CN108226349B - 一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学检测领域，具体涉及一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，包括（1）供试品溶液的制备（2）混合对照溶液的制备（3）色谱条件与系统适用性试验（4）测定等步骤。本发明提供的一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，仅需一次实验即可完成曲咪新乳膏中11种抑菌剂的种类鉴定及其含量测定，同时检测的抑菌剂种类多、品种多，具有操作简单、分析速度快、分析准确的特点，可以适用于不同厂家生产的曲咪新乳膏的抑菌剂检查，适用范围广，效果稳定可靠。通过该方法检测出曲咪新乳膏中所用的抑菌剂的含量，能进一步有效的控制曲咪新乳膏的质量。
Description
技术领域
本发明属于化学检测领域，具体涉及一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法。
背景技术
曲咪新乳膏为皮肤外用复方制剂，具有很强的抗真菌作用，在临床上主要用于治疗皮肤湿疹、接触性皮炎、脂溢性皮炎、体癣、股癣以及手足癣等，曾用名有脚癣净霜剂、皮康霜。曲咪新乳膏为我国自主研发产品，属于非基本药物，最早由广东华润顺峰药业有限公司研发生产，1985年获得批文上市销售。由于其治疗效果显著，目前在临床上已被广泛使用，其主成分为：硝酸咪康唑、醋酸曲安奈德和硫酸新霉素。目前，各个厂家生产的曲咪新乳膏中，添加抑菌剂的种类与剂量存在差异，这对药品成分筛查、制备工艺、科学研究、监督检验等工作造成一定困难。对于曲咪新乳膏中抑菌剂的种类与使用量的测定，现有的方法仅能对某一特定抑菌剂进行测定，或对某一特定类的几种抑菌剂进行测定，无法同时完成多种类、大数量的抑菌剂定性与定量检测。随着我国药品质量控制要求的日渐提高，需要一种更为快捷、方便、准确、全面的曲咪新乳膏中抑菌剂测定方法，以满足实际情况的需要。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，本发明提供的检测方法仅需一次实验即可完成曲咪新乳膏中11种抑菌剂（2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯）的种类鉴定及其含量测定，具有操作简单、分析速度快、分析准确的特点，可以适用于不同厂家生产的曲咪新乳膏的抑菌剂检查，适用范围广，效果稳定可靠。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，采用高效液相色谱法进行测定，具体包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，置于15ml刻度离心管中，加甲醇至10ml，涡旋振摇，超声15min，6000转/min离心20分钟，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
（2）混合对照溶液的制备：分别取2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯和对羟基苯甲酸丁酯对照品适量，用甲醇溶解配制含甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮10ug/ml， 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯250 ug/ml的混合对照溶液；
（3）色谱条件与系统适用性试验 ：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1ml/min；柱温30℃，进样量：20μl；检测波长为254 nm（测定2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯）和280 nm（测定甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮）；
（4）测定：分别精密量取混合对照溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、20.0ml、50.0ml置100ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为标准曲线1～5溶液；混合对照溶液作为标准曲线6溶液，精密量取供试品溶液和标准曲线系列溶液各20ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图,按标准曲线法计算样品中抑菌剂含量。
上述的同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，步骤（3）中所述的梯度洗脱的洗脱条件为：0～3 min，质量浓度为0.1%的磷酸水溶液90%，乙腈10%；3～25 min，质量浓度为0.1%的磷酸水溶液90%～50%，乙腈10%～50%；25～35 min，质量浓度为0.1%的磷酸水溶液50%～35%，乙腈50%～65%；35～40 min，质量浓度为0.1%的磷酸水溶液35%～5%，乙腈65%～95%；40～60 min，质量浓度为0.1%的磷酸水溶液90%，乙腈10%。
以下为本发明同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法的方法学验证结果：
1、线性关系和检出限
检出限溶液制备：取曲咪新乳膏样品两份，各约1g，分别置于15ml刻度离心管中，分别精密加入标准曲线1溶液0.3ml、标准曲线5溶液0.2ml，加甲醇至10ml，涡旋振摇，超声15min，6000转/min离心20分钟，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液即得。
检测方法中制得标准曲线1～6溶液，取标准曲线溶液1-6在设定色谱条件下，进样20μl，记录色谱图，以浓度C（μg/ml）对峰面积A进行线性回归；取仪器信噪比为3：1时溶液的浓度为各成分的检测限。通过高效液相色谱法分别进样分析，记录不同色谱峰的保留时间与峰面积，得11 种抑菌剂标准曲线溶液的典型图谱（见图1和图2）、回归方程及检出限见表1所示。
上述结果表明，11 种抑菌剂线性关系和检出限均符合方法学要求。
2、模拟回收试验
取空白基质约1g，置于15ml刻度离心管中，精密加入1ml混合标准储备液，加甲醇至10ml，涡旋振摇，超声15min，6000转/min离心20分钟，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液即得，同时制备两份。按设定的色谱条件，进样20μl，测定，结果见表2。
结果表明，11 种抑菌剂的模拟回收率均符合方法学要求。
3、专属性试验
取空白基质约1g，置于15ml刻度离心管中，加甲醇至10ml，涡旋振摇，超声15min，6000转/min离心20分钟，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液按设定的色谱条件，进样20μl，测定，得到空白基质色谱图（见图3）。结果表明空白基质无干扰，符合方法学要求。
与现有技术相比，本发明具有如下技术效果：
本发明提供的一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，仅需一次实验即可完成曲咪新乳膏中11种抑菌剂（2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯）的种类鉴定及其含量测定，同时检测的抑菌剂种类多、品种多，具有操作简单、分析速度快、分析准确的特点，可以适用于不同厂家生产的曲咪新乳膏的抑菌剂检查，适用范围广，效果稳定可靠。通过该方法检测出曲咪新乳膏中所用的抑菌剂的含量，能进一步有效的控制曲咪新乳膏的质量。
附图说明
图1为标准曲线溶液的典型图谱（254nm）；
图2为标准曲线溶液典型图谱（280nm）；
图3为 空白基质的色谱图。
具体实施方式
实施例1
一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，采用高效液相色谱法进行测定，具体包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，置于15ml刻度离心管中，加甲醇至10ml，涡旋振摇，超声15min，6000转/min离心20分钟，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
（2）混合对照溶液的制备：分别取2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯和对羟基苯甲酸丁酯对照品适量，用甲醇溶解配制含甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮10ug/ml， 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯250 ug/ml的混合对照溶液；
（3）色谱条件与系统适用性试验 ：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱（梯度洗脱的洗脱条件为：0～3 min，0.1%磷酸水溶液90%，乙腈10%；3～25 min，0.1%磷酸水溶液90%～50%，乙腈10%～50%；25～35 min，0.1%磷酸水溶液50%～35%，乙腈50%～65%；35～40 min，0.1%磷酸水溶液35%～5%，乙腈65%～95%；40～60 min，0.1%磷酸水溶液90%，乙腈10%），流速1ml/min；柱温30℃，进样量：20μl；检测波长为254 nm（测定2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯）和280 nm（测定甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮）；
（4）测定：分别精密量取混合对照溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、20.0ml、50.0ml置100ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为标准曲线1～5溶液；混合对照溶液作为标准曲线6溶液，精密量取供试品溶液和标准曲线系列溶液各20ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图,按标准曲线法计算样品中抑菌剂含量；
采用本方法测定了20个厂家生产曲咪新乳膏的抑菌剂使用情况，结果20个厂家涉及的仅有羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯，其中大部分厂家均使用羟苯乙酯，仅新乡华青药业有限公司和珠海安生凤凰制药有限公司使用羟苯甲酯和羟苯丙酯，而特一药业集团股份有限公司和江西德成制药有限公司未添加抑菌剂，测定结果见表3。
上述可见，经过采用本发明同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法进行测定20个厂家生产的曲咪新乳膏的抑菌剂使用情况，测定结果与企业提供的处方基本相同，未发现有企业违规使用抑菌剂的情况，可见，本发明同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法可以适用于不同厂家生产的曲咪新乳膏的抑菌剂检查，适用范围广，效果稳定可靠，通过该方法检测出曲咪新乳膏中所用的抑菌剂的含量，能进一步有效的控制曲咪新乳膏的质量。
Claims (1)
1.一种同时测定曲咪新乳膏中多种抑菌剂的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行测定，具体包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，置于15ml刻度离心管中，加甲醇至10ml，
涡旋振摇，超声15min，6000转/min离心20分钟，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
（2）混合对照溶液的制备：分别取2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯和对羟基苯甲酸丁酯对照品适量，用甲醇溶解配制含甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮10ug/ml， 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-丙二醇、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸丁酯250 ug/ml的混合对照溶液；
（3）色谱条件与系统适用性试验：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Agilent Eclipse Plus C 18 柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1ml/min；柱温30℃，进样量：20μl；检测波长为254 nm和280 nm；
（4）测定：分别精密量取混合对照溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、20.0ml、50.0ml置100ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，作为标准曲线1～5溶液；混合对照溶液作为标准曲线6溶液，精密量取供试品溶液和标准曲线系列溶液各20ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图,按标准曲线法计算样品中抑菌剂含量；
步骤（3）中所述的梯度洗脱的洗脱条件为：0～3 min，0.1%磷酸水溶液90%，乙腈10%；3～25min，0.1%磷酸水溶液90%～50%，乙腈10%～50%；25～35 min，0.1%磷酸水溶液50%～35%，乙腈50%～65%；35～40 min，0.1%磷酸水溶液35%～5%，乙腈65%～95%；40～60 min，0.1%磷酸水溶液90%，乙腈10%。
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