CN106163503B - 包含治疗剂的治疗性纳米颗粒及其制造及使用方法 - Google Patents

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Abstract

一般地说，本公开内容涉及纳米颗粒，其包含实质上疏水性酸及治疗剂(1‑(4‑{[4‑(二甲基氨基)哌啶‑1‑基]羰基}苯基)‑3‑[4‑(4,6‑二吗啉‑4‑基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)苯基]脲)或其药学上可接受的盐，以及聚合物。其它方面包括制造及使用所述纳米颗粒的方法。

Description

包含治疗剂的治疗性纳米颗粒及其制造及使用方法
相关申请
本申请主张2014年3月14日提交的美国临时申请第61/953,628号的权益，该临时申请的全部内容以引用方式并入本申请。
背景
将某些药物递送至患者(例如，靶向特定组织或细胞类型或靶向具体患病组织但不靶向正常组织)或控制药物释放的系统长久以来一直被视为有益的。
举例而言，包括活性药物且，例如，靶向特定组织或细胞类型或靶向具体患病组织但不靶向正常组织的治疗剂可减少未被靶向的身体组织中的药物的量。在治疗诸如癌症等病况时，这尤其重要，在癌症的情况下期望将细胞毒性剂量的药物递送至癌细胞而不杀灭周围非癌性组织。有效药物靶向可减少抗癌疗法中常见的不期望及有时危及生命的副作用。此外，这类治疗剂可容许药物到达用其它方法它们不能到达的某些组织。
提供受控释放和/或靶向疗法的治疗剂还必须能够递送有效量的药物，这是其它纳米颗粒递送系统中的已知限制。举例而言，制备具有适量的与每一纳米颗粒结合的药物同时保持纳米颗粒的大小足够小以具有有利递送性质的纳米颗粒系统可为一个挑战。
含有至少一个碱性氮原子的治疗剂(即，含有可质子化氮的治疗剂)代表一组重要的治疗剂。然而，此类药物的纳米颗粒制剂通常受阻于不期望的性质，例如，不利的爆发性释放特征及不良药物载量。
因此，对于能够递送治疗水平的含有可质子化氮的治疗剂以治疗诸如癌症等疾病同时还减少患者副作用的纳米颗粒治疗剂及制造这类纳米颗粒的方法存在需求。
概述
本发明涉及治疗性药物1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐的治疗性纳米颗粒。更具体而言，本发明涉及包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐且进一步包含实质上疏水性酸的治疗性纳米颗粒。另外，本发明涉及包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐、实质上疏水性酸及选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。本发明还涉及包含所述纳米颗粒(包括多种所述纳米颗粒)及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。此外，本发明涉及包含约0.05重量％至约30重量％的实质上疏水性酸、约0.2重量％至约25重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐及约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的共聚物的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇，还涉及包含所述治疗性纳米颗粒及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。本发明还涉及包含约0.05重量％至约30重量％的实质上疏水性酸、约0.2重量％至约20重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐及约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的共聚物的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇，还涉及包含所述治疗性纳米颗粒及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
本申请中描述的是包括治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐的聚合纳米颗粒。此化合物是碱性的且它是一种含有可质子化氮的治疗剂，如下文所定义。本申请中还描述了制造及使用所述治疗性纳米颗粒的方法。
一方面，提供治疗性纳米颗粒。在此方面，治疗性纳米颗粒包含约0.05重量％至约30重量％的实质上疏水性酸、约0.2重量％至约25重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐(其中质子化形式的治疗剂的pKa比疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位)及约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的共聚物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。在一个实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约0.05重量％至约30重量％的实质上疏水性酸、约0.2重量％至约20重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐(其中质子化形式的治疗剂的pKa比疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位)及约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的共聚物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:7的重量比(治疗剂:PLA-PEG)包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:5的重量比(治疗剂:PLA-PEG)包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:4的重量比(治疗剂:PLA-PEG)包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:14的重量比(治疗剂:PLA-PEG)包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:3的重量比(治疗剂:PLA-PEG)包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。
另一方面，所述治疗性纳米颗粒包含实质上疏水性酸(其中该实质上疏水性酸与上述治疗剂的摩尔比的范围为约0.25:1至约2:1)、约0.2重量％至约25重量％的上述治疗剂(其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位)及约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。在一个实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含实质上疏水性酸(其中该实质上疏水性酸与上述治疗剂的摩尔比为约0.25:1至约2:1)、约0.2重量％至约20重量％的上述治疗剂(其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位)及约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含实质上疏水性酸及上述治疗剂(其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位)及选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物。
在一些实施例中，所述治疗性纳米颗粒包含上述治疗剂、实质上疏水性酸(其中该实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比的范围为约0.25:1至约2:1且其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位)及选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物。
在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸与上述治疗剂的摩尔比为约0.5:1至约1.5:1。在某些实施方案中，所述实质上疏水性酸与上述治疗剂的摩尔比为约0.75:1至约1.25:1。在某些实施方案中，所述实质上疏水性酸与上述治疗剂的摩尔比为约0.25:1至约1:1。在某些实施方案中，质子化形式的上述治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约2.0pKa单位。在其它实施方案中，质子化形式的上述治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约4.0pKa单位。
另一方面，所述治疗性纳米颗粒包含疏水性离子对，该疏水性离子对含有疏水性酸及上述治疗剂(其中质子化形式的上述治疗剂与所述疏水性酸之间的pKa之间的差为至少约1.0pKa单位)及约50重量％至约99.75重量％的二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物，其中聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约15kDa至约20kDa聚(乳酸)的数均分子量及约4kDa至约6kDa聚(乙)二醇的数均分子量。在本发明此方面的某些实施方案中，质子化形式的上述治疗剂与所述疏水性酸之间的pKa之间的差为至少约2.0pKa单位。在其它实施方案中，质子化形式的上述治疗剂与所述疏水性酸之间的pKa之间的差为至少约4.0pKa单位。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约0.05重量％至约20重量％的疏水性酸。
在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸具有约2至约8的log P，其中P系疏水性酸的辛醇/水分配系数。在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸具有约4至约8的log P。在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸具有约2至约7的log P。
在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸在水中具有约-1.0至约5.0的pKa。在其它实施方案中，实质上疏水性酸在水中具有约2.0至约5.0的pKa。
在某些实施方案中，所述实质上疏水性酸及上述治疗剂形成治疗性纳米颗粒中的疏水性离子对。
在一些实施方案中，所述疏水性酸是脂肪酸。举例而言，在某些实施方案中，所述脂肪酸是饱和脂肪酸，包括但不限于己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一酸、二十二烷酸、二十三烷酸、木蜡酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、虫胶蜡酸、叶虱酸、三十四酸、三十五烷酸、三十六烷酸或其组合。在其它实施方案中，所述脂肪酸是ω-3脂肪酸，包括但不限于十六碳三烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十一碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸或其组合。在其它实施方案中，所述脂肪酸是ω-6脂肪酸，包括但不限于油酸、γ-亚麻酸、二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳二烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸、二十四碳四烯酸、二十四碳五烯酸或其组合。在某些其它实施例中，脂肪酸是ω-9脂肪酸，包括但不限于油酸、二十烯酸、二十碳三烯酸(mead acid)、芥酸、神经酸或其组合。在其它实施方案中，所述脂肪酸是多不饱和脂肪酸，包括但不限于瘤胃酸(rumenic acid)、α-十八碳三烯酸、β-十八碳三烯酸、兰花酸(jacaric acid)、α-桐酸、β-桐酸、梓树酸、石榴酸、茹米烯酸(rumelenic acid)、α-帕里拉油酸、β-帕里拉油酸、十八碳五烯酸(bosseopentaenoic acid)、皮诺敛酸(pinolenicacid)、罗汉松酸或其组合。
在某些实施方案中，所述疏水性酸是胆汁酸。举例而言，在一些实施方案中，所述胆汁酸包括但不限于鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸、猪胆酸(hycholic acid)、β-鼠胆酸(muricholic acid)、胆酸、石胆酸、氨基酸缀合的胆汁酸或其组合。在一些实施方案中，所述胆汁酸是胆酸。在其它实施方案中，所述氨基酸缀合的胆汁酸是甘氨酸缀合的胆汁酸或牛磺酸缀合的胆汁酸。
在某些实施方案中，所述疏水性酸包括但不限于磺基琥珀酸二辛酸、1-羟基-2-萘甲酸、十二烷基硫酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、双羟萘酸、十一烷酸或其组合。
在其它实施方案中，所述疏水性酸具有介于约200Da与约800Da之间的分子量。
在某些实施方案中，所述疏水性酸是双羟萘酸。在其它实施方案中，所述疏水性酸是油酸。在一些实施方案中，1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与油酸的重量比为约6:1。在一些实施方案中，1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]对双羟萘酸的重量比为约1.8:1。
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约1重量％至约20重量％的上述治疗剂。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约1重量％至约15重量％的上述治疗剂。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约2重量％至约20重量％的上述治疗剂。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约2重量％至约15重量％的上述治疗剂。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约4重量％至约20重量％的上述治疗剂。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约4重量％至约15重量％的上述治疗剂。在某些其它实施例中，所述治疗性纳米颗粒包含约5重量％至约20重量％的上述治疗剂。在某些其它实施例中，所述治疗性纳米颗粒包含约5重量％至约10重量％的上述治疗剂。
在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒实质上保留治疗剂至少1分钟。在某些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒实质上立即释放小于约30％的治疗剂。在某些其它实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒经约1小时释放约10％至约45％的治疗剂。在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒经约4小时释放约0.01％至约15％的治疗剂。在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒经约10小时释放约0.01％至约15％的治疗剂。在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒经约20小时释放约0.01％至约25％的治疗剂。在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒经约40小时释放约1％至约40％的治疗剂。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒的释放特征与对照纳米颗粒的释放特征实质上相同，对照纳米颗粒与治疗性纳米颗粒实质上相同，只是它不含有脂肪酸或胆汁酸。
在某些实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.6至约0.95的聚(乳)酸数均分子量分数。在某些其它实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.6至约0.8的聚(乳)酸数均分子量分数。在其它实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.75至约0.85的聚(乳)酸数均分子量分数。在其它实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.7至约0.9的聚(乳)酸数均分子量分数。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约25重量％的聚(乙)二醇。在某些其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约20重量％的聚(乙)二醇。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约15重量％至约25重量％的聚(乙)二醇。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约20重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。
在某些实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约15kDa至约20kDa聚(乳酸)的数均分子量及约4kDa至约6kDa聚(乙)二醇的数均分子量。
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含约0.2重量％至约30重量％经靶向配体功能化的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含约0.2重量％至约30重量％经靶向配体功能化的聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。在某些实施方案中，所述靶向配体共价结合至所述聚(乙)二醇。
在某些实施方案中，所述疏水性酸是聚合物电解质。举例而言，在一些实施方案中，所述聚合物电解质包括但不限于聚(苯乙烯磺酸)、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸或其组合。
在某些实施方案中，所述考虑的治疗性纳米颗粒进一步包含两种或更多种实质上疏水性酸的混合物。举例而言，在一些实施方案中，所考虑的治疗性纳米颗粒包含两种实质上疏水性酸的混合物、三种实质上疏水性酸的混合物、四种实质上疏水性酸的混合物或五种实质上疏水性酸的混合物。在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸的混合物包含油酸及胆酸。在其它实施方案中，两种实质上疏水性酸的混合物是油酸及胆酸。
另一方面，通过以下方式来制备所述治疗性纳米颗粒：乳化包含第一聚合物、上述治疗剂及实质上疏水性酸的第一有机相，由此形成乳化相；将乳化相骤冷，由此形成骤冷相，最后过滤骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒。
在一些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸是脂肪酸。举例而言，在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的脂肪酸是饱和脂肪酸，包括但不限于己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一酸、二十二烷酸、二十三烷酸、木蜡酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、虫胶蜡酸、叶虱酸、三十四酸、三十五烷酸、三十六烷酸或其组合。在其它实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的脂肪酸是ω-3脂肪酸，包括但不限于十六碳三烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十一碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸或其组合。在其它实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的脂肪酸是ω-6脂肪酸，包括但不限于亚油酸、γ-亚麻酸、二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳二烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸、二十四碳四烯酸、二十四碳五烯酸或其组合。在某些其它实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的脂肪酸是ω-9脂肪酸，包括但不限于油酸、二十烯酸、二十碳三烯酸、芥酸、神经酸或其组合。在其它实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的脂肪酸是多不饱和脂肪酸，包括但不限于瘤胃酸、α-十八碳三烯酸、β-十八碳三烯酸、兰花酸、α-桐酸、β-桐酸、梓树酸、石榴酸、茹米烯酸、α-帕里拉油酸、β-帕里拉油酸、十八碳五烯酸、皮诺敛酸、罗汉松酸或其组合。
在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸是胆汁酸，包括但不限于鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸、猪胆酸、β-鼠胆酸、胆酸、石胆酸、氨基酸缀合的胆汁酸或其组合。在一些实施方案中，所述胆汁酸是胆酸。在其它实施方案中，所述氨基酸缀合的胆汁酸是甘氨酸缀合的胆汁酸或牛磺酸缀合的胆汁酸。
在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸包括但不限于磺基琥珀酸二辛酸、1-羟基-2-萘甲酸、十二烷基硫酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、双羟萘酸、十一烷酸或其组合。
在其它实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸具有介于约200Da与约800Da之间的分子量。
在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸是双羟萘酸。在其它实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸是油酸。在一些实施方案中，1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与用于制备所述治疗性纳米颗粒的油酸的重量比为约6:1。在一些实施方案中，1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与用于制备所述治疗性纳米颗粒的双羟萘酸的重量比为约1.8:1。在一些实施方案中，1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与用于制备所述治疗性纳米颗粒的油酸的重量比为6:1。在一些实施方案中，1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与用于制备所述治疗性纳米颗粒的双羟萘酸的重量比为1.8:1。
在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的第一聚合物是聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物。在其它实施方案中，所述第一聚合物是聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。在某些实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.6至约0.95的聚(乳)酸数均分子量分数。在某些其它实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.6至约0.8的聚(乳)酸数均分子量分数。在其它实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.75至约0.85的聚(乳)酸数均分子量分数。在其它实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.7至约0.9的聚(乳)酸数均分子量分数。
在某些实施方案中，使用约10重量％至约25重量％的聚(乙)二醇制备所述治疗性纳米颗粒。在某些其它实施方案中，使用约10重量％至约20重量％的聚(乙)二醇。在其它实施方案中，使用约15重量％至约25重量％的聚(乙)二醇。在其它实施方案中，使用约20重量％至约30重量％的聚(乙)二醇。
在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约15kDa至约20kDa聚(乳酸)的数均分子量及约4kDa至约6kDa聚(乙)二醇的数均分子量。
在一些实施方案中，通过进一步使用靶向配体对约0.2重量％至约30重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物实施官能化来制备所述治疗性纳米颗粒。在其它实施方案中，通过进一步使用靶向配体对约0.2重量％至约30重量％的聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物实施官能化来制备所述治疗性纳米颗粒。在某些实施方案中，靶向配体共价结合至聚(乙)二醇。
在某些实施方案中，用于制备所述治疗性纳米颗粒的疏水性酸是聚合物电解质。举例而言，在一些实施方案中，所述聚合物电解质包括但不限于聚(苯乙烯磺酸)、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸或其组合。
在某些实施方案中，使用两种或更多种实质上疏水性酸的混合物来制备所述治疗性纳米颗粒。举例而言，在一些实施方案中，可使用两种实质上疏水性酸的混合物、三种实质上疏水性酸的混合物、四种实质上疏水性酸的混合物或五种实质上疏水性酸的混合物来制备所述治疗性纳米颗粒。在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸的混合物包含油酸及胆酸。在其它实施方案中，所述两种实质上疏水性酸的混合物是油酸及胆酸。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含聚合物PLA-PEG且PLA-PEG的摩尔比为约5:1。
在一些实施方案中，通过以下方法来制备所述治疗性纳米颗粒：合并第一有机相与第一水溶液以形成第二相；乳化该第二相以形成乳化相，其中该乳化相包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸；将所述乳化相骤冷，由此形成骤冷相；且过滤该骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲，所述第一有机相包含有机溶剂(包含苄醇及乙酸乙酯且苄醇与乙酸乙酯的重量比为约1.25)中的治疗剂及双羟萘酸(治疗剂与双羟萘酸的重量比为约11:1)及PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:3)，且所述第一水溶液包含以0.005:1的重量比溶于苄醇中的聚氧乙烯(100)十八烷基醚，且以约1:5的重量比合并所述第一有机相及所述第一水相以形成第二相并乳化由此形成的第二相，且使用0.1M pH 4.5的柠檬酸水溶液骤冷所述乳化相并浓缩所得产物。
在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含上述治疗剂或其药学上可接受的盐及选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒具有另外存在的靶向配体且该配体是PLA-PEG-GL，其中GL具有下列结构：
Figure BDA0001114226930000131
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些实施方案中，所述增溶剂是聚山梨酯80。在其它实施方案中，所述增溶剂是聚氧乙烯(100)十八烷基醚。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、双羟萘酸(治疗剂与双羟萘酸的重量比为约1.8:1)、PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:3)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为约44:1)。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些所述实施方案中，所述增溶剂是聚氧乙烯(100)十八烷基醚。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、油酸(治疗剂与油酸的重量比为约6:1)、PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:7)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为约46:1)。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含胆酸。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些所述实施方案中，所述增溶剂是聚山梨酯80。
又另一方面，提供药物组合物，其包含本申请中所述的治疗性纳米颗粒及药学上可接受的赋形剂。该药物组合物可包含多种所考虑的治疗性纳米颗粒。
在某些实施方案中，所述药物组合物进一步包含糖。举例而言，在一些实施方案中，所述糖是选自由蔗糖或海藻糖或其混合物组成的组的二糖。
在某些实施方案中，所述药物组合物进一步包含环糊精。举例而言，在一些实施方案中，所述环糊精包括但不限于α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、七-(2,3,6-三-O-苄基)-β-环糊精、七-(2,3,6-三-O-苯甲酰基)-β-环糊精或其混合物。
另一方面，提供一种治疗有需要的个体的癌症的方法。该方法包括向个体给予治疗有效量的如本申请中所述的药物组合物。在一些实施方案中，所述癌症是慢性髓性白血病。在某些实施方案中，所述癌症包括但不限于慢性髓性单核细胞白血病、嗜伊红细胞增多综合征、肾细胞癌、肝细胞癌、费城染色体阳性急性成淋巴细胞性白血病、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳癌、实体肿瘤、外套细胞淋巴瘤、胃肠道间质肿瘤或头颈癌。在一些实施方案中，所述癌症是乳癌。
再另一方面，提供一种通过向有需要的个体给予治疗有效量的本申请中所述的药物组合物来治疗个体的胃肠道间质肿瘤的方法。
又另一方面，提供一种制备所述治疗性纳米颗粒的方法。该方法包含：合并第一有机相与第一水溶液以形成第二相；乳化该第二相以形成乳化相，其中该乳化相包含第一聚合物、上述治疗剂及实质上疏水性酸；随后将所述乳化相骤冷，由此形成骤冷相，及最后过滤骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括在乳化第二相之前于第二相中合并上述治疗剂及实质上疏水性酸。在某些实施方案中，上述治疗剂及实质上疏水性酸在乳化第二相之前形成疏水性离子对。在某些其它实施方案中，上述治疗剂及实质上疏水性酸在乳化第二相期间形成疏水性离子对。在某些实施方案中，所述方法进一步包括实质上与乳化第二相的同时在第二相中合并上述治疗剂及实质上疏水性酸。举例而言，在一些实施方案中，第一有机相包含上述治疗剂且所述第一水溶液包含实质上疏水性酸。
在一些实施方案中，上述治疗剂在质子化时具有第一pKa，实质上疏水性酸具有第二pKa，且使用pH等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的水溶液将所述乳化相骤冷。举例而言，在某些实施方案中，所述骤冷相具有等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的pH。在其它实施方案中，上述治疗剂在质子化时具有第一pKa，实质上疏水性酸具有第二pKa，且第一水溶液具有等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的pH。在某些其它实施方案中，pH等于在第一pKa与第二pKa之间约等距的pKa单位。
在一些实施方案中，上述治疗剂在质子化时具有第一pKa，实质上疏水性酸具有第二pKa，且使用pH等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的水溶液将所述乳化相骤冷。举例而言，在某些实施方案中，所述骤冷相具有等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的pH。在其它实施方案中，上述治疗剂在质子化时具有第一pKa，实质上疏水性酸具有第二pKa，且第一水溶液具有等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的pH。在某些其它实施方案中，pH等于在第一pKa与第二pKa之间等距的pKa单位。
另一方面，提供用作个体中的药物的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供用于在个体中产生抗增殖效应的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
再另一方面，提供用于在个体中作为抗侵袭剂来防范和/或治疗实体肿瘤疾病的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒用于预防或治疗个体的癌症的用途。
再另一方面，提供用于预防或治疗个体的癌症的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于预防或治疗个体的癌症的药物。
再另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒用于在个体中产生抗增殖效应的用途。
又另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于在个体中产生抗增殖效应的药物。
再另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于在个体中作为抗侵袭剂来防范和/或治疗实体肿瘤疾病的药物。
又另一方面，提供在需要治疗的个体中产生抗增殖效应的方法，其包括向该个体给予有效量的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
再另一方面，提供通过防范和/或治疗需要治疗的个体的实体肿瘤疾病来产生抗侵袭性效应的方法，其包括向该个体给予有效量的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供用于预防或治疗个体的实体肿瘤疾病的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
再另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于预防或治疗个体的实体肿瘤疾病的药物。
又另一方面，提供一种预防或治疗需要治疗的个体的实体肿瘤疾病的方法，其包括向该个体给予有效量的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
附图简要说明
图1是形成所公开的纳米颗粒的乳化方法的流程图。
图2A及2B显示用于所公开的乳化方法的流程图。
图3描绘在下文分别鉴别为制剂A、B及C(各包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲)的本申请中所述的三种制剂的纳米颗粒的体外释放特征。误差棒表示标准偏差。水浴温度＝37℃。
图4描绘本申请中所述的且分别鉴别为制剂A、B及C(各包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲)的三种制剂的纳米颗粒在Wistar Han大鼠中的药物动力学；(a)显示纳米颗粒相对于游离治疗剂的药物动力学，而(b)显示省去游离治疗剂时的相同数据。
图5描绘药物1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的制剂A的体外释放特征。误差棒表示标准偏差。水浴温度＝37℃。
图6描绘使用pH 4.5柠檬酸缓冲骤冷液的药物1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的制剂C的体外释放特征。
图7描绘每8天一次对每4天一次施用制剂B纳米颗粒或1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)的雌性SCID/bg小鼠中的MDAMB361异种移植物排程研究。
图8A、8B及8C描绘每8天一次对每4天一次施用制剂A、B或C纳米颗粒或无载体的API的雌性SCID/bg小鼠中的MDAMB361异种移植物排定研究及施用制剂A、B或C纳米颗粒或1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)的体内pS6调节研究。TA＝治疗剂。
图9描绘使用制剂B或C纳米颗粒或1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)治疗的雌性nu/nu小鼠中的WM266-4模型肿瘤生长抑制研究。TA＝治疗剂。
图10描绘在使用制剂B或C纳米颗粒或1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)治疗之后小鼠或大鼠中的葡萄糖及胰岛素浓度的分析。
详细说明
定义
本申请中所描述的定义意欲澄清本申请中通篇使用的术语。
术语“本申请中”意指整个申请。
除非另外定义，否则本申请中所用的所有科学及技术术语皆具有与本领域普通技术人员通常所理解那些相同的含义。尽管本发明的实践或测试中可使用类似或等效于本申请中所述方法及材料的方法及材料，但下文描述适宜方法及材料。材料、方法及实例仅为阐释性的且并非意欲为限制性的。本申请中所提及的所有出版物、专利及其它文件的全部内容皆以引用方式并入本申请。
本申请中所述的本发明每一实施方案可单独采用或与本发明的任何一个或多个其它实施方案组合采用。
在本申请通篇中，词语“一种或一个(a或an)”应理解为隐含包括一个(种)或多个(种)由冠词“a或an”修饰的整体。
在本申请通篇中，词语“包含(comprise)”或变化形式(例如，“包含(comprises)”或“包含(comprising)”)应理解为隐含包括所描述的整体或整体的组但并不排除任一其它整体或整体的组。
在本申请通篇中，在将组合物描述为具有、包括或包含具体组分的情形下，考虑到组合物亦可基本上由所列举组分组成或由其组成。类似地，在将方法或工艺(或过程)描述为具有、包括或包含具体工艺步骤的情形下，所述方法亦可基本上由所列举处理步骤组成或由其组成。另外，应理解，只要本申请中所述的组合物及方法依然是可操作的，各步骤的次序或实施某些动作的次序并不重要。另外，可同时实施两个或更多个步骤或动作。
除非上下文另外明确指示，否则本申请所用的术语“或”应理解为意指“和/或”。
术语“烷氧基”是指连接有氧的烷基，优选低级烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基及诸如此类。
另外，本申请中所用的术语“烷基”(或“低级烷基”)意欲包括“未被取代的烷基”及“被取代的烷基”，后者是指具有代替烃骨架中一个或多个碳上的氢的取代基的烷基部分。如果没有另外具体说明，则所述取代基可包括，例如，卤素、羟基、羰基(例如，羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(例如，硫代酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族部分。本领域技术人员应理解，烃链上被取代的部分视需要它们自身可以被取代。举例而言，被取代的烷基的取代基可包括被取代及未被取代形式的氨基、叠氮基、亚氨基、酰氨基、磷酰基(包括膦酸酯及次膦酸酯)、磺酰基(包括硫酸酯、磺酰氨基、氨磺酰基及磺酸酯)及硅烷基以及醚、烷基硫醇、羰基(包括酮、醛、羧酸酯及酯)、-CF3、-CN及诸如此类。
术语“Cx-y”在连同化学部分(例如，酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基)一起使用时意指包括在链中含有x至y个碳的基团。举例而言，术语“Cx-y烷基”是指在链中含有x至y个碳的被取代或未被取代的饱和烃基团(包括直链烷基及有支链的烷基)，包括卤代烷基，例如，三氟甲基及2,2,2-三氟乙基等。C0烷基表示氢(若该基团位于末端位置)、键(若位于内部)。
本申请中所用的术语“酰胺”是指基团
Figure BDA0001114226930000201
其中每个R30独立地代表氢或烃基，或两个R30与其所连接的N原子一起构成在环结构中具有4至12个原子的杂环。
本申请中所用的术语“芳基”包括环中每个原子皆为碳的被取代或未被取代的单环芳族基团。优选地，环为5至7元环，更优选6元环。术语“芳基”亦包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳或杂原子为两个邻接环所共有，其中所述环中的至少一个为芳族环，举例而言，其它环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。
本申请中所用的术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指经芳基取代的烷基。
术语“叠氮基”是本领域所认可的且是指基团-N═N+═N-。
本申请中所用的术语“羧基”是指由式-CO2H代表的基团。
本申请中所用的术语“卤代”及“卤素”意指卤素且包括氯、氟、溴及碘。
本申请中所用的术语“烃基”是指经由碳原子键合且并不具有＝O或＝S取代基的基团，且其通常具有至少一个碳-氢键及(主要地)碳骨架，但可任选包括杂原子。因此，出于本申请之目的，诸如甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基及三氟甲基等基团可视为烃基，但诸如乙酰基(其在连接碳上具有＝O取代基)及乙氧基(其经由氧而非碳连接)等取代基并非烃基。烃基包括但不限于芳基、碳环、杂环基、烷基、烯基、炔基及其组合。
本申请中所用的术语“羟基”是指-OH基团。
术语“被取代的”是指具有代替骨架中一个或多个碳上的氢的取代基的部分。应理解，“取代”或“被取代”包括隐含前提，即此取代应与所被取代的原子及取代基的容许化合价一致，且该取代会产生稳定化合物，举例而言，其不会自发地发生转变(例如，通过重排、环化、消除等)。如本申请中所使用，术语“被取代的”意指包括有机化合物的所有容许取代基。广义上，所述容许取代基包括有机化合物的非环状及环状、有支链及无支链的、碳环及杂环、芳族及非芳族取代基。对于适当有机化合物而言，所述容许取代基可为一个或多个且可以相同或不同。出于本申请之目的，杂原子(例如，氮)可具有满足杂原子化合价要求的氢取代基和/或本申请中所述有机化合物的任一容许取代基。
取代基可包括本申请中所述的任何取代基，例如，但不限于卤素、羟基、羰基(例如，羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(例如，硫代酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族部分。本领域技术人员应理解，取代基如合适它们自身可以被取代。除非具体描述为“未被取代的”，否则在本申请中所提及的化学部分应理解为包括被取代的变化形式。举例而言，所提及的“芳基”或部分隐含地包括被取代及未被取代的变化形式二者。
“任选”或“任选地”意指随后描述的情况可发生或可不发生，从而本申请包括该情况发生的情形及该情况不发生的情形。举例而言，短语“任选地被取代的”意指非氢取代基可存在或可不存在于给定原子上，且由此本申请包括存在非氢取代基的结构及不存在非氢取代基的结构。
术语“健康”及“正常”在本申请中可互换使用且是指无(至少就检测限而言)疾病病况的个体或特定细胞或组织。
除非有相反显示，否则术语“碱性治疗剂”或“治疗剂”是指治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。其具有如下所示的结构：
Figure BDA0001114226930000221
其描述于美国专利第8,039,469号中，其内容以引用方式并入本申请。辛醇:盐水分配系数的计算log(clogP)＝1.24(计算分配系数)。在pH 6.5下的分布常数logD＝0.212，而在pH 7.4下的logD＝1.08。如上文所显示，其是碱。其是含有可质子化氮的治疗剂。如本申请中所使用，“含有可质子化氮的治疗剂”包括任一含有至少一个能够被质子化的含氮官能基的药物活性剂。换言之，治疗剂上具有氮原子，该氮原子具有可潜在地接受质子的弧电子对。pKa是指相应质子化形式的治疗剂的对数标度的酸解离常数。换言之，若质子(H+)存在于有箭头所示的氮原子之处，则治疗剂具有如下所示的pKa：
Figure BDA0001114226930000222
如上显示了最碱性氮(底部)及碱性较小但仍可质子化的氮(上部)的pKa信息。ACD是使用本领域中已知的标准技术的所计算数值，例如，描述于Liao CZ,NicklausMC.Comparison of nine programs predicting pK(a)values of pharmaceutical substances.J.Chem.Inform.Model.49(12):2801-2812,2009中。应理解，所述治疗剂的pKa是指其质子化形式。
本发明治疗剂拥有一个或多个手性中心且本发明包括所述化合物的每种单独对映异构体以及对映异构体混合物。在存在多个手性中心的情形下，本发明包括每种组合以及其混合物。除非具体显示具体立体化学或异构体形式，否则预计存在结构的所有手性、非对映异构体及外消旋形式。本领域已熟知如何制备光学活性形式，例如，通过拆分外消旋形式或通过自光学活性起始材料合成来制备。
术语“实质上”在用于提及诸如“疏水性酸”等化合物时是指化合物以至少1重量％存在或是指logP大于2的疏水性酸。logP大于2的疏水性酸具有分配至有机相中的较大趋势。
术语“疏水性酸”是指log为-7或更大(即-6、-5、-4、-3、-2、-1、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16)的亲脂性酸。
本申请中所述的纳米颗粒亦可含有治疗剂的药学上可接受的盐。代表性“药学上可接受的盐”包括但不限于，例如，水溶性及水不溶性盐，例如，乙酸盐、铝盐、安索酸盐(4,4-二氨基
Figure BDA0001114226930000231
-2,2-二磺酸盐)、苄星盐(N,N'-二苄基乙二胺)、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、铋盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、钙盐、依地酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、胆碱、柠檬酸盐、克拉维酸盐、二乙醇胺、二盐酸盐、二磷酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐(樟脑磺酸盐)、乙磺酸盐(乙烷磺酸盐)、乙二胺、富马酸盐、葡庚糖酸盐(葡庚糖酸盐)、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、六氟磷酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明(N,N'-双(去氢松香基)乙二胺)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、1-羟基-2-萘甲酸盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐(2-羟基乙烷磺酸盐)、乳酸盐、乳糖酸盐、月硅酸盐、月桂基硫酸盐、锂盐、镁盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、葡甲胺(1-脱氧-1-(甲基氨基)-D-葡糖醇)、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、黏酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡萄糖胺铵盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(4,4'-亚甲基双-3-羟基-2-萘甲酸盐或恩波酸盐)、泛酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、聚半乳糖醛酸盐、钾盐、丙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、钠盐、硬脂酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、苏拉明酸盐(suramate)、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(8-氯-3,7-二氢-1,3-二甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮)、三乙基碘化物、胺丁三醇(2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇)、戊酸盐及锌盐。
在用于下文中时，除非有相反的说明，否则％是重量％。
本申请中所述的包括碱性治疗剂的聚合物纳米颗粒及制造和使用所述治疗性纳米颗粒的方法。
在一些实施方案中，将实质上疏水性酸(例如，脂肪酸和/或胆汁酸)包括(即添加)于所公开的纳米颗粒中和/或包括于纳米颗粒制备方法中可得到包括改良药物载量的纳米颗粒。另外，在某些实施方案中，包含疏水性酸和/或在疏水性酸存在下制得的纳米颗粒可展现改良的受控释放性质。举例而言，与在没有疏水性酸的情况下制得的纳米颗粒相比，所公开的纳米颗粒可更缓慢地释放治疗剂。
不期望受限于任何理论，据信包含疏水性酸(例如，脂肪酸和/或胆汁酸)的所公开的纳米颗粒制剂通过在治疗剂(如上所示的治疗剂上的一个或多个氮原子上的弧电子对上，例如，在胺部分上)与酸之间形成疏水性离子对(HIP)而具有显著改良的制剂性质(例如，药物载量和/或释放特征)。如本申请中所使用，HIP是通过库仑引力保持在一起的一对带相反电荷的离子。同样不期望受限于任何理论，在一些实施方案中，可使用HIP来增加含有可离子化基团(例如，胺)的治疗剂的疏水性。在治疗剂具有增加的疏水性时，其有益于纳米颗粒制剂，因其导致可在有机溶剂中提供治疗剂较高溶解度的HIP形成。如本申请中所考虑的，HIP形成可产生具有，例如，增加的药物载量的纳米颗粒。治疗剂自纳米颗粒的较缓慢释放亦可发生于，例如，一些实施方案中，因为治疗剂在水溶液中的溶解度降低。另外，使治疗剂与大疏水性抗衡离子复合可减缓治疗剂在聚合物基质内的分布。有利的是，无需疏水性基团共价缀合至治疗剂即形成HIP。
不期望受限于任何理论，据信HIP的强度影响所考虑的纳米颗粒的药物载量及释放速率。举例而言，可通过增加质子化形式治疗剂的pKa及疏水性酸的pKa之间差的幅度来增加HIP的强度，如下文更详细所论述。同样不期望受限于任何理论，据信离子对形成的条件会影响所考虑的纳米颗粒的药物载量及释放速率。
本申请中所公开的纳米颗粒包括一种、两种、三种或更多种生物相容和/或可被生物降解的聚合物。举例而言，所考虑的纳米颗粒在一些实施方案中可包括约35重量％至约99.75重量％；在一些其它实施方案中约50重量％至约99.75重量％；在一些实施方案中约50重量％至约99.5重量％；在其它实施方案中约50重量％至约99重量％；在其它实施方案中约50重量％至约98重量％；在其它实施方案中约50重量％至约97重量％；在其它实施方案中约50重量％至约96重量％；在其它实施方案中约50重量％至约95重量％，在其它实施方案中约50重量％至约94重量％；在其它实施方案中约50重量％至约93重量％；在其它实施方案中约50重量％至约92重量％；约50重量％至约91重量％，在一些实施方案中约50重量％至约90重量％；在一些实施方案中约50重量％至约85重量％；在一些实施方案中约60重量至约85重量％；在一些实施方案中，约65重量％至约85重量％；以及在一些实施方案中，约50重量％至约80重量％的一种或多种包括可被生物降解的聚合物及聚(乙二醇)(PEG)的嵌段共聚物，以及约0重量％至约50重量％的可被生物降解的均聚物。
在一些实施方案中，所考虑的纳米颗粒在一些实施方案中可包括35重量％至99.75重量％；在一些其它实施方案中50重量％至99.75重量％；在一些实施方案中50重量％至99.5重量％；在其它实施方案中50重量％至99重量％；在其它实施方案中50重量％至98重量％；在其它实施方案中50重量％至97重量％；在其它实施方案中50重量％至96重量％；在其它实施方案中50重量％至95重量％；在其它实施方案中50重量％至94重量％；在其它实施方案中50重量％至93重量％；在其它实施方案中50重量％至92重量％；50重量％至91重量％，在一些实施方案中50重量％至90重量％；在一些实施方案中，50重量％至85重量％；在一些实施方案中，60重量％至85重量％；在一些实施方案中65重量％至85重量％；以及在一些实施方案中，50重量％至80重量％的一种或多种包括可被生物降解的聚合物及聚(乙二醇)(PEG)的嵌段共聚物，以及0重量％至50重量％的可被生物降解的均聚物。
在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒可包括约0.2重量％至约35重量％、约0.2重量％至约25重量％、约0.2重量％至约20重量％、约0.2重量％至约10重量％、约0.2重量％至约5重量％、约0.5重量％至约5重量％、约0.75重量％至约5重量％、约1重量％至约5重量％、约2重量％至约5重量％、约3重量％至约5重量％、约1重量％至约20重量％、约2重量％至约20重量％、约3重量％至约20重量％、约4重量％至约20重量％、约5重量％至约20重量％、约1重量％至约15重量％、约2重量％至约15重量％、约3重量％至约15重量％、约4重量％至约15重量％、约5重量％至约15重量％、约1重量％至约10重量％、约2重量％至约10重量％、约3重量％至约10重量％、约4重量％至约10重量％、约5重量％至约10重量％、约10重量％至约30重量％或约15重量％至约25重量％的治疗剂。在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒包括约0.2重量％、约0.3重量％、约0.4重量％、约0.5重量％、约0.6重量％、约0.7重量％、约0.8重量％、约0.9重量％、约1重量％、约2重量％、约3重量％、约4重量％、约5重量％、约6重量％、约7重量％、约8重量％、约9重量％、约10重量％、约11重量％、约12重量％、约13重量％、约14重量％、约15重量％、约16重量％、约17重量％、约18重量％、约19重量％、约20重量％、约21重量％、约22重量％、约23重量％、约24重量％、约25重量％、约26重量％、约27重量％、约28重量％、约29重量％或约30重量％的治疗剂。
在某些实施方案中，所公开的纳米颗粒可包括0.2重量％至35重量％、0.2重量％至25重量％、0.2重量％至20重量％、0.2重量％至10重量％、0.2重量％至5重量％、0.5重量％至5重量％、0.75重量％至5重量％、1重量％至5重量％、2重量％至5重量％、3重量％至5重量％、1重量％至20重量％、2重量％至20重量％、3重量％至20重量％、4重量％至20重量％、5重量％至20重量％、1重量％至15重量％、2重量％至15重量％、3重量％至15重量％、4重量％至15重量％、5重量％至15重量％、1重量％至10重量％、2重量％至10重量％、3重量％至10重量％、4重量％至10重量％、5重量％至10重量％、10重量％至30重量％或15重量％至25重量％的治疗剂。在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒包括0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30重量％的治疗剂。
在某些实施方案中，所公开的纳米颗粒包含疏水性酸(例如，脂肪酸和/或胆汁酸)和/或通过包含疏水性酸的方法制得。所述纳米颗粒可具有高于通过不含疏水性酸的方法制得的纳米颗粒的药物载量。举例而言，通过包含疏水性酸的方法制得的所公开的纳米颗粒的药物载量(例如，以重量计)可为通过不含疏水性酸的方法制得的所公开的纳米颗粒的约2倍至约10倍或甚至更高。在一些实施方案中，通过包含疏水性酸的第一方法制得的所公开的纳米颗粒的药物载量(以重量计)可为通过第二方法制得的所公开的纳米颗粒的至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍，其中第二方法与第一方法相同，只是第二方法不包含疏水性酸。
在某些实施方案中，通过包含疏水性酸的方法制得的所公开的纳米颗粒的药物载量(例如，以重量计)可为通过不含疏水性酸的方法制得的所公开的纳米颗粒的2倍至10倍或甚至更高。在一些实施方案中，通过包含疏水性酸的第一方法制得的所公开的纳米颗粒的药物载量(以重量计)可为通过第二方法制得的所公开的纳米颗粒的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少10倍，其中第二方法与第一方法相同，只是第二方法不包含疏水性酸。
涵盖任何适宜的疏水性酸。在一些实施方案中，所述疏水性酸可为羧酸(例如，单羧酸、二羧酸、三羧酸或诸如此类)、亚磺酸、次磺酸或磺酸。在一些情形下，所考虑的疏水性酸可包括两种或更多种酸的混合物。举例而言，在某些实施方案中，所述疏水性酸可包含两种实质上疏水性酸的混合物、在一些实施方案中三种实质上疏水性酸的混合物、在一些实施方案中四种实质上疏水性酸的混合物或在一些实施方案中五种实质上疏水性酸的混合物。在一些实施方案中，所述实质上疏水性酸的混合物包含油酸及胆酸。在其它实施方案中，所述两种疏水性酸的混合物是油酸及胆酸。
在一些情形下，可在制剂中使用疏水性酸的盐。
举例而言，所公开的羧酸可为脂肪族羧酸(例如，具有环状或非环状、有支链或无支链烃链的羧酸)。在一些实施方案中，所公开的羧酸可经一个或多个包括但不限于卤素(即F、Cl、Br及I)、磺酰基、硝基及侧氧基的官能基取代。在某些实施方案中，所公开的羧酸可未被取代。
示例性羧酸可包括被取代或未被取代的脂肪酸(例如，C6-C50脂肪酸)。在一些情形下，脂肪酸可为C10-C20脂肪酸。在其它情形下，脂肪酸可为C15-C20脂肪酸。在一些情形下，脂肪酸可为饱和的。在其它实施方案中，所述脂肪酸可为不饱和的。举例而言，脂肪酸可为单不饱和脂肪酸或多不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，不饱和脂肪酸基团的双键可为顺式构型。在一些实施方案中，不饱和脂肪酸的双键可为反式构型。不饱和脂肪酸包括但不限于ω-3、ω-6或ω-9脂肪酸。
饱和脂肪酸的非限制性实例包括己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、木蜡酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、虫胶蜡酸、叶虱酸、三十四酸、三十五烷酸、三十六烷酸或其组合。
不饱和脂肪酸的非限制性实例包括十六碳三烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十一碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸、亚油酸、γ-亚麻酸、二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳二烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸、二十四碳四烯酸、二十四碳五烯酸、油酸(pKa＝～4-5；logP＝6.78)、二十烯酸、二十碳三烯酸、芥酸、神经酸、瘤胃酸、α-十八碳三烯酸、β-十八碳三烯酸、兰花酸、α-桐酸、β-桐酸、梓树酸、石榴酸、茹米烯酸、α-帕里拉油酸、β-帕里拉油酸、十八碳五烯酸、皮诺敛酸、罗汉松酸、棕榈油酸、异油酸、鳕油酸、芥酸或其组合。
疏水性酸的其它非限制性实例包括芳族酸，例如，1-羟基-2-萘甲酸(即昔萘酸)(pKa＝～2-3；log P＝2.97)、萘-1,5-二磺酸(pKa＝-2；logP＝1.3)、萘-2-磺酸(pKa＝-1.8；logP＝2.1)、双羟萘酸(pKa＝2.4；logP＝6.17)、肉桂酸、苯基乙酸、(±)-樟脑-10-磺酸、十二烷基苯磺酸(pKa＝-1.8；logP＝6.6)或其组合。疏水性酸的其它非限制性实例包括十二烷基硫酸(pKa＝-0.09；logP＝4.5)、磺基琥珀酸二辛酸(即多库酸)(pKa＝-0.8；logP＝5.2)、二油酰磷脂酸(pKa＝～2)或维他命D3硫酸盐(pKa＝-1.5)。
在一些实施方案中，所述疏水性酸可为胆汁酸。胆汁酸的非限制性实例包括鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸(pKa＝4.65；logP＝3.79)、猪胆酸、β-鼠胆酸、胆酸(pKa＝～4.5；logP＝2.48)、牛磺胆酸、胆固醇硫酸酯(pKa＝-1.4)、石胆酸、氨基酸缀合的胆汁酸或其组合。氨基酸缀合的胆汁酸可缀合至任一适宜氨基酸。在一些实施方案中，所述氨基酸缀合的胆汁酸是甘氨酸缀合的胆汁酸或牛磺酸缀合的胆汁酸。
在某些情形下，疏水性酸可为聚合物电解质。举例而言，聚合物电解质可为聚磺酸(例如，聚(苯乙烯磺酸)或硫酸右旋糖酐)或多羧酸(例如，聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸)。
在一些情形下，所考虑的疏水性酸的分子量可小于约1000Da、在一些实施方案中小于约500Da、在一些实施方案中小于约400Da、在一些实施方案中小于约300Da、在一些实施方案中小于约250Da、在一些实施方案中小于约200Da及在一些实施方案中小于约150Da。在一些情形下，疏水性酸的分子量可介于约100Da与约1000Da之间、在一些实施方案中介于约200Da与约800Da之间、在一些实施方案中介于约200Da与约600Da之间、在一些实施方案中介于约100Da与约300Da之间、在一些实施方案中介于约200Da与约400Da之间、在一些实施方案中介于约300Da与约500Da之间及在一些实施方案中介于约300Da与约1000Da之间。在某些实施方案中，所考虑的酸的分子量可大于约200kDa、在一些实施方案中大于约300Da、在一些实施方案中大于约400Da及在一些实施方案中大于约500Da。在某些实施方案中，可通过增加纳米颗粒制剂中所使用的疏水性酸的分子量来减缓治疗剂自纳米颗粒的释放速率。
在一些情形下，所考虑的疏水性酸的分子量可小于1000Da、在一些实施方案中小于500Da、在一些实施方案中小于400Da、在一些实施方案中小于300Da、在一些实施方案中小于250Da、在一些实施方案中小于200Da及在一些实施方案中小于150Da。在一些情形下，疏水性酸的分子量可介于100Da与1000Da之间、在一些实施方案中介于200Da与800Da之间、在一些实施方案中介于200Da与600Da之间、在一些实施方案中介于100Da与300Da之间、在一些实施方案中介于200Da与400Da之间、在一些实施方案中介于300Da与500Da之间及在一些实施方案中介于300Da与1000Da之间。在某些实施方案中，所考虑的酸的分子量可大于200kDa、在一些实施方案中大于300Da、在一些实施方案中大于400Da及在一些实施方案中大于500Da。
在一些实施方案中，可至少部分地基于酸的强度来选择疏水性酸。举例而言，疏水性酸在25℃下于水中测得的酸解离常数(pKa)可为约-5至约7、在一些实施方案中约-3至约5、在一些实施方案中约-3至约4、在一些实施方案中约-3至约3.5、在一些实施方案中约-3至约3、在一些实施方案中约-3至约2、在一些实施方案中约-3至约1、在一些实施方案中约-3至约0.5，在一些实施方案中约-1.0至约5.0、在一些实施方案中约-0.5至约0.5、在一些实施方案中约1至约7、在一些实施方案中约2至约7、在一些实施方案中约2.0至约5.0、在一些实施方案中约3至约7、在一些实施方案中约4至约6、在一些实施方案中约4至约5.5、在一些实施方案中约4至约5及在一些实施方案中约4.5至约5。在一些实施方案中，酸在25℃下测得的pKa可小于约7、小于约5、小于约3.5、小于约3、小于约2、小于约1或小于约0。
在一些实施方案中，所述疏水性酸在25℃下于水中测得的酸解离常数(pKa)可为-5至7、在一些实施方案中-3至5、在一些实施方案中-3至4、在一些实施方案中-3至3.5、在一些实施方案中-3至3、在一些实施方案中-3至2、在一些实施方案中-3至1、在一些实施方案中-3至0.5，在一些实施方案中-1.0至5.0、在一些实施方案中-0.5至0.5、在一些实施方案中1至7、在一些实施方案中2至7、在一些实施方案中2.0至5.0、在一些实施方案中3至7、在一些实施方案中4至6、在一些实施方案中4至5.5、在一些实施方案中4至5及在一些实施方案中4.5至5。在一些实施方案中，酸在25℃下测得的pKa可小于7、小于5、小于3.5、小于3、小于2、小于1或小于0。
在某些实施方案中，可至少部分地基于疏水性酸的pKa与质子化治疗剂的pKa之间的差来选择疏水性酸。举例而言，在一些情形下，在25℃下所测得疏水性酸的pKa与质子化治疗剂的pKa之间的差可介于约1pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约1pKa单位与约10pKa单位之间、在一些实施方案中介于约1pKa单位与约5pKa单位之间、在一些实施方案中介于约1pKa单位与约3pKa单位之间、在一些实施方案中介于约1pKa单位与约2pKa单位之间、在一些实施方案中介于约2pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约2pKa单位与约10pKa单位之间、在一些实施方案中介于约2pKa单位与约5pKa单位之间、在一些实施方案中介于约2pKa单位与约3pKa单位之间、在一些实施方案中介于约3pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约3pKa单位与约10pKa单位之间、在一些实施方案中介于约3pKa单位与约5pKa单位之间、在一些实施方案中介于约4pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约4pKa单位与约10pKa单位之间、在一些实施方案中介于约4pKa单位与约6pKa单位之间、在一些实施方案中介于约5pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约5pKa单位与约10pKa单位之间、在一些实施方案中介于约5pKa单位与约7pKa单位之间、在一些实施方案中介于约7pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约7pKa单位与约9pKa单位之间、在一些实施方案中介于约9pKa单位与约15pKa单位之间、在一些实施方案中介于约9pKa单位与约11pKa单位之间、在一些实施方案中介于约11pKa单位与约13pKa单位之间及在一些实施方案中介于约13pKa单位与约15pKa单位之间。
在某些实施方案中，在25℃下所测得疏水性酸的pKa与质子化治疗剂的pKa之间的差可介于1pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于1pKa单位与10pKa单位之间、在一些实施方案中介于1pKa单位与5pKa单位之间、在一些实施方案中介于1pKa单位与3pKa单位之间、在一些实施方案中介于1pKa单位与2pKa单位之间、在一些实施方案中介于2pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于2pKa单位与10pKa单位之间、在一些实施方案中介于2pKa单位与5pKa单位之间、在一些实施方案中介于2pKa单位与3pKa单位之间、在一些实施方案中介于3pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于3pKa单位与10pKa单位之间、在一些实施方案中介于3pKa单位与5pKa单位之间、在一些实施方案中介于4pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于4pKa单位与10pKa单位之间、在一些实施方案中介于4pKa单位与6pKa单位之间、在一些实施方案中介于5pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于5pKa单位与10pKa单位之间、在一些实施方案中介于5pKa单位与7pKa单位之间、在一些实施方案中介于7pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于7pKa单位与9pKa单位之间、在一些实施方案中介于9pKa单位与15pKa单位之间、在一些实施方案中介于9pKa单位与11pKa单位之间、在一些实施方案中介于11pKa单位与13pKa单位之间及在一些实施方案中介于13pKa单位与15pKa单位之间。
在一些情形下，在25℃下所测得疏水性酸的pKa与质子化治疗剂的pKa之间的差可为至少约1pKa单位、在一些实施方案中至少约2pKa单位、在一些实施方案中至少约3pKa单位、在一些实施方案中至少约4pKa单位、在一些实施方案中至少约5pKa单位、在一些实施方案中至少约6pKa单位、在一些实施方案中至少约7pKa单位、在一些实施方案中至少约8pKa单位、在一些实施方案中至少约9pKa单位、在一些实施方案中至少约10pKa单位及在一些实施方案中至少约15pKa单位。
在一些实施方案中，在25℃下所测得疏水性酸的pKa与质子化治疗剂的pKa之间的差可为至少1pKa单位、在一些实施方案中至少2p Ka单位、在一些实施方案中至少3pKa单位、在一些实施方案中至少4pKa单位、在一些实施方案中至少5pKa单位、在一些实施方案中至少6pKa单位、在一些实施方案中至少7pKa单位、在一些实施方案中至少8pKa单位、在一些实施方案中至少9pKa单位、在一些实施方案中至少10pKa单位及在一些实施方案中至少15pKa单位。
在一些实施方案中，所述疏水性酸的logP可介于约2与约15之间、在一些实施方案中介于约5与约15之间、在一些实施方案中介于约5与约10之间、在一些实施方案中介于约2与约8之间、在一些实施方案中介于约4与约8之间、在一些实施方案中介于约2与约7之间或在一些实施方案中介于约4与约7之间。在一些情形下，疏水性酸的logP可大于约2、大于约4、大于约5或大于约6。
在一些实施方案中，所述疏水性酸的logP可介于2与15之间、在一些实施方案中介于5与15之间、在一些实施方案中介于5与10之间、在一些实施方案中介于2与8之间、在一些实施方案中介于4与8之间、在一些实施方案中介于2与7之间或在一些实施方案中介于4与7之间。在一些情形下，疏水性酸的logP可大于2、大于4、大于5或大于6。
在一些实施方案中，所考虑的疏水性酸可具有有利于，例如，改良治疗性纳米颗粒的性质的相变温度。举例而言，疏水性酸的熔点可小于约350℃、在一些情形下小于约300℃、在一些情形下小于约100℃及在一些情形下小于约50℃。在某些实施方案中，所述疏水性酸的熔点可介于约5℃与约25℃之间、在一些情形下介于约15℃与约50℃之间、在一些情形下介于约30℃与约100℃之间、在一些情形下介于约75℃与约150℃之间、在一些情形下介于约125℃与约200℃之间、在一些情形下介于约150℃与约250℃之间、在一些情形下介于约200℃与约300℃之间及在一些情形下介于约250℃与约350℃之间。在一些情形下，疏水性酸的熔点可小于约15℃、在一些情形下小于约10℃或在一些情形下小于约0℃。在某些实施方案中，所述疏水性酸的熔点可介于约-30℃与约0℃之间或在一些情形下介于约-20℃与约-10℃之间。
在一些实施方案中，所述疏水性酸的熔点可小于350℃、在一些情形下小于300℃、在一些情形下小于100℃及在一些情形下小于50℃。在某些实施方案中，所述疏水性酸的熔点可介于5℃与25℃之间、在一些情形下介于15℃与50℃之间、在一些情形下介于30℃与100℃之间、在一些情形下介于75℃与150℃之间、在一些情形下介于125℃与200℃之间、在一些情形下介于150℃与250℃之间、在一些情形下介于200℃与300℃之间及在一些情形下介于250℃与350℃之间。在一些情形下，疏水性酸的熔点可小于15℃、在一些情形下小于10℃或在一些情形下小于0℃。在某些实施方案中，所述疏水性酸的熔点可介于-30℃与0℃之间或在一些情形下介于-20℃与-10℃之间。
举例而言，可至少部分地基于治疗剂在包含酸的溶剂中的溶解度来选择用于本申请中所公开方法及纳米颗粒中的疏水性酸。举例而言，在一些实施方案中，取决于溶剂，溶于包含酸的溶剂中的治疗剂的溶解度可介于约15mg/mL至约200mg/mL之间、介于约20mg/mL至约200mg/mL之间、介于约25mg/mL至约200mg/mL之间、介于约50mg/mL至约200mg/mL之间、介于约75mg/mL至约200mg/mL之间、介于约100mg/mL至约200mg/mL之间、介于约125mg/mL至约175mg/mL之间、介于约15mg/mL至约50mg/mL之间、介于约25mg/mL至约75mg/mL之间。在一些实施方案中，溶于含有疏水性酸的溶剂中的治疗剂的溶解度可大于约10mg/mL、大于约50mg/mL或大于约100mg/mL。在一些实施方案中，溶于含有疏水性酸的溶剂中的治疗剂(例如，由治疗剂、溶剂及疏水性酸组成的第一溶液)的溶解度可为在治疗剂溶于不含有疏水性酸的溶剂中(例如，由治疗剂及溶剂组成的第二溶液)时的至少约2倍、在一些实施方案中至少约5倍、在一些实施方案中至少约10倍、在一些实施方案中至少约20倍、在一些实施方案中约2倍至约20倍或在一些实施方案中约10倍至约20倍。
在一些实施方案中，取决于溶剂，溶于包含酸的溶剂中的治疗剂的溶解度可介于15mg/mL至200mg/mL之间、介于20mg/mL至200mg/mL之间、介于25mg/mL至200mg/mL之间、介于50mg/mL至200mg/mL之间、介于75mg/mL至200mg/mL之间、介于100mg/mL至200mg/mL之间、介于125mg/mL至175mg/mL之间、介于15mg/mL至50mg/mL之间、介于25mg/mL至75mg/mL之间。在一些实施方案中，溶于含有疏水性酸的溶剂中的治疗剂的溶解度可大于10mg/mL、大于50mg/mL或大于100mg/mL。在一些实施方案中，溶于含有疏水性酸的溶剂中的治疗剂(例如，由治疗剂、溶剂及疏水性酸组成的第一溶液)的溶解度可为在治疗剂溶于不含有疏水性酸的溶剂中(例如，由治疗剂及溶剂组成的第二溶液)时的至少2倍、在一些实施方案中至少5倍、在一些实施方案中至少10倍、在一些实施方案中至少20倍、在一些实施方案中2倍至20倍或在一些实施方案中10倍至20倍。
在一些情形下，疏水性酸在药物溶液(即治疗剂溶液)中的浓度范围可为约1重量％至约30重量％、在一些实施方案中约2重量％至约30重量％、在一些实施方案中约3重量％至约30重量％、在一些实施方案中约4重量％至约30重量％、在一些实施方案中约5重量％至约30重量％、在一些实施方案中约6重量％至约30重量％、在一些实施方案中约8重量％至约30重量％、在一些实施方案中约10重量％至约30重量％、在一些实施方案中约12重量％至约30重量％、在一些实施方案中约14重量％至约30重量％、在一些实施方案中约16重量％至约30重量％、在一些实施方案中约1重量％至约5重量％、在一些实施方案中约3重量％至约9重量％、在一些实施方案中约6重量％至约12重量％、在一些实施方案中约9重量％至约15重量％、在一些实施方案中约12重量％至约18重量％及在一些实施方案中约15重量％至约21重量％。在某些实施方案中，所述疏水性酸在药物溶液中的浓度可为约1重量％或更大、在一些实施方案中约2重量％或更大、在一些实施方案中约3重量％或更大、在一些实施方案中约5重量％或更大、在一些实施方案中约10重量％或更大、在一些实施方案中约15重量％或更大及在一些实施方案中约20重量％或更大。
在一些情形下，疏水性酸在药物溶液(即治疗剂溶液)中的浓度范围可为1重量％至30重量％、在一些实施方案中2重量％至30重量％、在一些实施方案中3重量％至30重量％、在一些实施方案中4重量％至30重量％、在一些实施方案中5重量％至30重量％、在一些实施方案中6重量％至30重量％、在一些实施方案中8重量％至30重量％、在一些实施方案中10重量％至30重量％、在一些实施方案中12重量％至30重量％、在一些实施方案中14重量％至30重量％、在一些实施方案中16重量％至30重量％、在一些实施方案中1重量％至5重量％、在一些实施方案中3重量％至9重量％、在一些实施方案中6重量％至12重量％、在一些实施方案中9重量％至15重量％、在一些实施方案中12重量％至18重量％及在一些实施方案中15重量％至21重量％。在某些实施方案中，所述疏水性酸在药物溶液中的浓度可为1重量％或更大、在一些实施方案中2重量％或更大、在一些实施方案中3重量％或更大、在一些实施方案中5重量％或更大、在一些实施方案中10重量％或更大、在一些实施方案中15重量％或更大及在一些实施方案中20重量％或更大。
在某些实施方案中，所述疏水性酸与治疗剂的摩尔比(例如，最初在配制纳米颗粒期间和/或在纳米颗粒中)的范围可为约0.25:1至约6:1、在一些实施方案中约0.25:1至约5:1、在一些实施方案中约0.25:1至约4:1、在一些实施方案中约0.25:1至约3:1、在一些实施方案中约0.25:1至约2:1、在一些实施方案中约0.25:1至约1.5:1、在一些实施方案中约0.25:1至约1:1、在一些实施方案中约0.25:1至约0.5:1、在一些实施方案中约0.5:1至约6:1、在一些实施方案中约0.5:1至约5:1、在一些实施方案中约0.5:1至约4:1、在一些实施方案中约0.5:1至约3:1、在一些实施方案中约0.5:1至约2:1、在一些实施方案中约0.5:1至约1.5:1、在一些实施方案中约0.5:1至约1:1、在一些实施方案中约0.5:1至约0.75:1、在一些实施方案中约0.75:1至约2:1、在一些实施方案中约0.75:1至约1.5:1、在一些实施方案中约0.75:1至约1.25:1、在一些实施方案中约0.9:1至约1.1:1、在一些实施方案中约0.95:1至约1.05:1，在一些实施方案中约1:1、在一些实施方案中约0.75:1至约1:1、在一些实施方案中约1:1至约6:1、在一些实施方案中约1:1至约5:1、在一些实施方案中约1:1至约4:1、在一些实施方案中约1:1至约3:1、在一些实施方案中约1:1至约2:1、在一些实施方案中约1:1至约1.5:1、在一些实施方案中约1.5:1至约6:1、在一些实施方案中约1.5:1至约5:1、在一些实施方案中约1.5:1至约4:1、在一些实施方案中约1.5:1至约3:1、在一些实施方案中约2:1至约6:1、在一些实施方案中约2:1至约4:1、在一些实施方案中约3:1至约6:1、在一些实施方案中约3:1至约5:1及在一些实施方案中约4:1至约6:1。
在某些实施方案中，所述疏水性酸与治疗剂的摩尔比(例如，最初在配制纳米颗粒期间和/或在纳米颗粒中)的范围可为0.25:1至6:1、在一些实施方案中0.25:1至5:1、在一些实施方案中0.25:1至4:1、在一些实施方案中0.25:1至3:1、在一些实施方案中0.25:1至2:1、在一些实施方案中0.25:1至1.5:1、在一些实施方案中0.25:1至1:1、在一些实施方案中0.25:1至0.5:1、在一些实施方案中0.5:1至6:1、在一些实施方案中0.5:1至5:1、在一些实施方案中0.5:1至4:1、在一些实施方案中0.5:1至3:1、在一些实施方案中0.5:1至2:1、在一些实施方案中0.5:1至1.5:1、在一些实施方案中0.5:1至1:1、在一些实施方案中0.5:1至0.75:1、在一些实施方案中0.75:1至2:1、在一些实施方案中0.75:1至1.5:1、在一些实施方案中0.75:1至1.25:1、在一些实施方案中0.9:1至1.1:1、在一些实施方案中0.95:1至1.05:1、在一些实施方案中1:1、在一些实施方案中0.75:1至1:1、在一些实施方案中1:1至6:1、在一些实施方案中1:1至5:1、在一些实施方案中1:1至4:1、在一些实施方案中1:1至3:1、在一些实施方案中1:1至2:1、在一些实施方案中1:1至1.5:1、在一些实施方案中1.5:1至6:1、在一些实施方案中1.5:1至5:1、在一些实施方案中1.5:1至4:1、在一些实施方案中1.5:1至3:1、在一些实施方案中2:1至6:1、在一些实施方案中2:1至4:1、在一些实施方案中3:1至6:1、在一些实施方案中3:1至5:1及在一些实施方案中4:1至6:1。
在一些情形下，疏水性酸与治疗剂的初始摩尔比(即在配制纳米颗粒期间)可不同于纳米颗粒中疏水性酸与治疗剂的摩尔比(即在去除未被囊封的疏水性酸及治疗剂之后)。在其它情形下，疏水性酸与治疗剂的初始摩尔比(即在配制纳米颗粒期间)可基本上与纳米颗粒中疏水性酸与治疗剂的摩尔比(即在去除未被囊封的疏水性酸及治疗剂之后)相同。
在一个实施方案中，在纳米颗粒含有疏水性酸时，包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的纳米颗粒可与疏水性酸形成盐。换言之，与治疗剂缔合的疏水性酸是药学上可接受的盐。因此，在一个实施方案中，本发明涉及包含治疗剂或其药学上可接受的盐及选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物的治疗性纳米颗粒，其中治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲。
在一些情形下，含有治疗剂的溶液可与含有聚合物的溶液单独制备，且然后可在配制纳米颗粒之前组合两种溶液。举例而言，在一个实施方案中，第一溶液含有治疗剂及疏水性酸，且第二溶液含有聚合物及任选地疏水性酸。第二溶液并不含有疏水性酸的制剂可有利于，例如，最小化方法中所使用的疏水性酸的量，或在一些情形下有利于最小化疏水性酸与，例如，可在疏水性酸存在下降解的聚合物之间的接触时间。在其它情形下，可制备含有治疗剂、聚合物及疏水性酸的单一溶液。
在一些实施方案中，可在配制纳米颗粒之前形成疏水性离子对。举例而言，可在配制所考虑的纳米颗粒之前制备含有疏水性离子对的溶液(例如，通过制备含有适宜量的治疗剂及疏水性酸的溶液)。在其它实施方案中，可在配制纳米颗粒期间形成疏水性离子对。举例而言，可在用于制备纳米颗粒的方法步骤期间(例如，在乳液形成之前和/或在乳液形成期间)组合含有治疗剂的第一溶液及含有疏水性酸的第二溶液。在某些实施方案中，可在将治疗剂及疏水性酸囊封于所考虑的纳米颗粒中之前形成疏水性离子对。在其它实施方案中，可，例如，在囊封治疗剂及疏水性酸之后在纳米颗粒中形成疏水性离子对。
在某些实施方案中，在25℃下测得的疏水性酸的溶解度可小于约2g/100mL水或更小、在一些实施方案中约1g/100mL水或更小、在一些实施方案中约100mg/100mL水或更小、在一些实施方案中约10mg/100mL水或更小及在一些实施方案中约1mg/100mL水或更小。在其它实施方案中，在25℃下测得的疏水性酸的溶解度的范围可为约1mg/100mL水至约2g/100mL水、在一些实施方案中约1mg/100mL水至约1g/100mL水、在一些实施方案中约1mg/100mL水至约500mg/100mL水及在一些实施方案中约1mg/100mL水至约100mg/100mL水。在一些实施方案中，所述疏水性酸在25℃下可基本上不溶于水中。
在某些实施方案中，在25℃下测得的疏水性酸的溶解度可小于2g/100mL水或更小、在一些实施方案中1g/100mL水或更小、在一些实施方案中100mg/100mL水或更小、在一些实施方案中10mg/100mL水或更小及在一些实施方案中1mg/100mL水或更小。在其它实施方案中，在25℃下测得的疏水性酸的溶解度的范围可为1mg/100mL水至2g/100mL水、在一些实施方案中1mg/100mL水至1g/100mL水、在一些实施方案中1mg/100mL水至500mg/100mL水及在一些实施方案中1mg/100mL水至100mg/100mL水。在一些实施方案中，所述疏水性酸在25℃下可基本上不溶于水中。
在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒可基本上不含在制备纳米颗粒期间使用的疏水性酸。在其它实施方案中，所公开的纳米颗粒可包含疏水性酸。举例而言，在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒中的酸含量范围可为约0.05重量％至约35重量％、在一些实施方案中约0.05重量％至约30重量％、在一些实施方案中约0.05重量％至约20重量％、在一些实施方案中约0.5重量％至约30重量％、在一些实施方案中约1重量％至约30重量％、在一些实施方案中约2重量％至约30重量％、在一些实施方案中约3重量％至约30重量％、在一些实施方案中约5重量％至约30重量％、在一些实施方案中约7重量％至约30重量％、在一些实施方案中约10重量％至约30重量％、在一些实施方案中约15重量％至约25重量％、在一些实施方案中约15重量％至约30重量％、在一些实施方案中约20重量％至约30重量％、在一些实施方案中约0.05重量％至约0.5重量％、在一些实施方案中约0.05重量％至约5重量％、在一些实施方案中约1重量％至约5重量％、在一些实施方案中约3重量％至约10重量％、在一些实施方案中约1重量％至约10重量％、在一些实施方案中约5重量％至约10重量％、在一些实施方案中约5重量％至约15重量％及在一些实施方案中约10重量％至约20重量％。
在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒中的酸含量范围可为0.05重量％至35重量％、在一些实施方案中0.05重量％至30重量％、在一些实施方案中0.05重量％至20重量％、在一些实施方案中0.5重量％至30重量％、在一些实施方案中1重量％至30重量％、在一些实施方案中2重量％至30重量％、在一些实施方案中3重量％至30重量％、在一些实施方案中5重量％至30重量％、在一些实施方案中7重量％至30重量％、在一些实施方案中10重量％至30重量％、在一些实施方案中15重量％至25重量％、在一些实施方案中15重量％至30重量％、在一些实施方案中20重量％至30重量％、在一些实施方案中0.05重量％至0.5重量％、在一些实施方案中0.05重量％至5重量％、在一些实施方案中1重量％至5重量％、在一些实施方案中3重量％至10重量％、在一些实施方案中约1重量％至约10重量％、在一些实施方案中约5重量％至约10重量％、在一些实施方案中5重量％至15重量％及在一些实施方案中10重量％至20重量％。
在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒实质上立即释放(例如，自约1分钟至约30分钟、约1分钟至约25分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约1小时、约1小时或约24小时)。在其它情形下，释放特征较缓慢：举例而言，在室温下(例如，25℃)和/或在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液(例如，包含磷酸二氢盐及磷酸氢盐缓冲液的缓冲液(例如，0.138M氯化钠、0.0027M氯化钾、约0.02M磷酸二氢钠或磷酸二氢钾及约0.01M磷酸氢二钠或磷酸氢二钾缓冲液，溶于1升水(例如，RODI水)中))中时，释放约2％或更少、约5％或更少、约10％或更少、约15％或更少、约20％或更少、约25％或更少、约30％或更少、约40％或更少的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约1小时释放约0.01％至约50％、在一些实施方案中约0.01％至约25％、在一些实施方案中约0.01％至约15％、在一些实施方案中约0.01％至约10％、在一些实施方案中约1％至约40％、在一些实施方案中约5％至约40％及在一些实施方案中约10％至约40％的治疗剂(以重量计)。在一些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约4小时释放约10％至约70％、在一些实施方案中约10％至约45％、在一些实施方案中约10％至约35％或在一些实施方案中约10％至约25％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约4小时释放约0.01％至约50％、在一些实施方案中约0.01％至约25％、在一些实施方案中约0.01％至约15％、在一些实施方案中约0.01％至约10％、在一些实施方案中约0.01％至约5％及在一些实施方案中约0.01％至约3％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约10小时释放约0.01％至约60％、在一些实施方案中约0.01％至约25％、在一些实施方案中约0.01％至约15％、在一些实施方案中约0.01％至约10％、在一些实施方案中约0.01％至约5％及在一些实施方案中约0.01％至约3％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约20小时释放约0.01％至约70％、在一些实施方案中约0.01％至约50％、在一些实施方案中约0.01％至约25％、在一些实施方案中约0.01％至约15％、在一些实施方案中约0.01％至约10％、在一些实施方案中约0.01％至约5％及在一些实施方案中约0.01％至约3％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约40小时释放约1％至约80％、在一些实施方案中约1％至约50％、在一些实施方案中约1％至约30％、在一些实施方案中约1％至约25％、在一些实施方案中约1％至约15％、在一些实施方案中约1％至约10％及在一些实施方案中约1％至约5％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经约100小时释放约10％至约100％、在一些实施方案中约10％至约80％、在一些实施方案中约10％至约70％、在一些实施方案中约10％至约60％、在一些实施方案中约10％至约50％、在一些实施方案中约10％至约40％、在一些实施方案中约10％至约30％、在一些实施方案中约10％至约20％的治疗剂(以重量计)。
在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒实质上立即释放(例如，自1分钟至30分钟、1分钟至25分钟、5分钟至30分钟、5分钟至1小时、1小时或24小时)。在其它情形下，释放特征较缓慢：举例而言，在室温下(例如，25℃)和/或在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液(例如，包含磷酸二氢盐及磷酸氢盐缓冲液的缓冲液(例如，0.138M氯化钠、0.0027M氯化钾、约0.02M磷酸二氢钠或磷酸二氢钾及约0.01M磷酸氢二钠或磷酸氢二钾缓冲液，溶于1升水(例如，RODI水)中))中时，释放2％或更少、5％或更少、10％或更少、15％或更少、20％或更少、25％或更少、30％或更少、40％或更少的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经1小时释放0.01％至50％、在一些实施方案中0.01％至25％、在一些实施方案中0.01％至15％、在一些实施方案中0.01％至10％、在一些实施方案中1％至40％、在一些实施方案中5％至40％及在一些实施方案中10％至40％的治疗剂(以重量计)。在一些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经4小时释放10％至70％、在一些实施方案中10％至45％、在一些实施方案中10％至35％或在一些实施方案中10％至25％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经4小时释放0.01％至50％、在一些实施方案中0.01％至25％、在一些实施方案中0.01％至15％、在一些实施方案中0.01％至10％、在一些实施方案中0.01％至5％及在一些实施方案中0.01％至3％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经10小时释放0.01％至60％、在一些实施方案中0.01％至25％、在一些实施方案中0.01％至15％、在一些实施方案中0.01％至10％、在一些实施方案中0.01％至5％及在一些实施方案中0.01％至3％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经20小时释放0.01％至70％、在一些实施方案中0.01％至50％、在一些实施方案中0.01％至25％、在一些实施方案中0.01％至15％、在一些实施方案中0.01％至10％、在一些实施方案中0.01％至5％及在一些实施方案中0.01％至3％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经40小时释放1％至80％、在一些实施方案中1％至50％、在一些实施方案中1％至30％、在一些实施方案中1％至25％、在一些实施方案中1％至15％、在一些实施方案中1％至10％及在一些实施方案中1％至5％的治疗剂(以重量计)。在某些实施方案中，例如，在25℃下和/或在37℃下置于水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液，例如，上文所描述的)中时，包含治疗剂的纳米颗粒可以以实质上对应于以下的速率释放治疗剂：经100小时释放10％至100％、在一些实施方案中10％至80％、在一些实施方案中10％至70％、在一些实施方案中10％至60％、在一些实施方案中10％至50％、在一些实施方案中10％至40％、在一些实施方案中10％至30％、在一些实施方案中10％至20％的治疗剂(以重量计)。
在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所公开的纳米颗粒可实质上保留治疗剂，例如，至少约1分钟、至少约1小时或更长。
在一些实施方案中，在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时，所公开的纳米颗粒可实质上保留治疗剂，例如，至少1分钟、至少1小时或更长。
在一个实施方案中，所公开的治疗性纳米颗粒可包括靶向配体，例如，低分子量配体。在某些实施方案中，低分子量配体缀合至聚合物，且纳米颗粒包含一定比率的配体缀合聚合物(例如，PLA-PEG-配体)与非官能化聚合物(例如，PLA-PEG或PLGA-PEG)。纳米颗粒可具有有效比率的这些两种聚合物，从而有效量的配体与纳米颗粒缔合以用于治疗诸如癌症等疾病或病症。举例而言，增加的配体密度可增加靶结合(细胞结合/靶摄取)，从而使得纳米颗粒为“靶特异性”。可替代的是，纳米颗粒中一定浓度的非官能化聚合物(例如，非官能化PLGA-PEG共聚物)可控制发炎和/或免疫原性(即能够激起免疫反应)，且使得纳米颗粒具有适于治疗疾病或病症的循环半衰期。举例而言，在一个实施方案中，非官能化聚合物与配体缀合的聚合物的摩尔比介于约0.01至约0.1之间且在另一个实施方案中为约0.01至约0.05(例如，约0.025)。另外，在一些实施方案中，非官能化聚合物可降低通过网状内皮系统(RES)自循环系统的清除率。因此，非官能化聚合物可向纳米颗粒提供可容许颗粒在给予后穿过身体的特性。在一些实施方案中，非官能化聚合物可平衡原本较高的配体浓度，该较高的配体浓度可另外加速个体清除，从而使得至靶细胞的递送较少。
在另一个实施方案中，非官能化聚合物与配体缀合的聚合物的摩尔比介于0.01至0.1之间且在另一个实施方案中为0.01至0.05(例如，0.025)。
在一些实施方案中，本申请中所公开的纳米颗粒可包括缀合至配体的官能化聚合物，其占纳米颗粒的整个聚合物组合物(即官能化+非官能化聚合物)的范围为大约0.1摩尔％至约50摩尔％、例如，约0.1摩尔％至约30摩尔％、例如，约0.1摩尔％至约20摩尔％、例如，约0.1摩尔％至约10摩尔％。在另一个实施方案中，本申请亦公开包括与一个或多个低分子量配体缀合(例如，以共价方式(即通过连接体(例如，烯烃连接体))或使用键)的聚合物的纳米颗粒，其中低分子量配体相对于总聚合物重量的百分比介于约0.001至约5之间、例如，约0.001至约2及，例如，约0.001至约1。
在一些实施方案中，本申请中所公开的纳米颗粒可包括缀合至配体的官能化聚合物，其占纳米颗粒的整个聚合物组合物(即官能化+非官能化聚合物)的范围为0.1摩尔％-50摩尔％、例如，0.1摩尔％–30摩尔％、例如，0.1摩尔％–20摩尔％、例如，0.1摩尔％-10摩尔％。本申请亦公开包括与一个或多个低分子量配体缀合的聚合物的纳米颗粒，其中低分子量配体相对于总聚合物的重量百分比介于0.001至5之间、例如，0.001至2，以及，例如，0.001至1。
一般而言，“纳米颗粒”是指直径小于1000nm(例如，约10nm至约200nm)的任何颗粒。所公开的治疗性纳米颗粒可包括具有直径为以下范围的纳米颗粒：约60nm至约120nm或约70nm至约120nm或约80nm至约120nm或约90nm至约120nm或约100nm至约120nm或约60nm至约130nm或约70nm至约130nm或约80nm至约130nm或约90nm至约130nm或约100nm至约130nm或约110nm至约130nm或约60nm至约140nm或约70nm至约140nm或约80nm至约140nm或约90nm至约140nm或约100nm至约140nm或约110nm至约140nm或约60nm至约150nm或约70nm至约150nm或约80nm至约150nm或约90nm至约150nm或约100nm至约150nm或约110nm至约150nm或约120nm至约150nm。
所公开的治疗性纳米颗粒可包括直径为以下范围的纳米颗粒：60nm至120nm或70nm至120nm或80nm至120nm或90nm至120nm或100nm至120nm或60nm至130nm或70nm至130nm或80nm至130nm或90nm至130nm或100nm至130nm或110nm至130nm或60nm至140nm或70nm至140nm或80nm至140nm或90nm至140nm或100nm至140nm或110nm至140nm或60nm至150nm或70nm至150nm或80nm至150nm或90nm至150nm或100nm至150nm或110nm至150nm或120nm至150nm。
聚合物
在一些实施方案中，所述纳米颗粒可包含聚合物基质及治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂和/或靶向部分(即低分子量配体)可与聚合物基质的至少一部分缔合。举例而言，在一些实施方案中，靶向部分(例如，配体)可与聚合物基质的表面共价缔合。在一些实施方案中，通过连接体介导共价缔合。治疗剂可与聚合物基质的表面缔合、囊封于其内、被其环绕和/或分散于其中。
药物递送技术领域中已知广泛多种聚合物及由其形成颗粒的方法。在一些实施方案中，本公开内容涉及具有至少两种大分子的纳米颗粒，其中第一大分子包含结合至低分子量配体(例如，靶向部分)的第一聚合物；且第二大分子包含不结合至靶向部分的第二聚合物。纳米颗粒可任选包括一种或多种其它非官能化聚合物。
可在所公开的纳米颗粒中使用任何适宜聚合物。聚合物可为天然或非天然(合成)聚合物。聚合物可为均聚物或包含两种或更多种单体的共聚物。就序列而言，共聚物可为随机、嵌段或包含随机及嵌段序列的组合。通常，聚合物是有机聚合物。
本申请中所用的术语“聚合物”是以如本领域中所使用的其常用含义给出的，即包含一个或多个通过共价键连接的重复单元(单体)的分子结构。重复单元可全部相同，或在一些情形下可在聚合物内存在多于一种类型的重复单元。在一些情形下，聚合物可为生物来源的，即生物聚合物。非限制性实例包括肽或蛋白质。在一些情形下，另外的部分亦可存在于聚合物中，例如，生物部分，例如，下文中描述的那些。若多于一种类型的重复单元存在于聚合物内，则聚合物称为“共聚物”。应理解，在采用聚合物的任一实施方案中，在一些情形下所采用的聚合物可为共聚物。形成共聚物的重复单元可以任一方式进行配置。举例而言，重复单元可以随机顺序、以交替顺序或以嵌段共聚物(即包含一个或多个各包含第一重复单元(例如，第一嵌段)的区域及一个或多个各包含第二重复单元(例如，第二嵌段)的区域)等形式进行配置。嵌段共聚物可具有两个(二嵌段共聚物)、三个(三嵌段共聚物)或更多数量的不同嵌段。
所公开的颗粒可包括共聚物，在一些实施方案中共聚物描述通常通过将两种或更多种聚合物共价键合至一起而彼此缔合的两种或更多种聚合物(例如，本申请中所描述的那些)。因此，共聚物可包含缀合在一起以形成嵌段共聚物的第一聚合物及第二聚合物，其中第一聚合物可为嵌段共聚物的第一嵌段且第二聚合物可为嵌段共聚物的第二嵌段。当然，本领域技术人员应理解，在一些情形下，嵌段共聚物可含有多个聚合物嵌段，且本申请中所使用的“嵌段共聚物”并不仅限于仅具有单一第一嵌段及单一第二嵌段的嵌段共聚物。举例而言，嵌段共聚物可包括含有第一聚合物的第一嵌段、含有第二聚合物的第二嵌段及含有第三聚合物或第一聚合物的第三嵌段等。在一些情形下，嵌段共聚物可含有任一数量的第一聚合物的第一嵌段及第二聚合物的第二嵌段(及在某些情形下第三嵌段、第四嵌段等)。此外，应注意，在一些情形下，嵌段共聚物亦可由其它嵌段共聚物形成。举例而言，第一嵌段共聚物可缀合至另一聚合物(其可为均聚物、生物聚合物、另一嵌段共聚物等)以形成含有多个类型嵌段的新嵌段共聚物和/或缀合至其它部分(例如，缀合至非聚合部分)。
在一些实施方案中，所述聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)可为两亲性，即具有亲水性部分及疏水性部分或相对亲水性部分及相对疏水性部分。亲水性聚合物可为通常吸引水的聚合物且疏水性聚合物可为通常排斥水的聚合物。例如，可以通过以下方式来鉴别亲水性或疏水性聚合物：制备聚合物样品且测量其与水的接触角(通常，亲水性聚合物具有小于60°的接触角，而疏水性聚合物具有大于约60°的接触角)。在一些情形下，两种或更多种聚合物的亲水性可相对于彼此来测量，即，第一聚合物可较第二聚合物更具亲水性。举例而言，第一聚合物可具有小于第二聚合物的接触角。
在一组实施方案中，本申请中所考虑的聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)包括生物相容性聚合物，即聚合物在插入或注射至活个体时通常并不诱导不良反应，例如，并无显著发炎和/或聚合物不由免疫系统，例如，通过T-细胞反应急性排斥。因此，本申请中所考虑的治疗性颗粒可为非免疫原性。本申请中所用的术语非免疫原性是指处于原始状态的内源性生长因子，其通常不诱发或仅诱发最小浓度的循环抗体、T-细胞或反应性免疫细胞，且其通常不在个体中诱发针对自身的免疫反应。
生物相容性通常是指免疫系统的至少一部分对物质的急性排斥，即植入个体中的非生物相容材料在个体中激起如下免疫反应：其可足够严重从而免疫系统对材料的排斥不能被适当控制，且通常其程度使得必须自个体去除所述物质。一种测定生物相容性的简单实验可为将聚合物暴露于体外细胞；生物相容性聚合物是通常在适当浓度下(例如，在50微克/106个细胞的浓度下)不引起显著细胞死亡的聚合物。举例而言，在暴露于细胞(例如，纤维母细胞或上皮细胞)时，即使被所述细胞吞噬或以其它方式吸收，生物相容性聚合物亦可引起小于约20％的细胞死亡。可用于各个实施方案中的生物相容性聚合物的非限制性实例包括聚二氧杂环己酮(PDO)、聚羟基烷酸酯、聚羟基丁酸酯、聚(甘油癸二酸酯)、聚乙交酯(即聚(乙醇)酸)(PGA)、聚丙交酯(即聚(乳)酸)(PLA)、聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸(PLGA)、聚己内酯或包括这些和/或其它聚合物的共聚物或衍生物。
在某些实施方案中，所考虑的生物相容性聚合物可为可被生物降解的，即，聚合物能够以化学方式和/或生物方式在生理学环境内(例如，在身体内)降解。如本申请中所使用，“可被生物降解的”聚合物是在引入细胞中时通过细胞机构(可被生物降解)和/或通过化学过程(例如，水解)(化学可降解)分解成细胞可再利用或处置且对细胞并无显著毒性效应的组分的那些。在一个实施方案中，可被生物降解的聚合物及其降解副产物可为生物相容的。
本申请中所公开的颗粒可含有或可不含PEG。此外，某些实施方案可涉及含有聚(酯-醚)(例如，具有由酯键(例如，R100-C(O)-O-R1键)及醚键(例如，R1-O-R1键，其中R100及R1独立地是可任选被取代且可以相同或不同的烃基部分)连接的重复单元的聚合物)的共聚物。在一些实施方案中，含有羧酸基团的可被生物降解的聚合物(例如，可水解的聚合物)可与聚(乙二醇)重复单元缀合以形成聚(酯-醚)。含有聚(乙二醇)重复单元的聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)亦可称为“聚乙二醇化”聚合物。
举例而言，所考虑的聚合物可为在暴露于水后(例如，在个体内)自发水解的聚合物，或聚合物可在暴露于热后(例如，在约37℃的温度下)降解。取决于所用聚合物或共聚物，聚合物可以不同速率发生降解。举例而言，取决于聚合物，聚合物的半衰期(50％的聚合物可降解成单体和/或其它非聚合部分的时间)可大约为数天、数周、数月或数年。聚合物，例如，可通过酶活性或细胞机构，在一些情形下，例如，通过暴露于溶菌酶(例如，具有相对较低pH)发生生物降解。在一些情形下，聚合物可分解成细胞可再利用或处置且对细胞并无显著毒性效应的单体和/或其它非聚合部分(举例而言，聚丙交酯可水解形成乳酸，聚乙交酯可水解形成乙醇酸等)。
在一些实施方案中，所述聚合物可为聚酯，包括含有乳酸及乙醇酸单元的共聚物，例如，聚(乳酸-共-乙醇酸)及聚(丙交酯-共-乙交酯)(在本申请中统称为“PLGA”)；及包含乙醇酸单元(在本申请中称为“PGA”)及乳酸单元(例如，聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D,L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯及聚-D,L-丙交酯，在本申请中统称为“PLA”)的均聚物。在一些实施方案中，示例性聚酯包括，例如，聚羟基酸、丙交酯及乙交酯的聚乙二醇化聚合物及共聚物(例如，聚乙二醇化PLA、聚乙二醇化PGA、聚乙二醇化PLGA及其衍生物)。在一些实施方案中，所述聚酯包括，例如，聚酐、聚(原酸酯)、聚乙二醇化聚(原酸酯)、聚(己内酯)、聚乙二醇化聚(己内酯)、聚赖氨酸、聚乙二醇化聚赖氨酸、聚(乙烯亚胺)、聚乙二醇化聚(乙烯亚胺)、聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]及其衍生物。
在一些实施方案中，所述聚合物可为PLGA。PLGA是乳酸及乙醇酸的生物相容及可被生物降解的共聚物，且可通过乳酸:乙醇酸的比率表征各种形式的PLGA。乳酸可为L-乳酸、D-乳酸或D,L-乳酸。可通过改变乳酸-乙醇酸比率来调节PLGA的降解速率。在一些实施方案中，PLGA的特征可在于乳酸:乙醇酸摩尔比为大约85:15、大约75:25、大约60:40、大约50:50、大约40:60、大约25:75或大约15:85。在一些实施方案中，可以选择颗粒聚合物(例如，PLGA嵌段共聚物或PLGA-PEG嵌段共聚物)中乳酸与乙醇酸单体的摩尔比以优化各种参数，举例而言，可优化水摄取、治疗剂释放和/或聚合物降解动力学。
在一些实施方案中，所述聚合物可为一种或多种丙烯酸聚合物。在某些实施方案中，丙烯酸聚合物包括，例如，丙烯酸及甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙基酯、甲基丙烯酸氰基乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油基酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯及包含一种或多种前述聚合物的组合。丙烯酸聚合物可包含具有低含量季铵基团的丙烯酸及甲基丙烯酸酯的完全聚合共聚物。
在一些实施方案中，所述聚合物可为阳离子型聚合物。一般而言，阳离子型聚合物能够缩合和/或保护核酸(例如，DNA、RNA或其衍生物)的带负电荷链。在一些实施方案中，含胺聚合物(例如，聚(赖氨酸)、聚乙烯亚胺(PEI)及聚(酰氨基胺)树枝状聚合物)预计可用于所公开的颗粒中。
在一些实施方案中，所述聚合物可为具有阳离子型侧链的可降解聚酯。所述聚酯的实例包括聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)。
预计PEG可封端且包括端基团(例如，在PEG并未缀合至配体时)。举例而言，PEG可封端于羟基、甲氧基或其它烷氧基、甲基或其它烷基、芳基、羧酸、胺、酰胺、乙酰基、胍基或咪唑。其它预期端基团包括叠氮化物、炔烃、马来酰亚胺、醛、酰肼、羟基胺、烷氧基胺或硫醇部分。
本领域技术人员应知晓，例如，通过以下方式使聚合物聚乙二醇化的方法及技术：使用EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)及NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)使聚合物与终止于胺的PEG基团进行反应、通过开环聚合技术(ROMP)或诸如此类。
在一个实施方案中，可优化聚合物的分子量(或，例如，共聚物的，例如，不同嵌段的分子量的比率)以用于如本申请中所公开的有效治疗。举例而言，聚合物的分子量可影响颗粒降解速率(例如，在可调节可被生物降解的聚合物的分子量时)、溶解度、水吸收及药物释放动力学。举例而言，可调节聚合物的分子量(或，例如，不同共聚物的，例如，嵌段的分子量的比率)，从而颗粒在合理时间段内(自数小时至1-2周、3-4周、5-6周、7-8周等)于所治疗个体中发生生物降解。
所公开的颗粒，例如，可包含PEG及PL(G)A的二嵌段共聚物，其中举例而言，PEG部分可具有约1,000-20,000、例如，约2,000-20,000、例如，约2至约10,000之数均分子量，且PL(G)A部分可具有约5,000至约20,000或约5,000-100,000、例如，约20,000-70,000、例如，约15,000-50,000的数均分子量。
举例而言，本申请中所述公开的是示例性治疗性纳米颗粒，其包含约10重量％至约99重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物或约50重量％至约99.75重量％、约20重量％至约80重量％、约40重量％至约80重量％或约30重量％至约50重量％或约70重量％至约90重量％、约70重量％至约99.75重量％、约80重量％至约99.75重量％、约70重量％至约80重量％或约85重量％至约95重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含约50重量％、约55重量％、约60重量％、约65重量％、约70重量％、约75重量％、约80重量％、约85重量％、约90重量％或约95重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。示例性聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物可包括介于约15kDa至约20kDa或约10kDa至约25kDa之间的聚(乳)酸数均分子量及约4kDa至约6kDa、约4kDa至约10kD、约6kDa至约10kDa或约2kDa至约10kDa聚(乙)二醇的数均分子量。
在另一实例中，本申请中所公开的是示例性治疗性纳米颗粒，其包含10重量％至99重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物或50重量％至99.75重量％、20重量％至80重量％、40重量％至80重量％或30重量％至50重量％或70重量％至90重量％、70重量％至99.75重量％、80重量％至99.75重量％、70重量％至80重量％或85重量％至95重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％或95重量％的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。示例性聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物可包括介于15kDa至20kDa或10kDa至25kDa之间的聚(乳)酸数均分子量及4kDa至6kDa、4kDa至10kD、6kDa至10kDa或2kDa至10kDa聚(乙)二醇的数均分子量。
在一些实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物可具有以下聚(乳)酸数均分子量分数：约0.6至约0.95、在一些实施方案中约0.7至约0.9、在一些实施方案中约0.6至约0.8、在一些实施方案中约0.7至约0.8、在一些实施方案中约0.75至约0.85、在一些实施方案中约0.8至约0.9及在一些实施方案中约0.85至约0.95。应理解，可通过以下方式来计算聚(乳)酸数均分子量分数：使共聚物中聚(乳)酸组分的数均分子量除以聚(乳)酸组分的数均分子量及聚(乙)二醇组分的数均分子量的总和。
在一些实施方案中，所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物可具有以下聚(乳)酸数均分子量分数：0.6至0.95、在一些实施方案中0.7至0.9、在一些实施方案中0.6至0.8、在一些实施方案中0.7至0.8、在一些实施方案中0.75至0.85、在一些实施方案中0.8至0.9及在一些实施方案中0.85至0.95。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:7的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:4的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:14的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以约1:3的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以1:7的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以1:4的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以1:14的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒以1:3的重量比包含1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及PLA-PEG(以16:5摩尔比)。
所公开的纳米颗粒可任选包括约1重量％至约50重量％的聚(乳)酸或聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸(其不包括PEG)，或可任选包括约1重量％至约50重量％或约10重量％至约50重量％或约30重量％至约50重量％的聚(乳)酸或聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸。举例而言，聚(乳)或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸可具有介于约5kDa至约15kDa或约5kDa至约12kDa之间的数均分子量。示例性PLA可具有介于约5kDa至约10kDa之间的数均分子量。示例性PLGA可具有介于约8kDa至约12kDa之间的数均分子量。
所公开的纳米颗粒可任选包括1重量％至50重量％的聚(乳)酸或聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸(其不包括PEG)，或可任选包括1重量％至50重量％或10重量％至50重量％或30重量％至50重量％的聚(乳)酸或聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸。举例而言，聚(乳)或聚(乳)-共-聚(乙醇)酸可具有介于5kDa至15kDa或5kDa至12kDa之间的数均分子量。示例性PLA可具有介于5kDa至10kDa之间的数均分子量。示例性PLGA可具有介于8kDa至12kDa之间的数均分子量。
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可含有约10重量％至约30重量％、约10重量至约25重量％、约10重量％至约20重量％、约10重量％至约15重量％、约15重量％至约20重量％、约15重量％至约25重量％、约20重量％至约25重量％、约20重量％至约30重量％或约25重量％至约30重量％的聚(乙)二醇，其中聚(乙)二醇可以聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乙)二醇均聚物之形式存在。在某些实施方案中，所述纳米颗粒的聚合物可缀合至脂质。聚合物可为，例如，脂质封端的PEG。
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可含有10重量％至30重量％、10重量％至25重量％、10重量％至20重量％、10重量％至15重量％、15重量％至20重量％、15重量％至25重量％、20重量％至25重量％、20重量％至30重量％或25重量％至30重量％的聚(乙)二醇，其中聚(乙)二醇可以聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物、聚(乳)-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物或聚(乙)二醇均聚物的形式存在。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含聚合物PLA-PEG且PLA-PEG的摩尔比约为5:1。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含聚合物PLA-PEG且PLA-PEG的摩尔比为5:1。
靶向部分
在一些实施方案中，本申请提供的是可包括任选靶向部分(即能够结合至生物实体(例如，膜组分、细胞表面受体、抗原或诸如此类)或以其它方式与其缔合的部分)的纳米颗粒。存在于颗粒表面上的靶向部分可容许颗粒定位于特定靶向位点(例如，肿瘤、疾病位点、组织、器官、某类细胞等)上。因此，纳米颗粒然后可为“靶特异性的”。在一些情形下，药物或其它有效负载物(payload)然后可自颗粒释放且容许在局部与特定靶向位点相互作用。
在一个实施方案中，所公开的纳米颗粒包括为低分子量配体的靶向部分。本申请中所用的术语“结合(bind或binding)”是指相应的一对分子或其部分之间的相互作用，所述分子或其部分通常因特异性或非特异性结合或相互作用(包括但不限于生物化学、生理学和/或化学相互作用)而展现相互亲和力或结合能力。“生物结合”定义发生于分子(包括蛋白质、核酸、糖蛋白、碳水化合物、激素或诸如此类)对之间的一类相互作用。术语“结合配偶体”是指可与特定分子进行结合的分子。“特异性结合”是指分子(例如，聚核苷酸)能够以实质上高于其它类似生物实体的程度结合至或识别结合配偶体(或有限数量的结合配偶体)。在一组实施方案中，靶向部分具有小于约1微摩尔浓度、至少约10微摩尔浓度或至少约100微摩尔浓度的亲和力(通过解离常数测量)。
在一些实施方案中，靶向部分具有小于1微摩尔浓度、至少10微摩尔浓度或至少100微摩尔浓度的亲和力(通过解离常数测量)。
举例而言，取决于所用靶向部分，靶向部分可使得颗粒定位于个体身体内的肿瘤(例如，实体肿瘤)、疾病位点、组织、器官、某类细胞等处。举例而言，低分子量配体可定位于实体肿瘤(例如，乳房或前列腺肿瘤)或癌细胞处。个体可为人类或非人类动物。个体的实例包括但不限于哺乳动物，例如，狗、猫、马、猴、兔、牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、天竺鼠、仓鼠、灵长类动物、人类或诸如此类。
所考虑的靶向部分可包括小分子。在某些实施方案中，术语“小分子”是指具有相对较低分子量且并非蛋白质、多肽或核酸的有机化合物，不论是天然或人工产生(例如，通过化学合成)。小分子通常具有多个碳-碳键。在某些实施方案中，小分子的大小为约2000g/mol或更小。在一些实施方案中，小分子为约1500g/mol或更小或约1000g/mol或更小。在一些实施方案中，小分子为约800g/mol或更小、500g/mol或更小、例如，约100g/mol至约600g/mol或约200g/mol至约500g/mol。
在某些实施方案中，小分子的大小为2000g/mol或更小。在一些实施方案中，小分子为1500g/mol或更小或1000g/mol或更小。在一些实施方案中，小分子为800g/mol或更小、500g/mol或更小、例如，100g/mol至600g/mol或200g/mol至500g/mol。
在一些实施方案中，低分子量配体具有式I、II、III或IV：
Figure BDA0001114226930000581
及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物；
其中m及n各自独立地为0、1、2或3；p为0或1；
R1、R2、R4及R5各自独立地选自由以下基团组成的组：被取代或未被取代的烷基(例如，C1-10-烷基、C1-6-烷基或C1-4-烷基)、被取代或未被取代的芳基(例如，苯基或吡啶基)及其任一组合；且R3是H或C1-6-烷基(例如，CH3)。
对于式I、II、III及IV的化合物而言，R1、R2、R4或R5包含与纳米颗粒的连接点，例如，与形成所公开的纳米颗粒的一部分的聚合物(例如，PEG)的连接点。连接点可通过共价键、离子键、氢键、通过吸附(包括化学吸附及物理吸附)形成的键、来自范德华键(van derWaals bond)形成的键或分散力形成。举例而言，若R1、R2、R4或R5定义为苯胺或C1-6-烷基-NH2基团，则可去除所述官能基的任一氢(例如，氨基氢)，从而低分子量配体共价结合至纳米颗粒的聚合物基质(例如，聚合物基质的PEG嵌段)。如本申请中所使用，术语“共价键”是指两个原子之间通过共享至少一对电子所形成的键。在式I、II、III或IV的特定实施方案中，R1、R2、R4及R5各自独立地是C1-6-烷基或苯基，或者C1-6-烷基或苯基的任一组合，其独立地被OH、SH、NH2或CO2H取代一次或多次，且其中烷基可间杂有N(H)、S或O。在另一个实施方案中，R1、R2、R4及R5各自独立地是CH2-Ph、(CH2)2-SH、CH2-SH、(CH2)2C(H)(NH2)CO2H、CH2C(H)(NH2)CO2H、CH(NH2)CH2CO2H、(CH2)2C(H)(SH)CO2H、CH2-N(H)-Ph、O-CH2-Ph或O-(CH2)2-Ph，其中Ph是苯基，且其中每一Ph可独立地被OH、NH2、CO2H或SH取代一次或多次。对于所述式而言，NH2、OH或SH基团用作与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG、-O-PEG或-S-PEG)。
示例性配体包括：
Figure BDA0001114226930000591
Figure BDA0001114226930000601
及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋物，其中NH2、OH或SH基团用作与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG、-O-PEG或-S-PEG)或
Figure BDA0001114226930000602
表示与纳米颗粒的连接点，其中n为1、2、3、4、5或6，且其中R独立地选自由以下基团组成的组：NH2、SH、OH、CO2H、经NH2、SH、OH或CO2H取代的C1-6-烷基及经NH2、SH、OH或CO2H取代的苯基，且其中R用作与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG、-S-PEG、-O-PEG或CO2-PEG)。所述化合物可进一步经NH2、SH、OH、CO2H、经NH2、SH、OH或CO2H取代的C1-6-烷基或经NH2、SH、OH或CO2H取代的苯基取代，其中所述官能基亦可用作与纳米颗粒的共价连接点。
在一些实施方案中，可用于靶向与实体肿瘤(例如，前列腺或乳癌肿瘤)有关的细胞的小分子靶向部分包括PSMA肽酶抑制剂，例如，2-PMPA、GPI5232、VA-033、苯基烷基膦酰胺化物和/或其类似物及衍生物。在一些实施方案中，可用于靶向与前列腺癌肿瘤有关的细胞的小分子靶向部分包括硫醇及吲哚硫醇衍生物，例如，2-MPPA及3-(2-巯基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸衍生物。在一些实施方案中，可用于靶向与前列腺癌肿瘤有关的细胞的小分子靶向部分包括氧肟酸酯衍生物。在一些实施方案中，可用于靶向与前列腺癌肿瘤有关的细胞的小分子靶向部分包括基于PBDA及基于脲的抑制剂(例如，ZJ 43、ZJ 11、ZJ 17、ZJ 38和/或其类似物及衍生物)、雄激素受体靶向剂(ARTA)、聚胺(例如，腐胺、精胺及精脒)、谷氨酸羧化酶II(GCPII)(亦称为NAAG肽酶或NAALADase)的抑制剂。
在另一个实施方案中，靶向部分可为靶向Her2、EGFR、叶酸盐受体或toll受体的配体。在另一个实施方案中，靶向部分是叶酸酯、叶酸或EGFR结合分子。
举例而言，预计靶向部分可包括核酸、多肽、糖蛋白、碳水化合物或脂质。举例而言，靶向部分可为结合至细胞类型特异性标记物的核酸靶向部分(例如，适体，例如，A10适体)。一般而言，适体是结合至特定靶(例如，多肽)的寡核苷酸(例如，DNA、RNA或其类似物或衍生物)。在一些实施方案中，靶向部分可为用于细胞表面受体的天然或合成配体，例如，生长因子、激素、LDL、转铁蛋白等。靶向部分可为抗体，该术语意指包括抗体片段。例如，可使用诸如噬菌体展示等程序来鉴别抗体的特征部分-单链靶向部分。
在一些实施方案中，本申请中所公开的靶向部分可缀合至所公开的聚合物或共聚物(例如，PLA-PEG)，且此类聚合物缀合物可形成所公开的纳米颗粒的一部分。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒另外存在靶向配体且该配体是PLA-PEG-GL，其中GL具有下列结构：
Figure BDA0001114226930000621
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可包括聚合物-药物缀合物。举例而言，药物可缀合至所公开的聚合物或共聚物(例如，PLA-PEG)，且此类聚合物-药物缀合物可形成所公开的纳米颗粒的一部分。举例而言，所公开的治疗性纳米颗粒可任选包括约0.2重量至约30重量％的PLA-PEG或PLGA-PEG，其中PEG被药物官能化(例如，PLA-PEG-药物)。
在另一实例中，所公开的治疗性纳米颗粒可任选包括0.2重量％至30重量％的PLA-PEG或PLGA-PEG，其中PEG被药物官能化(例如，PLA-PEG-药物)。
可使用任一适宜缀合技术形成所公开的聚合物缀合物(例如，聚合物-配体缀合物)。举例而言，可使用诸如以下等技术使两种化合物(例如，靶向部分或药物及生物相容性聚合物(例如，生物相容性聚合物及聚(乙二醇)))缀合在一起：EDC-NHS化学(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐及N-羟基琥珀酰亚胺)或涉及马来酰亚胺或羧酸(其可缀合至硫醇、胺或类似官能化聚醚的一端)的反应。靶向部分或药物及聚合物形成聚合物-靶向部分缀合物或聚合物-药物缀合物的缀合可在有机溶剂(例如，但不限于二氯甲烷、乙腈、氯仿、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、丙酮或诸如此类)中实施。本领域技术人员仅使用常规实验即可确定具体反应条件。
在另一组实施方案中，可通过使包含羧酸官能基的聚合物(例如，聚(酯-醚)化合物)与上面具有胺官能基的聚合物或其它部分(例如，靶向部分或治疗性药物)进行反应来实施缀合反应。举例而言，可使靶向部分(例如，低分子量配体或治疗剂)与胺反应形成含胺部分，其然后可缀合至聚合物的羧酸。该反应可以单一步骤反应形式发生，即在不使用中间体(例如，N-羟基琥珀酰亚胺或马来酰亚胺)下实施缀合。在一些实施方案中，可使治疗剂与含胺连接体反应形成含胺药物，其然后可缀合至聚合物的羧酸，如上文所描述。在一组实施方案中，可通过以下方式来实现含胺部分与羧酸封端的聚合物(例如，聚(酯-醚)化合物)之间的缀合反应：将溶于有机溶剂(例如，(但不限于)二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氢呋喃、丙酮、甲酰胺、二甲基甲酰胺、吡啶、二
Figure BDA0001114226930000631
烷或二甲基亚砜)中的含胺部分添加至含有羧酸封端的聚合物的溶液中。羧酸封端的聚合物可含于有机溶剂(例如，但不限于二氯甲烷、乙腈、氯仿、二甲基甲酰胺、四氢呋喃或丙酮)内。在一些情形下，含胺部分与羧酸封端的聚合物之间的反应可自发发生。可在所述反应之后洗涤掉未缀合反应物，且可使聚合物沉淀于溶剂(例如，乙醚、己烷、甲醇或乙醇)中。在某些实施方案中，可在含醇部分与聚合物的羧酸官能基之间形成缀合物，此可类似于如上文针对胺及羧酸的缀合物所描述来实现。
纳米颗粒的制备
本公开内容之另一方面涉及制造所公开的纳米颗粒的系统及方法。在一些实施方案中，使用不同比率的两种或更多种不同聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)且自聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)产生颗粒，颗粒的性质得以控制。举例而言，一种聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)可包括低分子量配体，而可针对生物相容性和/或控制所得颗粒的免疫原性的能力来选择另一聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)。
在一些实施方案中，用于纳米颗粒制备方法(例如，如下文所论述的纳米沉淀方法或纳米乳化方法)的溶剂可包含疏水性酸，其可赋予使用该方法制得的纳米颗粒有利性质。如上文所论述，在一些情形下，疏水性酸可改良所公开的纳米颗粒的药物载量。另外，在一些情形下，可通过使用疏水性酸来改良所公开的纳米颗粒的受控释放性质。在一些情形下，疏水性酸可包括，例如，方法中所使用的有机溶液或水溶液中。在一个实施方案中，将治疗剂有机溶液及疏水性酸及任选地一种或多种聚合物组合。用于溶解治疗剂的溶液中的疏水性酸浓度论述于上文中且，例如，可介于约1重量％与约30重量％或1重量％与30重量％等之间。
在一组实施方案中，通过以下方式来形成颗粒：提供包含一种或多种聚合物的溶液，及使溶液与聚合物非溶剂接触以产生颗粒。溶液可与聚合物非溶剂混溶或不混溶。举例而言，水混溶性液体(例如，乙腈)可含有聚合物，并且，例如，在通过以受控速率将乙腈倾倒至水中来使乙腈与水、聚合物非溶剂接触时，形成颗粒。含于溶液内的聚合物在与聚合物非溶剂接触时然后可发生沉淀以形成颗粒，例如，纳米颗粒。当在环境温度及压力下一种液体在至少10重量％的程度上不溶于另一种液体中时，这两种液体可视为彼此“不混溶”或不混溶。通常，有机溶液(例如，二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氢呋喃、丙酮、甲酰胺、二甲基甲酰胺、吡啶、二
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烷、二甲基亚砜等)及含水液体(例如，水或含有溶解盐或其它物质、细胞或生物介质、乙醇等的水)彼此不混溶。举例而言，可将第一溶液倾倒至第二溶液中(以适宜速率或速度)。在一些情形下，在第一溶液与不混溶性第二液体接触时，可形成颗粒(例如，纳米颗粒)，举例而言，在将第一溶液倾倒至第二液体中时，聚合物在接触时发生沉淀会使得聚合物形成纳米颗粒，且在一些情形下，举例而言，在小心控制引入速率且保持于相对较缓慢速率时，可形成纳米颗粒。本领域普通技术人员仅使用常规实验即可易于优化该颗粒形成的控制。
可使用所公开的方法高度控制诸如以下等性质：表面官能性、表面电荷、大小、齐他(ζ)电势、疏水性、控制免疫原性的能力及诸如此类。举例而言，可合成颗粒文库，且筛选以鉴别具有使得颗粒具有特定密度的存在于颗粒表面上的部分(例如，低分子量配体)的特定聚合物比率的颗粒。此容许制备具有一种或多种特定性质(例如，特定大小及部分的比表面密度)的颗粒，而无需过多努力。因此，某些实施方案涉及使用所述文库的筛选技术以及使用所述文库鉴别的任何颗粒。此外，可通过任一适宜方法来进行鉴别。举例而言，鉴别可为直接或间接，或定量或定性进行。
在一些实施方案中，利用靶向部分使用类似于那些针对产生配体功能化聚合缀合物所描述的程序来对已形成纳米颗粒实施官能化。举例而言，将第一共聚物(PLGA-PEG、聚(丙交酯-共-乙交酯)及聚(乙二醇))与含有可质子化氮的治疗剂混合以形成颗粒。然后使颗粒与低分子量配体缔合以形成可用于治疗癌症的纳米颗粒。可使颗粒与不同量的低分子量配体缔合以控制纳米颗粒的配体表面密度，由此改变纳米颗粒的治疗性特性。另外，举例而言，通过控制诸如分子量、PEG分子量及纳米颗粒表面电荷等参数，可获得极精确控制的颗粒。
在另一个实施方案中，提供纳米乳化方法，例如，图1、2A及2B中所代表的方法。举例而言，可将治疗剂、疏水性酸、第一聚合物(例如，二嵌段共聚物，例如，PLA-PEG或PLGA-PEG，其中的任一者可任选结合至配体)及任选第二聚合物(例如，(PL(G)A-PEG或PLA)与有机溶液组合以形成第一有机相。该第一相可包括约1％重量至约50％重量固体、约5％重量至约50％重量固体、约5％重量至约40％重量固体、约1％重量至约15％重量固体或约10％重量至约30％重量固体。可将第一有机相与第一水溶液组合以形成第二相。有机溶液可包括，例如，甲苯、甲基乙基酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、乙酸异丙基酯、二甲基甲酰胺、二氯甲烷(methylene chloride、dichloromethane)、氯仿、丙酮、苄醇、TweenTM 80、Span80或诸如此类及其组合。在一个实施方案中，有机相可包括苄醇、乙酸乙酯及其组合。第二相可包括约0.1重量％至50重量％或约1重量％至50重量％或约5重量％至40重量％或约1重量％至15重量％的固体。水溶液可为任选地与胆酸钠、乙酸乙酯、聚乙酸乙烯酯及苄醇中之一或多种组合的水。在一些实施方案中，可基于质子化碱性治疗剂的pKa和/或疏水性酸的pKa来选择水相的pH。举例而言，在某些实施方案中，治疗剂在质子化时可具有第一pKa，疏水性酸可具有第二pKa，且水相可具有等于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的pH。在一特定实施方案中，水相的pH可等于在第一pKa与第二pKa之间约等距的pKa单位。
在另一个实施方案中，第一相可包括1重量％至50％重量固体、5重量％至50％重量固体、5重量％至40％重量固体、1重量％至15％重量固体或10重量％至30％重量固体。在一个实施方案中，第二相可包括0.1重量％至50重量％或1重量％至50重量％或5重量％至40重量％或1重量％至15重量％的固体。在一特定实施方案中，水相的pH可等于在第一pKa与第二pKa之间等距的pKa单位。
举例而言，油或有机相可使用仅部分地与非溶剂(水)混溶的溶剂。因此，在以足够低比率混合时和/或在使用经有机溶剂预饱和的水时，油相仍为液体。油相可乳化至水溶液中且使用，例如，高能量分散系统(例如，均化器或超声处理器)以液滴形式剪切成纳米颗粒。乳液的水性部分(另外称为“水相”)可为由胆酸钠组成且经乙酸乙酯及苄醇预饱和的表面活性剂溶液。在一些情形下，有机相(例如，第一有机相)可包括碱性治疗剂。另外，在某些实施方案中，水溶液(例如，第一水溶液)可包括实质上疏水性酸。在其它实施方案中，碱性治疗剂及实质上疏水性酸皆可溶于有机相中。
可，例如，以一个或两个乳化步骤乳化第二相以形成乳化相。举例而言，可制备初级乳液，且然后乳化以形成精细乳液。可，例如，使用简单混合、高压均化器、探针超声处理器、搅拌棒或转子-定子均化器来形成初级乳液。可通过使用，例如，探针超声处理器或高压均化器，例如，通过穿过均化器1、2、3或更多次来使初级乳液形成精细乳液。举例而言，在使用高压均化器时，所用压力可为约30psi至约60psi、约40psi至约50psi、约1000psi至约8000psi、约2000psi至约4000psi、约4000psi至约8000psi或约4000psi至约5000psi，例如，约2000psi、2500psi、4000psi或5000psi。
在另一实例中，在使用高压均化器时，所用压力可为30psi至60psi、40psi至50psi、1000psi至8000psi、2000psi至4000psi、4000psi至8000psi或4000psi至5000psi，例如，2000psi、2500psi、4000psi或5000psi。
在一些情形下，任选择精细乳化条件(其特征可在于乳液中的液滴具有极高表面与体积的比率)以最大化治疗剂及疏水性酸的溶解度且形成期望HIP。在某些实施方案中，在精细乳化条件下，所溶解组分可极快速地发生平衡，即快于纳米颗粒的固化。因此，基于，例如，质子化形式的治疗剂与疏水性酸之间的pKa差来选择HIP或调节其它参数(例如，精细乳液的pH和/或骤冷溶液的pH)可对纳米颗粒的药物载量及释放性质具有显著影响，此通过控制，例如，在纳米颗粒中形成HIP而非使治疗剂和/或疏水性酸扩散出纳米颗粒来实现。
在一些实施方案中，可在乳化第二相之前将治疗剂及实质上疏水性酸组合于第二相中。在一些情形下，治疗剂及实质上疏水性酸可在乳化第二相之前形成疏水性离子对。在其它实施方案中，治疗剂及实质上疏水性酸可在乳化第二相期间形成疏水性离子对。举例而言，可实质上与乳化第二相的同时使治疗剂及实质上疏水性酸组合于第二相中，举例而言，治疗剂及实质上疏水性酸可溶于单独溶液(例如，两种实质上不混溶溶液)中，然后在乳化期间进行组合。在另一实例中，治疗剂及实质上疏水性酸可溶于单独混溶溶液中，然后在乳化期间将其供给至第二相中。
可需要溶剂蒸发或稀释以完成溶剂萃取且固化颗粒。为更佳地控制萃取动力学及更具扩展性方法，可使用通过水性骤冷的溶剂稀释。举例而言，可将乳液在冷水中稀释至足以溶解所有有机溶剂以形成骤冷相的浓度。在一些实施方案中，可至少部分地在约5℃或更低的温度下实施骤冷。举例而言，用于骤冷的水可在低于室温的温度下(例如，约0℃至约10℃或约0℃至约5℃)。在某些实施方案中，任选择pH有利于将所述乳化相骤冷(例如，通过改良纳米颗粒的性质(例如，释放特征)或改良纳米颗粒参数(例如，药物载量)的骤冷液。可通过，例如，酸或碱滴定或通过适当选择缓冲液来调节骤冷液的pH。在一些实施方案中，可基于质子化碱性治疗剂的pKa和/或疏水性酸的pKa来选择骤冷液的pH。举例而言，在某些实施方案中，碱性治疗剂在离子化时可具有第一pKa，疏水性酸可具有第二pKa，且可使用pH等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的水溶液将所述乳化相骤冷。在一些实施方案中，所得骤冷相亦可具有等于介于第一pKa与第二pKa之间的pKa单位的pH。在一特定实施方案中，pH可等于在第一pKa与第二pKa之间约等距的pKa单位。
在某些实施方案中，HIP形成可发生于乳化期间或之后，例如，因精细乳液中的平衡条件。不期望受限于任何理论，据信，有机可溶性抗衡离子(即疏水性酸)可因HIP形成而促进治疗剂扩散至乳液纳米颗粒中。不期望受限于任何理论，HIP可在固化纳米颗粒之前保留于纳米颗粒中，此乃因HIP在纳米颗粒中的溶解度高于HIP在乳液水相和/或在骤冷液中的溶解度。举例而言，通过选择骤冷液pH介于碱性治疗剂的pKa与疏水性酸的pKa之间，可优化离子化治疗剂及疏水性酸的形成。然而，选择过高pH可往往导致疏水性酸扩散出纳米颗粒，而选择过低pH可往往导致治疗剂扩散出纳米颗粒。
在一些实施方案中，用于纳米颗粒制剂方法(例如，包括但不限于水相、乳化相、骤冷液及骤冷相)的水溶液的pH可独立地进行选择且其范围可为约1至约3、在一些实施方案中约2至约4、在一些实施方案中约3至约5、在一些实施方案中约4至约6、在一些实施方案中约5至约7、在一些实施方案中约6至约8、在一些实施方案中约7至约9及在一些实施方案中约8至约10。在某些实施方案中，用于纳米颗粒制剂方法的水溶液的pH范围可为约3至约4、在一些实施方案中约4至约5、在一些实施方案中约5至约6、在一些实施方案中约6至约7、在一些实施方案中约7至约8及在一些实施方案中约8至约9。
在一些实施方案中，用于纳米颗粒制剂方法(例如，包括但不限于水相、乳化相、骤冷液及骤冷相)的水溶液的pH可独立地进行选择且其范围可为1至3、在一些实施方案中2至4、在一些实施方案中3至5、在一些实施方案中4至6、在一些实施方案中5至7、在一些实施方案中6至8、在一些实施方案中7至9及在一些实施方案中8至10。在某些实施方案中，用于纳米颗粒制剂方法的水溶液的pH范围可为3至4、在一些实施方案中4至5、在一些实施方案中5至6、在一些实施方案中6至7、在一些实施方案中7至8及在一些实施方案中8至9。
在一些实施方案中，并非所有治疗剂在此阶段皆囊封于颗粒中，且向骤冷相中添加药物增溶剂以形成溶解相。药物增溶剂可为，例如，聚山梨酯80(TweenTM 80)、TweenTM20、聚乙烯基吡咯烷酮、环糊精、十二烷基硫酸钠、胆酸钠、二乙基亚硝胺、乙酸钠、脲、甘油、丙二醇、三缩四乙二醇、聚(乙)二醇、双(聚氧乙二醇)十二烷基醚、苯甲酸钠、水杨酸钠、聚氧乙烯(100)十八烷基醚及其组合。举例而言，可将TweenTM 80添加至骤冷纳米颗粒悬浮液中以溶解游离药物且防止形成药物晶体。在一些实施方案中，药物增溶剂与含有可质子化氮的治疗剂的比率为约200:1至约10:1或在一些实施方案中约100:1至约10:1。
在一些实施方案中，药物增溶剂与含有可质子化氮的治疗剂的比率为200:1至10:1或在一些实施方案中100:1至10:1。
可过滤溶解相以回收纳米颗粒。举例而言，可使用超滤膜浓缩纳米颗粒悬浮液且实质上消除有机溶剂、游离药物(即未囊封治疗剂)、药物增溶剂及其它处理助剂(表面活性剂)。可使用切向流过滤系统实施示例性过滤。举例而言，通过使用孔径适于截留纳米颗粒而容许溶质、胶束及有机溶剂通过的膜，可选择性分离纳米颗粒。可使用截留分子量介于约300kDa至约500kDa之间(约5nm至约25nm)的示例性膜。可使用截留分子量介于300kDa至500kDa(约5nm至25nm)的示例性膜。
可使用恒定体积方式来实施透析过滤，此意指可以与自悬浮液去除滤液相同的速率向进料悬浮液中添加透析滤液(冷去离子水，例如，约0℃至约5℃或0℃至约10℃)。在一些实施方案中，过滤可包括使用约0℃至约5℃或0℃至约10℃的第一温度的第一过滤及约20℃至约30℃或15℃至约35℃的第二温度。在一些实施方案中，过滤可包括处理约1至约30、在一些情形下约1至约15或在一些情形下1至约6透析体积。举例而言，过滤可包括在约0℃至约5℃下处理约1至约30或在一些情形下约1至约6透析体积及在约20℃至约30℃下处理至少一透析体积(例如，约1至约15、约1至约3或约1至约2透析体积)。在一些实施方案中，过滤包含在不同温度下处理不同透析体积。
在一些实施方案中，过滤可包括使用0℃至5℃或0℃至10℃的第一温度的第一过滤及20℃至30℃或15℃至35℃的第二温度。在一些实施方案中，过滤可包括处理1至30、在一些情形下1至15或在一些情形下1至6透析体积。举例而言，过滤可包括在0℃至5℃下处理1至30或在一些情形下1至6透析体积及在20℃至30℃下处理至少一透析体积(例如，1至15、1至3或1至2透析体积)。
在纯化及浓缩纳米颗粒悬浮液之后，可使颗粒通过一个、两个或更多个灭菌和/或深度过滤器(例如，使用约0.2μm深度预滤波器)。举例而言，灭菌过滤步骤可涉及使用过滤系列以受控速率过滤治疗性纳米颗粒。在一些实施方案中，过滤系列可包括深度过滤器及灭菌过滤器。
在制备纳米颗粒的另一个实施方案中，形成由治疗剂及聚合物(均聚物、共聚物及具有配体的共聚物)的混合物构成的有机相。将有机相与水相以大约1:5比率(油相:水相)混合，其中水相是由表面活性剂及一些溶解溶剂构成。通过在简单混合下或通过使用转子-定子均化器组合两种相来形成初级乳液。然后通过使用高压均化器使初级乳液形成精细乳液。然后通过在混合下添加至去离子水中来将精细乳液骤冷。在一些实施方案中，骤冷液:乳液比率可为约2:1至约40:1或在一些实施方案中约5:1至约15:1。在一些实施方案中，骤冷液:乳液比率大约为8.5:1。在一些实施方案中，骤冷液:乳液比率可为2:1至40:1或在一些实施方案中5:1至15:1。在一些实施方案中，骤冷液:乳液比率为8.5:1。然后将TweenTM(例如，TweenTM 80)的溶液添加至骤冷液中以达成总共大约2％TweenTM。此用于溶解游离、未囊封治疗剂。然后通过离心或超滤/透析过滤分离纳米颗粒。
应了解，用于制备制剂的聚合物、治疗剂及疏水性酸的量可与最终制剂不同。举例而言，一些治疗剂可不完全纳入纳米颗粒中，且例如，可过滤掉该游离治疗剂。举例而言，在一个实施方案中，可使用第一有机溶液(含有约11重量％理论载量的治疗剂且在第一有机溶液中含有约9％第一疏水性酸(例如，脂肪酸))、第二有机溶液(含有约89重量％聚合物(举例而言，聚合物可包括约2.5mol％缀合至聚合物的靶向部分及约97.5mol％PLA-PEG))及水溶液(含有约0.12％第二疏水性酸(例如，胆汁酸))来制备制剂，其得到，例如，包含约2重量％治疗剂、约97.5重量％聚合物(其中聚合物可包括约1.25mol％缀合至聚合物的靶向部分及约98.75mol％PLA-PEG)及约0.5％总疏水性酸的最终纳米颗粒。所述方法可提供适于给予个体的最终纳米颗粒，其包括约1重量％至约20重量％治疗剂，例如，约1、约2、约3、约4、约5、约8、约10或约15重量％治疗剂。
在另一个实施方案中，可使用第一有机溶液(含有11重量％理论载量的治疗剂且在第一有机溶液中含有9％第一疏水性酸(例如，脂肪酸))、第二有机溶液(含有89重量％聚合物(举例而言，聚合物可包括2.5mol％缀合至聚合物的靶向部分及97.5mol％PLA-PEG))及水溶液(含有0.12％第二疏水性酸(例如，胆汁酸))来制备制剂，其得到，例如，包含2重量％治疗剂、97.5重量％聚合物(其中聚合物可包括1.25mol％缀合至聚合物的靶向部分及98.75mol％PLA-PEG)及0.5％总疏水性酸的最终纳米颗粒。所述方法可提供适于给予个体的最终纳米颗粒，其包括1重量％至20重量％治疗剂，例如，1、2、3、4、5、8、10或15重量％治疗剂。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及双羟萘酸且治疗剂与双羟萘酸的重量比为约0.1:1、约0.5:1、约1:1、约1.1:1、约1.2:1、约1.3:1、约1.4:1、约1.5:1、约1.6:1、约1.7:1、约1.8:1、约1.9:1、约2:1、约2.5:1、约3:1、约3.5:1、约4:1、约4.5:1、约5:1、约5.5:1、约6:1、约6.5:1、约7:1、约7.5:1、约8:1、约8.5:1、约9:1、约9.5:1或约10:1。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含PLA-PEG(以16:5摩尔比)且治疗剂与PLA-PEG的重量比为约0.5:1、约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:15或约1:20。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、双羟萘酸(治疗剂对双羟萘酸的重量比率为约1.8:1)、PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:3)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比)为约44:1。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些所述实施方案中，所述增溶剂是聚氧乙烯(100)十八烷基醚。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及双羟萘酸且治疗剂对双羟萘酸的重量比率为0.1:1、0.5:1、1:1、1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1、6.5:1、7:1、7.5:1、8:1、8.5:1、9:1、9.5:1或10:1。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含PLA-PEG(以16:5摩尔比)且治疗剂与PLA-PEG的重量比为0.5:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:15或1:20。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、双羟萘酸(治疗剂对双羟萘酸的重量比率为1.8:1)、PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为1:3)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为44:1)。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些所述实施方案中，所述增溶剂是聚氧乙烯(100)十八烷基醚。
在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及油酸且治疗剂与油酸的重量比为约0.1:1、约0.5:1、约1:1、约1.1:1、约1.2:1、约1.3:1、约1.4:1、约1.5:1、约1.6:1、约1.7:1、约1.8:1、约1.9:1、约2:1、约2.5:1、约3:1、约3.5:1、约4:1、约4.5:1、约5:1、约5.5:1、约6:1、约6.5:1、约7:1、约7.5:1、约8:1、约8.5:1、约9:1、约9.5:1或约10:1。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含PLA-PEG(以16:5摩尔比)且治疗剂与PLA-PEG的重量比为约0.5:1、约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:11、约1:12、约1:13、约1:14、约1:15、约1:20、约1:25或约1:30。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、油酸(治疗剂与油酸的重量比为约6:1)、PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:7)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为约46:1)。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含胆酸。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些所述实施方案中，所述增溶剂是聚山梨酯80。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及油酸且治疗剂与油酸的重量比为0.1:1、0.5:1、1:1、1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1、6.5:1、7:1、7.5:1、8:1、8.5:1、9:1、9.5:1或10:1。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含PLA-PEG(以16:5摩尔比)且治疗剂与PLA-PEG的重量比为0.5:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:20、1:25或1:30。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒包含治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、油酸(治疗剂与油酸的重量比为6:1)、PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为1:7)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为46:1)。在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含胆酸。在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒进一步包含增溶剂。在某些所述实施方案中，所述增溶剂是聚山梨酯80。
在一些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒是通过以下方式制得的纳米颗粒：乳化包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸的第一有机相，由此形成乳化相；将所述乳化相骤冷，由此形成骤冷相；且过滤该骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
在其它实施方案中，所述治疗性纳米颗粒是通过以下方法制得的纳米颗粒：合并第一有机相与第一水溶液以形成第二相；乳化该第二相以形成乳化相，其中该乳化相包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸；将所述乳化相骤冷，由此形成骤冷相；且过滤该骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲，所述第一有机相包含有机溶剂(包含苄醇及乙酸乙酯且苄醇与乙酸乙酯的重量比为约1.25)中的治疗剂及双羟萘酸(治疗剂与双羟萘酸的重量比为约11:1)及PLA-PEG(以16:5摩尔比)(治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:3)，且所述第一水溶液包含以0.005:1的重量比溶于苄醇中的聚氧乙烯(100)十八烷基醚，且以约1:5的重量比合并所述第一有机相及所述第一水相以形成第二相并乳化由此形成的第二相，且使用0.1M pH 4.5的柠檬酸水溶液骤冷所述乳化相并浓缩所得产物。
治疗剂可包括替代形式，例如，其药学上可接受的盐形式、游离碱形式、水合物、异构体及前药。
在结合本发明化合物使用时，“有效量”是有效抑制个体中mTOR或PI3K的量。
本发明治疗剂展现mTOR抑制活性且因此自该治疗剂制得的治疗性纳米颗粒可用于抑制mTOR发挥一定作用的异常细胞生长。因此，本发明的治疗性纳米颗粒有效治疗与mTOR的异常细胞生长作用有关的病症，例如，再狭窄症、动脉粥样硬化、骨病症、关节炎、糖尿病性视网膜病变、牛皮癣、良性前列腺肥大、动脉粥样硬化、炎症、血管生成、免疫学病症、胰腺炎、肾病、癌症等。特定而言，本发明化合物拥有优异的癌细胞生长抑制效应且有效治疗癌症，优选所有类型的实体癌及恶性淋巴瘤，尤其白血病、皮肤癌、膀胱癌、乳癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、脑肿瘤、晚期肾细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病、恶性黑素瘤、软组织或骨肉瘤等。
本发明治疗剂展现PI3激酶抑制活性且因此自该治疗剂制得的治疗性纳米颗粒可用于抑制PI3激酶发挥一定作用的异常细胞生长。因此，本发明治疗剂有效治疗与PI3激酶的异常细胞生长作用有关的病症，例如，再狭窄症、动脉粥样硬化、骨病症、关节炎、糖尿病性视网膜病变、牛皮癣、良性前列腺肥大、动脉粥样硬化、炎症、血管生成、免疫学病症、胰腺炎、肾病、癌症等。特定而言，本发明的治疗性纳米颗粒拥有优异的癌细胞生长抑制效应且有效治疗癌症，优选所有类型的实体癌及恶性淋巴瘤，尤其白血病、皮肤癌、膀胱癌、乳癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、脑肿瘤、头颈癌(例如，下列区域的癌症：口腔、咽、喉、鼻旁窦及鼻腔或唾液腺)、晚期肾细胞癌、急性成淋巴细胞性白血病、恶性黑素瘤、软组织或骨肉瘤等。
所述治疗剂亦可用于治疗与PTEN缺陷有关的癌症。染色体10上缺失的磷酸酶及张力蛋白同系物(PTEN)是脂质及蛋白磷酸酶且通过去磷酸化丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸残基上的蛋白质底物而用作蛋白磷酸酶。PTEN亦通过去磷酸化磷酸肌醇3,4,5-三磷酸酯(PIP3)(磷酸肌醇-3-激酶(PI3-激酶)的关键信号传导组分)而用作脂质磷酸酶。PTEN是与细胞过程(包括介导MAP激酶信号传导路径、着丝粒维持)有关的已知肿瘤阻抑剂，且通过介导Rad51基因表现而与DNA修复路径有关。肿瘤阻抑剂在维持基因组稳定性中发挥作用，且所述肿瘤阻抑剂的功能损失已知会引起基因组不稳定性。基因不稳定性代表肿瘤阻抑剂损失的不可避免的后果。实际上，在大量PTEN缺陷癌症中发现频繁发生PTEN突变及基因不稳定性。同样，已知若干肿瘤细胞系是PTEN缺陷性的。同样，已知若干肿瘤细胞系是PTEN缺陷的。无PTEN的胚胎干细胞显示因应于电离辐射而展现DNA修复检查点缺陷，此使得累积具有DNA双链间隙及断裂的未修复染色体。另外机制研究公开，所观察G2检查点缺陷可源自检查点蛋白质CHK1的功能缺损(因缺乏PTEN)。PTEN缺陷直接升高AKT激酶活性，此会触发CHK1磷酸化。磷酸化CHK1发生泛素化，此会防止其进入细胞核中。掩蔽细胞质中的CHK1会损害其引发DNA修复检查点的正常功能。此外，PTEN缺陷细胞中的CHK1钝化使得DNA双链断裂发生累积。一大组原发性人类乳房癌中CHK1定位的检查显示，肿瘤细胞中CHK1的细胞质浓度有所增加且PTEN表现有所降低以及AKT磷酸化有所升高。另外，在具有低PTEN表现的人类乳房癌及来自Pten.sup.+/-小鼠的前列腺上皮内新生物形成中经常观察到非整倍性。所述体外及体内观察显示，PTEN缺陷涉及通过引起重要检查点蛋白质的功能障碍而引发致癌信号传导过程。细胞质可视为PTEN诱发其肿瘤阻抑功能的初级位点，且PTEN通过其磷酸酶活性阻断PI3-激酶路径的能力可视为PTEN阻抑癌发生的关键机制。尽管PTEN的细胞分布在不同组织中有所不同，但神经元、神经胶质瘤及甲状腺细胞、胰脏及皮肤中的内源性PTEN主要发现于核间隔中。愈来愈多的证据显示，恶性肿瘤可伴有PTEN自细胞核易位至细胞质。在广发多种的肿瘤中鉴别了PTEN钝化(通过突变、缺失或启动子超甲基化)。本发明的治疗剂可用于治疗与PTEN缺陷有关的癌症的方法中，所述癌症例如，子宫内膜癌、成胶质细胞瘤(多形性成胶质细胞瘤/间变性星形细胞瘤)、前列腺癌、肾癌、小细胞肺癌、脑膜瘤、头颈癌、甲状腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、乳癌、黑素瘤。
药物制剂
根据另一方面，本申请中所公开的纳米颗粒可与药学上可接受的载体组合形成药物组合物。本领域普通技术人员应了解，可基于如下文所描述的给予途径、靶组织位置、所递送药物、递送药物的时间过程等来选择载体。
可通过本领域中已知的任一方式(包括口服及肠胃外途径)将药物组合物给予患者或个体。本申请中所用的术语“患者”或“个体”可互换使用且是指人类以及非人类(包括，例如，哺乳动物、鸟、爬行动物、两栖动物及鱼)。举例而言，非人类可为哺乳动物(例如，啮齿类动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、灵长类动物或猪)。在某些实施方案中，期望肠胃外途径，因其避免与消化管中所发现的消化酶接触。根据该实施方案，可通过注射(例如，静脉内、皮下或肌内、腹膜腔内注射)、经直肠、经阴道、局部(通过粉剂、乳霜、软膏或滴剂)或通过吸入(通过喷雾剂)给予本发明组合物。
在一特定实施方案中，将纳米颗粒全身性(例如，通过IV输注或注射)给予有需要的个体。
可根据已知技术使用适宜分散或润湿剂及悬浮剂来制剂可注射制剂，例如，无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂亦可为无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如，呈1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受的媒介及溶剂尤其为水、林格氏液(U.S.P.)及等渗氯化钠溶液。此外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用包括合成甘油单酸酯或甘油二酸酯的任何温和的不挥发性油。此外，在可注射制剂中可使用诸如油酸等脂肪酸。在一个实施方案中，将发明性缀合物悬浮于包含1％(w/v)羧甲基纤维素钠及0.1％(v/v)TweenTM 80的载体流体中。例如，可通过以下方式来将可使注射制剂无菌：通过细菌截留过滤器过滤，或纳入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂(其可在使用之前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中)。
用于经口给予的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂及颗粒剂。在所述固体剂型中，经囊封或未囊封的缀合物与至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载体(例如，柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：(a)填充剂或扩充剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及硅酸，(b)黏合剂，例如，羧甲基酸纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶，(c)保湿剂，例如，甘油，(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠，(e)溶液阻滞剂，例如，石蜡，(f)吸收促进剂，例如，季铵化合物，(g)润湿剂，例如，鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯，(h)吸收剂，例如，高岭土及膨润土，及(i)润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂及丸剂的情形下，所述剂型亦可包含缓冲剂。
应了解，个体医师根据被治疗的患者来选择含有治疗剂的纳米颗粒的确切剂量，一般而言，调节剂量及给予以将有效量的治疗剂纳米颗粒提供至所治疗患者。如本申请中所使用，包含含有可质子化氮的治疗剂的纳米颗粒的“有效量”是指诱发期望生物反应所需的量。本领域技术人员应了解，含有治疗剂的纳米颗粒的有效量可取决于诸如以下等因素而有所变化：所期望的生物终点、拟递送药物、靶组织、给予途径等。举例而言，含有治疗剂的纳米颗粒的有效量可为产生肿瘤大小在期望时间段内减小期望量的量。可考虑的其它因素包括疾病况态的严重程度；所治疗患者的年龄、体重及性别；给予的饮食、时间及频率；药物组合；反应敏感性；及对疗法的耐受性/反应。
可以剂量单位形式配制纳米颗粒以便于给予且达成剂量均匀性。本申请中所使用的表达“剂量单位形式”是指适于被治疗的患者的纳米颗粒的物理离散单位。然而，应理解，组合物的总日剂量应由主治医师在合理医学判断的范围内确定。对于任何纳米颗粒而言，可最初在细胞培养分析中或在动物模型(通常为小鼠、兔、狗或猪)中估计治疗有效剂量。亦使用动物模型来实现期望给予浓度范围及途径。然后可使用所述信息来确定人类中的可用给予剂量及途径。可通过标准药物程序在细胞培养物或实验动物中确定纳米颗粒的治疗效能及毒性，例如，ED50(于50％群体中治疗有效的剂量)及LD50(致死50％群体的剂量)。毒性效应与治疗效应的剂量比率为治疗指数，且其可表示为比率LD50/ED50。展现较大治疗指数的药物组合物可用于一些实施方案中。在配制供人类使用的剂量范围中可使用自细胞培养分析及动物研究获得的数据。
在一个实施方案中，本申请中所公开的组合物可包括约10ppm或更少钯、约8ppm或更少钯或约6ppm或更少钯。举例而言，本申请提供包括具有聚合缀合物的纳米颗粒的组合物，其中该组合物具有小于约10ppm或更少钯。
在一个实施方案中，本申请中所公开的组合物可包括10ppm或更少钯、8ppm或更少钯或6ppm或更少钯。举例而言，本申请提供包括具有聚合缀合物的纳米颗粒的组合物，其中该组合物具有小于10ppm或更少钯。
在一些实施方案中，涵盖适于冷冻的组合物，其包括本申请中所公开的纳米颗粒及适于冷冻的溶液(例如，糖，例如，单糖、二糖或多糖，例如，蔗糖和/或海藻糖)，和/或将盐和/或环糊精溶液添加至纳米颗粒悬浮液中。糖(例如，蔗糖或海藻糖)可用作，例如，冷冻保护剂来防止颗粒在冷冻后聚集。举例而言，本申请提供包含多种所公开的纳米颗粒、蔗糖、离子卤化物及水的纳米颗粒制剂；其中纳米颗粒/蔗糖/水/离子卤化物为约3-40％/10-40％/20-95％/0.1-10％(w/w/w/w)或约5-10％/10-15％/80-90％/1-10％(w/w/w/w)。举例而言，该溶液可包括如本申请中所公开的纳米颗粒、约5重量％至约20重量％蔗糖及离子卤化物(例如，氯化钠，其浓度为约10-100mM)。在另一实例中，本申请提供包含多种所公开的纳米颗粒、海藻糖、环糊精及水的纳米颗粒制剂；其中纳米颗粒/海藻糖/水/环糊精为约3-40％/1-25％/20-95％/1-25％(w/w/w/w)或约5-10％/1-25％/80-90％/10-15％(w/w/w/w)。
在另一实例中，本申请提供包含多种所公开的纳米颗粒、蔗糖、离子卤化物及水的纳米颗粒制剂；其中纳米颗粒/蔗糖/水/离子卤化物为3-40％/10-40％/20-95％/0.1-10％(w/w/w/w)或5-10％/10-15％/80-90％/1-10％(w/w/w/w)。举例而言，该溶液可包括如本申请中所公开的纳米颗粒、5重量％至20重量％蔗糖及离子卤化物(例如，氯化钠，其浓度为10-100mM)。在另一实例中，本申请提供包含多种所公开的纳米颗粒、海藻糖、环糊精及水的纳米颗粒制剂；其中纳米颗粒/海藻糖/水/环糊精为3-40％/1-25％/20-95％/1-25％(w/w/w/w)或5-10％/1-25％/80-90％/10-15％(w/w/w/w)。
举例而言，所考虑的溶液可包括如本申请中所公开的纳米颗粒、约1重量％至约25重量％二糖(例如，海藻糖或蔗糖(例如，约5重量％至约25重量％海藻糖或蔗糖，例如，约10重量％海藻糖或蔗糖或约15重量％海藻糖或蔗糖，例如，约5重量％蔗糖))及环糊精(例如，β-环糊精，其浓度为约1重量％至约25重量％(例如，约5重量％至约20重量％、例如，10重量％或约20重量％或约15重量％至约20重量％环糊精))。所考虑的制剂可包括多种所公开的纳米颗粒(例如，具有PLA-PEG及治疗剂的纳米颗粒)及约2wt％至约15wt％(或约4wt％至约6wt％，例如，约5wt％)蔗糖及约5wt％至约20％(例如，约7wt％至约12wt％，例如，约10wt％)环糊精(例如，HPbCD)。
在另一实例中，所考虑的溶液可包括如本申请中所公开的纳米颗粒、1重量％至25重量％二糖(例如，海藻糖或蔗糖(例如，5重量％至25重量％海藻糖或蔗糖，例如，10重量％海藻糖或蔗糖，或15重量％海藻糖或蔗糖，例如，5重量％蔗糖))及环糊精(例如，β-环糊精，且浓度为1重量％至25重量％(例如，5重量％至20重量％，例如，10重量％或20重量％，或15重量％至20重量％环糊精))。所考虑的制剂可包括多种所公开的纳米颗粒(例如，具有PLA-PEG及治疗剂的纳米颗粒)及2wt％至15wt％(或4wt％至6wt％，例如，5wt％)蔗糖及5wt％至20wt％(例如，7wt％至12wt％，例如，10wt％)环糊精(例如，HPbCD)。
本公开内容部分地涉及冻干药物组合物，其在重构时具有最小量的大聚集物。所述大聚集物可具有约0.5μm或更大、约1μm或更大、约10μm或更大的大小，且可在重构溶液中是不期望的。可使用各种技术来测量聚集物大小，包括美国药典(U.S.Pharmacopeia，“USP”)<788>中所显示的那些，通过引用将其并入本申请。USP<788>中所概述的测试包括遮光颗粒计数测试、微观粒子计数测试、激光衍射及单粒子光学传感。在一个实施方案中，使用激光衍射和/或单粒子光学传感来测量给定样品中的粒径。
USP<788>通过遮光颗粒计数测试来描述用于采样悬浮液中的粒径的指南。对于小于或等于100mL的溶液而言，若所存在颗粒的平均数量不超过6000个/容器(其≥10μm)及600个/容器(其≥25μm)，则制剂与测试相吻合。
如USP<788>中所概述，微观粒子计数测试描述用于使用调节至100±10倍放大倍数且具有目镜测微计的双目显微镜来测定颗粒量的指南。目镜测微计是圆形直径方格，其由分成象限的圆组成且具有在以100倍放大倍数观测时指示10μm及25μm的黑色参考圆。在方格下方提供线性标度。目测计算参照10μm及25μm的颗粒数。对于小于或等于100mL的溶液而言，若所存在颗粒的平均数量不超过3000个/容器(其≥10μm)及300个/容器(其≥25μm)，则制剂与测试相吻合。
在一些实施方案中，所公开组合物的10mL含水样品在重构后包含小于600个颗粒/mL(其大小大于或等于10微米)和/或小于60个颗粒/mL(其大小大于或等于25微米)。
可使用动态光散射(DLS)来测量粒径，但其依赖于布朗运动，从而该技术不能检测一些较大颗粒。激光衍射依赖于颗粒与悬浮介质之间的折射率差。该技术能够检测在亚微米至毫米范围内的颗粒。可在纳米颗粒悬浮液中测定相对较小(例如，约1-5重量％)量的较大颗粒。单粒子光学传感(SPOS)使用稀悬浮液的遮光来计数约0.5μm的个体颗粒。通过知晓所测量样品的颗粒浓度，可计算聚集物的重量百分比或聚集物浓度(颗粒/mL)。
在冻干期间可因颗粒表面去水而形成聚集物。可通过在冻干之前于悬浮液中使用冻干保护剂(例如，二糖)来避免此去水。适宜二糖包括蔗糖、乳果糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖或纤维二糖和/或其混合物。其它所考虑的二糖包括曲二糖、黑曲霉糖、异麦芽糖、β,β-海藻糖、α,β-海藻糖、槐糖、二碳糖、龙胆二糖、松二糖、麦芽酮糖、帕拉金糖、龙胆二酮糖、甘露二糖、蜜二糖、车前二糖、芸香糖、芦丁糖及木二糖。在与起始悬浮液相比时，重构显示等效DLS大小分布。然而，激光衍射可检测一些重构溶液中>10μm大小的颗粒。另外，SPOS亦可以高于FDA指南的浓度检测>10μm大小颗粒(对于>10μm颗粒而言，104-105个颗粒/mL)。
在一些实施方案中，可使用一种或多种离子卤化物盐作为糖(例如，蔗糖、海藻糖或其混合物)的额外冻干保护剂。糖可包括二糖、单糖、三糖和/或多糖，且可包括其它赋形剂(例如，甘油和/或表面活性剂)。任选地，可包括环糊精作为额外冻干保护剂。可添加环糊精以代替离子卤化物盐。可替代的是，可除离子卤化物盐外添加环糊精。
适宜离子卤化物盐可包括氯化钠、氯化钙、氯化锌或其混合物。其它适宜离子卤化物盐包括氯化钾、氯化镁、氯化铵、溴化钠、溴化钙、溴化锌、溴化钾、溴化镁、溴化铵、碘化钠、碘化钙、碘化锌、碘化钾、碘化镁或碘化铵和/或其混合物。在一个实施方案中，可将约1重量％至约15重量％的蔗糖与离子卤化物盐一起使用。在一个实施方案中，可将1重量％至15重量％的蔗糖与离子卤化物盐一起使用。在一个实施方案中，冻干药物组合物可包含约10mM至约100mM的氯化钠。在一个实施方案中，冻干药物组合物可包含10mM至100mM的氯化钠。在另一个实施方案中，冻干药物组合物可包含约100mM至约500mM的二价离子氯化物盐(例如，氯化钙或氯化锌)。在另一个实施方案中，冻干药物组合物可包含100mM至500mM的二价离子氯化物盐(例如，氯化钙或氯化锌)。在又一实施方案中，拟冻干的悬浮液可进一步包含环糊精，举例而言，可使用约1重量％至约25重量％的环糊精。在又一实施方案中，拟冻干悬浮液可进一步包含环糊精，举例而言，可使用1重量％至25重量％的环糊精。
适宜环糊精可包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精或其混合物。预计用于本申请中所公开的组合物中的示例性环糊精包括羟丙基-β-环糊精(HPbCD)、羟乙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精、羧甲基乙基-β-环糊精、二乙基-β-环糊精、三-O-烷基--β-环糊精、糖基-β-环糊精及麦芽糖基-β-环糊精。在一个实施方案中，可将约1重量％至约25重量％的海藻糖(例如，约10重量％至约15重量％，例如，5重量％至约20重量％)与环糊精一起使用。在一个实施方案中，冻干药物组合物可包含约1重量％至约25重量％的β-环糊精。示例性组合物可包含含有PLA-PEG、活性/治疗剂、约4wt％至约6wt％(例如，约5wt％)蔗糖及约8重量％至约12重量％(例如，约10wt％)HPbCD的纳米颗粒。在一个实施方案中，可将1重量％至25重量％的海藻糖(例如，10重量％至15重量％，例如，5重量％至20重量％)与环糊精一起使用。在一个实施方案中，干药物组合物可包含1重量％至25重量％的β-环糊精。示例性组合物可包含含有PLA-PEG、活性/治疗剂、4wt％至6wt％(例如，5wt％)蔗糖及8重量％至12重量％(例如，10wt％)HPbCD的纳米颗粒。
一方面，提供包含所公开的纳米颗粒的冻干药物组合物，其中以约50mg/mL的纳米颗粒浓度于小于或约100mL含水介质中在重构冻干药物组合物后，适于肠胃外给予的重构组合物包含小于6000(例如，小于3000)个大于或等于10微米的微粒和/或小于600(例如，小于300)个大于或等于25微米的微粒。
可通过本领域普通技术人员已知的方式(例如，描述于USP<788>中)、通过遮光颗粒计数测试(例如，描述于USP<788>中)、通过微观粒子计数测试、激光衍射及单粒子光学传感来测定微粒数。
一方面，提供包含多种治疗性颗粒的适于在重构后肠胃外使用的药物组合物，所述治疗性颗粒各自包含具有疏水性聚合物区段及亲水性聚合物区段的共聚物、治疗剂、糖及环糊精。
举例而言，共聚物可为聚(乳)酸-嵌段-聚(乙)二醇共聚物。在重构后，100mL含水样品可包含小于6000个大小大于或等于10微米的颗粒及小于600个大小大于或等于25微米的颗粒。
添加二糖及离子卤化物盐的步骤可包含添加约5重量％至约15重量％蔗糖或约5重量％至约20重量％海藻糖(例如，约10重量％至约20重量％海藻糖)及约10mM至约500mM离子卤化物盐。离子卤化物盐可选自氯化钠、氯化钙及氯化锌或其混合物。在一个实施方案中，亦添加约1重量％至约25重量％的环糊精。
在另一个实施方案中，添加二糖及离子卤化物盐的步骤可包含添加5重量％至15重量％蔗糖或5重量％至20重量％海藻糖(例如，10重量％至20重量％海藻糖)及10mM至500mM离子卤化物盐。在一个实施方案中，亦添加1重量％至25重量％的环糊精。
在另一个实施方案中，添加二糖及环糊精的步骤可包含添加约5重量％至约15重量％蔗糖或约5重量％至约20重量％海藻糖(例如，约10重量％至约20重量％海藻糖)及约1重量％至约25重量％环糊精。在一个实施方案中，添加约10重量％至约15重量％的环糊精。环糊精可选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精或其混合物。
在另一个实施方案中，添加二糖及环糊精的步骤可包含添加5重量％至15重量％蔗糖或5重量％至20重量％海藻糖(例如，10重量％至20重量％海藻糖)及1重量％至25重量％环糊精。在一个实施方案中，添加10重量％至15重量％的环糊精。
另一方面，提供防止药物纳米颗粒组合物中的颗粒发生实质性聚集的方法，其包括向冻干制剂中添加糖及盐以防止纳米颗粒在重构后发生聚集。在一个实施方案中，亦将环糊精添加至冻干制剂中。又另一方面，提供防止药物纳米颗粒组合物中的颗粒发生实质性聚集的方法，其包括向冻干制剂中添加糖及环糊精以防止纳米颗粒在重构后发生聚集。
所考虑的冻干组合物可具有大于约40mg/mL的治疗性颗粒浓度。适于肠胃外给予的制剂可在10mL剂量中具有小于约600个大小大于10微米的颗粒。冻干可包含在大于约-40℃或例如，小于约-30℃的温度下冷冻组合物，形成冷冻组合物；及干燥冷冻组合物以形成冻干组合物。干燥步骤可在约50毫托及约-25℃至约-34℃或约-30℃至约-34℃的温度下发生。
所考虑的冻干组合物可具有大于40mg/mL的治疗性颗粒浓度。适于肠胃外给予的制剂可在10mL剂量中具有小于600个大小大于10微米的颗粒。冻干可包含在大于-40℃或例如，小于-30℃的温度下冷冻组合物，形成冷冻组合物；及干燥冷冻组合物以形成冻干组合物。干燥步骤可在50毫托及-25℃至-34℃或-30℃至-34℃的温度下发生。
治疗方法
在一些实施方案中，靶向纳米颗粒可用于治疗目的。如本申请中所使用，术语“治疗(treat、treatment或treating)”意指缓解、改善、减轻疾病、病症和/或病况、延迟其发作、抑制其进展、减小其严重程度和/或减少一种或多种症状或特征的发生。在一些实施方案中，可使用靶向纳米颗粒治疗实体肿瘤，例如，癌症和/或癌细胞。在某些实施方案中，可使用靶向纳米颗粒或包含纳米颗粒的药物组合物治疗前列腺特异性膜抗原(PSMA)表现于癌细胞表面上或有需要的个体的肿瘤新血管系统(包括前列腺或非前列腺实体肿瘤的新血管系统)中的任一癌症。PSMA相关适应症的实例包括但不限于前列腺癌、乳癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌及成胶质细胞瘤。
在一些实施方案中，可使用靶向纳米颗粒或包含纳米颗粒的药物组合物制备用于缓解、改善、减轻疾病、病症和/或病况、延迟其发作、抑制其进展、减小其严重程度和/或减少一种或多种症状或特征的发生的药物。在一些实施方案中，可使用靶向纳米颗粒或包含纳米颗粒的药物组合物制备用于治疗前列腺特异性膜抗原(PSMA)表现于癌细胞表面上或有需要的个体的肿瘤新血管系统(包括前列腺或非前列腺实体肿瘤的新血管系统)中的任一癌症的药物。
术语“癌症”包括恶化前期以及恶性癌症。癌症包括但不限于血液癌(例如，慢性髓性白血病、慢性髓性单核细胞白血病、费城染色体阳性急性成淋巴细胞性白血病、外套细胞淋巴瘤)、前列腺癌、胃癌、结肠直肠癌、皮肤癌(例如，黑素瘤或基底细胞癌)、肺癌(例如，非小细胞肺)、乳癌、头颈癌、支气管癌、胰腺癌、膀胱癌、脑癌或中枢神经系统癌、周围神经系统癌、食管癌、口腔癌或咽癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、肾癌(例如，肾细胞癌)、睪丸癌、胆道癌、小肠癌或盲肠癌、胃肠道间质肿瘤、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、血液组织癌、头颈癌及诸如此类。“癌细胞”可呈肿瘤形式(即实体肿瘤)，单独存在于个体内(例如，白血病细胞)，或是源自癌症的细胞系。
癌症可与各种身体症状有关。癌症症状通常取决于肿瘤的类型及位置。举例而言，肺癌可引起咳嗽、呼吸短促及胸痛，而结肠癌通常引起腹泻、便秘及便血。然而，仅举几个实例，下列症状通常与许多癌症有关：发烧、寒冷、盗汗、咳嗽、呼吸困难、重量减轻、食欲缺乏、厌食、恶心、呕吐、腹泻、贫血、黄疸、肝大、咯血、疲劳、全身乏力、认知性功能障碍、抑郁、内分泌障碍、嗜中性白血球减少、疼痛、未愈疡、淋巴结肿大、周围神经病变及性功能障碍。
一方面，提供治疗癌症(例如，白血病)的方法。在一些实施方案中，所述癌症治疗包含以实现期望结果所需的量及时间向有需要的个体给予治疗有效量的本发明靶向颗粒。在某些实施方案中，本发明靶向颗粒的“治疗有效量”是有效治疗、缓解、改善、减轻癌症、延迟其发作、抑制其进展、减小其严重程度和/或减小一种或多种症状或特征的发生的量。
一方面，提供向患有癌症(例如，白血病)的个体给予本发明组合物的方法。在一些实施方案中，可以实现期望结果(即治疗癌症)所需的量及时间向个体给予颗粒。在某些实施方案中，本发明靶向颗粒的“治疗有效量”是有效治疗、缓解、改善、减轻癌症、延迟其发作、抑制其进展、减小其严重程度和/或减小一种或多种症状或特征的发生的量。
发明性治疗方案涉及将治疗有效量的本发明靶向颗粒给予健康个体(即不显示任何癌症症状和/或并未诊断有癌症的个体)。举例而言，可在癌症发生和/或癌症症状发作之前使用本发明靶向颗粒对健康个体“实施免疫”；可与癌症症状发作实质上同时(例如，在48小时内、24小时内或12小时内)治疗风险下个体(例如，具有癌症家族史的患者；携载一种或多种与癌症发生有关的基因突变的患者；具有与癌症发生有关的基因多态性的患者；感染与癌症发生有关的病毒的患者；具有与癌症发生有关的习惯和/或生活方式的患者；等)。当然，已知患有癌症的个体可在任一时间接受本发明治疗。
在其它实施方案中，可使用所公开的纳米颗粒抑制癌细胞(例如，骨髓性白血病癌细胞)的生长。如本申请中所使用，术语“抑制癌细胞生长”是指减缓癌细胞增殖和/或迁移速率、阻止癌细胞增殖和/或迁移或杀灭癌细胞中的任一者，从而癌细胞生长速率小于未处理对照癌细胞中所观察或预测生长速率。术语“抑制生长”亦可是指减小癌细胞或肿瘤的大小或使其消失以及减小其转移可能。优选地，细胞层面上此抑制可减小患者癌症的大小、阻止生长、减小进攻性或预防或抑制转移。本领域技术人员可轻易地通过各种适宜标记中的任一者来确定癌细胞生长是否得以抑制。
可以，例如，通过在细胞周期的特定期中阻止癌细胞(例如，在细胞周期的G2/M期阻止)来证实癌细胞生长的抑制。亦可通过直接或间接测量癌细胞或肿瘤大小来证实癌细胞生长的抑制。在人类癌症患者中，所述测量通常使用熟知成像方法(例如，核磁共振成像、计算机化轴向断层扫描及X射线)进行。亦可以，例如，通过测定循环癌胚抗原、前列腺特异性抗原或其它与癌细胞生长相关的癌症特异性抗原的浓度来间接测定癌细胞生长。癌症生长的抑制亦通常与个体中延长的存活和/或增加的之健康及幸福感相关。
本申请中还提供的是向患者给予本申请中所公开的包括治疗剂的纳米颗粒的方法，其中在给予患者后，与给予单独药剂(即不以所公开的纳米颗粒形式)相比，所述纳米颗粒实质上减小分布体积和/或实质上减小游离Cmax。
在一些实施方案中，将治疗性纳米颗粒与选自由以下组成的组的化合物一起给予：拓扑异构酶I抑制剂、MEK 1/2抑制剂、HSP90抑制剂、丙卡巴肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、吉西他滨(gemcitabine)、卡培他滨(capecitabine)、胺甲喋呤(methotrexate)、紫杉醇(taxol)、紫杉德(taxotere)、巯嘌呤(mercaptopurine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、羟基脲(hydroxyurea)、阿糖胞苷(cytarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、亚硝基脲(nitrosourea)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、丝裂霉素(mitomycin)、达卡巴嗪、丙卡巴肼(procarbizine)、依托泊甙(etoposide)、替尼泊甙(teniposide)、喜树碱(campathecin)、博来霉素(bleomycin)、多柔比星(doxorubicin)、伊达比星(idarubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、更生霉素(dactinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、L-天门冬酰胺酶(L-asparaginase)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、多西紫杉醇(docetaxel)、紫杉酚(paclitaxel)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、左旋咪唑(levamisole)、伊立替康(irinotecan)、雌氮芥(estramustine)、依托泊甙、氮芥(nitrogen mustard)、BCNU、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、奥沙利铂(oxaliplatin)、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、贝伐单抗(bevacizumab)、六甲嘧胺(hexamethylmelamine)、托泊替坎(topotecan)、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)、除草霉素A(herbimycin A)、染料木黄酮(genistein)、伊斯塔丁(erbstatin)、羟嗪(hydroxyzine)、乙酸格拉默(glatiramer acetate)、干扰素β-1a、干扰素β-1b、那他珠单抗(natalizumab)及熏草菌素A(lavendustin A)；及药学上可接受的载体。
另一方面，提供如本申请中所述的用作个体中的药物的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供如本申请中所述的用于在个体中产生抗增殖效应的治疗性纳米颗粒。
再另一方面，提供如本申请中所述的用于在个体中作为抗侵袭剂来防范和/或治疗实体肿瘤疾病的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒用于预防或治疗个体的癌症的用途。
再另一方面，提供如本申请中所述的用于预防或治疗个体的癌症的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于预防或治疗个体的癌症的药物。
再另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒用于在个体中产生抗增殖效应的用途。
又另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于在个体中产生抗增殖效应的药物。
再另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于在个体中作为抗侵袭剂来防范和/或治疗实体肿瘤疾病的药物。
又另一方面，提供在需要治疗的个体中产生抗增殖效应的方法，其包括向该个体给予有效量的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
再另一方面，提供通过防范和/或治疗需要治疗的个体的实体肿瘤疾病来产生抗侵袭性效应的方法，其包括向该个体给予有效量的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
又另一方面，提供如本申请中所述的用于预防或治疗个体的实体肿瘤疾病的治疗性纳米颗粒。
再另一方面，提供如本申请中所述的治疗性纳米颗粒的用途，其用以制造用于预防或治疗个体的实体肿瘤疾病的药物。
又另一方面，提供预防或治疗需要治疗的个体的实体肿瘤疾病的方法，其包括向该个体给予有效量的如本申请中所述的治疗性纳米颗粒。
通过引用将2012年6月26日颁布且标题为“Drug Loaded PolymericNanoparticles and Methods of Making and Using Same”的美国专利第8,206,747号的全部内容并入本申请。
实施方案
本发明的一些实施方案如下：
1.一种治疗性纳米颗粒，其包含：
约0.05重量％至约30重量％的实质上疏水性酸；
约0.2重量％至约25重量％的治疗剂；其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位；及
约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及组合的聚合物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
2.如实施方案1的治疗性纳米颗粒，其中所述治疗剂的量为约0.2重量％至约20重量％。
3.如实施方案1或2的治疗性纳米颗粒，其包含：
1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲；
及PLA-PEG(以16:5摩尔比)，且1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲:PLA-PEG的重量比为约1:7。
4.如实施方案1或2的治疗性纳米颗粒，其包含：
1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲；
及PLA-PEG(以16:5摩尔比)，且1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲:PLA-PEG的重量比为约1:14。
5.如实施方案1或2的治疗性纳米颗粒，其包含：
1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲；
及PLA-PEG(以16:5摩尔比)，且1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲:PLA-PEG的重量比为约1:5。
6.一种治疗性纳米颗粒，其包含：
约0.2重量％至约25重量％的治疗剂；
实质上疏水性酸，其中该实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比为约0.25:1至约2:1且其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位；及
约50重量％至约99.75重量％的选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及组合的聚合物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10重量％至约30重量％的聚(乙)二醇，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
7.如实施方案6的治疗性纳米颗粒，其中所述治疗剂的量为约0.2重量％至约20重量％。
8.一种治疗性纳米颗粒，其包含：
实质上疏水性酸；
治疗剂；其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位；及
选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
9.一种治疗性纳米颗粒，其包含：
治疗剂；
实质上疏水性酸，其中该实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比为约0.25:1至约2:1且其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约1.0pKa单位；及
选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物，且其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
10.如实施方案6或9的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比为约0.5:1至约1.5:1。
11.如实施方案6或9的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比为约0.25:1至约1:1。
12.如实施方案6或9的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比为约0.75:1至约1.25:1。
13.如实施方案1至12中任一项的治疗性纳米颗粒，其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约2.0pKa单位。
14.如实施方案1至12中任一项的治疗性纳米颗粒，其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少约4.0pKa单位。
15.一种治疗性纳米颗粒，其包含：
包含疏水性酸及治疗剂的疏水性离子对；其中质子化治疗剂与所述疏水性酸的pKa之间的差为至少约1.0pKa单位或更大；及
约50重量％至约99.75重量％的二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物，其中该聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约15kDa至约20kDa聚(乳酸)的数均分子量及约4kDa至约6kDa聚(乙)二醇的数均分子量，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
16.如实施方案15的治疗性纳米颗粒，其中所述质子化治疗剂与所述疏水性酸的pKa之间的差为至少约2.0pKa单位。
17.如实施方案15的治疗性纳米颗粒，其中所述质子化治疗剂与所述疏水性酸的pKa之间的差为至少约4.0pKa单位。
18.如实施方案1至5、8或13至17中任一项的治疗性纳米颗粒，其包含约0.05重量％至约20重量％的所述疏水性酸。
19.如实施方案1至18中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸具有约2至约7的logP。
20.如实施方案1至18中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸具有约4至约8的logP。
21.如实施方案1至20中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸在水中具有约-1.0至约5.0的pKa。
22.如实施方案1至20中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸在水中具有约2.0至约5.0的pKa。
23.如实施方案1至22中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸与所述治疗剂在所述治疗性纳米颗粒中形成疏水性离子对。
24.如实施方案1至23中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是脂肪酸。
25.如实施方案24的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的饱和脂肪酸：己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一酸、二十二烷酸、二十三烷酸、木蜡酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、虫胶蜡酸、叶虱酸、三十四酸、三十五烷酸、三十六烷酸及其组合。
26.如实施方案24的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的ω-3脂肪酸：十六碳三烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十一碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸及其组合。
27.如实施方案24的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的ω-6脂肪酸：亚油酸、γ-亚麻酸、二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳二烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸、二十四碳四烯酸、二十四碳五烯酸及其组合。
28.如实施方案24的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的ω-9脂肪酸：油酸、二十烯酸、二十碳三烯酸、芥酸、神经酸及其组合。
29.如实施方案28的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是油酸。
30.如实施方案29的治疗性纳米颗粒，其中1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与油酸的重量比为约6:1。
31.如实施方案24的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的多不饱和脂肪酸：瘤胃酸、α-十八碳三烯酸、β-十八碳三烯酸、兰花酸、α-桐酸、β-桐酸、梓树酸、石榴酸、茹米烯酸、α-帕里拉油酸、β-帕里拉油酸、十八碳五烯酸、皮诺敛酸、罗汉松酸及其组合。
32.如实施方案1至24中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是胆汁酸。
33.如实施方案32的治疗性纳米颗粒，其中所述胆汁酸选自由以下酸组成的组：鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸、猪胆酸、β-鼠胆酸、胆酸、石胆酸、氨基酸缀合的胆汁酸及其组合。
34.如实施方案33的治疗性纳米颗粒，其中所述胆汁酸是胆酸。
35.如实施方案33的治疗性纳米颗粒，其中所述氨基酸缀合的胆汁酸是甘氨酸缀合的胆汁酸或牛磺酸缀合的胆汁酸。
36.如实施方案1至23中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸选自由以下酸组成的组：磺基琥珀酸二辛酸、1-羟基-2-萘甲酸、十二烷基硫酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、双羟萘酸、十一烷酸及其组合。
37.如实施方案36的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是双羟萘酸。
38.如实施方案37的治疗性纳米颗粒，其中1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与双羟萘酸的重量比为约1.8:1。
39.如实施方案1至38中任一项的治疗性纳米颗粒，其包含约1重量％至约20重量％的所述治疗剂。
40.如实施方案1至38中任一项的治疗性纳米颗粒，其包含约2重量％至约20重量％的所述治疗剂。
41.如实施方案1至38中任一项的治疗性纳米颗粒，其包含约4重量％至约20重量％的所述治疗剂。
42.如实施方案1至38中任一项的治疗性纳米颗粒，其包含约5重量％至约20重量％的所述治疗剂。
43.如实施方案1至38中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸具有介于约200Da与约800Da之间的分子量。
44.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时实质上保留所述治疗剂至少1分钟。
45.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时实质上立即释放小于约30％的所述治疗剂。
46.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约1小时释放约10％至约45％的所述治疗剂。
47.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约4小时释放约0.01％至约15％的所述治疗剂。
48.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约10小时释放约0.01％至约15％的所述治疗剂。
49.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约20小时释放约0.01％至约25％的所述治疗剂。
50.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约40小时释放约1％至约40％的所述治疗剂。
51.如实施方案1至43中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒具有与对照纳米颗粒的释放特征实质上相同的释放特征，所述对照纳米颗粒与该治疗性纳米颗粒实质上相同，只是它不含有脂肪酸或胆汁酸。
52.如实施方案1至51中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.6至约0.95的聚(乳)酸数均分子量分数。
53.如实施方案1至51中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.6至约0.8的聚(乳)酸数均分子量分数。
54.如实施方案1至51中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.75至约0.85的聚(乳)酸数均分子量分数。
55.如实施方案1至51中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约0.7至约0.9的聚(乳)酸数均分子量分数。
56.如实施方案1至55中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约10重量至约25重量％的聚(乙)二醇。
57.如实施方案1至55中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约10重量至约20重量％的聚(乙)二醇。
58.如实施方案1至55中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约15重量至约25重量％的聚(乙)二醇。
59.如实施方案1至55中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒包含约20重量至约30重量％的聚(乙)二醇。
60.如实施方案1至59中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物具有约15kDa至约20kDa聚(乳酸)的数均分子量及约4kDa至约6kDa聚(乙)二醇的数均分子量。
61.如实施方案1至60中任一项的治疗性纳米颗粒，其进一步包含约0.2重量至约30重量％的被靶向配体功能化的聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物。
62.如实施方案1至60中任一项的治疗性纳米颗粒，其进一步包含约0.2重量至约30重量％的被靶向配体功能化的聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。
63.如实施方案61或62的治疗性纳米颗粒，其中所述靶向配体共价结合至所述聚(乙)二醇。
64.如实施方案1至63中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是聚合物电解质。
65.如实施方案64的治疗性纳米颗粒，其中所述聚合物电解质选自由以下物质组成的组：聚(苯乙烯磺酸)、聚丙烯酸及聚甲基丙烯酸。
66.如实施方案1至65中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸是两种或更多种实质上疏水性酸的混合物。
67.如实施方案66的治疗性纳米颗粒，其包含两种实质上疏水性酸的混合物。
68.如实施方案67的治疗性纳米颗粒，其中所述两种实质上疏水性酸是油酸及胆酸。
69.如实施方案66的治疗性纳米颗粒，其包含三种实质上疏水性酸的混合物。
70.如实施方案66的治疗性纳米颗粒，其包含四种实质上疏水性酸的混合物。
71.如实施方案66的治疗性纳米颗粒，其包含五种实质上疏水性酸的混合物。
72.一种治疗性纳米颗粒，其由包括以下步骤的方法制得：
乳化包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸的第一有机相，因此形成乳化相；
将所述乳化相骤冷，因此形成骤冷相；及
过滤所述骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
73.如实施方案72的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是脂肪酸。
74.如实施方案73的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的饱和脂肪酸：己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一酸、二十二烷酸、二十三烷酸、木蜡酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、虫胶蜡酸、叶虱酸、三十四酸、三十五烷酸、三十六烷酸及其组合。
75.如实施方案73的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的ω-3脂肪酸：十六碳三烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十一碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸及其组合。
76.如实施方案73的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的ω-6脂肪酸：亚油酸、γ-亚麻酸、二十碳二烯酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳二烯酸、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸、二十四碳四烯酸、二十四碳五烯酸及其组合。
77.如实施方案73的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的ω-9脂肪酸：油酸、二十烯酸、二十碳三烯酸、芥酸、神经酸及其组合。
78.如实施方案77的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是油酸。
79.如实施方案73的治疗性纳米颗粒，其中所述脂肪酸是选自下组的多不饱和脂肪酸：瘤胃酸、α-十八碳三烯酸、β-十八碳三烯酸、兰花酸、α-桐酸、β-桐酸、梓树酸、石榴酸、茹米烯酸、α-帕里拉油酸、β-帕里拉油酸、十八碳五烯酸、皮诺敛酸、罗汉松酸及其组合。
80.如实施方案72的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是胆汁酸。
81.如实施方案80的治疗性纳米颗粒，其中所述胆汁酸选自由以下酸组成的组：鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸、猪胆酸、β-鼠胆酸、胆酸、石胆酸、氨基酸缀合的胆汁酸及其组合。
82.如实施方案81的治疗性纳米颗粒，其中所述胆汁酸是胆酸。
83.如实施方案81的治疗性纳米颗粒，其中所述氨基酸缀合的胆汁酸是甘氨酸缀合的胆汁酸或牛磺酸缀合的胆汁酸。
84.如实施方案72的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸选自由以下酸组成的组：磺基琥珀酸二辛酸、1-羟基-2-萘甲酸、十二烷基硫酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、双羟萘酸、十一烷酸及其组合。
85.如实施方案84的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸是双羟萘酸。
86.如实施方案72至85中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述疏水性酸具有介于约200Da与约800Da之间的分子量。
87.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时实质上保留所述治疗剂至少1分钟。
88.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时实质上立即释放小于约30％的所述治疗剂。
89.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约1小时释放约10％至约45％的所述治疗剂。
90.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约4小时释放约0.01％至约15％的所述治疗剂。
91.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约10小时释放约0.01％至约15％的所述治疗剂。
92.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约20小时释放约0.01％至约25％的所述治疗剂。
93.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒在37℃下置于磷酸盐缓冲溶液中时经约40小时释放约1％至约40％的所述治疗剂。
94.如实施方案72至86中任一项的治疗性纳米颗粒，其中该治疗性纳米颗粒具有与对照纳米颗粒的释放特征实质上相同的释放特征，所述对照纳米颗粒与该治疗性纳米颗粒实质上相同，只是它不含有脂肪酸或胆汁酸。
95.如实施方案72至94中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述第一聚合物是聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物。
96.如实施方案72至94中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述第一聚合物是聚(乳)酸-共-聚(乙醇)酸-聚(乙)二醇共聚物。
97.如实施方案72至96中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述实质上疏水性酸是两种或更多种实质上疏水性酸的混合物。
98.如实施方案97的治疗性纳米颗粒，其包含两种实质上疏水性酸的混合物。
99.如实施方案97的治疗性纳米颗粒，其包含三种实质上疏水性酸的混合物。
100.如实施方案97的治疗性纳米颗粒，其包含四种实质上疏水性酸的混合物。
101.如实施方案97的治疗性纳米颗粒，其包含五种实质上疏水性酸的混合物。
102.如实施方案1、5至95或97至101中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述聚合物是PLA-PEG且PLA-PEG的摩尔比为5:1。
103.一种治疗性纳米颗粒，其由包括以下步骤的方法制得：
合并第一有机相与第一水溶液以形成第二相；
乳化所述第二相以形成乳化相，其中该乳化相包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸；
将所述乳化相骤冷，因此形成骤冷相；及
过滤所述骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲，所述第一有机相在包含苄醇及乙酸乙酯且苄醇与乙酸乙酯的重量比为约1.25的有机溶剂中包含治疗剂与双羟萘酸的重量比为约11:1的治疗剂及双羟萘酸以及治疗剂与PLA-PEG的重量比为约1:3的PLA-PEG(以16:5摩尔比)，且所述第一水溶液包含以0.005:1的重量比溶于苄醇中的聚氧乙烯(100)十八烷基醚，且以约1:5的重量比合并所述第一有机相及所述第一水相以形成第二相并乳化因此形成的该第二相，且使用0.1M pH 4.5的柠檬酸水溶液骤冷该乳化相并浓缩所得产物。
104.一种1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐的治疗性纳米颗粒。
105.一种治疗性纳米颗粒，其包含治疗剂或其药学上可接受的盐及选自二嵌段聚(乳)酸-聚(乙)二醇共聚物或二嵌段聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙)二醇共聚物及其组合的聚合物，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
106.如实施方案1至71、104或105中任一项的治疗性纳米颗粒，其中另外存在靶向配体且其为PLA-PEG-GL，其中GL具有下列结构：
Figure BDA0001114226930001031
107.如实施方案1至71或104至106中任一项的治疗性纳米颗粒，其进一步包含增溶剂。
108.如实施方案107的治疗性纳米颗粒根据，其中该增溶剂聚山梨酯80。
109.如实施方案107的治疗性纳米颗粒，其中所述增溶剂是聚氧乙烯(100)十八烷基醚。
110.如实施方案1至109中任一项的治疗性纳米颗粒，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲。
111.一种药物组合物，其包含如实施方案1至110中任一项的治疗性纳米颗粒及药学上可接受的赋形剂。
112.如实施方案111的药物组合物，其包含多种治疗性纳米颗粒。
113.如实施方案111或112的药物组合物，其进一步包含糖。
114.如实施方案111至113中任一项的药物组合物，其进一步包含环糊精。
115.如实施方案113或114的药物组合物，其中所述糖是选自下组的二糖：蔗糖、海藻糖及其混合物。
116.一种治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向该个体给予治疗有效量的如实施方案1至110中任一项的治疗性纳米颗粒或如实施方案111至115中任一项的药物组合物。
117.如实施方案116的方法，其中所述癌症是慢性髓性白血病。
118.如实施方案116的方法，其中所述癌症是胃肠道间质肿瘤。
119.如实施方案116的方法，其中所述癌症选自由以下癌症组成的组：慢性髓性单核细胞白血病、嗜伊红细胞增多综合征、肾细胞癌、肝细胞癌、费城染色体阳性急性成淋巴细胞性白血病(Philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia)、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳癌、实体肿瘤、头颈癌及外套细胞淋巴瘤。
120.如实施方案119的方法，其中所述癌症是乳癌。
121.一种制备所述治疗性纳米颗粒的方法，其包括以下步骤：
合并第一有机相与第一水溶液以形成第二相；
乳化所述第二相以形成乳化相，其中该乳化相包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸；
将所述乳化相骤冷，因此形成骤冷相；及
过滤所述骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
122.如实施方案121的方法，其进一步包括在乳化所述第二相之前在该第二相中合并所述治疗剂及所述实质上疏水性酸。
123.如实施方案122的方法，其中所述治疗剂及所述实质上疏水性酸在乳化所述第二相之前形成疏水性离子对。
124.如实施方案122的方法，其中所述治疗剂及所述实质上疏水性酸在乳化所述第二相期间形成疏水性离子对。
125.如实施方案121的方法，其进一步包括在实质上与乳化所述第二相的同时在该第二相中合并所述治疗剂及所述实质上疏水性酸。
126.如实施方案125的方法，其中所述第一有机相包含所述治疗剂且所述第一水溶液包含所述实质上疏水性酸。
127.如实施方案121至126中任一项的方法，其中所述治疗剂在离子化时具有第一pKa，所述实质上疏水性酸具有第二pKa，且使用pH等于介于所述第一pKa与所述第二pKa之间的pKa单位的水溶液将所述乳化相骤冷。
128.如实施方案127的方法，其中所述骤冷相具有等于介于所述第一pKa与所述第二pKa之间的pKa单位的pH。
129.如实施方案121至128中任一项的方法，其中所述治疗剂在离子化时具有第一pKa，所述实质上疏水性酸具有第二pKa，且所述第一水溶液具有等于介于所述第一pKa与所述第二pKa之间的pKa单位的pH。
130.如实施方案127至129中任一项的方法，其中所述pH等于所述第一pKa与所述第二pKa之间大约等距离的pKa单位。
131.如实施方案121至130中任一项的方法，其中所述治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲。
实施例
现已大致描述了本发明，通过参照下列实施例将更易于理解，包括所述实施例仅用于举例说明某些方面及实施方案，不意欲以任何方式限制本发明。
实施例1-含有治疗剂的制剂A的制备
(a)有机相备料的制备：在混合下将苄醇(8932.5mg)溶于67.5mg RODI(反渗透去离子)水中。向溶液中添加治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(150mg)，且然后对其进行超声处理直至药物溶解为止。以16mol/5mol的比率向其中添加PLA-PEG-GL(19.2mg)及PLA-PEG(830.8mg)且涡旋直至溶解为止。
(b)水相备料的制备：在搅拌板上将胆酸钠(2.75g)溶于RODI水(955.5g)中。向胆酸钠/水溶液中添加苄醇(40g)且在搅拌板上搅拌混合物直至溶解为止。
(c)乳液的形成：水相与有机相的重量比为5:1。将重10g的有机相倾倒至50g在冰水浴中冷却的水相中，且使用手动均化器将混合物均质化15秒。使用压力计上设定于10485psi的压力使粗乳液进料穿过高压均化器1次以形成纳米乳液(精细乳液)。
(d)纳米颗粒的形成：将纳米乳液倾倒至600g冷RODI水(小于2℃)中同时在搅拌板上搅拌以形成骤冷相。(骤冷液与乳液的重量比为10:1)。在混合的同时向骤冷相中添加64.3克聚山梨酯80溶液(350克溶于650g RODI水中)。
(e)通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒：使用TFF利用300kDa Pall盒(2个膜)浓缩骤冷相以形成大约200mL的纳米颗粒浓缩液。使用大约20透析体积的冷RODI水在小于2℃下透析过滤纳米颗粒浓缩液。将经透析过滤的纳米颗粒浓缩液的体积减小至最小体积。
因此，此制剂含有1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲，以及聚合物PLA-PEG(以16:5摩尔比)和PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为约43:1)，且治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与聚合物的重量比为15:85。在此制剂中不存在抗衡离子或疏水性酸。如上文所描述如此形成的纳米颗粒的粒径为约116nm。
实施例2-含有治疗剂的制剂B的制备
(a)有机相备料的制备：将油酸(900mg)、三氟乙酸(TFA)(273mg)溶于苄醇(8827mg)中。将治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(120mg)与油酸/TFA/苄醇溶液混合且加热至80℃保持10分钟以溶解其中的治疗剂。一旦1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲溶解，立即将溶液冷却至室温。将此溶液与PLA-PEG(以16摩尔/5摩尔的比率，860mg)、PLA-PEG-GL(18.9mg)及乙酸乙酯(4549mg)的聚合物溶液充分混合以形成溶液。
(b)水相备料的制备：在搅拌板上将胆酸钠(4.5g)溶于RODI水(955.5g)中。向胆酸钠/水溶液中添加苄醇(40g)且在搅拌板上搅拌混合物直至溶解为止。
(c)乳液的形成：水相与有机相的重量比为5:1。将有机相倾倒至33.4g在冰水浴中冷却的水相中，且使用手动均化器将混合物均质化15秒。使用压力计上设定于10485psi的压力使粗乳液进料穿过高压均化器1次以形成纳米乳液(精细乳液)。
(d)纳米颗粒的形成：将纳米乳液倾倒至401.2g冷RODI水(小于2℃)中同时在搅拌板上搅拌以形成骤冷相。在混合的同时向骤冷相中添加51.4克聚山梨酯80溶液(350g溶于650g RODI水中)。
(e)通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒：使用TFF利用300kDa Pall盒(2个膜)浓缩骤冷相以形成大约200mL的纳米颗粒浓缩液。使用大约20透析体积的冷RODI水在小于2℃下透析过滤纳米颗粒浓缩液。将经透析过滤的纳米颗粒浓缩液的体积减小至最小体积。
因此，此制剂含有1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及聚合物PLA-PEG(以16:5摩尔比)以及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为约46:1)，且治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与聚合物的重量比为12:88。其含有3％三氟乙酸中的约5.7重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及约9重量％油酸。如上文所描述如此形成的纳米颗粒的粒径为约74nm。
实施例3-含有治疗剂的制剂C的制备
(a)有机相备料的制备：将三氟乙酸(1600mg)、苄醇(8827mg)及RODI水(1500mg)混合至一起且视需要加热以形成溶液。向此溶液中添加治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(1468.8mg)，且将所得混合物超声处理以形成溶液。一旦治疗剂溶解，立即将溶液冷却至室温。将此溶液添加至双羟萘酸(136.5mg)及DMSO(331.2mg)的溶液中。将此溶液与PLA-PEG(以16mol/5mol的比率，643.5mg)、PLA-PEG-GL(14.5mg)及乙酸乙酯(7200mg)的聚合物溶液充分混合。
(b)水相备料的制备：在搅拌下将表面活性剂Brij S 100(聚氧乙烯(100)十八烷基醚)(200mg)溶于苄醇(40.0g)中，且向其中添加冷RODI水(959.8g)并在冰上混合直至溶液澄清为止。在搅拌下将水相备料冷却至小于2℃。
(c)乳液的形成：水相与有机相的重量比为5:1。将有机相倾倒至50.07g在冰水浴中冷却的水相中，且使用手动均化器将混合物均质化15秒。使用压力计上设定于10485psi的压力使粗乳液进料穿过高压均化器1次以形成纳米乳液(精细乳液)。
(d)纳米颗粒的形成：将纳米乳液倾倒至冷冻至小于2℃的冷RODI水(1000g)的骤冷溶液中且在搅拌板上搅拌。在混合的同时向骤冷溶液中添加溶于RODI水(650g)中的聚山梨酯80(350g)的冷冻溶液(小于2℃)。
(e)通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒：使用TFF利用300kDa Pall盒(2个膜)浓缩骤冷相以形成大约200mL的纳米颗粒浓缩液。使用大约20透析体积的冷RODI水在小于2℃下透析过滤纳米颗粒浓缩液。将经透析过滤的纳米颗粒浓缩液的体积减小至最小体积。
因此，此制剂含有1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲，以及聚合物PLA-PEG(以16:5摩尔比)及PLA-PEG-GL(PLA-PEG与PLA-PEG-GL的重量比为约44:1)，且治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲与聚合物的重量比为22:64。其含有约60重量％的双羟萘酸对1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲。因此，该制剂含有约5重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及3.2重量％的双羟萘酸。如上文所描述因此形成的纳米颗粒的粒径为约92nm。
实施例4：含有治疗剂的制剂D
(a)有机备用溶液的制备：将苄醇中的经加热7wt％昔萘酸溶液与PLA-PEG(以16:5的摩尔比)以及乙酸乙酯组合，涡旋直至溶解为止。向其中添加治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲以制备15重量％的最终浓度。
(b)水相备料的制备：在搅拌下将胆酸钠(2.75g)溶于RODI水(955.5g)中。将苄醇(40g)添加至胆酸钠水溶液中且搅拌混合物直至溶解为止。
(c)乳液的形成：水相与有机相的重量比为5:1。将有机相倾倒至在冰水浴中冷却的水相中，且使用手动均化器将混合物均质化15秒。使用压力计上设定于10485psi的压力使粗乳液进料穿过高压均化器1次以形成纳米乳液(精细乳液)。
(d)纳米颗粒的形成：将纳米乳液倾倒至由冷RODI水(1000g)中且冷却至小于2℃的无水柠檬酸(19.2g)组成的骤冷缓冲溶液中，且使用10N氢氧化钠达到pH 4.5，且在搅拌板上搅拌所得溶液。在混合的同时向骤冷溶液中添加溶于RODI水(650g)中的聚山梨酯80(350g)的冷冻溶液(小于2℃)。
(e)根据实施例1的程序通过切向流过滤来浓缩纳米颗粒。
因此，此制剂含有抗衡离子昔萘酸。其含有1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲。如上文所描述因此形成的纳米颗粒的粒径为约109nm。
对比性实施例1对照溶液
(a)有机备用溶液的制备：将7.5wt％苄醇溶液(通过将苄醇溶于RODI水中制得)与PLA-PEG混合物(具有16:5的摩尔比)以及乙酸乙酯组合且涡旋直至溶解为止。
(b)水相备料的制备：在搅拌下将胆酸钠(2.75g)溶于RODI水(955.5g)中。将苄醇(40g)添加至胆酸钠/水溶液中且搅拌混合物直至溶解为止。
(c)乳液的形成：水相与有机相的重量比为5:1。将有机相倾倒至在冰水浴中冷却的水相中，且使用手动均化器将混合物均质化15秒。使用压力计上设定于10485psi的压力使粗乳液进料穿过高压均化器1次以形成纳米乳液(精细乳液)。
(d)纳米颗粒的形成：将纳米乳液倾倒至600g冷RODI水(小于2℃)中同时在搅拌板上搅拌以形成骤冷相。(骤冷液与乳液的重量比为10:1)。在混合的同时向骤冷相中添加64.3g聚山梨酯80溶液(350g溶于650g RODI水中)。
(e)通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒：使用TFF利用300kDa Pall盒(2个膜)浓缩骤冷相以形成大约200mL的纳米颗粒浓缩液。使用大约20透析体积的冷RODI水在小于2℃下透析过滤纳米颗粒浓缩液。将经透析过滤的纳米颗粒浓缩液的体积减小至最小体积。
对比性实施例2制剂B
(a)有机相备料的制备：将油酸(900mg)、三氟乙酸(TFA)(273mg)溶于苄醇(8827mg)中。将治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(120mg)与油酸/TFA/苄醇溶液混合且加热至80℃保持10分钟以溶解其中的治疗剂。一旦1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲溶解，将溶液冷却至室温。将此溶液与PLA-PEG(以16摩尔/5摩尔的比率，860mg)、PLA-PEG-GL(18.9mg)及乙酸乙酯(4549mg)的聚合物溶液充分混合以形成溶液。
(b)水相备料的制备：在搅拌板上将胆酸钠(4.5g)溶于RODI水(955.5g)中。向胆酸钠/水溶液中添加苄醇(40g)且在搅拌板上搅拌混合物直至溶解为止。
(c)乳液的形成：水相与有机相的重量比为5:1。将有机相倾倒至33.4g在冰水浴中冷却的水相中，且使用手动均化器将混合物均质化15秒。使用压力计上设定于10485psi的压力使粗乳液进料穿过高压均化器1次以形成纳米乳液(精细乳液)。
(d)纳米颗粒的形成：将纳米乳液倾倒至401.2g冷RODI水(小于2℃)中同时在搅拌板上搅拌以形成骤冷相。在混合的同时向骤冷相中添加51.4克聚山梨酯80溶液(350g溶于650g RODI水中)。
(e)通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒：使用TFF利用300kDa Pall盒(2个膜)浓缩骤冷相以形成大约200mL的纳米颗粒浓缩液。使用大约20透析体积的冷RODI水在小于2℃下透析过滤纳米颗粒浓缩液。将经透析过滤的纳米颗粒浓缩液的体积减小至最小体积。
因此，此制剂含有1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲及聚合物PLA-PEG(以约16:5摩尔比)且治疗剂与聚合物的重量比为约1:14.7。其含有约6.0重量％的1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲、约5.4％胆酸及约1.1重量％油酸。
实施例5：含有治疗剂的制剂E
重复实施例1的程序，只是不存在PLA-PEG-GL聚合物。使用19.2mg PLA-PEG(以16mol/5mol的比率)代替PLA-PEG-GL聚合物，从而所存在的PLA-PEG总量为850mg。
实施例6：含有治疗剂的制剂F
重复实施例2的程序，只是不存在PLA-PEG-GL聚合物。使用20mg PLA-PEG(以16mol/5mol的比率)代替PLA-PEG-GL聚合物，从而所存在的PLA-PEG总量为860mg。
实施例7：含有治疗剂的制剂F
重复实施例3的程序，只是不存在PLA-PEG-GL聚合物。使用14.5mg PLA-PEG(以16mol/5mol的比率)代替PLA-PEG-GL聚合物，从而所存在的PLA-PEG总量为658mg。
实施例8：制剂的释放特征
以足以递送200mg治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的规模且以>2.5mg/mL的浓度(制剂A＝25g，制剂B＝20g，制剂C＝10g)来制备每一制剂。使用30wt％蔗糖制备纳米颗粒悬浮液且以>11mg治疗剂等分样品装瓶。表1汇总了针对此研究制得的纳米颗粒的属性。
表1：制剂A、B、C的概述
Figure BDA0001114226930001121
Figure BDA0001114226930001131
三个批料满足粒径及治疗剂释放标准(90-150nm，在t>2h时释放<50％治疗剂)。除制剂A的纳米颗粒外，所述批料亦满足>5％的治疗剂载量标准。过去，制剂A的治疗剂载量一直在下限上或低于目标载量阈值，从而此结果并不令人意外。
图3显示每个批次的体外释放曲线。所用的体外释放方法使用离心系统测定这些纳米颗粒在37℃下的释放特征。将样品以264,000×g离心30分钟且分析上清液的治疗剂浓度。通过将上清液浓度与离心之前的总治疗剂浓度进行比较来测定累积释放百分比。
图3中的体外释放特征显示，每个制剂的治疗剂释放速率可量化地不同。图4描绘了治疗剂纳米颗粒在Wistar Han大鼠中的药物动力学。
方案如下：向具有留置颈静脉插管的雄性Wistar Han大鼠(大约6周龄；n＝4/组)经静脉内施用1mg/kg浓注的制剂A、B及C纳米颗粒或稀释于0.9％盐水中的制剂A、B及C纳米颗粒。在给药之后的不同时间，自颈静脉插管连续收集血液且通过LC-MS/MS量化治疗剂的血浆浓度。图4(a)显示纳米颗粒与游离治疗剂的药物动力学，而(b)显示省去了游离治疗剂的相同数据。
图4(a)显示，所测试的所有三种制剂A、B及C皆展现出较游离API实质上增加的血流中的保留时间。这对应于AUC及t1/2的增加值且汇总于表2中(TA＝治疗剂)。
表2：所测试的制剂A、B及C纳米颗粒的AUC总及t1/2数据概述。
Figure BDA0001114226930001132
Figure BDA0001114226930001141
实施例9：制剂C的释放特征
再次如实施例3中使用传统批次方法以2g及5g规模制备制剂C。使用50mM柠檬酸缓冲液(使用氢氧化钠滴定至pH 4.5以促进潜在离子配对)制备制剂C的额外2g批料。选择此pH是因为其介于双羟萘酸的pKa(约2.5)与1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的第一pKa(约6.7)之间。表3汇总了这些小规模批料的颗粒属性：
表3：使用pH 4.5 50mM柠檬酸缓冲液用于制剂C中的骤冷介质的效应。
批次 批号 治疗剂载量 大小(nm)
2g RODI骤冷液 237-34-1 4.48％ 101
5g RODI骤冷液 237-34-2 2.43％ 98
2g缓冲骤冷液 237-34-3 13.18％ 92
自2g批料至5g批料增加的乳化处理时间使得治疗剂载量发生实质性降低。然而，显示使用pH 4.5缓冲骤冷液使得治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的载量增加接近三倍。
使用体外释放方法且使用离心系统测定在37℃下自这些纳米颗粒的释放特征。将样品以264,000×g离心30分钟且分析上清液的治疗剂浓度。通过比较上清液浓度与离心之前的总治疗剂浓度来测定累积释放百分比。图5显示体外释放特征未受使用缓冲骤冷液影响。
实施例10：制剂C的颗粒属性的测定
使用100mM柠檬酸缓冲骤冷液(滴定至pH 4.5)制备两个10g批次的制剂C，其各自汇集五份2g批料以避免处理时间对治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲的药物载量的影响。表4汇总了这些批料的颗粒属性。
表4利用pH 4.5柠檬酸缓冲骤冷液的制剂C批料的颗粒属性。
Figure BDA0001114226930001151
BA＝苄醇 EA＝乙醇
如下进行进行体外释放特征分析；使用体外释放方法且使用离心系统测定在37℃下自这些纳米颗粒的释放特征。将样品以264,000×g离心30分钟且分析上清液的治疗剂浓度。通过比较上清液浓度与离心之前的总治疗剂浓度来测定累积释放百分比。结果显示于图6中。
由所述研究确定，在pH 4.5下实现了制剂C中的最大治疗剂载量。不希望受约束，据信这可归因于以下事实：在溶液的pH低于质子化治疗剂药物的pKa且高于酸性分子(双羟萘酸)的pKa时，会促进治疗剂与抗衡离子之间的离子配对。据信在最大分数的这两种物质处于其离子化状态时，此效应在理论上是最大的。
实施例11：MDAMB361异种移植物排定研究1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰 基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲纳米颗粒Q4D与Q8D
自Charles River实验室(Wilmington,MA)获得约6周龄的雌性SCID/bg小鼠。在清洁室条件下将动物维持于无菌滤盖笼中，所述笼具有固定且安装于HEPA过滤通气槽上的Alpha-Dri。动物接受可自由获得的无菌啮齿动物混合饲料及水。根据Institute forLaboratory Animal Research Guide for the Care and Use of Laboratory Animals且使用Pfizer Animal Care and Use Committee指南进行所有程序。
在肿瘤细胞接种之前三至四天，向动物植入0.36mg 60-d释放17β-雌二醇粒丸(Innovative Research of America)。使用50％基质胶(BD Biosciences,San Jose CA)补充在80-90％汇合下收获且存活率高于80-90％(NS)的MDA-MB-361细胞以促进肿瘤获取。将细胞(5×106，200μL)经皮下(S.C.)植入小鼠的后肋区域中并使其生长至指定大小，然后针对每一实验给予化合物。通过用电子卡尺测量测定肿瘤大小且肿瘤体积计算为其长度×宽度2×0.5的积。在肿瘤体积达到平均250mm3时，将小鼠随机化至治疗组(包括媒介对照组)中且以每四天一次(Q4D)或每八天一次(Q8D)方案以10mL/kg体积经静脉内(i.v.)注射相应药物。在每次注射时使用5或10mg/kg 1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或25mg/kg制剂B纳米颗粒治疗动物。
图7显示，每8天一次施用的制剂B纳米颗粒与每4天一次的给药具有类似功效且制剂B纳米颗粒可在临床中提供2周给药频率。
实施例12：MDAMB361肿瘤生长抑制及肿瘤生长延迟研究
自Charles River实验室(Wilmington,MA)获得约6周龄的雌性SCID/bg小鼠。在清洁室条件下将动物维持于无菌滤盖笼中，所述笼具有固定且安装于HEPA过滤通气槽上的Alpha-Dri。动物接受可自由获得的无菌啮齿动物混合饲料及水。根据Institute forLaboratory Animal Research Guide for the Care and Use of Laboratory Animals且使用Pfizer Animal Care and Use Committee指南进行所有程序。
在肿瘤细胞接种之前三至四天，向动物植入0.36mg 60-d释放17β-雌二醇颗粒(Innovative Research of America)。使用50％基质胶(BD Biosciences,San Jose CA)补充在80-90％汇合下收获且存活率高于80-90％(NS)的MDA-MB-361细胞以促进肿瘤获取。将细胞(5×106，200μL)经皮下(S.C.)植入小鼠的后肋区域中并使其生长至指定大小，然后针对每一实验给予化合物。通过用电子卡尺测量测定肿瘤大小且肿瘤体积计算为其长度×宽度2×0.5的积。在肿瘤体积达到平均250mm3时，将小鼠随机化至治疗组(包括媒介对照组)中且以每四天一次(Q4D)方案以10mL/kg体积经静脉内(i.v.)注射相应药物的4个剂量。在第4剂量后，另外监测动物的肿瘤生长延迟。在每次注射时使用10mg/kg 1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲；2、10或25mg/kg制剂A或B纳米颗粒，或10或25mg/kg制剂C纳米颗粒治疗动物。
图8A、8B及8C显示，制剂B纳米颗粒及制剂C纳米颗粒抑制肿瘤生长且较1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)及制剂A纳米颗粒具有改良功效。
实施例13：WM266-4模型肿瘤生长抑制研究
自Charles River实验室(Wilmington,MA)获得约8周龄的雌性nu/nu小鼠。在清洁室条件下将动物维持于无菌滤盖笼中，所述笼具有固定且安装于HEPA过滤通气槽上的Alpha-Dri。动物接受可自由获得的无菌啮齿动物混合饲料及水。根据Institute forLaboratory Animal Research Guide for the Care and Use of Laboratory Animals且使用Pfizer Animal Care and Use Committee指南进行所有程序。
使用50％基质胶(BD Biosciences,San Jose CA)补充在80-90％汇合下收获且存活率高于80-90％(NS)的WM266-4细胞以促进肿瘤获取。将细胞(2×106，200μL)经皮下(S.C.)植入小鼠的后肋区域中并使其生长至指定大小，然后针对每一实验给予化合物。通过用电子卡尺测量测定肿瘤大小且肿瘤体积计算为其长度×宽度2×0.5的积。在肿瘤体积达到平均400mm3时，将小鼠随机化至治疗组(包括媒介对照组)中且每天一次经口(QD)给予PF-0192513-00-0004(PD-901)和/或以每四天一次(Q4D)方案以10mL/kg体积经静脉内(i.v.)注射纳米颗粒药物B及C的4个剂量。给药及药物描述于图例中。在每次注射时使用10mg/kg 1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或者10、25或50mg/kg制剂B或C纳米颗粒治疗动物。
图9说明制剂C纳米颗粒所产生的耐受性及功效大于制剂B纳米颗粒或1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)。
实施例14：使用纳米颗粒的体内靶调节研究
进行体内靶调节研究以通过ELISA测定使用制剂A、B及C纳米颗粒进行治疗对S235/S236上的S6以及S473和T308上的AKT的磷酸化的效应。使用金属Martor及花岗石杵在液氮下将切割的新鲜肿瘤研磨成精细粉末。将肿瘤粉末储存于-80℃下直至制备用于ELISA分析的肿瘤裂解物为止。简言之，将肿瘤粉末的等分样品(50mg)置于预冷2mL玻璃martor管中，添加500μl冷裂解缓冲液[20mM Tris-HCl(pH 7.5)、150mM NaCl、1.0mM Na2EDTA、1mMEGTA、1％NP-40、1％脱氧胆酸钠、2.5mM焦磷酸钠、1mMβ-磷酸甘油、1mM Na3VO4、1μg/ml亮抑蛋白酶肽、1mM PMSF、1×蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合制剂]，将管埋入湿冰中，且通过使用组织均化器以速度6将样品均质化30秒。收集样品且速冻于干冰上并在湿冰上解冻。重复冷冻-解冻循环，然后将样品在冷藏艾芬道夫离心管(Eppendorf centrifuge)中以13,000rpm离心10分钟。收集上清液且再次离心。通过ELISA测定肿瘤裂解物中的总及磷酸化AKT(S473及T308)以及总及磷酸化S6蛋白质浓度。将自经治疗动物切割的肿瘤的磷酸化程度与在同一时间点自媒介治疗动物切割的肿瘤进行比较。
图8A、8B及8C显示，制剂B纳米颗粒及制剂C纳米颗粒抑制pS6且较1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)及制剂A纳米颗粒具有改良功效，且证实直到给药后第7天观察到持续靶调节作用。
实施例15：纳米颗粒治疗后葡萄糖及胰岛素水平的分析
葡萄糖：在小鼠或大鼠研究中，使用大约100μL血浆(使用EDTA作为抗凝血剂)基于如由Slein(Bergmeyer HU,Slein MW.编辑，Methods of Enzymatic Analysis.New York,NY:Academic Press；1974:1196-1201.)公开的酶分析法使用己糖激酶及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶来评价葡萄糖含量。使用
Figure BDA0001114226930001191
120 Glucose Hexokinase_3(GLUH_3)系统利用Automated Hematology分析仪(Siemens Healthcare Diagnostics公司，Tarrytown,NewYork)测量血浆葡萄糖。Advia Chemistyr Glucose Hexokinase_3(GLUH_3)分析法使用两组分试剂。将血浆样品添加至含有缓冲液、ATP及NAD的试剂1中。获取试剂1中的样品的吸光度读数且用于校正样品中的干扰物质。添加试剂2(缓冲液、ATP、NAD、己糖激酶及G6PD)，其引发葡萄糖转化且使得在340/410nm下产生吸光度。试剂1及试剂2之间的吸光度差与葡萄糖浓度成比例。
胰岛素：在小鼠或大鼠研究中，使用大约20μL血浆(使用EDTA作为抗凝血剂)来评价胰岛素含量。胰岛素分析法基于夹心式ELISA且使用自EMD Millipore公司(St.Charles,Missouri)获得的Rat/Mouse Insulin ELISA试剂盒。分析程序如下：1)将胰岛素分子自血浆样品捕获至涂覆有预滴定量单克隆小鼠抗大鼠胰岛素抗体的微量滴定板的孔中且使生物素化多克隆抗体结合至经捕获胰岛素上，2)自样品洗涤掉未结合的物质，3)使辣根过氧化物酶结合至固定生物素化抗体上，4)洗涤掉游离酶缀合物，及5)通过在底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺存在下监测辣根过氧化物酶活性来量化所述固定的抗体-酶缀合物。以分光光度法通过在450nm下增加的吸光度来测量酶活性，其与血浆样品中所捕获胰岛素的量成正比。通过由在使用已知浓度大鼠或小鼠胰岛素的参考标准品的相同分析法中生成的参考曲线进行内插法来计算血浆胰岛素浓度。
图10说明制剂B及C纳米颗粒较1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲(无载体的API)可具有改良的安全性特征。
等效方案
本领域技术人员仅使用常规实验即可识别或能够确定本申请中所述的本发明具体实施方案的许多等效方案。这类等效方案皆意欲被下文权利要求涵盖。

Claims (24)

1.一种治疗性纳米颗粒，其包含：
实质上疏水性酸；
治疗剂；其中质子化治疗剂的pKa比所述疏水性酸的pKa大至少1.0pKa单位；
聚合物，其选自二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物或二嵌段聚乳酸-共-乙醇酸-聚乙二醇共聚物及其组合；
其中所述的聚合物形成聚合物基质；
其中所述的实质上疏水性酸与所述的治疗剂形成疏水性离子对；
其中所述的疏水性离子对分散在整个所述的聚合物基质中；以及
其中所述的治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的治疗性纳米颗粒，其中所述的实质上疏水性酸与所述治疗剂的摩尔比为0.25:1至2:1。
3.权利要求2的治疗性纳米颗粒，其包含0.2重量％至25重量％的所述治疗剂和50重量％至99.75重量％的所述聚合物，且其中所述的治疗性纳米颗粒包含10重量％至30重量％的聚乙二醇。
4.权利要求1的治疗性纳米颗粒，其包含0.05重量％至30重量％的所述实质上疏水性酸；0.2重量％至25重量％的所述治疗剂；以及50重量％至99.75重量％的所述聚合物；其中所述的治疗性纳米颗粒包含10重量％至30重量％的聚乙二醇。
5.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其中所述的实质上疏水性酸是脂肪酸。
6.权利要求5的治疗性纳米颗粒，其中所述的脂肪酸是ω-9脂肪酸，其选自由如下各项组成的组：油酸、二十烯酸、二十碳三烯酸、芥酸、神经酸及其组合。
7.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其中所述的实质上疏水性酸是胆汁酸。
8.权利要求7的治疗性纳米颗粒，其中所述的胆汁酸选自由以下酸组成的组：脱氧胆酸、胆酸、氨基酸缀合的胆汁酸及其组合。
9.权利要求7的治疗性纳米颗粒，其中所述的胆汁酸选自由以下酸组成的组：鹅脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、猪胆酸、β-鼠胆酸、石胆酸及其组合。
10.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其中所述的实质上疏水性酸选自由以下酸组成的组：磺基琥珀酸二辛酸、1-羟基-2-萘甲酸、十二烷基硫酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、双羟萘酸、十一烷酸及其组合。
11.权利要求10的治疗性纳米颗粒，其中所述的实质上疏水性酸是双羟萘酸。
12.权利要求1的治疗性纳米颗粒，其包含：
实质上疏水性酸双羟萘酸；
治疗剂1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐；以及
聚合物，其选自二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物或二嵌段聚乳酸-共-乙醇酸-聚乙二醇共聚物及其组合；
其中双羟萘酸与所述治疗剂的摩尔比为0.25:1至2:1。
13.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其进一步包含0.2重量至30重量％的被靶向配体功能化的聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物。
14.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其中所述的实质上疏水性酸是两种实质上疏水性酸的混合物。
15.权利要求14的治疗性纳米颗粒，其中所述的两种实质上疏水性酸是油酸及胆酸。
16.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其中另外存在靶向配体且该靶向配体为PLA-PEG-GL，其中GL具有下列结构：
Figure FDA0002885116120000031
17.权利要求1至4中任意一项的治疗性纳米颗粒，其中该纳米颗粒包含1重量％至20重量％的所述治疗剂。
18.权利要求17的治疗性纳米颗粒，其中该纳米颗粒包含1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％或20重量％的所述治疗剂。
19.一种药物组合物，其包含权利要求1至18中任意一项的治疗性纳米颗粒以及药学上可接受的赋形剂。
20.权利要求1至18中任意一项的治疗性纳米颗粒或权利要求19的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
21.权利要求20的用途，其中所述的癌症选自由以下癌症组成的组：慢性髓性单核细胞白血病、嗜伊红细胞增多综合征、肾细胞癌、肝细胞癌、费城染色体阳性急性成淋巴细胞性白血病、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳癌、胃肠道间质肿瘤、头颈癌及外套细胞淋巴瘤。
22.权利要求20的用途，其中所述的癌症选自由慢性髓性白血病和实体肿瘤组成的组。
23.权利要求1至18中任意一项的治疗性纳米颗粒或权利要求19的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述的药物用于治疗子宫内膜癌、成胶质细胞瘤、前列腺癌、肾癌、小细胞肺癌、脑膜瘤、头颈癌、甲状腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、乳癌或黑素瘤。
24.一种制备权利要求1至18中任意一项所述的治疗性纳米颗粒的方法，其包括以下步骤：
合并第一有机相与第一水溶液以形成第二相；
乳化所述第二相以形成乳化相，其中该乳化相包含第一聚合物、治疗剂及实质上疏水性酸；
将所述乳化相骤冷，因此形成骤冷相；以及
过滤所述骤冷相以回收所述治疗性纳米颗粒，其中所述的治疗剂是1-(4-{[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]羰基}苯基)-3-[4-(4,6-二吗啉-4-基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲或其药学上可接受的盐。
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