CN105866268B - 一种同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，采用本发明提供的方法，仅需一次实验即可完成滴眼液中6类共计11种抑菌剂(包括氯己定、苯甲醇、三氯叔丁醇、山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苯扎溴铵)的检测，本发明采用的液相色谱分析方法专属性好；定性、定量效果准确；同时检测的抑菌剂种类多、品种多，检测速度快；可以适用于不同厂家生产的不同品牌的滴眼液，适用范围广，效果稳定可靠。

Description

一种同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法

技术领域

本发明涉及滴眼液中抑菌剂的测定方法，具体涉及一种同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法。

背景技术

滴眼液系指眼用制剂中的滴眼剂，是一种将药物成分与药用添加剂均匀混入基质，制备成溶液、悬浊液、乳浊液的液体无菌制剂。滴眼液直接作用于眼部，通过局部黏膜吸收，大多发挥局部治疗作用。

滴眼液中药物可以直接接触药物作用部位，并且利用眼部黏膜吸收速度快的优势，快速完成药物吸收、分布，具有十分显著的速效作用与定向作用，在眼科疾病检查与治疗领域有不可替代的作用。按照中国药品现行法定最低标准《中国药典》2015年版规定，滴眼液属于液体无菌制剂，必须保持清洁和无菌的状态，以避免主成分分解、眼部二次感染等危害。按照现行《中国药典》规定，滴眼液制备处方中可以添加一定量的抑菌剂，以保持无菌状态。

目前，各类滴眼液中，添加抑菌剂的种类与剂量存在显著差异，这对药品成分筛查、制备工艺、科学研究、监督检验等工作造成一定困难。对于滴眼液中抑菌剂的种类与剂量的测定，现有的方法仅能对某一特定抑菌剂进行测定，或对某一特定类的几种抑菌剂进行测定，无法同时完成多种类、大数量的抑菌剂定性与定量检测。随着我国药品质量控制要求的日渐提高，需要一种更为快捷、方便、准确、全面的滴眼液中抑菌剂测定方法，以满足实际情况的需要。

发明内容

针对现有技术在完成滴眼液中抑菌剂的定性与定量检测中存在的频繁更换色谱系统、分析速度缓慢、多次重复分析、单次分析覆盖面窄的问题，本发明提供了一种同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，本发明提供的检测方法仅需一次实验即可完成滴眼液中6类共计11种抑菌剂的种类鉴定及其含量测定，而不必更换色谱系统进行多次分析，具备操作简单、分析速度快、定量分析准确的特点，且本发明可以适用于几乎全部剂型，如溶液、悬浊液、乳浊液型滴眼液中的抑菌剂检查，适用范围广。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案，具体包括以下步骤：

步骤一、制备对照品溶液

分别精密称定氯己定、苯甲醇、三氯叔丁醇、山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苯扎溴铵对照品，加甲醇使溶解，于容量瓶中加50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度分别约为10、240、500、500、100、15、40、20、30和20μg·mL^-1的对照品溶液；

步骤二、对待测滴眼液进行预处理

取待测滴眼液，将其过滤即为供试品溶液；

步骤三、通过高效液相色谱法测定对照品溶液

分别精密量取步骤一所述对照品溶液0.4，0.8，1，2，4，10，20mL，分别置于100mL量瓶中，用50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成7个系列浓度的对照品溶液，按以下色谱方法进样分析：

色谱柱：Waters XBridge C18(4.6mm×150mm，5μm)；检测波长为214nm；流动相A为0.1％磷酸溶液，流动相B为甲醇，流动相C为四氢呋喃；线性梯度洗脱条件为：0-3min，50％A、43％B、7％C，3-8min，50-5％A、43-88％B、7％C，8-10min，5％A、88％B、7％C，10-11min，5-50％A、88-43％B、7％C，11-16min，50％A、43％B、7％C；流速：1.0mL·min^-1；

分别取对照品溶液5μL进样分析，记录不同色谱峰的保留时间与峰面积，以不同色谱峰的保留时间用于待测滴眼液中抑菌剂的定性分析，并以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并拟合回归方程，用于待测滴眼液中抑菌剂的定量分析；

对照品溶液加50％甲醇逐步稀释，进样分析，取仪器信噪比为3：1时溶液的浓度为各成分的检测限；

步骤四、鉴别、测定经过预处理后的滴眼液中抑菌剂的种类及含量

将步骤二中所述经过预处理的待测滴眼液按步骤三中所述液相色谱方法进行分析，记录保留时间与色谱峰面积，通过保留时间比对，鉴别滴眼液中抑菌剂的品种，将记录所得色谱峰面积套用回归方程计算，得到滴眼液中抑菌剂的含量。

本发明的技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：

本发明采用的液相色谱分析方法定性、定量效果准确，同时检测的抑菌剂种类多、品种多，检测速度快，本发明可以适用于不同厂家生产的不同品牌的滴眼液，适用范围广，效果稳定可靠。

附图说明

图1为对照品的溶液的色谱峰-抑菌剂对照关系图；

图2为对照品的溶液的色谱峰-保留时间图；

图3为实施例一中盐酸林克霉素滴眼液测定的色谱图；

图4为实施例二中硫酸软骨素滴眼液测定的色谱图；

图5为实施例三中复方新霉素多粘菌素滴眼液测定的色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。

本发明的实施例提供的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，具体步骤包括：

步骤一、制备对照品溶液；

步骤二、对待测滴眼液进行预处理；

步骤三、通过液相色谱法测定对照品溶液，完成系统适用性验证，绘制标准曲线；

步骤四、通过液相色谱法鉴别与测定经过预处理的滴眼液中抑菌剂的种类及含量；

其中，本发明的实施例中采用的仪器为：Agilent 1100高效液相色谱仪，配备紫外检测器、四元梯度泵、自动进样器；电子天平(CP225D，德国Sartorius公司)。

其中，高效液相色谱法所述使用的色谱柱为Waters XBridge C18(4.6mm×150mm，5μm)；检测波长为214nm；流动相A为0.1％磷酸溶液为流动相A，流动相B为甲醇，流动相C为四氢呋喃；线性梯度洗脱条件为：0-3min，50％A、43％B、7％C，3-8min，5％A、88％B、7％C，8-10min，50％A、43％B、7％C，10-11min，50％A、43％B、7％C，11-16min，50％A、43％B、7％C；流速：1.0mL·min^-1；进样体积：5μL。

其中，对照品溶液的制备方法为：分别取氯己定、苯甲醇、三氯叔丁醇、山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苯扎溴铵对照品各适量，精密称定，置于量瓶中，加甲醇适量使溶解，加50％甲醇溶液稀释至刻度，制成浓度分别为10.57、238.1、504.2、502.2、99.53、14.98、40.06、20.18、30.68和22.11μg·mL^-1的对照品溶液。

其中，标准曲线的绘制方法为：精密量取上述混合对照品溶液0.4，0.8，1，2，4，10，20mL，分别置于100mL量瓶中，用50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成7个系列浓度的对照品溶液，通过高效液相色谱法分别进样分析，记录不同色谱峰的保留时间与峰面积，得对照品的色谱峰-保留时间图，如图1所示。

其中，色谱峰1-10分别为对照品氯己定、苯甲醇、三氯叔丁醇、山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵的色谱峰，由于苯扎氯铵、苯扎氯铵均为阳离子型抑菌剂，其阴离子不起抑菌作用，且二者具有同样的阳离子，仅阴离子不同，因此苯扎溴铵和苯扎氯胺的色谱峰相同。

上述色谱峰-保留时间图用于待测滴眼液中抑菌剂的定性分析。

以对照品浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，得对照品浓度-峰面积图，所得图如图2所示：

对照品溶液加50％甲醇逐步稀释，进样分析，取仪器信噪比为3：1时溶液的浓度为各成分的检测限。

以对照品浓度-峰面积图绘制标准曲线并拟合回归方程，所得回归方程等相关系统适用性参数如下表所示：

表1对照品的回归方程、线性范围及检测限表

上述回归方程用于待测滴眼液中的抑菌剂的定量分析。

实施例1

对市面销售的某一批次盐酸林克霉素滴眼液进行了筛查与测定，获得色谱图如附图3所示：

图3中检出成分经与图1比对，确认检出成分为对羟基苯甲酸乙酯，将色谱峰面积3629带入对羟基苯甲酸乙酯标准曲线Y＝175.9X+21.72，计算浓度为20.51μg/ml。

实施例2

对市面销售的某一批次硫酸软骨素滴眼液进行了筛查与测定，获得色谱图如图4所示。

图4中检出成分经与图1比对，确认检出成分为三氯叔丁醇，将色谱峰面积4.640带入三氯叔丁醇标准曲线Y＝1.224X+1.303，计算浓度为2.726μg/ml。

实施例3

对市面销售的某一批次复方新霉素多粘菌素滴眼液进行了筛查与测定，获得色谱图如图5所示：

图5中检出成分经与图1比对，确认检出成分为硫柳汞钠，将色谱峰面积137.1带入硫柳汞钠标准曲线Y＝15.36X-44.52，计算浓度为6.025μg/ml。

于上述技术方案基础上，进一步的，由于苯扎氯铵、苯扎氯铵均为阳离子型抑菌剂，其阴离子不起抑菌作用，且二者具有同样的阳离子，仅阴离子不同，因此本技术同样适用于测定苯扎溴铵，不必做任何调整，系统适用性没有问题。

本发明实施例提供的方法，可以用液相色谱一次实验完成滴眼液中6类11种抑菌剂的定性、定量检测，具有检测速度快(一般10分钟以内)、前处理方法简单(过滤即可)、方法稳定可靠的优点。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，具体步骤包括：

步骤一、制备对照品的溶液；

步骤二、对待测滴眼液进行预处理；

步骤三、通过液相色谱法测定步骤一中制备的对照品的溶液，得到对照品的溶液的色谱峰-抑菌剂对照关系图和色谱峰-保留时间图；

步骤四、通过液相色谱法测定预处理后的待测滴眼液，得到待测滴眼液的液相色谱图，将待测滴眼液的液相色谱图与对照品的溶液的液相色谱图比对；

其中，液相色谱法中流动相A为0.1％磷酸溶液，流动相B为甲醇，流动相C为四氢呋喃；线性梯度洗脱条件为：0-3min，50％A、43％B、7％C，3-8min，50-5％A、43-88％B、7％C，8-10min，5％A、88％B、7％C，10-11min，5-50％A、88-43％B、7％C，11-16min，50％A、43％B、7％C。

2.根据权利要求1所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，所述对照品分别为氯己定、苯甲醇、三氯叔丁醇、山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎溴铵和苯扎氯铵。

3.根据权利要求2所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，对照品溶液的制备包括：分别称取对照品，加甲醇溶解后，于容量瓶中加甲醇溶液定容，配制成浓度分别为10、240、500、500、100、15、40、20、30和20μg·mL^-1的10个对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述步骤二中的滴眼液的剂型包括溶液型、悬浊液型、乳浊液型。

5.根据权利要求4所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述步骤二中的预处理方法为过滤。

6.根据权利要求3所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，精密量取对照品溶液0.4，0.8，1，2，4，10，20mL，分别置于100mL量瓶中，用甲醇溶液定容后摇匀，制成7个系列浓度的对照品溶液，分别进行液相色谱分析。

7.根据权利要求3或6所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述甲醇溶液为50wt％甲醇。

8.根据权利要求1所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法中，流速为1.0mL·min^-1。

9.根据权利要求1所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法中，进样体积为5μL。

10.根据权利要求1所述的同时测定滴眼液中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法中，检测波长为214nm。