CN106117380A - 一种香菇多糖的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物提取技术领域，特别涉及一种香菇多糖的提取方法，包括以下步骤：1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；2)高压处理，得到膏状浆液；3)再向膏状浆液中加入水和复合酶，在一定条件下分温度段超声波提取；4)抽滤，滤液压缩，进行醇沉，醇析，离心，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。本发明制备得到的香菇多糖提取率和纯度高，且抗氧化性和抗衰老性强。

Description

一种香菇多糖的提取方法
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，特别涉及一种香菇多糖的提取方法。
背景技术
我国已成为食用菌生产大国，至2013年为止，我国生产的食用菌生产量占世界总产量的70％以上。食用菌生产已成为与种植业、养殖业并重的农村三大产业，是我国山区或贫困地区农民脱贫致富的重要途径。然而，在我国食用菌生产存在着原料消耗大、经济效率低、产出比倒挂等严重现象。研究一种培养基配方，提高食用菌的产量和质量，成为食用菌市场的新需求。
香菇在分类上属于真菌门，伞菌目，侧耳科，香菇属。香菇不但营养丰富、味道鲜美，而且具有较高的药用价值，是药食两用食用菌之一。现代研究表明，香菇中主要活性成分为香菇多糖。香菇多糖具有抗肿瘤、抗衰老、降血糖、提高人体免疫力和抗氧化等多方面的药理活性。近年来，对香菇多糖的研究一直是一个热点问题，主要集中在其提取和活性研究等方面。但目前香菇多糖的提取率低、活性不高，这大大阻碍了香菇多糖产业的发展。因此，急需寻找能高效制备香菇多糖并提高其生理活性的提取方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种香菇多糖的提取方法,该方法制备出来的香菇多糖具有较强的抗氧化性和抗衰老功效。
为实现上述目的，本发明所要解决的技术方案为：
本发明提供一种香菇多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量4～8倍的去离子水，加压至12～18MPa进行高压处理3～10min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量6～12倍的去离子水，再加入原香菇重量0.03～0.11％的复合酶，调节pH为4.0～5.0，在频率为110～190kHz下，在37～39℃下超声波提取5～10min，再继续升高温度至45～50℃超声波提取5～10min，得到提取液；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/4～1/3，再加入原香菇重量10～20倍的乙醇溶液，进行醇沉，醇析16～20h，5000～5500r/min离心10～20min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。
优选地，本发明所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物。
优选地，本发明所述步骤3)中复合酶为原香菇重量的0.07％。
更优选地，本发明所述步骤3)中复合酶为重量比为8～13:12～18:2～4:1～3果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物。
优选地，本发明所述步骤3)超声波频率为150kHz。在这个频率时，超声波提取具有最好的效果。
优选地，本发明所述步骤4)乙醇溶液的体积浓度为85～95％。在这个体积浓度时，醇沉的效果最好。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1、本发明在超声波提取前，先进行高压处理，能够提高香菇多糖的提取率，同时还能提高香菇多糖的功效。
2、本发明在进行超声波提取时，添加复合酶，能够缩短超声波提取时间，同时能够提高香菇多糖的提取率和抗氧化、抗衰老活性，同时，超声波的条件也促进复合酶酶解，两者的相互作用，降低香菇多糖的响度if恩子质量，使支链增多，更多抗氧化和抗衰老基团暴露，从而提高香菇多糖的抗氧化和抗衰老功效。
3、本发明方法制备得到的香菇多糖纯度高，达到98.6％以上，提取率也相对现有技术提高9％～12.8％。
4、经试验，现有技术制备得到的香菇多糖，本发明的香菇多糖对DPPH抑制率提高28.6～34.2％，ABTS+抑制率提高31.4～36.2％，总抗氧化能力提高25.3～29.8％。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量4倍的去离子水，加压至18MPa进行高压处理3min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量12倍的去离子水，再加入原香菇重量0.03％的复合酶，调节pH为5.0，在频率为110kHz下，在39℃下超声波提取5min，再继续升高温度至50℃超声波提取10min，得到提取液，所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/4，再加入原香菇重量10倍体积浓度为85％的乙醇溶液，进行醇沉，醇析16h，5500r/min离心10min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。
实施例2
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量5倍的去离子水，加压至16MPa进行高压处理5min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量10倍的去离子水，再加入原香菇重量0.05％的复合酶，调节pH为4.8，在频率为130kHz下，在39℃下超声波提取6min，再继续升高温度至49℃超声波提取9min，得到提取液，所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/3，再加入原香菇重量13倍体积浓度为95％的乙醇溶液，进行醇沉，醇析17h，5200r/min离心13min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。
实施例3
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量6倍的去离子水，加压至14MPa进行高压处理7min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量9倍的去离子水，再加入原香菇重量0.07％的复合酶，调节pH为4.5，在频率为150kHz下，在38℃下超声波提取8min，再继续升高温度至48℃超声波提取8min，得到提取液，所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/4，再加入原香菇重量15倍体积浓度为90％的乙醇溶液，进行醇沉，醇析18h，5100r/min离心15min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。
实施例4
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量7倍的去离子水，加压至13MPa进行高压处理8min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量8倍的去离子水，再加入原香菇重量0.09％的复合酶，调节pH为4.3，在频率为170kHz下，在38℃下超声波提取9min，再继续升高温度至47℃超声波提取7min，得到提取液，所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/3，再加入原香菇重量17倍体积浓度为90％的乙醇溶液，进行醇沉，醇析19h，5400r/min离心18min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。
实施例5
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量8倍的去离子水，加压至12MPa进行高压处理10min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量6倍的去离子水，再加入原香菇重量0.11％的复合酶，调节pH为4.0，在频率为190kHz下，在37℃下超声波提取10min，再继续升高温度至45℃超声波提取5min，得到提取液，所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/4，再加入原香菇重量20倍体积浓度为85％的乙醇溶液，进行醇沉，醇析20h，5000r/min离心20min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖。
试验例：本发明方法制备得到的香菇多糖的抗衰老功效
1、建模与给药
取Wistar大鼠50只，随机分为4组(正常组、亚急性衰老动物组、香菇多糖A组及香菇多糖B组)，每组10只。除正常组Wistar大鼠颈背部皮下注射生理盐水外，其余各组Wistar大鼠颈背部皮下注射D-半乳糖100mg/kg，l次/d，连续注射42d，以构建Wistar大鼠衰老模型。同时，A组(市售香菇多糖)和B组(实施例3制备得到的香菇多糖)按每天30mL/kg的剂量给Wistar大鼠灌胃香菇多糖汁，正常组和模型组灌胃生理盐水。
2、血清SOD、MDA及GSH-Px测
第42d末次给药2h后，于Wistar大鼠眼球后静脉丛毛细管取血，血样静置后3500r/min离心10min，取血清严格按试剂盒说明进行测定。
1、脑组织LPF测定
Wistar大鼠取血后迅速颈椎脱臼处死，剖出脑组织，用4℃生理盐水冲洗后用滤纸吸干，-20℃冷冻保存。测定时，脑组织匀浆，4℃下3000r/min离心10min，取上清严格按试剂盒说明进行测定。
2、试验结果
各组大鼠血清SOD、MDA、GSH-Px及脑组织LPF含量变化
上述试验可知，本发明方法制备的香菇多糖可有效抑制血清MDA和脑组织LPF生成、增强体内SOD和GSH-Px活力，具有良好的抗衰老功效，相对现有技术制备的香菇多糖，抗衰老功效显著提高。

Claims (5)

1.一种香菇多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取香菇，除杂洗净，沥干，切碎；
2)将步骤1)得到的香菇，放入高压罐中，加入香菇重量4～8倍的去离子水，加压至12～18MPa进行高压处理3～10min，卸压，得到膏状浆液；
3)再向膏状浆液中加入原香菇重量6～12倍的去离子水，再加入原香菇重量0.03～0.11％的复合酶，调节pH为4.0～5.0，在频率为110～190kHz下，在37～39℃下超声波提取5～10min，再继续升高温度至45～50℃超声波提取5～10min，得到提取液；
4)对提取液进行抽滤，将滤液压缩至原滤液体积的1/4～1/3，再加入原香菇重量10～20倍的乙醇溶液，进行醇沉，醇析16～20h，5000～5500r/min离心10～20min，弃上清液，真空冷冻干燥，得到香菇多糖；
所述的复合酶为果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物。
2.根据权利要求1所述的香菇多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤3)中复合酶为原香菇重量的0.07％。
3.根据权利要求2所述的香菇多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤3)中复合酶为重量比为8～13:12～18:2～4:1～3的果胶裂解酶、纤维素酶、胃蛋白酶和脂肪酶的混合物。
4.根据权利要求1所述的香菇多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤3)超声波频率为150kHz。
5.根据权利要求1所述的香菇多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤4)乙醇溶液的体积浓度为85～95％。
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