CN107664667B - 一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法 - Google Patents

一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，所述方法包括如下步骤：(1)样品提取；(2)提取液的过膜净化；(3)制备防腐剂标准品储备液和标准品系列；(4)使用高效液相色谱法进行检测，(5)绘制防腐剂标准品溶液系列的标准曲线，将各防腐剂峰面积与对应质量浓度做线性回归，根据得到的线性回归方程计算待测样品中各种防腐剂的含量。本发明所述测定方法可以同时测定化妆品中常见的9种防腐剂，分离度大于1.5，分离度好，并且平均回收率超过80％，RSD为0.91～4.52％，测定方法简单、准确并且灵敏度高。

Description

一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种防腐剂的测定方法，具体涉及一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法。
背景技术
化妆品是指以涂抹、喷洒或者其它类似方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指趾甲、唇齿等，以达到清洁、保养、美容、修改和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品。为了控制化妆品中微生物的生长繁殖，保持化妆品性质的稳定性，通常都在化妆品中添加一定量的防腐剂从而避免其受到微生物的污染，并且同时可以起到延长产品的使用寿命并保证使用的安全性。
目前，通常在一个化妆品产品中同时添加多种防腐剂，以此达到全面的防腐效果，然而，现有技术中鲜有可以一次测定化妆品中多种防腐剂的方法，为此，本发明建立了一种通过高效液相色谱法(HPLC)可以同时测定化妆品中多种防腐剂含量的方法，通过本发明所述的方法，可以同时测定化妆品中9种常见的防腐剂，测定方法简单、准确而且灵敏度高。
发明内容
本发明目的在于提供一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，测定方法简单、准确而且灵敏度高。
本发明的目的是这样实现的：一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，所述的防腐剂包括：苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯扎糖精铵、氯苯甘醚、2,4-二氯-3,5-二甲苯酚、葡萄糖酸氯己定、醋酸氯己定、4-氯-2-甲苯酚、O-苯基苯酚；其特征在于：测定步骤如下：
(1)提取：将待测样品加入醋酸铵水溶液中，涡旋后加入甲醇，经匀质、超声、高速离心后，吸取上清液得到提取液；
(2)过膜净化：将所述提取液经0.22μm滤膜净化，得到净化液；
(3)取2μL上述净化液注入高效液相色谱仪中检测，测定色谱图；
高效液相色谱法进行分析时参数设置如下：
流动相：A相：醋酸水溶液，调节pH值为4.2；B相：甲醇－乙腈混合溶液，采用A相和B相进行梯度洗脱；流速：0.5mL/min，柱温：30℃；
色谱柱：采用规格为2.7μm，3.0mm×100mm的Poroshell 120EC-C18柱；检测波长：298nm。
进一步的，所述梯度洗脱具体为：所述流动相在0～5min时间段内，A相和B相的体积比为48:52；然后在5～10min时间段内，A相和B相的体积比降至35:65；在10～15min时间段内，A相和B相的体积比降至26:74；在15～20min时间段内，A相和B相的体积比降至21:79；最后在20～25min时间段内，A相和B相的体积比降至17:83。
进一步的，所述步骤(1)具体操作为：准确称取样品1.00g置于具塞比色管中，加入60～80mmol/L浓度的醋酸铵水溶液5mL后，涡旋均匀，然后加入甲醇10mL，经匀质、超声、高速离心后，吸取上清液得到提取液。
进一步的，所述步骤(1)中所述醋酸铵水溶液的浓度为70mmol/L。
进一步的，所述步骤(1)中的高速离心为：30000r/min离心5min。
进一步的，所述流动相B相中甲醇和乙腈的体积比为55：45。
进一步的，所述测定方法还包括标准样品溶液的制备，包括：取上述9种防腐剂标准品，用乙腈溶液溶解，制成标准品储备液；用乙腈溶液逐级将制备好的标准品储备液稀释5、10、20、50、100倍得到防腐剂标准品系列。
进一步的，绘制防腐剂标准品系列的标准曲线，将各防腐剂峰面积与对应质量浓度做线性回归，根据得到的线性回归方程计算待测样品中各防腐剂的含量。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明在样品前处理时采用醋酸铵水溶液可以使待测样品分散均匀，使得后续提取更加有效，可以有效地提取化妆品中的各种防腐剂；
(2)本发明中的流动相采用pH值为4.2的醋酸水溶液作为A相，甲醇－乙腈混合溶液作为B相，以及通过对流动相在不同时间段的设置，使得采用高效液相色谱分析时，分析时间短，效率高；
(3)采用本发明所述的方法进行化妆品中防腐剂的监测，平均回收率超过80％，相对标准偏差(RSD)为0.91～4.52％，检测结果准确；
(4)按照本发明提供的方法可以同时测定化妆品中常用的9种防腐剂，分离度大于1.5，分离效果好，测定步骤简单，并且灵敏度高。
附图说明
图1为采用本发明所述的测定方法检测9种防腐剂标准品的色谱图；
图中：1：氯苯甘醚，2：葡萄糖酸氯己定，3：醋酸氯己定，4：苯扎溴铵，5：苯扎糖精铵，6：苯扎氯铵，7：2,4-二氯-3,5-二甲苯酚，8：4-氯-2-甲苯酚，9：O-苯基苯酚。
图2为采用本发明所述的测定方法检测某品牌的保湿乳所含防腐剂的色谱图；
图中：1：葡萄糖酸氯己定，2：醋酸氯己定，3：苯扎溴铵，4：苯扎氯铵，5：4-氯-2-甲苯酚，6：O-苯基苯酚。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换，均落入本发明保护范围。
本发明所述的一种化妆品中多种防腐剂的含量的测定方法，所述的防腐剂包括：苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯扎糖精铵、氯苯甘醚、2,4-二氯-3,5-二甲苯酚、葡萄糖酸氯己定、醋酸氯己定、4-氯-2-甲苯酚、O-苯基苯酚；其特征在于：测定步骤如下：
(1)提取：将待测样品加入醋酸铵水溶液中，涡旋后加入甲醇，经匀质、超声、高速离心后，吸取上清液得提取液；具体操作为：准确称取样品1.00g置于具塞比色管中，加70mmol/L浓度的醋酸铵水溶液5mL后，涡旋混匀，然后加入甲醇10mL，经匀质、超声，在高速离心机上30000r/min离心5min，吸取上清液得到提取液；
(2)过膜净化：取所述提取液经0.22μm滤膜净化，得到净化液；
(3)取2μL上述净化液注入高效液相色谱仪中检测，测定色谱图；高效液相色谱法进行分析时参数设置如下：
流动相：A相：醋酸水溶液，调节pH值为4.2；B相：甲醇－乙腈混合溶液(体积比为55：45)，采用A相和B相进行梯度洗脱，流速：5mL/min，柱温：30℃；
色谱柱：采用规格为2.7μm，3.0mm×100mm的Poroshell 120
EC-C18柱；检测波长：298nm；
所述梯度洗脱具体为：所述流动相在0～5min时间段内，A相和B相的体积比为48:52；然后在5～10min时间段内，A相和B相的体积比降至35:65；在10～15min时间段内，A相和B相的体积比降至26:74；在15～20min时间段内，A相和B相的体积比降至21:79；最后在20～25min时间段内，A相和B相的体积比降至17:83。
(4)所述测定方法还包括标准样品溶液的制备，包括：取上述9种防腐剂标准品，用乙腈溶液溶解，制成标准品储备液；用乙腈溶液逐级将制备好的标准品储备液稀释5、10、20、50、100倍得到防腐剂标准品系列。采用与上述待测样品同样的测试方法进行测试。
(5)绘制防腐剂标准品系列的标准曲线，将各防腐剂峰面积与对应质量浓度做线性回归，根据得到的线性回归方程计算待测样品中各防腐剂的含量。
实施例1采用本发明所述方法检测化妆品中防腐剂的含量
仪器：高效液相色谱仪(安捷伦1290，美国安捷伦公司)，配有PDA检测器(美国安捷伦公司)，TB-114型分析天平，超声波清洗器，高速离心机。
标准品：苯扎氯铵(含量99.5％)、苯扎溴铵(含量99.0％)、苯扎糖精铵(含量99.5％)、氯苯甘醚(含量99.0％)、2,4-二氯-3,5-二甲苯酚(含量99.0％)、葡萄糖酸氯己定(含量99.5％)、醋酸氯己定(含量99.0％)、4-氯-2-甲苯酚(含量99.0％)、O-苯基苯酚(含量99.0％)，共9种。
待测化妆品：某品牌保湿乳
试剂：醋酸铵为分析纯，醋酸、甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水、电阻率为18.2MΩ·cm。
制备标准品储备液溶液：分别准确称取9种防腐剂标准品，置于同一个10mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容，制成标准品储备液，移取相应储备液逐级稀释得到相应的标准品系列溶液。具体浓度如下表1所示：
表1本发明中各防腐剂标准品储备液溶液质量浓度及标准品系列质量浓度
Figure GDA0002258980140000071
待测样品处理：准确称取样品1.00g置于具塞比色管中，加70mmol/L浓度的醋酸铵水溶液5mL后，涡旋混匀，然后加入甲醇10mL，经匀质、超声，在高速离心机上30000r/min离心5min，吸取上清液得到提取液；取所述提取液经0.22μm滤膜净化，得净化液。
取2μL上述净化液注入高效液相色谱仪检测，测定色谱图；
高效液相色谱法进行分析时参数设置如下：
流动相：A相：醋酸水溶液，调节pH值为4.2；B相：甲醇－乙腈混合溶液(体积比为55：45)，采用A相和B相进行梯度洗脱，流速：0.5mL/min，柱温：30℃；
色谱柱：采用规格为2.7μm，3.0mm×100mm的Poroshell 120
EC-C18柱；检测波长：298nm；
所述梯度洗脱具体为：所述流动相在0～5min时间段内，A相和B相的体积比为48:52；然后在5～10min时间段内，A相和B相的体积比降至35:65；在10～15min时间段内，A相和B相的体积比降至26:74；在15～20min时间段内，A相和B相的体积比降至21:79；最后在20～25min时间段内，A相和B相的体积比降至17:83。
防腐剂标准品的色谱图和待测样品的色谱图如图1、图2所示。
使用本发明的方法检测出待测化妆品含有6种防腐剂，各防腐剂含量如下表2所示。
表2采用本发明所述方法检测待测化妆品中防腐剂含量的结果。
Figure GDA0002258980140000091
加样回收实验
在空白化妆品样品的容器中分别加入10mg/L、20mg/L、50mg/L三个浓度的标准工作溶液，按照本发明实施例1所述的前处理方式进行处理，并按照实施例1所述的高效液相色谱过程进行检测，平均测定5次，测得平均回收率超过80％，相对标准偏差(RSD)为0.91～4.52％，该结果表明，本发明的测定方法具有较好得回收率。
综上，本发明提供的化妆品中防腐剂含量的测定方法，样品前处理简便、高效，能有效提取出化妆品中的防腐剂，从而为化妆品产品控制和产品安全监测提供必要的技术支持，进而保障化妆品的消费安全。
以上所述仅为本发明的优选实施例，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的相关技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，其中所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，所述防腐剂包括：苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯扎糖精铵、氯苯甘醚、2,4-二氯-3,5-二甲苯酚、葡萄糖酸氯己定、醋酸氯己定、4-氯-2-甲苯酚、O-苯基苯酚；其特征在于：测定步骤如下：
(1)提取：将待测样品加入醋酸铵水溶液中，涡旋后加入甲醇，经匀质、超声、高速离心后，吸取上清液得到提取液；
(2)过膜净化：将所述提取液经0.22μm滤膜净化，得到净化液；
(3)取2μL上述净化液注入高效液相色谱仪中检测，测定色谱图；
高效液相色谱法进行分析时参数设置如下：
流动相：A相：醋酸水溶液，调节pH值为4.2；B相：甲醇－乙腈混合溶液，采用A相和B相进行梯度洗脱；流速：0.5mL/min，柱温：30℃；
色谱柱：采用规格为2.7μm，3.0mm×100mm的Poroshell 120EC-C18柱；
检测波长：298nm；
所述梯度洗脱具体为：
所述流动相在0～5min时间段内，A相和B相的体积比为48:52；然后在5～10min时间段内，A相和B相的体积比降至35:65；在10～15min时间段内，A相和B相的体积比降至26:74；在15～20min时间段内，A相和B相的体积比降至21:79；最后在20～25min时间段内，A相和B相的体积比降至17:83。
2.根据权利要求1所述的一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)具体操作为：准确称取样品1.00g置于具塞比色管中，加入60～80mmol/L浓度的醋酸铵水溶液5mL后，涡旋均匀，然后加入甲醇10mL，经匀质、超声、高速离心后，吸取上清液得到提取液。
3.根据权利要求2所述的一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，其特征在于：所述醋酸铵水溶液的浓度为70mmol/L。
4.根据权利要求3所述的一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的高速离心为：30000r/min离心5min。
5.根据权利要求1所述的一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，其特征在于：所述流动相B相中甲醇和乙腈的体积比为55：45。
6.根据权利要求1所述的一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，其特征在于：所述测定方法还包括标准品溶液的制备，包括：取上述9种防腐剂标准品，用乙腈溶液溶解，制成标准品储备液；用乙腈溶液逐级将制备好的标准品储备液稀释5、10、20、50、100倍得到防腐剂标准品系列。
7.根据权利要求6所述的一种化妆品中多种防腐剂含量的测定方法，其特征在于：绘制防腐剂标准品系列的标准曲线，将各防腐剂峰面积与对应质量浓度做线性回归，根据得到的线性回归方程计算待测样品中各防腐剂的含量。
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