CN109152744A

CN109152744A - 用于冻干治疗性颗粒的稳定制剂

Info

Publication number: CN109152744A
Application number: CN201780032134.3A
Authority: CN
Inventors: U·乔希; S·洛; Y-H·宋; J·特兰; G·特罗亚诺
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 2016-03-25
Filing date: 2017-03-16
Publication date: 2019-01-04
Also published as: KR20180115750A; US20190099374A1; BR112018068598A2; AU2017236659A1; MX2018011016A; WO2017163155A1; CA2961760A1; RU2018133578A; JP2019512516A; IL261459A; EP3432866A1; RU2018133578A3

Abstract

本发明整体上涉及包括聚合物纳米颗粒的冻干药物组合物，其在重构后具有低水平的大于0微米尺寸的颗粒。本发明的其他方面包括制备此类纳米颗粒的方法。

Description

用于冻干治疗性颗粒的稳定制剂

背景技术

向患者递送某些药物(例如靶向特定组织或细胞类型或者靶向特定病变组织而不是正常组织)或控制药物释放的系统长期以来被认为是有益的。

例如，包括活性药物且例如靶向特定组织或细胞类型或者靶向特定病变组织而不是正常组织的治疗剂可减少不需要治疗的体内组织中的药物量。当治疗诸如癌症的病症时这尤其重要，在此希望的是在不杀死周围非癌组织的情况下，将药物的细胞毒性剂量递送给癌细胞。进一步而言，这样的治疗剂可减少抗癌治疗中不期望的并且有时威胁生命的副作用。此外，这样的治疗剂可允许药物到达它们以其他方式不能到达的某些组织。

通过胃肠外注射纳米颗粒的重构悬浮液能够实现治疗性纳米颗粒的递送。在重构前将原始纳米颗粒悬浮液冻干，即冷冻干燥以便储存。冷冻干燥纳米颗粒悬浮液有可能产生在储存稳定性方面远胜于其相对应的冷冻悬浮液的供重构的产品。进一步，冷冻干燥可提供更方便的储存，不需要恒定的极低温度。然而，重构的冻干物必须具备与原始悬浮液相当或优于原始悬浮液的理化和性质属性。纳米颗粒悬浮液冻干的最具挑战性的方面在于重新分散成具有相同尺寸的颗粒而没有因为微团聚或未分散的颗粒产生少许微粒。

因此需要存在纳米颗粒治疗剂和制备这样的纳米颗粒的方法，其能够递送治疗水平的药物以治疗诸如癌症的疾病并具备更好的储存能力。

发明内容

本发明的一方面提供一种冻干药物组合物。冻干药物组合物包括聚合物纳米颗粒，其包括：聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物，以及治疗剂；糖醇；以及环糊精。

在某些实施方案中，聚合物纳米颗粒:糖醇:环糊精的重量比为：0.2-1.0:1.0:0.5-1.8；0.3-0.9:1.0:0.6-1.6；0.4-0.9:1.0:0.6-1.4；0.4-0.9:1.0:0.8-1.2；0.5-0.8:1.0:0.8-1.2；0.5-0.7:1.0:0.8-1.2；或0.5-0.7:1.0:0.9-1.1。在另外某些实施方案中，糖醇包括甘露醇；环糊精包括羟丙基β-环糊精；聚合物纳米颗粒包括大约5-20重量％的治疗剂。

在某些实施方案中，当预期的冻干药物组合物在含水介质中重构后，组合物包括约2至约12重量％的糖醇(例如甘露醇)；以及约2至约12重量％的环糊精(例如羟丙基β-环糊精)。在某些实施方案中，重构的组合物包括约6至约10重量％的糖醇。在某些实施方案中，重构的组合物包括约6至约9重量％的环糊精。在某些实施方案中，重构的组合物包括约6至约10(例如约6至约9；或约7至约8)重量％的所述糖醇(例如甘露醇)；约6至约9(例如约6至约8；或约7至约8)重量％的环糊精(例如羟丙基β-环糊精)；以及约10至约100mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒(例如约20至约90mg/mL；20至约80mg/mL；约30至约80mg/mL；约40至约80mg/mL；约40至约70mg/mL；约40至约60mg/mL；约40至约50mg/mL；约50至约60mg/mL；约40mg/mL；约45mg/mL；约50mg/mL；或约55mg/mL)。在某些实施方案中，组合物包括约7.5重量％的环糊精和约7.5重量％的糖醇。

在某些实施方案中，糖醇选自：甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇及其混合物。在某些实施方案中，糖醇为甘露醇。

在某些实施方案中，环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精及其混合物。在某些实施方案中，环糊精为羟丙基β-环糊精。

在某些实施方案中，重构的组合物包括约7.5重量％的羟丙基β-环糊精和约7.5重量％的甘露醇。

在某些实施方案中，聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乳酸部分具有约10kDa至约25kDa的重均分子量，且聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乙二醇部分具有约4至约6kDa的重均分子量。在某些实施方案中，聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乳酸部分具有约16kDa的重均分子量，且聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乙二醇部分具有约5kDa的重均分子量。

在某些实施方案中，预期的聚合物纳米颗粒具有约60nm至约140nm或约80nm至约120nm的直径。

在某些实施方案中，预期的聚合物纳米颗粒包括约3至约40重量％的治疗剂。

在某些实施方案中，预期的聚合物纳米颗粒还包括配体缀合的聚合物。

在某些实施方案中，治疗剂选自紫杉烷、埃博霉素、mTOR抑制剂、长春花生物碱、二萜衍生物及烷化剂。

在某些实施方案中，预期的组合物能够在约30至约120秒、或约40至约90秒内重构。

在某些实施方案中，当预期的冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于3000颗具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒。

在某些实施方案中，当预期的冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于300颗具有大于或等于25微米的尺寸的颗粒。

在某些实施方案中，当预期的冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于600颗具有大于或等于25微米的尺寸的颗粒和/或少于6000颗具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒。

在某些实施方案中，当预期的冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于0.05重量％的具有5至50微米的尺寸的颗粒。

在某些实施方案中，当预期的冻干药物组合物在少于或大约10mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括：40mg/mL或更高浓度的聚合物纳米颗粒，其包括聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和治疗剂；约6至约9重量％的甘露醇；以及约6至约9重量％的环糊精；其中，重构的冻干药物组合物包括少于600颗具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒。

在某些实施方案中，预期的冻干药物组合物相较于不含甘露醇的冻干组合物，在2.5天或更短时间内冻干。在某些实施方案中，本发明的冻干药物组合物相较于不含甘露醇的另一冻干组合物(例如包括蔗糖和HPbCD的冻干组合物)在短得多的周期时间内冻干。

本发明的另一方面提供冻干药剂(pharmaceutical dose)。冻干药剂包括聚合物纳米颗粒，所述聚合物纳米颗粒包括：聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和多西他赛，其中所述药剂包括约30-37mg或约33mg的多西他赛；甘露醇；以及羟丙基β-环糊精。

某些实施方案提供容器，所述容器包括约6mL至约7mL、或大约6.6mL的预期的冻干药剂。在某些实施中，当冻干药剂重构成13.2mL的重构药剂时，所述容器具有少于约454颗尺寸大于或等于10微米的颗粒/毫升重构药剂，和/或具有少于约45颗尺寸大于或等于10微米的颗粒/毫升重构药剂。

另一方面，本发明提供适合胃肠外给药的重构的冻干药物组合物。所述重构的冻干药物组合物包括在含水介质中的10-100mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒；其中所述聚合物纳米颗粒包括：聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和治疗剂；约6至约10重量％的甘露醇；以及约6至约9重量％的羟丙基β-环糊精。

在某些实施方案中，预期的重构的冻干药物组合物包括：每个具有少于或大约100mL所述组合物的样本容器，少于6000颗大于或等于10微米的微粒；以及少于600颗大于或等于25微米的微粒。

在某些实施方案中，预期的重构的冻干药物组合物包括：每毫升少于600颗大于或等于10微米的微粒；以及每毫升少于60颗大于或等于25微米的微粒。

在某些实施方案中，预期的重构的冻干药物组合物包括：每个具有少于或大约100mL所述组合物的样本容器，少于600颗大于或等于10微米的微粒；以及少于60颗大于或等于25微米的微粒。

在某些实施方案中，所述共聚物的聚乳酸部分具有约16kDa的重均分子量，且所述共聚物的聚乙二醇部分具有约5kDa的重均分子量。

在另一方面，本发明提供制备适合在重构后胃肠外给药的冻干药物组合物的方法。所述方法包括：提供包括聚合物纳米颗粒的制剂，其中聚合物纳米颗粒包括治疗剂和选自聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚合物；向所述制剂中添加羟丙基β-环糊精和甘露醇以形成预冻干含水制剂；以及将预冻干含水制剂冻干以形成冻干药物制剂。在某些实施方案中，预冻干含水制剂包括约6至约10(例如约6至约9、约6至约8、或约7至约8)重量％的甘露醇，约6至约9(例如约6至约8、或约7至约8)重量％的羟丙基β-环糊精，以及约10至约100mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒(例如约20至约90mg/mL、20至约80mg/mL、约30至约80mg/mL、约40至约80mg/mL、约40至约70mg/mL、约40至约60mg/mL、约40至约50mg/mL、约50至约60mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL或约55mg/mL)。在某些实施方案中，预冻干含水制剂包括约6至约9重量％的甘露醇，约6至约9重量％的羟丙基β-环糊精，以及约10至约100mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒(例如约20至约90mg/mL、20至约80mg/mL、约30至约80mg/mL、约40至约80mg/mL、约40至约70mg/mL、约40至约60mg/mL、约40至约50mg/mL、约50至约60mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL或约55mg/mL)。在某些实施方案中，预冻干含水制剂包括约6至约9重量％的甘露醇，约6至约9重量％的羟丙基β-环糊精，以及约30至约80mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒[例如约6至约9重量％的甘露醇，约6至约8重量％的羟丙基β-环糊精，以及约40至约70mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒；约6至约8重量％的甘露醇，约6至约8重量％的羟丙基β-环糊精，以及约40至约70mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒；或约7至约8重量％的甘露醇，约7至约8重量％的羟丙基β-环糊精，以及约40至约60mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒；或约7.5重量％的甘露醇，约7.5重量％的羟丙基β-环糊精，以及约40至约60mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒]。

在某些实施方案中，冻干预期的预冻干含水制剂包括约4.5天或更短时间、或约4天或更短时间、或约3天或更短时间、或约2.5天、或约60小时的冻干周期。

在某些实施方案中，冻干预期的预冻干含水制剂包括：将所述制剂装载于约4℃的冻干机中；首先将冻干机温度降至约-45℃且在约-45℃下保持约2小时；将冻干机温热至约-12℃且在约-12℃下保持约3小时；再次将冻干机温度降至约-45℃且在约-45℃下保持约2小时。

在某些实施方案中，冻干预期的预冻干含水制剂进一步包括在再次降温步骤后将冻干机温度升至约35℃。

在某些实施方案中，冻干机压力为大约250毫托。

在某些实施方案中，冻干预期的预冻干含水制剂包括：将所述制剂装载于约4℃的冻干机中；首先将冻干机温度降至比糖醇的玻璃化转变温度低至少约10℃；将冻干机温热至比糖醇的玻璃化转变温度高至少约10℃；以及再次将冻干机温度降至比糖醇的玻璃化转变温度低至少约10℃。

在某些实施方案中，冻干预期的预冻干含水制剂进一步包括将冻干机温度升至比预期的冻干药物组合物的冻干块崩塌温度高约1℃。

附图说明

图1为形成所公开的纳米颗粒的乳化工艺流程图。

图2A和2B示出了所公开的乳化工艺流程图。

图3描述了本文中公开的各种重构的纳米颗粒悬浮液的纳米颗粒尺寸(使用DLS测量)。

图4描述了本文中公开的各种重构的纳米颗粒悬浮液的微粒计数。

图5描述了本文中公开的各种重构的纳米颗粒悬浮液的微粒计数。

图6描述了本文中公开的各种重构的纳米颗粒悬浮液的纳米颗粒尺寸(使用DLS测量)。

图7描述了本文中公开的各种重构的纳米颗粒悬浮液的微粒计数。

图8描述了本文中公开的各种重构的纳米颗粒悬浮液的微粒计数。

图9描述了本文中公开的各种纳米颗粒悬浮液的多西他赛的体外释放。

图10描述了具有7.5％甘露醇和7.5％羟丙基-β-环糊精的纳米颗粒悬浮液的未退火差示扫描量热(DSC)性质。

图11描述了具有7.5％甘露醇和7.5％羟丙基-β-环糊精的纳米颗粒悬浮液的退火差示扫描量热(DSC)性质。

图12示出了根据一实施方案，对于一个冻干周期，与时间成函数关系的搁架温度和真空压力。

具体实施方式

本文描述了冻干聚合物纳米颗粒组合物，以及制备和使用这样的治疗组合物的方法。这样的组合物可由冻干组合物重构，且可包括最小限度的纳米颗粒和/或其他物质的大团聚体。因此，所公开的组合物可以适合胃肠外使用。

在某些实施方案中，有利地是，包括糖醇和环糊精的预期的制剂相比于现有技术的制剂能明显更快地冻干，同时基本上保持质量属性。在某些实施方案中，重构的冻干制剂相比于在不含糖醇和环糊精的情况下制备的制剂可呈现有利的性质，诸如(例如)最小限度的纳米颗粒微团聚和/或实质上相似的释放性质。

冻干药物组合物

在一些实施方案中，适合冷冻的组合物是可预期的，其可包括本文中公开的纳米颗粒以及适合冷冻的溶液。例如，在一些实施方案中，所述溶液可包括水、糖醇和环糊精。不希望受任何理论约束的情况下，据信所述糖醇可用作(例如)低温保护剂，所述环糊精可用作(例如)冻干保护剂。

在某些实施方案中，所述糖醇可以例如通过还原糖而衍生自单糖、双糖或多糖类。在一些实施方案中，所述糖醇可以选自：甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇及其混合物。

在一些实施方案中，可将所述糖醇以适合制备冻干组合物的任何浓度添加至纳米颗粒悬浮液中。例如，在某些情形下，所述糖醇在纳米颗粒悬浮液中的浓度可为约1至约15重量％，约1重量至约12重量％，约1至约10重量％，约1重量至约8重量％，约1至约6重量％，约1重量至约4重量％，约2至约12重量％，约2重量至约10重量％，约2至约8重量％，约2重量至约6重量％，约3至约12重量％，约3重量至约10重量％，约3至约8重量％，约3重量至约6重量％，约4至约12重量％，约4重量至约10重量％，约4至约8重量％，约4重量至约6重量％，约5至约15重量％，约5重量至约12重量％，约5至约10重量％，约5重量至约8重量％，约6至约15重量％，约6重量至约12重量％，约6至约10重量％，约6至约9重量％，约7至约15重量％，约7至约12重量％，约7至约10重量％，约7至约9重量％，约8至约15重量％，约8至约12重量％，约8至约10重量％，约9至约15重量％，约9至约12重量％，约10至约15重量％，或约10至约12重量％。在某些实施方案中，所述糖醇在纳米颗粒悬浮液中的浓度可为约7.5重量％。

在一些实施方案中，所述环糊精可包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精或其混合物。预期用于本文公开的组合物中的非限制性典型环糊精包括：羟丙基-β-环糊精(HPbCD)、羟乙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精、羧甲基乙基-β-环糊精、二乙基-β-环糊精、三-O-烷基-β-环糊精、糖基-β-环糊精以及麦芽糖基-β-环糊精。

在某些实施方案中，可将所述环糊精以适合制备冻干组合物的任何浓度添加至纳米颗粒悬浮液中。例如，在某些情形下，所述环糊精在纳米颗粒悬浮液中的浓度可在为约1至约15重量％，约1至约12重量％，约1至约10重量％，约1至约8重量％，约1至约6重量％，约1至约4重量％，约2至约12重量％，约2至约10重量％，约2至约8重量％，约2至约6重量％，约3至约12重量％，约3至约10重量％，约3至约8重量％，约3至约6重量％，约4至约12重量％，约4至约10重量％，约4至约8重量％，约4至约6重量％，约5至约15重量％，约5至约12重量％，约5至约10重量％，约5至约8重量％，约6至约15重量％，约6至约12重量％，约6至约10重量％，约6至约9重量％，约7至约15重量％，约7至约12重量％，约7至约10重量％，约7至约9重量％，约8至约15重量％，约8至约12重量％，约8至约10重量％，约9至约15重量％，约9至约12重量％，约10至约15重量％，或约10至约12重量％。在某些实施方案中，所述环糊精在纳米颗粒悬浮液中的浓度可为约7.5重量％。

本发明部分涉及冻干药物组合物，其在重构时具有最小量的大团聚体。这样的大团聚体可具有大于约0.5μm、大于约1μm或大于约10μm的尺寸，且在重构溶液中可能是不合需要的。可使用各种技术测量团聚体尺寸，包括美国药典32<788>处所示的技术，其通过援引并入本文。USP 32<788>中概述的试验包括遮光颗粒计数试验、微观颗粒计数试验、激光衍射以及单颗粒光学感测。在一实施方案中，使用激光衍射和/或单颗粒光学感测测量给定样品中的颗粒尺寸。

USP 32<788>处的遮光颗粒计数试验阐述了在悬浮液中取样颗粒尺寸的指导方针。对于少于或等于100mL的溶液，若每个容器存在的≥10μm的颗粒的平均数量不超过6000颗，且每个容器存在的≥25μm的颗粒的平均数量不超过600颗，则制备符合该试验。

如USP 32<788>中所述，微观颗粒计数试验阐述了使用具有目镜测微尺的双目镜显微镜测定颗粒数量的指导方针，所述双目镜显微镜调整至100±10x放大倍率。目镜测微尺为圆形直径标线，当在100×放大倍数下观察时，其由被表示10μm和25μm的黑色参考圆分成各象限的圆组成。在标线下方提供线性刻度。参照10μm和25μm肉眼清点颗粒数量。对于少于或等于100mL的溶液，若每个容器存在的≥10μm的颗粒的平均数量不超过3000颗，且每个容器存在的≥25μm的颗粒的平均数量不超过300颗，则制备符合该试验。

动态光散射(DLS)可用于测量颗粒尺寸，但其依赖于布朗运动，因此该技术不能检测一些较大的颗粒。激光衍射依赖于颗粒与悬浮介质之间的衍射指数差。该技术能够检测到亚微米至毫米级的颗粒。在纳米颗粒悬浮液中可测定相对少量(例如约1-5重量％)的较大颗粒。单颗粒光学感测(SPOS)使用稀释的悬浮液的遮光以计数约0.5μm的个体颗粒。通过知晓所测样品的颗粒浓度，可以计算出团聚体的重量百分比或团聚体浓度(颗粒/mL)。

重构显示出当与初始悬浮液相比相当的DLS尺寸分布。然而，在一些重构溶液中，激光衍射可检测尺寸>10μm的颗粒。此外，SPOS还可检测浓度高于FDA指导方针的浓度(对于>10μm的颗粒，10⁴-10⁵颗颗粒/mL)的尺寸>10μm的颗粒。

在一些实施方案中，在重构后，所公开的组合物的10mL含水样品包括每毫升少于600颗尺寸大于或等于10微米的颗粒；和/或每毫升少于60颗尺寸大于或等于25微米的颗粒。在一些实施方案中，在重构后，所公开的组合物的10mL含水样品包括每毫升少于500颗、每毫升少于400颗、每毫升少于300颗、每毫升少于200颗、每毫升少于100颗、每毫升少于80颗、每毫升少于60颗或每毫升少于40颗尺寸大于或等于10微米的颗粒。在某些实施方案中，在重构后，所公开的组合物的10mL含水样品包括每毫升少于50颗、每毫升少于40颗、每毫升少于30颗、每毫升少于20颗、每毫升少于10颗或每毫升少于5颗尺寸大于或等于25微米的颗粒。

一方面，本发明提供包括聚合物纳米颗粒的冻干药物组合物，其中，所述冻干药物组合物在少于或约13.2mL的含水介质中以约50mg/mL或约40mg/mL的纳米颗粒浓度重构后，适合胃肠外给药的重构的组合物包括少于6000颗、少于5000颗、少于4000颗、少于3000颗、少于2000颗、少于1500颗或少于1000颗大于或等于10微米的颗粒；和/或少于600颗、少于500颗、少于400颗、少于300颗或少于250颗大于或等于25微米的微粒。

所述重构组合物相较于不包括糖醇和/或环糊精的重构的组合物可具有最小限度的团聚。在一些实施方案中，所述重构的组合物可具有小于0.2的多分散指数。

在某些实施方案中，冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中的重构形成重构的冻干药物组合物，所述重构的冻干药物组合物包括小于0.05重量％的具有5至50微米的尺寸的颗粒。

在一些实施方案中，预期的冻干组合物可被快速重构，这例如在临床环境中在准备将组合物给药时是有利的。例如，在一些实施方案中，预期的冻干组合物可以在约30至约360秒、约30至约300秒、约30至约150秒、约30至约120秒、约40至约90秒或约60至约150秒内重构。

另一方面，本发明提供用于胃肠外给药的药学上可接受的制剂，其通过包括下列的方法制备：a)提供包括多个治疗颗粒的组合物，每一治疗颗粒包括具有疏水聚合物片段和亲水聚合物片段的共聚物；以及活性剂；b)向所述组合物中添加糖醇和环糊精；c)将所述组合物冻干以形成冻干组合物；d)重构所述冻干组合物以形成适合胃肠外给药的制剂。在一些实施方案中，这样的重构可以有利地通过简单手动混合几分钟完成。重构的产品属性(例如药物纯度和/或释放特征)与预冻干组合物(例如悬浮液)相比基本上没有改变。

在一些实施方案中，预期的冻干过程可以比不含糖醇(例如甘露醇)和/或环糊精的冻干过程更快地完成。例如，在某些实施方案中，预期的冻干过程可包括持续少于72小时的周期。例如，预期的冻干过程周期可为约12至约72小时长、约24至约72小时长、约36至约72小时长、或约48至约72小时长。在某些实施方案中，预期的冻干过程周期可为约60小时长。

在一些实施方案中，预期的冻干周期可包括例如时长、温度和/或压力可以不同的一系列阶段。在某些实施方案中，预期的冻干周期可包括以下阶段：(1)上架和冷冻，(2)初级干燥，以及(3)二级干燥和储存。

在一些实施方案中，上架和冷冻阶段可用于进行退火程序。不希望局限于任何理论的情况下，据信通过实行温度循环进行的退火程序改变材料的物理和/或化学性质。为了预期的制剂，在一些实施方案中，可使用退火以制备包括基本上结晶的糖醇的冷冻的纳米颗粒悬浮液。不希望局限于任何理论的情况下，据信通过在冷冻的纳米颗粒悬浮液的干燥期间产生更多的开放通道，基本上结晶的糖醇有助于去除水分。此外，在一些实施方案中，可使用退火程序以改变材料(例如糖醇)的临界温度，使得该材料在冻干期间在特定温度范围内不发生玻璃化转变。

例如使用差示扫描量热法可观察到玻璃化转变。然后可以设计退火程序以将材料(例如糖醇)转变成特定的固体状态。例如，在低于糖醇的玻璃化转变温度的第一温度下可冷冻液态的纳米颗粒悬浮液，接着通过将冷冻的纳米颗粒悬浮液升温到第二温度来退火，所述第二温度处于冷冻的纳米颗粒悬浮液的玻璃化转变温度与固体/液体转变温度之间。例如，第一温度可比糖醇的玻璃化转变温度低至少约5℃、至少约10℃、至少约15℃、或至少约20℃。在某些实施方案中，第二温度可比糖醇的玻璃化转变温度高至少约5℃、至少约10℃、至少约15℃、或至少约20℃。在一些实施方案中，在升高的第二温度之后，可将冷冻的纳米颗粒悬浮液的温度降至例如初始的第一温度或任何其他适合的温度。可将冷冻的纳米颗粒悬浮液独立地在第一温度和/或第二温度下和/或第三温度下保持一段时间，例如约1小时至约10小时，约1小时至约5小时，约1小时至约4小时，或约2小时至约5小时。在一实施方案中，可将冷冻的纳米颗粒悬浮液在第一温度下保持约2小时，在第二温度下保持约3小时，且在第三温度下保持约2小时。

在冷冻阶段之后，冻干周期行进到初级干燥阶段，其中冷冻的纳米颗粒悬浮液经受真空以促进升华。可选择其上持有冷冻的纳米颗粒悬浮液的搁架的温度和真空压力使得冷冻的纳米颗粒悬浮液在初级干燥阶段的初始升华段期间保持在需要的温度下。例如，在一些实施方案中，期望的是选择搁架温度和真空压力使得冷冻的纳米颗粒悬浮液的温度低于崩塌温度(即，冻干块开始失去其结构的温度，如通过例如冷冻干燥显微镜所测定的)。在一些实施方案中，在所述干燥阶段期间冷冻的纳米颗粒悬浮液的温度可比崩塌温度低至少约1℃、至少约2℃、至少约3℃、至少约4℃或至少约5℃。在一些实施方案中，在初级干燥阶段期间的真空压力可为约100毫托至约500毫托，约150毫托至约400毫托，或约200毫托至约300毫托。在一实施方案中，在初级干燥阶段期间的真空压力可为大约250毫托。在一些实施方案中，初级干燥阶段的长度可为约12小时至约96小时，约12小时至约72小时，或约24小时至约48小时。在一实施方案中，干燥时间可为约1.5天。

在一些实施方案中，二级干燥与储存阶段在冷冻阶段之后且其导致冻干组合物的形成。在某些实施方案中，在二级干燥阶段开始之前，已去除冷冻的纳米颗粒悬浮液中大约70％至大约90％重量的水。在一些实施方案中，可在比初级干燥更高的温度下进行二级干燥。例如，在一些实施方案中，二级干燥的温度可为约0℃至约40℃，约10℃至约40℃，约20℃至约40℃或在约30℃至约40℃。在一实施方案中，二级干燥的温度可为大约35℃。在某些实施方案中，二级干燥可在真空下，例如在与初级干燥大约相同的压力下进行。

在完成二级干燥后，可在真空下储存冻干组合物直至将其从冻干机移除。在一些实施方案中，冻干组合物可储存在比二级干燥低的温度下。在一些实施方案中，冻干组合物可储存在约0℃至约30℃，或约10℃至约30℃。在一实施方案中，冻干组合物可储存在约20℃、约250毫托真空下。

另一方面，本发明提供用于胃肠外给药的药学上可接受的制剂，其通过包括下列的方法制备：a)提供包括多个治疗颗粒的组合物，每一治疗颗粒包括具有疏水聚合物片段和亲水聚合物片段的共聚物；以及活性剂；b)向所述组合物中添加二糖和环糊精；c)将所述组合物冻干以形成冻干组合物；d)重构所述冻干组合物以形成适合胃肠外给药的制剂。在一些实施方案中，这样的重构可以有利地通过简单手动混合几分钟完成。重构的产品属性(例如药物纯度和/或释放特征)与预冻干组合物(例如悬浮液)相比基本上没有改变。

冻干的步骤可包括：在大于约-40℃的温度或例如小于约-30℃的温度下冷冻组合物，形成冷冻的组合物；以及干燥冷冻的组合物以形成冻干组合物。干燥步骤可在约50毫托下，在约-25至-34℃或约-30至约-34℃下进行。

另一方面，本发明提供防止药用纳米颗粒组合物中颗粒大量团聚的方法，其包括：添加糖醇和盐至冻干制剂中以防止纳米颗粒在重构后团聚。在一实施方案中，还向冻干制剂中添加环糊精。另一方面，本发明提供防止药用纳米颗粒组合物中颗粒大量团聚的方法，其包括：添加糖醇和环糊精至冻干制剂中以防止纳米颗粒在重构后团聚。

根据一个方面，本文公开的纳米颗粒可与药学上可接受的载体组合以形成药物组合物。本领域技术人员会明白，可根据下文所述的给药路径、目标组织位置、所递送的药物、递送药物的时程等来选择载体。

本发明的药物组合物可通过本技术中已知的任何方法(包括口服和胃肠外路径)给药。本文中所用术语“患者”是指人类和非人类，包括例如哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物和鱼类。例如，非人类可为哺乳动物(例如啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、灵长类动物或猪)。在某些实施方案中，胃肠外路径是理想的，因为其避免与在消化道中所发现的消化酶接触。根据这样的实施方案，本发明的组合物可通过注射(例如静脉、皮下或肌肉注射、腹膜内注射)、通过直肠、阴道、局部(如以粉末、乳膏、软膏或滴剂的形式)或通过吸入(如以喷剂的形式)给药。

在特定的实施方案中，将本发明的纳米颗粒全身性地(例如)经胃肠外或者通过静脉内输注或注射)给药于有此需要的个体。

在一些实施方案中，可使用约6mL至约7mL、或约6.6mL的溶液将预期的冻干药物组合物悬浮在容器中。在一些实施方案中，预期的冻干药物组合物的剂量可包括约25mg至约50mg的活性剂，约25mg至约40mg的活性剂，约30mg至约40mg的活性剂，约30mg至约37mg的活性剂或约33mg的活性剂。

纳米颗粒

一般而言，“纳米颗粒”是指具有少于1000nm(例如约10nm至约200nm)的直径的任何颗粒。所公开的治疗纳米颗粒可包括具有直径为约60至约200nm、约60至约190nm、或约70至约190nm、或约60至约180nm、或约70至约180nm、或约50nm至约200nm、或约60至约120nm，或约70至约120nm、或约80至约120nm、或约90至约120nm、或约100至约120nm、或约60至约130nm、或约70至约130nm、或约80至约130nm、或约90至约130nm、或约100至约130nm、或约110至约130nm、或约60至约140nm、或约70至140nm、或约80至约140nm、或约90至约140nm、或约100至约140nm、或约110至约140nm、或约60至约150nm、或约70至约150nm、或约80至约150nm、或约90至约150nm、或约100至约150nm、或约110至约150nm、或约120至约150nm的纳米颗粒。

本文公开的纳米颗粒包括一种、两种、三种或更多种生物相容性和/或可生物降解聚合物。例如，预期的纳米颗粒可包括：约35至约99.6重量％、在一些实施方案中约50至约99.6重量％、在一些实施方案中约50至约99.5重量％、在一些实施方案中约50至约99重量％、在一些实施方案中约50至约98重量％、在一些实施方案中约50至约97重量％、在一些实施方案中约50至约96重量％、在一些实施方案中约50至约95重量％、在一些实施方案中约50至约94重量％、在一些实施方案中约50至约93重量％、在一些实施方案中约50至约92重量％、在一些实施方案中约50至约91重量％、在一些实施方案中约50至约90重量％、在一些实施方案中约50至约85重量％，以及在一些实施方案中约50至约80重量％的一种或多种包括可生物降解聚合物和聚乙二醇(PEG)的嵌段共聚物，以及约0至约50重量％的可生物降解均聚物。

在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒可包括约0.2至约35重量％、约0.2至约30重量％、约0.2至约20重量％、约0.2至约10重量％、约0.2至约5重量％、约0.5至约5重量％、约0.75至约5重量％、约1至约5重量％、约2至约5重量％、约3至约5重量％、约1至约30重量％、约1至约20重量％、约2至约20重量％、约5至约20重量％、约1至约15重量％、约2至约15重量％、约3至约15重量％、约4至约15重量％、约5至约15重量％、约1至约10重量％、约2至约10重量％、约3至约10重量％、约4至约10重量％、约5至约10重量％、约10至约30重量％、或约15至约25重量％的活性剂。

在一组实施方案中，纳米颗粒可具有内部和表面，其中表面具有与内部不同的组成，即可以存在至少一种化合物，其存在于内部中但不存在于表面上(反之亦然)，且/或至少一种化合物以不同浓度存在于内部中和表面上。例如，在一实施方案中，诸如靶向部分的化合物可存在于颗粒的内部和表面二者，但在颗粒的表面上的浓度比在内部中的浓度高。尽管在一些情形下，在颗粒的内部中的浓度实质上非零，即在颗粒的内部中存在可检出量的化合物。

在一些情形下，颗粒的内部比颗粒的表面更疏水。例如，颗粒的内部相对于颗粒的表面较为疏水，且药物或其他有效负载可为疏水性的，且易于与颗粒的较为疏水的中心相结合。因此，药物或其他有效负载可包括在颗粒的内部之中，这可使其与颗粒周围的外部环境隔离(反之亦然)。例如，给药于个体的颗粒内包括的药物或其他有效负载会避开个体的身体，且身体也可与药物实质上隔离至少一段时间。

例如，本文所公开的是治疗性聚合物纳米颗粒，其包括第一非官能化聚合物；任选存在的第二非官能化聚合物；任选存在的包括靶向部分的官能化聚合物；以及治疗剂。在特定实施方案中，第一非官能化聚合物为PLA、PLGA、PEG或其共聚物，例如双嵌段共聚物PLA-PEG。例如，示例性纳米颗粒可具有密度为约0.065g/cm³或约0.01至约0.10g/cm³的PEG冠。

所公开的纳米颗粒例如在可含有糖醇和环糊精的溶液中，在室温或25℃下，可以稳定(例如基本上保留所有活性剂)至少约3天、约4天或至少约5天。

在一些实施方案中，预期的纳米颗粒可包括环糊精。适合的环糊精可包括α-环糊精、环糊精、环糊精或其混合物。预期可用于本文中公开的纳米颗粒中的示例性环糊精包括：羟丙基-β-环糊精(HPbCD)、羟乙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精、羧甲基乙基-β-环糊精、二乙基-β-环糊精、三-O-烷基-β-环糊精、糖基-β-环糊精以及麦芽糖基-β-环糊精。在一些实施方案中，环糊精可以共价连接到聚合物上。例如，在一些实施方案中，环糊精可以共价连接到壳聚糖上。

例如，在一些实施方案中，预期的纳米颗粒可包括约0.05至约35重量％的环糊精、在一些实施方案中约0.05至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约0.1至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约0.5至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约1至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约2至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约5至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约10至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约15至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约20至约30重量％的环糊精、在一些实施方案中约15至约25重量％的环糊精、在一些实施方案中约5至约25重量％的环糊精、在一些实施方案中约5至约20重量％的环糊精、在一些实施方案中约5至约15重量％的环糊精。

在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒还可包括脂肪醇，其可提高药物释放的速率。例如，所公开的纳米颗粒可包括C₈-C₃₀醇，诸如鲸蜡醇、辛醇、硬脂醇、花生醇、二十二烷醇或二十八烷醇(octasonal)。

纳米颗粒可具有控释性质，例如其能够将一定量的治疗剂在延长的时间段内(例如一天、一星期或更长时间)递送给患者，例如至患者的特定部位。

在一些实施方案中，所公开的纳米颗粒基本上立即释放(例如经大约1分钟至大约30分钟)少于约2％、少于约4％、少于约5％或少于约10％的活性剂，例如当置放于室温下和/或37℃下的磷酸盐缓冲溶液中时。

在另一实施方案中，所公开的纳米颗粒可经0.5小时或更长时间释放少于约40％、少于50％或少于60％、少于70％的活性剂，例如当置放于室温下和/或37℃下的磷酸盐缓冲溶液中时。在一实施方案中，所公开的纳米颗粒可经0.5小时释放少于约70％的治疗剂，例如当置放于37℃下的磷酸盐缓冲溶液中时。

在另一实施方案中，所公开的纳米颗粒可释放少于约20％、少于约30％、少于约40％、少于50％或甚至少于60％(或更多)，例如当置放于室温下或37℃下的磷酸盐缓冲溶液中1天或更长时间时。在一实施方案中，所公开的纳米颗粒可经2小时释放少于约60％的治疗剂，例如当置放于室温下的磷酸盐缓冲溶液中时。

在一些实施方案中，在向个体或患者给药所公开的纳米颗粒或包括所公开的纳米颗粒的组合物后，患者体内治疗剂的峰值血浆浓度(C_max)比单独给药(例如不是作为纳米颗粒的部分)的治疗剂的C_max实质上更高。

在另一实施方案中，当给药于个体时，所公开的包括治疗剂的纳米颗粒具有的治疗剂的t_max可比单独给药的治疗剂的t_max实质上更长。

也可形成这样的颗粒的库。例如，通过改变颗粒内两种(或更多种)聚合物的比例，这些库可用于筛选试验、高通量分析等。库内的实体可随诸如上述的性质而改变，且在某些情形下，颗粒的多于一种的性质在库内可改变。相应地，一个实施方案涉及具有不同比率的聚合物的不同性质的纳米颗粒的库。该库可包括任何适合比率的聚合物。

在一些实施方案中，生物相容性聚合物为疏水性聚合物。生物相容性聚合物的非限制性实例包括聚丙交酯、聚乙交酯和/或聚(丙交酯-共-乙交酯)。

聚合物

在一些实施方案中，本发明的纳米颗粒包括聚合物基质和治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂和/或靶向部分(即低分子量PSMA配体)可与至少部分聚合物基质结合。例如，在一些实施方案中，靶向部分(例如配体)可与聚合物基质的表面共价结合。在一些实施方案中，共价结合是通过接头介导的。治疗剂可与聚合物基质的表面结合、囊封在聚合物基质内、被聚合物基质包围和/或分散遍及整个聚合物基质。

各种聚合物及由其形成颗粒的方法在药物递送的领域中众所周知。在一些实施方案中，本发明涉及具有至少两种大分子的纳米颗粒，其中第一大分子包括连接到低分子量配体(例如靶向部分)的第一聚合物；以及第二大分子包括未连接到靶向部分的第二聚合物。所述纳米颗粒可任选地包括一种或多种另外的非官能化聚合物。

本文中所用术语“聚合物”具有其在本领域中的通常含义，即，包括通过共价键连接的一个或多个重复单元(单体)的分子结构。重复单元可以全部相同，或者在某些情形下，在聚合物中可存在多于一个类型的重复单元。在某些情形下，聚合物可以是生物衍生的，即生物聚合物。非限制性实例包括肽或蛋白。在某些情形下，聚合物中也可存在其他部分，例如生物部分，诸如下文所述的那些。若聚合物中存在多于一个类型的重复单元，则可以称该聚合物为“共聚物”。应明白，在采用聚合物的任何实施方案中，所采用的聚合物在某些情形下可以是共聚物。形成共聚物的重复单元可以任何方式排列。例如，重复单元可以随机顺序、交替顺序排列，或排列成嵌段共聚物，即包括：各自包括第一重复单元(例如第一嵌段)的一个或多个区域，以及各自包括第二重复单元(例如第二嵌段)的一个或多个区域，等等。嵌段共聚物可以具有两个(双嵌段共聚物)、三个(三嵌段共聚物)或更多数量的不同嵌段。

所公开的颗粒可包括共聚物，在某些实施方案中，其描述了两种或更多种聚合物(诸如本文中所述的那些)，这些聚合物一般通过所述两种或更多种聚合物的共价键而彼此结合在一起。因此，共聚物可包括第一聚合物和第二聚合物，其缀合在一起以形成嵌段共聚物，其中第一聚合物可以为嵌段共聚物的第一嵌段，且第二聚合物可以嵌段共聚物的第二嵌段。当然，本领域普通技术人员会明白，在某些情形下，嵌段共聚物可包括多个聚合物嵌段，且本文中所用的“嵌段共聚物”并不仅限于仅具有单一第一嵌段和单一第二嵌段的嵌段共聚物。例如，嵌段共聚物可包括包含第一聚合物的第一嵌段，包含第二聚合物的第二嵌段，以及包含第三聚合物或第一聚合物的第三嵌段，等等。在某些情形下，嵌段共聚物可包含任何数量的第一聚合物的第一嵌段和第二聚合物的第二嵌段(且在某些情形下，包含第三嵌段、第四嵌段，等等)。此外，应注意，在某些情形下，也可由其他嵌段共聚物形成嵌段共聚物。例如，第一嵌段共聚物可与另一聚合物(其可为均聚物、生物聚合物、另一嵌段共聚物，等等)缀合以形成包含多个类型的嵌段的新嵌段共聚物，和/或与其他部分(例如非聚合物部分)缀合。

在一些实施方案中，聚合物可以是聚酯，包括：包含乳酸和乙醇酸单元的共聚物，诸如聚(乳酸-共-乙醇酸)以及聚(丙交酯-共-乙交酯)，本文中统称为“PLGA”；以及包括乙醇酸单元的均聚物，本文称为“PGA”，以及包括乳酸单元的均聚物，诸如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚D,L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯以及聚-D,L-丙交酯，本文中统称为“PLA”。在一些实施方案中，示例性聚酯包括(例如)聚羟基酸；丙交酯和乙交酯的PEG化聚合物和共聚物(例如PEG化PLA、PEG化PGA、PEG化PLGA及其衍生物)。在一些实施方案中，聚酯包括(例如)聚酐、聚原酸酯、PEG化聚原酸酯、聚己内酯、PEG化聚己内酯、聚赖氨酸、PEG化聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、PEG化聚乙烯亚胺、聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚丝氨酸酯、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]及其衍生物。

在一些实施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是乳酸和乙醇酸的生物相容性和可生物降解共聚物，且各种形式的PLGA的特征在于乳酸:乙醇酸的比率。乳酸可为L-乳酸、D-乳酸或D,L-乳酸。通过改变乳酸-乙醇酸的比率可以调整PLGA的降解速率。在一些实施方案中，根据本发明使用的PLGA的特征可为约85:15、约75:25、约60:40、约50:50、约40:60、约25:75、或约15:85的乳酸:乙醇酸比率。在一些实施方案中，可选择颗粒的聚合物(例如PLGA嵌段共聚物或PLGA-PEG嵌段共聚物)中乳酸与乙醇酸单体的比率以使各种参数最佳化，诸如可最佳化水分吸收、治疗剂释放和/或聚合物降解动力学。

本文公开的颗粒可以包含或不含PEG。此外，某些实施方案可涉及包含聚(酯-醚)的共聚物，例如具有通过酯键(例如R-C(O)-O-R'键)和醚键(例如R-O-R'键)连接的重复单元的聚合物。在本发明的一些实施方案中，包含羧酸基团的可生物降解聚合物(诸如可水解聚合物)可与聚乙二醇重复单元缀合以形成聚(酯-醚)。包含聚乙二醇重复单元的聚合物(例如共聚物，诸如嵌段共聚物)也可称为“PEG化”聚合物。

可以预期的是，例如当PEG未与配体缀合时，PEG可以封端且包括端基。例如，PEG可以羟基、甲氧基或其他烷氧基、甲基或其他烷基、芳基、羧酸、胺、酰胺、乙酰基、胍基或咪唑封端。其他预期的端基包括叠氮基、炔基、马来酰亚胺、醛基、酰肼基、羟胺、烷氧基胺或硫醇部分。

本领域普通技术人员会明白PEG化聚合物的方法和技术，例如，通过使用EDC((l-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)使聚合物与胺封端的PEG基团反应，通过开环聚合技术(ROMO)，等等。

所公开的颗粒可包括(例如)PEG和PL(G)A的双嵌段共聚物，其中，例如，PEG部分可具有约1000-20000的数均分子量，例如约2000-20000，例如约2至约10000，且PL(G)A部分可具有约5000至约20000的数均分子量或约5000-100000的数均分子量，例如约20000-70000，例如约15000-50000。

例如，本文公开了示例性治疗纳米颗粒，其包括约10至约99重量％的聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物，或约20至约80重量％、约40至约80重量％、或约30至约50重量％、或约70至约90重量％的聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物。示例性聚乳酸-聚乙二醇共聚物可包括数均分子量为约15至约20kDa、或约10至约25kDa的聚乳酸以及数均分子量为约4至约6、或约2kDa至约10kDa的聚乙二醇。

所公开的纳米颗粒可任选地包括约1至约50重量％的聚乳酸或聚乳酸-共-聚乙醇酸(其不包括PEG)，或可任选地包括约1至约50重量％、或约10至约50重量％、或约30至约50重量％的聚乳酸或聚乳酸-共-聚乙醇酸。例如，聚乳酸或聚乳酸-共-聚乙醇酸可具有约5至约15kDa、或约5至约12kDa的数均分子量。示例性PLA可具有约5至约10kDa的数均分子量。示例性PLGA可具有约8至约12kDa的数均分子量。

靶向部分

本文提供的纳米颗粒可包括任选存在的靶向部分，即能够与生物实体结合或以其他方式缔合的部分，所述生物实体例如为细胞膜成分、细胞表面受体、前列腺特异性膜抗原等等。颗粒表面上存在的靶向部分可允许颗粒定位于特定靶向位点，例如肿瘤、疾病部位、组织、器官、某类细胞等。因此，纳米颗粒则可为“靶特异性的”。这样，在某些情形下，药物或其他有效负载可从颗粒中释放并被允许局部性地与特定靶向位点相互作用。

在特定实施方案中，药物或其他有效负载可以控释的方式从颗粒中释放出来且被允许局部性地与特定靶向位点(例如肿瘤)相互作用。本文中(例如在“控释系统”的背景下)所用的术语“控释”(及该术语的变体)通常意欲涵盖在选定的位点或者以速率、间隔和/或量可控的方式释放物质(例如药物)。控释涵盖、但不一定限于基本上连续的递送、模式化递送(patterned release)(例如被规则或不规则的时间间隔中断的经一段时间间歇性递送)以及推注递送选定的物质(例如，作为经较短时间段(例如几秒或几分钟)递送的预定的、分散的量的物质)。

在一实施方案中，所公开的纳米颗粒包括靶向部分，其为低分子量配体，例如低分子量PSMA配体。

例如，低分子量PSMA配体可为：

以及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体、或外消旋物。特别地，该丁基胺化合物具有易于合成的优点，尤其因为其缺乏苯环。

例如，所公开的纳米颗粒可包括缀合物，其表示为：

其中y为约222且z为约114。

例如，所公开的纳米颗粒包括选自下列的聚合物化合物：

其中R₁选自H和任选地被卤素取代的C₁-C₂₀烷基；；

R₂为键、酯键或酰胺键；

R₃为C₁-C₁₀亚烷基或键；

x为50至约1500，例如约170至约260；

y为0至约50，例如，y为0；且

z为约30至约456，或约30至约200，例如z为约80至约130。

治疗剂

在一实施方案中，活性剂或治疗剂可以(或可以不)与所公开的聚合物(其形成所公开的纳米颗粒的部分)缀合，例如，活性剂可与PLA或PGLA、或诸如PLA-PEG或PLGA-PEG的共聚物的PLA或PLGA部分缀合(例如共价键合，诸如直接或通过连接部分共价键合)。

一方面，包括(例如)治疗剂(例如抗癌剂或抗炎剂)、诊断剂(例如造影剂；放射性核素；以及荧光部分、发光部分和磁性部分)、预防剂(例如疫苗)和/或营养剂(例如维生素、微量元素等)的任何药剂可通过所公开的纳米颗粒递送。根据本发明递送的示例性药剂包括但不限于小分子(例如细胞毒性剂或抗炎剂)、核酸(例如siRNA、RNAi和微小核糖核酸(mircoRNA)制剂)、蛋白(例如抗体)、肽、脂质、碳水化合物、激素、金属、放射性元素和化合物、药物、疫苗、免疫学药剂等，和/或它们的组合。在一些实施方案中，递送的药剂是用于治疗癌症的药剂。

在特定实施方案中，药物或其他有效负载可以控释方式从颗粒中释放出来且被允许局部性地与特定靶向位点(例如肿瘤或发炎组织)相互作用。本文中(例如在“控释系统”的背景下)所用的术语“控释”(及该术语的变体)通常意欲涵盖在选定的位点或者以速率、间隔和/或量可控的方式释放物质(例如药物)。控释涵盖、但不一定限于基本上连续的递送、模式化递送(例如被规则或不规则的时间间隔中断的经一段时间间歇性递送)以及推注递送选定的物质(例如，作为经较短时间段(例如几秒或几分钟)递送的预定的、分散的量的物质)。

活性剂或药物可以是治疗剂(例如化学治疗剂)，诸如mTor抑制剂(例如西罗莫司、坦罗莫司或依维莫司)、长春花生物碱(例如长春瑞滨或长春新碱)、双萜衍生物、紫杉烷(例如紫杉醇或其衍生物，诸如DHA-紫杉醇或PG-紫杉醇或多西他赛)、心血管药剂(例如利尿剂、血管舒张剂、血管紧张素转化酶、β阻断剂、醛固酮拮抗剂或血液稀释剂)、皮质类固醇、抗代谢药或抗叶酸药剂(例如甲氨蝶呤)、化疗剂(例如埃坡霉素B)、烷化剂(例如苯达莫司汀)，或者活性剂或药物可以是siRNA。

在一组实施方案中，有效负载为药物或多于一种药物的组合。例如，在其中靶向部分可用于将包含药物的颗粒导向个体体内的特定局限性部位的实施方案中，这样的颗粒可用于(例如)允许进行药物的局部化递送。示例性治疗剂包括化疗剂，诸如阿霉素(Adriamycin)、吉西他滨(Gemzar)、道诺霉素、丙卡巴肼、丝裂霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、甲氨蝶呤、长春瑞滨、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春花生物碱，诸如长春碱或长春新碱；博莱霉素、紫杉醇(taxol)、紫杉萜(taxotere)、卡巴他赛(Cabazitaxel)、阿地白介素(aldesleukin)、天冬酰胺酶、白消安、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、CPT-11、10-羟基-7-乙基喜树碱(SN38)、达卡巴嗪、S-I卡培他滨、替加氟、5'脱氧氟尿苷、UFT、恩尿嘧啶、脱氧胞苷、5-氮杂胞嘧啶、5-氮杂脱氧胞嘧啶、别嘌呤醇、2-氯腺苷、三甲曲沙、氨基蝶呤、亚甲基-10-去氮杂氨基蝶呤(MDAM)、奥沙利铂、吡铂、四铂、赛特铂、铂-DACH、奥马铂、CI-973、JM-216及其类似物、表柔比星、依托泊苷磷酸盐、9-氨基喜树碱、10,11-亚甲二氧基喜树碱、卡仑尼替星、9-硝基喜树碱、TAS103、长春地辛、苯丙氨酸氮芥、异环磷酰胺(ifosphamidemefosphamide)、过磷酰胺、氯乙环磷酰胺卡莫司汀、司莫司汀、埃坡霉素A-E、拓优得(tomudex)、6-巯嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、安吖啶、依托泊苷磷酸盐、卡仑尼替星(karenitecin)、阿昔洛维、伐昔洛韦、更昔洛韦、金刚烷胺、金刚乙胺、拉米夫定、齐多夫定、贝伐单抗、曲妥单抗、利妥昔单抗、5-氟尿嘧啶，以及它们的组合。

潜在适合的药物的非限制性实例包括抗癌剂，其包括(例如)卡巴他赛、米托蒽醌和盐酸米托蒽醌。在另一实施方案中，有效负载可以是抗癌药物，诸如20-epi-1,25二羟基维生素D3、4-甘薯苦醇、5-乙炔基尿嘧啶、9-二氢紫杉醇、阿比特龙、阿西维辛、阿克拉霉素、阿考达唑盐酸盐、阿克罗宁、acylfiilvene、adecypenol、阿多来新阿地白介素、所有tk拮抗剂、六甲蜜胺、安巴司丁、安波霉素、乙酸阿美坦醌(ametantrone acetate)、amidox、氨磷汀、氨鲁米特、氨基乙酰丙酸、氨柔比星、安丫啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内酯、血管生成抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、antarelix、安曲霉素、抗背侧化形态形成蛋白-1(anti-dorsalizdng morphogenetic protein-1)、抗雌激素、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、阿非迪霉素甘氨酸、凋亡基因调节剂(apoptosis genemodulators)、凋亡调节剂(apoptosis regulators)、脱嘌呤核酸、ARA-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨酶、天冬酰胺酶、曲林菌素(asperlin)、奥沙那宁(asulacrine)、阿他美坦、阿莫司汀、海洋环肽1、海洋环肽2、海洋环肽3、氮杂胞苷、阿扎司琼、阿扎毒素、氮杂酪氨酸、阿扎替派、阿佐霉素、浆果赤霉素III衍生物、班兰诺(balanol)、巴马司他、苯并二氢卟酚(benzochlorins)、苯佐替派、苯甲酰基十字孢碱、β-内酰胺衍生物、β-阿立辛(beta-alethine)、贝拉霉素B(betaclamycinB)、桦木酸、BFGF抑制剂、比卡鲁胺、比生群、盐酸比生群、双吖丙啶基精胺、双奈法德(bisnafide)、二甲磺酸双奈法德、双曲群A(bistratene A)、比折来新、博来霉素、硫酸博来霉素、BRC/ABL拮抗剂、breflate、布喹那钠、溴匹立明、布度钛、白消安、丁硫氨酸亚砜胺、放线菌素、卡泊三醇、钙感光蛋白C、卡普睾酮、喜树碱衍生物、金丝雀痘IL-2、卡培他滨、卡醋胺(caraceraide)、卡巴他赛、卡贝替姆(carbetimer)、卡铂、羧酰胺-氨基-三唑、羧酰胺基三唑、carest M3、卡莫司汀、earn700、软骨衍生抑制剂、盐酸卡柔比星、卡折来新、酪蛋白激酶抑制剂、栗精胺、天蚕抗菌肽B、西地芬戈、西曲瑞克、苯丁酸氮芥、二氢卟酚、氯喹喔啉磺酰胺、西卡前列素(cicaprost)、西罗霉素、顺铂、顺-卟啉、克拉屈滨、氯米芬类似物、克霉唑、克里霉素(collismycin)A、克里霉素B、考布他汀A4、考布他汀类似物、conagenin、crambescidin 816、克立那托、甲磺酸克立那托、念珠藻素8、念珠藻素A衍生物、curacin A、环戊蒽醌、环磷酰胺、cycloplatam、cypemycin、阿糖胞苷、阿糖胞苷烷磷酯(cytarabineocfosfate)、溶细胞因子、磷酸己烷雌酚、达卡巴嗪、达昔单抗(dacliximab)、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他滨、脱氢膜海鞘素B(dehydrodidemnin B)、地洛瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺、右奥马铂(dexormaplatin)、右丙亚胺、右维拉帕米、地扎呱宁(dezaguanine)、甲磺酸地扎呱宁、地吖醌、didemnin B、didox、二乙基去甲精胺(diethyhiorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷、dioxamycin、二苯基螺莫司汀、多西他赛、二十二烷醇、多拉司琼、去氧氟尿苷、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、柠檬酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮、屈大麻酚、达佐霉素、duocannycin SA、依布硒啉、依考莫司汀、依达曲沙、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸、盐酸依氟鸟氨酸、榄香烯、依沙芦星、乙嘧替氟、恩洛铂、恩普氨酯、依匹哌啶、表柔比星、盐酸表柔比星、依立雄胺、厄布洛唑、红细胞基因治疗载体系统、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌莫司汀类似物、雌莫司汀磷酸钠、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氯苯乙嘧胺、依西美坦、法倔唑、盐酸法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、非格司亭、非那雄胺、夫拉平度、氟卓斯汀、氟尿苷、fluasterone、氟达拉滨、磷酸氟达拉滨、fluorodaunorunicin盐酸盐、氟尿嘧啶、氟西他滨(flurocitabine)、福酚美克、福美坦、磷喹酮、福司曲星、福司曲星钠、福莫司汀、钆替沙林(gadolinium texaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨、加尼瑞克、明胶酶抑制剂、吉西他滨、盐酸吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、heregulin、六亚甲基双乙酰胺、羟基脲、金丝桃素、伊班膦酸、伊达比星、盐酸伊达比星、艾多昔芬、伊决孟酮、异环磷酰胺、ihnofosine、伊洛马司他、咪唑并吖啶酮、咪喹莫特、免疫刺激剂肽、胰岛素样生长因子-1受体抑制剂、干扰素激动剂、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-N1、干扰素α-N3、干扰素β-IA、干扰素γ-IB、干扰素、白介素、碘苄胍、碘代阿霉素、异丙铂、依立替康、盐酸伊立替康、伊罗普拉、伊索拉定、isobengazole、isohomohalicondrin B、伊他司琼、jasplakinolide、kahalalide F、片螺素-N三乙酸酯(lamellarin-Ntriacetate)、兰瑞肽、乙酸兰瑞肽、leinamycin、来格司亭、香菇多糖硫酸酯、leptolstatin、来曲唑、白血病抑制因子、白细胞α干扰素、醋酸亮丙瑞林、亮丙瑞林/雌激素/孕酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、盐酸利阿唑、线性多胺类似物、亲脂二糖肽、亲脂铂化合物、lissoclinamide、洛铂、胍乙基磷酸丝氨酸、洛美曲索、洛美曲索钠、洛莫司汀、氯尼达明、洛索蒽醌、盐酸洛索蒽醌、洛伐他汀、洛索立宾、勒托替康、镥泰克萨菲瑞(lutetiumtexaphyrin)、致溶解肽(lytic peptides)、美坦辛、mannostatinA、马立马司他、马索罗酚、乳腺丝抑蛋白(maspin)、基质溶素抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、美登素、氮芥盐酸盐、乙酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑美洛格瑞、美巴龙(merbarone)、巯基嘌呤、美替瑞林、蛋氨酸酶、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠、甲氧氯普胺、氯苯氨啶、美乌替派、微藻蛋白激酶C抑制剂、MIF抑制剂、米非司酮、米替福新、立司亭、错配双链RNA、米丁度胺、米托卡星、丝裂红素、丝林霉素、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂马菌素、丝裂霉素、丝裂霉素类似物、米托萘胺、丝裂帕菌素、米托坦、mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素、米托蒽醌、盐酸米托蒽醌、莫法罗汀、莫拉司亭、单克隆抗体、人绒毛膜促性腺激素、单磷酰脂质a/分支杆菌细胞壁SK、莫哌达醇、多重抗药性基因抑制剂、基于多重肿瘤抑制因子1的治疗、芥子抗癌剂、印度洋海绵(mycaperoxide)B、分枝杆菌细胞壁提取物、麦考酚酸、myriaporone、正乙酰基地那林、那法瑞林、nagrestip、纳洛酮/喷他佐辛、napavin、naphterpin、那托司亭、奈达铂、奈莫柔比星、奈立膦酸、中性肽链内切酶、尼鲁米特、nisamycin、一氧化氮调节剂、氮氧化物抗氧化剂、nitrullyn、诺考达唑、诺拉霉素、n-取代的苯甲酰胺、O6-苯甲基鸟嘌呤、奥曲肽、okicenone、寡核苷酸、奥那司酮、昂丹司琼、oracin、口腔细胞因子诱导剂、奥马铂、奥沙特隆、奥沙利铂、oxaunomycin、奥昔舒仑、紫杉醇、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、palauamine、棕榈酰基根霉素(palmitoylrhizoxin)、帕米磷酸、人参炔三醇、帕诺米芬、parabactin、帕折普汀、培门冬酶、培得星、培利霉素、戊氮芥、戊聚硫钠、喷司他丁、pentrozole、硫酸培洛霉素、全氟溴烷、培磷酰胺、紫苏乙醇、phenazinomycin、乙酸苯酯、磷酸酶抑制剂、溶链菌素、盐酸毛果云香碱、哌泊溴烷、哌泊舒凡、吡柔比星、吡曲克辛、盐酸吡罗蒽醌、placetinA、placetin B、纤溶酶原激活物抑制剂、铂络合物、铂化合物、铂-三胺络合物、普卡霉素、普洛美坦、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼莫司汀、盐酸甲基苄肼、丙基双吖啶酮、前列腺素J2、前列腺癌抗雄激素、蛋白酶体抑制剂、基于蛋白质A的免疫调节剂、蛋白质激酶C抑制剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、嘌呤霉素、嘌呤霉素盐酸盐、红紫素、吡唑呋喃菌素、吡唑并吖啶(pyrazoloacridine)、吡哆醛化血红蛋白聚氧乙烯偶联物、RAF拮抗剂、雷替曲塞、雷莫司琼、AS法呢基蛋白质转移酶抑制剂、RAS抑制剂、RAS-GAP抑制剂、脱甲基瑞替普汀、铼RE186依替膦酸盐、根霉素、利波腺苷、核酶、RH维甲酰胺(retinamide)、RNAi、罗谷亚胺、罗希吐碱、罗莫肽、罗喹美克、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈、盐酸沙芬戈、saintopin、sarcnu、sarcophytol A、沙格司亭、SDI1模拟物、司莫司汀、衰老衍生的抑制剂1、有义寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、辛曲秦、单链抗原结合蛋白质、sizofuran、索布佐生、巯基硼烷钠(sodium borocaptate)、苯基乙酸钠、solverol、生长调节素结合蛋白质、索纳明、磷乙酰天冬氨酸钠(sparfosafe sodium)、膦门冬酸、司帕霉素、穗霉素D(spicamycin D)、盐酸螺旋锗、螺莫司汀、螺铂、脾脏五肽、海绵抑制素1、角鲨胺、干细胞抑制剂、干细胞分裂抑制剂、stipiamide、链黑菌素、链佐星、溶基质素抑制剂、sulfinosine、磺氯苯脲、强效血管活性肠肽拮抗剂、suradista、苏拉明、苦马豆碱、合成糖胺聚糖、他利霉素、他莫司汀、他莫昔芬甲碘化物、牛磺莫司汀、他扎罗汀、替可加兰钠、替加氟、tellurapyrylium、端粒酶抑制剂、替洛蒽醌盐酸盐、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、替罗昔隆、睾内酪、四氯十氧化物、tetrazomine、thaliblastine、沙利度胺、硫咪嘌呤、噻可拉林、硫鸟嘌呤、塞替派、血小板生成素、血小板生成素模拟物、胸腺法新、胸腺喷丁受体激动剂、胸腺曲南、甲状腺刺激激素、噻唑扶林(tiazofurin)、本紫红素乙酯锡、替拉扎明、二氯环戊二烯钛、盐酸拓扑替康、topsentin、托瑞米芬、柠檬酸托瑞米芬、全能干细胞因子、翻译抑制剂、醋酸曲托龙、维甲酸、三乙酰基尿苷、曲西立滨、磷酸曲西立滨、三甲曲沙、葡萄糖醛酸三甲曲沙、曲普瑞林、托烷司琼、盐酸妥布氯唑、妥罗雄脲、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂、UBC抑制剂、乌苯美司、尿嘧啶芥子、乌瑞替派、泌尿生殖窦衍生的生长抑制因子、尿激酶受体拮抗剂、伐普肽、variolin B、维拉雷琐、藜芦明、verdins、维替泊芬、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春地辛、硫酸长春地辛、硫酸长春匹定、硫酸长春甘酯、硫酸长春罗新、长春瑞滨或酒石酸长春瑞滨、硫酸长春罗定、vinxaltine、硫酸长春利定、vitaxin、伏氯唑、扎诺特隆、折尼铂、亚苄维C、净司他丁、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)、或盐酸佐柔比星。

潜在适合的药物的非限制性实例还包括抗炎剂，包括(例如)抗炎类固醇和非甾体抗炎剂(NSAIDs)。抗炎剂的非限制性实例包括：甲氨蝶呤、环孢菌素、阿氯米松、硫唑嘌呤、二丙酸倍氯米松、二丙酸倍他米松、布地奈德、赛利可喜、氯泼尼松、环索奈德、皮质醇、cortisporin、可的伐唑、地夫可特、地塞米松、氟氢缩松、氟尼缩松、醋酸氟轻松、氟可龙、氟米龙、氟替卡松、糠酸氟替卡松、丙酸氟替卡松、糖皮质激素、氢可他酯、醋酸甲地孕酮、美沙拉嗪、甲泼尼松、6-巯基嘌呤、甲基泼尼松、糠酸莫米松、帕拉米松、强的松龙、泼尼松、氟泼尼酯、孕甾烷、孕三烯(pregnatriene)、孕烯、proctosedyl、利美索龙、四氢皮质甾酮、妥布霉素/地塞米松、曲安西龙和氯氟美松。

实施例

到目前为止，我们已对本发明进行了一般性描述，通过参考下面的实施例会更容易理解本发明，包括这些实施例的目的仅为了说明本发明的某些方面和实施方案，而不是以任何方式限制本发明。

实施例1：示例性纳米颗粒制备-乳化法

图1、2A和2B中示出了制备预期的纳米颗粒的示例性方法。

形成包含多西他赛(DTXL)和聚合物(均聚物、共聚物和具有配体的共聚物)的混合物的有机相。将有机相与水相以接近1:2(油相:水相)的比率混合，其中水相包含表面活性剂(0.25％胆酸钠)和一些溶解的溶剂(4％乙酸乙酯、2％苯甲醇)。为实现高药物负载，有机相中使用约30％的固体。

通过简单混合或通过使用转子/定子均化器使两个相组合，形成初级粗乳液。转子/定子产生均一的乳状溶液，而搅拌棒产生可见的较大的粗乳液。可以观察到，搅拌棒方法导致显著的油相液滴，其黏附到供料容器侧壁，这表明虽然粗乳液尺寸不是对品质关键的过程参数，但应使其适当精细以防止产率损失或相分离。因此，将转子/定子用作形成粗乳液的标准方法，然而在较大规模下高速混合器可能是适合的。

然后通过使用高压均化器使初级乳液形成精细乳液。在连续通过(103)均化器后，粗乳液的尺寸不会显著影响颗粒尺寸。

在2-3次通过后，颗粒尺寸未显著降低，且连续通过甚至可引起颗粒尺寸增加。将有机相用标准水相以5:1油水比(O:W)乳化，并进行多次不连续的通过，在每次通过后将一小部分乳液骤冷。所示规模表示制剂中的总固体。

规模对颗粒尺寸的影响表明规模依赖性。趋势显示，在2-10g的批次大小范围内，较大批次产生较小颗粒。已证实，当考虑大于10g规模的批次时，该规模依赖性被削除。油相中所用的固体量为大约30％。

表A汇总了乳化工艺参数。

表A

通过在搅拌下将精细乳液添加到给定温度的去离子水中以使其骤冷。在骤冷单元操作中，在搅拌下将乳液添加到冷的含水骤冷液(quench)中。这有助于萃取大部分的油相溶剂，有效硬化纳米颗粒以进行下游的过滤。冷冻骤冷液显著改善了药物的胶囊化。骤冷液:乳液比为大约5:1。

将35％(wt％)的Tween 80溶液添加到骤冷液中以整体上实现接近4％的Tween80。在乳液骤冷后，添加Tween-80的溶液，其用作药物增溶剂，从而允许在过滤期间有效去除未胶囊化的药物。表B示出了各个骤冷工艺参数。

表B：骤冷工艺参数汇总。

必须用足够稀释的悬浮液(足够低浓度的溶剂)使温度保持足够冷以保持低于颗粒的T_g。若Q:E比率不够高，则较高浓度的溶剂使颗粒塑化并使药物泄漏。相反，在低Q:E比率(至～3:1)下，较冷的温度允许高的药物胶囊化，使得该过程能更有效地运行。

接着通过切向流式过滤工艺分离纳米颗粒以浓缩纳米颗粒悬浮液，并将溶剂、游离药物和药物增溶剂从骤冷溶液缓冲交换至水中。使用分子量截留值(MWCO)为300的再生纤维素膜。

进行恒容渗滤(DF)以去除骤冷溶剂、游离药物和Tween-80。为进行恒容渗滤，将缓冲液以与去除滤液相同的速度添加到截留物容器中。TFF操作的工艺参数汇总于表C中。交叉流速率是指溶液流通过进料通道和穿过膜的速率。该溶液流提供力以扫除可污染膜并限制滤液流动的分子。跨膜压力是驱使可渗透分子穿过膜的力。

表C：TFF参数

接着在后处理期间将过滤后的纳米颗粒浆料热循环至升高的温度。在其第一次曝露于25℃后，小部分(通常5-10％)的胶囊化药物从纳米颗粒中非常快速地释放。因为这种现象，在整个后处理期间保冷的批次在递送或非冷冻储存的任何部分期间易发生游离药物或药物晶体形成。在后处理期间通过使纳米颗粒浆料曝露于升高的温度，可去除这种“松散地胶囊化的”药物并改善产品稳定性，而代价是药物负载的小幅下降。表D概述了25℃下处理的两个实例。其他实验显示，在约2-4个渗滤体积后，产品足够稳定可曝露于25℃而不会损失大部分的胶囊化药物。在25℃处理之前，5个渗滤体积用作冷处理的量。

表D：

¹在至少5个渗滤体积后，将25℃后处理小批次曝露于25℃不同的时间段。因为存在多个小批次进行25℃曝露，所以报告的是范围。

²稳定性数据表示在浆料中晶体形成(通过显微镜可见)之前，最终产物可在25℃、10-50mg/mL纳米颗粒浓度下保持的时间。

³体外猝释表示第一时间点(基本上立刻)释放的药物。

在过滤过程后，使纳米颗粒悬浮液通过除菌级过滤器(0.2μm绝对值)。预过滤器用于保护除菌级过滤器，以便该过程利用合理的过滤面积/时间。值汇总于表E中。

表E：

预过滤器在Pall SUPRAcap或Stax过滤芯中具有Seitz PDD1深度过滤介质。深度过滤器可使用每公斤纳米颗粒0.2m²的过滤表面积，除菌级过滤器可使用每公斤纳米颗粒1.3m²的过滤表面积。

实施例2：具有糖醇和羟丙基-β-环糊精(HPbCD)的冻干组合物

所有制剂的HPbCD浓度均保持恒定为7.5％，且甘露醇的测试浓度为2.5％至10％(如表1中所示)。块外观与重构时间示于表2中。DLS结果示于图3中。大于1微米的纳米颗粒的数量的结果示于图4中。大于10微米的颗粒和大于25微米的颗粒的数量的结果示于图5中。原料(即NP悬浮液)为纳米颗粒在去离子水中的不含糖醇的悬浮液且在未冷冻下冷藏储存(NP悬浮液的浓度为约50mg/mL)。7.5％的甘露醇为优选浓度。

表1：针对313-21的实验设计

赋形剂	制剂1	制剂2	制剂3	制剂4
					HPbCD	7.5％	7.5％	7.5％	7.5％
甘露醇	2.5％	5％	7.5％	10％

表2：

进行实验以评估HPbCD最适合的浓度。所有制剂的甘露醇的浓度均保持恒定为7.5％，且HPbCD测试浓度为0％至10％(如表3中所示)。块外观与重构时间示于表4中。DLS结果示于图6中。大于1微米的纳米颗粒的数量的结果示于图7中。大于10微米的颗粒和大于25微米的颗粒的数量的结果示于图8中。体外释放(IVR)数据示于图9中。7.5％HPbCD为最佳浓度。

表3：实验设计

赋形剂

水平1

水平2

水平3

水平4

水平5

水平6

HPbCD

0％

2.5％

5％

6％

7.5％

10％

甘露醇

10％

7.5％

表4：

对制剂进行热表征实验以指导冻干周期/配方开发。通过对制剂进行差示扫描量热法(DSC)和冻干显微术(FDM)评估在冷冻状态下赋形剂的物理状态(即非晶态、晶态、混合态)以及与该物理状态有关的临界温度(即玻璃化转变温度、共晶熔融温度、崩塌温度)。

差示扫描量热法(DSC)使用TA仪器Q2000DSC对制剂(7.5％甘露醇+7.5％HPbCD)进行DSC。将液体样品(20L)等分到Tzero盘中。将Tzero密封盖置于盘上，随后将其缚住。在缚住后，将盘装入DSC中。对样品进行两种试验：未退火(正常斜变)和退火的。

未退火：对于未退火试验，将样品冷冻至-45℃，接着将温度以10℃/分钟渐升至25℃。DSC热分析图示于图10中。由于样品未退火，制剂中的甘露醇保持为非晶态，且在-31℃下出现玻璃化转变(所示为小的吸热峰)，其随后在-20℃下开始结晶放热，随后显示为共晶熔融(开始于-2℃，所示为大的吸热峰)。

退火：样品首先在-45℃下冷冻。接着将样品温热至-12℃并保持10分钟。使样品再次回到-45℃，接着将温度以10℃/分钟渐升至25℃。此试验的DSC热分析图示于图11中。因为退火步骤，甘露醇完全结晶，因此在-31℃下不出现玻璃化转变。在曲线上仅在-17℃处观察到一个玻璃化转变，其属于HPbCD。观察到另一较大的吸热峰(在-3℃开始)，其表示甘露醇的共晶熔融。因此，通过使甘露醇的固体状态从非晶态变为结晶态，改变了甘露醇的临界温度，从而使其在更高的温度下更稳定。

冷冻干燥显微术(FDM)：进行FDM以确定冻干(Lyo)块的崩塌温度。FDM基本上是配备低温台(用于冷冻和加热)真空泵(用于干燥)和相机的显微镜，其中样品在经历冻干周期的各阶段时都能被看见。使用相机，可以在整个周期期间样品转变成不同阶段时拍照。使用BTLLyostat4对制剂(7.5％甘露醇+7.5％HPbCD)进行FDM。将样品(5L)置于显微镜的低温台上。首先将样品冷冻至-45℃并保持5分钟。接着将样品温热至-12℃(用于退火)并保持10分钟，随后冷却回至-45℃。接着开启真空泵以在低温台内引入真空。接着以1℃/分钟使低温台的温度缓慢上升直至达到25℃。由于系统内存在真空，样品将开始干燥。在某一温度下，块将开始失去其结构，这称之为崩塌温度。在整个周期中，随着样品经历不同的阶段，相机连续拍照。通过观察照片可以确定样品的坍塌温度。对于制剂(7.5％甘露醇+7.5％HPbCD)，崩塌开始于-10℃，且全部崩塌出现在约-7℃。

冻干：整个冻干周期的总时间为大约2.5天(60小时)。图12中示出了一个实例。冻干的各个阶段为：上架、冷冻、初级干燥、二级干燥和储存，下面对其进行说明：

1)上架/冷冻：一般而言，根据对甘露醇所做的热处理，其可以是非晶态或结晶态。在此情形下，具有结晶态的甘露醇从冻干状态去除了玻璃化转变事件，并且还产生了更多的用于干燥和除湿的开放通道。为保证甘露醇完全结晶，在冷冻阶段期间进行退火程序。在退火期间，将冻干搁架加热直至制剂(即纳米颗粒悬浮液)达到期望的温度(其通常通过热表征研究确定)。将搁架在该温度下保持2-3小时。接着使搁架回到初始冷冻温度。在此实例所述的冻干周期中，将包含纳米颗粒悬浮液的小瓶装载到处于4℃下的搁架上。接着通过使搁架温度降低至-45℃并保持2小时以冷冻小瓶。为了退火，将搁架温热至-12℃并保持3小时。随后，使小瓶回到初始冷冻温度(-45℃)并保持2小时。

2)初级干燥：一旦完成冷冻步骤，该周期进入初级干燥，此时真空泵开始工作且冰开始升华。冻干周期的此阶段持续直至围绕间隙空间所有基本纯的冰已实质上去除。在进行热表征研究(DSC和FDM)以及其他实验后，初级干燥的搁架温度为0℃且真空水平为250毫托。这些参数导致在初级干燥的初始升华阶段期间产物温度为约-15℃，其远低于使用冷冻干燥显微术证实的崩塌温度。一旦初级干燥完成，会观察到产物温度上升，且皮拉尼真空计会满足电容压力计。对制剂进行的初级干燥的时长为大约1.5天。

3)二级干燥和储存：当时间周期到达此阶段时，大部分水(70-90％)已被去除。在理解了制剂的热性质后，二级干燥温度可选择为35℃(大约8小时)。一旦二级干燥完成，将小瓶储存在20℃真空下，直至其被从冻干机手动取出。二级干燥和储存的真空水平保持在250毫托下。

实施例3：使用糖(蔗糖)和羟丙基-β-环糊精(HPbCD)的冻干工艺与使用甘露醇和HPbCD的冻干工艺的比较

为比较冻干工艺中的甘露醇与糖(蔗糖)，使用其中含5重量％的糖和7.5重量％的HPbCD的制剂(起始纳米颗粒悬浮液的浓度为约50mg/mL)。由于冷冻干燥显微术显示，在初级冷冻干燥期间，制剂崩塌起始于-23℃，因此将搁架温度保持在-27℃以避免崩塌。制剂初级干燥的时长为大约9-12天；且二级干燥的时长为在渐升后大约8天。还实行了另一冻干工艺(起始纳米颗粒悬浮液浓度为～50mg/mL，使用5重量％蔗糖和7.5重量％HPbCD)。

两种工艺(一种使用7.5重量％的糖+5重量％的HPbCD，另一种使用7.5％甘露醇+7.5％HPbCD；经退火)的比较的总结示于下表5中。

表5

*目标：在冻干组合物在含水介质中重构后，100mL的重构的组合物包括少于600或300颗尺寸大于或等于25微米的颗粒，和/或少于6000或3000颗尺寸大约或等于10微米的颗粒；其中重构的组合物的纳米颗粒的浓度为大约～10-100mg(例如40-60mg)/mL。

等同方案

本领域技术人员会认识到或者只需使用常规实验就能够确定许多与本文所述的发明的具体实施方案等同方案。这样的等同方案也包括在下面的权利要求书中。

援引加入

所有专利、公开的专利申请、网站和本文中列出的其他参考文献的全部内容明确地以其整体通过援引加入本文。

Claims

1.冻干药物组合物，所述冻干药物组合物包括：

聚合物纳米颗粒，其包括：聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物，以及治疗剂；

糖醇；以及

环糊精。

2.权利要求1的冻干药物组合物，其中当所述冻干药物组合物在含水介质中重构后，重构的组合物包括约2至约12重量％的所述糖醇；以及约2至约12重量％的所述环糊精。

3.权利要求1或2的冻干药物组合物，其中所述重构的组合物包括约6至约10重量％的所述糖醇，以及约6至约9重量％的所述环糊精。

4.权利要求1至3中任一项的冻干药物组合物，其中所述重构的组合物包括以下浓度的所述聚合物纳米颗粒：约10至约100mg/mL；约20至约80mg/mL；约30至约80mg/mL；约40至约80mg/mL；约40至约70mg/mL；约40至约60mg/mL；或约40至约50mg/mL。

5.权利要求1至4中任一项的冻干药物组合物，其中所述重构的组合物包括约7.5重量％的环糊精和约7.5重量％的糖醇。

6.权利要求1至5中任一项的冻干药物组合物，其中所述糖醇选自：甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇及其混合物。

7.权利要求1至6中任一项的冻干药物组合物，其中所述糖醇为甘露醇。

8.权利要求1至6中任一项的冻干药物组合物，其中所述环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精及其混合物。

9.权利要求1至8中任一项的冻干药物组合物，其中所述环糊精为羟丙基β-环糊精。

10.权利要求1至9中任一项的冻干药物组合物，其中所述重构的组合物包括约7.5重量％的羟丙基β-环糊精和约7.5重量％的甘露醇。

11.权利要求1至10中任一项的冻干药物组合物，其中所述聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乳酸部分具有约10kDa至约25kDa的重均分子量，且所述聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乙二醇部分具有约4至约6kDa的重均分子量。

12.权利要求1至11中任一项的冻干药物组合物，其中所述聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乳酸部分具有约16kDa的重均分子量，且所述聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚乙二醇部分具有约5kDa的重均分子量。

13.权利要求1至12中任一项的冻干药物组合物，其中所述聚合物纳米颗粒具有约60nm至约140nm的直径。

14.权利要求1至13中任一项的冻干药物组合物，其中所述聚合物纳米颗粒具有约80nm至约120nm的直径。

15.权利要求1至14中任一项的冻干药物组合物，其中所述聚合物纳米颗粒包括约3至约40重量％的治疗剂。

16.权利要求1至15中任一项的冻干药物组合物，其中所述聚合物纳米颗粒还包括配体缀合的聚合物。

17.权利要求1至16中任一项的冻干药物组合物，其中所述治疗剂选自紫杉烷、埃博霉素、mTOR抑制剂、长春花生物碱、二萜衍生物及烷化剂。

18.权利要求1至17中任一项的冻干药物组合物，其中所述组合物能够在约30至约120秒内重构。

19.权利要求1至18中任一项的冻干药物组合物，其中所述组合物能够在约40至约90秒内重构。

20.权利要求1至19中任一项的冻干药物组合物，其中当所述冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于3000颗具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒。

21.权利要求1至19中任一项的冻干药物组合物，其中当所述冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于300颗具有大于或等于25微米的尺寸的颗粒。

22.权利要求1至19中任一项的冻干药物组合物，其中当所述冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于600颗具有大于或等于25微米的尺寸的颗粒和/或少于6000颗具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒。

23.权利要求1至22中任一项的冻干药物组合物，其中当所述冻干药物组合物在少于或大约100mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括少于0.05重量％的具有5至50微米的尺寸的颗粒。

24.权利要求1至23中任一项的冻干药物组合物，其中当所述冻干药物组合物在少于或大约10mL的含水介质中重构后，重构的冻干药物组合物包括：

40mg/mL或更高浓度的聚合物纳米颗粒，其包括聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和治疗剂；

约6至约9重量％的甘露醇；以及

约6至约9重量％的环糊精；

其中，所述重构的冻干药物组合物包括少于600颗具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒。

25.权利要求1至24中任一项的冻干药物组合物，其中所述冻干药物组合物相较于不含甘露醇的冻干组合物，在2.5天或更短时间内冻干。

26.冻干药剂，所述冻干药剂包括聚合物纳米颗粒，所述聚合物纳米颗粒包括：聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和多西他赛，其中所述药剂包括约30-37mg或约33mg的多西他赛；甘露醇；以及羟丙基β-环糊精。

27.容器，所述容器包括约6mL至约7mL、或大约6.6mL的权利要求26的冻干药剂。

28.权利要求27的容器，其中当所述冻干药剂重构成13.2mL的重构药剂时，所述容器具有少于约454颗尺寸大于或等于10微米的颗粒/毫升所述重构药剂，和/或具有少于约45颗尺寸大于或等于10微米的颗粒/毫升所述重构药剂。

29.适合胃肠外给药的重构的冻干药物组合物，所述重构的冻干药物组合物包括：

在含水介质中的10-100mg/mL浓度的聚合物纳米颗粒；其中所述聚合物纳米颗粒包括：聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和治疗剂；

约6至约10重量％的甘露醇；以及

约6至约9重量％的羟丙基β-环糊精。

30.权利要求29的重构的冻干药物组合物，其中所述重构的冻干药物组合物包括：每个具有少于或大约100mL所述组合物的样本容器，少于6000颗大于或等于10微米的微粒；以及少于600颗大于或等于25微米的微粒。

31.权利要求29的重构的冻干药物组合物，其中所述重构的冻干药物组合物包括：每毫升少于600颗大于或等于10微米的微粒；以及每毫升少于60颗大于或等于25微米的微粒。

32.权利要求29的重构的冻干药物组合物，其中所述重构的冻干药物组合物包括：每个具有少于或大约100mL所述组合物的样本容器，少于600颗大于或等于10微米的微粒；以及少于60颗大于或等于25微米的微粒。

33.权利要求29至32中任一项的重构的冻干药物组合物，其中所述共聚物的聚乳酸部分具有约16kDa的重均分子量，且所述共聚物的聚乙二醇部分具有约5kDa的重均分子量。

34.制备适合在重构后胃肠外给药的冻干药物组合物的方法，所述方法包括：

提供包括聚合物纳米颗粒的制剂，其中所述聚合物纳米颗粒包括治疗剂和选自聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物和聚乳酸-共-聚乙醇酸-嵌段-聚乙二醇共聚物的聚合物；

向所述制剂中添加羟丙基β-环糊精和甘露醇以形成预冻干含水制剂；以及

将所述预冻干含水制剂冻干以形成所述冻干药物制剂。

35.权利要求34的方法，其中冻干所述预冻干含水制剂包括约4.5天或更短时间、约4天或更短时间、约3.5天或更短时间、约3天或更短时间、约2.5天、或约60小时的冻干周期。

36.权利要求34或35的方法，其中冻干所述预冻干含水制剂包括：

将所述预冻干含水制剂装载于约4℃的冻干机中；

首先将冻干机温度降至约-45℃且在约-45℃下保持约2小时；

将所述冻干机温热至约-12℃且在约-12℃下保持约3小时；

再次将冻干机温度降至约-45℃且在约-45℃下保持约2小时。

37.权利要求36的方法，其中冻干所述预冻干含水制剂进一步包括在再次降温步骤后将冻干机温度升至约35℃。

38.权利要求34至38中任一项的方法，其中冻干机压力为大约250毫托。

39.权利要求34或35的方法，其中冻干所述预冻干含水制剂包括：

将所述预冻干含水制剂装载于约4℃的冻干机中；

首先将冻干机温度降至比甘露醇的玻璃化转变温度低至少约10℃；

将所述冻干机温热至比甘露醇的玻璃化转变温度高至少约10℃；以及

再次将冻干机温度降至比甘露醇的玻璃化转变温度低至少约10℃。

40.权利要求39的方法，其中冻干所述预冻干含水制剂进一步包括将冻干机温度升至比所述冻干药物组合物的冻干块崩塌温度高约1℃。

41.权利要求34至40中任一项的方法，其中所述预冻干含水制剂包括约6至约10(例如约6至约9、约6至约8、或约7至约8)重量％的甘露醇，约6至约9(例如约6至约8、或约7至约8)重量％的羟丙基β-环糊精，以及约10至约100mg/mL浓度的所述聚合物纳米颗粒(例如约20至约90mg/mL、20至约80mg/mL、约30至约80mg/mL、约40至约80mg/mL、约40至约70mg/mL、约40至约60mg/mL、约40至约50mg/mL、约50至约60mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL或约55mg/mL)。