Publication of CN106574245A publication Critical patent/CN106574245A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0642—Granulocytes, e.g. basopils, eosinophils, neutrophils, mast cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/34—Sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/36—Lipids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/105—Insulin-like growth factors [IGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/135—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2306—Interleukin-6 (IL-6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/25—Tumour necrosing factors [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/33—Insulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/375—Thyroid stimulating hormone [TSH]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C12N2501/392—Sexual steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；b)测量第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；c)将质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果质量因子的测量浓度在预定范围内，那么选择该第一血液制品用于细胞培养基并且可选地将第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择该第一血液制品。

Description

用于细胞免疫治疗的培养基
技术领域
本发明涉及具有高质量标准的细胞培养基，特别用于免疫细胞的生长和扩增，并且涉及制备方法。
背景技术
癌症治疗最有前途的进展之一是称作主动细胞免疫治疗(active cellularimmunotherapy)的新治疗类别。主动免疫治疗刺激患者的免疫系统，其目的是使用身体自身的免疫细胞促进抗原特异性抗肿瘤作用。为此，在体外培养免疫细胞以便增加细胞数目并影响分化。
为了在体外培养细胞，必须要满足几个基本的环境要求，诸如，控制温度，细胞附着的基质，以及合适的生长培养基和保持适当的pH与渗透压的培养箱。
细胞培养基配方在文献资料中已有详尽记载，并且很多培养基是在市场上可买到的。细胞培养基通常包括适当的能源来源和调节细胞周期的化合物。典型的培养基由如下物质组成：氨基酸补足物，维生素，无机盐，葡萄糖，和作为生长因子、激素与附着因子(attachment factor)来源的血清。除了作为营养物，培养基还有助于维持pH与渗透压。
细胞培养基配方在文献资料中已有详尽记载，并且很多培养基是在市场上可买到的。对于免疫细胞特别是淋巴细胞的培养与扩增，细胞培养基通常来自血清或血浆，因为它们向免疫细胞提供了与身体的自然环境类似的环境。
然而，在目前专业水平的培养基中扩增的淋巴细胞的增殖速度和活性还不够。此外，关于淋巴细胞扩增结果的数量、质量和存活率的可预测结果到目前为止还很少，并且通常作法是必需测试几批血清以便确定所需的质量。
因此，本发明的目的是克服现有技术中的至少一个缺陷。
发明内容
本发明尤其是基于如下发现：所使用的细胞培养基的质量对用于细胞免疫治疗的淋巴细胞的扩增过程的结果具有重要影响。特别地，本发明人已经定义了决定细胞培养基在淋巴细胞扩增方面的质量的多个质量因子(quality factor)。发明人能够确定质量因子诸如雌二醇、皮质醇、IGF-1、胰岛素和SHBG必须以某些预定浓度存在。满足为各质量因子测定确定的标准的细胞培养基提供了培养哺乳动物细胞，尤其是免疫系统细胞的改进的结果。
因此，本发明提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者(donor)的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：
a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；
b)测量第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果该质量因子的测量浓度在该预定范围内，那么选择该第一血液制品用于细胞培养基并且选择性地将第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择该第一血液制品。
本发明还包括细胞培养基，基于细胞培养基的体积，其包括：
-浓度低于3ng/ml的CCL5；
-浓度低于500pg/ml的嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)，
-浓度低于100pg/ml的PDGF-88和/或CXCL-10；
-浓度低于200pg/ml的IL-10；
-浓度低于50pg/ml的IL-13；
-浓度低于20pg/ml的IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL 12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP 1b、PDGF、IL-1RA和/或TNFα；
-浓度至少是65pmol/l，优选至少是75pmol/l，更优选至少是85pmol/l的雌二醇；
-浓度至少是190nmol/l，优选至少是210nmol/l，更优选至少是220nmol/l的皮质醇；
-浓度至少是80μg/l，优选至少是120μg/l，更优选至少是140μg/l的IGF-1；和/或
-浓度低于31nmol/l，优选低于29nmol/l的SHBG。
最后，本发明提供了细胞培养基用于培养细胞的用途。
具体实施方式
发明人已经发现，对于细胞培养免疫治疗，细胞培养基必须满足更高的质量标准。如实施例所示，各质量因子的差别导致淋巴细胞悬浮液的结果显著变化。特别地，使用质量因子在预定范围内的培养基，免疫细胞的生长、增殖或扩增引起细胞增殖速度、存活率和活性提高。鉴定这些质量因子能够确定制备细胞培养基，特别是用于免疫治疗用细胞群的细胞培养基的改进方法。
因此，本发明提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：
a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；
b)测量第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果该质量因子的测量浓度在该预定范围内，那么选择该第一血液制品用于细胞培养基并且选择性地将第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择该第一血液制品。
根据本发明的方法提供了高质量细胞培养基，其与用于淋巴细胞扩增的因子组合得到强的细胞增殖能力和高活性的扩增的淋巴细胞。此外，该方法保证了提供质量稳定的细胞培养基用于促进淋巴细胞诸如T-细胞的体外扩增。
如本文所用，“细胞培养基”或“生长培养基”是旨在供给动物或植物细胞生长的液体或胶体。生长培养基可以在pH、葡萄糖浓度、生长因子和其他营养物的存在方面存在不同。有两类细胞培养基：基于血液制品的培养基和合成培养基。
根据本发明，“基于血液制品的培养基”含有至少一种血液制品。
如本文所用，“合成培养基”是化学成分确定的培养基。这种培养基不含有任何天然来源的液体培养基(broth)诸如血液制品。相反，所有组分以确定的浓度加入到培养基中。
如本文所用，“血液制品”是指哺乳动物的全血或全血的子集(subset)，尤其是血浆、血清或者血浆和血清的进一步的子集。
如本文所用，“加工的血液制品”包括血浆、血清及其子集。
如本文所用的“血浆”是指哺乳动物的血浆。它是血液的淡白色有时是黄色的液体组分，其通常将血细胞以悬浮态保持在全血中。血浆主要是水并含有溶解的蛋白质、葡萄糖、凝结因子(clotting factor)、电解质、激素和二氧化碳。血浆可由血液制备，例如通过对含有抗凝剂的新鲜血液离心，其中血细胞沉在离心管底部。上清液则是血浆。
如本文所用的“血清”是没有凝血因子(coagulation factor)的血浆。
如本文所用的“凝血因子”也指“凝结因子”，包括各种蛋白质，诸如纤维蛋白原、凝血酶原或因子VII。
如本文所用的“全血的子集”是指来源于全血的溶液或悬浮液，包括全血的一部分组分。血浆和血清是全血的子集。
如本文所用的“捐赠者”是指获得血液制品的哺乳动物，尤其是人。捐赠物可以是全血(WB)或者通过单采法(apheresis)取回(retrieved)的全血的特定组分。
如本文所用的“单采法”是医学技术，其中捐赠者的血液经过一种设备，该设备分离出一种具体成分并将剩余成分返回血液循环。例如，血浆单采法(plasmapheresis)仅收集血浆，所有的其他组分返回捐赠者。
如本文所用，从捐赠者“获得血液制品”是指从捐赠者取回血液的操作，尤其是直接从捐赠者的静脉取得血液。
“细胞因子”，如本文所用，是种类广泛且松散的小蛋白质(～5–20kDa)，其在细胞信号传导中是重要的。它们由细胞释放并影响其他细胞的行为。细胞因子也可参与自分泌信号传导。细胞因子包括趋化因子、干扰素、白细胞介素、淋巴因子、肿瘤坏死因子和生长因子。
“临床相关的淋巴细胞”也称为抗原-编辑的(antigen-edited)淋巴细胞。术语临床相关也用于淋巴细胞亚组。优选的临床相关的淋巴细胞特别是临床相关的T-细胞或抗原-编辑的T-细胞。
根据本发明的“临床相关的抗原”是疾病涉及的抗原。因此，临床相关的抗原可以是肿瘤相关抗原TAA、病原体相关抗原(PAA)或自身抗原。肿瘤反应性淋巴细胞是对TAA特异性的并与TAA相互作用。传染性疾病反应性淋巴细胞是对PAA特异性的并与PAA相互作用，自身免疫性疾病反应性淋巴细胞是对自身抗原特异性的并与自身抗原相互作用。
根据本发明，“抗原”(Ag)可以是任何结构物质，其分别作为适应性免疫应答受体、TCR或抗体的靶标。抗原尤其是蛋白质、多糖、脂质及其亚结构诸如肽。尤其是当与蛋白质或多糖组合时，脂质和核酸是抗原性的。
由一个捐赠者或多个捐赠者提供血液制品不包括获得该血液制品的过程。
根据本发明，质量因子可以是可在血液中发现的任何组分并且其浓度对高度敏感的细胞系诸如免疫系统细胞和干细胞的生长和性质具有影响。
免疫系统细胞包括但不限于B-细胞、T-细胞、NK细胞、单核细胞、树突细胞、粒细胞和血小板。
血源性培养基(blood derived media)具有如下缺点：由于从一个捐赠者到下一个的变动而存在成分的变化。
如本文所用，“病原体相关因子(pathogen related factor)”是鉴定血液中病原体存在的因子。通常测试的病原体例如是抗-克氏锥虫、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、细小病毒、水痘-带状疱疹病毒、戊型肝炎病毒(HEV)以及1型和2型人类免疫缺陷病毒(HIV-1、HIV-2)。对病原体相关因子进行测试使得使用感染的血液制品的风险最小化。优选地，质量因子不是病原体相关因子。
人类血液捐赠者包括自愿的捐赠者和专业监测的捐赠者。这两类捐赠者必须是健康的个体。此外，人类血液捐赠者必须满足一定的标准，诸如年龄、体重和饮食。专业监测的捐赠者被登记入册。在登记册中，对关于捐赠者和提供的血液样品的各种数据进行记录。
提供第一血液制品尤其包括将血液制品转移到血袋盒(blood bag kit)、袋、容器、器皿或多孔板。根据一个实施方案，将来自第一捐赠者的第一血液制品转移至血袋盒。
根据一个实施方案，将来自第一捐赠者的第一血液制品转移至多孔板。多孔板尤其是24-孔板、48-孔板、96-孔板或192-孔板。多孔板是有许多孔的板。孔的数目不限。
对于测量质量因子的浓度，很多方法在本领域是已知的。根据本发明的一个实施方案，采用选自浊度法(nephelometry)、比浊法(turbidimetry)和ELISA的方法测量质量因子。浊度计(nephelometer)是测量液体或气体胶体中悬浮粒子的浓度的仪器。
欧标(Euronorm)EN 27027(与德国DIN-标准(DIN-Norm)、ISO标准7027(ISO Norm7027)相同)对浊度法(和比浊法)进行了定义。浊度计通过使用设置在源光束(sourcebeam)的一侧的光束和光检测器来测量悬浮粒子。在浊度法中，向血液制品的样品中加入对质量因子特异性的抗体。然后，抗体与质量因子相互作用引起光侧向散射的参与(participation)。因此，可以限定增加或减少。在浊度法中，测量侧向散射光的增加。在比浊法中，测量前向散射光的减少。浊度测量的结果以浊度单位(nephelometric turbidityunit)(NTU)给出，并且通过具有确定的质量因子浓度值的NTU-曲线校准，与该质量因子的浓度值相关。
酶联免疫吸附试验(ELISA)是用于测定抗原的存在与质量的固相试验，尤其是可以使用夹心ELISA。尤其是通过基于PCR的方法测定病原体相关因子的存在。
将质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较，意味着取得从特定质量因子测量获得的读数并检查该质量因子的值是否在预定范围内。可以采用测试装置或与测试装置连接的装置自动完成测试。可选择地，可以通过进行测量的人员手动进行比较。
根据本发明优选的质量因子是一个细胞因子或一些细胞因子。质量因子可以是一组细胞因子。此外，质量因子可以是所有细胞因子。如实施例所示，对于多种细胞因子确定的是，这些细胞因子存在于预定范围之外(这意味着高于某一阈值)强烈地降低了培养基在生长和/或扩增免疫系统细胞或干细胞的能力方面的质量。尤其是不可能获得具有免疫治疗质量的扩增的淋巴细胞。
因此，根据一个实施方案，质量因子是细胞因子。然而，已经发现其他组分极大影响了扩增培养基在生长尤其是扩增免疫系统细胞的能力方面的质量。
有趣的是，质量因子在预定范围之外的培养基，即非选择的培养基，仍然能够用于生长用于重组蛋白表达的细胞。已经鉴定的其他质量因子是雌二醇、皮质醇、性激素结合球蛋白(SHBG)、胰岛素和胰岛素样生长因子1(IGF-1)。
然而，其他质量因子可能没有被特别提及，但是也会影响培养基在淋巴细胞的生长和扩增方面的质量，但不一定影响标准细胞系的生长。根据本发明的一个实施方案，至少一个质量因子选自由雌二醇、皮质醇、SHBG、胰岛素和IGF-1。
有多种细胞因子，它们在预定范围之外的存在导致血液制品不被选择。一个质量因子是CCL5，也称为RANTES。CCL5的预定范围低于5ng/ml，尤其低于3ng/ml。
所有浓度值根据ISO 7027由浊度法界定。因此，上限是5ng/ml，尤其是3ng/ml；质量因子的所有界定浓度都是基于血液制品的体积。
另一个质量因子是细胞因子嗜酸性粒细胞趋化因子。嗜酸性粒细胞趋化因子的预定范围是低于800pg/ml，尤其是500pg/ml。另一个质量因子是PDGF-88。PDGF-88的预定范围是低于150pg/ml，尤其低于100pg/ml。另一个质量因子是CXCL-10。CXCL-10的预定范围是低于150pg/ml，尤其低于100pg/ml。另一个质量因子是细胞因子IL-10。IL-10的预定浓度范围是低于200pg/ml。另一个质量因子是细胞因子IL-13。IL-13的预定范围是低于80pg/ml，尤其低于50pg/ml。另一个质量因子是IL-1b。IL-1b的预定范围是低于30pg/ml，尤其低于20pg/ml。另一个质量因子是IL-2。另一个质量因子是IL-4。IL-5是另一个质量因子。IL-7是另一个质量因子。另外，IL-8是另一个质量因子。另一个质量因子是IL-9。根据本发明，IL-12p70也是质量因子。另一个质量因子是IL-15。根据本发明的一个质量因子是IL-17a。IL-21是另一个质量因子。另一个质量因子是碱性FGF。表皮生长因子(EGF)是另一个质量因子。另一个质量因子是干扰素γ(IFNγ)。粒细胞集落刺激因子(GCSF)是根据本发明的另一个质量因子。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是根据本发明的另一个质量因子。此外，MCP1被确定为质量因子。确定的另一个质量因子是MIP1a。MIP1b也是。另一个质量因子是PDGF。此外，IL-1RA是另一个质量因子，并且肿瘤坏死因子α(TNFα)是另一个质量因子。所有这些因子都是存在于人血液中的已知细胞因子。
因子IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL 12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP 1b、PDGF、II 1RA和TNFα低于30pg/ml，尤其低于20pg/ml。
发现上面列出的所有细胞因子都影响淋巴细胞、免疫细胞或干细胞的培养尤其是扩增。因此，这些细胞因子只允许达到某一上阈限。其他质量因子有必要至少在一定程度上包括在血液制品中。
根据一个实施方案，所述质量因子是雌二醇。雌二醇应当以至少65pmol/l的浓度存在于血液制品中。雌二醇的优选浓度是至少75pmol/l。更优选地，雌二醇的浓度是至少85pmol/l。
根据本发明的一个实施方案，所述质量因子是皮质醇。皮质醇的预定范围是至少190nmol/l，优选至少210nmol/l，更优选至少220nmol/l。
根据本发明的一个实施方案，所述质量因子是胰岛素样生长因子1(IGF-1)。根据一个实施方案，IGF-1的预定范围是至少100μg/l，优选至少130μg/l，更优选至少140μg/l。
存在根据本发明的细胞培养基应当满足的多个其他参数，特别是预定范围中存在的标准培养因子。因此，该方法还包括测量标准培养因子并将它们与预定范围进行比较。
标准培养因子的实例是：蛋白质、葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、氨基酸氮、肌酸酐、肌酸、尿素、总脂质、甘油三酸酯、胆甾醇、脂质、酯化组分、磷脂、脂肪酸、有机酸、丙酮酸盐、柠檬酸盐、酮类。
基于细胞培养基总体积的预定范围是：蛋白质60.080.0g/l；葡萄糖4.5至5.5mmol/l，非蛋白氮15至30mmol/l，尿素氮3.5至7.0mmol/l，氨基酸氮3.0至5.0mmol/l；肌酸酐70.0至140.0μmol/l；肌酸25.0至70.0μmol/l；尿素3.0至5.0μmol/l；总脂质4.5至8.5g/l；甘油三酸酯0.6至2.4mmol/l，胆甾醇4.0至6.5mmol/l，脂质浓度是0.3至0.4mmol/l，酯化组分0.7至0.8mmol/l，磷脂2.0至3.0mmol/l，脂肪酸0.3至0.9mmol/l；有机酸4.0至6.0mmol/l，丙酮酸盐0.1至0.2mmol/l，柠檬酸盐0.1至0.2mmol/l，以及酮类浓度是0.3至0.5mmol/l。
根据本发明的一个实施方案，采用多于一种血液制品来实施步骤，并且将选择的血液制品或加工的血液制品组合形成培养基。一个捐赠者一次只能获得200至500ml血液制品。因此，必须将几个捐赠者的几种血液制品组合以用于细胞培养。只使用选择的血液制品用于制备细胞培养基。
如果在未被选择的样品中，血液制品中的一个或多个质量因子超过上限–如果适用–超过质量因子上限值的少于30％，更优选少于20％，更优选少于10％，那么血液制品是暂时未被选择的血液制品。此外，如果在未被选择的样品中，血液制品中的一个或多个质量因子超过下限–如果适用–超过质量因子上限值的少于30％，更优选少于20％，更优选少于10％，那么血液制品是暂时未被选择的血液制品。如果有可能将暂时未被选择的血液制品与至少一种选择的血液制品混合以得到质量因子在限定范围内的混合血液制品，那么暂时未被选择的血液制品可以成为选择的血液制品。否则，暂时未被选择的血液制品会成为未被选择的血液制品。
也有可能测定制品混合物中至少一个质量因子的浓度。因此，本发明还提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：
a)提供来自两个或更多个捐赠者的血液制品的至少第一混合物；
b)测量该第一混合物中至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果该质量因子的测量浓度在该预定范围内，那么选择该第一混合物用于细胞培养基，否则，不选择该第一混合物。
另外，优选的是，在将血液制品加入到混合物中形成培养基之前直接测量血液制品中的质量因子的浓度。还可能筛选血液制品的各种混合物并检验这些混合物是否满足由质量因子确定的要求。
在选择之后且在加入到最终产品即细胞培养基之前，可以将血液制品转化成加工的血液制品。加工血液制品意味着使一种类型的血液制品变成另一种类型的血液制品。例如，测量和选择的血液制品是全血，然后其会被进一步转化为血浆。可选择地，测量和选择的血液制品是全血，加工的血液制品是血清。另一选择是选择的血液制品是血浆，加工的血液制品是血清。另一选择是选择的血液制品是血浆，加工的血液制品是血清的子集。另外，选择的血液制品可以是血清，加工的血液制品是血清的子集。
优选地，提供的血液制品是血浆。血浆经常被用于培养例如免疫系统的细胞。此外，血浆能够通过血浆单采法从捐赠者容易地取回。因此，加工的血液制品也是血浆。使用血浆具有不需要进一步的加工步骤的优点。因此，节省了工艺步骤。
优选地，测试两个或更多个质量因子，例如，测试2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个质量因子。测试更多个质量因子增加了获得真正地满足培养和扩增高活性淋巴细胞的更高质量标准的最终细胞培养基的机会。然而，测试一个样品中的大量因子也导致工艺的复杂性增加。因此，优选地，测试少于15个、少于12个、少于10个、少于8个、少于6个质量因子。
根据本发明的一个实施方案，测试的质量因子的数目范围是2至6，优选3至5，优选4。已发现，已知质量因子的某一子集足以发现一种高可能性，即该细胞培养基是适合淋巴细胞扩增或干细胞培养的细胞培养基。显示整个样品是高质量样品的指示的质量因子是SHBG、IGF-1、CCL5和IL-6。因此，优选地，质量因子是SHBG。也优选IGF-1作为质量因子。类似地，CCL5是优选的质量因子。IL-6也是优选的质量因子。根据本发明的一个实施方案，测试的所有质量因子是SHBG、IGF-1、CCL5和IL-6。
质量因子的测试也可用于选择合适的捐赠者，尤其是专业监测的捐赠者。专业监测的捐赠者定期捐赠血液制品并记录在册。
使用本发明的方法，献血者可以鉴定为适合捐赠高质量的血液制品。因此，根据本发明的方法提供了关于捐赠者级别的进一步的选择步骤。
根据一个实施方案，该方法包括捐赠者选择：
a)提供来自捐赠者的血液制品；
b)测量第一捐赠者的血液制品中至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果血浆库的浓度值如果该质量因子的测量浓度在该预定范围内，那么选择该捐赠者用于血浆或血清捐赠，否则，不选择该第一捐赠者。
将未被选择的捐赠者从高质量血液制品登记册中除去。
本发明还涉及细胞培养基，基于细胞培养基的体积，该细胞培养基包括：
-浓度低于3ng/ml的CCL5；
-浓度低于500pg/ml的嗜酸性粒细胞趋化因子，
-浓度低于100pg/ml的PDGF-88和/或CXCL-10；
-浓度低于200pg/ml的IL-10；
-浓度低于50pg/m的IL-13；
-浓度低于20pg/ml的IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL 12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP 1b、PDGF、II1RA和/或TNFα；
-浓度至少是65pmol/l，优选至少是75pmol/l，更优选至少是85pmol/l的雌二醇；
-浓度至少是190nmol/l，优选至少是210nmol/l，更优选至少是220nmol/l的皮质醇；
-浓度至少是100μg/l，优选至少是130μg/l，更优选至少是140μg/l的IGF-1；和/或
-浓度低于31nmol/l，优选低于29nmol/l的SHBG。
该培养基提供在受控和人工环境中T-细胞培养和扩增所必需的营养，从而能够获得稳定且可重复的结果。
细胞培养基优选是由根据本发明的制备方法获得的培养基。根据一个实施方案，细胞培养基包括至少一种血液制品，尤其是血浆和/或血清。更优选地，血液制品是血清。根据另一个实施方案，细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品。优选地，来自两个或更多个捐赠者的血液制品选自血清和/或血浆。更优选地，来自两个或更多个捐赠者的制品是血清。根据一个可选的实施方案，细胞培养基是合成培养基。
存在根据本发明的细胞培养基应当满足的多个其他参数，特别是，预定范围中存在的标准培养因子。标准培养因子的实例是：蛋白质、葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、氨基酸氮、肌酸酐、肌酸、尿素、总脂质、甘油三酸酯、胆甾醇、脂质、酯化组分、磷脂、脂肪酸、有机酸、丙酮酸盐、柠檬酸盐、酮类。
因此，本发明的细胞培养基还包括：
-浓度是60.080.0g/l的蛋白质；
-浓度是4.5至5.5mmol/l的葡萄糖；
-浓度是15至30mmol/l的非蛋白氮；
-浓度是3.5至7.0mmol/l的尿素氮；
-浓度是3.0至5.0mmol/l的氨基酸氮；
-浓度是70.0至140.0μmol/l的肌酸酐；
-浓度是25.0至70.0μmol/l的肌酸；
-浓度是3.0至5.0μmol/l的尿素；
-浓度是4.5至8.5g/l的总脂质；
-浓度是0.6至2.4mmol/l的甘油三酸酯；
-浓度是4.0至6.5mmol/l的胆甾醇；
-浓度是0.3至0.4mmol/l的脂质；
-浓度是0.7至0.8mmol/l的酯化组分；
-浓度是2.0至3.0mmol/l的磷脂；
-浓度是0.3至0.9mmol/l的脂肪酸；
-浓度是4.0至6.0mmol/l的有机酸；
-浓度是0.1至0.2mmol/l的丙酮酸盐；
-浓度是0.1至0.2mmol/l的柠檬酸盐；和/或
-浓度是0.3至0.5mmol/l的酮类。
优选地，该细胞培养基满足上述所有参数。
根据一个实施方案，细胞培养基包括下述的任一个：
-浓度低于29nmol/l的SHBG；
-浓度至少是100μg/l的IGF-1，
-浓度低于20pg/ml的IL-6；和
-浓度低于3ng/ml的CCL5。
根据另一个实施方案，细胞培养基包括
-浓度低于29nmol/l的SHBG；
-浓度至少是100μg/l的IGF-1，
-浓度低于20pg/ml的IL-6；和
-浓度低于3ng/ml的CCL5。
根据本发明的细胞培养基可以由血液制品的混合物组成。优选地，细胞培养基除了血液制品的混合物之外还包括其他组分。根据一个优选的实施方案，其他组分选自水、NaCl、PBS、DTT、TCEP或2-巯基乙醇。
根据本发明的细胞培养基适合培养多种不同的细胞。因此，本发明还提供细胞培养基用于培养细胞的用途。主要的优点是除了培养永生细胞系(immortal cell line)之外，还可以成功地培养从患者获得的细胞尤其是免疫系统的细胞或干细胞。
采用根据本发明的培养基，特别是用根据本发明的方法获得的培养基，发现了高得多的淋巴细胞的扩增速率。如本文所用的“扩增”或“克隆扩增”意思是生产最初来自单细胞的子细胞。在淋巴细胞的克隆扩增中，所有后代都具有相同的抗原特异性。
此外，在细胞培养中采用根据本发明的培养基能够获得总数增加的细胞。特别地，能够获得增加数量的具有相同抗原特异性的淋巴细胞的总扩增子细胞。
因此，根据用途的一个实施方案，细胞是免疫系统的细胞，尤其是淋巴细胞。优选地，从患者获得淋巴细胞。根据一个实施方案，淋巴细胞在细胞培养基中生长、增殖和/或扩增。
根据一个实施方案，培养基用于扩增来自肿瘤的T-细胞。优选地，扩增包括使用IL-2、IL-15和IL-21的细胞因子组合。根据本发明，IL-2、IL-15和IL-21的组合物(composition)也称作“细胞因子组合(cytokine cocktail)”。
如本文所用，“白细胞介素2”或“IL-2”是指由SEQ ID NO:1限定的人IL-2及其功能等效物。如本文所用，“白细胞介素15”或“IL-15”是指人IL-15及其功能等效物。如本文所用，“白细胞介素21”或“IL-21”是指人IL-21及其功能等效物。
根据本发明的细胞培养基，优选采用根据本发明的方法得到的培养基，尤其适合与IL-2、IL-15和/或IL-21的细胞因子混合物组合来扩增淋巴细胞。优选地，与细胞因子的该混合物组合，根据本发明的细胞培养基提供了提高的生长率、总数增加的扩增细胞以及改善的细胞轮廓(profile)。特别地，由CD45RA/CCR7表型限定的成熟和分化得到改善。最终发现，用细胞因子IL-2、IL-15和IL-21的混合物扩增淋巴细胞会导致临床相关淋巴细胞尤其是T-细胞的存活率提高。
在主动细胞免疫治疗中，提高的生长和扩增速率减少了从患者获得淋巴细胞样品至将标准淋巴细胞再引入患者的时间。(临床相关)淋巴细胞存活率的提高导致主动免疫治疗产品的疗效提高。
受益于上面的描述和相关附图中呈现的教导，本发明所属领域技术人员将想到对本文提出的本发明的许多修改和其他实施方案。因此，应当理解的是，本发明并不限于公开的具体实施方案，修改和其他具体实施方案旨在包括在所附权利要求的范围内。虽然本文采用了特定术语，但是它们仅在一般和描述性意义上使用，而非用于限定的目的。
实施例
实施例1-不同细胞培养基中淋巴细胞的扩增
对用NY-ESO-1致敏(primed)的健康捐赠者实施单采法。在分离血液组分之后，将含有白细胞的产物与其余分离。
将细胞悬浮在具有1000U/ml IL-2、10ng/ml IL-15和10ng/ml IL-21的培养基M1中。培养基另外还含有10μmol NY-ESO-1肽。细胞扩增良好，4天后达到106/ml的浓度。
平行地，根据相同的方案将淋巴细胞在培养基M2中进行扩增。没有检测到淋巴细胞显著扩增。
实施例2-细胞培养基的组成分析
标准测试没有显示细胞培养基之间有任何不同。使用浊度法和抗列为表1组分的物质的抗体，对培养基M1和M2进行更详细的分析。
表1
组分 单位 M 1 M 2
甘油三酸脂 mmol/l 1.1 0.99
胆固醇 mmol/l 4.1 2.8
HDL-胆固醇 mmol/l 1.1 0.9
LDL-胆固醇 mmol/l 2.5 1.5
雌二醇 pmol/l 86 57
T3 pmol/l 11 12
T4 pmol/l 4.4 4.5
皮质醇 nmol/ 231 179
睾酮 nmol/l 12 12
SHGB nmol/l 26 31
胰岛素 mIE/l 7.2 5.0
IGF-1 μg/l 157 86
S-GH μg/l 0.3 0.3
实施例3-不同捐赠者血浆的分析
根据细胞培养基分析的结果，从不同的专业监测的捐赠者获得血浆样品，并且，针对雌二醇、皮质醇、胰岛素和IGF-1的浓度对血浆样品进行分析。结果列于表2。
表2
组分 单位 P1 P2 P3 P4 P5
雌二醇 pmol/l 53 56 58 88 87
皮质醇 nmol/ 231 233 177 235 230
胰岛素 mIE/l 7.2 4.9 7.3 7.4 7.5
IGF-1 μg/l 84 154 158 157 156
根据本发明的方法，血浆样品P1至P4未被选择。血浆样品P5被选择用于淋巴细胞培养。
实施例4-不同捐赠者血浆的分析
为了确认血浆选择，于是准备血浆样品P1至P5用于细胞培养。根据上面描述的方案，培养从用NY-ESO-1致敏的健康捐赠者的外周血获得的淋巴细胞。将P5在细胞培养基中的扩增与在培养基M1中的扩增(参见实施例1)进行比较。

Claims (24)

1.制备细胞培养基的方法，所述细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，所述方法包括如下步骤：
a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；
b)测量所述第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与所述质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果所述质量因子的测量浓度在所述预定范围内，那么选择所述第一血液制品用于所述细胞培养基并且选择性地将所述第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择所述第一血液制品。
2.根据权利要求1所述的方法，其中采用来自不同捐赠者的多于一种的血液制品进行步骤a)至d)，并且将所述选择的血液制品或加工的血液制品合并形成所述培养基。
3.制备细胞培养基的方法，所述细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，所述方法包括如下步骤：
a)提供来自两个或更多个捐赠者的血液制品的至少第一混合物；
b)测量所述第一混合物中的至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与所述质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果所述质量因子的测量浓度在所述预定范围内，那么选择所述第一混合物用于所述细胞培养基，否则，不选择所述第一混合物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述血液制品选自全血、血浆、血清或其子集。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一个质量因子选自细胞因子，或者选自雌二醇、皮质醇、性激素结合球蛋白(SHBG)、胰岛素和胰岛素样生长因子1(IGF-1)。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞因子选自如下：白细胞介素6(IL-6)、干扰素-γ(IFNγ)、白细胞介素1受体激动剂(IL-1RA)、白细胞介素5(IL-5)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子(TNFα)、CCL5(RANTES)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素1b(IL-1b)、嗜酸性粒细胞趋化因子、碱性FGF、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF-88)、C-X-C基序趋化因子10(CXCL-10)100pg/ml、白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素4(IL-4)、MCP1、白细胞介素8(IL-8)、MIP1a、白细胞介素10、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、白细胞介素15(IL-15)、白细胞介素7(IL-7)白细胞介素12p70(IL 12p70)、白细胞介素17a(IL-17a)、白细胞介素9(IL-9)和白细胞介素21(IL-21)。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述质量因子选自SHBG、IGF-1、CCL5和IL-6。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中测试两个或更多个质量因子。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述质量因子选自CCL5、嗜酸性粒细胞趋化因子、PDGF-88、CXCL-10、IL-10、IL-13、IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP1b、PDGF、IL-1RA、TNFα、雌二醇、皮质醇、IGF-1和SHBG。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中测试四个质量因子，并且其中所述质量因子是SHBG、IGF-1、CCL5和IL-6。
11.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其中基于所述血液制品的体积来限定的浓度范围是：
-CCL5低于3ng/ml，
-嗜酸性粒细胞趋化因子低于500pg/ml，
-PDGF-88和CXCL-10低于100pg/ml，
-IL-10低于200pg/ml，
-IL-13低于50pg/m，
-IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL 12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP 1b、PDGF、IL-1RA和TNFα低于20pg/ml
-雌二醇至少是65pmol/l，优选至少是75pmol/l，更优选至少是85pmol/l
-皮质醇至少是190nmol/l，优选至少是210nmol/l，更优选至少是220nmol/l；
-IGF-1至少是100μg/l，优选至少是130μg/l，更优选至少是140μg/l；
-SHBG低于31nmol/l，优选低于29nmol/l。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括捐赠者选择，其包括：
a)提供来自捐赠者的血液制品；
b)测量第一捐赠者的血液制品中至少一个质量因子的浓度；
c)将一个质量因子的测量浓度与所述质量因子的预定浓度范围进行比较；
d)如果所述血浆库的浓度值如果所述质量因子的测量浓度在所述预定范围内，那么选择所述捐赠者用于血浆或血清捐赠，否则，不选择所述第一捐赠者。
13.细胞培养基，基于所述细胞培养基的体积，其包括：
-浓度低于3ng/ml的CCL5；
-浓度低于500pg/ml的嗜酸细胞活化趋化因子，
-浓度低于100pg/ml的PDGF-88和/或CXCL-10；
-浓度低于200pg/ml的IL-10；
-浓度低于50pg/m的IL-13；
-浓度低于20pg/ml的IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP 1b、PDGF、IL-1RA和/或TNFα；
-浓度至少是65pmol/l，优选至少是75pmol/l，更优选至少是85pmol/l的雌二醇；
-浓度至少是190nmol/l，优选至少是210nmol/l，更优选至少是220nmol/l的皮质醇；
-浓度至少是100μg/l，优选至少是130μg/l，更优选至少是140μg/l的IGF-1；和/或
-浓度低于31nmol/l，优选低于29nmol/l的SHBG。
14.根据权利要求13所述的细胞培养基，包括至少一种血液制品，特别是血浆和/或血清。
15.根据权利要求14所述的细胞培养基，包括来自两个或更多个捐赠者的血清。
16.根据权利要求13所述的细胞培养基，其中所述细胞培养基是合成培养基。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的细胞培养基，还包括：
-浓度是60.080.0g/l的蛋白质；
-浓度是4.5至5.5mmol/l的葡萄糖；
-浓度是15至30mmol/l的非蛋白氮；
-浓度是3.5至7.0mmol/l的尿素氮；
-浓度是3.0至5.0mmol/l的氨基酸氮；
-浓度是70.0至140.0μmol/l的肌酸酐；
-浓度是25.0至70.0μmol/l的肌酸；
-浓度是3.0至5.0μmol/l的尿素；
-浓度是4.5至8.5g/l的总脂质；
-浓度是0.6至2.4mmol/l的甘油三酸酯；
-浓度是4.0至6.5mmol/l的胆甾醇；
-浓度是0.3至0.4mmol/l的脂质；
-浓度是0.7至0.8mmol/l的酯化组分；
-浓度是2.0至3.0mmol/l的磷脂；
-浓度是0.3至0.9mmol/l的脂肪酸；
-浓度是4.0至6.0mmol/l的有机酸；
-浓度是0.1至0.2mmol/l的丙酮酸盐；
-浓度是0.1至0.2mmol/l的柠檬酸盐；和/或
-浓度是0.3至0.5mmol/l的酮类。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的细胞培养基，包括下述的任一个：
-浓度低于29nmol/l的SHBG；
-浓度至少是100μg/l的IGF-1，
-浓度低于20pg/ml的IL-6；和
-浓度低于3ng/ml的CCL5。
19.根据权利要求13至19中任一项所述的细胞培养基，包括
-浓度低于29nmol/l的SHBG；
-浓度至少是100μg/l的IGF-1，
-浓度低于20pg/ml的IL-6；和
-浓度低于3ng/ml的CCL5。
20.根据权利要求13至19中任一项所述的细胞培养基，还包括PBS。
21.根据权利要求13至20中任一项所述的细胞培养基用于培养细胞的用途。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述细胞是淋巴细胞，尤其是来自患者的淋巴细胞。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述淋巴细胞在所述细胞培养基中生长、增殖和/或扩增。
24.根据权利要求23所述的用途，其中所述淋巴细胞在存在IL-2、IL-15和IL-21的细胞因子组合中的至少一种抗原时在所述细胞培养基中扩增。
CN201580042926.XA 2014-06-10 2015-06-10 用于细胞免疫治疗的培养基 Pending CN106574245A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102014211052 2014-06-10
DE102014211052.1 2014-06-10
PCT/EP2015/062992 WO2015189301A1 (en) 2014-06-10 2015-06-10 Culture medium for cellular immunotherapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106574245A true CN106574245A (zh) 2017-04-19

Family

ID=53498960

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580042926.XA Pending CN106574245A (zh) 2014-06-10 2015-06-10 用于细胞免疫治疗的培养基

Country Status (10)

Country Link
US (1) US10975353B2 (zh)
EP (1) EP3155092B1 (zh)
JP (1) JP6806970B2 (zh)
KR (1) KR102573837B1 (zh)
CN (1) CN106574245A (zh)
AU (1) AU2015273531B2 (zh)
CA (1) CA2951746C (zh)
IL (1) IL249410B (zh)
RU (1) RU2708199C2 (zh)
WO (1) WO2015189301A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY180750A (en) * 2014-06-11 2020-12-08 Polybiocept Ab Expansion of lymphocytes with a cytokine composition for active cellular immunotherapy
KR102631682B1 (ko) * 2021-12-02 2024-02-28 (주)에스엠티바이오 면역 세포 공여자의 선별 방법

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5648350A (en) * 1993-05-25 1997-07-15 Laboratoires Besins Iscovesco Dihydrotestosterone for use in androgenotherapy
WO1999067365A1 (en) * 1998-06-22 1999-12-29 Medi-Cult A/S A method for in vitro maturation of human gametes
JP2001275662A (ja) * 2000-04-03 2001-10-09 Nobuhiko Emi ヒト血清及びその製造方法
JP2003235548A (ja) * 2001-12-13 2003-08-26 Japan Science & Technology Corp ヒト細胞の培養用培地および培養方法
WO2005019450A1 (ja) * 2003-08-22 2005-03-03 Takara Bio Inc. 細胞傷害性リンパ球の製造方法
CN1754574A (zh) * 2004-09-27 2006-04-05 深圳市中兴扬帆生物工程有限公司 使用免疫细胞治疗血液缺损症和骨髓抑制
WO2007037682A1 (en) * 2005-09-28 2007-04-05 Ipd-Therapeutics B.V. Methods and means for stem cell proliferation and subsequent generation and expansion of progenitor cells, as well as production of effector cells as clinical therapeutics.
CN101243187A (zh) * 2005-08-17 2008-08-13 宝生物工程株式会社 淋巴细胞的制备方法
US20100323383A1 (en) * 2008-04-15 2010-12-23 Nicolas Manel Methods for in vitro differentiation of Th-17+cells
CN102781449A (zh) * 2009-12-29 2012-11-14 加米达细胞有限公司 增强自然杀伤细胞增殖和活性的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2415929C2 (ru) * 2009-06-10 2011-04-10 Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное предприятие "ПанЭко" Специализированная среда для культивирования клеток амниотической жидкости и фибробластов человека
WO2012012803A2 (en) * 2010-07-23 2012-01-26 Advanced Cell Technology, Inc. Methods for detection of rare subpopulations of cells and highly purified compositions of cells

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5648350A (en) * 1993-05-25 1997-07-15 Laboratoires Besins Iscovesco Dihydrotestosterone for use in androgenotherapy
WO1999067365A1 (en) * 1998-06-22 1999-12-29 Medi-Cult A/S A method for in vitro maturation of human gametes
JP2002519640A (ja) * 1998-06-22 2002-07-02 メディ−カルト エイ／エス 未受精卵の存在を示すためのアッセイ
JP2001275662A (ja) * 2000-04-03 2001-10-09 Nobuhiko Emi ヒト血清及びその製造方法
JP2003235548A (ja) * 2001-12-13 2003-08-26 Japan Science & Technology Corp ヒト細胞の培養用培地および培養方法
WO2005019450A1 (ja) * 2003-08-22 2005-03-03 Takara Bio Inc. 細胞傷害性リンパ球の製造方法
CN1839202A (zh) * 2003-08-22 2006-09-27 宝生物工程株式会社 细胞毒性淋巴细胞的制备方法
CN1754574A (zh) * 2004-09-27 2006-04-05 深圳市中兴扬帆生物工程有限公司 使用免疫细胞治疗血液缺损症和骨髓抑制
CN101243187A (zh) * 2005-08-17 2008-08-13 宝生物工程株式会社 淋巴细胞的制备方法
WO2007037682A1 (en) * 2005-09-28 2007-04-05 Ipd-Therapeutics B.V. Methods and means for stem cell proliferation and subsequent generation and expansion of progenitor cells, as well as production of effector cells as clinical therapeutics.
US20100323383A1 (en) * 2008-04-15 2010-12-23 Nicolas Manel Methods for in vitro differentiation of Th-17+cells
CN102781449A (zh) * 2009-12-29 2012-11-14 加米达细胞有限公司 增强自然杀伤细胞增殖和活性的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIESECKER等: "Interleukin-6 is a component of human umbilical cord serum and stimulates hematopoiesis in embryonic stem cells in vitro", 《EXPERIMENTAL HEMATOLOGY》 *
EDUARDO HUARTE等: "Ex vivo expansion of tumor specific lymphocytes with IL-15 and IL-21 for adoptive immunotherapy in melanoma", 《CANCER LETTERS》 *
MCFAUL等: "Hemoglobin stimulates the release of proinflammatory cytokines from leukocytes in whole blood", 《JOURNAL OF LABORATORY AND CLINICAL MEDICINE》 *
李霞等: "雌二醇对小鼠正常淋巴细胞和致敏淋巴细胞活化的调节", 《现代免疫学》 *
林明敏等: "石鲽外周血细胞的培养及染色体制备条件的探讨 ", 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 *
钟学礼等: "《临床糖尿病学》", 31 October 1989, 上海科学技术出版社 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015189301A1 (en) 2015-12-17
JP6806970B2 (ja) 2021-01-06
CA2951746C (en) 2023-08-22
EP3155092C0 (en) 2024-02-28
CA2951746A1 (en) 2015-12-17
EP3155092B1 (en) 2024-02-28
EP3155092A1 (en) 2017-04-19
RU2708199C2 (ru) 2019-12-04
RU2017100024A (ru) 2018-07-18
AU2015273531A1 (en) 2017-01-12
JP2017522902A (ja) 2017-08-17
US10975353B2 (en) 2021-04-13
KR102573837B1 (ko) 2023-09-01
IL249410A0 (en) 2017-02-28
US20170121680A1 (en) 2017-05-04
AU2015273531B2 (en) 2021-07-29
IL249410B (en) 2021-01-31
RU2017100024A3 (zh) 2018-11-28
KR20170031138A (ko) 2017-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104593324B (zh) 一种自然杀伤细胞的培养基及自然杀伤细胞的扩增培养方法
CN105754941A (zh) 一种外周血nk细胞的体外诱导扩增培养方法
CN106148266A (zh) 一种免疫细胞用培养基及该培养基的添加剂
CN104938477A (zh) 一种cik细胞冻存液及冻存方法
CN109161527A (zh) 一种高效的nk细胞扩增方法
CN105062968A (zh) 一种dc-cik细胞培养试剂及其培养方法
CN107988155A (zh) 一种cik细胞的制备方法
CN109825473A (zh) 一种采用tlr7激动剂刺激的自体外周血淋巴细胞的培养方法
CN103436492A (zh) 通过无血清培养扩增活化淋巴细胞的方法
CN106085958A (zh) 一种nk细胞的制备方法
CN109456940A (zh) 得到nk细胞或树突细胞的方法
JP2007297291A (ja) リンパ球の活性・増殖に係る培養方法
CN114507640B (zh) 一种高增殖能力和高细胞毒性cik细胞的培养方法及其应用
CN106574245A (zh) 用于细胞免疫治疗的培养基
CN113789299B (zh) 一种脐血nk细胞的体外增殖培养基、体外培养试剂盒和体外培养方法
Zhang et al. Interleukin-12 supports in vitro self-renewal of long-term hematopoietic stem cells
CN103834614A (zh) 一种附子多糖诱导nkt细胞增殖的制备方法及其应用
CN111172110A (zh) 一种脐带血cik细胞的培养方法
CN102144165A (zh) 一种刺激细胞的标准样品
CN103289957B (zh) 干细胞样肺癌细胞制备及其抗原组合物负载树突状细胞的方法与试剂盒
JP2022533012A (ja) 細胞表現型を調節するための系および方法
CN1656214A (zh) 祖细胞在没有细胞因子存在条件下的生长和维持
CN111690608A (zh) 一种双抗体联合胸腺肽体外培养nk细胞试剂及试剂盒和培养方法
CN107541490A (zh) 一种增强型cik细胞的培养液及其培养方法
CN111690607A (zh) 一种高效杀伤细胞体外培养试剂盒及培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20201020

Address after: Alzenault, Germany

Applicant after: Poly bisobert Co., Ltd

Address before: Stockholm, Sweden

Applicant before: POLYBIOCEPT AB