CN104812381B - 用于制备治疗性纳米颗粒的方法 - Google Patents

Abstract

本公开内容一般地涉及用于制备治疗性纳米颗粒的方法，其中所述方法包括将治疗剂与有机酸组合。所述治疗性纳米颗粒可以具有例如改善的药物负荷和/或药物释放特性。

Description

用于制备治疗性纳米颗粒的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2012年9月17日提交的美国临时专利申请61/702,037的权益和优先权，其特此通过引用整体并入。

背景技术

长期以来，已经公认将某些药物递送至患者(例如，靶向特定的组织或细胞类型或靶向具体的疾病组织而非正常组织)的系统或控制药物释放的系统是有益的。

例如，包含活性药物和那些例如靶向特定的组织或细胞类型或靶向特异性的疾病组织而非正常组织的治疗剂，可以减少药物在身体非靶向组织中的量。当治疗诸如癌症(其中希望细胞毒剂量的药物递送至癌细胞而不杀死周围的癌性组织)的病症时，这是特别重要的。有效的药物靶向作用可以减少在抗癌治疗中常见的不希望的和有时威胁生命的副作用。此外，这样的治疗剂可以允许药物到达某些它们以其它方式不能到达的组织。

提供控制释放和/或靶向疗法的治疗剂也必须能够递送有效量的药物，所述药物在其它纳米颗粒递送系统中是公知的限制。例如，它可以解决下述问题：制备纳米颗粒系统(含有适当量的药物相关的各纳米颗粒)，同时保持所述纳米颗粒的尺寸足够小，从而具有有利的递送特性。希望用高量的治疗剂装载纳米颗粒，而使用过高的药物负荷(drug load)的纳米颗粒制剂将产生对实际治疗应用而言过大的纳米颗粒。

相应地，存在对纳米颗粒治疗剂和制备所述纳米颗粒的方法的需求，其能够递送治疗水平的药物以治疗疾病诸如癌症，同时也减少患者的副作用。

发明内容

本文描述了用于制备治疗性纳米颗粒的方法，其中所述方法包括将治疗剂与有机酸组合。

在一个方面，提供了制备多个治疗性纳米颗粒的方法。所述方法包括将治疗剂、第一聚合物和有机酸与有机溶剂组合以形成具有约1至约50％固体的第一有机相，将所述第一有机相与第一水溶液组合以形成所述多个治疗性纳米颗粒，和通过过滤来回收所述治疗性纳米颗粒。

在某些实施方案中，所述有机酸可以具有在25℃小于约3.5的pK_a。在其它实施方案中，所述有机酸可以具有在25℃小于约2.0的pK_a。在其它实施方案中，所述有机酸可以具有在25℃小于约1的pK_a。在其它实施方案中，所述有机酸可以具有在25℃小于约0的pK_a。

在某些情况下，所述有机酸可以具有约50℃至约110℃的沸点。在某些实施方案中，所述有机酸可以具有约-30℃至约0℃的熔点。

在某些情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约0.2至约35重量％的治疗剂。在其它情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约1至约10重量％的治疗剂。

在某些实施方案中，所述方法可以是第一种方法，且所述治疗性纳米颗粒与通过第二种方法制备的治疗性纳米颗粒相比可以具有至少约2倍的治疗剂负荷，其中除了所述第二种方法不包括所述有机酸以外，所述第二种方法与所述第一种方法相同。在某些情况下，所述治疗性纳米颗粒可以具有至少约5倍的治疗剂负荷。在其它情况下，所述治疗性纳米颗粒可以具有至少约10倍的治疗剂负荷。

在某些情况下，与由所述治疗剂和所述有机溶剂组成的第二溶液相比，所述治疗剂在由所述治疗剂、所述有机溶剂和所述有机酸组成的第一溶液中可以具有至少5倍的溶解度。在其它情况下，与由所述治疗剂和所述有机溶剂组成的第二溶液相比，所述治疗剂在由所述治疗剂、所述有机溶剂和所述有机酸组成的第一溶液中可以具有约2至约20倍的溶解度。在某些实施方案中，所述有机酸的浓度可以是至少约1重量％、至少约2重量％或至少约3重量％。在其它实施方案中，所述有机酸的浓度可以是约1至约10重量％。

在某些实施方案中，所述有机酸可以是卤代羧酸。例如，所述卤代羧酸可以是三氟乙酸。

在某些情况下，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以基本上立即释放小于约5％的治疗剂。在其它情况下，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以在约1小时释放约0.01至约25％的治疗剂。在其它情况下，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以在约4小时释放约10至约45％的治疗剂。

在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可以具有约60nm至约150nm、约80nm至约150nm、或约90nm至约140nm的直径。

在某些情况下，将所述第一有机相与所述第一水溶液组合可以包括乳化通过将所述第一有机相与所述第一水溶液组合而形成的第二相，以形成乳相。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括淬灭所述乳相以形成淬灭相。例如，所述方法可以进一步包括将药物增溶剂加入所述淬灭相中以形成未包封的治疗剂的增溶相。

在某些情况下，乳化所述第二相可以包括乳化所述第二相以形成粗乳状液，和乳化所述粗乳状液以形成细乳相。

在某些实施方案中，所述有机溶剂可以包含选自以下的溶剂：乙酸乙酯、苯甲醇、二氯甲烷、氯仿、甲苯、甲基乙基酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、丙酮、乙腈、乙酸、吐温80和司盘80，和其中的2种或更多种的组合。

在某些实施方案中，所述水溶液可以包含选自以下的试剂：胆酸钠、乙酸乙酯、苯甲醇或它们的组合。

在某些实施方案中，乳化所述第二相可以包括，使用转子-定子式匀浆器、探头超声破碎器(probe sonicator)、搅拌棒或高压匀浆器。在某些情况下，乳化所述粗乳状液可以包括使用高压匀浆器。在某些实施方案中，乳化所述粗乳状液可以包括穿过匀浆器约2至约3次。在某些情况下，匀浆器进料压力可以是每个相互作用腔室约2000至约8000psi。在某些情况下，所述匀浆器可以包含多个相互作用腔室(multiple interaction chamber)。

在某些实施方案中，淬灭可以至少部分地在约5℃或更低的温度进行。在其它实施方案中，淬灭可以在约0℃至约5℃进行。

在某些情况下，所述淬灭液:乳液比率可以是约2:1至约40:1或约5:1至约15:1。

在某些实施方案中，所述药物增溶剂可以选自吐温80、吐温20、聚乙烯吡咯烷酮、环葡聚糖(cyclodextran)、十二烷基硫酸钠和胆酸钠。在其它实施方案中，所述药物增溶剂可以选自二乙基亚硝胺、醋酸钠、脲、甘油、丙二醇、糖原质、聚乙二醇、三(聚氧乙烯二醇)十二烷基醚(bris(polyoxyethyleneglycolddodecyl ether)、苯甲酸钠和水杨酸钠。在某些实施方案中，药物增溶剂与治疗剂的比率可以是约200:1至约10:1。

在某些情况下，过滤可以包括切向流过滤。在某些实施方案中，过滤可以包括约0℃至约5℃的第一温度过滤。在某些情况下，过滤可以进一步包括约20℃至约30℃的第二温度过滤。在某些实施方案中，过滤可以包括，在约0℃至约5℃处理约1至约30个透析体积(diavolume)和在约20℃至约30℃处理至少一个透析体积。在另一个实施例中，过滤可以包括在约0℃至约5℃处理约1至约30个透析体积和在约20℃至约30℃处理约1至约15个透析体积。在某些情况下，过滤可以包括在不同的特殊温度处理不同透析体积。

在某些实施方案中，所述方法可以进一步包括在过滤之前纯化所述增溶相以基本上除去所述有机溶剂、未包封的治疗剂和/或药物增溶剂。

在某些情况下，过滤可以包括无菌过滤。例如，所述无菌过滤可以包括使用过滤串(filtration train)以受控的速率过滤治疗性纳米颗粒。在某些情况下，所述过滤串可以包含深层过滤器(depth filter)和无菌过滤器。

在某些实施方案中，所述第一聚合物可以是二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物。在其它实施方案中，所述第一聚合物可以是二嵌段聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物(poly(lactic)-co-poly(glycolic)acid-poly(ethylene)glycol copolymer)。在某些情况下，所述方法进一步包括将第二聚合物与所述有机溶剂组合，其中所述第二聚合物是用靶向配体官能化的聚乳酸-聚乙二醇共聚物。在 某些情况下，所述方法进一步包括将第二聚合物与所述有机溶剂组合，其中所述第二聚合物是用靶向配体官能化的聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物。在某些实施方案中，所述靶向配体可以与所述聚乙二醇共价地结合。

在某些实施方案中，所述有机酸包含2种或更多种有机酸的混合物。例如，在某些实施方案中，所述有机酸包含2种有机酸的混合物、3种有机酸的混合物、4种有机酸的混合物或5种有机酸的混合物。

在另一个方面，提供了制备多个治疗性纳米颗粒的方法。所述方法包括将治疗剂、第一聚合物和有机酸与有机溶剂组合以形成具有约1至约50％固体的第一有机相，将所述第一有机相与第一水溶液组合以形成第二相，乳化所述第二相以形成乳相，淬灭所述乳相以形成淬灭相，和过滤所述增溶相以回收所述治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了治疗性纳米颗粒。所述治疗性纳米颗粒如下制备：乳化包含第一聚合物、治疗剂和有机酸的第一有机相从而形成乳相，淬灭所述乳相从而形成淬灭相，和过滤所述淬灭相以回收所述治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了治疗性纳米颗粒。所述治疗性纳米颗粒包含约0.2至约35重量％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂和约50至约99.8重量％的二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物或二嵌段聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10至约30重量％的聚乙二醇。

在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可以进一步包含具有在25℃小于约3.5的pK_a的有机酸。在另一个实施方案中，所述有机酸可以具有在25℃约-1至约2的pK_a。

在某些情况下，所述有机酸可以是三氟乙酸。

在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒的流体动力学直径可以是约60至约150nm。在另一个实施方案中，所述治疗性纳米颗粒的流体动力学直径可以是约90至约140nm。

在某些情况下，所述治疗性纳米颗粒可以包含约1至约10重量％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。在其它情况下，所述治疗性纳米颗粒可以 包含约2至约5重量％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。

在某些实施方案中，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以基本上保留Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂至少1分钟。在其它实施方案中，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以基本上立即释放小于约5％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。在其它实施方案中，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以在约1小时释放约0.01至约25％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。在其它实施方案中，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒可以在约4小时释放约10至约45％的Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂。

在某些情况下，所述Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂可以是达沙替尼或其药学上可接受的盐。在其它情况下，所述Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂可以选自伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼、波舒替尼、普纳替尼(ponatinib)、巴氟替尼、及其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒所述聚乳酸-聚乙二醇共聚物可以具有约0.6至约0.95、约0.6至约0.8、约0.75至约0.85、或约0.7至约0.9的聚乳酸数均分子量分数(number average molecular weight fraction)。

在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可以包含约10至约25重量％的聚乙二醇、约10至约20重量％的聚乙二醇、约15至约25重量％的聚乙二醇、或约20至约30重量％的聚乙二醇。

在某些情况下，所述治疗性纳米颗粒可以进一步包含约0.2至约30重量％的用靶向配体官能化的聚乳酸-聚乙二醇共聚物。在某些实施方案中，所述治疗性纳米颗粒可以进一步包含约0.2至约30重量％的用靶向配体官能化的聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物。所述靶向配体可以与所述聚乙二醇共价地结合。

在另一个方面，提供了治疗性纳米颗粒。所述治疗性纳米颗粒包含约0.5至约35重量％的达沙替尼或其药学上可接受的盐、约30至约99.5重量％聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物和任选的约0.0001至约0.5重量％的具有在25℃小于约3.5的pK_a的 有机酸，其中所述治疗性纳米颗粒包含约10至约25重量％的聚乙二醇。

在某些实施方案中，预见到的治疗性纳米颗粒进一步包含2种或更多种有机酸的混合物。例如，在某些实施方案中，预见到的治疗性纳米颗粒包含2种有机酸的混合物、3种有机酸的混合物、4种有机酸的混合物或5种有机酸的混合物。

在另一个方面，提供了治疗性纳米颗粒。所述治疗性纳米颗粒如下制备：乳化第一有机相从而形成乳相，所述第一有机相包含第一聚合物、Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂和具有在25℃小于约3.5的pK_a的有机酸，淬灭所述乳相从而形成淬灭相，和过滤所述淬灭相以回收所述治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了药学上可接受的组合物。所述药学上可接受的组合物可以包含多个如本文中所述的治疗性纳米颗粒和药学上可接受的赋形剂。

在某些实施方案中，所述药学上可接受的组合物可以进一步包含糖。在某些情况下，所述糖可以是选自以下的二糖：蔗糖或海藻糖或其混合物。在另一个实施方案中，所述药学上可接受的组合物可以进一步包含环糊精。在某些情况下，所述环糊精可以选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、及其混合物。

在另一个方面，提供了在有此需要的患者中治疗癌症的方法。所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的包含如本文中所述的治疗性纳米颗粒的组合物。在某些实施方案中，所述癌症可以是慢性髓性白血病。在其它实施方案中，所述癌症可以选自慢性粒单核细胞性白血病(chronic myelomonocytic leukemia)、嗜酸细胞增多综合征、肾细胞癌、肝细胞癌、费城染色体阳性的急性成淋巴细胞性白血病、非小细胞肺癌、胰腺癌、乳腺癌、实体瘤和套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)。

在另一个方面，提供了在有此需要的患者中治疗胃肠道间质瘤的方法。所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的包含如本文中所述的治疗性纳米颗粒的组合物。

在另一个方面，提供了在温血动物(诸如人类)中用作药物的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了用于在温血动物(诸如人类)中产生抗增殖作用的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了在温血动物(诸如人类)中用作用于抑制和/或治疗实体瘤疾病的抗侵袭剂(anti-invasive agent)的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了如本文中所述的治疗性纳米颗粒在温血动物(诸如人类)中预防或治疗癌症的用途。

在另一个方面，提供了用于在温血动物(诸如人类)中预防或治疗癌症的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了如本文中所述的治疗性纳米颗粒在药物制备中的用途，所述药物用于在温血动物(诸如人类)中预防或治疗癌症。

在另一个方面，提供了如本文中所述的治疗性纳米颗粒用于在温血动物(诸如人类)中产生抗增殖作用(anti-proliferative effect)的用途。

在另一个方面，提供了如本文中所述的治疗性纳米颗粒在药物制备中的用途，所述药物用于在温血动物(诸如人类)中产生抗增殖作用。

在另一个方面，提供了如本文中所述的治疗性纳米颗粒在药物制备中的用途，所述药物用于在温血动物(诸如人类)中用作用于抑制和/或治疗实体瘤疾病的抗侵袭剂。

在另一个方面，提供了用于在需要这种治疗的温血动物(诸如人类)中产生抗增殖作用的方法，所述方法包括给所述动物施用有效量的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了用于在需要这种治疗的温血动物(诸如人类)中通过抑制和/或治疗实体瘤疾病而产生抗侵袭效应的方法，所述方法包括给所述动物施用有效量的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了用于在温血动物(诸如人类)中预防或治疗实体瘤疾病的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

在另一个方面，提供了如本文中所述的治疗性纳米颗粒在药物制备中的用途，所述药物用于在温血动物(诸如人类)中预防或治疗实体瘤疾病。

在另一个方面，提供了用于在需要这种治疗的温血动物(诸如人类) 中预防或治疗实体瘤疾病的方法，所述方法包括给所述动物施用有效量的如本文中所述的治疗性纳米颗粒。

附图说明

图1描绘了公开的纳米颗粒的一个实施方案的图示。

图2是用于形成公开的纳米颗粒的乳液方法的程序框图。

图3A是公开的乳液方法的一个流程图。

图3B是公开的乳液方法的一个流程图。

图4描绘了不同纳米颗粒制剂的体外释放特性。

发明详述

本文描述了用于制备治疗性纳米颗粒的方法，其中所述方法包括将治疗剂与有机酸组合。在某些实施方案中，在纳米颗粒制备方法中包含有机酸可以产生含有相当高治疗剂负荷的纳米颗粒。此外，在某些实施方案中，包括有机酸或在有机酸存在下制备的纳米颗粒可以表现出改善的控释特性。例如，与在没有有机酸存在下存在下制备的纳米颗粒相比，公开的纳米颗粒可以更缓慢地释放治疗剂。本文中还描述了通过公开的方法制备的治疗性纳米颗粒。

本领域普通技术人员会明白，有些治疗剂的纳米颗粒制剂证实了比其它治疗剂更有问题。例如，尝试制备含有有问题的治疗剂的纳米颗粒，可以产生具有不足药物负荷的纳米颗粒、较差控释特性、过大的颗粒等。令人惊奇地，已经发现，在用于制备治疗性纳米颗粒的方法中包括酸(例如，三氟乙酸)可以改善得到的治疗性纳米颗粒的特性。如以上所讨论的，在某些实施方案中，酸在公开的方法中的应用可以给通过所述方法制备的治疗性纳米颗粒赋予有利特性，例如，改善的药物负荷和/或控释特性。不希望受任何理论约束，据信，所述酸通过提高治疗剂在用于制备治疗性纳米颗粒的溶剂中的溶解度而给公开的纳米颗粒赋予有利特性。

任何合适的酸可以用在纳米颗粒制备方法中。在某些实施方案中，所述酸可以是有机酸。例如，预见到的酸可以是羧酸(例如，单羧酸、二羧酸、三羧酸等)、亚磺酸、次磺酸或磺酸。在某些情况下，预见到的酸 可以包括2种或更多种酸的混合物。例如，在某些实施方案中，预见到的酸可以包含2种酸的混合物，在某些实施方案中包含3种酸的混合物，在某些实施方案中包含4种酸的混合物，或在某些实施方案中包含5种酸的混合物。在某些实施方案中，可以使用酸的酯。在某些情况下，可以使用酸的盐。在某些实施方案中，所述酸可以是无机酸。示例性的无机酸包括盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、硼酸、氢氟酸和氢溴酸。

例如，公开的羧酸可以是脂族羧酸(例如，具有环状或无环的、支链或直链的烃链的羧酸)。在某些实施方案中，公开的羧酸可以被一个或多个官能团取代，所述官能团包括、但不限于，卤素(即，F、Cl、Br和I)、磺酰基、硝基和氧代。例如，所述羧酸可以是卤代羧酸(例如，三氟乙酸)。在某些实施方案中，公开的羧酸可以是未被取代的。

示例性的羧酸可以包括被取代的或未被取代的脂肪酸(例如，C₈-C₅₀脂肪酸)。在某些情况下，所述脂肪酸可以是C₁₀-C₂₀脂肪酸。在其它情况下，所述脂肪酸可以是C₁₅-C₂₀脂肪酸。在某些情况下，所述脂肪酸可以是饱和的。在其它实施方案中，所述脂肪酸可以是不饱和的。例如，所述脂肪酸可以是单不饱和脂肪酸或多不饱和脂肪酸。在某些实施方案中，不饱和脂肪酸基团的双键可以处于顺式构象。在某些实施方案中，不饱和脂肪酸基团的双键可以处于反式构象。

羧酸的非限制性例子包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一烷酸、山嵛酸、二十三烷酸、木蜡酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐霉酸、二十九烷酸(nonacosanoic acid)、蜂花酸、三十一烷酸(henatriacontanoic acid)、紫胶蜡酸、三十三烷酸、格地酸、三十五烷酸、三十六烷酸、2-甲基丙酸、2-甲基丁酸、3-甲基丁酸、2-甲基戊酸、2-乙基己酸、2-丙基庚酸、新戊酸、棕榈油酸、油酸、异油酸、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、鳕烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、芥酸、环己烷甲酸、丙烯酸、甲基丙烯酸、巴豆酸、肉桂酸、苯乙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、马来酸、苹果酸、酒石酸(例如，右旋酒石酸、内消旋酒石酸等)、柠檬酸、葡糖酸、天冬氨酸、 谷氨酸、富马酸、衣康酸、卤代羧酸诸如氟乙酸、二氟乙酸、三氟乙酸、氯乙酸、二氯乙酸和三氯乙酸、磺酸诸如三氟甲磺酸、甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸和它们的组合。

在某些情况下，预见到的酸可以具有小于约1000Da的的分子量，在某些实施方案中小于约500Da，在某些实施方案中小于约400Da，在某些实施方案中小于约300Da，在某些实施方案中小于约250Da，在某些实施方案中小于约200Da，在某些实施方案中小于约150Da，在某些实施方案中小于约100Da，在某些实施方案中小于约90Da，在某些实施方案中小于约85Da和在某些实施方案中小于约75Da。在某些情况下，所述酸可以具有约40Da至约1000Da的分子量，在某些实施方案中约91Da至约1000Da，在某些实施方案中约95Da至约1000Da，在某些实施方案中约100Da至约1000Da，在某些实施方案中约91Da至约150Da，在某些实施方案中约95Da至约150Da，且在某些实施方案中约100Da至约150Da。

在某些实施方案中，可以至少部分地基于酸的强度来选择酸。例如，所述酸可以具有在25℃测定的在水中的下述酸解离常数(pK_a)：约-15至约7，在某些实施方案中为约-3至约5，在某些实施方案中为约-3至约4，在某些实施方案中为约-3至约3.5，在某些实施方案中为约-3至约3，在某些实施方案中为约-3至约2，在某些实施方案中为约-3至约1，在某些实施方案中为约-3至约0.5，在某些实施方案中为约-0.5至约0.5，在某些实施方案中为约1至约7，在某些实施方案中为约2至约7，在某些实施方案中为约3至约7，在某些实施方案中为约4至约6，在某些实施方案中为约4至约5.5，在某些实施方案中为约4至约5，且在某些实施方案中为约4.5至约5。在某些实施方案中，所述酸可以具有在25℃测定的下述pK_a：小于约7、小于约5、小于约3.5、小于约3、小于约2、小于约1或小于约0。

在某些实施方案中，预见到的酸可以具有在以下方面有利的相变温度，例如，对于改善治疗性纳米颗粒的特性或对于降低最终的治疗性纳米颗粒中的酸的浓度(例如，通过真空)。例如，所述酸可以具有小于约300℃的沸点，或在某些情况下小于约100℃的沸点。在某些实施方案中，所述酸可以具有约50℃至约110℃的沸点，或在某些情况下，约60℃至约90℃的沸点。在某些情况下，所述酸可以具有小于约15℃的熔点，在某些情况下，小于约10℃的熔点，或在某些情况下小于约0℃的熔点。在某些实施方案中，所述酸可以具有约-30℃至约0℃的熔点，或在某些情况下，约-20℃至约-10℃的熔点。

例如，至少部分地基于所述治疗剂在包含酸的溶剂中的溶解度，可以选择用在本文中公开的方法的纳米颗粒中的酸。例如，在某些实施方案中，溶解在包含酸的溶剂中的治疗剂可以具有约15mg/mL至约200mg/mL、约20mg/mL至约200mg/mL、约25mg/mL至约200mg/mL、约50mg/mL至约200mg/mL、约75mg/mL至约200mg/mL、约100mg/mL至约200mg/mL或约125mg/mL至约175mg/mL的溶解度。在某些实施方案中，溶解在包含酸的溶剂中的治疗剂可以具有大于约50mg/mL或大于约100mg/mL的溶解度。在某些实施方案中，与将治疗剂溶解在不含酸的溶剂(例如，由治疗剂和溶剂组成的第二溶液)中相比，溶解在包含酸的溶剂(例如，由治疗剂、溶剂和酸组成的第一溶液)中的治疗剂可以具有至少约2倍的溶解度，在某些实施方案中至少约5倍，在某些实施方案中至少约10倍，在某些实施方案中至少约20倍，在某些实施方案中约2倍至约20倍，或在某些实施方案中约10倍至约20倍。如在下面更详细地讨论的，药物溶液中酸的浓度可以是约1％至约10％，或在某些实施方案中约2.5％至约3.5％。

如在下面更详细地讨论的，在某些情况下，药物溶液(即，治疗剂溶液)中的酸的浓度可以是约1重量％至约10重量％，或在某些实施方案中约2.5重量％至约3.5重量％。在某些实施方案中，药物溶液中酸的浓度可以是至少约1重量％，在某些实施方案中是至少约2重量％，在某些实施方案中是至少约3重量％，在某些实施方案中是至少约10重量％。

在某些情况下，含有治疗剂的溶液可以与含有聚合物的溶液分开制备，然后可以在纳米颗粒配制之前组合两种溶液。例如，在一个实施方案中，第一溶液含有治疗剂和酸，且第二溶液含有聚合物和任选的酸。其中第二溶液不含有酸的制剂可以是有利的，例如，为了使在过程中使用的酸的量最小化，或在某些情况下，为了使酸和例如在有酸存在下可 以降解的聚合物之间的接触时间最小化。在其它情况下，可以制备含有治疗剂、聚合物和酸的单一溶液。

在某些实施方案中，所述酸可以具有在25℃测定的至少约100mg/100mL水、至少约1g/100mL水、至少约10g/100mL水或至少约50g/100mL水的溶解度。在其它实施方案中，所述酸可以具有在25℃测定的约100mg/100mL水至约1g/100mL水、约0.5g/100mL水至约2g/100mL水、约1g/100mL水至约10g/100mL水或约5g/100mL水至约50g/100mL水的溶解度。在某些实施方案中，所述酸可以在25℃与水混溶。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒可以基本上不含有在制备纳米颗粒过程中使用的酸。在其它实施方案中，公开的纳米颗粒可以包含酸。例如，在某些实施方案中，公开的纳米颗粒中的酸含量可以是约0.0001重量％至约0.5重量％、约0.001重量％至约0.5重量％、约0.01重量％至约0.5重量％、约0.1重量％至约0.5重量％、约0.0001重量％至约0.4重量％、约0.0001重量％至约0.3重量％、约0.0001重量％至约0.2重量％、约0.0001重量％至约0.1重量％、约0.0001重量％至约0.01重量％或约0.0001重量％至约0.001重量％。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒基本上立即释放(例如，历时约1分钟至约30分钟、约1分钟至约25分钟、约5分钟至约30分钟、约5分钟至约1小时、约1小时或约24小时)小于约2％、小于约5％、小于约10％、小于约15％、小于约20％、小于约25％或小于约30％的治疗剂，例如当置于在室温(例如，25℃)和/或在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时。在某些实施方案中，当置于例如在25℃和/或在37℃的水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液)中时，公开的包含治疗剂的纳米颗粒可以以基本上对应于在约1小时释放的治疗剂的下述百分比的速率释放治疗剂：约0.01至约50％，在某些实施方案中基本上对应于约0.01至约25％，在某些实施方案中基本上对应于约0.01至约15％，或在某些实施方案中基本上对应于约0.01至约10％。在某些实施方案中，当置于例如在25℃和/或在37℃的水溶液(例如，磷酸盐缓冲溶液)中时，公开的包含治疗剂的纳米颗粒可以以基本上对应于在约4小时释放的治疗剂的下述百分比的速率释放治 疗剂：约10至约70％，在某些实施方案中基本上对应于约10至约45％，在某些实施方案中基本上对应于约10至约35％，或在某些实施方案中基本上对应于约10至约25％。

在某些实施方案中，当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，公开的纳米颗粒可以基本上保留治疗剂，例如，持续至少约1分钟、至少约1小时或更久。

本文中公开的纳米颗粒包括一种、两种、三种或更多种生物相容的和/或可生物降解的聚合物。例如，预见到的纳米颗粒可以包括下述的一种或多种嵌段共聚物：约40至约99.8重量％，在某些实施方案中为约50至约99.8重量％，在某些实施方案中为约50至约99.5重量％，在某些实施方案中为约50至约98重量％，在某些实施方案中为约40至约94重量％，在某些实施方案中为约50至约94重量％，在某些实施方案中为约60至约96重量％，在某些实施方案中为约60至约85重量％，且在某些实施方案中为约65至约85重量％，所述嵌段共聚物包括可生物降解的聚合物和聚(乙二醇)(PEG)、和约0至约50重量％的可生物降解的均聚物。

公开的纳米颗粒可以包括治疗剂。例如，包含这样的纳米颗粒的组合物可以能够将有效量的治疗剂递送至例如患者的靶身体区域。任意合适的治疗剂可以用在公开的纳米颗粒中。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒可以包括约0.2至约35重量％、约0.2至约20重量％、约0.2至约10重量％、约0.2至约5重量％、约0.3至约5重量％、约0.4至约5重量％、约0.5至约5重量％、约0.75至约5重量％、约1至约5重量％、约2至约5重量％、约0.3至约3重量％、约0.4至约3重量％、约0.5至约3重量％、约0.75至约3重量％、约1至约3重量％、约2至约3重量％、约2至约10重量％、约2至约20重量％、约2至约30重量％、约3至约40重量％、约5至约15重量％、约5至约30重量％、约10至约30重量％、约15至25重量％、或甚至约4至约25重量％的治疗剂。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒包含酸，和/或通过包括酸的方法来制备。与通过不用酸的方法制备的纳米颗粒相比，这样的纳米颗粒 可以具有更高的药物负荷。例如，与通过不用酸的方法制备的公开的纳米颗粒相比，通过包含酸的方法制备的公开的纳米颗粒的药物负荷(例如，按重量计)可以是约2倍至约10倍。在某些实施方案中，与通过第二种方法制备的公开的纳米颗粒相比，通过包含酸的第一种方法制备的公开的纳米颗粒的药物负荷(按重量计)可以是至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍，其中除了所述第二种方法不包括酸以外，所述第二种方法与所述第一种方法相同。

在一个实施方案中，公开的治疗性纳米颗粒可以包括靶向配体(例如，低分子量PSMA配体)，所述靶向配体可有效地靶向或结合前列腺特异性的膜抗原。在某些实施方案中，所述低分子量配体缀合至聚合物，并且所述纳米颗粒包含特定比率的配体缀合的聚合物(例如，PLA-PEG-配体)与非官能化聚合物(例如，PLA-PEG或PLGA-PEG)。所述纳米颗粒可以具有优化比率的这两种聚合物，使得有效量的配体与用于治疗疾病或障碍(诸如癌症)的纳米颗粒相关联。例如，增加的配体密度可以增加靶结合(细胞结合/靶摄取)，使得纳米颗粒为“靶特异性的”。可替换地，在纳米颗粒中的某些浓度的非官能化聚合物(例如，非官能化的PLGA-PEG共聚物)可以控制炎症和/或免疫原性(即，引起免疫应答的能力)，和允许纳米颗粒具有适用于治疗疾病或障碍(例如，前列腺癌)的循环半衰期。另外，在某些实施方案中，非官能化聚合物可以降低经由网状内皮系统(RES)从循环系统中的清除速率。因而，非官能化聚合物可以提供具有以下特征的纳米颗粒：可以允许所述颗粒在施用后在身体中行进。在某些实施方案中，非官能化聚合物可以使其它方式高浓度的配体平衡，所述配体可以以其它方式加速受试者的清除，从而导致向靶细胞的更少递送。

在某些实施方案中，本文中公开的纳米颗粒可以包括与配体缀合的官能化聚合物，所述配体构成纳米颗粒的整个聚合物组合物(即，官能化聚合物+非官能化聚合物)的大约0.1-50摩尔％，例如，0.1-30摩尔％，例如，0.1-20摩尔％，例如，0.1-10摩尔％。在另一个实施方案中，本文还公开了这样的纳米颗粒：其包括与一个或多个低分子量配体缀合(例如，共价地(即通过连接基(linker)(例如，亚烷基连接基))或键)的聚 合物，其中低分子量配体相对于总聚合物而言的重量百分比是约0.001至5，例如约0.001至2，例如约0.001至1。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒可以能够有效地结合或以其它方式与生物实体(例如，特定膜组分或细胞表面受体)关联。对于治疗组织特异性的疾病诸如实体瘤癌症(例如，前列腺癌)而言，治疗剂的靶向(例如，靶向特定组织或细胞类型，靶向具体的患病组织、但是不靶向正常组织，等)是合乎需要的。例如，与细胞毒性的抗癌剂的全身递送相比，本文中公开的纳米颗粒可以基本上预防药剂杀死健康细胞。另外，公开的纳米颗粒可以允许施用较低剂量的药剂(与不用公开的纳米颗粒或制剂时施用的药剂的有效量相比)，这可以减少通常与传统化学疗法有关的不希望的副作用。

一般而言，“纳米颗粒”表示具有小于1000nm(例如，约10nm至约200nm)的直径的任何颗粒。公开的治疗性纳米颗粒可以包括具有约60至约120nm、或约70至约120nm、或约80至约120nm、或约90至约120nm、或约100至约120nm、或约60至约130nm、或约70至约130nm、或约80至约130nm、或约90至约130nm、或约100至约130nm、或约110至约130nm、或约60至约140nm、或约70至约140nm、或约80至约140nm、或约90至约140nm、或约100至约140nm、或约110至约140nm、或约60至约150nm、或约70至约150nm、或约80至约150nm、或约90至约150nm、或约100至约150nm、或约110至约150nm、或约120至约150nm的直径的纳米颗粒。

聚合物

在某些实施方案中，所述纳米颗粒可以包含聚合物的基质和治疗剂。在某些实施方案中，治疗剂和/或靶向部分(即，低分子量PSMA配体)可以与聚合物基质的至少部分结合。例如，在某些实施方案中，靶向部分(例如，配体)可以与聚合物基质的表面共价地结合。在某些实施方案中，共价结合由连接基介导。治疗剂可以与聚合物基质的表面结合、包封在聚合物基质中、被聚合物基质包围和/或分散遍及聚合物基质。

多种聚合物和用于从其形成颗粒的方法是药物递送领域已知的。在 某些实施方案中，公开内容涉及具有至少两种大分子的纳米颗粒，其中所述第一种大分子包含与低分子量配体(例如，靶向部分)结合的第一聚合物；且所述第二种大分子包含未与靶向部分结合的第二聚合物。纳米颗粒可以任选地包括一种或多种额外的非官能化聚合物。

任何合适的聚合物可以用在公开的纳米颗粒中。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是包含两个或更多个单体的均聚物或共聚物。就序列而言，共聚物可以是随机序列、嵌段序列或包含随机序列和嵌段序列的组合。通常，聚合物是有机聚合物。

本文中使用的术语“聚合物”被赋予本领域中使用的它的普通含义，即，包含通过共价键连接的一个或多个重复单元(单体)的分子结构。所述重复单元可以全部相同，或在某些情况下，在聚合物中可以存在超过一种类型的重复单元。在某些情况下，所述聚合物可以是生物学上衍生的，即，生物聚合物。非限制性例子包括肽或蛋白。在某些情况下，额外的部分也可以存在于聚合物中，例如生物学部分诸如下述那些。如果超过一种类型的重复单元存在于聚合物中，那么所述聚合物被称作“共聚物”。应当理解，在采用聚合物的任意实施方案中，在某些情况下采用的聚合物可以是共聚物。形成共聚物的重复单元可以以任何方式排列。例如，重复单元可以以随机的次序、以交替的次序排列或排列为嵌段共聚物，即，包含一个或多个各自包含第一重复单元(例如，第一嵌段)的区域和一个或多个各自包含第二重复单元(例如，第二嵌段)的区域等。嵌段共聚物可以具有两个(二嵌段共聚物)、三个(三嵌段共聚物)或更多数目的不同嵌段。

公开的颗粒可以包括共聚物，在某些实施方案中，所述共聚物描述了通常通过两种或更多种聚合物的共价键合而彼此已经结合到一起的两种或更多种聚合物(诸如本文描述的那些)。因而，共聚物可以包含第一聚合物和第二聚合物，它们已经缀合在一起以形成嵌段共聚物，其中所述第一聚合物可以是所述嵌段共聚物的第一嵌段，且所述第二聚合物可以是所述嵌段共聚物的第二嵌段。当然，本领域普通技术人员会理解，在某些情况下，嵌段共聚物可以含有聚合物的多个嵌段，并且本文中使用的“嵌段共聚物”不限于仅具有单一第一嵌段和单一第二嵌段的唯一嵌段 共聚物。例如，嵌段共聚物可以包含含有第一聚合物的第一嵌段、含有第二聚合物的第二嵌段和含有第三聚合物或所述第一聚合物的第三嵌段等。在某些情况下，嵌段共聚物可以含有任意数量的第一聚合物的第一嵌段和第二聚合物的第二嵌段(和在某些情况下，第三嵌段、第四嵌段等)。另外，应当指出，在某些情况下也可以从其它嵌段共聚物形成嵌段共聚物。例如，第一嵌段共聚物可以缀合至另一聚合物(它可以是均聚物、生物聚合物、另一嵌段共聚物等)以形成含有多种类型的嵌段的新嵌段共聚物，和/或缀合至其它部分(例如，缀合至非聚合部分)。

在某些实施方案中，所述聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)可以是两亲的，即，具有亲水部分和疏水部分、或相对亲水部分和相对疏水部分。亲水聚合物可以是通常吸引水的聚合物，疏水聚合物可以是通常排斥水的聚合物。可以如下鉴定亲水或疏水聚合物：例如，制备聚合物的样品并测量它与水的接触角(通常，亲水聚合物将具有小于60°的接触角，而疏水聚合物将具有大于约60°的接触角)。在某些情况下，可以相对于彼此来测量两种或更多种聚合物的亲水性，即，第一聚合物可以比第二聚合物更亲水。例如，第一聚合物可以具有比第二聚合物更小的接触角。

在一组实施方案中，本文预见到的聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)包括生物相容的聚合物，即，这样的聚合物：当它被插入或注射进入活的受试者中时，通常不诱导不利应答，例如没有显著的炎症和/或免疫系统对聚合物的急性排斥反应(例如，经由T-细胞应答)。因此，本文预见到的治疗性颗粒可以是非免疫原性的。本文中使用的术语非免疫原性的表示处于其天然状态的内源性生长因子，其通常不引起或仅引起最低水平的循环抗体、T-细胞或反应性免疫细胞，且其通常不在个体中引起针对其自身的免疫应答。

生物相容性通常表示免疫系统的至少一部分对材料的急性排斥反应，即，植入受试者中的非生物相容的材料会在所述受试者中引起免疫应答，所述免疫应答可以足够严重，使得免疫系统对所述材料的排斥不能被适当控制，且常常达到使得所述材料必须从所述受试者除去的程度。一个确定生物相容性的简单试验可以是：将聚合物在体外暴露于细胞； 生物相容的聚合物是这样的聚合物：其在适中浓度，例如，在50微克/10⁶细胞的浓度，通常不造成显著细胞死亡。例如，当将生物相容的聚合物暴露于细胞(诸如成纤维细胞或上皮细胞)时，甚至如果被所述细胞吞噬或以其它方式摄取，所述聚合物可以造成小于约20％的细胞死亡。可以在不同的实施方案中有用的生物相容的聚合物的非限制性例子包括聚二氧杂环己烷酮(PDO)、聚羟基烷酸酯、聚羟基丁酸酯、聚癸二酸甘油酯、聚乙醇酸交酯(即，聚乙醇酸)(PGA)、聚丙交酯(即，聚乳酸)(PLA)、聚乳酸-共聚-聚乙醇酸(PLGA)、聚己内酯或包括这些和/或其它聚合物的共聚物或衍生物。

在某些实施方案中，预见到的生物相容的聚合物可以是可生物降解的，即，所述聚合物在生理学环境中(诸如在体内)能够在化学上和/或生物学上降解。本文中使用的“可生物降解的”聚合物是这样的聚合物：当被引入细胞时，其通过细胞机构(生物学上可降解的)和/或通过化学过程(诸如水解)(化学上可降解的)分解成细胞可以再利用或除去的组分，而对细胞没有显著的毒性效应。在一个实施方案中，所述可生物降解的聚合物和它们的降解副产物可以是生物相容的。

本文中公开的颗粒可以含有或不含有PEG。此外，某些实施方案可以涉及含有聚(酯-醚)的共聚物，例如，具有通过酯键(例如，R-C(O)-O-R'键)和醚键(例如，R-O-R'键)连接的重复单元的聚合物。在某些实施方案中，含有羧酸基团的可生物降解的聚合物(诸如可水解的聚合物)可以与聚(乙二醇)重复单元缀合以形成聚(酯-醚)。含有聚(乙二醇)重复单元的聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)也可以被称作“聚乙二醇化的”聚合物。

例如，预见到的聚合物可以是在暴露于水(例如，在受试者内)后自发地水解的聚合物，所述聚合物在暴露于热(例如，在约37℃的温度)后可以降解。聚合物的降解可以以变化的速率发生，取决于使用的聚合物或共聚物。例如，聚合物的半衰期(50％的聚合物可以降解成单体和/或其它非聚合部分时的时间)可以是在数天、数周、数月或数年的量级，取决于聚合物。聚合物可以被生物地降解，例如，通过酶活性或细胞机构，在某些情况下，例如，通过暴露于溶菌酶(例如，具有相对较低的pH)。在 某些情况下，聚合物可以分解成单体和/或细胞可以再利用或除去的其它非聚合部分，而对细胞没有显著毒性效应(例如，聚丙交酯可以水解以形成乳酸，聚乙醇酸交酯可以水解以形成乙醇酸等)。

在某些实施方案中，聚合物可以是聚酯，包括含有乳酸和乙醇酸单元的共聚物，诸如聚乳酸-共聚-乙醇酸和聚丙交酯-共聚-乙交酯，在本文中共同地被称作“PLGA”；和包含乙醇酸单元的均聚物，在本文中被称作“PGA”，和乳酸单元，诸如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D,L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D,L-丙交酯，在本文中共同地被称作“PLA”。在某些实施方案中，示例性的聚酯包括、例如，聚羟基酸；丙交酯和乙交酯的聚乙二醇化的聚合物和共聚物(例如，聚乙二醇化的PLA、聚乙二醇化的PGA、聚乙二醇化的PLGA、及其衍生物)。在某些实施方案中，聚酯包括、例如，聚酸酐、聚(原酸酯)、聚乙二醇化的聚(原酸酯)、聚(己内酯)、聚乙二醇化的聚(己内酯)、聚赖氨酸、聚乙二醇化的聚赖氨酸、聚(乙烯亚胺)、聚乙二醇化的聚(乙烯亚胺)、聚(L-丙交酯-共聚-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]、及其衍生物。

在某些实施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是生物相容的和可生物降解的乳酸和乙醇酸的共聚物，并且通过乳酸:乙醇酸的比率来表征不同形式的PLGA。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D,L-乳酸。通过改变乳酸-乙醇酸比率，可以调节PLGA的降解速率。在某些实施方案中，通过大约85:15、大约75:25、大约60:40、大约50:50、大约40:60、大约25:75或大约15:85的乳酸:乙醇酸比率，可以表征PLGA。在某些实施方案中，可以选择在颗粒的聚合物(例如，PLGA嵌段共聚物或PLGA-PEG嵌段共聚物)中的乳酸与乙醇酸单体的比率以优化各种参数，例如可以优化水摄取、治疗剂释放和/或聚合物降解动力学。

在某些实施方案中，聚合物可以是一种或多种丙烯酸聚合物。在某些实施方案中，丙烯酸聚合物包括、例如，丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷酯共聚物、缩水甘油基甲基丙烯酸酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯和包含前述聚合物中的一种或多种的组合。所述丙烯酸聚合物可以包含丙烯酸和甲基丙烯酸酯(具有低含量的季铵基团)的完全聚合的共聚物。

在某些实施方案中，聚合物可以是阳离子聚合物。一般而言，阳离子聚合物能够缩合和/或保护核酸(例如，DNA、RNA或其衍生物)的带负电荷链。在某些实施方案中，预见到将含胺的聚合物诸如聚(赖氨酸)、聚乙烯亚胺(PEI)和聚(酰氨基胺)树枝状聚合物用在公开的颗粒中。

在某些实施方案中，聚合物可以是携带阳离子侧链的可降解的聚酯。这些聚酯的例子包括聚(L-丙交酯-共聚-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)和聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)。

预见到，PEG可以是封端的且包括端基，例如，当PEG没有缀合至配体时。例如，PEG可以用羟基、甲氧基或其它烷氧基、甲基或其它烷基、芳基、羧酸、胺、酰胺、乙酰基、胍基或咪唑封端。其它预见到的端基包括叠氮化物、炔烃、马来酰亚胺、醛、酰肼、羟胺、烷氧基胺或硫醇部分。

本领域普通技术人员会知道用于将聚合物PEG化的方法和技术，例如，通过使用EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)以使聚合物与以胺封端的PEG基团反应，通过开环聚合技术(ROMP)等。

在一个实施方案中，可以为本文中公开的有效治疗优化聚合物的分子量(或例如，诸如共聚物的不同嵌段的分子量的比率)。例如，聚合物的分子量可以影响颗粒降解速率(诸如当可生物降解的聚合物的分子量可以被调节时)、溶解度、水摄取和药物释放动力学。例如，可以调节聚合物的分子量(或例如，诸如共聚物的不同嵌段的分子量的比率)，使得颗粒在被治疗的受试者中在合理的时间段(从几小时到1-2周、3-4周、5-6周、7-8周等)内生物降解。公开的颗粒可以例如包含PEG和PL(G)A的二嵌段共聚物，其中例如，PEG部分可以具有约1,000-20,000的数均分子量，例如，约2,000-20,000，例如，约2至约10,000，且PL(G)A部分可以具有约5,000至约20,000、或约5,000-100,000的数均分子量，例如，约 20,000-70,000，例如，约15,000-50,000。

例如，这里公开了示例性的治疗性纳米颗粒，其包括约10至约99重量％的聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物，或约20至约80重量％、约40至约80重量％、或约30至约50重量％、或约70至约90重量％的聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物。示例性的聚乳酸-聚乙二醇共聚物可以包括数均分子量为约15至约20kDa、或约10至约25kDa的聚乳酸和数均分子量为约4至约6、或约2kDa至约10kDa的聚乙二醇。

在某些实施方案中，所述聚乳酸-聚乙二醇共聚物可以具有下述的聚乳酸数均分子量分数：约0.6至约0.95，在某些实施方案中约0.7至约0.9，在某些实施方案中约0.6至约0.8，在某些实施方案中约0.7至约0.8，在某些实施方案中约0.75至约0.85，在某些实施方案中约0.8至约0.9，且在某些实施方案中约0.85至约0.95。应当理解，可以如下计算聚乳酸数均分子量分数：将共聚物的聚乳酸组分的数均分子量除以聚乳酸组分的数均分子量和聚乙二醇组分的数均分子量的总和。

公开的纳米颗粒可以任选地包含约1至约50重量％的聚乳酸或聚乳酸-共聚-聚乙醇酸(其不包含PEG)，或可以任选地包含约1至约50重量％、或约10至约50重量％或约30至约50重量％的聚乳酸或聚乳酸-共聚-聚乙醇酸。例如，聚乳酸或聚乳酸-共聚-聚乙醇酸可以具有约5至约15kDa、或约5至约12kDa的数均分子量。示例性的PLA可以具有约5至约10kDa的数均分子量。示例性的PLGA可以具有约8至约12kDa的数均分子量。

在某些实施方案中，治疗性纳米颗粒可以含有下述的聚乙二醇：约10至约30重量％，在某些实施方案中为约10至约25重量％，在某些实施方案中为约10至约20重量％，在某些实施方案中为约10至约15重量％，在某些实施方案中为约15至约20重量％，在某些实施方案中为约15至约25重量％，在某些实施方案中为约20至约25重量％，在某些实施方案中为约20至约30重量％，或在某些实施方案中为约25至约30重量％，其中所述聚乙二醇可以作为聚乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物或聚乙二醇均聚物存在。

在某些实施方案中，纳米颗粒的聚合物可以缀合至脂质。例如，聚合物可以是脂质封端的PEG。如下描述，聚合物的脂质部分可以用于与另一种聚合物自装配，从而促进纳米颗粒的形成。例如，可以将亲水聚合物缀合至脂质，所述脂质将与疏水聚合物自装配。

在某些实施方案中，脂质是油。一般而言，可以将本领域已知的任何油缀合至在纳米颗粒中使用的聚合物。在某些实施方案中，油可以包含一个或多个脂肪酸基团或其盐。在某些实施方案中，脂肪酸基团可以包含可消化的、长链(例如，C₈-C₅₀)、被取代的或未被取代的烃。在某些实施方案中，脂肪酸基团可以是C₁₀-C₂₀脂肪酸或其盐。在某些实施方案中，脂肪酸基团可以是C₁₅-C₂₀脂肪酸或其盐。在某些实施方案中，脂肪酸可以是不饱和的。在某些实施方案中，脂肪酸基团可以是单不饱和的。在某些实施方案中，脂肪酸基团可以是多不饱和的。在某些实施方案中，不饱和脂肪酸基团的双键可以处于顺式构象。在某些实施方案中，不饱和脂肪酸基团的双键可以处于反式构象。

在某些实施方案中，脂肪酸基团可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸或木蜡酸中的一种或多种。在某些实施方案中，脂肪酸基团可以是棕榈油酸、油酸、异油酸、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、鳕烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥酸中的一种或多种。

在一个特定实施方案中，所述脂质具有式V：

和其盐，其中每个R独立地是C_1-30烷基。在式V的一个实施方案中，所述脂质是1,2二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、及其盐，例如，钠盐。

在一个实施方案中，任选的小分子靶向部分键合(例如，共价地键 合)至纳米颗粒的脂质组分。例如，本文提供了纳米颗粒，其包含治疗剂、含有官能化的和非官能化的聚合物的聚合物基质、任选的脂质和任选的低分子量PSMA靶向配体，其中所述靶向配体键合(例如，共价地键合)至纳米颗粒的脂质组分。在一个实施方案中，键合至低分子量靶向部分的脂质组分具有式V。在另一个实施方案中，提供了靶标特异性的纳米颗粒，其包含治疗剂、聚合物基质、DSPE和低分子量PSMA靶向配体，其中所述配体键合(例如，共价地键合)至DSPE。例如，纳米颗粒可以包含含有PLGA-DSPE-PEG-配体的聚合物基质。

靶向部分

本文提供了纳米颗粒，其可以包括任选的靶向部分，即，能够结合至生物实体或以其它方式与生物实体结合的部分，所述生物实体是例如膜组分、细胞表面受体、前列腺特异性的膜抗原等。在颗粒表面上存在的靶向部分可以允许颗粒定位在特定靶向位点，例如，肿瘤、患病部位、组织、器官、一类细胞等。这样，然后所述纳米颗粒可以是“靶特异性的”。在某些情况下，然后药物或其它有效负荷(payload)可以从颗粒中释放并且被允许与特定靶向位点局部地相互作用。

在一个实施方案中，公开的纳米颗粒包含靶向部分，所述靶向部分是低分子量配体，例如，低分子量PSMA配体。本文中使用的术语“结合”表示一对相应的分子或其部分之间的相互作用，所述分子或其部分之间展示相互的亲和力或结合能力，通常由于特异性的或非特异性的结合或相互作用，包括但不限于生物化学、生理学和/或化学相互作用。“生物学结合”定义了相互作用的类型，所述相互作用发生在分子(包括蛋白、核酸、糖蛋白、碳水化合物、激素等)对之间。术语“结合配偶体”表示可以经历与特定分子结合的分子。“特异性结合”表示能够结合或识别结合配偶体(或有限数量的结合配偶体)的分子(诸如多核苷酸)，达到与对其它相似生物实体相比基本上更高的程度。在一组实施方案中，所述靶向部分具有小于约1微摩尔、至少约10微摩尔或至少约100微摩尔的亲和力(如通过解离常数所测得的)。

例如，靶向部分可以使得颗粒定位于受试者体内的肿瘤(例如实体 瘤)、患病部位、组织、器官、一类细胞等，这取决于使用的靶向部分。例如，低分子量PSMA配体可以定位至实体瘤，例如乳腺或前列腺肿瘤或癌细胞。所述受试者可以是人或非人动物。受试者的例子包括、但不限于哺乳动物诸如狗、猫、马、驴、兔、牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、灵长类动物、人等。

预见到的靶向部分可以包括小分子。在某些实施方案中，术语“小分子”表示这样的有机化合物：无论是天然存在的还是人工产生的(例如，经由化学合成)，其具有相对较低的分子量且不是蛋白、多肽或核酸。小分子通常具有多个碳-碳键。在某些实施方案中，小分子的尺寸小于约2000g/mol。在某些实施方案中，小分子小于约1500g/mol或小于约1000g/mol。在某些实施方案中，小分子小于约800g/mol或小于约500g/mol，例如约100g/mol至约600g/mol，或约200g/mol至约500g/mol。

例如，靶向部分可以靶向前列腺癌肿瘤，例如靶向部分可以是PSMA肽酶抑制剂。这些部分在本文中也被称作“低分子量PSMA配体”。当与正常组织中的表达相比较时，前列腺特异性的膜抗原(PSMA)在恶性前列腺中的表达相对于正常组织过表达至少10倍，并且PSMA表达的水平随着疾病发展至转移期而进一步上调(Silver等人1997,Clin.Cancer Res.,3:81)。

在某些实施方案中，所述低分子量PSMA配体具有式I、II、III或IV：

及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋体；

其中m和n各自独立地是0、1、2或3；p是0或1；

R¹、R²、R⁴和R⁵各自独立地选自被取代的或未被取代的烷基(例如，C_1-10-烷基、C_1-6-烷基或C_1-4-烷基)、被取代的或未被取代的芳基(例如，苯基或吡啶基)和它们的任意组合；且R³是H或C_1-6-烷基(例如，CH₃)。

对于式I、II、III和IV的化合物，R¹、R²、R⁴或R⁵包含连接至纳米颗粒的点，例如，连接至聚合物(其形成公开的纳米颗粒的部分，例如，PEG)的点。连接点可以通过下述键形成：共价键、离子键、氢键、通过吸附(包括化学吸附和物理吸附)形成的键、通过范德华键形成的键或色散力。例如，如果R¹、R²、R⁴或R⁵被定义为苯胺或C_1-6-烷基-NH₂基团，这些官能团的任意氢(例如，氨基氢)可以被除去，使得低分子量PSMA配体共价结合至纳米颗粒的聚合物基质(例如，聚合物基质的PEG-嵌段)。本文中使用的术语“共价键”表示两个原子之间通过共享至少一对电子所形成的键。

在式I、II、III或IV的特定实施方案中，R¹、R²、R⁴和R⁵各自独立地是C_1-6-烷基或苯基、或C_1-6-烷基或苯基的任意组合，其独立地被OH、SH、NH₂或CO₂H取代一次或更多次，且其中所述烷基基团可以被N(H)、S或O隔断。在另一个实施方案中，R¹、R²、R⁴和R⁵各自独立地是CH₂-Ph、(CH₂)₂-SH、CH₂-SH、(CH₂)₂C(H)(NH₂)CO₂H、CH₂C(H)(NH₂)CO₂H、CH(NH₂)CH₂CO₂H、(CH₂)₂C(H)(SH)CO₂H、CH₂-N(H)-Ph、O-CH₂-Ph或O-(CH₂)₂-Ph，其中每个Ph可以独立地被OH、NH₂、CO₂H或SH取代一次或更多次。对于这些式，所述NH₂、OH或SH基团充当与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG、-O-PEG或-S-PEG)。

在另一个实施方案中，所述低分子量PSMA配体选自：

及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋体，且其中所述NH₂、OH或SH基团充当与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG、-O-PEG或-S-PEG)。

在另一个实施方案中，所述低分子量PSMA配体选自：

及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋体，其中R独立地选自NH₂、SH、OH、CO₂H、被NH₂、SH、OH或CO₂H取代的C_1-6-烷基，和被NH₂、SH、OH或CO₂H取代的苯基，且其中R充当与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG、-S-PEG、-O-PEG或CO₂-PEG)。

在另一个实施方案中，所述低分子量PSMA配体选自：

及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋体，其中所述NH₂或CO₂H基团充当与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG或CO₂-PEG)。这些化合物可以进一步被下述基团取代：NH₂、SH、OH、CO₂H、被NH₂、SH、OH或CO₂H取代的C_1-6-烷基、或被NH₂、SH、OH或CO₂H取代的苯基，其中这些官能团还可充当与纳米颗粒的共价连接点。

在另一个实施方案中，所述低分子量PSMA配体是

及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映 异构体或外消旋体，其中n是1、2、3、4、5或6。对于该配体，NH₂基团充当与纳米颗粒的共价连接点(例如，-N(H)-PEG)。

在另一个实施方案中，所述低分子量PSMA配体是

及其对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、非对映异构体或外消旋体。具体地，丁胺化合物具有易于合成的优势，特别是因为它缺少苯环。此外，不希望受理论的约束，所述丁胺化合物将可能分解成天然存在的分子(即，赖氨酸和谷氨酸)，由此使毒性影响最小化。

在某些实施方案中，可以用于靶向与实体瘤(诸如前列腺或乳腺癌肿瘤)有关的细胞的小分子靶向部分包括PSMA肽酶抑制剂诸如2-PMPA、GPI5232、VA-033、苯基烷基膦酰胺(phenylalkylphosphonamidate)和/或其类似物和衍生物。在某些实施方案中，可以用于靶向与前列腺癌肿瘤有关的细胞的小分子靶向部分包括硫醇和吲哚硫醇衍生物，诸如2-MPPA和3-(2-巯基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸衍生物。在某些实施方案中，可以用于靶向与前列腺癌肿瘤有关的细胞的小分子靶向部分包括氧肟酸盐衍生物。在某些实施方案中，可以用于靶向与前列腺癌肿瘤有关的细胞的小分子靶向部分包括基于PBDA和脲的抑制剂(诸如ZJ 43、ZJ 11、ZJ 17、ZJ 38和/或其类似物和衍生物)、雄激素受体靶向试剂(ARTA)、多胺(诸如腐胺、精胺和精脒)、酶谷氨酸羧化酶II(GCPII)的抑制剂(也被称作NAAG肽酶或NAALAD酶)。

在另一个实施方案中，所述靶向部分可以是靶向Her2、EGFR、叶酸盐受体或toll受体的配体。在另一个实施方案中，所述靶向部分是叶酸盐、叶酸或EGFR结合分子。

例如，预见到所述靶向部分可以包括核酸、多肽、糖蛋白、碳水化合物或脂质。例如，靶向部分可以是结合至细胞类型特异性标志物的核酸靶向部分(例如适体，例如，A10适体)。一般而言，适体是结合至特定 靶标(诸如多肽)的寡核苷酸(例如，DNA、RNA或类似物或其衍生物)。在某些实施方案中，靶向部分可以是细胞表面受体的天然存在的或合成的配体，例如，生长因子、激素、LDL、转铁蛋白等。靶向部分可以是抗体，该术语意图包括抗体片段，抗体的特征部分。可以例如使用操作诸如噬菌体展示来鉴定单链靶向部分。

靶向部分可以是具有至多约50个残基的长度的靶向肽或靶向肽拟似物。例如，靶向部分可以包括氨基酸序列AKERC、CREKA、ARYLQKLN或AXYLZZLN，其中X和Z是可变氨基酸或其保守变体或肽拟似物。在特定实施方案中，所述靶向部分是包括氨基酸序列AKERC、CREKA、ARYLQKLN或AXYLZZLN的肽，其中X和Z是可变氨基酸，并且具有小于20、50或100个残基的长度。还预见到CREKA(Cys Arg Glu LysAla)肽或其肽拟似物或八肽AXYLZZLN作为靶向部分，以及肽或其保守变体或肽拟似物(其结合胶原IV或与其形成复合物，或靶向组织基膜(例如，血管的基膜))可以用作靶向部分。示例性靶向部分包括靶向ICAM(细胞间粘附分子，例如ICAM-1)的肽。

在某些实施方案中，本文中公开的靶向部分可以缀合至公开的聚合物或共聚物(例如，PLA-PEG)，并且这样的聚合物缀合物可以形成公开的纳米颗粒的部分。

在某些实施方案中，治疗性纳米颗粒可以包括聚合物-药物缀合物。例如，药物可以缀合至公开的聚合物或共聚物(例如，PLA-PEG)，并且这样的聚合物-药物缀合物可以形成公开的纳米颗粒的部分。例如，公开的治疗性纳米颗粒可以任选地包括约0.2至约30重量％的PLA-PEG或PLGA-PEG，其中所述PEG被药物官能化(例如，PLA-PEG-药物)。

使用任意合适的缀合技术，可以形成公开的聚合的缀合物。例如，使用技术诸如EDC-NHS化学(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺)或涉及马来酰亚胺或羧酸(其可以缀合至硫醇、胺或类似地官能化的聚醚的一端)的反应，可以将两种化合物(诸如靶向部分或药物和生物相容的聚合物(例如，生物相容的聚合物和聚(乙二醇))缀合到一起。靶向部分或药物和聚合物的形成聚合物-靶向部分缀合物或聚合物-药物缀合物的缀合可以在有机溶剂(例如，但不限于，二 氯甲烷、乙腈、氯仿、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、丙酮等)中进行。使用不超过例行实验，本领域普通技术人员可以确定具体的反应条件。

在另一组实施方案中，通过使包含羧酸官能团(例如，聚(酯-醚)化合物)的聚合物与聚合物或包含胺的其它部分(诸如靶向部分或药物)反应，可以进行缀合反应。例如，靶向部分，诸如低分子量PSMA配体，或药物，诸如达沙替尼，可以与胺反应以形成含胺的部分，然后可以将所述含胺的部分缀合至聚合物的羧酸。这样的反应可以作为单步反应出现，即，不使用中间体诸如N-羟基琥珀酰亚胺或马来酰亚胺进行所述缀合。在某些实施方案中，可以使药物与含胺的连接基反应以形成含胺的药物，然后可以将其缀合至如上所述的聚合物的羧酸。在一组实施方案中，通过将含胺的部分加入到含有羧酸封端的聚合物的溶液中，可以实现含胺的部分和所述羧酸封端的聚合物(诸如聚(酯-醚)化合物)之间的缀合反应，其溶解在有机溶剂诸如(但不限于)二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氢呋喃、丙酮、甲酰胺、二甲基甲酰胺、吡啶、二氧杂环己烷或二甲基亚砜中。所述羧酸封端的聚合物可以被包含在有机溶剂(例如，但不限于，二氯甲烷、乙腈、氯仿、二甲基甲酰胺、四氢呋喃或丙酮)中。在某些情况下，在含胺的部分和羧酸封端的聚合物之间的反应可以自发地发生。可以在这样的反应之后洗掉未缀合的反应物，并且所述聚合物可以沉淀在溶剂(例如，乙醚、己烷、甲醇或乙醇)中。在某些实施方案中，可以在含醇的部分和聚合物的羧酸官能团之间形成缀合物，这可以与上面关于胺和羧酸的缀合物所述类似地实现。

作为一个具体实施例，可以如下将低分子量PSMA配体制备为颗粒中的靶向部分。可以将羧酸改性的聚丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA-COOH)缀合至胺改性的异双功能聚(乙二醇)(NH₂-PEG-COOH)以形成PLGA-PEG-COOH的共聚物。通过使用胺改性的低分子量PSMA配体(NH₂-Lig)，通过将PEG的羧酸端缀合至配体上的胺官能团，可以形成PLGA-PEG-Lig的三嵌段聚合物。然后可以使用多嵌段聚合物，例如，如下面讨论的，例如，用于治疗用途。

纳米颗粒

公开的纳米颗粒可以是稳定的(例如保留基本上所有的治疗剂)，例如 在室温或在25℃在可以含有糖的溶液中保持稳定至少约3天、约4天或至少约5天。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒还可以包括脂肪醇，其可以增加药物释放的速率。例如，公开的纳米颗粒可以包括C₈-C₃₀醇诸如鲸蜡醇、辛烷醇、硬脂醇、花生醇、山嵛醇(docosonal)或二十八烷醇(octasonal)。

纳米颗粒可以具有控释特性，例如，在延长的时间段，例如在1天、1周或更长的时间，可以能够将一定量的活性剂递送至患者，例如，患者的特定部位。

在某些实施方案中，在将公开的纳米颗粒或包含公开的纳米颗粒的组合物施用给受试者或患者之后，相对于如果单独施用的治疗剂(例如，不作为纳米颗粒的一部分)的C_max而言，治疗剂在所述患者中的峰血浆浓度(C_max)基本上更高。

在另一个实施方案中，相对于单独施用的治疗剂的t_max而言，当将含有治疗剂的公开的纳米颗粒施用给受试者时，所述治疗剂可以具有基本上更长的治疗剂的t_max。

也可以形成这样的颗粒库。例如，通过改变所述颗粒中的两种(或更多种)聚合物的比率，这些库可以用于筛选试验、高通量测定等。通过诸如上面描述的那些特性，库内的实体(Entities)可以变化，且在某些情况下，所述颗粒的一种以上特性可以在库内变化。因此，一个实施方案涉及含有不同比率的具有不同特性的聚合物的纳米颗粒的库。所述库可以包括任意合适的比率的聚合物。

在某些实施方案中，所述生物相容的聚合物是疏水聚合物。生物相容的聚合物的非限制性例子包括聚丙交酯、聚乙醇酸交酯和/或聚丙交酯-共聚-乙交酯。

在不同的实施方案中，本公开内容提供了纳米颗粒，其包含1)聚合物基质；2)任选的两亲化合物或层，其包围所述聚合物基质或分散在所述聚合物基质中，从而形成所述颗粒的连续或不连续壳；3)非官能化聚合物，其可以形成聚合物基质的一部分，和4)任选的共价结合至聚合物的低分子量配体(其结合靶蛋白缀合物诸如PSMA)，其可以形成聚合 物基质的一部分。例如，两亲的层可以减少穿透进入纳米颗粒的水，由此增强药物包封效率和减慢药物释放。

本文中使用的术语“两亲的”表示其中分子具有极性部分和非极性部分的特性。经常，两亲的化合物具有连接至长疏水尾巴的极性头。在某些实施方案中，极性部分可溶于水，而非极性部分不溶于水。此外，所述极性部分可以具有形式正电荷或形式负电荷。可替换地，所述极性部分可以具有形式正电荷和形式负电荷，并且是两性离子或内盐。在某些实施方案中，所述两亲化合物可以是、但不限于下述的一种或多种：天然衍生的脂质、表面活性剂、或具有亲水部分和疏水部分的合成化合物。

两亲化合物的具体例子包括、但不限于：磷脂，诸如1,2二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二花生四烯酰基磷脂酰胆碱(DAPC)、二山嵛酰基磷脂酰胆碱(DBPC)、双二十三酰基磷脂酰胆碱(DTPC)和二亚油酰磷脂酰胆碱(dilignoceroylphatidylcholine)(DLPC)，其以0.01-60(重量脂质/w聚合物)、最优选0.1-30(重量脂质/w聚合物)的比率掺入。可以使用的磷脂包括、但不限于：磷脂酸、具有饱和和不饱和脂质的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰衍生物、心磷脂和β-酰基-y-烷基磷脂。磷脂的例子包括、但不限于：磷脂酰胆碱诸如二油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱、双十五酰基磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二花生四烯酰基磷脂酰胆碱(DAPC)、二山嵛酰基磷脂酰胆碱(DBPC)、双二十三酰基磷脂酰胆碱(DTPC)、二亚油酰磷脂酰胆碱(DLPC)；和磷脂酰乙醇胺诸如二油酰基磷脂酰乙醇胺或1-十六烷基-2-棕榈酰甘油磷酸乙醇胺。也可以使用具有不对称酰基链(例如，具有一个6碳的酰基链和另一个12碳的酰基链)的合成磷脂。

在一个特定实施方案中，可以用于形成两亲层的两亲组分是卵磷脂，和，具体地是磷脂酰胆碱。卵磷脂是两亲脂质，并且这样形成磷脂双层，其具有面向它们的环境的亲水(极性)头(其时常是水性的)和彼此相对的疏水尾巴。卵磷脂具有为可得自例如大豆的天然脂质的优点，并且已经获得FDA批准用于其它递送装置。此外，脂质诸如卵磷脂的混合物比单 一纯脂质更有利。

在某些实施方案中，公开的纳米颗粒具有两亲的单层，意指所述层不是磷脂双层，而是作为围绕纳米颗粒或在纳米颗粒内的单个连续或不连续层存在。所述两亲的层与纳米颗粒“结合”，意指它位于聚合物基质附近，诸如包围聚合壳的外部或分散在构成纳米颗粒的聚合物中。

纳米颗粒的制备

本公开内容的另一个方面涉及制备公开的纳米颗粒的系统和方法。在某些实施方案中，以不同的比率使用两种或更多种不同的聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)和从所述聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)产生颗粒，控制所述颗粒的特性。例如，一种聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)可以包括低分子量PSMA配体，而为了它的生物相容性和/或它的控制所得颗粒的免疫原性的能力可以选择另一种聚合物(例如，共聚物，例如，嵌段共聚物)。

在某些实施方案中，在纳米颗粒制备方法(例如，如下面讨论的纳米沉淀方法或纳米乳液方法)中使用的溶剂可以包括酸，其可以给使用所述方法制备的纳米颗粒赋予有利特性。如以上所讨论的，在某些情况下，所述酸可以提高公开的纳米颗粒的药物负荷。此外，在某些情况下，通过使用所述酸，可以改善公开的纳米颗粒的控释特性。在某些情况下，可以将所述酸包含在例如所述方法所用的有机溶液或水溶液中。在一个实施方案中，将所述药物(即，治疗剂)与有机溶液和酸和任选的一种或多种聚合物组合。用于溶解药物的溶液中的酸浓度可以是例如约0.5重量％至约10重量％、约2重量％至约10重量％、约5重量％至约10重量％、约1.5重量％至约5重量％、约2重量％至约5重量％或约2.5重量％至约3.5重量％。在一个实施方案中，所述有机溶液中的酸浓度可以是至少约3重量％。在某些实施方案中，药物溶液中酸的浓度可以是至少约1重量％，在某些实施方案中是至少约2重量％，在某些实施方案中是至少约3重量％，在某些实施方案中是至少约10重量％。

在一组实施方案中，通过提供包含一种或多种聚合物的溶液，并使所述溶液与聚合物非溶剂接触以产生颗粒，形成所述颗粒。所述溶液可 以是与所述聚合物非溶剂可混溶的或不可混溶的。例如，水可混溶的液体诸如乙腈可以含有所述聚合物，且随着乙腈与水、聚合物非溶剂接触(例如，通过以受控的速率将乙腈倾倒进水中)而形成颗粒。包含在溶液中的聚合物在与聚合物非溶剂接触后，然后可以沉淀以形成颗粒诸如纳米颗粒。在环境温度和压力，当一种液体不溶于另一种的程度为至少10重量％时，两种液体被称为彼此“不可混溶”或不混溶。通常，有机溶液(例如，二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氢呋喃、丙酮、甲酰胺、二甲基甲酰胺、吡啶、二氧杂环己烷、二甲基亚砜等)和含水液体(例如，水或含有溶解的盐或其它物质的水、细胞或生物学介质、乙醇等)彼此不可混溶。例如，可以将第一溶液倒入第二溶液中(以合适的速率或速度)。在某些情况下，随着第一溶液接触不可混溶的第二种液体，可以形成颗粒诸如纳米颗粒，例如，当将第一溶液倒入第二种液体中时，在接触后的聚合物沉淀导致聚合物形成纳米颗粒，和在某些情况下，例如，当引入的速率受到小心地控制和保持在相对慢的速率时，纳米颗粒可以形成。仅仅使用例行实验，本领域普通技术人员可以容易地优化控制这样的颗粒形成。

使用公开的方法，可以高度地控制特性诸如表面官能性、表面电荷、尺寸、zeta(ζ)电位、疏水性、控制免疫原性的能力等。例如，可以合成颗粒的库，并筛选以鉴别具有特定比率的聚合物的颗粒，所述聚合物允许所述颗粒具有存在于所述颗粒的表面上的特定密度的部分(例如，低分子量PSMA配体)。这允许制备具有一种或多种具体特性的颗粒，例如，具体的尺寸和具体的表面密度的部分，而无需过度的劳动。因此，某些实施方案涉及使用这样的库的筛选技术，以及使用这样的库鉴别出的任意颗粒。此外，可以通过任意合适的方法来鉴别。例如，鉴别可以是直接的或间接的，或定量地或定性地进行。

在某些实施方案中，使用与关于生产配体官能化的聚合的缀合物所描述的那些操作类似的操作，用靶向部分使已经形成的纳米颗粒官能化。例如，将第一共聚物(PLGA-PEG、聚丙交酯-共聚-乙交酯和聚(乙二醇))与治疗剂混合以形成颗粒。然后，所述颗粒与低分子量配体结合以形成可以用于治疗癌症的纳米颗粒。所述颗粒可以与不同量的低分子量配体结合从而控制所述纳米颗粒的配体表面密度，由此改变所述纳米颗粒的 治疗特征。另外，例如，通过控制参数诸如分子量、PEG的分子量和纳米颗粒表面电荷，可以获得非常精确地控制的颗粒。

在另一个实施方案中，提供了纳米乳液方法，诸如图2、3A和3B中所示的方法。例如，治疗剂、酸、第一聚合物(例如，二嵌段共聚物诸如PLA-PEG或PLGA-PEG，其中任一种可以任选地结合至配体)和任选的第二聚合物(例如，(PL(G)A-PEG或PLA)可以与有机溶液组合以形成第一有机相。这样的第一相可以包括约1至约50重量％的固体、约5至约50重量％的固体、约5至约40重量％的固体、约1至约15重量％的固体或约10至约30重量％的固体。所述第一有机相可以与第一水溶液组合以形成第二相。所述有机溶液可以包括，例如，甲苯、甲基乙基酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、乙酸异丙酯、二甲基甲酰胺、亚甲基二氯、二氯甲烷、氯仿、丙酮、苯甲醇、吐温80、司盘80等和它们的组合。在一个实施方案中，所述有机相可以包括苯甲醇、乙酸乙酯和它们的组合。所述第二相可以是约0.1至50重量％的固体、约1至50重量％的固体、约5和40重量％的固体或约1和15重量％的固体。所述水溶液可以是水，任选地与胆酸钠、乙酸乙酯、聚乙酸乙烯酯和苯甲醇中的一种或多种组合。

例如，油或有机相可以使用仅与非溶剂(水)部分混溶的溶剂。因此，当以足够低的比率混合时和/或当使用以有机溶剂预饱和的水时，所述油相保持液体。使用例如高能量分散体系统，诸如匀浆器或超声破碎器，所述油相可以被乳化成水溶液，和作为液体微滴剪切进入纳米颗粒中。乳液的水性部分(另外被称作“水相”)可以是由胆酸钠组成的表面活性剂溶液，并且被乙酸乙酯和苯甲醇预饱和。

乳化第二相以形成乳相，可以在例如一个或两个乳化步骤中进行。例如，可以制备初级乳状液，然后乳化以形成细乳液。例如，使用简单混合、高压匀浆器、探头超声破碎器、搅拌棒或转子-定子式匀浆器，可以形成初级乳状液。通过使用例如探头超声破碎器或高压匀浆器，例如通过使用穿过匀浆器1、2、3次或更多次，可以使初级乳状液形成为细乳液。例如，当使用高压匀浆器时，使用的压力可以是约1000至约8000psi、约2000至约4000psi、约4000至约8000psi、或约4000至约5000 psi，例如，约2000、2500、4000或5000psi。

可以需要溶剂蒸发或稀释以完成溶剂的提取和固化所述颗粒。为了对提取的动力学的更佳控制和更加规模升级(scalable)的方法，可以使用经由水性淬灭的溶剂稀释。例如，可以将乳液稀释进冷水中至足以溶解全部有机溶剂以形成淬灭相的浓度。在某些实施方案中，淬灭可以至少部分地在约5℃或更低的温度进行。例如，在淬灭中使用的水可以处于低于室温的温度(例如，约0至约10℃，或约0至约5℃)。

在某些实施方案中，在该阶段并非全部治疗剂都被包封在颗粒中，并且将药物增溶剂加入到淬灭相中以形成增溶相。所述药物增溶剂可以是例如，吐温80、吐温20、聚乙烯吡咯烷酮、环葡聚糖、十二烷基硫酸钠、胆酸钠、二乙基亚硝胺、醋酸钠、脲、甘油、丙二醇、糖原质、聚乙二醇、三(聚氧乙烯二醇)十二烷基醚、苯甲酸钠、水杨酸钠或它们的组合。例如，可以将吐温-80加入到淬灭的纳米颗粒悬浮液中以溶解游离药物和预防药物晶体的形成。在某些实施方案中，药物增溶剂与治疗剂的比率是约200:1至约10:1，或在某些实施方案中是约100:1至约10:1。

可以过滤增溶相以回收纳米颗粒。例如，可以使用超滤膜来浓缩纳米颗粒悬浮液和基本上消除有机溶剂、游离药物(即，未包封的治疗剂)、药物增溶剂和其它加工助剂(表面活性剂)。可以使用切向流过滤系统进行示例性的过滤。例如，通过使用具有适宜保留纳米颗粒而允许溶质、胶束和有机溶剂穿过的孔径的膜，可以选择性地分离纳米颗粒。可以使用具有约300-500kDa(～5-25nm)的分子量截止值(cut-offs)的示例性膜。

可以使用恒定体积方案进行渗滤，意指可以将渗滤液(冷去离子水，例如，约0至约5℃、或0至约10℃)以与从悬浮液除去滤液的速率相同的速率加入到进料悬浮液中。在某些实施方案中，过滤可以包括使用约0至约5℃、或0至约10℃的第一温度以及约20至约30℃、或15至约35℃的第二温度的第一过滤。在某些实施方案中，过滤可以包括处理约1至约30个透析体积，在某些情况下，约1至约15个透析体积，或在某些情况下，1至约6个透析体积。例如，过滤可以包括在约0至约5℃处理约1至约30个透析体积，或在某些情况下，约1至约6个透析体积，和在约20至约30℃处理至少一个透析体积(例如，约1至约15、约1至约 3、或约1至约2个透析体积)。在某些实施方案中，过滤包括在不同的特殊温度处理不同透析体积。

在纯化和浓缩纳米颗粒悬浮液以后，可以使所述颗粒穿过一个、二个或更多个灭菌过滤器和/或深层过滤器，例如，使用～0.2μm深层预过滤器。例如，无菌过滤步骤可以包括在受控的速率使用过滤串过滤治疗性纳米颗粒。在某些实施方案中，所述过滤串可以包括深层过滤器和无菌过滤器。

在制备纳米颗粒的另一个实施方案中，有机相由治疗剂、酸和聚合物(均聚物、共聚物和含有配体的共聚物)的混合物组合形成。所述有机相以大约1:5比率(油相:水相)与水相混合，其中所述水相由表面活性剂和一些溶解的溶剂组成。通过在简单混合下或通过使用转子-定子式匀浆器将两相组合，形成初级乳状液。然后，通过使用高压匀浆器，使所述初级乳状液形成为细乳液。然后，通过在混合下加入到去离子水中，淬灭细乳液。在某些实施方案中，淬灭液:乳液比率可以是约2:1至约40:1，或在某些实施方案中是约5:1至约15:1。在某些实施方案中，淬灭液:乳液比率是大约8.5:1。然后，将吐温(例如，吐温80)的溶液加入到淬灭液中以达到总共大约2％吐温。这用以溶解游离的、未包封的治疗剂。然后通过离心或超滤/渗滤，分离纳米颗粒。

应当理解，用于制备制剂的聚合物、治疗剂和酸的量可以不同于最终制剂。例如，一些治疗剂可能不会完全掺入纳米颗粒中，并且这样的游离治疗剂可以例如被过滤掉。例如，在一个实施方案中，可以使用在含有约1％酸的有机溶液中的约30重量％的治疗剂和约70重量％的聚合物(例如，聚合物可以包含约2.5mol％的与聚合物缀合的靶向部分和约97.5mol％的PLA-PEG)来制备制剂，所述制剂产生例如约2.5重量％治疗剂、约97.5重量％聚合物(其中所述聚合物可以包括约1.25mol％的与聚合物缀合的靶向部分和约98.75mol％的PLA-PEG)和小于约0.5％酸的最终纳米颗粒。这样的方法可以提供适合用于施用给患者的最终纳米颗粒，其包含约1至约20重量％的治疗剂，例如，约1、约2、约3、约4、约5、约8、约10或约15重量％的治疗剂。

治疗剂

如以上所讨论的，可以使用公开的方法在纳米颗粒中配制任意合适的治疗剂。这样的颗粒可以在例如这样的实施方案中有用：其中靶向部分可以用于将含有药物的颗粒引导至受试者内的特定局部位置，例如，以允许发生药物的局部递送。在一组实施方案中，可以使用超过一种治疗剂的组合。示例性的治疗剂包括化学治疗剂诸如Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂(例如，伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼、波舒替尼、普纳替尼和巴氟替尼)、多柔比星(阿霉素)、吉西他滨(健择)、柔红霉素、丙卡巴肼、丝裂霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、甲氨蝶呤、长春瑞滨(venorelbine)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春花生物碱诸如长春碱或长春新碱；博来霉素、紫杉醇(泰素)、多西他赛(泰索帝)、卡巴他赛、阿地白介素、天门冬酰胺酶、白消安、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、CPT-11、10-羟基-7-乙基喜树碱(SN38)、达卡巴嗪、S-I卡培他滨、替加氟、5'去氧氟尿苷(5'deoxyflurouridine)、优福定(UFT)、恩尿嘧啶、脱氧胞苷、5-氮杂胞嘧啶、5-氮杂脱氧胞嘧啶、别嘌呤醇、2-氯腺苷、三甲曲沙、氨基蝶呤、亚甲基-10-脱氮氨基蝶呤(MDAM)、奥沙利铂(oxaplatin)、吡铂、四铂、沙铂、铂-DACH、奥马铂、CI-973、JM-216、及其类似物、表柔比星、磷酸依托泊苷、9-氨基喜树碱、10,11-亚甲基二氧基喜树碱、卡仑尼替星(karenitecin)、9-硝基喜树碱、TAS 103、长春地辛、L-苯丙氨酸芥、ifosphamidemefosphamide、培磷酰胺、氯乙环磷酰胺卡莫司汀、司莫司汀、埃博霉素A-E、拓优得、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、安吖啶、磷酸依托泊苷、卡仑尼替星、阿昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、金刚烷胺、金刚乙胺、拉米夫定、齐多夫定、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗、5-氟尿嘧啶、和它们的组合。

潜在合适的组合药物的非限制性例子包括抗癌剂，包括、例如，卡巴他赛、米托蒽醌和盐酸米托蒽醌。在另一个实施方案中，所述有效负荷可以是抗癌药物诸如20-epi-1,25二羟基维生素D3、4-甘薯苦醇、5-乙炔基尿嘧啶、9-二氢泰素、阿比特龙、阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、acylfiilvene、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新、阿地白介素、全部-tk拮抗剂、六甲蜜胺、氨莫司汀、安波霉素、醋酸阿 美蒽醌、amidox、氨磷汀、氨鲁米特、氨基酮戊酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内酯、血管生成抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、安雷利克斯、安曲霉素、抗背部化形态发生蛋白-1(anti-dorsalizdngmorphogenetic protein-1)、抗雌激素剂、抗瘤酮、反义寡核苷酸、甘氨酸阿非科林、细胞凋亡基因调节剂、细胞凋亡调节剂、脱嘌呤酸、ARA-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨酶、天门冬酰胺酶、曲林菌素、asulacrine、阿他美坦、阿莫司汀、海洋环肽(axinastatin)1、海洋环肽2、海洋环肽3、阿扎胞苷、阿扎司琼、阿扎毒素、重氮酪氨酸、阿扎替派、阿佐霉素、浆果赤霉素III衍生物、balanol、巴马司他、苯并二氢卟酚、苯佐替派、苯甲酰基星形孢菌素、β内酰胺衍生物，β-alethine、betaclamycin B、白桦脂酸、BFGF抑制剂、比卡鲁胺、比生群、盐酸比生群、bisazuidinylspermine、双奈法德、二甲磺酸双奈法德、bistrateneA、比泽来新、博来霉素、硫酸博来霉素、BRC/ABL拮抗剂、breflate、布喹那钠、溴匹立明、布度钛、白消安、丁硫氨酸-亚砜亚胺、放线菌素C、卡泊三醇、calphostin C、卡普睾酮、喜树碱衍生物、金丝雀痘IL-2、卡培他滨、caraceraide、卡巴他赛、卡贝替姆、卡铂、羧酰胺-氨基-三唑、羧酰氨三唑、carest M3、卡莫司汀、earn 700、软骨(cartilage)衍生的抑制剂、盐酸卡柔比星、卡泽来新、酪蛋白激酶抑制剂、澳洲栗精胺(castanosperrnine)、杀菌肽B、西地芬戈、西曲瑞克、苯丁酸氮芥、二氢卟酚、氨磺酰氯喹噁啉、西卡前列素、西罗霉素、顺铂、顺式卟啉(cis-porphyrin)、克拉屈滨、氯米芬类似物、克霉唑、collismycin A、collismycin B、考布他汀A4、combretastatin类似物、conagenin、crambescidin 816、克立那托、甲磺酸克立那托、念珠藻环肽8、念珠藻环肽衍生物、curacin A、cyclopentanthraquinones、环磷酰胺、cycloplatam、cypemycin、阿糖胞苷、cytarabine ocfosfate、溶细胞因子、磷酸己烷雌酚、达卡巴嗪、达昔单抗、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他滨、脱氢膜海鞘素B、地洛瑞林、右异环磷酰胺、右奥马铂、右雷佐生、右维拉帕米、地扎呱宁、甲磺酸地扎呱宁、地吖醌、代代宁B、didox、diethyhiorspermine、二氢-5-氮胞苷、dioxamycin、二苯基螺莫司汀、多西他赛、二十二烷醇、多拉司琼、去氧氟尿苷、多柔比星、盐 酸多柔比星、屈洛昔芬、枸橼酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮、屈大麻酚、达佐霉素、duocannycin SA、依布硒、依考莫司汀、依达曲沙、依地福新、依屈洛单抗、依氟鸟氨酸(eflomithine)、盐酸依氟鸟氨酸(eflomithinehydrochloride)、榄香烯、elsarnitrucin、乙嘧替氟、恩洛铂、恩普氨酯、依匹哌啶、表柔比星、盐酸表柔比星、依立雄胺、厄布洛唑、红细胞基因治疗载体系统、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌莫司汀类似物、磷酸雌莫司汀钠、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氯苯乙嘧胺、依西美坦、法倔唑、盐酸法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、非格司亭、非那雄胺、flavopiridol、氟卓斯汀、氟尿苷、fluasterone、氟达拉滨、磷酸氟达拉滨、fluorodaunorunicin hydrochloride、氟尿嘧啶、氟西他滨、福酚美克、福美坦、磷喹酮、福司曲星、福司曲星钠、福莫司汀、替沙林钆、硝酸镓、加洛他滨、加尼瑞克、明胶酶抑制剂、吉西他滨、盐酸吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、调蛋白、六亚甲基二乙酰胺、羟基脲、金丝桃素、伊班膦酸、伊达比星、盐酸伊达比星、艾多昔芬、伊决孟酮、异环磷酰胺、ihnofosine、伊洛马司他、咪唑并吖啶酮、咪喹莫特、免疫刺激肽、胰岛素-样生长因子-1受体抑制剂、干扰素激动剂、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-Nl、干扰素α-N3、干扰素β-IA、干扰素γ-IB、干扰素、白细胞介素、碘苄胍、碘阿霉素、iproplatm、伊立替康、盐酸伊立替康、伊罗普拉、伊索拉定、isobengazole、isohomohalicondrin B、伊他司琼、促微丝聚合剂(jasplakinolide)、kahalalide F、片螺素-N三醋酸酯、兰瑞肽、醋酸兰瑞肽、leinamycin、来格司亭、硫酸香菇多糖、leptolstatin、来曲唑、白血病抑制因子、白细胞α干扰素、醋酸亮丙瑞林、亮丙瑞林/雌激素/黄体酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、盐酸利阿唑、直链多胺类似物、亲脂二糖肽、亲脂铂化合物、lissoclinamide、洛铂、蚯蚓磷脂、洛美曲索、洛美曲索钠、洛莫司汀、氯尼达明、洛索蒽醌、盐酸洛索蒽醌、洛伐他汀、洛索立宾、勒托替康、lutetium texaphyrin lysofylline、溶菌肽、美坦新、制甘糖酶素A、马立马司他、马索罗酚、maspin、基质溶解因子抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、美坦辛、盐酸氮芥、乙酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑、美诺立尔、merbarone、巯嘌呤、美替瑞林、蛋 氨酸酶、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠、甲氧氯普胺、氯苯氨啶、美妥替哌、微藻蛋白激酶C抑制剂、MIF抑制剂、米非司酮、米替福新、米立司亭、错位双链RNA、米丁度胺、米托卡星、丝裂红素、米托洁林、米托胍腙、二溴卫矛醇、米托马星、丝裂霉素、丝裂霉素类似物、米托萘胺、米托司培、米托坦、mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素、米托蒽醌、盐酸米托蒽醌、莫法罗汀、莫拉司亭、单克隆抗体、人绒毛膜促性腺激素、单磷酰脂质a/分枝杆菌细胞壁SK、莫哌达醇、多药抗性基因抑制剂、基于多瘤抑制基因1的疗法、氮芥抗癌剂、印度洋海绵B(mycaperoxide B)、分枝杆菌细胞壁提取物、麦考酚酸、myriaporone、正-乙酰基地那林、那法瑞林、nagrestip、纳洛酮/喷他佐辛、napavin、萘萜二醇、那托司亭、奈达铂、奈莫柔比星、奈立膦酸、中性内肽酶、尼鲁米特、nisamycin、一氧化氮调节剂、一氧化氮抗氧化剂、nitrullyn、诺考达唑、诺拉霉素、n-取代的苯并酰胺、O6-苄基鸟嘌呤、奥曲肽、okicenone、寡核苷酸、奥那司酮、昂丹司琼、oracin、口腔细胞因子诱导剂、奥马铂、奥沙特隆、奥沙利铂、oxaunomycin、奥昔舒仑、紫杉醇、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、palauamine、棕榈酰根霉素、帕米膦酸、人参炔三醇、帕诺米芬、副球菌素、帕折普汀、培门冬酶、培得星、培利霉素、奈莫司汀、木聚硫钠、喷司他丁、pentrozole、硫酸培洛霉素、全氟溴烷、培磷酰胺、紫苏醇、苯连氮霉素、乙酸苯酯、磷酸酶抑制剂、溶链菌、盐酸毛果芸香碱、哌泊溴烷、哌泊舒凡、吡柔比星、吡曲克辛、盐酸吡罗蒽醌、placetin A、placetin B、纤溶酶原活化剂抑制剂、铂络合物、铂化合物、铂-三胺络合物、普卡霉素、普洛美坦、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼莫司汀、盐酸丙卡巴肼、丙基双-吖啶酮、前列腺素J2、前列腺癌抗雄激素物质、蛋白酶体抑制剂、基于蛋白质A的免疫调节剂、蛋白激酶C抑制剂、蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、嘌罗霉素、盐酸嘌罗霉素、红紫素、pyrazorurin、吡唑并吖啶、吡哆醛血红蛋白聚氧乙烯缀合物(pyridoxylatedhemoglobin polyoxyethylene conjugate)、RAF拮抗剂、雷替曲塞、雷莫司琼、RAS法尼基蛋白转移酶抑制剂、RAS抑制剂、RAS-GAP抑制剂、脱甲基瑞替普汀、铼RE 186依替膦酸、根霉素、利波腺苷、核酶、RH retinarnide、RNAi、罗谷亚胺、罗希吐碱、 罗莫肽、罗喹美克、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈、盐酸沙芬戈、saintopin、sarcnu、sarcophytol A、沙格司亭、SDI1模拟物、司莫司汀、衰老衍生的抑制剂1、有义寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、辛曲秦、单链抗原结合蛋白、西佐喃、索布佐生、硼卡钠、苯乙酸钠、solverol、生长介素结合蛋白、索纳明、sparfosafe sodium、膦门冬酸、司帕霉素、spicamycin D、盐酸锗螺胺、螺莫司汀、螺铂、splenopentin、spongistatin 1、角鲨胺、干细胞抑制剂、干-细胞分裂抑制剂、stipiamide、链黑霉素、链佐星、间充质溶解素抑制剂、sulfinosine、磺氯苯脲、强效血管肠肽拮抗剂、suradista、苏拉明、苦马豆碱、合成的氨基多糖、他利霉素、他莫司汀、他莫昔芬methiodide、牛磺莫司汀、他扎罗汀、替可加兰钠、替加氟、tellurapyrylium、端粒酶抑制剂、盐酸替洛蒽醌、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、替罗昔隆、睾内酯、tetrachlorodecaoxide、红四氮唑(tetrazomine)、thaliblastine、沙利度胺、硫咪嘌呤、噻可拉林、硫鸟嘌呤、塞替派、血小板生成素、血小板生成素模拟物、胸腺法新、胸腺生成素受体激动剂、胸腺曲南、甲状腺刺激激素、tiazofurin、乙基锡初紫红素、替拉扎明、二氯环戊二烯钛、托泊替康盐酸化物、topsentin、托瑞米芬、枸橼酸托瑞米芬、全能干细胞因子、翻译抑制剂、醋酸曲托龙、维A酸、三乙酰尿苷、曲西立滨、磷酸曲西立滨、三甲曲沙、三甲曲沙葡糖醛酸酯、曲普瑞林、托烷司琼、盐酸妥布氯唑、妥罗雄脲、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂、UBC抑制剂、乌苯美司、乌拉莫司汀、乌瑞替派、泌尿生殖窦-衍生的生长抑制因子、尿激酶受体拮抗剂、伐普肽、variolin B、维拉雷琐、藜芦明明、verdins、维替泊芬、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春地辛、硫酸长春地辛、硫酸长春匹定、硫酸长春甘酯、硫酸长春罗新、长春瑞滨或酒石酸长春瑞滨、硫酸长春罗定、vinxaltine、硫酸长春利定、vitaxin、伏氯唑、扎诺特隆、折尼铂、亚苄维C、净司他丁、净司他丁斯酯或盐酸佐柔比星。

药物制剂

根据另一个方面，本文中公开的纳米颗粒可以与药学上可接受的载体组合以形成药物组合物。本领域的技术人员将会认识到，所述载体可 以基于如下描述的施用途径、靶问题的位置、被递送的药物、递送药物的时程等来选择。

通过本领域已知的任何方式(包括口服和非肠道途径)，可以将所述药物组合物施用给患者。本文中使用的术语“患者”表示人类以及非人类，包括，例如，哺乳动物、禽类、爬行动物、两栖动物和鱼。例如，非人类可以是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、灵长类动物或猪)。在某些实施方案中，需要非肠道途径，因为它们会避免与存在于消化道中的消化酶接触。根据这样的实施方案，本发明组合物可以通过下述方式来施用：注射(例如，静脉内、皮下或肌肉内、腹膜内注射)、经直肠、经阴道、局部(如通过粉剂、乳膏剂、软膏剂或滴剂)或通过吸入(如通过喷雾剂)。

在一个特定实施方案中，将所述纳米颗粒全身性地施用给有此需要的受试者，例如，通过静脉内输注或注射。

根据已知技术，使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂，可以配制可注射制剂，例如无菌的可注射的水性或油性的悬浮液。无菌注射制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液、悬浮液或乳液，例如，作为在1,3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液(美国药典)和等渗的氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以采用任意温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸诸如油酸被用在可注射制剂的制备中。在一个实施方案中，将本发明的缀合物悬浮于载体流体中，所述载体流体包含1％(w/v)的羧甲基纤维素钠和0.1％(v/v)TWEEN^TM80。所述注射制剂可以例如如下灭菌：穿过保留细菌的过滤器过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，所述灭菌剂可以在使用前溶解或分散在无菌水或其它无菌的可注射的介质中。

用于口服施用的固体剂型包括：胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒。在这样的固体剂型中，将包封的或未包封的缀合物与至少一种下述物质混合：惰性的药学上可接受的赋形剂或载体诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或(a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(b)粘合剂诸如羧甲纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，(c)保湿剂诸如甘油，(d)崩解剂诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，(e)溶液阻滞剂诸如石蜡，(f)吸收促进剂诸如季铵化合物，(g)润湿剂诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(h)吸收剂诸如高岭土和皂粘土粘土，和(i)润滑剂诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型也可以包含缓冲剂。

应当理解，各个医师考虑到要治疗的患者来选择含有治疗剂的纳米颗粒的精确剂量，一般而言，调节剂量和施用以给被治疗的患者提供有效量的治疗剂纳米颗粒。本文中使用的含有治疗剂的纳米颗粒的“有效量”表示引起期望的生物应答所需的量。本领域普通技术人员会理解，含有治疗剂的纳米颗粒的有效量可以随诸如以下因素变化：希望的生物学终点、要递送的药物、靶组织、施用途径等。例如，含有治疗剂的纳米颗粒的有效量可能是这样的量：其导致肿瘤尺寸在希望的时间段内减小希望的量。可以考虑的其它因素包括：疾病状态的严重程度；被治疗的患者的年龄、重量和性别；饮食、施用的时间和频率；药物组合；反应敏感性；和对疗法的耐受/应答。

可以以容易施用和剂量均匀的剂量单元形式配制纳米颗粒。本文中使用的表述“剂量单元形式”表示适用于要治疗的患者的物理上离散的纳米颗粒的单元。然而，应当理解，主治医师在合理的医学判断范围内确定所述组合物的每日使用。对于任意的纳米颗粒，最初可以在细胞培养测定中或在动物模型(通常为小鼠、兔、狗或猪)中估计治疗有效剂量。动物模型也用于获得合乎需要的浓度范围和施用途径。然后可以使用这样的信息来确定在人类中有用的剂量和施用途径。纳米颗粒的治疗效果和毒性可以通过标准药物规程在细胞培养物或实验动物中确定，例如，ED₅₀(在50％的群体中在治疗上有效的剂量)和LD₅₀(对50％的群体致命的剂量)。毒性效果与治疗效果的剂量比是治疗指数，并且可以将它表示为比率LD₅₀/ED₅₀。表现出大治疗指数的药物组合物在某些实施方案中是有用的。从细胞培养测定和动物研究获得的数据可以用于配制人用的一系列剂量。

在一个实施方案中，本文中公开的组合物可以包含小于约10ppm的 钯或小于约8ppm、或小于约6ppm的钯。例如，在此提供了这样的组合物：其包含具有聚合的缀合物的纳米颗粒，其中所述组合物具有小于约10ppm的钯。

在某些实施方案中，预见到适合用于冷冻的组合物(其包括本文中公开的纳米颗粒)和适合用于冷冻的溶液，例如，将糖诸如单糖、二糖或多糖(例如蔗糖和/或海藻糖)和/或盐和/或环糊精溶液加入纳米颗粒悬浮液中。所述糖(例如蔗糖或海藻糖)可以充当例如冷冻保护剂以防止颗粒在冷冻后聚集。例如，本文提供了包含多个公开的纳米颗粒、蔗糖、离子卤化物和水的纳米颗粒制剂；其中所述纳米颗粒/蔗糖/水/离子卤化物是约3-40％/10-40％/20-95％/0.1-10％(w/w/w/w)或约5-10％/10-15％/80-90％/1-10％(w/w/w/w)。例如，这样的溶液可以包括如在本文中公开的纳米颗粒、约5％至约20重量％的蔗糖和约10-100mM浓度的离子卤化物诸如氯化钠。在另一个实施例中，本文提供了包含多个公开的纳米颗粒、海藻糖、环糊精和水的纳米颗粒制剂；其中所述纳米颗粒/海藻糖/水/环糊精是约3-40％/1-25％/20-95％/1-25％(w/w/w/w)或约5-10％/1-25％/80-90％/10-15％(w/w/w/w)。

例如，预见到的溶液可以包括如在本文中公开的纳米颗粒、约1％至约25重量％的二糖诸如海藻糖或蔗糖(例如按重量计约5％至约25％海藻糖或蔗糖，例如约10％海藻糖或蔗糖、或约15％海藻糖或蔗糖，例如约5％蔗糖))和约1％至约25重量％浓度的环糊精诸如β-环糊精(例如约5％至约20％，例如10％或约20重量％、或约15％至约20重量％的环糊精)。预见到的制剂可以包括多个公开的纳米颗粒(例如具有PLA-PEG和活性剂的纳米颗粒)和约2％至约15重量％(或约4％至约6重量％，例如约5重量％)的蔗糖和约5重量％至约20％(例如约7重量％至约12重量％，例如约10重量％)的环糊精，例如，HPbCD)。

本公开内容部分地涉及低压冻干的药物组合物，其当重构时，具有最小量的大聚集体。这样的大聚集体可以具有大于约0.5μm、大于约1μm或大于约10μm的尺寸，且可以在重构溶液中是不希望的。使用多种技术，包括在美国药典在32<788>(特此通过引用并入)中指出的那些，可以测量聚集体尺寸。在USP 32<788>中描述的试验包括不透光颗 粒计数试验、微观颗粒计数试验、激光衍射和单个颗粒光学感知。在一个实施方案中，使用激光衍射和/或单个颗粒光学感知来测量给定样品中的颗粒尺寸。

通过不透光颗粒计数试验进行的USP 32<788>阐述了将悬浮液中的颗粒尺寸取样的指南。对于小于或等于100mL的溶液，如果存在的颗粒的平均数目没有超过6000/容器(其≥10μm)和600/容器(其≥25μm)，则所述制品符合试验。

如在USP 32<788>中所述，微观颗粒计数试验阐述了使用具有目镜测微尺的双目显微镜确定颗粒量的指南，所述双目显微镜被调至100±10倍放大率。目镜测微尺是圆形直径分度线，其由分成象限的圆圈组成，用黑色参照圆圈表示当在100倍放大率观察时的10μm和25μm。在分度线下面提供了直线标度。在视觉上计数关于10μm和25μm的颗粒的数目。对于小于或等于100mL的溶液，如果存在的颗粒的平均数目没有超过3000/容器(其≥10μm)和300/容器(其≥25μm)，则所述制品符合试验。

在某些实施方案中，公开的组合物在重构后的10mL水性样品包含每ml小于600个具有大于或等于10微米的尺寸的颗粒；和/或每ml小于60个具有大于或等于25微米的尺寸的颗粒。

可以使用动态光散射(DLS)来测量颗粒尺寸，但是它依赖于布朗运动，所以该技术可能不会检测某些较大的颗粒。激光衍射依赖于颗粒和悬浮介质之间的折射率的差异。该技术能够检测亚微米至毫米范围内的颗粒。可以确定纳米颗粒悬浮液中的相对小(例如，约1-5重量％)量的较大颗粒。单个颗粒光学感知(SPOS)使用稀悬浮液的不透光来计数约0.5μm的各个颗粒。通过获知测量的样品的颗粒浓度，可以计算聚集体的重量百分比或聚集体浓度(颗粒/mL)。

聚集体的形成可以在低压冻干过程中由于颗粒表面的脱水而发生。通过在低压冻干之前在悬浮液中使用冷冻保护剂，诸如二糖类，可以避免该脱水。合适的二糖类包括蔗糖、乳果糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖或纤维二糖和/或其混合物。其它预见到的二糖类包括曲二糖、黑曲霉糖、异麦芽糖、β,β-海藻糖、α,β-海藻糖、槐糖、昆布二糖、龙胆二糖、松二 糖、麦芽酮糖、帕拉金糖、gentiobiulose、甘露二糖、蜜二糖、车前二糖、芸香糖、芦丁糖(rutinulose)和木二糖。与起始悬浮液相比，重构显示等同的DLS尺寸分布。但是，激光衍射可以在某些重构的溶液中检测到>10μm尺寸的颗粒。此外，SPOS也可以在超过FDA指南浓度(对于>10μm颗粒，10⁴-10⁵个颗粒/mL)的浓度检测>10μm尺寸的颗粒。

在某些实施方案中，可以将一种或多种离子卤化物盐用作糖(诸如蔗糖、海藻糖或其混合物)的额外冷冻保护剂。糖可以包括二糖类、单糖类、三糖类和/或多糖类，且可以包括其它赋形剂，例如甘油和/或表面活性剂。任选地，可以包括环糊精作为额外的冷冻保护剂。可以加入环糊精来替代离子卤化物盐。可替换地，可以在离子卤化物盐以外加入环糊精。

合适的离子卤化物盐可以包括氯化钠、氯化钙、氯化锌或其混合物。额外的合适的离子卤化物盐包括氯化钾、氯化镁、氯化铵、溴化钠、溴化钙、溴化锌、溴化钾、溴化镁、溴化铵、碘化钠、碘化钙、碘化锌、碘化钾、碘化镁或碘化铵和/或其混合物。在一个实施方案中，约1至约15重量％的蔗糖可以与离子卤化物盐一起使用。在一个实施方案中，所述低压冻干的药物组合物可以包含约10至约100mM氯化钠。在另一个实施方案中，所述低压冻干的药物组合物可以包含约100至约500mM二价离子盐酸盐，诸如氯化钙或氯化锌。在另一个实施方案中，要低压冻干的悬浮液可以进一步包含环糊精，例如，可以使用约1至约25重量％的环糊精。

合适的环糊精可以包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精或其混合物。预见到用在本文中公开的组合物中的示例性环糊精包括羟丙基-β-环糊精(HPbCD)、羟乙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精、甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精、羧甲基乙基-β-环糊精、二乙基-β-环糊精、三-O-烷基--β-环糊精、葡萄糖基(glocosyl)-β-环糊精和麦芽糖基(maltosyl)-β-环糊精。在一个实施方案中，约1至约25重量％(例如约10％至约15％，例如5至约20重量％)的海藻糖可以与环糊精一起使用。在一个实施方案中，所述低压冻干的药物组合物可以包含约1至约25重量％的β-环糊精。一种示例性的组合物可以包含这样的纳米颗粒：其包 含PLA-PEG、活性剂/治疗剂、约4％至约6％(例如约5重量％)的蔗糖和约8至约12重量％(例如约10重量％)的HPbCD。

在一个方面，提供了包含公开的纳米颗粒的低压冻干的药物组合物，其中在小于或约100mL水性介质中以约50mg/mL的纳米颗粒浓度重构低压冻干的药物组合物以后，适合用于胃肠外施用的重构组合物包含小于6000个(诸如小于3000个)大于或等于10微米的微粒；和/或小于600个(诸如小于300个)大于或等于25微米的微粒。

借助于诸如USP 32<788>(通过不透光颗粒计数试验)、USP 32<788>(通过微观颗粒计数试验、激光衍射和单个颗粒光学感知)，可以确定微粒的数目。

在一个方面，提供了在重构后适合用于胃肠外使用的药物组合物，其包含多个治疗性颗粒，每个治疗性颗粒包含具有疏水聚合物段和亲水聚合物段的共聚物；活性剂；糖；和环糊精。

例如，所述共聚物可以是聚乳酸-嵌段-聚乙二醇共聚物。重构后，100mL水性样品可以包含小于6000个具有大于或等于10微米尺寸的颗粒；和小于600个具有大于或等于25微米尺寸的颗粒。

加入二糖和离子卤化物盐的步骤可以包括加入约5至约15重量％的蔗糖或约5至约20重量％的海藻糖(例如，约10至约20重量％的海藻糖)和约10至约500mM离子卤化物盐。所述离子卤化物盐可以选自氯化钠、氯化钙和氯化锌或其混合物。在一个实施方案中，也加入约1至约25重量％的环糊精。

在另一个实施方案中，所述加入二糖和环糊精的步骤可以包括加入约5至约15重量％的蔗糖或约5至约20重量％的海藻糖(例如，约10至约20重量％的海藻糖)和约1至约25重量％的环糊精。在一个实施方案中，加入约10至约15重量％的环糊精。所述环糊精可以选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精或其混合物。

在另一个方面，提供了在药用纳米颗粒组合物中防止颗粒大量聚集的方法，所述方法包括向低压冻干制剂中加入糖和盐以防止纳米颗粒在重构后的聚集。在一个实施方案中，还将环糊精加入低压冻干制剂中。在另一个方面，提供了在药用纳米颗粒组合物中防止颗粒大量聚集的方 法，所述方法包括向低压冻干制剂中加入糖和环糊精以防止纳米颗粒在重构后的聚集。

预见到的低压冻干的组合物可以具有大于约40mg/mL的治疗性颗粒浓度。适合用于胃肠外施用的制剂在10mL剂量可以含有小于约600个具有大于10微米尺寸的颗粒。低压冻干可以包括在大于约-40℃或例如小于约-30℃的温度冷冻所述组合物，从而形成冷冻的组合物；和干燥所述冷冻的组合物以形成低压冻干的组合物。干燥步骤可以在约-25至约-34℃、或约-30至约-34℃的温度在约50毫托发生。

治疗方法

在某些实施方案中，靶向纳米颗粒可以用于治疗、缓解、改善、缓和、延缓疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征的发作，抑制其进展，减轻其严重程度，和/或降低其发生率。在某些实施方案中，靶向纳米颗粒可以用于治疗实体瘤，例如，癌症和/或癌细胞。在某些实施方案中，靶向纳米颗粒可以用于治疗有此需要的受试者中的任何癌症，其中PSMA在癌细胞的表面上或在肿瘤新脉管系统(包括前列腺或非前列腺实体瘤的新脉管系统)中表达。PSMA相关的适应症的例子包括、但不限于前列腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌(colorectal carcinoma)和胶质母细胞瘤。

术语“癌症”包括恶化前的癌症以及恶性癌症。癌症包括、但不限于：血液癌(例如，慢性髓性白血病、慢性粒单核细胞性白血病、费城染色体阳性的急性成淋巴细胞性白血病、套细胞淋巴瘤)、前列腺癌、胃癌、结直肠癌、皮肤癌例如黑素瘤或基底细胞癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、乳腺癌、头颈癌、支气管癌、胰腺癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌症、周围神经系统癌症、食管癌、口或咽的癌症、肝癌(例如，肝细胞癌)、肾癌(例如，肾细胞癌)、睾丸癌、胆道癌、小肠或盲肠癌、胃肠道间质瘤、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、血液学组织的癌症等。“癌细胞”可以处于肿瘤形式(即，实体瘤)，单独存在于受试者(例如，白血病细胞)中或是衍生自癌症的细胞系。

癌症可以与多种物理症状有关。癌症的症状一般取决于肿瘤的类型 和位置。例如，肺癌可以导致咳嗽、呼吸短促和胸痛，而结肠癌常常导致腹泻、便秘和便血。但是，仅举几个例子，下述症状常常通常与许多癌症相关：发烧、寒战、盗汗、咳嗽、呼吸困难、重量减轻、食欲缺乏、厌食、恶心、呕吐、腹泻、贫血、黄疸、肝肿大、咯血、疲劳、全身乏力、认知功能障碍、抑郁、激素紊乱、嗜中性粒细胞减少症、疼痛、未愈疮、淋巴结肿大、周围神经病变和性功能障碍。

在一个方面，提供了用于治疗癌症(例如，白血病)的方法。在某些实施方案中，癌症的治疗包括：以实现希望的结果所需的这样的量和时间，给有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明的靶向颗粒。在某些实施方案中，本发明的靶向颗粒的“治疗有效量”是这样的量：其有效地治疗、缓解、改善、缓和、延缓癌症的一种或多种症状或特征的发作，抑制其进展，减轻其严重程度，和/或降低其发生率。

在一个方面，提供了给罹患癌症(例如，白血病)的受试者施用本发明组合物的方法。在某些实施方案中，以实现希望的结果(即，治疗癌症)所需的这样的量和时间，给受试者施用颗粒。在某些实施方案中，本发明的靶向颗粒的“治疗有效量”是这样的量：其有效地治疗、缓解、改善、缓和、延缓癌症的一种或多种症状或特征的发作，抑制其进展，减轻其严重程度，和/或降低其发生率。

本发明的治疗方案包括给健康个体(即，没有显示癌症的任何症状和/或尚未诊断出癌症的受试者)施用治疗有效量的本发明的靶向颗粒。例如，在癌症的进展和/或癌症的症状发作之前，可以用本发明的靶向颗粒“免疫”健康个体；可以基本上与癌症症状的发作同时(例如，在48小时内、在24小时内或在12小时内)治疗处于风险之中的个体(例如，具有癌症家族史的患者；携带一种或多种与癌症进展有关的基因突变的患者；具有与癌症进展有关的遗传多态性的患者；被与癌症进展有关的病毒感染的患者；具有与癌症进展有关的习性和/或生活方式的患者；等)。当然，已知患有癌症的个体可以在任何时间接受本发明的治疗。

在其它实施方案中，公开的纳米颗粒可以用于抑制癌细胞(例如，前列腺癌细胞)的生长。本文中使用的术语“抑制癌细胞的生长”表示癌细胞增殖和/或迁移的速率的任何减慢、癌细胞增殖和/或迁移的阻止、或 癌细胞的杀死，使得癌细胞生长的速率与未治疗的对照组癌细胞的观察或预测的生长速率相比降低。术语“抑制生长”还可以表示癌细胞或肿瘤的尺寸减小或消失，以及其转移潜力的降低。优选地，这样的抑制在细胞水平可以减小患者的癌症的尺寸、阻止患者的癌症的生长、降低患者的癌症的侵袭性、或预防或抑制患者的癌症的转移。通过多种合适标记中的任一种，本领域技术人员可以容易地确定癌细胞生长是否被抑制。

癌细胞生长的抑制可以通过下述方式证实：例如，在细胞周期的特定阶段阻止癌细胞，例如，在癌细胞周期的G2/M期阻止。癌细胞生长的抑制也可以通过下述方式证实：直接或间接测量癌细胞或肿瘤大小。在人类癌症患者中，通常如下进行这样的测量：使用众所周知的成像方法诸如磁共振成像、计算机化的轴向断层摄影术和X-射线。也可以间接确定癌细胞生长，诸如通过确定循环癌胚抗原的水平、前列腺特异性的抗原或与癌细胞生长相关的其它癌症特异性的抗原。癌症生长的抑制一般也与受试者的延长的生存和/或增加的健康以及安康相关。

本文还提供了给患者施用本文中公开的纳米颗粒的方法，所述纳米颗粒包含治疗剂，其中，在给患者施用后，与单独药剂(即并非公开的纳米颗粒)的施用相比，这样的纳米颗粒基本上降低分布容积和/或基本上降低游离C_max。

2012年6月26日授权的标题为“负荷药物的聚合纳米颗粒及其制备和使用方法(Drug Loaded Polymeric Nanoparticles and Methods of Making and Using Same)”的美国专利号8,206,747特此通过引用整体并入。

具体实施方式

现在一般地描述本发明，通过参考下述实施例将更容易理解本发明，下述实施例仅仅为了某些方面和实施方案的例证目的而被包括，并且无意以任何方式限制本发明。

实施例1:示例性的纳米颗粒制备-乳液方法1

有机相的制备。向20mL玻璃瓶中加入聚乳酸-聚乙二醇二嵌段共聚物(PLA-PEG)(950mg)和苯甲醇(9g)。将混合物涡旋过夜，以得到聚合 物-BA有机相。在配制纳米颗粒之前，通过涡旋将50mg药物溶解在有机相中。

水相的制备。向1L瓶子中加入胆酸钠(SC)(4.75g)和去离子水(955.25g)。将混合物在搅拌板上搅拌直到溶解。向胆酸钠/水中加入苯甲醇(40g)，并将混合物在搅拌板上搅拌直到溶解。

乳液的形成。水相与有机相的比率为5:1。将有机相倒入水相中，并将混合物使用手动匀浆器在室温匀浆化10秒以形成粗乳状液。将粗乳状液供料穿过具有在测量仪上设定在46psi的压力的高压匀浆器(110S)分别2次以形成纳米乳液(细乳液)。(注：在第1次穿过以后，将5％SC掺入纳米乳液中以达到最终的0.5％SC)。

纳米颗粒的形成。在小于5℃在搅拌板上搅拌下将纳米乳液倒入淬灭剂(去离子水)中以形成淬灭相。淬灭剂与乳液的比率为10:1。以100:1的吐温80:药物的比率向淬灭相中加入吐温80的水溶液(35％(w/w))。

通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒。使用具有300kDa Pall盒(2膜)的TFF浓缩淬灭相，以形成～200mL的纳米颗粒浓缩物。用～20个透析体积(4L)的冷去离子水渗滤纳米颗粒浓缩物。将渗滤的纳米颗粒浓缩物的体积减小至最小体积。将冷水(100mL)加入容器中，并泵送穿过膜以冲洗和形成浆料。将所述浆料(～100mL)收集在玻璃瓶中。

确定未过滤的最终浆料的固体浓度。向配衡的20mL闪烁瓶中加入一定体积的最终浆料，将其在冷冻干燥器/烘箱上在真空下干燥。确定经干燥的浆料的体积中的纳米颗粒的重量。向最终浆料中加入浓蔗糖(0.666g/g)以达到10％蔗糖。

确定0.45μm过滤的最终浆料的固体浓度。将最终浆料样品的一部分穿过0.45μm注射器式滤器过滤，然后加入蔗糖。向配衡的20mL闪烁瓶中加入一定体积的经过滤的样品，将其使用冷冻干燥器/烘箱在真空下干燥。将含有蔗糖的未过滤的最终浆料的剩余样品冷冻。

实施例2:示例性的纳米颗粒制备-乳液方法2

有机相的制备。向第一个20mL玻璃瓶中加入聚乳酸-聚乙二醇二嵌段共聚物(PLA-PEG)(700mg)和乙酸乙酯(16.22g)。将混合物涡旋过夜以 得到聚合物-EA溶液。向第二个20mL玻璃瓶中加入300mg达沙替尼和约5g新鲜制备的3％三氟乙酸(TFA)在苯甲醇(BA)中的溶液，并将混合物涡旋过夜以得到药物-酸-BA溶液。在配制纳米颗粒之前，将聚合物-EA溶液加入药物-酸-BA溶液中，并将混合物涡旋以形成有机相。

水相的制备。向1L瓶子中加入胆酸钠(SC)(5g)和去离子水(955g)。将混合物在搅拌板上搅拌直到溶解。向胆酸钠/水中加入苯甲醇(40g)，并将混合物在搅拌板上搅拌直到溶解。

乳液的形成。水相与有机相的比率为5:1。将有机相倒入水相中，并将混合物使用手动匀浆器在室温匀浆化10秒以形成粗乳状液。将粗乳状液供料穿过具有在测量仪上设定在45psi的压力的高压匀浆器(110S)1次，以形成纳米乳液(细乳液)。

纳米颗粒的形成。在小于5℃在搅拌板上搅拌下将纳米乳液倒入淬灭剂(去离子水)中以形成淬灭相。淬灭剂与乳液的比率为10:1。以100:1的吐温80:药物的比率向淬灭相中加入吐温80的水溶液(35％(w/w))。

通过切向流过滤(TFF)浓缩纳米颗粒。使用具有300kDa Pall盒(2膜)的TFF浓缩淬灭相，以形成～200mL的纳米颗粒浓缩物。用～20个透析体积(4L)的冷去离子水渗滤纳米颗粒浓缩物。将渗滤的纳米颗粒浓缩物的体积减小至最小体积。将冷水(100mL)加入容器中，并泵送穿过膜以冲洗和形成浆料。将所述浆料(～100mL)收集在玻璃瓶中。

未过滤的最终浆料的固体浓度的确定。向配衡的20mL闪烁瓶中加入一定体积的最终浆料，将其在冷冻干燥器/烘箱上在真空下干燥。确定经干燥的浆料的体积中的纳米颗粒的重量。向最终浆料中加入浓蔗糖(0.666g/g)以达到10％蔗糖。

0.45μm过滤的最终浆料的固体浓度的确定。将最终浆料样品的一部分穿过0.45μm注射器式滤器过滤，然后加入蔗糖。向配衡的20mL闪烁瓶中加入一定体积的经过滤的样品，将其使用冷冻干燥器/烘箱在真空下干燥。将含有蔗糖的未过滤的最终浆料的剩余样品冷冻。

实施例3:制剂

用或不用酸搀杂，制备了6种达沙替尼制剂。理论负荷和固体浓度 列出在表1中：

表1.制剂

在没有酸搀杂下，由于在BA中的低药物溶解度(9.45mg/mL)，使用5％理论药物负荷和10％固体。在有酸搀杂下，药物在有机相(含有TFA或油酸的BA)中的溶解度高得多，如在表2中所示，可以使用更高的药物负荷。滴酸制剂的所有固体百分比维持在4.7％，以模拟激酶抑制剂的滴酸制剂。另外，当使用酸-BA混合物作为药物溶剂时，通过在即将配制之前将聚合物-EA加入药物-BA溶液中，使用20/80BA/EA混合物作为最终的有机相溶剂80％(重量)。

表2.用或不用酸搀杂时达沙替尼在选择的溶剂中的溶解度

用或不用酸搀杂时的溶剂	达沙替尼溶解度(mg/mL,通过HPLC)
		BA	9.45
EA	0.32
		7.5％水在BA中的溶液	32.76
1％TFA在BA中的溶液	56.49
		2％TFA在BA中的溶液	102.87
3％TFA在BA中的溶液	140.92
		3％TFA在7.5％水的BA中的溶液	157.16
3％油酸在BA中的溶液	16.82
		6％油酸在BA中的溶液	25.18
9％油酸在BA中的溶液	29.84

将表征数据汇编在表3中。制剂的颗粒尺寸是在约100-150nm范围内。四批具有110±10nm的颗粒尺寸，两批产生更大一些的尺寸，分别是137.2nm和143.1nm。

在不用酸搀杂下，2个16/5批次(1和2)和1个47/5批次(3)产生<1％ 的药物负荷。使用1％TFA或6％油酸在BA中的溶液(4和6)也产生<1％的药物负荷。达沙替尼在3％TFA中具有最高溶解度，这允许高得多的30％的理论药物负荷(5)。对于3％TFA，药物负荷提高至2.54％。

表3.制剂表征

体外数据显示在图4和表3中。三个无酸批次和一个油酸批次产生了约10％药物的类似爆发释放(burst release)。两个无酸16/5批次的药物释放是最快的，具有约60％药物的4小时释放。油酸批次和无酸47/5批次显示约50％的4小时释放。

1％TFA批次(4)显示最高的爆发释放，释放了约25.44％的药物。来自批次(4)的药物释放与无酸16/5批次大约一样快地进行，具有59.22％药物的4小时释放。

在所有制剂中，3％TFA批次(5)产生最低的爆发3.4％。另外，与两个无酸16/5批次相比，释放显著更低，具有17.06％药物的4小时释放。

在表4中将24小时和48小时的释放数据标记下划线，因为在这2个时间点回收的药物显示显著的降解(数据显示在表的药物回收率部分的下面)。在37℃温育4小时以后，观察到达沙替尼的降解。

表4.在体外实验中的结果和药物回收率

以上制剂证实了向BA中加入3％TFA的改善药物负荷和减慢药物释放的能力，如关于激酶抑制剂制剂所观察到的。

等同方案

本领域技术人员会认识到或仅仅使用例行实验就能够确定许多与本文所述的本发明的具体实施方案等效的方案。这样的等同方案意图由下述权利要求涵盖。

通过引用并入

在本文中引用的所有专利、公开的专利申请、网站和其它参考文献的整个内容特此通过引用明确地整体并入本文。

Claims (14)

1.一种制备多个治疗性纳米颗粒的方法，所述方法包括：

将治疗剂、第一聚合物和有机酸与有机溶剂组合以形成具有1至50％固体的第一有机相；

将所述第一有机相与第一水溶液组合以形成所述多个治疗性纳米颗粒；和

通过过滤回收所述治疗性纳米颗粒，

其中所述治疗剂是Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂，所述Bcr-Abl酪氨酸-激酶抑制剂选自伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼、波舒替尼、普纳替尼、巴氟替尼、及其药学上可接受的盐；

所述第一聚合物是二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物或二嵌段聚乳酸-共聚-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物；

所述有机酸包括三氟乙酸；且

所述有机溶剂包括苯甲醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机酸的浓度是至少约2重量％。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述有机酸的浓度是至少约3重量％。

4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述治疗性纳米颗粒包含1至10重量％的治疗剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其中通过所述方法制备的所述治疗性纳米颗粒与通过另一种方法制备的治疗性纳米颗粒相比具有至少2倍的治疗剂负荷，其中除了所述另一种方法不包括所述有机酸以外，所述另一种方法与所述方法相同。

6.根据权利要求4所述的方法，其中与由所述治疗剂和所述有机溶剂组成的第二溶液相比，所述治疗剂在由所述治疗剂、所述有机溶剂和所述有机酸组成的第一溶液中具有至少5倍的溶解度。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是达沙替尼。

8.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中当置于在37℃的磷酸盐缓冲溶液中时，所述治疗性纳米颗粒在1小时内释放0.01至25％的治疗剂。

9.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述治疗性纳米颗粒具有60nm至150nm的直径。

10.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中将所述第一有机相与所述第一水溶液组合包括乳化通过将所述第一有机相与所述第一水溶液组合而形成的第二相，以形成乳相。

11.根据权利要求10所述的方法，所述方法进一步包括淬灭所述乳相以形成淬灭相。

12.根据权利要求11所述的方法，所述方法进一步包括将药物增溶剂加入所述淬灭相中以形成未包封的治疗剂的增溶相。

13.根据权利要求11所述的方法，其中淬灭在0℃至5℃进行，且其中淬灭剂:乳液比率是2:1至40:1。

14.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述第一聚合物是二嵌段聚乳酸-聚乙二醇共聚物。